BAB I

PENDAHULUAN
I.1 Latar BeIakang
Kebanyakan obat dapat diukur aktivitasnya secara cepat dan teliti
dengan metode kimiawi atau fisika, dengan menggunakan alat modern,
misalnya dengan spektrofotometer ultraviolet/infrared, dan polarograf.
Untuk obat yang struktur kimianya belum diketahui dan untuk
sediaan tak murni atau campuran dari beberapa zat aktif, metode ini tidak
dapat dilakukan. Obat-obat ini diukur dengan metode biologis, yaitu
dengan bio-assay, dimana aktifitas ditentukan oleh organisme hidup
(hewan, kuman) dengan membandingkan efek obat tersebut dengan efek
suatu standar internasional.
Suatu metode yang menggunakan udang laut Artemia salina Leach
diajukan sebagai suatu Bio-assay sederhana untuk penelitian produk
alamiah adalah ¨Brine Shimp Lethality Test¨. Metode ini menggunakan
hewan uji Artemia salina Leach yang merupakan udang-udangan primitif,
sederhana dan efektif dalam ilmu biologi dan toksikologi. Prosedur
penentuan LC50 dalam /ml dari ekstrak dilakukan dalam medium air asin.
Besarnya aktifitas dari ekstrak ditunjukkan sebagai toksisitas terhadap
larva udang. Pengujian Brine Shrimp Lethality Test (BST) ini dimaksudkan
untuk menguji efek toksik dan sitotoksik yang terdapat pada suatu
senyawa kimia.
I.2 Maksud dan Tujuan
I.2.1 Maksud Percobaan
Adapun maksud dari percobaan ini adalah untuk mengetahui
dan memahami uji toksisitas dengan metode Brine Shrimp Lethality
Test (BST) terhadap larva udang (Artemia salina L).
I.2.1 Tujuan Percobaan
Adapun tujuan dari praktikum kali ini adalah untuk menentukan
LC
50
ekstrak daun sirsak (Annona muricata) dengan metode Brine
Shrimp Lethality Test (BST) terhadap larva udang (Artemia salina L).
I.3 Prinsip Praktikum
Adapun prinsip kerja dari percobaan ini adalah uji toksisitas ekstrak
daun sirsak (Annona muricata) terhadap larva udang (Artemia salina
Leach) dengan menggunakan metode Brine Shrimp Lethality Test (BST)
dan dilakukan pengamatan terhadap jumlah larva yang mati setelah 1 x
24 jam.




BAB II
METODE KERJA
II.1 AIat dan Bahan
II.1.1 AIat yang Digunakan
a. Aerator
b. Batang pengaduk
c. Corong
d. Gelas ukur 10 ml
e. Gelas arloji
f. Mikropipet
g. Neraca analitik
h. Pipet tetes
i. Seperangkat alat penetasan telur
j. Spoid 10 ml
k. Timbangan kasar
l. Termometer
m. Vial
II.1.2 Bahan yang Digunakan
a. Air laut
b. Air suling
c. Aluminium foil
d. Ekstrak ragi
e. Ekstrak daun sirsak (Annona muricata)
f. Kertas saring
g. Telur udang Artemia salina Leach
II.2 Cara Kerja
II.2.1 Penyiapan Iarva
a. Direndam sebanyak 50 mg telur Artemia salina Leach ke
dalam 200 ml air laut dibawah cahaya lampu dan suhu
25
o
C yang dilengkapi aerator.
b. Setelah 24 jam telur akan menetas dan menjadi larva.
Larva yang telah berumur 48 jam akan digunakan
sebagai hewan uji untuk diuji aktivitas toksisnya
II.2.2 PeIaksanaan Pengujian
a. Ekstrak daun sirsak (Annona muricata) yang telah ditimbang
dilarutkan dengan etanol hingga diperoleh konsentrasi 2
mg/ml sebagai larutan persediaan.
b. Dari sediaan tersebut dipipet ke dalam vial masing-masing
1, 10, 100, dan 1000 µl dengan menggunakan mikropipet
c. Pelarutnya diuapkan kemudian ditambahkan 10 ml air laut
d. Dimasukkan 10 ekor larva Artemia salina Leach ke dalam
masing-masing vial yang berisi sampel uji dan larutan
kontrol dengan berbagai konsentrasi.
e. Ditambahkan 1 tetes suspensi ekstrak ragi.
f. Disimpan vial-vial uji di tempat yang cukup mendapat sinar
lampu.
g. Dilakukan pengamatan setelah 24 jam terhadap larva yang
mati.
h. Diulangi sebanyak 3 kali untuk tiap sampel dan kontrol.













BAB III
HASIL DAN PEMBAHASAN
III.1 TabeI Pengamatan
Data hasil pengamatan kematian larva udang Artemia salina L
setelah 24 jam perlakuan.
8epllkasl konsenLrasl(ĝl) kemaLlan Ʒ kemaLlan
l
1 3
konsenLrasl 1 ƹ 9/30 x 100Ʒ
ƹ 30Ʒ
10 3
100 7
1000 9
konsenLrasl 10 ƹ 13/30 x 100Ʒ
ƹ 43ţ33Ʒ
ll
1 4
10 3
100 3
konsenLrasl 100 ƹ 19/30 x 100Ʒ
ƹ 63ţ33Ʒ
1000 7
lll
1 2
10 3
konsenLrasl 1000 ƹ 23/30 x 100Ʒ
ƹ 83ţ33Ʒ
100 7
1000 9

!erhitungan LC
50
ekstrak etanol dari daun sirsak (Annona muricata)
menurut metode grafik probit log konsentrasi.
x (Loa C) ? (ÞroblL) x
2
v
2
xŦv
0 4ţ48 0 20ţ07 0
1 4ţ82 1 23ţ23 4ţ82
2 3ţ33 4 28ţ41 10ţ66
3 3ţ93 9 33ţ4 17ţ83
¿ ƹ6 ¿ ƹ20ţ38 ¿ =14 ¿ ƹ107ţ11 ¿ =33ţ33

Persamaan regresi : y = a + bx
a =
¿ x
2
.¿ y)- (¿ x .¿ xy)
n ¿ x
2
- (¿ x)
2

=
(14 x20,58)- (6 x 33,33)
(3 x 14)- 36

=
288,12-199,98
42-36

=
88,14
6

= 14,69
b =
(n ¿ xy)-( ¿x ¿y)
(n ¿ x
2
)- (¿ x)
2

=
(3 x 33,33)-(6 x 20,58)
(3 x 14)- 36

=
99,99-123,48
42-36

=
-23,49
6

= -3, 915
Jika persamaan garisnya y = a + bx
y = 14,69 + (-3,915)x
Jika y = 5, maka :
X =
y-u
b

=
5-14,69
- 3,915

=
- 9,69
- 3,915

= 2,475
Log LC
50

= x
Log LC
50
= 2,475
LC
50
= antilog 2,475
= 298,54 ĝa/ml
Keterangan :
x = log konsentrasi ekstrak etanol daun sirsak (Annona muricata)
y = nilai probit dalam suatu persentase respon kematian
a = panjang sumbu tegak antara titik asal dan titik potong garis regresi
b = slope atau gradient (kemiringan)
!erhitungan standar deviasi LC
50
ekstrak etanol dari daun sirsak
(Annona muricata) berdasarkan nilai bobot per probit.
x (Loa C) n ? W n Ŧ W
1 30 4ţ82 0ţ627 18ţ81
2 30 3ţ33 0ţ616 18ţ48
3 30 3ţ93 0ţ439 13ţ17
¿ =30ţ46

Y = 14,69 + (-3,915)x
=
1
b
=
1
- 3,915
= - 0,255
SE Log LC
50
=
c
V ¿ n w
=
- 0,255
V 50,46
=
-0,255
7,103
= - 0,036
SE LC
50
= LC
50
x Log e 10 x SE Log LC
50
= 298,54 x 2,303 x -0,036
= - 24,75 ĝa/ml
LC
50
= 298,54 ƾ - 24,75 ĝa/ml
Keterangan :
x = log konsentrasi
n = hewan coba
y = nilai probit dalam suatu respon kematian sesuai hasil regresi
w = faktor bobot dari masing-masing probit
e = 1/slope regresi / simpangan
SE = standar error, standar deviasi, simpangan baku.
III.2 Pembahasan
Biossay adalah suatu pengujian tentang toksisitas pada suatu
produk dalam rangka pencarian produk alam yang potensial yang
biasanya menggunakan makhluk hidup sebagai sampel. Kebanyakan
obat dapat diukur aktivitasnya secara cepat dan teliti dengan metode
kimiawi atau fisika, dengan mnggunakan alat modern, misalnya dengan
spektrofotometer ultraviolet/infrared.
Untuk obat yang struktur kimianya belum diketahui dan untuk
sediaan tak murni atau campuran dari beberapa zat aktif, metode ini tidak
dapat dilakukan. Obat-obat ini diukur dengan metode biologis, yaitu
dengan bio-assay, dimana aktivitas ditentukan oleh organisme hidup
(hewan, kuman) dengan membandingkan efek obat tersebut dengan efek
suatu standar internasional.
Toksisitas adalah efek beracun dari suatu senyawa atau bahan
obat pada organ target. Umumnya suatu senyawa kimia mempunyai
potensi terhadap timbulnya gangguan atau kematian jika diberikan pada
organisme hidup, untuk dilakukan pengujian untuk mengetahui tingkat
keamanan dan keberbahayaan suatu zat yang diuji atau lebih dikenal
dengan istilah uji toksisitas.
Zat toksis umumnya berasal dari alam maupun bahan sintetik.
Bahan-bahan yang dapat bersifat toksis antara lain zat tambahan
misalnya pewarna, pemanis bumbu penyedap dll, dan zat pencemar pada
makanan (pestisida, logam-logam terutama logam berat serta
pencemaran lingkungan.
Ada 3 jenis metode pengujian Biossay untuk mengetahui toksisitas
suatu bahan alam yaitu Simple Brench-Top Bioassay (Metode BST "Brine
Shrimp Lethality, Lemna Minor Bioassay dan Crown-Gall Potato Disc
Bioassay) serta Pengujian pada sel telur babi.
a. Metode BST "Brine Shrimp Lethality¨ adalah suatu metode guna
menentukan toksisitas suatu senyawa bahan alam dengan cepat, murah
dan cukup akurat untuk penapisan ekstrak bahan aktif dengan
menggunakan hewan uji Artemia salina Leach yang berumur 48 jam.
Metode ini juga digunaka untuk mendeteksi keberadaan senyawa toksik
dalam proses isolasi senyawa dari bahan alam yang berefek sitotoksik
dengan menentukan harga LC 50 dari senyawa aktif. Metode BST dapat
digunakan dari berbagai sistem uji seperti morfin, karsinogenik dan
ketoksikan dari hewan dan tumbuhan laut serta senyawa racun dari
tumbuhan darat.
b. Lemna minor Biossay terutama digunakan sebagai uji pendahuluan
terhadap bahan yang dapat menghambat dan meningkatkan
pertumbuhan tanaman. Dengan pengujian ini dapat diamati bahwa anti
tumor alami juga dapat menghambat pertumbuhan lemna, walaupun
korelasinya dengan antitumor lainnya kurang baik. Oleh karedna itu
pengujian ini lebih diarahkan untuk mencari herbisida dan stimulant
pertumbuhan baru.
c. Crown-gall potato Biossaay merupakan metode pengujian toksisitas yang
relatif cepat pengerjaannya, tidak mahal, tidak memerlukan hewan
percobaan serta menunjukan korelasi yang baik dengan uji anti tumor
lainnya. Crown-Gall merupakan suatu penyakit neoplastik pada tumbuhan
yang disebabkan bakteri gram negatif Agrobacterium tumefaciens yang
selanjutnya menyebabkan pertumbuhan jaringan tumor secara otonom
dan tidak dipengaruhi oleh mekanisme kontrol normal.
Efek toksik yang terjadi sangat bervariasi dalam sifat, organ,
sasaran maupun mekanisme kerjanya. Efek toksisitas dapat bersifat :
a. Lokal : yaitu hanya terjadi pada tempat bahan toksik bersentuhan
dengan tubuh misalnya pada saluran pencernaan, iritasi gas, atau
uap saluran napas.
b. Sistemik : terjadi hanya setelah toksikan tersekap dan tersebar ke
bagian tubuh yang lain. Umumnya toksikan hanya mempengaruhi satu
beberapa organ lainnya.
c. Reservibel : bila efek yang ditimbulkan dapat hilang dengan
sendirinya atau dapat hilang beberapa waktu setelah pemaparan
toksikan tertentu.
d. Ìrreversibel : yaitu efek yang menetap atau justru bertambah parah
setelah pemberian toksikan berlangsung.
Pada percobaan ini dilakukan pengujian toksisitas terhadap
udang laut Artemia salina) dengan menggunakan metode BST (Brine
Shrimp Lethality Test) dengan menggunakan etanol sebagai pelarut
dan ekstrak ragi.
LC
50
adalah konsentrasi dari suatu senyawa kimia di udara atau
dalam air yang dapat menyebabkan 50% kematian pada suatu
populasi hewan uji atau makhluk hidup tertentu. Penggunaan LC
50

dimaksudkan untuk pengujian ketoksikan dengan perlakuan terhadap
hewan uji secara berkelompok yaitu pada saat hewan uji dipaparkan
suatu bahan kimia melalui udara maka hewan uji tersebut akan
menghirupnya atau percobaan toksisitas dengan media air. Nilai LC
50

dapat digunakan untuk menentukan tingkat efek toksik suatu senyawa
sehingga dapat juga untuk memprediksi potensinya sebagai
antikanker.
LD
50
adalah dosis dari suatu senyawa kimia yang dapat
menyebabkan 50% kematian hewan uji yang diberikan pada setiap
individu yang telah ditentukan atau yang lebih tepat adalah dosis
tunggal yang diperoleh secara statistik dari suatu bahan yang dapat
menyebabkan 50% kematian hewan uji. LD
50
digunakan untuk menguji
ketoksikan suatu bahan kimia dengan rute pemberian secara oral atau
intraperitonial pada hewan uji.
Kista artemia dapat ditetaskan secara optimal, apabila sarat-
sarat yang diperlukannya dapat dipenuhi. Beberapa syarat tersebut
adalah:
1. Salinitas antara 20-30 ppt (parts per thousand) atau 1-2 sendok teh
garam per liter air tawar. Untuk buffer bisa ditambahkan magnesium
sulfat (20 % konsentrasi) atau 1/2 sendok teh per liter air.
2. Suhu air 26 - 28 °C.
3. Disarankan untuk memberikan sinar selama penetasan untuk
merangsang proses.
4. Aerasi yang cukup; untuk menjaga oksigen terlarut sekitar 3 ppm
5. pH 8.0 atau lebih, apabila pH drop dibawah 7.0 dapat ditambahkan soda
kue untuk menaikkan pH.
6. Kepadatan sekitar 2 gram per liter.
7. Sebelumnya dapat dilakukan proses dekapsulisasi untuk melunakan
cangkang
Digunakan larva udang karena laju pertumbuhannya sama dengan sel
kanker sehingga apabila suatu sampel dapat membunuh larva udang maka
sampel tersebut dapat dipastikan dapat membunuh atau menghambat
pertumbuhan sel kanker.
Pada praktikum ini digunakan sampel ekstrak etanol daun sirsak
(Annona muricata) sehingga digunakan etanol sebagai kontrol untuk melihat
apakah etanol dapat juga membunuh larva udang. Sedang digunakan ekstrak
ragi adalah untuk memberikan nutrisi kepada larva udang sehingga dapat
tumbuh dan berkembang biak.
Digunakan pencahayaan karena untuk menyesuaikannya dengan
kondisi alam terbuka sehingga tidak mengganggu pertumbuhan dari larva
udang itu sendiri. Umur larva udang harus 48 jam karena pada umur tersebut
merupakan umur dimana larva udang telah menjadi dewasa.
Dari praktikum ini didapatkan hasil yaitu pada konsentrasi 1 persen
kematian 30%, pada konsentrasi 10 persen kematian 43,33%, pada
konsentrasi 100 persen kematian 63,33%, pada konsentrasi 1000 persen
kematian 83,33%. Dengan nilai LC
50
298,54 ĝa/mlţ dan standar deviasi -
24,75 ĝa/mlŦ



















BAB IV
PENUTUP
IV.1 KesimpuIan
Berdasarkan percobaan yang telah dilakukan dengan
cara analisis probit maka dapat disimpulkan bahwa nilai LC
50
dari
ekstrak etanol daun sirsak (Annona muricata) adalah sebesar
298,54 ƾ - 24,75 ĝa/mlţ berarti mempunyai efek toksik terhadap
larva udang Artemia salina Leach karena nilai LC
50
dibawah 1000
ĝa/mlŦ
IV.2 Saran
Diharapkan agar alat yang digunakan dalam praktikum
diperbanyak agar proses praktikum dapat berjalan dengan lancar.









DAFTAR PUSTAKA
1. Dirjen POM, 1979. Farmakope Ìndonesia Edisi ÌÌÌ. Depkes RÌ. Jakarta.

2. Ganiswarna. S., 1995. Farmakologi dan Terapi Edisi ÌV, Bagian
Farmakologi dan terapi kedokteran Ì, Jakarta.

3. Mutschler. E., 1991. inamika Obat. ÌTB : Bandung.

4. Mycek. M. J., Harvey. R. A., dan Champe. P. C., 2001. ¨Farmakologi
Ulasan Bergambar¨.

5. Olson, James. 2002. "Belajar Mudah Farmakologi¨. Penerbit Buku
Kedokteran EGC. Jakarta.

6. Tjay, dan Rahardjo K., 2002. Obat-obat Penting. Depkes RÌ. Jakarta.














LAMPIRAN
Skema Kerja




Daun sirsak
(Annona muricata)
Hewan uji
Ekstrak etanol
Telur udang
(Artemia salina L)
Ekstrak etanol dalam air
laut 1, 10, 100, 1000 µg/ml
Air laut
(kontrol)
Larva udang
(48 jam)
Pengumpulan data
(jumlah larva yang mati)
Kesimpulan
Analisis data
Pembahasan

7-0-07.3 94844  !7480/:7 503039:.:.3. :39: 50309. /.0.3010 8:.. .3.  $:.3 2094/0 -448  .9 3 /::7 /03.3.3207:5.9.9: 4 . 80/07.: /...3 80-.3 :39: 80/.  /2.25:7.3.:97902.3 :2..3 897:9:7 2.843.88..3 574/: .3203:3. /.3..2:73.3 40 47.3/.9 4-...739073..3  -.9: /03. -0:2 /09.3. 8:.919.. .8 /9039:.3:/.3/.9.91 2094/039/.3820 /:5 0.8.3:7902.354.2.3 -4 .317.5.990780-:9/03./.3/3.3:/.3.747.9 /.30104-.9:89.1  &39: 4-.9 %089  094/0 3 203:3.2 2: -44 /.:.2..9:2094/0.0.357291  80/07.70/ /..8.:.9 ..5..39.3 /03.88.3 :/. 730 $25 09.3.3202-. /.3 0.3 /.3 01091 /.

220/:2.. .:.3 . 94889.9%089 $% 3/2.7.83  08.7.3/././.73.3 80-..:/.8:/.70897.8 /.919.5 .2/.8 907.3730$72509.3 !03:.. /9:3:.7 0897.

9 5..3/. /.    %::./.5.   . 8.4-.   !7385!7.8:/ /. 3343..3 203:3..: /./.7507.3 202.5 :2.5.4-.5:3 2.3   0897.:39: 203: 010 948 /.8://.3 2.9.:3 878./.9%089 $% 907.2      .  /03..3  2094/0 730 $72509.7. 2:7.3.7...3.9 %089 $%  /. .5:39::.5.9: 803.3%::../.8.3   .:3 878. /.8:/!07.  907. 2:7.3.9.3 2094/0 730 $725 09.3 7902../.9 %089 $% 907.5 ./.3  /.80897..3.9:2 /.3 3 .4-. 3343.  /03.2./.8.3 894948 .:./. 0.3 907/.33.5:35738507.3 /.3 503.:94889.:/.:/...7.:39:203039:.3!07...   .. :39: 20309.7 507.9 8090.9.2.3 907.3 /.8 /03. ...3 7902. :/.9:2..3 7902.757. 8:.7.4-.3 2094/0 730$725 09.2 : 94889./.

950309.  7.3:3.9..  4743 /  0.3..3:3.3..7   %072420907 2  './: .3 .:9 -  78:3 .8.3.8. % #  .   .947 -  .8.9..  :23:214 .3.  07.3   .74 1  745509   07..8::7 2 0  0..3503..9.9/.9   !50990908   $0507.3 .390:7   $54/ 2   %2-.3..3.

9.88.3::39:/:.:9 /-. 0  897...2   2 .0..7 .3 /.07.0.7.5.3 20309.. -07:2:7  . 290:77902.8  2.  1  079.390.8..3/03.8./ .34 3.7.3.3 /:3.25: /.0 /.5..  897.0.07..2:7.3 203.73   %0:7:/. /50740 4380397.:3878.  ..37902.  ..   !03.2 .7.9.3!03:.3 09./  897. 3343.8.7.8 /..  . 3343..3./92-.3 90.3 . .3 /03.3.7:9..3.9./..3 80-.9.947  -  $090..:3878. . .2:7.894883. .   !0.2 90:7 ... .  703/..280-.3.7./.3 8:: 4.

.2 ..8  .3 2..7.7:9..4380397.302:/.5.3 90780-:9 /5509 0 /.250 : /.83 2.83 .  !0.3   047 . 0 /.7 80/.2 2. 8.83 2.2-.3-07-.3 a/03../:.32745509 . .7:93.3 43974/03. 7902.83    /.350780/.3..7:9. 0..3  -  .3203:3.8:.3/9... 2...:9 /  2.280-..3 -078 8.3 ..7.

25:    .3 503..3 .2 907..3 . .9    :.7.3.:.  1  825.7 .9 ..9 83.3 2.2-. : / 9025.7.3909088:850380897.9.58.::5 203/.343974               .2..250/.0  9.5 .5./.  . .:39:9..3 8090.380-.

9..-0!03.34/.3.3 . 8. 3343.3 .2507.2.3 02.3 0897.9.7/.2:7.1574-944380397.2.3   ½f¾ °¾ °f¾% %              ¯ff°              ¯ff° °¾ °f¾ $     °¾ °f¾ $      °¾ °f¾ $      °¾ °f¾ $          !079:3.09. :/..9.8 503.7.:3878. $!$  %.8  %–.9.  8090.3 7902.:.9.  203:7:92094/07.. .

%     %9 %                                                .

 -           .370708..2.3.     {      {     { { { {   {    { { {       - {  {   {     { {   { { { { {   {  {   {  {            .                .!078...2. -          .5078. 2..783.

9.3  !079:3.9.:3878..8.34/. 09.9:5078039.  3.34 /.:3 878.394    –$¯ 0907.7870708 -8450. 3343..9.8..28:.3 44380397.7./.8   0897. 3343.9.7 /.-4-49507574-9  %–.7.:7.99.39954943.39.38:2-:90..7 /0.33.5. -07/.3.2:7./039 0273.8070854302.3 .3.3/.4  4    .574-9/.2:7.3 89.80897.09..

%     °             J        ° J                            $4           $  40 $4        .

947-4-49/.83 2.28:.574-9/.870708 1..    –$¯       –$¯ 0907.72. 3.9.3.9:70854302.3808:.83574-9 0.4-.3.8 30.3 44380397..

845070708.

3 2.3-.3 23:3.3 4-.3./.3 909 /03.3 .3.9 /::7 .3 $89.3  574/: ..3/.9 24/073  28.825.3 549038. 8:../.9 /. 503. 8.: 18.7/0...9 /.409...:   !02-.83.. .8. .9.9: 574/: /..7.8 5. 80. 203:3.  .707747 89.250  0-..3.: /:5 80-.3    488.3.8 825.3 850974149420907:97.3 9039.  /03.5.3 94889.2 7.3/.2 .3...9. /03.3. .3 2094/0 2.9.7. 8:.05.9: 503:.3 -..8..

3.9.317.:.3.9 4-.7-0-07.70/  &39: 4-.  /2.8 /9039:.39.9 /.88.9.3 2094/0 -448  .3 -4 .91 2094/039/.3 40 47.9 ..:..5.3 :39: 80/.: /.9.9. /.3  -.9: /03.3/.25:7.. .9 3 /::7 /03. -0:2 /09.3820 /:5 .2:73.3 897:9:7 2.5.

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

9:503.33.3..399:247 .:3 /.2 30./..8 803.9 5079:2-:.:5:3 470..3 907.9 203.2 :.907:2 9:201.   20207:.3 803..783403 /. 2. :39: 203/09080-07.7.8/.3-...  0 .7 -07-.91 74-.3 0948.7 9:2-:.7..93045.. /.3 .5.73.. 2347 488.7. 7. 88902 : 805079 24713  .   9/.907 7.3 907.3820439743472..7.3 .91 094/0$%/..3 503:..895.. /:3.3 .3 /.7 07-8/.39/.2.3 -.39 5079:2-:.8.3:93.549..7:4020.207:5.94488.70/3.4-. 2030-.3 9:247 80.3  03.5. 9: 503:.3  : .  9/.7 0.9 .3.3  8079.2-. 1094889.9 /:3.38:..3 3 0- /.8 /. /03.3 .5 -.  .9-0781.3 2033.3 80-.3 -07010 894948 /03.83.3 892:.33. 494342 /.3 /.-.3 9:2-:..9 -.3 80.:9 8079.3 3 /..::. /.3 .7.32. /03.3 .39 9:247 .3 5079:2-:.9 /.3 :39: 203.3 -. /. 907:9.394889. /.3 0.. 743 .9 /.3 023.3 470.39 9:247 . 203:3:.05..3 9./..9 -07.3/.2 574808 84...9  47.382007.9 50307.3  8. 948 /.3.3 /.2 .7803.  10 948 .8 .2 81.7 -..7. : 503/.9.5.3 507..  743 ..207:5.038 ./503..2-.3./ 8.-. /:3.094/03 :.2./.5..:5:320..3 /80-.9:2-:.3 -.7:  .91 .3 /.3 70. :7.3203039:...9  -  023..3 5079:2-:.33.. .8.9 203. 803.32094/0503:.2.5.

3  79..9.3 803/73../.58..: :/.7.3203:3.  4.-.078-0..3 9:-: 28. 9025.34 80-.7.9 .3 203:3. 948.5.3 948 -078039:..  .073.5.320/.3 907.78:.3  /03.3 /92-:..3 /.3 3 /..9./.8/.7.7:8..3 /03.5.. 507.948.502-07.5.:7.3 /.  #0807.38:3  !.3948.3. 8.3 : 90780-:9 .3   /2.47./:/.3 /03../ 5.3 503:.8  .3 2037:53./..7..  .  .9 %089  /03.2-.3 948.9 2030-.8/03.3   02.3 503.3.3-07.3 90780-.5.:9 7902.7 .3.3.9: -0-07.:7.7 0 -.3 09.::897:-079./. .9: .9 0.3 5. 20.:507.3 :39: 503:..9   . 0.7./..   8.. 8090.32094/0$% 730 $725 09.:.4380397.2.3..5. 2.: 2./.3.3 : 80. 907.9:010.9...3 8:. 5.5.33.. 8:.5.5 0.-0  -.3.5.: /:5 9079039:  !03:3.5 :/.9: -.7.202503.3 -0-07.3 2.39:-:.7 .7.2 .3.8 907.3.9.:.9: 8090.8.4-.5. 50.7:9 /. 010  .: /.3 : .8 0. 502.  .320309.5 /.9./.3 &2:23.3 0948.39079039:  /  770.8 . -0704254 .3 : /5.394889. /03.8:/.9 -.   ./.: /.3 90780..30897.9.8  -  $8902  907.: :.3 507.4-.9.9: 5.9:803.3 94889.33.9: 545:./ . 8090..

0..393.7... 809./.9 :.7.5.9/:3./03.5.3 80./: .7 8:.3 /.3 /507:.9 2030-..9 .:.39.7. .3 /-07. 80-.507943.-..3 0.8.7.:   803/4 90 .9. .5.90109488:.5.2-.380.3 .9: -.7.30...7 8:.3 02.9: 803./.3 90.3 .5. 4592.9  4380397.    559 5.5.7.3 /.39. /488 9:3./.32.9..9:803.9.9...9 2030-. /.9 /503:  0-07.9 /909.3:39:203039:.8 .7902.47.5. /..9.-.989 /.: . 2.9 90780-:9 .2 507 907 . 8.3 2..5..9.8 .3:  89.5 3/..-.3   02.3 0- 905. . 803.7  &39: -:1107 -8.7 9. /9039:././.9:-. 8.  .: 397.9 8.7. 89.38:.39..33.3:  /:3.3:39:203: 0948.3 5. /488 /. .   $.3 /50740 80.798 507 94:8. /9.37:90502-07.3/  .7.3 : ./.5. :39: 202570/8 5490383.9 .307    .308:2 8:1. /..

7     $::.3. 50309.7:9809.3 :39: 207.7 80.4803907.7.7 S    8.7552 .3 :39: 202-07..8.38.2.803/490507907.3.3 83.::5:39:203.3574808    07.8.

/.30897.3    5.43974:39:20.250 90780-:9 /.9:.9/9.. /.9.8. . :39: 202-07.3 . :39: 20308:.9 5079:2-:.35      05.  5 .9.:..2 907-:.9 9:2-:/.3-. 8:.384/. .  ...:/.390./03.3 803.3 3:978 05.: 203....2.3809.2:7..7.9:2 3 //.7. 803. 8.5.3    5.:0- .8  507803 02.9.3 /.3    5. :/.09.3.5.8 :39: 20:3.77.5.380 .202-:3:.703.89.9.5.9.3 :3. 3343. 803.5/745/-.7.../.8   507803 .3 $0/.3 43/8 .34 /.34/.3.307  !.-..3.33.3.3 574808 /0.5.3 8..7 .//0.9:2 3 /:3. /. :/.:5079:2-:.7./.  :3.58:8./.3480-..9 202-:3: .-. /03.3 2.9. 4380397.9: 8.. 7...8   507803 02.250 0897.7.2507907  $0-0:23. :/.9 .2-.9./:3. 9/.9: 5. :0:39:203. 57.. 09.5.:/.703.9.:/.3 .3.5.9 /.2-.8   507803 02.3 /.3 503..8. 4380397..39:803/7 &2:7../.380...3/:3.5.7:8.9 /5....2..3:2:7/2..7 57..8 ./.703. 4380397./.203.5.:2:790780-:9 207:5. .7. 203.7.:/./.9 202-:3: .3 .5.33.3: 5079:2-:.:3 878. /.250 /.5.5.309..307 803...3-0702-. 4380397./.

.8    –$¯                     .3 89.3    03.9.7 /0.      –$¯  /.3 3.3/.02.

703. 3343. 80-08..8.7.. /-.3 507.7 0897.7               ..79 2025:3.3 /..5 .3 .3    07/.5.2 57.3./...3..5..37902.9:2 /507-.9:2/./.3  . 010 948 907..3 .  –$¯  ' $.9 .7 .3 .5...:3 878. /.  .3 /:3.7.9...8. /.3-...7.7.3.4-.' !&%&! ' 0825:. 09.:.3..3 /03.88574-92.7.9-07./.3.3 90.:/.7       –$¯   -07.3.34 /.3.0.9/825:....3/03. 2:7.757480857.

.3#.44 /.3/:3     .3 .3907.0      ..%#!&$%   703!   .44  !0307-9 :: 0/4907.79.3 .3 .3 ..07   3./8 0508# ..2-..79.5 /8 '  ..208     0.8.50/4907..9 4-.7 :/.72.79.  $    .7/4    -.     :98.72.9!0393 0508# .     .4503/4308.44 &.2.7     843  .79.9 %.307.73.72. -. .3 %07.38.0  #    /.7.72.72. /.                .44/.     %.250  !       .

 3343.  .3.3: %0:7:/.:9    .   897.34/..34   0.09.07.7 .!# $02.:3878.2.2:7.9.09..   897.3 7902.8.

.9.... :2.9. !02-.7.3/.:9 43974  !03:25:.3 0825:.8.88/.:/.3 .32..9  3.2  7.7.2 .3 .

Sign up to vote on this title
UsefulNot useful