ÍNDICE DE CONTENIDO

GENERALIDADES DE LA MICROBIOLOGÍA ____________________________ 4
Membrana citoplasmática bacteriana _________________________________________ 4 Pared bacteriana___________________________________________________________ 4 Endospora bacteriana ______________________________________________________ 4 Metabolismo microbiano ____________________________________________________ 5 Crecimiento microbiano_____________________________________________________ 5

INTRODUCCIÓN A LA MICROBIOLOGÍA INDUSTRIAL __________________ 6 MICROORGANISMOS DE INTERÉS INDUSTRIAL _______________________ 7 MANTENIMIENTO Y CONSERVACIÓN DE MICROORGANISMOS INDUSTRIALES ______________________________________________________ 9 BÚSQUEDA DE NUEVOS METABOLITOS ______________________________ 10 MEJORA DE CEPAS DE INTERÉS INDUSTRIAL ________________________ 12 SUSTRATOS PARAMICROBIOLOGÍA INDUSTRIAL _____________________ 15
Sustratos usados como fuentes de carbono ____________________________________ 15 Sustratos usados como fuentes de nitrógeno ___________________________________ 16

MÉTODOS DE FERMENTACIÓN A GRAN ESCALA______________________ 17
Modos de operación del biorreactor __________________________________________ 17 Biorreactores_____________________________________________________________ 17 Tipos de biorreactores _____________________________________________________ 18 Instrumentación y control del proceso ________________________________________ 18 Escalado_________________________________________________________________ 19 Técnicas de esterilización___________________________________________________ 19
Del medio de cultivo _____________________________________________________________19 Del aire de fermentación __________________________________________________________19

Proceso fermentativo ______________________________________________________ 19

RECUPERACIÓN DE PRODUCTOS FINALES ___________________________ 20
Separación de las células ___________________________________________________ 20
Filtración ______________________________________________________________________20 Centrifugación __________________________________________________________________20

Rotura celular ____________________________________________________________ 20 Aislamiento preliminar ____________________________________________________ 21 Purificación ______________________________________________________________ 21 Secado __________________________________________________________________ 21 Recuperación de productos de ADN recombinante______________________________ 21 Rendimiento _____________________________________________________________ 22

PRODUCCIÓN DE ALCOHOLES ______________________________________ 23

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Procesos de producción de etanol ____________________________________________ 23
Preparación del sustrato___________________________________________________________23 Fermentación ___________________________________________________________________23 Purificación ____________________________________________________________________24

Producción de acetona/butanol ______________________________________________ 24

PRODUCCIÓN DE ÁCIDOS ORGÁNICOS _______________________________ 25
Ácido cítrico _____________________________________________________________ 25
Medio nutricional _______________________________________________________________25 Procesos de producción ___________________________________________________________26 Procesos en superficie (o koji, del japonés). _________________________________________26 Procesos sumergidos o en profundidad. ____________________________________________26 Purificación ____________________________________________________________________26

Ácido acético _____________________________________________________________ 26
Producción_____________________________________________________________________27 Método Orleans _______________________________________________________________27 Método alemán _______________________________________________________________27 Generadores por goteo o reactor Frigs______________________________________________27 Procesos sumergidos ___________________________________________________________27

Ácido láctico _____________________________________________________________ 27 Ácido málico _____________________________________________________________ 27 Ácido fumárico ___________________________________________________________ 28

PRODUCCIÓN DE NUCLEÓTIDOS, AMINOÁCIDOS Y VITAMINAS________ 29
Nucleótidos ______________________________________________________________ 29
Hidrólisis enzimática del ARN._____________________________________________________29 Hidrólisis química del ARN. _______________________________________________________29 Fermentación del IMP. ___________________________________________________________29 Fermentación del GMP.___________________________________________________________29 Síntesis indirecta:______________________________________________________________29 Síntesis directa________________________________________________________________30

Aminoácidos _____________________________________________________________ 30
Glutamato _____________________________________________________________________30 Otros aminoácidos _______________________________________________________________30

Vitaminas________________________________________________________________ 30
Riboflavina (B2)_________________________________________________________________31 Cobalamina (B12)________________________________________________________________31 Ácido ascórbico (C)______________________________________________________________31

PRODUCCIÓN DE ENZIMAS _________________________________________ 32
Producción comercial ______________________________________________________ 32
Selección de cepas_______________________________________________________________32 Procesos de producción ___________________________________________________________32 Sobre sustrato sólido (procesos Koji) ______________________________________________32 Procesos en biorreactores _______________________________________________________32 Aplicaciones ___________________________________________________________________33 Detergentes.__________________________________________________________________33 Producción de quesos. __________________________________________________________33 Procesado del almidón__________________________________________________________33 Industria papelera. _____________________________________________________________33 Elaboración de zumos.__________________________________________________________33 Elaboración de vinos. __________________________________________________________33 Industria textil ________________________________________________________________34 Síntesis orgánica.______________________________________________________________34

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PRODUCCIÓN MICROBIOLÓGICA DE ANTIBIÓTICOS __________________ 35
Antibióticos β-lactámicos ___________________________________________________ 35
Penicilinas _____________________________________________________________________35 Cefalosporinas __________________________________________________________________36 Nuevos productos _______________________________________________________________36

Antibióticos peptídicos _____________________________________________________ 36 Antibióticos carbohidratados _______________________________________________ 36 Antibióticos macrolídicos___________________________________________________ 37 Tetraciclinas _____________________________________________________________ 37 Antibióticos aromáticos ____________________________________________________ 37
Cloranfenicol ___________________________________________________________________37 Griseofulvina ___________________________________________________________________37

PRODUCCIÓN MICROBIOLÓGICA DE VACUNAS _______________________ 38
Métodos de producción ____________________________________________________ 38
Sistemas tradicionales ____________________________________________________________38 Vacunas de subunidades (técnicas de ADN recombinante) _______________________________38 Vacunas peptídicas ______________________________________________________________39

PRODUCCIÓN MICROBIOLÓGICA DE PROTEÍNAS TERAPÉUTICAS _____ 40
DNAsa __________________________________________________________________ 40 Eritropoietina (EPO) ______________________________________________________ 40 Somatropina _____________________________________________________________ 40 Insulina _________________________________________________________________ 40 Interferón _______________________________________________________________ 41 Interleuquinas ____________________________________________________________ 41 Activador del tejido plasminógeno ___________________________________________ 41 Colágeno ________________________________________________________________ 41

PRODUCCIÓN MICROBIOLÓGICA DE SCP ____________________________ 42
Producción de proteína unicelular ___________________________________________ 42
Sustratos ______________________________________________________________________42 Procesos de producción ___________________________________________________________43

Producción de levadura para panadería ______________________________________ 43

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GENERALIDADES DE LA MICROBIOLOGÍA
Microorganismo es todo organismo vivo que no es visible a simple vista: bacterias, algas, hongos, protozoos,... Se subdividen según los tipos de estructura celular: • Procariotas, que son las bacterias y arqueas (consideradas como bacterias simples y, por tanto, las menos evolucionadas). • Eucariotas, que son hongos, levaduras, protozoos, algas,... Los virus merecen una mención aparte dentro de esta clasificación, ya que no pueden ser considerados seres vivos en el sentido estricto (no poseen metabolismo, son incapaces de autorreplicarse, etc.) La principal diferencia entre procariotas y eucariotas es que los procariotas, a diferencia de los eucariotas, no poseen ninguna estructura nucleada que agrupe el material genético en una sola región, sino que éste se halla disperso por el citoplasma bacteriano. Además, los procariotas poseen una menor información genética y carecen de estructuras membranosas que delimiten orgánulos internos de funciones diferenciadas. Así, constan de una única macroestructura que desempeña múltiples funciones.

Membrana citoplasmática bacteriana
La estructura y composición son casi las mismas que en el caso eucariota. Sus funciones son: • Transporte de moléculas, efectuado por proteínas transportadoras embebidas en la membrana. • Contiene la cadena de transporte electrónico, que permite la fosforilación oxidativa y la producción de ATP. • Interviene en fenómenos de quimiotaxis (movimiento inducido por ciertos compuestos químicos, llamados quimioefectores), debido a que contiene receptores para los quimioefectores. • Juega un papel fundamental en la biosíntesis de moléculas como lípidos o polisacáridos. • Excreta proteínas que cumplen determinadas funciones en el exterior celular.

Pared bacteriana
Su principal función es dar rigidez a la bacteria, previniendo efectos osmóticos adversos, como la plasmólisis, además de preservarla de otras condiciones adversas. De hecho, una bacteria sin pared sólo puede sobrevivir en un medio isotónico con su citoplasma. La pared celular es una estructura tridimensional basada en la repetición de dos azúcares (Nacetilglucosamida y N-acetilmurano –NAG y NAM-), así como de un tetrapéptido. La principal diferenciación aplicada a las bacterias atiende al tipo de pared bacteriana: grampositivas o gramnegativas, o sea, sensibles o no a la tinción de Gram. En bacterias grampositivas, la estructura repetitiva es de gran tamaño y compacta, con pocas moléculas de otro tipo embebidas en la pared; mientras que en las gramnegativas es de tamaño notablemente menor, poseen muchas moléculas embebidas y presentan un denominado espacio periplásmico entre la pared bacteriana y la membrana plasmática. Así, una pared gramnegativa posee más funciones que una grampositiva.

Endospora bacteriana
Ciertas bacterias poseen dos estados en su ciclo vital: como célula vegetativa y como espora, no dándose ambos estados simultáneamente. El proceso de esporulación (formación de la espora) es bastante largo (810 horas). A diferencia con otras formas de vida, la espora no es un medio de reproducción, sino un cambio fisiológico. Las características más importantes de la espora son: - Presentan una mayor resistencia a condiciones extremas: altas temperaturas, compuestos químicos, desecación, radiaciones,... - Presenta una actividad metabólica casi nula. - Presenta una serie de capas de recubrimiento características: el exosporio, 3 cubiertas y el córtex. El exosporio y las cubiertas son proteicas, mientras que la otra es similar a la pared celular. - Prácticamente carece de agua, lo que le dota de resistencia térmica. - Contienen ácido dipicolínico, que asociado a iones calcio, permite mantener la estructura. Esta sustancia es típica de la endospora, ya que no se presenta en la célula vegetativa.

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y representa el tiempo que tardan los microorganismos en adaptarse a las condiciones del medio. . los microorganismos pueden ser fotoautotrofos. . hasta que un medio favorable induzca la germinación de la espora (proceso muy rápido. pueden obtener la energía de la luz (fototrofos) o de reacciones de ciertos compuestos químicos (litótrofos o quimiotrofos).Fase de muerte. Crecimiento microbiano Se refiere al aumento del número de células de un cultivo. - Metabolismo microbiano La diversidad en cuanto a rutas metabólicas entre las bacterias es enorme. ya que dota a las bacterias de mayor resistencia a los tratamientos. la esterilización debe realizarse en condiciones más críticas. la curva de crecimiento microbiano es siempre la misma.Fase estacionaria. Consiste en el periodo de mayor actividad de las células. la célula está preparada para desarrollar su actividad y multiplicarse utilizando los recursos que el medio le ofrece. Este proceso se caracteriza por el tiempo de generación. Existe un metabolismo muy importante. ya que son ciertas bacterias los únicos organismos capaces de efectuar las reacciones que permiten fijar el nitrógeno atmosférico y convertirlo en las formas en que pueden asimilarlo el resto de los seres vivos.En la rama sanitaria. El equilibrio entre células que nacen y células que mueren se rompe. Cuando finaliza. Asimismo. la fuente de carbono puede ser compuestos inorgánicos (autotrofos) u orgánicos (heterotrofos). puede mantenerse por un tiempo ilimitado. de retardo o de adaptación. . La forma de obtención del ATP por parte de los microorganismos es muy variada: • los organismos fotosintéticos obtienen el ATP por fosforilación. así como una explosión demográfica debido a las condiciones favorables del medio. La esporulación presenta dos aplicaciones fundamentales: . De este modo. • Los organismos respiratorios obtienen el ATP por fosforilación oxidativa. hasta alcanzarse un equilibrio entre el número de células que nacen y las que mueren. por lo que el número de células permanece aproximadamente constante. quimioautotrofos o quimioheterotrofos (son muy raros los microorganismos fotoheterotrofos). Debido a la acumulación de excreciones tóxicas al medio por la gran población microbiana. El estado de espora. por ejemplo.Contiene pequeñas proteínas ácido-solubles (SASP’s).Fase Lag. el del nitrógeno. de modo que va disminuyendo el número total de células hasta alcanzar un mínimo aproximadamente constante. así como el paulatino descenso de los nutrientes del mismo. ya sean aerobios o anaerobios. ya que dura sólo unos minutos).Fase de crecimiento. por lo que. o acíclica para organismos que sí lo producen. por procesos oxidativos parciales. que es el necesario para que la población se duplique. Así. 5 . dividiéndose en cuatro fases: . causado por la aparición de condiciones adversas en el medio. • Los organismos fermentativos obtienen el ATP a través de fosforilaciones a nivel de sustrato.En la industria. Este tiempo es variable según la especie y los factores ambientales y nutricionales. las células van muriendo. bien sea cíclica para organismos que no producen oxígeno. . disminuyen los daños causados en éste por las radiaciones ultravioletas y disminuyen las mutaciones. que unidas al material genético. Independientemente del tiempo de generación. se usan para sintetizar productos de interés. Representa un tiempo variable dependiente de las condiciones del medio.

se pueda mejorar la producción. las cepas industriales pueden ser muy diferentes de las salvajes originales. es en la Segunda Guerra Mundial donde la necesidad de antibióticos. Además. XX. sólo unas pocas presentan actualmente interés industrial. destacan dos ramas principales: • La Biotecnología tradicional. como glicerol o acetona. que se basa en la mejora de procesos ya establecidos. no fueron estudiados hasta el siglo siguiente por Pasteur. 6 . por lo que la búsqueda de una determinada especie con unas ciertas características es bastante compleja. Por ello. La Primera Guerra Mundial potenció la fabricación de otros productos necesarios para la guerra por vía microbiana. la vida media de los cultivos es mucho mayor. da el impulso definitivo al estudio de las capacidades industriales de los microorganismos. la legislación impone unas restrictivas medidas de seguridad con el fin de impedir la liberación de cepas modificadas al medio ambiente. Existe una amplísima diversidad de microorganismos. lo que supone un alto número posible de productos y sustratos. La biotecnología. La Biotecnología surge a finales de los 70 como punto de unión de diversas ciencias con el fin común de aprovechar los organismos vivos y sus cualidades para obtener beneficios económicos. Esto permite que. entre otros. o bien para obtener productos ya conocidos por vías alternativas. Por ello. así como los cultivos en continuo y el conocimiento en procesos anaerobios. Sin embargo. entre los que se puede llevar a cabo casi cualquier reacción metabólica. vino. por lo general. • Contemplan una amplia diversidad metabólica. por tecnologías de ADN recombinante. Dentro de la biotecnología. descubiertos poco antes. como la producción de etanol. para los microorganismos. o sea. dado que se desconocen sus efectos a largo plazo. debido a sus peculiares características: • Elevada tasa de desarrollo. y a pesar de su abundancia.INTRODUCCIÓN A LA MICROBIOLOGÍA INDUSTRIAL Desde tiempos ancestrales se han obtenido productos en cuya fabricación han intervenido los microorganismos. La primera prueba de la existencia de microorganismos se debe a los "animálculos” que Leuweenhoek observó gracias a su sistema de lentes en el siglo XVIII. • Sencilla manipulación genética. debido al relativamente pequeño tamaño de su ADN. Se aplica fundamentalmente a microorganismos. ya que la modificación del material genético de los microorganismos puede conducir a consecuencias inesperadas y potencialmente peligrosas. en los años 70 se perfeccionan las técnicas de inmovilización de células para aumentar el rendimiento económico de los cultivos (en medios sólidos. Sin embargo. Es por ello que las cepas salvajes son sometidas a diversas alteraciones con el fin de inculcar a éstas las características buscadas. cerveza. aunque no se haya tenido conciencia de ello. sin embargo. además de que facilita la separación del producto). que se basa en técnicas de ingeniería genética para obtener nuevos productos. Los primeros procesos industriales que aprovecharon la acción de microorganismos fueron procesos de obtención de alcohol y ácidos láctico y cítrico. yogur. Así. ácidos orgánicos o antibióticos. supone un problema ético y legal importante. Sin embargo. etc. a principios del s. • Toman como base para su crecimiento sustratos económicos. entre los que destacan los Pseudomonas. que en poco tiempo de cultivo son capaces de iniciar la producción al máximo de sus capacidades. También con estas técnicas se pueden obtener cepas capaces de degradar productos xenobióticos (productos no degradables de origen humano). como hormonas humanas. o incluso incorporar a los microorganismos de la maquinaria enzimática suficiente como para producir sustancias ajenas a ellos. • La nueva biotecnología. como ocurría con la fabricación de queso. las necesidades industriales son demasiado elevadas. y deben patentarse en alguna de las colecciones de cultivo existentes por el mundo.

ya que una vez que se altera el material genético. lo que requiere una modificación genética adicional de las cepas. además de que facilita su conservación al hacerlas más resistentes. son especies capaces de producir esporulación. filtraciones o centrifugaciones. lo que facilita su manejo e inoculación. Sin embargo. lo que permite una mayor facilidad de obtención de las cepas industriales buscadas. Pueden crecer en medios líquidos de bajo coste. que por lo general son residuos de otras industrias. Es preferible que el tamaño de las células sea el mayor posible. con diversos fines terapéuticos. ya que esto facilita la separación de las células del producto. Lácticos Embutidos y conservas Bacterias lácticas (el Probióticos (productos Bacterias grupo más importante) de efectos beneficiosos para la salud) Ácido láctico Saccharomyces cerevisiae Kluyveromyces fragilis Aspergillus niger (sobre todo en síntesis de ácidos orgánicos) Penicillium notatum 7 . de una especie pura. Por lo general. Esto supone una gran capacidad de absorción y sintetización de sustancias. Deben ser más o menos fáciles de manipular genéticamente. importante complemento dietético de bajo coste. Síntesis de proteínas de origen no microbiano. una mayor tasa metabólica. Dado que las condiciones del medio de cultivo son variables (por tratarse de cultivos a gran escala). como melazas. Los principales usos de las distintas clases de microorganismos son: Industria panadera Bebidas alcohólicas Fuente de vitaminas y de proteína unicelular (SCP. lo que permite iniciar la producción en periodos cortos de tiempo. sin presencia de otras células de otras especies diferentes). Así. Esto se debe a que los procesos de separación son. Las cepas utilizadas han de carecer de carácter patógeno. cítrico y filamentosos láctico). como pectinasas (útiles para la elaboración de zumos). Esta característica es importante. de Levaduras gran importancia en zonas con carencias de alimentos). a pesar de que hayan sido modificadas genéticamente en el proceso de obtención de la cepa industrial. para minimizar los riesgos en caso de que alguna célula viva escapara del fermentador al medio ambiente o al consumo. derivados de soja y ciertos quesos Producción de diversas enzimas. Son de rápido crecimiento. Otras características importantes de los microorganismos usados en industria son: Disponibilidad de cultivos axénicos (o sea.MICROORGANISMOS DE INTERÉS INDUSTRIAL La principal característica de los microorganismos es su elevada razón superficie / volumen (debido a su reducido tamaño). por lo general. como la penicilina. como Esclerichia coli. Hongos Síntesis de ácidos orgánicos (sobre todo. las cepas han de ser capaces de crecer aunque las condiciones no sean las óptimas ideales. son bastante más fáciles de manipular que otras. Síntesis de alcaloides. ciertas especies. más facilitada está la separación. esto presenta a su vez un inconveniente: son sustratos complejos y difíciles de metabolizar. son frecuentes las mutaciones. Son estables genéticamente en el tiempo. por lo que cuanto mayor sea el tamaño. en definitiva. Setas. tales como ciertas hormonas. Síntesis de antibióticos.

presentes en suelos) Bacillus - Antibióticos Enzimas Inhibidores enzimáticos Corinebacterias. utilizadas en industria quesera y en síntesis de potenciadores de sabor Clostridium (organismos estrictamente anaerobios) Antibióticos peptídicos Bacillus thuringiensis Enzimas proteasas Insecticidas Síntesis de disolventes Degradación de sustratos complejos en combinación con otras especies de microorganismos 8 .Actinomicetos (similares a hongos por morfología y tipo de crecimiento.

da buenos resultados suspensiones en tierra. En él. bastante bajo. 50 % . Un método alternativo es el del L-secado. y también .En tierra o arena da buenos resultados en clostridios. industriales (-70 ºC) o nitrógeno líquido (hasta –200 ºC). Debido a la manipulación continua. Para evitar la formación de cristales en el interior de las células.En bacterias lácticas. Para evitarlo. la temperatura de congelación varía. da resultados nitrógeno de una intermedios en precedida actinomicetos y desecación. es el más valorado. por lo general. de modo que se formen primero los cristales en el medio exterior. congelación en . Subcultivo Desecación Congelación Liofilización Escasa supervivencia y Saccharomyces .Para levaduras. dada la alta frecuencia de manipulación. líquido estéril. se sella a vacío. actinomicetos. Actinomicetos y clostridios. ya que cada especie presenta sus preferencias de conservación: Subcultivo. se usan dos técnicas: Adición de compuestos protectores. Para evitar que el proceso de desecación dañe las células. a la que las células pueden ser muy vulnerables. Consiste en pequeños discos gelatinosos que se impregnan con el cultivo líquido y se secan por un proceso activo (temperatura. ya que presenta tres grandes inconvenientes: El tiempo de persistencia de las células es. se requiere la adopción de técnicas de conservación apropiadas que permitan preservar sus propiedades. . como dimetilsulfóxido. se sella el cultivo y se conserva en refrigeración. . Consiste en el paso de un inóculo de un cultivo agotado en otro fresco (preferentemente. Según la técnica empleada. Al igual que antes. ya que permite unos tiempos de conservación bastante altos. se usa la genética. Este método. que pueden producir daños en sus estructuras. mejor es la conservación. Cuanto más baja sea la temperatura. al finalizar el proceso. etc.Para esporas de mohos. No es la más apropiada para la industria. Se puede producir contaminación fácilmente. el agua se sublimará por bajada de presión y el cultivo microbiano queda en el seno de una matriz porosa protectora (que por lo general es leche descremada o sacarosa). Se hace una congelación previa antes de pasar al liofilizador. clostridios 9 . Desecación. aumenta el riesgo de variabilidad genética en la cepa. El proceso se produce a temperatura ambiente una vez añadidos los protectores. pero también es mayor el coste.MANTENIMIENTO Y CONSERVACIÓN MICROORGANISMOS INDUSTRIALES DE Dado el alto coste de obtención de las cepas industriales. hay una de supervivencia y alta supervivencia aceptable alta variabilidad cerevisiae.Para mohos. Se usan congeladores normales (unos –30 ºC). reduciendo así el metabolismo.Para levaduras. Finalizado el proceso. se usan medios de congelación poco salinos. El inconveniente de este método es el gran aumento de la concentración de sales en el proceso de descongelación. nitrógeno líquido. se añaden compuestos protectores. Consiste en la eliminación de agua del microorganismo. Esto provocará la pérdida de agua de la célula por ósmosis. Liofilización. Congelación.). Actinomicetos y arena estéril o silica gel.Para esporas de mohos estabilidad genética. No existe un único método. junto con la congelación. Congelación lenta. sólido). se sella y se lleva a refrigeración. y alta estabilidad genética. . Debido a las características del método. Este tiempo puede aumentarse por refrigeración a unos 4 ºC.

es necesario emplear programas de selección. por lo que puede darse cualquier tipo de variación sobre cualquier gen (o sobre varios de ellos). 2. cuando sometemos una cepa salvaje a mejora genética para obtener la cepa optimizada para su uso industrial. es el medio de reproducción menos frecuente entre los microorganismos. Dichas técnicas son: Consiste en la penetración de DNA libre presente en el medio en Bacterias Transformación el interior celular. por lo que sólo puede aplicarse a ciertos hongos. Así. no lo hacen todas de la forma deseada. b. y se favorece cuando hay coincidencias en la secuencia (se facilita el trabajo de las enzimas de restricción usadas en estos procesos. etc. y esperar su acción sobre las células. Este gasto puede disminuirse si se efectúa la siembra sobre discos de agar. lo cual no es fácil de conseguir. Estos procesos requieren que el DNA introducido y el celular sean de estructuras similares. Presenta dos problemas principales: es muy complicado identificar el producto o cepa de interés. Sin embargo. Consiste en obtener la cepa de su hábitat común en la naturaleza. hay que mejorarla y preservarla de futuras alteraciones. Para este proceso. que permiten separar las células que nos interesan del resto del cultivo. Reproducción asexual. existen diversas técnicas de selección (las dos primeras para seleccionar un microorganismo concreto y las otras dos para obtener un nuevo producto o una vía alternativa de síntesis de un producto ya conocido. lo que supone un alto gasto económico y temporal. Es la más tradicional. y las que lo siguen. al menos. Sería la más adecuada. los mecanismos de degradación de la lactosa. para lo que hay que pasar a cultivos líquidos individuales). Existen dos métodos de separación de cepas: a. para poder separar las que presenten la cualidad buscada (aunque no sea posible analizar cuantitativamente dicha característica. en función del microorganismo al que se pretenda cambiar el material genético. Por ello. La creación de nuevos genomas microbianos utiliza técnicas de ingeniería genética. Consiste en la adición de una agente mutágeno. a los que se pueden aplicar compuestos coloreados). es limitar la mutación al gen que queremos modificar. A través de factores ambientales a los que sean sensibles las células que no posean la característica buscada. 10 . en la misma placa Petri y simultáneamente. Es una técnica aplicable a cualquier tipo de microorganismo. La creación de los nuevos genomas puede hacerse por diversos métodos: Mutagénesis. (mecanismos que introducen material Consiste en la introducción de DNA extraño en la célula a través Transducción genético extraño en de su infección por un virus bacteriano. Por definición. Reproducción sexual. ya sean especies nuevas o especies modificadas. con rendimientos más elevados y dotando a los productos de ciertas características importantes. en discos separados. Escrutinio racional. El potencial del mundo microbiano en este aspecto es enorme: sólo el 1% aproximadamente de las especies microbianas es conocido con cierta profundidad como para conocer sus intereses potenciales. por lo que puede no darse si quiera la característica buscada. como resistencia a antibióticos o degradación de compuestos cromógenos (como por ejemplo. Requiere realizar ensayos de cultivo de todas y cada una de las células tratadas. Así. que son las que usan bordes complementarios en los fragmentos unidos). Consiste en la observación de alguna característica secundaria asociada a la actividad buscada y fácilmente observable. podremos ir eliminando las células no modificadas. Se distinguen varios métodos. Escrutinio al azar. es necesario establecer los métodos de separación apropiados para obtener la cepa de interés de forma rápida y con la mayor selectividad posible. la selección o screening consiste en la aplicación de procedimientos altamente selectivos para detectar y aislar exclusivamente las células o metabolitos de interés a partir de una gran población de microorganismos distintos. y permite obtener cepas con nuevas características o con características propias mejoradas y potenciadas. El problema de esta técnica es que la mutación producida es al azar. no todas las células sufren el proceso de mutación. lo que interesa. como isómeros puros. Selección de cepas mejoradas genéticamente.BÚSQUEDA DE NUEVOS METABOLITOS Es costosa la búsqueda de nuevos productos o microorganismos capaces de producirlos. debido a que es una fuente natural de variabilidad genética. y una vez obtenida la cepa aislada.): 1. por ejemplo. Selección ambiental. lo que permite cultivar varias células. Una vez hallado el microorganismo en su hábitat.

Se aplican Electroporación pequeñas y breves corrientes eléctricas al cultivo. se transfieren plásmidos entre las dos células. a través de la cual se convierte en producto mejorado. Los primarios son aquellos que la célula produce porque son imprescindibles para efectuar sus funciones vitales. Modificación química.la célula) Consiste en la formación de un puente físico entre dos bacterias (una de ellas debe tener pili para que esto sea posible). 1. • Las condiciones ambientales determinan mucho su síntesis. más complejos. con lo que (para hongos) aparecen temporalmente poros en las cubiertas celulares. hay que disminuir las Especies con gran protoplastos repulsiones electrostáticas entre sus membranas citoplasmáticas dificultad para (con carga negativa). el metabolismo secundario es un campo de pruebas de la célula. En general. También se material genético favorece dicho proceso adicionando Ca2+. • Algunos metabolitos secundarios se obtienen como una familia de sustancias estrechamente relacionadas. con lisozimas). cuando un metabolito secundario otorga a una célula una gran ventaja sobre otras que no lo tienen. Las principales características de los metabolitos secundarios son: • Suelen ser producidos en exclusiva por un número limitado de especies. Es una técnica muy rápida y de buenos resultados. intercambiándose fragmentos del DNA bacteriano entre las bacterias. al producirse la escisión del plásmido. lo que facilita la entrada de DNA. que disminuyan dicha repulsión. Los protoplastos son células sin pared celular. Las células producen dos tipos de compuestos químicos: metabolitos primarios y secundarios. de modo que las células pasan al llamado estado competente (mayor disposición a la entrada de DNA). se mantiene la información genética que define la ruta metabólica que la origina. dando lugar a una nueva característica de la especie. 2. los productos de interés industrial son metabolitos secundarios. Consiste en sintetizar un producto químico para que luego el microorganismo efectúe alguna reacción enzimática sobre él y así transformarlo en producto. por lo que hay que cuidar que el trabajo sea en medios isotónicos. por lo general relacionadas entre sí. Biotransformación. La teoría más aceptada sobre el origen del metabolismo secundario es la de Zähner. De este modo. Así. pero como en ocasiones los plásmidos están fusionados con el cromosoma Conjugación bacteriano. éste pasa a ser un metabolito primario. son células mucho más sensibles. Esto genera mutaciones en las dos células por recombinación del DNA. Hongos Recombinación Se debe al proceso natural de reproducción sexual que siguen filamentosos mitótica estos microorganismos. modificar su como etilenglicol. las rutas metabólicas que los sintetizan están reguladas por mecanismos distintos a los de los metabolitos primarios y son. Fusión de Para que los protoplastos se fusionen. ya que dicha pared es la principal barrera al paso de DNA. por lo que es importante conocer los detalles del proceso de síntesis. por lo general. cuando una determinada sustancia producida por dicho metabolismo resulta beneficiosa para la célula. para poder mejorarlo y aumentar la producción. por lo que se hace necesario añadir agentes. Consiste en usar un metabolito microbiano como precursor de una reacción química ajena al microorganismo. aunque en determinadas condiciones la síntesis de estas sustancias le confiera algún beneficio. sobre todo a fenómenos osmóticos. • En general. Se obtienen por procesos químicos o enzimáticos (más concretamente. 11 . puede haber errores. Sin embargo. mientras que los secundarios son aquellos que la célula produce y no son vitales para que ella realice sus funciones vitales. Según ésta. En general.

Así. pero no se requiere que 12 . En el caso de inhibición multivalente. • Obtención de microorganismos capaces de sintetizar productos de interés biológico que no sean de origen microbiano. influyentes todos en la economía del proceso. Esto se debe a que. Estos mecanismos pueden ser: 1. para poder cruzarlas posteriormente con las células alteradas para recuperar las características originales. los microorganismos utilizados son aerobios. mejorando los resultados de la mutación. Además de alterar los mecanismos celulares para la obtención del producto que nos interese. El producto final de cada ruta “hija” actúa como inhibidor de la primera enzima que ya no efectúa una reacción común al resto de las rutas relacionadas. que están reguladas de forma independiente. por recombinación con células de la cepa original. La regulación a este nivel puede producirse. al menos. y más dispersos se hallen en el genoma. ii. mediante las técnicas de DNA recombinante. por lo que interesa disminuir el consumo de oxígeno o. Dado que cuanto más se manipula un microorganismo mutado. a través de varios mecanismos distintos: . iv. Cuando la ruta es ramificada. en ocasiones. se alteran características originales que afectaban a la eficiencia del proceso de fermentación. más caros y complejos son los equipos. disminuir el tiempo de fermentación (permite efectuar una producción mayor en menos tiempo) o aumentar la capacidad del microorganismo para nutrirse satisfactoriamente de un sustrato más barato.MEJORA DE CEPAS DE INTERÉS INDUSTRIAL No todas las especies presentan la misma disposición a la modificación genética. para facilitar su separación. es necesario mantener células mutadas originales en reserva sin utilizar. debido a que posiblemente se alteren otras características celulares que hacen disminuir el rendimiento posible. En el caso de la inhibición acumulativa. por lo general. la inhibición de la ruta se consigue sólo cuando todos los productos finales en los que desemboca alcanzan la concentración necesaria.Sustitución de alelos mutantes desfavorables tras diversos ciclos de mutación. . cuanto mayor sea el requerimiento de oxígeno. dichas características pueden recuperarse. optimizarlo al máximo). de las primeras de la ruta) una vez que alcanza cierta concentración en la ruta. La primera etapa de la parte común de la vía metabólica está regulada por distintas isoenzimas.Recombinación con cepas salvajes que suelen tener mejores características fermentativas. disminuir la producción de éstos. más complicada será la regulación y control del proceso). Esto. Regulación de la actividad enzimática.Retroinhibición. cuantos más genes estén implicados. mayor es el riesgo de que la mutación degenere. Por ello. es necesario conocer las posibilidades de regulación de la ruta que lo produce. Las principales razones que llevan a realizar los procesos de mejora genética. La recombinación es el proceso que permite aumentar la variabilidad genética por medio de la unión de la información genética contenida en dos genotipos. Consiste en que uno de los productos de la ruta metabólica actúa como inhibidor de una de las enzimas (por lo general. o a lo sumo. la inhibición sobre la ruta se produce también por todos los productos finales. entonces puede darse de varias formas: i. • Eliminar la síntesis de compuestos colaterales para aumentar la pureza del producto. Esto se consigue mediante: .Unión de diferentes alelos que generan cantidades crecientes de metabolito. . sin embargo. son: • Incrementar la baja producción que se obtiene a partir de cepas salvajes. • Adecuar las características del microorganismo a las condiciones ambientales del lugar donde se lleve a cabo la fermentación: requerimientos de oxígeno (ya que. La dificultad de este proceso depende de la complejidad de modificar los genes que rigen el producto. obtiene resultados inferiores a los teóricos posibles. iii. al alterar las características que nos interesan. en función de la especie de microorganismo y la complejidad de la información genética requerida por la característica que queremos incorporar al microorganismo (número y tipo de genes. a su vez.

Asimismo. Afecta. Hay tres procesos para ello: . Exceso de producción de metabolitos primarios. por determinadas circunstancias. 2. pero pueden tener ciertos efectos laterales sobre el secundario. Este método de regulación aparece. . . 4. por lo general.Obtención de mutantes resistentes a antimetabolitos. hemos de añadir el compuesto eliminado al medio de cultivo en cantidad suficiente como para que no se detenga el crecimiento celular pero tampoco la ruta deseada. que codifican las enzimas implicadas en la síntesis del compuesto. Controla la síntesis de enzima modificando el ARNm que daría lugar a su síntesis. Un antimetabolito es una sustancia de estructura tan similar a la de un metabolito que es capaz de unirse a la enzima. sobre todo. por lo que se usan para aumentar su producción. Así. Existen tres mecanismos fundamentales de regulación: . Las enzimas inducibles son aquellas que no están siempre presentes en la célula. Consiste en la activación o inhibición de una enzima debido a cambios conformacionales reversibles causados por la unión o no de un determinado grupo químico o molécula a la enzima..La inducción consiste en que el propio sustrato actúa como activador del sistema genético que codifica la enzima. Regulación y superproducción de metabolitos secundarios. . Carga energética. Se define la carga metabólica como: C.De resistencia. vitaminas. destacando la obtención de cepas auxotrofas y la eliminación de compuestos colaterales.- todos alcancen la concentración necesaria para detener la ruta. Afecta. .E.Convertir una enzima inducible en constitutiva.5ADP AMP + ADP + ATP Cuando el valor de este cociente es próximo a 1. sino que el proceso es más gradual.Eliminación de la retroalimentación: obtención de mutantes auxotrofos. 13 . a las rutas de síntesis de aminoácidos. pero ésta no es capaz de usarlo como sustrato para su reacción. que están implicados en el metabolismo primario. Estos metabolitos son más complejos de regular. Regulación de la síntesis de enzimas. Este proceso permite que un producto que no es siempre requerido por la célula salvo cuando aparece el sustrato en el medio esté siempre activo. cuando el valor se aproxima a 0. se regulan por los mismos mecanismos que los primarios. . Así. sobre todo. se inhiben las rutas anabólicas y se activan las que lo producen (catabólicas). que dan resistencia a la célula frente a la acción del metabolito secundario (en el caso de que éste presentara actividad antimicrobiana). indica una gran cantidad de formas energéticas del ATP.La atenuación actúa en conjunto con los 2 sistemas anteriores. 3. Para evitar la detención del crecimiento celular.).La represión consiste en la detención de la transcripción de enzima por la acción inhibitoria del producto final que genera.Estructurales. por lo que se activan las rutas que lo consumen (anabólicas) al tiempo que se inhiben las que lo producen. Los procesos de regulación anteriores afectan. a enzimas inducibles. podemos hacer que la célula no requiera el producto final de la ruta o bien dotarla de capacidad para actuar sobre el antimetabolito.. en células en la etapa de crecimiento estacionario. Así.De permeabilidad. A pesar de ello. que controlan el transporte de sustancias hacia y desde la célula. a metabolitos primarios. sobre todo. . sino sólo cuando.Regulatorios. ya que están controlados por cuatro tipos de genes. .. Los genes implicados son: . . . el producto de interés debe ser anterior en la ruta al punto de inserción del antimetabolito. = ATP + 0. se necesitan en un momento dado o aparece en la célula el sustrato sobre el que actúan.Degradación de enzimas. Un organismo auxotrofo para un determinado compuesto es aquel que no es capaz de sintetizar un producto que requiere para realizar sus funciones (algunos aminoácidos.Modificación de enzimas. Consiste en la degradación de enzimas inducibles por medio de la acción de otras proteasas específicas. por lo que han de suministrarse en el medio de cultivo. impedimos la inhibición de la ruta. si eliminamos la capacidad de la célula para sintetizar una sustancia que actúa como inhibidor del proceso que nos interesa.

Para reducir el número de pruebas de este proceso y aumentar el número de auxotrofos de partida. las cepas auxotrofas (que no se desarrollarán en medio mínimo) no se verán afectadas. se aumentará la competencia por presencia de iones calcio y/o electroporación. La técnica consiste en que las colonias de microorganismos estén en el mismo sitio en ambos medios. obtención de medicamentos. por lo que sólo ellas permanecen activas en el cultivo. • Inserción del gen en un plásmido. se usa un taco de madera de igual forma que el fondo del cultivo y recubierto de terciopelo. Otra forma de detectar los mutantes deseados es alterar algún carácter enzimático que origine una propiedad fácilmente observable. Para hacer una selección de mutantes selectiva. La ingeniería genética aplicada a la microbiología industrial permite introducir secuencias específicas de DNA en una célula. para ello. Para ello. mientras que el resto morirán. Para facilitar este proceso. se hacen coincidir las zonas adyacentes al gen con las secuencias de corte de las distintas enzimas de restricción.). y que son las colonias auxotrofas. las etapas a seguir son: • Obtener la secuencia genética a clonar. Por comparación tras la incubación de ambos cultivos. etc. un fago o un cósmido (plásmido que contiene los genes que codifican la síntesis de la cápsida de un fago λ). que no contiene los nutrientes necesarios para las especies auxotrofas (por lo que éstas no se desarrollarán). es frecuente tratar primero la muestra con penicilina en medio mínimo. 14 . lo que se consigue a través de mecanismos genéticos. sobre todo en biotecnología (prevención de enfermedades génicas. podemos adicionar antibióticos o antimetabolitos a los que sólo la cepa mutada es resistente. • Selección de mutantes. Una vez delimitado el gen a clonar en el genoma. Para el caso de auxotrofos se aplica la técnica de los dobles cultivos: uno en medio completo (contiene todas las sustancias que pueda requerir la célula) y otro en medio mínimo. Como la penicilina actúa sólo sobre células en crecimiento. es aconsejable efectuar tratamientos cíclicos con distintos agentes mutágenos sobre las cepas mutadas. Esto se realiza por acción de las endonucleasas de restricción. se impresiona éste en el terciopelo y se inocula éste en el medio mínimo.) y protección ambiental (degradación de productos xenobióticos. • Introducción en la célula hospedadora...Para evitar desechar cepas que puedan presentar características interesantes. localizamos en el medio completo las colonias que no se han desarrollado en el mínimo. Una vez efectuado el cultivo sobre el medio completo. eligiendo la que mejor se ajusta al proceso. Las técnicas de ingeniería genética tienen diversas aplicaciones. Éstos serán los vehículos a través de los cuales se introducirá el DNA en la célula..

de mutantes capaces de producir amilasas. condiciones. por lo general. es necesario proporcionarlo en celulosa. pureza. complejos. por hidrólisis química u obtención su degradación. su composición es desconocida y variable. etc. efectuar una hidrólisis química o tratamiento especial. plantas como sales y . etc. básicos para que los microorganismos efectúen sus funciones. por lo que se utilizan generalmente residuos de otras industrias. así prima (zona. se pueden producir condensaciones de Maillard durante el Proviene como Presenta fuentes de carbono proceso de esterilizado. Es necesario degradarlos cuando los Son polímeros de azúcares microorganismos carecen de las amilasas: que requieren la presencia por adición de amilasas al medio de de amilasas específicas para cultivo. según origen Presenta formas asimilables (caña o remolacha) y cultivo de la materia Residuos de las de carbono y nitrógeno. • Cierto contenido en oligoelementos y sales minerales. microorganismos. se añaden tampones. Esto es particularmente crítico en lo referente a sustratos: en laboratorio. Se usa en Metanol producción de proteína unicelular y de ciertas vitaminas. Muchos de ellos son Al igual que el almidón. • Su composición ha de ser lo suficientemente equilibrada: sin exceso ni limitación de ningún nutriente necesario. aunque sí como complemento de medios con bajo contenido en carbono. Estas reacciones residuo del fácilmente asimilables se producen entre grupos amino y malteado de la (azúcares sencillos). Han de presentarse en formas asequibles por las células (no son válidas todas las formas). lo que puede llegar a inhibir el crecimiento microbiano. aunque se Etanol están adaptando procesos para sintetizar diferentes sustancias usándolo como sustrato. están perfectamente definidos en cuanto a composición. clima. La consecuencia es la cerveza proteínas y pépticos) disminución de los nutrientes asimilables por los microorganismos. Sustratos usados como fuentes de carbono . Los sustratos se escogen. Los sustratos industriales presentan el gran inconveniente de que. Son pocos los microorganismos capaces de utilizarlo. y carboxilo de proteínas y azúcares. mientras que a escala industrial esto no es posible por no ser económicamente viable.Puede contener compuestos tóxicos de azucareras oligoelementos suficientes. además de por su composición. Debido a la actividad microbiana. Si el microorganismo pero otros. como la no lo posee.Composición muy variable. el metabolismo del microorganismo puede desequilibrarse hacia procesos que no son los habituales. Dada su composición. Estos residuos han de cumplir los siguientes requisitos para poder ser usados como sustrato: • Contener una fuente de carbono y nitrógeno suficientemente rica.. Para minimizar estos efectos. por cercanía a la zona. usar cepas mutadas capaces de degradarla. la celulosa directamente aprovechables requiere de un sistema enzimático especial por los microorganismos. Melazas Extracto de malta Almidón y dextrinas Desechos de madera e industrias papeleras Aceites vegetales Alcoholes de bajo número de carbonos 15 . requieren el medio. el pH del medio puede sufrir grandes variaciones. No son válidos como única fuente de carbono.).SUSTRATOS PARAMICROBIOLOGÍA INDUSTRIAL Las características de los procesos microbianos a escala industrial presentan grandes diferencias con los procesos a escala de laboratorio. lo que puede interesarnos o no. dando cebada en la variadas y ricas fuentes de compuestos de degradación muy fabricación de nitrógeno (aminoácidos. Se usa principalmente para la obtención de ácido acético. en función de si los productos producidos son los que buscamos. • Tamponadores de pH. Si no fuese así. para su degradación. ya que así se disminuyen los costes de transporte.

Sólo son válidos para unos pocos microorganismos. como urea o nitrato amónico. . maíz 16 . de una misma clase.. pero dentro de diversos orígenes.Alcanos de 12 a 18 carbonos Son subproductos del petróleo. lo que se hace es enriquecer los sustratos con especies químicas ricas en nitrógeno. ya que son muy indicadas para los hongos y actinomicetos que efectúan dichos procesos Líquidos de Procede de industrias Contiene fuentes muy ricas de nitrógeno fácilmente maceración del alimentarias asimilables.Su composición varía Peptonas degradación de proteínas composición que el extracto según el origen. Sustratos usados como fuentes de nitrógeno En ocasiones.Son bastante caras.) y carbohidratos. . Presentan los mismos Extracto de por plasmólisis (debido a la .Contienen una gran inconvenientes de adición de gran cantidad de variedad en fuentes de composición que las levadura NaCl) o termólisis.. por lo que su mayor inconveniente es que su precio está determinado por el precio del petróleo. para el aporte de nitrógeno. hay pocas diferencias. Se usan mucho como sustratos para la producción de Harina de soja antibióticos. péptidos.Es el extracto más usado Se obtienen de levaduras. nitrógeno (aminoácidos. melazas.. Estados intermedios de Son más homogéneas en su . de levadura.

Velocidad de crecimiento del microorganismo (en producto (búsqueda de las condiciones óptimas). . que pueden alterar el desarrollo microbiano y la producción.Obtención del producto en la mayor concentración . y ciertos productos sólo se sintetizan en la fase estacionaria. . Además.Tasa de producción. A tener en cuenta: Aspectos microbianos Aspectos técnicos . muchas ocasiones. Adición de oxígeno. Aunque teóricamente es el régimen de trabajo ideal. con la excepción de: a. debido a que la espuma puede generar diferencias de temperatura y concentraciones dentro del tanque. lo que facilita la recuperación y purificación. temperatura. El sustrato se aporta de forma secuencial (no todo el sustrato es añadido al principio). Control de las condiciones ambientales. Es el más utilizado por su sencillez. Se debe a que. Continuo. en ciertos procesos. c.MÉTODOS DE FERMENTACIÓN A GRAN ESCALA Es preciso conjugar los aspectos microbiológicos del sistema de producción con los puramente técnicos.. la concentración de nutrientes ejerce efectos inhibitorios sobre el proceso o el crecimiento del microorganismo. Estos inconvenientes son. para evitar las variaciones de pH originadas por la actividad microbiana. Adición de buffers. Discontinuo. predominante sobre el .Transferencia de materia y calor. Se trata de sistemas cerrados en los que no se varían externamente las condiciones iniciales (lo que supone que la composición del medio va variando continuamente en el tiempo conforme se desarrolla el cultivo). Biorreactores Están fabricados en materiales capaces de mantener las condiciones óptimas de presión. las condiciones óptimas para el crecimiento y para la producción serán diferentes. Adición de antiespumantes. Semicontinuo.Productividad lo más elevada posible.Eficiencia de la conversión del sustrato en . Potencial para el escalado creciente de producción. 2. hasta el punto de que. temperatura. para poder empezar a retirar caldo fermentativo e introducir sustrato fresco. Los criterios básicos de diseño de un biorreactor son: Características bioquímicas del cultivo a realizar. Asegurar la estabilidad genética del microorganismo. a pesar de su importancia.. impidiendo que se estimulen mutaciones. ya que diferencias mínimas pueden alterar gravemente la producción. Se retiran productos y sustrato agotado al mismo tiempo que se aporta la misma cantidad de sustrato fresco. por lo que no sabemos cuándo se habrá alcanzado el nivel de producción deseado. y según el proceso.. etc. que sólo podemos conocer el nivel de crecimiento del microorganismo. 17 . Modos de operación del biorreactor 1.Coeficientes de rendimiento de producción. para evitar gradientes de nutrientes. entre otros. Las células que quedan actúan como inóculos. rendimiento). Para ello. Cinética de crecimiento y producción del microorganismo. Diseño y modo de operación. presentan numerosos inconvenientes técnicos. Esterilización lo más barata posible. cuentan con diversos sistemas que permiten conocer cuándo se obtiene el nivel de producción adecuado. se llega a obviar. b.. Características hidrodinámicas del reactor: es necesario minimizar los fenómenos de transporte en el reactor. de gran importancia. que en la mayoría de los casos es acero inoxidable. posible. . Inclusión de sistemas de oxigenación adecuados a las exigencias del microorganismo. lo que se evita haciendo un aporte secuencial de los nutrientes. 3. lo que complica aún más el proceso.

por lo que se mide como diferencia entre los flujos de entrada y salida. la alimentación se produce de forma vertical en sentido ascendente. Son los más tradicionales (similares a los de lecho fijo). Adopción de refrigeradores. que puede afectar negativamente a la producción). suprimiendo posibles gradientes. Se usan sensores situados cerca de las enzimas inmovilizadas de interés. dado que las células pueden participar en varios procesos fermentativos. Resistencia a la corrosión. pero es difícil aislar la enzima que nos interesa. permite homogeneizar el interior del reactor. 5. Por lo general. producción y rendimiento. Los principales inconvenientes de la producción en continuo: En ocasiones. Favorecen la mutación de las cepas. y por lo tanto permite conocer las condiciones óptimas para la producción. Es más difícil obtener concentraciones altas. Los aparatos instrumentales son de difícil esterilización y baja fiabilidad. Materiales no tóxicos (ni para el microorganismo ni para el consumo). CO2. Afecta a la permeabilidad de la pared celular y al grado en que se producen las reacciones catalizadas por las enzimas presentes en ella. para mantener constantes las condiciones de temperatura (la actividad microbiana genera una gran cantidad de calor. Capacidad para soportar altas presiones. En columna de burbujas. aportándose éste por la parte inferior del reactor. Permiten reutilizar continuamente el biocatalizador. Los de enzimas presentan grandes ventajas. Temperatura. necesarias para la recuperación y purificación. aumentando la productividad. junto con una serie de bucles externos. ya que un grupo de células puede participar en varios ciclos de producción. el más usado. aumenta la inestabilidad genética. 2. 3. Informan sobre el nivel de producción de un determinado metabolito. Son los más interesantes y novedosos.- - Sistemas de muestreo para determinar las condiciones internas del biorreactor. Influye en la cinética de las reacciones. La información suministrada por el procesado de los datos obtenidos permitirá controlar el proceso de forma más eficiente. o atrapamiento mecánico en matriz o membrana) o químicos (enlaces covalentes). es aconsejable disponer de diversos medidores. y la estabilidad y actividad enzimáticas. En grandes fermentadores. 6. De lecho de goteo. por lo que la producción en continuo genera grandes cantidades en stock. 18 . aunque permiten trabajar también en discontinuo). 3. por lo que no es viable el almacenamiento por tiempo indefinido. Dicha inmovilización puede efectuarse por medios físicos (adsorción. Instrumentación y control del proceso La información aportada por estas variables permite conocer la marcha del proceso fermentativo. Oxígeno disuelto en el caldo de fermentación. 4. Se obtiene indirectamente por balances de materia. 4. De lecho fijo o empaquetado. pH. 5. Los medidores son sencillos de manejar. El sustrato se hace pasar lentamente por la matriz empaquetada que contiene al microorganismo (un proceso semicontinuo. dados su alto coste y complejidad. El microorganismo permanece suspendido (debido a burbujeo continuo. lo que supone la consideración de un tiempo de residencia en dicha matriz. Se insufla gas comprimido por la parte inferior que. El sustrato es el medio líquido en el que están inmersas las células. disminuyendo los costes. Tipos de biorreactores 1. Se usan electrodos de membrana o técnicas espectrofotométricas o cromatográficas. Los microorganismos se encuentran en una matriz empaquetada. De enzimas o células inmovilizadas. De lecho fluidizado. como consecuencia del sustrato líquido ascendente. la demanda del producto es estacional. No son muy corrientes. 1. lo que no es fácil de conseguir) en el fermentador. Biomasa. Presentan el inconveniente de que. La vida útil del producto puede ser limitada. 2. Sondas de enzimas inmovilizadas.

Esterilización continua. congelación (aunque rápida. Crecimiento del inóculo.1 y 3% para bacterias. Del aire de fermentación Se usan filtros profundos de lana de vidrio o de cartucho de fibra. Si esto no se consigue.Escalado Es el proceso de conversión de un proceso productivo de pequeña escala a escala industrial. Consiste en la obtención de altas temperaturas (140 oC) durante 120 s por inyección de vapor (intentando evitar su dilución) o cambiadores de calor (evitando la formación de depósitos de sales insolubles). 2. el almacenamiento a baja temperatura (poco útil). Precultivo. Requiere grandes periodos de tiempo.25 y 1 vvm de O2. Sus ventajas son que permiten reutilizar el agua y no alteran la composición del medio. • Entre 0. 3. o bien la aplicación directa del vapor sobre el medio de cultivo. Estas cantidades son entre 0. manteniendo una velocidad de transferencia de oxígeno constante. Consiste en la inyección de vapor a la camisa del fermentador o los serpentines internos. principalmente. • Sobrepresión (de 0. • Agitación en función del tamaño del fermentador. así como la potencia consumida por unidad de volumen. los procesos de transporte y el comportamiento celular son diferentes.. que consiste en obtener la cantidad suficiente de células para poder usar como inóculo en la fase de producción. Se coloca el inóculo en contacto con los nutrientes que le servirán de sustrato y las condiciones en las que crecerá. por lo general.2 a 0. Producción. de 5 a 10% para hongos y actinomicetos y de 1 a 500000 esporas por litro de cultivo. Por ello. es de alto coste (si no se puede reaprovechar el agua) y altera la composición del medio..Esterilización discontinua. Éstas son. no es viable) o liofilización (consigue un mayor número de células viables al usar agentes protectores). 1.5 atm sobre la atmosférica). 4. se aplica un proceso gradual. se producen menores concentraciones de producto y unos mayores tiempos de retardo de los esperados. estando éstas en los rangos: • Temperaturas para mesófilos (de 20 a 45 oC) y para sicrófilos (de 5 a 20 oC). que consiste en la recuperación de las células conservadas en condiciones adecuadas para su aplicación industrial. debido a que la fluidodinámica del sistema. Preservación del inóculo por medio de prácticas de conservación que permitan que las cepas mantengan su capacidad biosintética. extrapolables a la escala industrial. al tiempo que el tamaño del cultivo se va aumentando en proporción 1:10. Las condiciones de producción a pequeña escala no son. ya que permite homogeneizar el medio de cultivo. pero si es demasiado alta puede inhibir el crecimiento bacteriano. Técnicas de esterilización Del medio de cultivo Se usan preferentemente métodos térmicos y filtros. Proceso fermentativo 1. 2. 19 . lo que evita las contaminaciones.

Consiste en molinos de cuchillo. Permite facilitar la posterior purificación. así. permiten efectuar separaciones líquido-líquido en función de la densidad. el producto de interés se encuentra en el caldo de fermentación junto con numerosos compuestos que. La gran ventaja de este tipo de centrífugas es que. por lo que sólo consigue elevar en parte la concentración del producto. que separan las partículas en función de su gravedad específica. Alta viscosidad y comportamiento no newtoniano del fluido. la ultrafiltración para partículas de entre 10-3 a 0. Como las células son las más pesadas. • Acondicionamiento..1 µm o tamaño molecular superior a 1000. bolas. pobre sedimentación y alta retención de agua. en muchas ocasiones. si no es así. Así. Estas características de los fluidos biológicos son: 1. Se usan sobre todo en panadería y producción de proteína unicelular (SCP). • Que permitan una alta velocidad de flujo. lo que dificulta la predicción de propiedades. Tendencia a formar emulsiones. se depositan en la parte inferior. para comercializar o conservar el producto. los procesos de filtración constaran. desecación. generalmente. • Purificación. No se efectúa de un modo muy estricto.. selectivos y de un determinado tamaño de poro. En ellas. lo que impulsa la filtración a través de la membrana. Rotura celular El proceso a seguir es: 1.RECUPERACIÓN DE PRODUCTOS FINALES Al finalizar la fermentación. De cámara y disco. se usa la ósmosis inversa para partículas de 10-4 a 10-3 µm o tamaño molecular inferior a 1000.2 y 10 µm. 20 . Se efectúa entonces la rotura: a. También hay que tener en cuenta el diámetro de las partículas. 4. de las siguientes etapas: • Separación y rotura de células para el caso de que el producto se genere de forma intracelular. Baja estabilidad térmica y química.. • Aislamiento del producto. Se diluyen las muestras en tampón. Baja filtrabilidad. 3. no es necesario.. presentan propiedades similares a éste. 2.. Los tipos de centrífuga más usados son: De filtro de criba. 2. • Con posibilidades de esterilización.. lo que complica la purificación del compuesto final. Separación de las células Filtración Se pueden usar dos tipos de filtros: de placa y malla (para volúmenes pequeños) o continuos de tambor rotatorio a vacío (para volúmenes grandes). Técnicas mecánicas (molienda). esto es. y microfiltración para tamaños de partícula de entre 0. ya que se puede aplicar a más casos y condiciones que la filtración. Las características de los filtros utilizados son: • Resistentes. las suspensiones se proyectan sobre un material filtrante. además. Centrifugación Es más versátil. donde se obtienen ya altas concentraciones de producto.

detergentes. El caso más extendido es el uso de calor húmedo. 3. Así. que aunque son caras. Secado Es el punto final de la purificación en la mayoría de los casos. c.Técnicas físicas: ultrasonidos (rompen la estructura celular).. Permite separar el producto en función de su solubilidad en diferentes líquidos inmiscibles. se usa la liofilización. Así. Purificación Se utilizan principalmente técnicas cromatográficas. no corrosivos y no alteren el producto. aunque puede provocar alteraciones sobre el producto. d. Adsorción. debido a que los mecanismos para obtenerlos son construidos de forma artificial. aunque en industria se prefieren los molinos de bolas y los homogeneizadores de alta presión. Aun así. que usa el carácter antigénico de los productos y una matriz de anticuerpos específicos. Las características fisiológicas de cada organismo determinan el método más adecuado para su lisis (las bacterias Gram-. por ejemplo. autolisis (la célula sintetiza enzimas que degradan las cubiertas. Se usa para metabolitos hidrofílicos (con capacidad para ionizarse). no han sufrido todas las transformaciones o tratamientos a los que serían sometidos en una célula normal. lo que le permite una altísima selectividad. Dichos disolventes han de ser económicos. • De isoelectroenfoque. que consiste en modificación del pH hasta alcanzar el punto isoeléctrico de la proteína. Consiste en la adición de alguna sustancia en alta concentración o modificar las condiciones. Recuperación de productos de ADN recombinante Los productos obtenidos por este tipo de técnicas muestran características que dificultan su recuperación. lo que les provoca la muerte) o bacteriófagos (provocan la lisis celular al infectar la célula). antibióticos. son altamente rentables. En el proceso no debe haber pérdida de actividad. Consiste en hacer pasar el caldo de fermentación por resinas de intercambio iónico. las proteínas por alteración del pH más allá del punto isoeléctrico y en ocasiones por temperatura. b. homogeneizadores de alta presión o procesos cíclicos de congelación-descongelación. solventes. En el caso de que se requiera la presencia de células en el producto. Aislamiento preliminar Se aplican tres métodos principalmente: 1. Técnicas químicas: choque osmótico (plasmólisis de la célula al sumergirla en una solución muy salina). ácidos. • De inmunoadsorción. • De afinidad (adsorción selectiva). los polisacáridos pueden precipitar por adición de alcohol. las levaduras y las células en fase estacionaria son más resistentes). pero dado el alto valor de los productos. de modo que se provoca la precipitación de compuestos. Los tipos de cromatografía usados son: • De exclusión molecular. 2. para posteriormente desprender la humedad por una corriente de gas. Enzimas: lisozimas. son muy eficientes e inertes para los compuestos. los microorganismos y condiciones de la fermentación deberían ser tales que se minimice la complejidad del proceso. son procesos de separación muy complejos y costosos... que al no disociarse se fija a la fase estacionaria de la columna cromatográfica. desecación violenta. lo que obliga a un tratamiento posterior. de baja volatilidad y viscosidad. 21 . Precipitación. Extracción.

Rendimiento Las pérdidas producidas en la purificación del producto dependen del número de etapas de la purificación y la sensibilidad del producto frente a este tratamiento. Aun así. el coste del proceso de purificación suele ascender al 20% del total. 22 .

lo que vuelve a aumentar el crecimiento celular. como melazas. lo que aumenta la viscosidad y genera gradientes en el seno del caldo de fermentación. jugos azucarados. Se usan cultivos mixtos sobre el sustrato sólido de la levadura en cuestión con Clostridium thermocellum. Brasil. Específicamente. Kluyveromyces fragilis o Zymomonas mobilis. pero el crecimiento de las levaduras productoras necesita del oxígeno. se libera calor. Se usan entonces cepas modificadas de Torula cremoris y Candida pseudotropoçicalis. Condiciones de microaerofilia (0.25-0. el proceso de producción continuo dura unas 18 horas. Bioquímicamente. el rendimiento de la reacción es elevado: 0. es necesario efectuar primero el crecimiento de las células en un medio aerobio para luego introducirlas en otro anaerobio y así comenzar la producción..).. pero se usan más para otros procesos.. Las condiciones de operación en este proceso son: 30-35 oC pH = 4. la síntesis se produce por acción de la enzima alcohol-deshidrogenasa sobre el acetaldehído obtenido por reacción del piruvato. Celulosa: son difícilmente hidrolizables. Se usan cantidades limitantes de glucosa (< 1g/l). que sintetiza dextrano (un polisacárido). no se puede usar Saccharomyces. Se puede prolongar hasta 72 horas... Como consecuencia del proceso. ya que es incapaz de degradar la lactosa. A nivel industrial. Leuconostoc.5 3% de inóculo 600m3 Aumentos de temperatura y cantidad de inóculo. con una efectividad del 91-95%. Se reduce la oxigenación.5 l/g de células). Si se usan sueros lácticos. Fermentación Se dan principalmente procesos discontinuos en tres fases: 1. Canadá. pueden reducir el tiempo de fermentación hasta lo 2 o 3 días. Síntesis. Para evitarlo. son adecuados. que puede elevar la temperatura hasta los 40 oC.PRODUCCIÓN DE ALCOHOLES Dado que los residuos agrícolas son buenos sustratos para producir etanol (excepto el destinado a la alimentación). Clostridium thermosaccharalyticum o Trichoderma reesei. Por ello. los países con grandes superficies cultivadas son los principales productores de etanol por vía microbiológica (EE. capaces de efectuar dicha degradación. hay que adicionar amilasas o hidrolizar dicho almidón (este microorganismo no puede hacerlo).. Desarrollo celular: se somete el cultivo a fuerte oxigenación durante 12-24 horas. se puede producir contaminación con bacterias lácticas. siendo las condiciones en este caso: Se produce un mayor control de la temperatura y el pH. se puede efectuar destilación a vacío o limitar los nutrientes. Debido a las condiciones anaeróbicas. 3. Otros materiales azucarados. Teóricamente.UU. Procesos de producción de etanol Preparación del sustrato • • • • Si se usa Saccharomyces cerevisiae y se proporciona un sustrato almidonado. En estas condiciones. El etanol puede inhibir el crecimiento celular cuando se alcanzan concentraciones del 5%. en particular. o incluso el proceso de síntesis (cuando la concentración es del 10%). 2. 23 . lo que produce la reducción del crecimiento celular y el inicio de la producción durante 24-36 h.5 g de alcohol por gramo de glucosa.. Se detiene la síntesis por aumento de la oxigenación. También se han desarrollado procesos en continuo (en desarrollo). la síntesis de etanol requiere de medios anaerobios. se sintetiza por levaduras y bacterias: Saccharomyces cerevisiae.

8): otras 18 horas. que además de proporcionar agitación. en especial Lactobacillus (lo que supone una disminución del rendimiento) o por bacteriófagos. caracterizadas por ser: • Bacterias anaerobias estrictas. lo que causa una drástica bajada del pH hasta 5. butylicum Butanol + isopropanol C. Finalización del crecimiento y estabilización del pH (5. Durante la guerra.Purificación El alcohol se obtiene por destilación. 2. que son más complicadas de tratar.M. ya que matan las células y detienen el proceso. 24 . y se produce en tres fases: 1. butyricum Butírico + acético En la actualidad. al estudiar la producción de butadieno para obtener caucho sintético. la producción se efectúa con C.2. han de extraerse las células por sedimentación (generalmente) o centrifugación y se elimina el CO2 tras etapas de lavado. Se pueden producir contaminaciones por bacterias lácticas. Formación de ácidos acético y butírico (18 h). Se extraen los productos por destilación fraccionada. generando condiciones de anaerobiosis. 3. usando CO2. dependiendo de la especie usada: C. Sintetizan butanol y otro compuesto (convertible en etanol). Las especies usadas son todas del género Clostridium. • Generan esporas. con lo que sube el pH. Conversión de dichos ácidos en acetona y butanol (18 horas). se usa esta acetona de origen microbiano en la producción de TNT. quien estableció el proceso de producción microbiano. fue Weizmann poco antes de la 1ª G. Butylicum en fermentadores de 12 · 90 m3. Producción de acetona/butanol Aunque descubierta por Pasteur. Primero. El proceso es de 36 horas de duración. Los microorganismos usados para la síntesis de butanol generan también acetona. Entonces. desplaza al oxígeno. acetobutylicum Butanol + acetona C. aunque tras la 2ª GM se prefiere la síntesis química. se destila el caldo en columnas de rectificación. por lo que se obtienen ambos compuestos conjuntamente.

aunque sólo unos pocos en cantidades adecuadas para la aplicación industrial. • Metalurgia. • Candida lipolytica con parafina como sustrato. como caramelos... Minerales en las concentraciones adecuadas. ya que éstos pueden limitar la producción al superar los niveles traza. hidrolizados de almidón. los ríos y lagos se acaban convirtiendo en pantanos. Actualmente. Se pueden obtener tanto microbiológica como láctico químicamente.PRODUCCIÓN DE ÁCIDOS ORGÁNICOS Son ampliamente usados en alimentación. Al producirse la descomposición anaerobia de toda esa materia orgánica. etc. sueros lácteos. se prefiere el ácido cítrico (aunque más caro). en teoría. como sustituto de los polifosfatos. La mayoría de los obtenidos microbiológicamente proceden del ciclo de Krebs. ya que sólo se obtiene por vía microbiológica y además es el más utilizado. requiriendo unas condiciones diferentes para la fase de crecimiento y la de producción. helados. o Ausencia de cationes metálicos. • Cosmética. Así también. Ácido cítrico Es el más importante. • Detergentes. ya que es más fácil obtener y glucónico de los microorganismos las enzimas que catalizan su formación que el producto en sí. debido a sus propiedades antioxidantes. zumos.. Esto es importante porque los polifosfatos son causantes de la eutrofización de las aguas dulces. • Farmacia: como preservante de la sangre. se usan almidón de patata o hidrolizados de almidón (ambos requieren hidrólisis enzimática). Así también. aunque está poco implantado. Ácidos acético y Son los segundos en importancia. Las condiciones de este sustrato son: o Limitación del fosfato. antioxidante y saborizante para productos dulces. La abundancia de N y/o P favorece un altísimo desarrollo de las algas. más sencilla y económica. como integrante de diferentes preparados. • Química. como los ácidos oxálico y glucónico. Se obtiene en la fermentación del vino. sobre todo hierro. Medio nutricional • • La fuente de carbono ha de tener una concentración de azúcares del 15-25%. como acidulantes. pueden producirse por vía microbiológica. por tanto. Para ello. ya que se obtiene únicamente por vía microbiológica. aromatizante. ya que muchos metales se extraen más fácilmente como citratos. melazas o sacarosa. la morfología del hongo no será la óptima y la producción se verá afectada. Por ello. Las especies usadas son: • Aspergillus niger usando como sustrato sacarosa o melazas. síntesis química o extracción de productos naturales. fumárico Ácidos itacónico Se prefiere la síntesis química. por lo que. Esto se consigue por adición de ferrocianatos (con lo que los cationes precipitan como complejos) o usando resinas de intercambio iónico. está en desarrollo la producción Ácido tartárico a partir de Aspergillus o la bacteria Alcaligenes. son muchísimos los microorganismos capaces de sintetizarlos. Su sabor agradable y elevada solubilidad hacen que tenga diversidad de usos: • Alimentación: como acidulante. lo que causa una disminución enorme de oxígeno en el agua y. Los procesos de fermentación se llevan a cabo con cepas modificadas genéticamente para aumentar la producción y disminución de compuestos colaterales. jarabe de caña de azúcar. 25 . Los más importantes son: Ácido cítrico El más importante. sólo unos pocos de estos ácidos son más rentables producidos por vía microbiológica que por vía química. Si no se dan las concentraciones adecuadas. la muerte de los organismos de dichas aguas. como antiespumante y en la industria textil. saborizantes o ingredientes químicos. Ácidos málico y Son de escasa demanda e importancia.

MgSO4 y ZnSO4. pero requieren más mano de obra. pH inferior a 3).2-1 vvm). Dos factores importantes a tener en cuenta son: • La relación Fe/Cu ha de ser más controlada que en procesos koji para que el micelio adopte la forma adecuada. Son más sencillos. pasteureanus Acetobacter peroxidans Gluconovçbacter Finalizan el proceso con la obtención del ácido acético. Debido a las diferentes condiciones para idiofase y trofofase es difícil establecer un proceso de producción en continuo. se efectúa un lavado previo a la precipitación o filtración para retirar dicho micelio. Ácido acético Es el principal componente del vinagre. Se usan fermentadores pequeños (menos de 250 m3).• • Los requerimientos de pH varían de la fase de crecimiento (trofofase. se construyen en acero inoxidable). • El citrato se purifica mediante resinas de intercambio iónico. Como el ácido cítrico estará atrapado en el micelio (debido a la alta densidad de éste). agitados o de columna de aire. • Al adicionar ahora calcio. Es sintetizado por dos géneros de bacterias: Acetobacter aceti Acetobacter Son cepas superoxidantes. pH de 5) a la idiofase (de producción. Procesos de producción Procesos en superficie (o koji. sin una oxidación oxydans mayor. • Los niveles adecuados de oxígeno son menores (0. lo que hace que se pierdan los componentes volátiles interferentes. capaces de oxidar el producto hasta CO2 y agua. Purificación Se efectúa en pasos: • Se retira el micelio del hongo. pero permite una mayor mecanización. Procesos sumergidos o en profundidad. • Se inoculan las bandejas con esporas (2-5 ·107 esporas / m2) • Se procede a incubación a 30 oC con pH entre 4 y 5. Como sustrato líquido: • Se usan sacarosa o melazas. ya que éste inhibe la producción por encima del 10% de concentración. • Extracción del ácido cítrico a pH neutro con temperaturas entre 70 y 90 oC. del japonés). construidos en materiales capaces de resistir pH’s ácidos sin liberar cationes metálicos (por lo general. lo que permite obtener el ácido cítrico. • Se mantiene la etapa de crecimiento durante 30 horas. 26 . complementadas con H2KPO4. Como sustrato sólido: • Trigo u otro cereal • Se dispone en capas delgadas (3-5 cm) donde se colocan las esporas • Se mantiene a pH entre 4 y 5 y 28 oC durante 90 horas. lo que hace que precipite oxalato cálcico. • Adición de cationes calcio a pH 3. • Es necesario aportar suficiente oxígeno como para desplazar al CO2 producido. y la de producción entre 8 y 14 días. Es más complejo. precipita citrato cálcico. • Se procede a la extracción del ácido cítrico mediante 5 volúmenes de agua caliente. Se opera en discontinuo o semicontinuo con alimentación fraccionada.

o bien alcohol técnico. discontinuos y con células inmovilizadas.5 y 6. son menos interesantes que para el ácido cítrico. lo que constituye su principal problema. • Hidrolizados de patatas o cereales. por lo que son preferibles) y heterofermentadores (producen. La síntesis microbiológica usa: Aspergillus Con glucosa. se distingue entre homofermentadores (sólo producen ácido láctico. Son los más costosos. Las células se eliminan por filtración. ya que es más barata) o enzimática (tradicionalmente. dada su riqueza en este compuesto) a partir de ácido fumárico. Se obtiene por síntesis química (preferentemente. que dado que son deficitarios en otros nutrientes. ya que el proceso se detiene si el nivel de oxígeno es inferior al 5%. malta o sidra de baja calidad). y su producción es baja. necesitan suplementos: o fosfato amónico o sulfato magnésico o citrato y pantotenato cálcicos o hidrolizado de cereal Es de reducido coste y ocupamiento del espacio. Sobre dichas capas de virutas se gotea el sustrato El sustrato usado es: • Un líquido de alto contenido alcohólico (vino. Las especies utilizadas preferentemente son: Lactobacillus Usa residuos líquidos de la industria papelera (licor de cocción del sulfito) como pentosus sustrato. lo que permite sustraer los subproductos responsables de colorear el ácido acético.5. sobre todo bulgaricus de la producción de quesos. es precursor de los sistemas de células inmovilizadas). Ácido láctico Fue el primer ácido obtenido por fermentación. sales y carbonato cálcico. manteniendo altas temperaturas (45-50 oC) y pH entre 5. Según las características metabólicas de los microorganismos productores. a partir de extractos de zumo de manzana. su producción es poco satisfactoria. Procesos sumergidos En este caso. Generadores por goteo o reactor Frigs Se usan capas de virutas de haya sobre las que se adhieren las bacterias (en cierto modo. Presenta la ventaja de que con un coste mínimo obtiene una elevada eficacia. Se usa principalmente en alimentación (acidulante y saborizante. otras sustancias). además de hallarse de forma natural en productos lácteos) y en farmacia. Posteriormente.Producción Método Orleans Es el más tradicional. Brevibacterium ammoniagenes Brevibacterium flavum 27 . Lactobacillus Usa sueros o suero desproteinizado procedentes de la industria láctea. Método alemán Basado en procesos tradicionales. Aporta un buen rendimiento (14%). Ácido málico Se usa en alimentación como acidulante. Se usan procesos continuos. Requiere unos fuertes niveles de oxigenación. se añade ferrocianuro potásico. además.

Paralelamente.Ácido fumárico Debido a su baja higroscopicidad (tendencia a captar agua). acidulante y saborizante. se usa en bebidas deshidratadas y revestimientos de golosinas (evita la entrada de agua a alimentos). 28 . emulsificante. su baja solubilidad limita otras aplicaciones (lo que se evita por adición de compuestos que aumentan su solubilidad). como colorante (fija el color de la carne). suavizante. Se obtiene a partir del hongo Rhyzopus oryzae usando como sustratos derivados de soja o arroz.

sobre todo en Japón. La inosina producida se somete a pH básico (aprox. sin embargo. con lo que tenemos los nucleótidos sueltos en disolución. Este proceso es de un alto rendimiento (se obtienen 30-35 g/L). eliminamos los nucleótidos pirimidínicos. Se extrae el ARN usando agua caliente de pH alto (con lo que el ARN pasa a la disolución). Por ello. Entonces se deshidrata el producto. en concreto. los esfuerzos se centran en incrementar la competitividad de las fermentaciones por mejora de procesos de fermentación y purificación.PRODUCCIÓN DE NUCLEÓTIDOS. y posterior adición de HCl (preferentemente) o etanol. con la salvedad de que es preciso efectuar una fosforilación posterior. con lo que precipita y cristaliza. El resto del proceso es similar. Por elución selectiva con una solución de metanol-amonio. AMINOÁCIDOS Y VITAMINAS Su principal uso se da en alimentación. no todos presentan esta cualidad. Su importancia es creciente. El hecho de usar auxotrofos que sólo sintetizan inosina es para evitar la regulación por producto final. Adicionamos carbón activo. 29 . debido a la tendencia a sustituir los aditivos químicos por otros naturales. Síntesis indirecta: Se obtiene AICAR (5-amino-4-imidazol carboxamida ribosa) con cepas auxotrofas para la purina y mutadas en determinadas actividades enzimáticas (lo que facilita la acumulación sin inhibición). Se favorece la excreción del AICAR (intracelular) al caldo fermentativo: • Adición de una fuente de purina. 11). Se separan los nucleótidos por cromatografía de intercambio iónico. y el AMP se desamina por cultivo con Aspergillus oryzae. Hidrólisis química del ARN. Fermentación del GMP. Se produce entonces la hidrólisis enzimática. con lo que se adsorben sobre éste. Así. el IMP (inosin-mono-fosfato) y el GMP (guanosin-mono-fosfato). lo que provoca la precipitación de este ARN. se usan con preferencia. aunque los productos microbianos son más caros. con una producción similar. como potenciadores del sabor (nucleótidos y aminoácidos) y para aumentar la calidad nutricional. El GMP es producto. Sin embargo. Nucleótidos Por sí mismos no confieren sabor. Las cepas usadas son principalmente Candida utilis o Saccharomyces cerevisiae. Brevibacterium ammoniagenes y Microbacterium que tienen bloqueada la síntesis de nucleótidos. la vía microbiana presenta la ventaja de ser más fácil de mejorar y optimizar. El ARN se obtiene igual que en la hidrólisis enzimática. Se produce la fosforilación. Hidrólisis enzimática del ARN. con lo que nos quedamos con AMP y GMP. con lo que se obtiene el IMP. con lo que se obtiene IMP. Fermentación del IMP. que se cultivan hasta el final de la fase logarítmica de crecimiento (principio de la fase estacionaria). lo que permite que se siga sintetizando AICAR hasta que la célula lo va expulsando por exceso. Se produce la inosina usando auxotrofos de Bacillus subtilis. pero incrementan los sabores presentes (lo que se conoce como efecto umami). Es la más utilizada. sino sólo los derivados de la purina (las pirimidínicas no tienen esta propiedad). Se usan levaduras con alto contenido en ARN. ya que entonces detienen la biosíntesis estructural. Se degrada el ARN hasta obtener los nucleótidos mediante Ca(OH)2 y 130 oC durante 3-4 horas. Estos productos también podrían obtenerse de los vegetales.

la única vía para obtener cisteína. Se usa Corynebacterium glutamicum (el más usado) y Brevibacterium flavum. El proceso se realiza en discontinuo. Síntesis directa Es el menos usado.8. Forman el aspartamo. Glutamato Se usa mucho como potenciador de sabor para la comida china. lo que supone que muchos de los productos que de él se derivan siguen rutas alternativas y. Debido a su similitud estructural. 4. asparagina y tirosina. que requiere de separación enzimática posterior. 30 . precursor del glutamato. que evita un rápido agotamiento de los nutrientes. Brevibacterium y Esclerychia coli. cistina. lista para el consumo tras fosforilarla. Con una duración de 30-35 horas se obtienen del orden de 100 g/L. ya que endulzan pero no dan aporte calórico (sobre todo para zumos). se acumula ácido α-cetoglutárico. glutámico y purificar. ya que se obtienen mezclas racémicas y sólo una de las formas es la activa. Se usa sobre todo como antioxidante en zumos. Vitaminas Hay muchos microorganismos capaces de sintetizar todas las vitaminas necesarias para los humanos. edulcorantes. hidrolizados de almidón o n-parafinas) y mejorar la producción. aunque poco rentable. Se obtiene guanosina. Se facilita la excreción de ácido glutámico por adición de biotina al medio.) y en algunos productos cosméticos y farmacéuticos.. con lo que se puede extraer el ác. como consecuencia. leucina. por lo que evita la esporulación). Se usa como antioxidante de la leche en polvo. Todos se pueden obtener por vía microbiana. destacando glutamato. 2. • Fermentación microbiana con mutantes de Corynebacterium. usando glucosa y sacarosa como fuentes de carbono. para permitirles degradar sustratos baratos (como glucosa. En el caso del Corynebacterium. • Biotransformación enzimática. metionina y lisina. Aminoácidos Se usan sobre todo en alimentación (potenciadores de sabor. Se obtienen: • A partir de hidrolizados de proteínas. Se usan mutantes de Bacillus subtilis en los que se ha aumentado el número de copias del gen que codifica la enzima del paso limitante de la ruta de producción de guanosina (con lo que aumenta el número de enzimas del proceso y la producción aumenta).. un dipéptido usado como edulcorante sin proporcionar aporte calórico. Otros aminoácidos Aspartato Alanina Cisteína Fenilalanina combinado con aspartato Triptófano combinado con histidina Metionina Lisina Treonina Triptófano Otros Se usan como potenciadores del sabor y edulcorantes. antioxidantes. es incapaz de completar el ciclo de Krebs.• Adición de un inhibidor ante la esporulación (como ácido butírico o reducción del oxígeno. 3. a 38 oC y pH de 7. complemento nutricional. El proceso de producción es: 1. Se usan como suplementos en derivados de cereales o en complejos nutricionales.. • Por síntesis química. se transforma fácilmente en ácido glutámico. pero sólo B2 y B12 son de síntesis microbiana rentable frente a la síntesis química.

Propionibacterium. a. a. usando aceite de soja o maíz complementados con glicina y purinas (estimulan la producción). de las que la activa es la cianocobalamina. Químicamente. Segunda fase: aeróbica. En la actualidad. Es la más tradicional. ya que la síntesis química es muy compleja y poco rentable. Cobalamina (B12) Sólo se obtiene por vía microbiana. Síntesis mixta (el más usado). 2. Riboflavina (B2) Interviene en reacciones metabólicas redox y del metabolismo energético. Bacillus megaterium. Hay microorganismos capaces de sintetizar la vitamina completamente (el alga Chlorella pyrenoidosa y la levadura Candida norvegensis). 1. Se obtiene el mayor rendimiento. La glucosa se convierte químicamente en sorbitol. pero los sustituyentes constituyen varias formas. se están ensayando procesos en los que obtener intermediarios a partir de desechos contaminantes como sustrato. está sujeto a patentes. La síntesis más usada es: 1.El organismo las utiliza principalmente como coenzimas en la mayoría de los casos. que se transforma químicamente en riboflavina. 3. hígado y suplementos nutricionales. 2. y la producción es muy variable (de 21 g/L de Candida a 4. se adaptan a una fuente de carbono concreta. Con Ashbya gossypii (hongo). Hay tres vías de síntesis: 1. El sorbitol es transformado en sorbosa por acción del Acetobacter suboxydans. con lo que los procesos se hacen muy específicos. Pseudomonas denitrificans. verduras. 3. pero son menos rentables que los procesos químicos. Sin embargo. en experimentación. La sorbosa es modificada químicamente hasta obtener ácido ascórbico. Síntesis microbiana. Se encuentra en lácteos. b. Se emplea en suplementación de derivados de cereales y productos dietéticos. por lo que no es rentable. En ella se sintetiza la cobalamina siempre que se aplique el adecuado tratamiento térmico en presencia de cianuro. b. Primera fase: anaeróbica. Saccharomyces cerevisiae o Bacillus subtilis).5 g/L de Bacillus). 31 . usando Bacillus subtilis como productor de ribosa. 3. 2. Con otros microorganismos (Candida flareri. con rendimientos de 6-7 g/L. Síntesis química completa. En ella se sintetizan los precursores de la vitamina. presenta una estructura central fija. por lo que son indispensables para muchos procesos. Ácido ascórbico (C) Se utiliza como suplemento en bebidas y como antioxidante de productos envasados.

). Procesos de producción Sobre sustrato sólido (procesos Koji) No son muy apropiados. Para el control del pH. por lo tanto. que necesitan altas temperaturas para crecer (70-90 oC). que son las autorizadas legalmente para utilizarse en alimentación y medicina. ya que su producción es mayor y más económica.. cereales. S y Ca. clonación. aireación y humedad es difícil. junto con soja. Se usa como sustrato salvado. Los principales usos de las enzimas son: detergentes.PRODUCCIÓN DE ENZIMAS El interés por los procesos enzimáticos se debe a varios factores: • No necesitan condiciones especiales de temperatura y presión (los valores ambientales). Hidrolasas Hidrolizan moléculas. dando información sobre las características de la enzima (condiciones óptimas de funcionamiento: temperatura. como melazas. dispuestos en bandejas. salvo para procesos con hongos. ya que no generan ni compuestos colaterales ni residuos de riesgo. ya que pueden ejercer su función a estas temperaturas. Hay que tener en cuenta la mejora y adecuación de las características del proceso de producción al microorganismo. papel. pulpa de caña de azúcar o bagazo (medios sólidos o semisólidos porosos y sin agua libre). investigación biotecnológica (enzimas de restricción. ya que el control de temperatura. por lo general. etc. hidrolizados de levadura o geletina complementados con P. Dentro de este grupo. por lo que sus enzimas son de gran interés. Se usan sustratos de bajo coste. Procesos en biorreactores Son más fáciles de automatizar al tratarse de medios líquidos y. H o electrones. solución de fosfato (que a la vez acúta como suplemento de fósforo). Producción comercial Selección de cepas Los métodos de selección utilizados deben permitir diferenciar las especies capaces de producir una enzima basándose en determinados medios de cultivo. Isomerasas Interconvierten isómeros. textil.. cacahuete. Ligasas Forman enlaces mediante el gasto de ATP. es preferible buscar microorganismos de calidad GRAS. pero es preferible el microbiano. Por ello. Se clasifican en: Oxidorreductasas Efectúan procesos redox y transferencias de O. 32 . • Permiten el trabajo en sistemas no acuosos. además de que son muy propensos a las contaminaciones.. Liasas Rompen enlaces en procesos no redox ni hidrolíticos. será más fácil el controlar las variables ambientales. cáscara de arroz. • Son de bajon impacto ambiental. paja de trigo. pH. lácteos. y con menos problemas de purificación. ausencia de compuestos colaterales.. hidrolizados de almidón o lactosa. es necesario recurrir a manipulación genética para favorecer los inductores de la producción (se prefiere intentar que la modificación consiga obtener la enzima sin necesidad de presencia de inductores) e inhibir la producción de otras enzimas y procesos. sobre todo si la enzima producida no es de origen microbiano. Pueden tener distintos orígenes. Transferasas Transfieren grupos químicos.) y sus niveles de producción. • Presentan una mayor especificidad y con mayores rendimientos frente a estereoisomería. dada su inocuidad para el organismo humano y el medioambiente. se adiciona algún tamponador. procesado del almidón.. El grupo microbiano más usado al respecto son los microorganismos termófilos o termorresistentes.. • Requieren menos energía (tecnologías sencillas y ahorro al no necesitar altas temperaturas ni presiones).

procedente de Bacillus subtilis y Bacillus licheniformis. Rhizomucor pusilis. por lo que se usa para producir edulcorantes bajos en calorías y jarabes de alto contenido en fructosa (HFCS). cervezas y zumos por acción del oxígeno. Degradan la materia sólida presente en el caldo de fermentación del vino (pellejos.. Se usan celulasas. Aspergillus niger y Aspergillus oryzae. • Invertasa. que hidroliza la sacarosa en fructosa y glucosa. Elaboración de vinos. a diferencia de los fosfatos.). por lo que minimizan el impacto ambiental. pectinasas y lipasas. que al degradar ácidos grasos generan compuestos que otorgan sabor a los lácteos. Se usan proteasas principalmente. clarificando y licuando el zumo. Se obtiene de Aspergillus niger y Penicillium. Produce la proteolisis parcial de la leche. lo que permite reducir el impacto ambiental de esta actividad (se generan residuos muy contaminantes) y mejoran la textura y aspecto del papel. Se obtiene de Aspergillus niger y Penicillium. Se obtiene de Kluyveromyces marxianus. por lo que se usa para la fabricación de siropes y en las industrias cervecera y panadera. uno de los principales componentes de la materia vegetal. Actualmente. • Amilasas. posteriormente. Se obtiene a partir de Aspergillus niger y Rhizopus. Se obtiene principalmente de hongos y Bacillus. que convierte la glucosa en fructosa. Anteriormente. obteniéndose principalmente de hongos (Rhizomucor miehei. Producción de quesos. edulcorantes y helados.. se estudian procesos usando Esclerichia coli o Kluyveromyces lactis. maltosa y maltotriosa.Aplicaciones Detergentes. paa aumentar la eficacia del detergente para atacar manchas con componentes proteicos. y se usa para producción de siropes y chocolates. Se usan para degradar los principales componentes de la madera. Se utilizan también distintas lipasas. Industria papelera. respectivamente.. Se obtiene de Bacillus y Streptomyces. Otras ventajas son la disminución de los costes energéticos (al requerir temperaturas menores) y su carácter biodegradable. restos de pulpa. • β-galactosidasa. Elaboración de zumos. Las enzimas más utilizadas son: • Subtilisina (una proteasa). 33 . debido a su mayor facilidad para la manipulación genética. que actúan sobre la pectina. aunque actualmente las utilizadas son más resistentes a la temperatura y el pH. Eliminan los β-glucanos aparecidos en la fermentación de vinos procedentes de uva infectada por Botrytis cinerea. se obtenía a partir del rumen de los rumiantes. Celulasas y glicosidasas. Los microorganismos permiten obtener enzimas de las mismas características que las animales. Se obtiene de Saccharomyces cerevisiae. por lo que se usa en la fabricación de alimentos para personas no tolerantes a la lactosa. Se trata de pectinasas. Aspergillus niger y Aspergillus oryzae. Este uso de las enzimas comenzó en los 50. • • • β-glucanasas. • Lipasas. que degrada el almidón en glucosa. mejorando el color y el sabor. La enzima utilizada es la renina o quimosina. Glucosa oxidasas evitan daños sobre vinos. • Glucoamilasa. que conduce a la formación de la cuajada y. Procesado del almidón Los hidrolizados de almidón se utilizan en alimentación como edulcorantes y en clínica. al queso. que hidroliza el almidón totalmente hasta glucosa. sobre todo. con uan producción bastante baja. hemicelulasas. Los tipos de enzimas más utilizados son: • α-amilasa. • Glucosa isomerasa. Aspergillus nidulans o Aspergillus niger). que degrada la lactosa en glucosa y galactosa.

Celulasas se usan para dar el aspecto de lavado a la piedra de vaqueros. y aumentando la pureza. Síntesis orgánica. 34 . evitando la separación de mezclas quirales y compuestos colaterales. para retirar el almidón. También son muy útiles para la obtención de productos farmacéuticos. pelado. Se usan para la síntesis de compuestos quirales puros. al obtener productos estereoquímicamente puros. desengrasado y pelado.Industria textil • • • Amilasas y celulasas se usan en el tratamiento de tejidos vegetales. Proteasas y lipasas se usan para el procesado de pieles: lavado.

Los volúmenes de los biorreactores son pequeños.M. pero no es de origen microbiano. Durante la 2ª G. Naturales. Biosintéticas. se produjo un importante desarrollo. más tarde. • Presentan dos problemas acusados: 1. Por ello. Antibióticos β-lactámicos Se caracterizan por contener un anillo de ácido β-lactámico. 3. Ciertas especies son capaces de sintetizar β-lactamasas. pero diferenciados por la cadena lateral (ácido fenilacético para G y ácido fenoxiacético para V). que son menos agresivas y. por lo que son resistentes a este tipo de antibióticos. disminuyen los rendimientos en la fase de producción.PRODUCCIÓN MICROBIOLÓGICA DE ANTIBIÓTICOS Un antibiótico es una sustancia producida por microorganismos. En función de su origen. 2. para selección de poblaciones. obtenidos por modificación química del producto microbiano. aparecen resistencias. no se suele usar porque es más factible y económico el uso de agroquímicos y fitosanitarios. por lo que se impone una legislación restrictiva. Recuperación del Penicillium chrysogenum esporulado y liofilizado. Los usos más típicos de los antibióticos son: • Control de actividades infecciosas: o En plantas. o En animales. 2. se le llama quimioterápico. que se extiende rápidamente. • La búsqueda de nuevos antibióticos es cada vez más difícil y costosa. fue Florey quien. los valores más usuales son un volumen de 40 a 200 m3 con una oxigenación de 0. la estructura activa principal de la molécula. 3. obtenidas directamente de la fermentación microbiana. • Control de tumores. la mayoría se obtiene por modificación química de productos microbianos. 2. se propuso investigarlos. Sólo 123 se obtienen actualmente por vía microbiana. hongos (Aspergillus y Penicillium) y actinomicetos (Streptomyces). caracterizadas por el aumento de la actividad por medio de la incorporación de grupos químicos al anillo central. fecha en que Alexander Fleming descubrió la penicilina por contaminación de un cultivo de Streptococcus con Penicillium. por tanto. • Alimentación. Se obtienen añadiendo precursores del grupo a incorporar al antibiótico en el caldo de fermentación. ya que hidrolizan el anillo. Si el producto tiene el mismo efecto. debido a que los microorganismos demandan una gran cantidad de oxígeno en la fase de crecimiento. por lo que los efectos secundarios son inexistentes o muy leves. y derivada de su metabolismo secundario. Penicilinas Se obtienen de cepas de Penicillium y Aspergillus.5-1 vvm. En condiciones ácidas no son efectivos. realizada en dos etapas: 35 . Esta etapa es importante. se clasifican en: 1. pueden aparecer mutaciones que otorguen a los microorganismos resistencia frente a la acción de los antibióticos. Sus principales características son: • Presentan una baja toxicidad para el organismo. para evitar el deterioro de los alimentos. obtenidos por vía biosintética. hasta llegar a los 8000 que se conocen hoy día. Sin embargo. Las principales especies productoras son bacterias (Bacillus). debido a la capacidad de algunos antibióticos de controlar el crecimiento de las células tumorales. se están sustituyendo por bacteriocinas de origen microbiano. El proceso de síntesis más destacado es el de las penicilinas G y V. pero continúa siendo rentable por la ausencia de compuestos efectivos frente a ciertas especies patógenas. Semisintéticos. capaz de inhibir el crecimiento de otros microorganismos en concentraciones relativamente bajas. crean menos resistencias. ya que de ella depende el compactamiento o no del micelio: si el micelio es compacto. esto puede hacer más acusada la aparición de resistencias. Fermentación. que ha ido ampliando el número de antibióticos conocidos. Debido a las características reproductivas de los microorganismos. Sin embargo. Se descubrieron accidentalmente hacia los años 20. lo que los dota de actividad frente a bacterias gram+ por inhibición de la síntesis de la pared celular. Las características del proceso (discontinuo) son: 1. • Investigación bioquímica.

2. aunque ahora se sigue un proceso más complejo. Se aplica durante 6 horas. además de NaCl. Segunda prefermentación.por inhibición de la síntesis proteica. Se efectúa en reactores de 3000 L. extracto de levadura o suero). El proceso de producción es: • El sustrato es glucosa y sacarosa. Su principal característica es. Destaca el ácido clavulánico. Prefermentación. Destaca la bacitracina. harina de soja. • Desarrollan resistencias rápidamente. por lo que su uso está restringido a casos concretos. Sus características son: • Son activos frente a gram. en fermentadores de 90 m3 durante 30 horas. • Son tóxicos. este compuesto confiere resistencia a la degradación. líquidos de maceración del maíz. su amplio espectro de aplicación. El sustrato es principalmente: i. Cefalosporinas Se descubrieron primero en Cephalosporium acremonium. Fermentación con el mismo sustrato anterior (con el doble de glucosa). lactosa y líquidos de maceración del maíz (o. a. Se usan recipientes de 1 L con sólo 200 mL de medio líquido (peptonas).5-3.. glucosa o melazas y harina de soja. usado con la amoxicilina. 1. con una fase de crecimiento de 90 horas con alta aireación. . respectivamente. lo que permite aumentar la eficiencia o recuperar una actividad perdida por aparición de resistencias). Producción.4. Antibióticos carbohidratados Los más destacados son los aminoglucosídicos (oligosacáridos unidos a aminosacáridos). b. 2. capaz de crecer anaerobiamente). debido al alto requerimiento de oxígeno necesario (aunque es una especie anaerobia facultativa. Extracción del producto con acetato de amilo o acetato de butilo. Durante 120-160 horas. Cultivo de mantenimiento a 37 oC durante 18-24 horas. En la actualidad. Se usa glucosa complementada con almidón o dextrinas y harina de soja. 5. se usan derivados semisintéticos de 2ª y 3ª generación (una o dos modificaciones químicas. 36 . seguida de otra de producción de 90-160 horas. Streptomyces (el más usado actualmente) y Nocardia. además de su similitud con las penicilinas. Aunque no es un antibiótico en sí. • La fermentación se produce a 24-28 oC y pH 7. y pueden causar daños en riñón y oído. 3. pH 6.5-1 vvm oxígeno. Fase de crecimiento. • Son tóxicos.por inhibición de la síntesis de la pared celular. extracto de carne (complemento) y acetato amónico. sulfato amónico y carbonato cálcico. ii. producida por Bacillus licheniformis en procesos de superficie antiguamente. sintetizados mayoritariamente por Bacillus y Streptomyces. o sea. pero se usa como sustrato sacarosa. Se aporta un gran volumen de oxígeno durante unas 40 horas. Recuperación de las esporas. en su defecto. Se obtiene de Streptomyces clavuligerus.. Co. • Son específicamente activos frente a gram. 28-30 oC y pH neutro durante 4-7 días. manteniendo su actividad o reforzándola. 0. Fermentadores de 150 m3.4 y ácido fenilacético (G) o fenoxicético (V). aunque se obtienen también de Paecilomyces. Antibióticos peptídicos Destacan los lineales y cíclicos. a 0 oC y pH de 2. según el antibiótico. Se pasa a reactores de 800 L con una fuerte agitación (proporciona oxigenación) con el mismo medio de cultivo. Nuevos productos Se obtienen por adición de compuestos que confieren protección al anillo frente a las enzimas. El proceso de producción es: 1. Se caracterizan por: • Son muy comunes: estreptomicina. 4. Zn o Mn.

El sustrato es rico en glucosa. La producción se efectúa en fermentadores agitados de 150 m3 con glucosa o almidón y alta oxigenación (1vvm) durante las primeras 12 horas.3. pH neutro y 1 vvm. • Por lo general. sulfato amónico. Por lo general. cloruro sódico y carbonato cálcico. El producto es extracelular. debido a que detiene el proceso de traducción (síntesis de proteínas). Son activos frente a gram+ y gram. aunque se puede emplear extracto de levadura. se separa por adición de ácido sulfúrico hasta pH 2-2. Sus usos más destacados son: • Tratamiento de las salmonelosis. Antibióticos macrolídicos Contienen un anillo lactónico. 37 . aunque actualmente se usa más S. Se obtiene de Penicillium patulum por procesos aeróbicos. Destaca la eritromicina. con nitrato de sodio y cloruro potásico. por lo que se separa por columnas de intercambio iónico. • El proceso es aerobio y sumergido. El proceso de producción es: • El sustrato es glucosa. usando Streptomyces erithreus. • En medios de cultivo para hongos. se obtienen por procesos biosintéticos. Antibióticos aromáticos Cloranfenicol Es muy activo y eficaz. Son eficaces frente a gram+ y son poco tóxicos. Griseofulvina Es uno de los pocos antibióticos efectivos contra hongos. Si está adherido a las células. pero puede causar lesiones en la médula ósea. evitando el crecimiento de las bacterias. se efectúan a pH básico durante 3-7 días a temperaturas de 25-28 oC. • En biología molecular. Es importante limitar el fosfato en el medio. por lo que su uso está restringido. harina de soja. El proceso se efectúa durante 7-9 días.por inhibición de la síntesis proteica.5. aceites o almidón. pero son poco demandados porque se prefieren las penicilinas de tercera generación. a 25 oC. Actúan inhibiendo la síntesis de proteínas. Tiene un amplio espectro de aplicación. Tetraciclinas El primero descubierto fue la tetraciclina. ya que actúa como inhibidor. descubierta de Streptomyces viridofaciens. con excepción de la eritromicina (33 oC). ya que detiene la traducción. lo que les da su carácter hidrofóbico y básico. aureofaciens. pero no la replicación del DNA.

presenta ciertas dificultades importantes: • No se pueden obtener grandes cantidades de producto. • En las vacunas vivas existe el riesgo de la reversión (recuperación de la capacidad patógena). 2. lo que ocasiona la enfermedad. la capacidad para provocar la respuesta inmune no es la célula completa. b. lo que facilita que su estructura se acerque a la real). • En las vacunas muertas. proteínas. Esto supone una alta concentración de proteína activa (ya que se genera en el interior de una célula viva. lo que origina una modificación de la estructura original. Permite obtener vacunas para patógenos que no se pueden cultivar en laboratorio. debido a que no es necesario manipular organismos patógenos vivos. 38 . 2. Para evitarlo. las endotoxinas de las bacterias gram. Sin embargo. sería posible provocar la respuesta inmune sin necesidad de inocular el microorganismo entero. debido al rápido y constante crecimiento del hibridoma. recupera su capacidad patógena. Los principales problemas de estos sistemas son: • No todos los patógenos se pueden cultivar en laboratorio. Métodos de producción Sistemas tradicionales Consisten en la obtención de la vacuna mediante el cultivo del patógeno. de efectos más leves. • Las proteínas obtenidas no son suficientemente activas. Consisten en células muertas o proteínas tóxicas (toxoides) desactivadas. debido a que el sistema inmunitario del hospedador sea demasiado sensible o el microorganismo esté poco atenuado. La enfermedad no sea causada por la actividad de las células. pudiendo incluso erradicarla. se recurre al uso de hibridomas. La utilización de las vacunas presenta ciertas ventajas frente a los quimioterápicos. 1. El principal inconveniente es la posibilidad de aparición de reacciones (más leves que en vacunas vivas). y además permiten controlar la enfermedad de una forma mucho más eficaz. debido a la baja traducción del material genético patógeno. Este método presenta ventajas: 1. Vacunas vivas. Ésta también puede producirse si se introducen otras especies patógenas (sobre todo en vacunas víricas. ya que sólo se requiere de ellos su material genético. Vacunas de subunidades (técnicas de ADN recombinante) En muchos casos. Esto supuso la aparición de una idea intuitiva de inmunización frente a la viruela por padecer dicha enfermedad. obteniendo dichas subunidades de las proteínas. debidas a: a. no en laboratorio. Presentan un importante inconveniente: el acceso del patógeno al organismo puede desencadenar la enfermedad si. Se pueden obtener mejores resultados que con las tradicionales. Evita riesgos para el personal de producción. 3. El fundamento de estas vacunas es que. donde la contaminación es muy difícil de controlar) o el hospedador presenta inmunodepresión (sistema inmune débil). sino una parte de su estructura (por lo general. por alguna razón. de una o varias subunidades). una enfermedad similar pero que afectaba a las vacas. que consisten en un híbrido entre una célula tumoral y otra de un tipo determinado. sino por alguna sustancia de su estructura. por efectos colaterales de otras sustancias.PRODUCCIÓN MICROBIOLÓGICA DE VACUNAS Fueron descubiertas por Jenner hacia el siglo XIX por estudios de incidencias de la viruela en personas afectadas de vacuna. debido a que es más barata su aplicación en masa para prevenir que la de los quimioterápicos para curar. obtenidas bien por conservación durante largo tiempo o por cultivo en medios no apropiados. Esto se debe a que las proteínas obtenidas presentan plegamientos inadecuados. Son células con la capacidad patógena atenuada. Vacunas muertas. como por ejemplo los lipopolisacáridos de las bacterias gram-. Posibilidad de que no todas las células estén muertas.pueden provocar reacciones.

corta y débil. que reconocen el antígeno e inician la síntesis de anticuerpos monoclonales. es muy sensible frente a las mutaciones. generando una mayor respuesta inmune. Esto favorece la multiplicación del antígeno. Aumento de la concentración de antígenos. Tembién se puede aportar el antígeno usando un virus o bacteria atenuados. Para ello. sino por una pequeña secuencia peptídica.• En ocasiones. Sin embargo. ya que la unión entre ambas estructuras está más favorecida. vuelve a presentar el inconveniente del trabajo con patógenos vivos. Vacunas peptídicas Por lo general. y por otro lado. Éstas. En muchos casos. ii. • Es difícil producirlos en grandes cantidades. 39 . Para paliar este efecto: i. un adyuvante es una sustancia que favorece la acción de otro compuesto). varios problemas: • La identificación del epítope es compleja. denominada epítope. por lo que no constituyen una vacuna efectiva. Presenta. Éstos son sustancias portadoras del antígeno (en general. se usan estructuras del propio patógeno. que permiten situar la proteína en una zona específica de la célula. al ser una secuencia pequeña. dada la alta especificidad que se requiere para su identificación. se usan hibridomas de linfocitos B. el sistema inmune reconoce a los patógenos no por una estructura completa. como secuencia de aminoácidos. mediante el uso de adyuvantes. es difícil que los epítopes adquieran la estructura necesaria sin interaccionar con otras estructuras (con las que interacciona al ser sintetizado por una célula). se puede construir. Tembién se recurren a perfiles de hidrofobicidad. sin embargo. generan una escasa respuesta inmune. con la evidente ventaja de la reducción de los efectos secundarios por la inoculación de la vacuna. lo que permitiría generar la respuesta inmune sin necesidad de usar el antígeno completo. Por un lado.

con la consiguiente liberación de su ADN.PRODUCCIÓN MICROBIOLÓGICA TERAPÉUTICAS DE PROTEÍNAS Las proteínas terapéuticas son producidas de forma natural por el organismo humano. pero sometidos a patentes farmacéuticas. • Hay indicios de asociación con la enfermedad de Creutzfeld-Jakob (encefalopatía espongiforme). lo que disparaba el precio. pero presentaba problemas: • Se requerían muchos cadáveres para tratar un solo paciente. se combinan químicamente las subcadenas independientes. pero se obtenían bajas eficacias. DNAsa Es una enzima capaz de degradar el ADN. se usaban proteínas obtenidas de origen animal. se usaba isulina de origen animal (ovejas y cerdos).. El proceso de producción consiste en la producción de las subunidades proteicas que la componen por hospedadores diferentes (Saccharomyces cerevisiae. con dos problemas principalmente: su producción era escasa (lo que las encarecía) y suelen provocar efectos secundarios. el sistema inmune responde destruyendo las células. Con las técnicas de ADN recombinante. carecen de efectos secundarios (es prácticamente idéntica a la proteína humana) y se puede obtener en altas cantidades. y se usa para tratar enfermedades que causen inmunodepresión (cáncer. Ante ello. con la consiguiente transmisión del prión). Eritropoietina (EPO) Es una hormona glicoproteica producida en el riñón que interviene en la producción de eritrocitos.. provocada por priones y asociada al canibalismo (ingesta de cerebro humano. Su carencia genera la caída del número de glóbulos rojos.) anemias e infecciones renales que afecten a su producción. Fue el primer producto obtenido por métodos de ADN recomibnante aprobado para su empleo terapéutico. Somatropina Es la hormona del crecimiento. producida en la glándula pituitaria y usada en casos de enanismo por déficit hormonal y en enfermedades relacionadas con el envejecimiento. Usando recombinación genética sobre Escherichia Coli (por transformación con un plásmido que contiene el ADN de la hormona). creándose un círculo vicioso. usada en el tratamiento de la fibrosis quística. Anteriormente. de diferente gravedad según el órgano afectado. coli) y de forma separada.. Las proteínas obtenidas. Actualmente se investiga su producción con otras especies (Bacillus subtilis y Pseudomonas aeruginosa). en 1981. se posibilitó la producción microbiológica de proteínas humanas (ya que los microorganismos no las producen naturalmente. y su abuso un aumento (problemas de “dopping” en deportistas). Éste aumenta la viscosidad y densidad de la mucosidad. La DNAsa actúa hidrolizando el ADN liberado. taponando las vías respiratorias y favoreciendo las infecciones. Su carencia origina la diabetes. 40 . proveniente de información genética humana). generando enfermedades. al basarse en genes humanos. pero ciertas enfermedades pueden disminuir la producción de dichas proteínas. relacionada con el metabolismo de la glucosa y la regulación de su cantidad en sangre. En los pulmones. Tradicionalmente. sida. genera el aumento de la producción de mucosidad. se obtiene una somatropina idéntica a la humana (sólo se diferencian en un aminoácido). se obtuvo de animales. Los preparados comerciales son muy específicos y eficaces (pulmozina de Genentech). Inicialmente se obtenía de cadáveres humanos. pero daban problemas de abastecimiento (baja producción) y de pureza (por lo que solían producir efectos secundarios). disminuyendo la viscosidad de la mucosidad. La fibrosis quísteca es una enfermedad genética degenerativa. Tras la síntesis. Insulina Es una hormona polipeptídica producida por el páncreas. E. el caso más grave. se tuvo que introducir en su genoma la maquinaria necesaria para ello. Posteriormente. Se obtiene mediante técnicsa de ADN recombinante.

trombosis y contusiones. usado en casos de hepatitis C y tumores. usados en enfermedades que debilitan el sistema inmunitario: 1. coli. para tratar enfermedades con riesgo de bloqueo de vasos sanguíneos. Se comercializa desde 1987. como ataques cardiacos. 2. activa el plasminógeno. y se usa en el tratamiento de carcinomas renales. Se obtiene de E. que al transformarse en plasmina destruye la fibrina que mantiene unido el coágulo. en concreto. como leucemia. El interferón α. Activador del tejido plasminógeno Es una proteína constituyente del complejo implicado en la dilución de coágulos sanguíneos. cáncer renal. Actualmente.Interferón Es una proteína de la familia de las citoquininas que itnerviene en la regulación de la respuesta inmune. Se obtienen también de Escherichia coli. Sólo una está comercializada actualmente. usados en procesos de esclerosis múltiple (el primero) y otros cánceres (el segundo). embolias. se obtiene de cadáveres y vacas. 41 . Interleuquinas Son un grupo de citoquininas formado por 15 sustancias distintas. existen tres tipos diferentes. Los interferones β y γ. Colágeno Se usa en suturas quirúrgicas. En humanos. aunque hay procesos en investigación de producción con levaduras (Pichia augusta y Pichia pastoris) que eviten los riesgos de contaminación por virus y priones. mieloma múltiple o tumor genital. melanoma.

Los problemas a subsanar de este tipo de productos son. sobre todo. Producción de proteína unicelular Las características más destacables del producto son: • Rápida velocidad de crecimiento y elevada productividad. perfil aminoacídico. Sustratos Aunque son muchos los sustratos que pueden utilizarse. de alta calidad. 2. además. se está recuperando. Las características de los microorganismos usados son: • Crecimiento a partir de sustratos de muy bajo coste. sueros lácteos o la industria maderera). • Los hongos son los qua más fácil se recuperan del cultivo. regular la presencia de aflatoxinas. • Capacidad para utilizar una amplia variedad de fuentes de carbono. cultivos iniciadores par alimentación (levaduras para panadería) y consumo humano (poco extendido en occidente). de alto contenido proteico (de ahí el nombre). • Buenas características de requerimientos de oxígeno. • Se aplica desde los 70. El producto en sí es una torta compacta de células muertas completas.. Alcoholes. así como ingrediente de piensos animales. pero presentan problemas durante el proceso. disminuye los riesgos de contaminación. que puede generar enfermedades por acumulación). lo que se explica teniendo en cuenta que su origen no fue la obtención de la SCP. 42 . además del contenido en ácidos nucleicos: 1.. que se transforman en ácido úrico. en países en vías de desarrollo y como complemento dietético. color. • Estabilidad genética. Usa residuos de otras industrias como sustrato. Es necesario eliminar las sustancias tóxicas y/o cancerígenas que pudieran generarse en el proceso. 2.). y cada grupo microbiano presenta sus ventajas e inconvenientes: • Las bacterias son de crecimiento más rápido. A la hora de buscar nuevos sustratos. lo que. especies aeróbicas (los fermentadores son más baratos). se siguen los siguientes criterios: • Baratos • Alta producción de biomasa. • Alto contenido proteico (30-80%). • Posibilidad de alteración genética y selección de cepas de forma relativamente sencilla. muy empleados al principio. • El producto es. • Facilidad para la recuperación de las células. • Su degradación exija poca oxigenación. 1. generación de calor y formación de espuma. En ciertos hongos (Aspergillus. con el fin de reducir los problemas ambientales que podrían causar. en general.PRODUCCIÓN MICROBIOLÓGICA DE SCP Se usa principalmente para la producción de piensos animales. se elige el más adecuado en función del precio de éstos. pero pueden trabajar a pH ácido. aroma. • Ocupación de suelo baja. sino el tratamiento de residuos contaminantes. pero son más sensibles frente al pH (prefieren pH neutro). • Tolerancia al pH y la temperatura. • Las levaduras son de crecimiento más lento. Actualmente. Residuos de otras industrias (residuos agrícolas. textura y (muy importante) nivel de ARN (la degradación de los ácidos nucleicos genera purinas. sobre todo. Se prefieren. pero después fue más rentable usar residuos de otras industrias. sabor.. • No es dependiente del clima ni la estación. • Estructura y composición del producto final: contenido proteico.

y se destina a la producción de piensos.Se efectúa en condiciones asépticas y con nutrientes de grado alimentario. . y complementarlo con La SCP obtenida se destina a consumo minerales. las etapas de estos procesos son: 1. Se utiliza para disminuir los efectos .55 g por g de lactosa.Los microorganismos metanógenos son sólo Importante en Noruega. que que Candida no puede degradar. Aplicación de tratamientos previos al sustrato para su adecuación.Las condiciones de fermentación son: humano y animal Biorreactores de 22 m3. para degradarse. disminución de los costes de purificación o acoplado de procesos secundarios pueden contribuir a la extensión de estos procesos. El Con campos de gas del Mar del Norte más utilizado es Methylococcus capsulatus.Parte de suero lácteo con Kluyveromyces lactis o K. Aireación de 1700 m3/h. . 2. 43 . . lo que también repercute en el precio. . seguidos de tratamientos para reducir el contenido en ácidos nucleicos (choque térmico y adición de RNAsa) y acondicionamiento (pasteurización.El inconveniente del Fusarium es su alto producto. manteniendo las condiciones límite (óptimas) de crecimiento del organismo. Fácil eliminación de compuestos tóxicos. Producción de levadura para panadería El iniciador en los productos de panadería es Saccharomyces cerevisiae. donde los unas pocas especies. humano. lo que exige un Symba necesitan un alto consumo de oxígeno tratamiento previo con Saccharomyces fibuligera. . 3. Su producción se efectúa en discontinuo: 1.Desarrollado en Suecia. contenido en ARN. disminuyendo el coste. mejora de la eficacia. . Se efectúan procesos de filtración y purificación. y por medio de un proceso de escalado en diferentes etapas (hasta 8) se llega a los cultivos líquidos. producto contiene un 59 % de proteínas. lo que obliga a la realización de un tratamiento de eliminación a 64 oC durante 30 minutos. Los liófilos se recuperan en medio sólido. partiendo .Se produce entre 0.Se obtiene un producto con un 45 % de proteínas y el poder contaminante del sustrato se reduce un 90 %. Los biorreactores utilizados son pequeños. lo que favorece la no necesidad de utilizar cambiadores de calor.• • No generen calor al degradarse. En general. Los procesos más comunes son: . deshidratación y empaquetado). Procesos de producción Existe una gran cantidad de plantas piloto.45 y 0. marxianus. utiliza Candida utilis (levadura). .Se debe ajustar el contenido en lactosa del sustrato a 34 g/l. el Finlandés de residuos de papeleras y madereras.Se emplea Fusarium venenatum por sus El primero aprobado para el consumo características de estructura y textura. Es uno de los pocos procesos que operan en continuo. influencia del CO2 o la presión hidráulica. El primer proceso con hongos.5. 38 oC y pH de 3. debido a que surgen problemas de escalado por la diferencia de condiciones: requerimientos de oxígeno. ambientales de los residuos de patata. metano proporcionan el sustrato. pero hay pocas plantas industriales.El sustrato contiene gran cantidad de almidón. principalmente arqueas. . el único destino de este ICI . Bel .El producto contiene un 70 % de proteínas. aparición de gradientes térmicos y nutricionales. El empleo de sustratos más económicos. incremento del valor nutricional del producto.Destinado a la producción de piensos.

lo que lleva a la producción de sabor y aroma. sales de amonio) y aminoácidos (que a su vez actúan como factores de crecimiento). 3. 44 . así como sales minerales.5). durante media hora tras finalizar el proceso para adecuar las características de la célula (proceso de maduración). • Alta generación de CO2. complementadas con compuestos nitrogenados (principalmente. 2. Se efectúa a pH ácido (4-4. • Altos niveles de osmotolerancia. 5. desecado y conservación en refrigeración. 4. Las células se purifican por centrifugación. enfriado (2-4 oC). Se requiere un gran aporte de oxígeno.El sustrato utilizado son principalmente melazas provenientes de industrias azucareras. • Perfil metabólico adecuado. lavado. Las características principales del producto son: • Elevado poder glicolítico (capacidad para procesar azúcares).

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