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Universidad de Sonora
Departamento de Agricultura y Ganadería

Manual de Prácticas de Laboratorio de Bioquímica General
Ingeniero Agrónomo

Hermosillo, Sonora.

Agosto 2007

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Tabla de Contenido
PRÁCTICA 1: REACCIONES CARACTERISTICAS PARA IDENTIFICACIÓN DE CARBOHIDRATOS 3 PRACTICA 2: ESTUDIO DE ALGUNAS PROPIEDADES DEL ALMIDÓN 11 PRACTICA 3: ESTUDIO DE ALGUNAS PROPIEDADES DE LOS LÍPIDOS 20 PRÁCTICA 4: OBTENCION DE LECITINA Y COLESTEROL A PARTIR DE LA YEMA DEL HUEVO 22 PRACTICA 5: REACCIONES DE COLOR PARA AMINOÁCIDOS 29 LECTURAS EXPERIMENTO 5 36 PRACTICA 6: PRECIPITACION DE PROTEÍNAS 38 PRACTICA 7: AISLAMIENTO E IDENTIFICACIÓN DE ACIDOS NUCLEICOS 46 PRÁCTICA 8: ACCIÓN DE LA LIPASA PANCREÁTICA SOBRE LA LECHE HOMOGENIZADA 54 PRÁCTICA 9: HIDRÓLISIS ENZIMÁTICA DE PROTEINAS POR LA ACCIÓN DE LA TRIPSINA 57 PRACTICA 10: PRESENCIA DEL ÁCIDO CÍTRICO Y TARTÁRICO EN TEJIDOS VEGETALES 61 PRÁCTICA 11: PRODUCCIÓN DE ALMIDÓN DURANTE LA FOTOSÍNTESIS 62 1.

Metodología de trabajo
El manual de prácticas de laboratorio de Bioquímica General para estudiantes de la carrera de Ingeniero Agrónomo ha sido elaborado tomando en su mayor parte prácticas de los manuales elaborados por los maestros Q. F. B. Eva Irma Vejar Rivera y M. C Jesús Rubén Gracilazo Pérez, fundadores del Departamento de Químico-Biológicas. Consta de 11 prácticas que se contempla realizar en 13 sesiones de laboratorio. Dado que el semestre consta de 16 semanas de actividades, deberán realizarse todas en tiempo y forma y sobrará tiempo para aplicar una evaluación general y resolver cualquier duda. Si se realiza a conciencia cada una de ellas demostrarás los principios establecidos en la clase teórica, aumentarás tu capacidad de observación y adquirirás destrezas manuales con lo que tendrás una base sólida para continuar con materias como Fisiología Vegetal, Nutrición Animal, Poscosecha de productos hortícolas y en general podrás comprender el comportamiento de cualquier ser vivo, incluido tu mismo. Para todas las sesiones de laboratorio los estudiantes deberán leer con anticipación la práctica y elaborar un diagrama de flujo que incluya principalmente dibujos y evite el uso de textos donde plasmarás el procedimiento paso por paso, este diagrama será revisado al entrar al laboratorio, si lo haces con cuidado te permitirá distribuir rápidamente el trabajo entre los integrantes del equipo, realizar el experimento sin demora, y salir a tiempo para que no te deje el camión. Al final de cada práctica se revisará tu desempeño mediante la revisión de la siguiente lista de cotejo: Si ¿Asististe puntualmente? ¿Elaboraste anticipadamente un diagrama de flujo de la práctica a realizar para saber que vas a hacer antes de empezar? ¿Trajiste el material necesario indicado para realizar la práctica? ¿Usaste bata de laboratorio blanca, limpia de algodón durante la práctica? ¿Preparaste los reactivos de forma anticipada? ¿Limpiaste el equipo, material y área de trabajo una vez realizada la práctica? ¿Dispusiste los desechos en forma adecuada? ¿Entregaste el reporte de la práctica anterior? No

3 El Reporte a elaborar deberá ser escrito en una libreta sin resorte. Esta libreta de laboratorio debe: Especificar lo qué se hizo Detallar lo que se observó Ser comprensible para cualquier persona. Deberán incluir los siguientes datos: • Datos personales: Nombre y grupo del alumno * • Nombre, número y fecha de realización de la práctica. * • Objetivo * • Listado de materiales y reactivos * • Diagrama de flujo c/ fecha de revisado * • Observaciones y Resultados con el formato incluido en el manual • Discusiones y Conclusiones donde des una breve, pero crítica evaluación de tus resultados, así como del éxito o no del experimento. • Preguntas correctamente contestadas * • Bibliografía de consulta * • Comentarios personales • Tabla de constantes físicas y datos de seguridad de los compuestos químicos utilizados y obtenidos. Estos deberán incluir entre otros, los daños a la salud y al ambiente, precauciones durante su manejo, así como la disposición final de los residuos. *Son aspectos que puedes realizar antes de realizar la práctica para que no se te acumule el trabajo Prepare el cuaderno para recibir datos numéricos Habitúese a escribir frases completas •

El desempeño en el laboratorio de cada una de la sesiones será evaluado de la siguiente manera Lista de cotejo completa = 50%

Reporte elaborado en tiempo y forma = 50 % • • • • Para aprobar el laboratorio el alumno deberá aprobar al menos el 80 % de las prácticas realizadas Se requiere calificación aprobatoria en el laboratorio para poder considerar la calificación de teoría. La reprobación del laboratorio no da derecho a examen de regularización de la materia. Tres faltas en el laboratorio ocasionan la reprobación del mismo.

Te deseo éxito en tus estudios y en todos los aspectos de tu vida. No dudes en acercarte a resolver cualquier duda sobre la materia. Mi correo electrónico es merenteria@guayacan.uson.mx. M. C. Ma. Eugenia Rentería Martínez

PRÁCTICA 1: REACCIONES CARACTERISTICAS PARA IDENTIFICACIÓN DE CARBOHIDRATOS

instale un baño de agua. a cada uno de los cinco tubos. REACCION DE FEHLING Con el vaso de precipitados de 600 ml. Reacción de Seliwanoff: identifica carbohidratos cetohexosas.. de Glucosa al tubo 1 5. Monosacárido. 2. El agua no debe rebasar la mitad del vaso de precipitados puesto que ahí va a colocar los tubos y el agua se derramaría 1. Reacción de Bial: identifica carbohidratos aldopentosas. Esto se hará en todas las sesiones de laboratorio. Utilice agua destilada para que no se incrusten sales en el vaso de precipitados.4 Revisión de Conceptos . Utilizando la segunda pipeta de 5 ml.0 ml. 1 Vaso de precipitados de 100 ml. 1 Pinzas para tubos de ensaye 10 Tubos de ensaye de 15 x 150 6 Tubos de ensaye de 13 x 100 P R O C E D I M I E N T O. Cuando el agua del baño esté hirviendo. con agua destilada. . Cetosas. todos al mismo tiempo y anote el tiempo. . antes de hacer la práctica. agregue 5. Es responsabilidad del alumno el consultar los libros de texto para conocer los fundamentos científicos de cada una de las reacciones arriba mencionadas. del reactivo de Fehling.0 ml. Tenga junto el vaso de precipitados de 100 ml. Definición de Carbohidratos . Pipetee los carbohidratos de la siguiente manera: 5. .0 ml. El alumno debe de estar seguro de que tiene claros los conceptos y que recuerda los ejemplos concretos de cada una de las categorías de la clasificación de los Carbohidratos. ya preparado. Reacción de Barfoed: puede distinguir entre mono y disacáridos.0 ml. 2 Pipetas de 1 ml. Polisacárido . tripie y tela de asbestos. Mechero. deberá escribir un breve resumen del fundamento de las reacciones. coloque los cinco tubos al mismo tiempo. de Fructosa al tubo 2 5. 4. Coloque en su gradilla 5 tubos de ensaye de 18 x 150 y numérelos. .0 ml. Y en la hoja de Datos Experimentales Obtenidos deberá anotar todas sus observaciones y resultados. Clasificación completa. enjuague la pipeta dos veces después de haber pipeteado los carbohidratos. Enjuague inmediatamente la pipeta. 3. y prenda su mechero para calentar el agua hasta ebullición. tripie y tela de asbestos 1 Vaso de precipitados de 600 ml. Aldosas. MATERIAL NECESARIO: 1 Gradilla 2 Pipetas de 5 ml. Las reacciones que se practicarán en esta sesión son las siguientes. de Maltosa al tubo 5 Para hacer eso utilice una de las pipetas de 5 ml. Al final de la práctica. Reacción de Fehling: identifica Carbohidratos reductores en general . de Sacarosa al tubo 3 5. dentro del vaso.0 ml. de Lactosa al tubo 4 5. .

De acuerdo a los resultados verá que esta reacción puede detectar monosacáridos y disacáridos en mezcla.5 5. 5. Espere hasta 10 minutos. REACCIÓN DE BARFOED (Pronuncie Barfed) 1. 6. 6. 2. Pipetee 1. del Reactivo de Seliwanoff. coloque una mezcla de Glucosa y Lactosa en un tubo de ensaye. Si algún tubo no ha dado el precipitado después de cinco minutos quiere decir que la reacción con el carbohidrato de ese tubo es negativa. de Glucosa al tubo 2 y 1.0 ml. Anote sus resultados en la ‘Hoja de Datos’. REACCION DE SELIWANOFF (Pronuncie Selivanof). Una vez que aparezca el precipitado característico de color rojo ladrillo.0 ml. agregue el reactivo de Barfoed y llévelo al agua hirviendo. Agregue 5. Observe la aparición del color y el tiempo. Anote los tiempos de aparición del precipitado. Aquellos tubos que sean positivos serán los que contienen Cetohexosas. Recuerde que la reacción identifica CETOHEXOSAS Sabemos que de las muestras que tenemos para esta práctica solamente una contiene Cetohexosa por lo que basta probar esa muestra y otras dos como controles negativos. del reactivo de Barfoed ya preparado. 4. Los tubos con reacción positiva serán los que contienen CARBOHIDRATOS REDUCTORES 7. ya preparado a cada uno de los tres tubos.0 ml de Fructosa al tubo 3. No use los mismos tubos aunque ya estén lavados. en la mayoría de los tubos (toma de uno a tres minutos) saque del baño todos los tubos con ayuda de las pinzas y colóquelos en la gradilla.0 ml. Coloque los cinco tubos al mismo tiempo en el agua hirviendo y anote el tiempo. Anote sus resultados en la hoja de datos. En cuanto aparezca el primer precipitado. Repita los pasos dos y tres de la reacción anterior. 3. Los tubos positivos en cinco o más minutos serán los que contienen carbohidratos DISACARIDOS 5. 3. Coloque en su gradilla tres tubos de ensaye y numérelos. . 2. observando cuidadosamente la aparición de precipitados. de Xilosa al tubo 1.0 ml. saque el tubo y filtre. a cada uno de los cinco tubos. 4. Lave inmediatamente los tubos donde hubo precipitado o las manchas no se podrán quitar. 1. Como opción para ver la utilidad de esta prueba. Los tubos positivos para la prueba en unos tres minutos serán los que contienen carbohidratos monosacáridos. Coloque los tres tubos al mismo tiempo en el baño de agua hirviendo. Agregue 5. El precipitado va a ser un poco menos grueso que en la reacción anterior. El filtrado vuélvalo a colocar en agua hirviendo por unos diez minutos más o hasta que aparezca un nuevo precipitado. 1.

pero las soluciones individuales son estables. 2.5 ml. LA MEZCLA ES INESTABLE. con agua destilada.) .) Disolver 250 miligramos de Resorcinol en un poco de agua destilada y Aforar a 50 ml. de Hidróxido de Sodio. de Acido Clorhídrico concentrado Aforar a 500 ml. 3. de Acetato cúprico en poco menos de un litro de agua Destilada. Agregue 5. de Tartrato doble de Sodio y Potasio y 50 Gr. Reactivo de Bial (180 ml. así que no mezcle más de lo que va a usar cada día. (mucho cuidado al agregar el Agua al ácido).gr.0 ml. 6. de acuerdo con la cantidad que se vaya a usar. y 0. Coloque los tres tubos al mismo tiempo en el baño de agua hirviendo 5.0 ml. de Sulfato Cúprico Pentahidratado en Suficiente agua destilada para hacer 500 ml. Coloque en su gradilla tres tubos de ensaye y numérelos. (Solución al 0.8 ml.5 %). Reactivo de Fehling (1 litro) Solución A: Disolver 34. 4.5ml. Aquella muestra que haya dado la reacción positiva será la que contenga carbohidrato PENTOSA PREPARACIÓN DE REACTIVOS. de Glucosa en el tubo 2 . Agregar 24.6 REACCIÓN DE BIAL. de Fructosa en el tubo 3. Observe la aparición de color y el tiempo de aparición. Solución B: Disolver 178. Anote sus resultados en la hoja de datos. de Acido Acético al 38 % (Aforar 9. Pipetee 0. Reactivo de Barfoed (1 litro) Disolver 66. 0.5 ml. Aforar a 1 litro. del reactivo de Bial. Antes de usarse. ya preparado a cada uno de los tres tubos.5 gr. con agua destilada. Reactivo de Seliwanoff (500 ml. de Xilosa en el tubo 1. 1. Agregar 170 ml. en suficiente agua destilada para hacer 500 ml.65 gr. de Acido Acético Glacial a 25 ml. Filtrar a través de papel filtro Whatman 1. mezcle las soluciones A y B en partes iguales.

Todas a concentración 0.4 gramos de Glucosa Agregarlos lentamente y con agitación constante a 250 ml de Agua Destilada. ♦ Fructosa (300 ml.) Pesar 10. con agua destilada.8 gramos de Sacarosa.) Pesar 750 miligramos de Xilosa Disolver en suficiente agua destilada para hacer 50 ml. de agua destilada Agregar 100 ml.) Pesar 5.) Pesar 5. Aforar a 300 ml. de Acido Clorhídrico concentrado.7 Disolver 60 miligramos de Orcinol en 20 ml.8 gramos de Lactosa . DATOS EXPERIMENTALES OBTENIDOS EXPERIMENTO 1 . ♦ Maltosa (300 ml. Disolver en agua destilada y aforar a 300 ml. Muestras de Soluciones de Carbohidratos. Disolver en agua destilada y aforar a 300 ml. ♦ Lactosa (300 ml.4 gramos de Fructosa Disolver en agua destilada y Aforar a 300 ml.) Pesar 10. Disolver en agua destilada y aforar a 300 ml. ♦ Sacarosa (300 ml. (Si es necesario Se diluye 1:10 ♦ Glucosa (300 ml.1 M.) Pesar 10.8 gramos de Maltosa. Añadir 12 miligramos de Cloruro Férrico (unos cuantos granitos) Aforar a 180 ml. ♦ Xilosa (o Arabinosa) (50 ml.

8 Reacción de Fehling Tubo No. 1 2 3 4 5 Carbohidrato ___________ ____________ ____________ ____________ ____________ Precipitado (+) o (-) _________ _________ _________ _________ _________ Tiempo ________ ________ ________ ________ ________

Reacción de Barfoed Tubo No. 1 2 3 4 5 Carbohidrato ____________ ____________ ____________ ____________ ____________ Precipitado _________ _________ _________ _________ _________ Tiempo _______ _______ _______ _______ _______

Reacción de Seliwanoff Tubo No. 1 2 3 Reacción de Bial Tubo No. 1 2 3 Carbohidrato ___________ ___________ ___________ Color _______ ________ ________ Tiempo _______ _______ _______ Carbohidrato ____________ ____________ ____________ Color __________ __________ __________ Tiempo ________ ________ ________

FUNDAMENTO DE LAS REACCIONES Escriba brevemente el fundamento de las reacciones practicadas. Si es necesario consulte el libro de texto o alguna otra bibliografía. Reacción de Fehling:

Reacción de Barfoed:

Reacción de Seliwanoff:

Reacción de Bial: CUESTIONARIO 1. Dibuje un modelo de pared celular vegetal donde muestre los polisacáridos que la forman. 2. Establezca las diferencias estructurales y funcionales entre pared celular y membrana celular 3. Investigue cómo cambia la composición de carbohidratos de la pared celular en mango y calabaza a medida que estos van madurando.

9 4. Mencione los carbohidratos que contienen las uvas y los melones y como se cuantifica el contenido de éstos? 5. ¿Cuál es la diferencia entre el reactivo de Fehling y el de Barfoed en cuanto a composición y en cuanto a su capacidad de reconocer carbohidratos?

6. Cómo se realiza el proceso de digestión de pastos en el aparato digestivo de los rumiantes? 7. Por qué los humanos no nos podemos alimentar de pastos o zacates?

LECTURAS EXPERIMENTO 1

10 Las siguientes lecturas están diseñadas para que los alumnos puedan fácilmente consultar todos los datos necesarios para entender los ejercicios que practiquen en el laboratorio. Por eso también están divididas de acuerdo a los mismos ejercicios.

Los carbohidratos son Polihidroxialdehidos o Polihidroxicetonas, y sus derivados, o compuestos que puedan hidrolizarse a estos. Los más sencillos son los Monosacáridos que pueden ser Aldosas o Cetosas según que contengan la función aldehido o cetona en sus moléculas. Según el número de carbonos serán triosas, tetrosas, pentosas, hexosas y heptosas. Correspondientemente habrá Aldotriosas, Aldotetrosa Aldopentosas y Aldohexosas; o Cetotriosa, Cetotetrosas, Cetopentosas y Cetohexosas. Si la molécula consta de unos pocos monómenos unidos en Unión Glucosídica, entonces será un Oligosacárido. Disacárido, trisacárido, tetrasacárido… Si la molécula cuenta con cientos o miles de monosacáridos unidos en unión glucosídica entonces tendremos a los Polisacáridos. Los Homopolisacáridos constarán de un solo monómero repetitivo. Los Heteropolisacáridos, constarán de dos o, en contadas ocasiones, más monómeros distintos en su molécula.

Carbohidratos Reductores son aquellos carbohidratos (fundamentalmente Monosacáridos y Oligosacáridos), que tienen su grupo funcional aldehido o cetona libre o potencialmente libre. Libre si la molécula existe en forma abierta, potencialmente libre si la molécula existe en forma cíclica. Todos los monosacáridos, aun si existen en forma cíclica, son reductores. Los disacáridos que tengan el hidroxilo del Carbono Anomérico de alguno de los dos monómeros libre, también serán reductores, aunque más lentamente, por ejemplo la Maltosa y la Lactosa. Pero aquellos que estén unidos por sus dos carbonos anoméricos, como la Sacarosa, no serán reductores, a menos que se hidrolice la unión y queden libres los monómeros. A medida que el número de monómeros aumenta, las características reductoras se van haciendo más y más leves. De ahí que los polisacáridos, a pesar de tener su último monómero, con carbono anomérico, potencialmente libre, en la práctica nunca son reductores. Pero si los polisacáridos se hidrolizan, entonces sí mostrarán las características reductoras de sus monómeros constituyentes.

Reacción de Fehling Esta reacción identifica a carbohidratos reductores en general. Cuando se calienta un carbohidrato reductor en una solución alcalina de cobre, se inestabiliza la doble ligadura, por lo que cambia constantemente de posición, dando origen a los compuestos llamados Enedioles. Los enedioles en algún momento se rompen por la doble ligadura, dando fragmentos de gran potencia reductora. Los fragmentos reductores, en presencia de iones cúpricos, se convierten en fragmentos ácidos, a la vez que los iones cúpricos pasan a cuprosos. Los iones cuprosos entonces se combinan con los hidroxilos de la solución para formar hidróxido cuproso de color amarillo El hidróxido cuproso con el calor se convierte a Oxido cuproso que precipita dando un color rojo ladrillo característico. Esto es lo que identifica a un carbohidrato como reductor.

Reacción de Barfoed Esta reacción identifica carbohidratos reductores y puede distinguir entre Monosacáridos y Disacáridos. La reacción utiliza un reactivo oxidante más débil, por lo que las condiciones de la reacción son más bien ácidas que alcalinas. Es una reacción un poco más lenta que la de Fehling. El reactivo es Acetato Cúprico en Acido Acético diluido.

Al reaccionar una cetohexosa . así como los ácidos urónicos. Reacción de Seliwanoff Esta reacción identifica carbohidratos Cetohexosas. pierde moléculas de agua y produce la sustancia conocida con el nombre de furfural. siempre que no haya calentamiento prolongado. se formará un complejo verde. que será signo de la presencia de la cetohexosa. Las cetohexosas lo dan rápidamente. que al reposar producen un precipitado de color verde oscuro. Al reaccionar una aldopentosa con Acido Clorhídrico. dando como resultado el 5hidroximetilfurfural. Esta molécula reacciona con el Resorcinol dando un complejo rojo intenso. que corresponderá al monosacárido. Las cetohexosas y las metilpentosas dan un complejo naranja. sino complejo. mientras que las aldohexosas lo dan lenta y débilmente. al contacto con el reactivo da el característico precipitado de color rojo ladrillo.11 El carbohidrato reductor. Lo que varía en cuanto a tiempo es la formación del 5-hidroximetilfurfural. por lo que esta reacción se considera más bien característica para identificación de cetohexosas. que si existe. Las triosas y los ácidos 5-cetoaldónicos dan positiva la reacción. el carbohidrato pierde moléculas de agua. y en concreto de Fructosa Reacción de Bial Identifica carbohidratos Aldopentosas. puesto que las condiciones ácidas hidrolizan al ácido nucleico y las ribosas libres darán positiva la reacción. mientras que los disacáridos reductores la dan positiva pero más lentamente (de cinco a diez minutos). Las cetopentosas en estas condiciones dan un complejo de color rojo. en cuyo caso las hexosas interferirán con la producción de un precipitado rojo. Los monosacáridos reductores dan la reacción positiva en poco tiempo (de dos a cinco minutos). En una mezcla de monosacáridos y disacáridos reductores. La presencia de hexosas no interfiere con la reacción. Esta reacción se utiliza para identificar a los Acidos Ribonucleicos. (fructosa es la más común). bastará filtrar el primer precipitado que aparezca. por lo que hay que tener cuidado de que en la mezcla de reacción no existan estos compuestos si es que se quiere demostrar la presencia de las aldopentosas. PRACTICA 2: ESTUDIO DE ALGUNAS PROPIEDADES DEL ALMIDÓN . corresponderá al disacárido. No es precipitado. La reacción es muy rápida en cuanto a la formación del complejo. Si en estas condiciones se agrega una pequeña cantidad de cloruro férrico. con ácido clorhídrico. y esperar la formación de un nuevo precipitado. El furfural puede reaccionar en medio ácido con el orcinol.

Observación de granos de almidón al microscopio . MATERIAL NECESARIO Vaso de precipitados de 600 ml.12 Revisión de conceptos. Vaso de precipitados de 50 ml. Las manipulaciones que se practicarán aquí son las siguientes: . Gelatinización . tripie y tela de asbestos Vidrio de reloj mediano Termómetro Portaobjetos y cubreobjetos Agitador. Pipeta de 5 ml. Celulosa y Almidón . Además: Cada grupo de trabajo será responsable de traer al laboratorio por su cuenta. Observación de la reversibilidad del complejo Yodo-Almidón. lo siguiente: Una papa de tamaño mediano Una navaja o pelador de papa Un rayador de queso Un pañuelo limpio de tejido no muy cerrado. . 10 tubos de ensaye de 13 x 100 Placa excavada de porcelana Escobetilla Gradilla Mechero. Complejo Yodo-Almidón El alumno debe estar seguro de entender las distintas formas de uniones glucosídicas en los Polisacáridos. Obtención del Almidón en granos . Determinación de la temperatura de Gelatinización del Almidón . Hidrólisis ácida del almidón. Amilosa y Amilopectina . PROCEDIMIENTO OBTENCIÓN DEL ALMIDÓN: . En la hoja de datos deberá mencionar esos fundamentos. Es responsabilidad del alumno consultar los libros de texto para conocer los fundamentos de cada una de las manipulaciones que se practicarán aquí. . Glucógeno . Vaso de precipitados de 250 ml. Polisacárido .

Agregue agua destilada a la pulpa. (Esto debe hacerse lo más rápidamente posible para evitar las reacciones de oscurecimiento). 4. más o menos el doble de su volumen y agite fuertemente por unos minutos. 5. con el almidón que le proporcione el Instructor del Laboratorio. tela de asbestos y mechero y encienda el mechero. Coloque su tripie. Con el agitador tome una gota de la suspensión y colóquela en el centro de un portaobjetos y añada una gota de Lugol. apretando si es necesario. DE LOS TEMPERATURA DE GELATINIZACIÓN . y llévelo a la estufa a 60 ° C. Deje unos minutos a que el filtrado se asiente. Si es posible dibuje algunos de los granos que observe. Observe la preparación al microscopio con el objetivo seco débil. Con gaza doble. La parte gruesa que queda en el filtro. 2. (Serían más o menos 0. Una vez asentado descarte el agua sobrenadante y lave el almidón agregando nuevamente suficiente cantidad de agua destilada y agitando por unos minutos. teniendo cuidado de que no llegue a ebullición. Seque los bordes con un poco de papel filtro. Se deja asentar. y que es fundamentalmente celulosa. Con en almidón que le proporcione su Instructor y utilizando su vaso de precipitados de 50 ml. Pele una papa de tamaño mediano y ráyela con un rayador de queso de manera que la pulpa fina que se obtenga caiga en el vaso de precipitados de 600 ml. Una vez seca el almidón pulverícelo lo mejor posible y guárdelo en donde su instructor le indique. en 25 ml. Ponga el cubreobjetos sobre la preparación y presione ligeramente para eliminar el exceso de agua. haga una suspensión de Almidón de aproximadamente el 2 % en agua destilada. Coloque sobre la tela de asbestos su suspensión de almidón para calentarla UN POCO. La operación se puede repetir una vez más para obtener un almidón limpio. 6. Lo que se ha obtenido en esta parte de la práctica son los: GRANOS DE ALMIDÓN OBSERVACIÓN AL MICROSCOPIO 1.5 gr. se descarta. 3. 6. Mientras este almidón se seca. 5. Decante finalmente lo más posible de agua y extienda el Almidón en un vidrio de reloj mediano. 2. de agua. que puede proporcionar el laboratorio o con un pañuelo de tejido no muy cerrado filtre. hacia el vaso de precipitados de 250 ml. En esta forma se puede llegar a observar las: CAPAS CONCÉNTRICAS GRANOS DE ALMIDÓN.13 1. proceda a las siguientes manipulaciones. 4. 3.

De alguna manera también identifique 10 pozos de una placa excavada de porcelana. Con ayuda de una pinza para tubos de ensaye . de agua destilada). de la solución de Almidón soluble al 1 % (preparada de antemano por el Instructor). HIDRÓLISIS ACIDA DEL ALMIDÓN. 1. 5. porque el contenido caliente del tubo puede en algún momento saltar. Anote el tiempo requerido para la desaparición TOTAL del color. 2. cuando el agua del baño esté hirviendo. Anote sus resultados en la Hoja de datos. Con el almidón proporcionado por su Instructor haga una suspensión de Almidón al 5 % (1 gramo en 20 ml. Cuando la suspensión cambie de aspecto.0 ml. sostenga su vaso de precipitados con la solución de almidón. 6. Agite constantemente e introduzca un termómetro a la suspensión de almidón.1 N. 4. COMPLEJO YODO-ALMIDÓN 1. Lo que se acaba de observar es la: Reversibilidad del complejo YodoAlmidón. Tome el tubo de ensaye con pinzas y páselo lenta y repetidamente sobre la llama. Con su tripie. tela de asbestos y vaso de precipitados de 600 ml. 2. del normal a un aspecto gelatinoso. 6. 3. Anote sus resultado en la hoja de datos. sin llenar completamente el vaso de precipitados con el agua. Lleve entonces el tubo de ensaye al agua corriente de la llave y anote el tiempo requerido para que aparezca nuevamente el color. Si el color del complejo es tenue. 2. 5. instale un baño de agua. Agregue 3 gotas de solución de Yodo 0. . El color del complejo debe ser de un morado oscuro. haga la lectura de la temperatura. Prenda el mechero. en su vaso de precipitados de 50 ml. dentro del agua a ebullición. 3. Pipetee 5. Coloque en su gradilla 10 tubos de ensaye de 13 x 100 y numérelos. 4. esa será la: Temperatura de Gelatinización del Almidón. a un tubo de ensaye de 13 x 100.14 1. teniendo cuidado de que la boca del tubo apunte hacia donde no haya nadie. agregue una gota más.

A la gota que puso en el pozo 1. 12. 7. 5. Encienda el mechero y coloque el vaso de precipitados con la solución sobre la tela de asbestos para calentarla hasta que hierva. 4. 10. Observe el grado de reducción por la cantidad de precipitado de Oxido Cuproso de color rojo ladrillo en cada tubo. 11. Enjuague la pipeta. para lo cual desde el principio llene el vaso solamente hasta un poco más de la mitad. Agregue inmediatamente una gota de solución de yodo al pozo número 2.0 gramos de Ioduro de Potasio. y observe si la reacción del complejo yodo-almidón comienza a hacerse débil o negativa. agréguele una gota de solución de yodo. coloque en él todos los tubos. Esta operación se repite cada dos minutos hasta que la reacción yodo-Almidón sea negativa. Anote sus resultados en la Hoja de datos. Con su vaso de precipitados. Si es necesario baje de intensidad la llama del mechero. Espere cinco minutos. es decir que dé un color café característico del yodo y no el azul de complejo yodo-almidón. 15. Anote el tiempo en que la solución comienza a hervir. 13. Saque todos los tubos y colóquelos en su gradilla de acuerdo a su numeración. Acaba de hacer una: HIDRÓLISIS ÁCIDA DEL ALMIDÓN PREPARACION DE REACTIVOS.5 gramos de Yodo y 2. Agregue solución de yodo al pozo 3 y enjuague la pipeta. A los dos minutos exactos de haber comenzado a hervir la solución repita la operación tomando un poco y dejando una gota en el pozo 3 y tres gotas en el tubo 3. Se debe observar el color azul característico de la reacción positiva del yodo con el almidón. procurando que no se derrame agua. El hervor debe ser suave. 14. de una solución de almidón al 1 % ya preparada de antemano por el Instructor. En ese momento se termina el calentamiento de la solución. Cuando el agua esté hiriviendo. Añada 10 gotas de Acido Clorhídrico concentrado y agite suavemente. Con una pipeta tome un poco de esa solución y coloque una gota de ella en el pozo número 1 de la placa excavada y tres gotas en el tubo número 1 de la gradilla. prepare un baño de agua hirviendo.) Pesar 0. Enjuague su pipeta con agua destilada. En ese momento tome con su pipeta otro poco de la solución y coloque una gota en el pozo número 2 y tres gotas en el tubo número 2. 9. y usando agua destilada. coloque 25 ml. Solución de Lugol:( 100 ml. . En un vaso de precipitados de 50 ml. Agregue 3 mililitros de la solución de Fehling a todos los tubos que recibieron gotas de la solución. 6. 8.15 3.

Disolverlos en un poco de alcohol y aforar a 100 ml. Solución de Yodo (100 ml.) Pesar 1. Reactivo de Fehling: (Checar práctica anterior para su preparación) Acido Clorhídrico Concentrado. agregar el yoduro de potasio y aforar a 100 ml. DATOS EXPERIMENTALES OBTENIDOS EXPERIMENTO 2 Obtención del Almidón Peso en gramos del almidón que obtuvo _____________________ Observación al Microscopio Objetivo utilizado __________________________ Forma de granos observada (Haga un dibujo) Temperatura de Gelatinización Tiempo requerido para la gelatinización_________________ Temperatura a la cual gelatinizó ______________________ Complejo Iodo-Almidón Tiempo empleado para decolorar la solución ______________ Tiempo empleado para volver a colorear _________________ . Agregar agua hirviendo para disolver la pasta y Aforar a 1 litro con agua destilada.16 Disolver el yodo en un poco de alcohol etílico. Agregar suficiente agua fría para hacer una pasta. No debe quedar muy turbio. con agua destilada. con agua destilada Solución de Almidón al 1 % (1 litro) Pesar 10 gramos de Almidón Soluble.27 gramos de Yodo.

Obtención de los granos de almidón: Observación al microscopio: Determinación de la temperatura de Gelatinización: Reversibilidad del complejo Iodo-Almidón: Hidrólisis ácida del Almidón. ¿Se podría determinar la presencia de Glucosa y Almidón que estuviesen mezclados en el mismo tubo de ensaye? ¿Cómo? . Si es necesario consulte el libro de texto. Precipitado (+) o (-) ________ ________ ________ ________ ________ ________ ________ ________ ________ ________ 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 FUNDAMENTO DE LOS PROCEDIMIENTOS Escriba brevemente el fundamento científico de cada uno de los procedimientos efectuados en esta práctica. CUESTIONARIO 1.17 Hidrólisis ácida del almidón Pozo No. Color del complejo (+) o (-) _________ _________ _________ _________ _________ _________ _________ _________ _________ _________ Tubo No.

Normalmente contienen un gran número de monómeros. que pueden ser de un tipo. ¿Para qué se agrega solución de Lugol a la preparación del almidón cuando se va a observar al microscopio? 4.18 2. 5.¿Qué tipo de hidrólisis de almidón llevamos a cabo en el sistema digestivo cuando comemos alimentos con almidón? Explique detalladamente. Como se elabora el almidón en las plantas? 8. Anote las diferencias estructurales y funcionales entre el almidón y el glucógeno LECTURAS EXPERIMENTO 2 Los Polisacáridos son polímeros de carbohidratos sencillos unidos entre sí por uniones glucosídicas. ¿En qué condiciones el almidón daría la prueba de Fehling positiva y en qué condiciones daría la prueba de Seliwanoff positiva? 3. o de dos o más tipos . 7. ¿Qué otras maneras hay de hidrolizar al Almidón? Explique con detalle y con precisión.

para obtener una buena suspensión de granos de almidón. Las uniones glucosídicas pueden hidrolizarse sea con ácido mineral o con enzimas. en los granos de semillas. por lo que hay que hacer una preparación y llevarla a observación al microscopio. Las moléculas de almidón hidratadas se arreglan en forma de un enrejado cristalino. La forma de los granos es una característica específica de los distintos almidones. Basta con raspar la papa para hacer una pulpa fina y eliminar por filtración la parte gruesa insoluble de Celulosa. el almidón de unas partes del grano se solubiliza y se sale del grano.000. Obtención del almidón La papa es un tubérculo que almacena gran cantidad de almidón. Para observarlos mejor y. por lo que en sí la molécula no muestra las características reductoras. que pueden ser esféricos u ovalados. Son también polímeros formados exclusivamente de Glucosas. pero las uniones para formar los puntos de ramificación son α-1-6. dando una macromolécula linear. o sea que hay una ramificación después de cada más o menos 20 moléculas de glucosa. quedando otra parte del almidón que permanece insoluble. Las uniones para la parte linear de la molécula son también α-1-4. Suponiendo el peso molecular de la glucosa de 180 y restando el peso de una molécula de agua por cada unión glucosídica.500 monómeros de glucosa. por lo que es muy sencillo obtenerlo de esa fuente. en las frutas y en los rizomas de las plantas. lo que es muy común en los almidones de los cereales. será característico de la molécula de amilosa tener entre 25 y 2. lo cual corresponde a unas 15 a 300 ramificaciones. se facilita un tanto la observación de estas capas al microscopio. El almidón está formado por una mezcla de moléculas de Amilosa y Amilopectina. el glucógeno. En ocasiones es difícil observar estas capas. Temperatura de Gelatinización El material de los granos de almidón es una mezcla de sustancias diferentes con estructuras y propiedades distintas. La molécula de amilopectina es mucho mayor de tamaño y presenta ramificaciones. que pertenecen a los vegetales. o en capas excéntricas como en el almidón de la papa. El almidón en los granos contiene de 14 a 19 % de agua. El almidón puede estar organizado en capas concéntricas en los granos. Estas moléculas de amilosa están formadas exclusivamente por monómeros de glucosa.19 distintos unidos siempre en forma alternada. y para la amilopectina de 300 a 6. Ambas fracciones son mezclas de moléculas de diferentes tamaños. lo cual va a teñir de azul los granos de almidón. Su peso molecular varía de 50. pero esta estructura se pierde y se hace amorfa cuando se expele el agua de hidratación. Cuando el Almidón se trata con agua hirviendo. por calentamiento. Entre los homopolisacáridos importantes existen dos. Esta porción . la celulosa y el almidón.000 y 400. en forma linear. de la cual un 10 % está unida químicamente. Por lo general la molécula tiene un solo término reductor y muchos términos no reductores. en forma de lente o en forma irregular. Se calcula que las moléculas de amilopectina tienen un 5 % de ramificaciones.000. hacer visibles sus capas excéntricas se añade un poco de Lugol.000 1. Los almidones se presentan como reserva de carbohidratos en tubérculos tales como la papa. y uno que es característico de los animales. pero si los granos de almidón se sujetan a un ligero calentamiento. Se han identificado amilosas con pesos moleculares entre 4. que es una mezcla de Yodo con Ioduro de Potasio en agua.000 monómeros.000. El almidón se concentra en unas formaciones llamadas granos. si es posible. Observación al microscopio Los granos de almidón son de tamaño microscópico. unidos en union glucosídica α-1-4.

pero en el laboratorio se puede llevar al cabo con ácido mineral. hasta desaparecer por completo. absorbe agua y se hincha para formar una esfera elástica.20 insoluble de los granos. Colesterol . que es el polisacárido exclusivamente linear dará con el yodo el color más intenso de un azul profundo. Complejo Yodo-Almidón y su reversibilidad. o por la formación de azúcares reductores. Ambos almidones. O por la desaparición de la reacción con el yodo a medida que avanza la hidrólisis. Hidrólisis del almidón. La obtención de una sustancia colorida al reaccionar el yodo con el almidón se cree que se debe a la formación de un complejo de coordinación entre las micelas de Almidón y el Yodo. y toda la masa se convierte en una pasta de almidón. PRACTICA 3: ESTUDIO DE ALGUNAS PROPIEDADES DE LOS LÍPIDOS Revisión de Conceptos . La reacción del yodo con el almidón nos sirve para detectar el grado de hidrólisis del almidón. Fracción Insaponificable . para que estas puedan metabolizarse en los caminos energéticos. El color depende del largo de la sección linear de la molécula del almidón. Estas micelas están formadas por cadenas polisacáridas enrolladas en hélice. pero las células para la obtención de su energía no pueden metabolizar el almidón como tal. sino que es necesario que lo degraden por hidrólisis hasta sus constituyentes monosacáridos o glucosas. y menor será la reacción con el yodo hasta hacerse totalmente negativa. La amilopectina dará un color azul violeta mientras que el glucógeno que es la molécula más ramificada dará un color café rojizo. Por eso la amilosa pura. el soluble y el insoluble son mezclas de amilosa y amilopectina. Las células llevan al cabo la hidrólisis a través de procesos enzimáticos. dependiendo del tamaño de la molécula. . Agentes Emulsificantes . El curso de la hidrólisis se puede seguir de dos maneras. Mientras más hidrolizado esté el almidón. ni almidón insoluble con amilopectina. El almidón es la reserva alimenticia de las plantas. Fracción Saponificable. y se intensifica al bajar nuevamente la temperatura. Las dextrinas formadas por hidrólisis del almidón dan un color que varía de café rojizo a la ausencia de color. Esto indica la formación y destrucción de los complejos de coordinación formados entre el yodo y el almidón. Este proceso de gelatinización sucede siempre a una temperatura definida. más azúcares reductores habrá. El yodo puede colocarse centralmente en estas hélices. Eso no es correcto. La celulosa no da reacción de color con el yodo. obteniendo el mismo resultado. El color disminuye cuando la temperatura aumenta. No confundir almidón soluble con amilosa. Lecitinas y Cefalinas .

21 .

Agentes Emulsificantes . Colesterol . Fracción Saponificable.22 PRÁCTICA 4: OBTENCION DE LECITINA Y COLESTEROL A PARTIR DE LA YEMA DEL HUEVO Revisión de Conceptos . . Lecitinas y Cefalinas . Fracción Insaponificable . El alumno debe de estar seguro de entender la solubilidad de los distintos lípidos y de conocer la composición de los mejores solventes.

. deberá mencionar esos fundamentos. con tapón Probeta de 50 o 100 ml. MATERIAL NECESARIO PRIMERA PARTE Erlenmeyer de 250 ml. Coloque el Erlenmeyer con la mezcla de filtrados sobre una de las “Planchas Calientes”. Filtre nuevamente esta segunda extracción y combine los filtrados. Añada 50 ml. de Alcohol Etílico y 25 ml. un huevo fresco. donde le indique su Instructor. procurando siempre la limpieza. Rompa el huevo. agitando suavemente de tiempo en tiempo. Pase el residuo que queda en el papel filtro a otro Erlenmeyer y añada 10 ml. PROCEDIMIENTO OBTENCIÓN DE LA LECITINA 1. de Eter. del laboratorio. Detección del Colesterol por la reacción de Liebermann-Burchard Es responsabilidad de alumno consultar los libros de texto para conocer los fundamentos científicos de las distintas manipulaciones de la práctica. de Eter. Filtre sobre papel filtro Whatman 1. 6. La práctica puede llevarse al cabo en dos sesiones. de Etanol y 5 ml. Vaso de precipitados de 100 ml. separe la yema y vacíela en un Erlenmeyer de 250 ml. El residuo se descarta. 3. de 2. Vaso de precipitados de 50 ml. Gradilla. Deje reposar la mezcla por 10 minutos. Obtención de la Lecitina . Probeta de 50 o 100 ml. Escobetilla Además: Cada grupo de trabajo se responsabilizará de traer para la primera Parte. y en la segunda obtener el colesterol y hacer la prueba de Liebermann-Burchard. Disponga de él en el lugar apropiado. En la Hoja de Datos. Agitador 6 tubos de ensaye de 13 x 100 Pipeta de 5 ml. 5. Cheque con el Instructor para saber cómo se dobla ese papel. Agitador SEGUNDA PARTE Vaso de precipitados de 250 ml. Agite suavemente y deje reposar por cinco minutos. La clara se descarta. Hágalo con cuidado. Obtención del Colesterol . humedecido con Etanol y doblado en la forma de “zig-zag” (en inglés “fluted”). Embudo Vaso de precipitados de 250 ml.23 Los procedimientos que se practicarán en esta sesión de laboratorio son: . antes de hacer la práctica. preferencia en el lavabo. Tape el Erlenmeyer y agite con cuidado durante unos dos minutos. destapando de tiempo en tiempo para desalojar cualquier presión que pudiera desarrollarse. 4.

Lentamente y con agitación suave solo alrededor del centro del vaso de precipitados vacíe la solución del Erlenmeyer hacia el vaso con Acetona. 3. Puede observar la sedosidad de la lecitina obtenida. Ahora añada gota a gota agua destilada a la solución. de Eter y agite bien. Ese sobrenadante contiene el Colesterol. Siga agitando con cuidado hasta que las partículas de Lecitina cruda precipiten. se adhieran entre sí y formen una bolita alrededor del agitador. Siga añadiendo agua hasta que ya no aparezca más precipitado. En ocasiones la Lecitina precipita pero no se adhiere. pues ya no se usará más. 8. Transfiera el sobrenadante a otro tubo de ensaye. 9. Se obtiene colesterol cristalino. Transfiera la solución a un tubo de ensaye 6. Puede utilizarlos para la siguiente parte de la práctica. 2. Decante para eliminar el líquido. No importa. Con mucho cuidado agregue 15 ml. El colesterol cristalino estará en el fondo del tubo de ensaye. Agregue 10 ml.24 7. 10. Si obtuvo buenos cristales de colesterol en su sección anterior. pero cuidando de que se llegue a resecar totalmente. 5. REACCIÓN DE LIEBERMANN-BURCHARD (Pronuncie LibermanBurchar). Lo que aprendió en esta parte es que: La Lecitina es insoluble en Acetona Donde PRECIPITA OBTENCIÓN DEL COLESTEROL 1. agite bien y vuelva a colocar la preparación en la plancha caliente. de una solución de Potasa Alcohólica al 10 %. Nuevamente evapore el filtrado hasta sequedad. Coloque en su gradilla dos tubos de ensaye. de Eter al Erlenmeyer con su residuo 9. Prepare un vaso de precipitados de 100 ml. Añada 5 ml. Deje que se enfríe la preparación. 2. de Alcohol etílico y caliente por unos dos minutos. agréguelos a uno de los tubos. y colóque el vaso en la plancha caliente que le proporcione su Instructor. de Acetona. Filtre para separar la Lecitina. Al otro agréguele 10 a 15 miligramos de Colesterol puro que le proporcione su instructor. Añada 50 ml. Guarde el filtrado para usarlo en la segunda parte de la práctica. Comenzará a precipitarse el colesterol. con 30 ml. y deje secar los cristales de Colesterol. Deje que se haga una pasta. Deje reposar la preparación unos minutos y centrifugue por cinco minutos. 1. . Lo que en esta parte aprendió es que: El Colesterol disuelto en Alcohol se precipita con Agua. No debe proseguir calentando pues se quemará la preparación y será difícil seguir con el procedimiento. Centrifugue por cinco minutos 7. hasta que la solución se concentre a sequedad. 4. Después de lo cual se descarta. Esté pendiente a que se la haya evaporado todo el solvente y solo quede una pasta verdoso-amarillenta que burbujee un poquito. Filtre por si hay algún precipitado de jabón. 8. Coloque el filtrado de la sección anterior en un vaso de precipitados de 250 ml.

4.5 litros Acetona………………………. Con mucho cuidado agregue dos o tres gotas de Ácido sulfúrico Concentrado a cada uno de los dos tubos.0 ml.0 ml. Äcido Sulfúrico Concentrado …50 ml.300 ml. Añada 1.. DATOS EXPERIMENTALES OBTENIDOS EXPERIMENTO 5 Obtención de Lecitina: ¿ Se obtuvo Lecitina en el experimento? ________ ¿Cuál era la apariencia de la Lecitina __________ _______________________________________________ .1. 6.100 ml. Anote todos sus resultados en la Hoja de Datos. Debe prepararse el mismo día. de Cloroformo anhidro. Agite suavemente y observe la aparición de color. Anhidrido Acético…………….25 3. Deje reposar y observe el color a los dos. 7. de Alcohol Etílico.. Añada a los dos tubos 3.) Disuelva 30 gramos de KOH en 300 ml. 2 litros Eter Etílico……………………. Colesterol Puro………………. 1 litro SEGUNDA PARTE Alcohol Etílico………………. cinco y diez minutos para notar algún cambio de color en la reacción. de Anhidrído Acético a cada uno de los dos tubos. 5. En esta parte aprendió que la principal reacción para cuantificar el colesterol es: La reacción de Liebermann-Burchard PREPARACIÓN DE REACTIVOS PRIMERA PARTE Alcohol Etílico……………….200 ml.. Solución de Potasa Alcohólica al 10 % (para 300 ml.100 miligramos.. Eter Etílico…………………… 1 litro Cloroformo Anhidro………….

¿Qué quiere decir que las Lecitinas puras sean buenos agentes emulsificadores? 3. 1 2 Color _________________ _________________ Tiempo _______________ _______________ FUNDAMENTO DE LOS PROCEDIMIENTOS Obtención de la Lecitina Fundamento del procedimiento hasta la obtención de la Lecitina: Obtención del Colesterol. Fundamento del procedimiento hasta la obtención del Colesterol: Reacción de Leibermann-Burchard Fundamento de la reacción Cuestionario: 1. ¿Cuál es el fundamento para la clasificación de los Lípidos? 2. ¿Cuáles son los productos de la hidrólisis completa de la Lecitina? .26 Obtención de Colesterol: ¿Se obtuvo Colesterol en el experimento?_______ ¿Cuál era la apariencia del Colesterol?___________ _____________________________________________ Resultado de la Reacción de Liebermann-Burchard Tubo No. ¿Cuál es el mejor solvente para la extracción de los lípidos y por qué? 4.

Benceno. son muy insolubles en agua.27 5. como grupo. Tetracloruro de Carbono. etc. por medio de solventes orgánicos como Éter. Los lípidos. ¿Por qué en la obtención del colesterol se usa KOH disuelto en alcohol y no disuelto en Agua? 6. . en primer lugar porque constituyen formas de almacenamiento de energía. y en segundo lugar. porque forman parte de estructuras celulares. LECTURAS EXPERIMENTO 3 y 4 Lípidos son aquellas sustancias orgánicas extraíbles de tejidos animales o vegetales. Bioquímicamente hablando. Es muy importante que consulte en sus libros y tenga claros los modelos de los Fosfolípidos y colesterol. son sustancias de suma importancia. Cloroformo. Anote las estructuras de estos lípidos. para entender sus propiedades de anfotericidad y sus características de orientación sobre todo en la estructura de las membranas biológicas. principalmente de todo tipo de membrana biológica.

Terpenos y Eicosanoides o Prostaglandinas. No existe clasificación de lípidos. Fosfatidil Etanolamina y Fosfatidil Serina. Son solubles en los solventes ordinarios de las grasas. Las Lecitinas son moléculas polares que existen en forma de sales internas o zwiteriones. Es muy soluble en Eter.28 Los lípidos extraídos de material biológico representan una gran variedad de moléculas. pero que comparten la propiedad de ser solubles en solventes orgánicos. lo cual concuerda con su estructura anfótera. propiedad que se aumenta cuando la lecitina está combinada o adsorbida a Proteínas y carbohidratos. Es un poco soluble en soluciones jabonosas y todavía más solubles en soluciones de ácidos biliares. Cerebrósidos. se oxida lentamente. Esta propiedad se emplea para su aislamiento. por ejemplo con Etanol-Eter. Disulfuro de Carbono y Acetona. Existen varias lecitinas dependiendo de los dos ácidos grasos que contengan esterificados en los carbonos alfa y beta del glicerol. Unos lípidos son más solubles en un solvente y otros en otro. para separar los Acidos Grasos. Son higroscópicas y se mezclan bien con el agua formando soluciones coloidales nebulosas. el separar cuantitativamente. El pH isoeléctrico de una Lecitina pura es generalmente de 6. Las lecitinas puras son sustancias blancas de aspecto grasoso. Si se expone a la luz y al aire. ya que contienen la carga negativa del Acido Fosfórico. a todos los lípidos de un tejido. pero una de las más comunes es la que los divide en: Acidos Grasos. y como es insaponificable. No tiene olor ni sabor. debido a la autooxidación y descomposición. después del tratamiento con hidróxido de potasio. La identificación de la lecitina puede hacerse por saponificación. aceptada universalmente. Triacilgliceroles. los Terpenos y algunas Vitaminas. o triglicéridos. Sulfolípidos.7 o un poco mayor. estructuralmente diferentes. por extracción con solventes orgánicos. Fosfoglicéridos y Lípidos no fosforilados. Eter de Petroleo. Esteroides. Cloroformo. Hay que notar que los nombres genéricos de los grupos de lípidos pueden variar de acuerdo a diferentes autores. Entre los Fosfolgicéridos más comunes. llamados por eso. si no imposible. siendo esta última una categoría heterogenea que incluye: Gangliósidos. hidrólisis para separar la Colina y después probar para presencia de Colina. A los Fosfatidil Colina se les conoce con el nombre genérico de Lecitinas. solventes de las grasas. Proteolípidos. Es insoluble en agua. formando una mezcla de productos que bajan su punto de fusión y cambian sus reacciones de solubilidad. Preparaciones de Lecitina purificada son suficientemente efectivas en bajar la tensión superficial de soluciones acuosas. . El colesterol no se precipita del eter por la Acetona. ácidos y álcalis. Es muy difícil. puede extraerse con eter. y moléculas polares como los Fosfoglicéridos. excepto en Acetona. Benceno. En el reino animal el esteroide más abundante es el Colesterol. tenemos a los tres derivados del Acido Fosfatídico. como los triacilgliceroles. y los Esfingolípidos. o Fosfolípidos. El colesterol. en cuyo caso las lecitinas son muy activas y constituyen agentes emulsificantes excelentes. Sus principales propiedades químicas se relacionan con su grupo hidroxilo secundario y su doble ligadura. que cuando se exponen a la luz y al aire toman una coloración café. y la carga positiva del grupo trimetilamino de la colina. generalmente cristaliza como placas rómbicas blancas. a saber: Fosfatidil Colina. o con Etanol-Eter-Cloroformo. Entre los lípidos existen moléculas no polares. y moléculas de tipo terpenoide los Esteroides.

Una sustancia insaponificable. Tal vez la mejor mezcla de solventes es Ethanol-Eter al 2:1. El colesterol entonces se precipita en forma cristalina agregando agua. A su vez se llamará Fracción saponificable. B o C. como el Colesterol. Esteroides y Terpenos. es aquella que mantiene su insolubilidad en agua y su soluibilidad en eter después del tratamiento alcalino. Reacción de Liebermann-Burchard La demostración de la presencia del colesterol se hace por medio de la reacción de LiebermannBurchard. al conjunto de sustancias que después del tratamiento de saponificación se vuelven solubles en agua e insolubles en eter. Las reacciones de color de los esteroles se deben a una dehidración preliminar para formar dienos. que se polimerizan a dímeros y trímeros.29 Después de la saponificación de un Triacilglicerol. Composición e hidrólisis de las proteínas. . . se extraen los lípidos con solventes orgánicos.3-colestadieno. por lo que se requiere de 15 a 20 minutos para que se desarrolle completamente el color típico verde azulado oscuro característico.Tipos de cadenas laterales de los aminoácidos. Extracción de Lecitina y Colesterol En la yema del huevo se encuentran las lecitinas en gran abundancia y además el colesterol en suificiente cantidad para hacer su aislamiento y detección fácil. los productos son solubles en agua e insolubles en Eter. . El alumno debe tener claro la configuración L o D de los aminoácidos. Las reacciones de los grupos amino y los grupos carboxilo de los aminoácidos y las reacciones específicas para los grupos de las cadenas laterales de los aminoácidos. que pueden representar productos intermediarios o finales de la reacción. Esta última fracción contiene principalmente jabones y ésteres de ácidos grasos. que es específica para Esteroles con insaturación en los anillos A. se deben a los diversos pasos del proceso. Las lecitinas una vez extraídas por los solventes orgánicos.5-Colestadieno o el 2. El conjunto de sustancias que se comportan así se llaman genéricamente: Fracción insaponificable de las grasas. mientras que la fracción insaponificable la componen principalmente alcoholes de alto peso polecular. que puede incluso cuantificarse. se precipita fácilmente agregando Acetona. Entonces el Colestadieno. Clasificación de los aminoácidos. Para esta reacción se requieren condiciones completamente anhidras. y sus polímeros reaccionan con el Acido Sulfúrico para formar Acidos Sulfónicos. principalmente el 3. Si entonces se hace una saponificación se separa la fracción saponificable y queda la fracción insaponificable. donde viene el colesterol. PRACTICA 5: REACCIONES DE COLOR PARA AMINOÁCIDOS Revisión de conceptos . Una vez precipitadas las lecitinas en soluición queda el colesterol junto con otras sustancias de menor concentración. Separada la yema.

Con ‘masking tape’. Si algún tubo después de 10 minutos no ha dado la reacción positiva. Observe el color desarrollado y anote en su ‘Hoja de Datos’. Tirosina. 2 pinzas para tubos de ensaye Mechero.0 ml. Reacción Xantoproteica: Identifica Tirosina y Triptófano.30 Las reacciones que se practicarán en esta sesión son las siguientes: . antes de hacer la práctica. Triptófano. 3 pipetas de 1 ml. . sáquelo y considere en ese tubo una reacción negativa. 8. Añada 1. Coloque en su gradilla 7 tubos de ensaye e identifíquelos de alguna manera con los nombres de las sustancias que va a probar (puede usar una hoja aparte para la correcta identificación de las sustancias). 9. Cuando ya esté hirviendo el agua en el baño que preparó coloque ahí los siete tubos al mismo tiempo y déjelos unos minutos. 4. de cada una de las muestras. 3. Se pueden juntar dos o tres grupos y entre ellos traer una bolsa de hielo. Use agua destilada. Si al final algo sobrara se podrá regresar al frasco original. Si no está neutro. Reacción de la Ninhidrina: Universal para detectar Aminoácidos. o con plumón graso. En la Hoja de Datos deberá mencionar esos fundamentos. titule sus siete vasos de precipitados de 50 ml. Las muestras las tiene ya en sus vasos de precipitados en su lugar de trabajo. 6. prepare un baño de agua hirviendo. Estas soluciones estarán en su mesa de trabajo para facilitar la práctica. Alanina. No llene de agua totalmente el vaso de precipitados sino más o menos a la mitad. 7 Vasos de precipitados de 50 ml. tela de asbestos y el vaso de precipitados de 250 ml. Además: Es responsabilidad de cada grupo traer un poco de hielo que se necesitará para la última reacción. las características de tiempo y color de la reacción para cada tubo. Con su mechero. 2. de la solución de Ninhidrina al 0. de cada una de las muestras a sus correspondientes tubos. 1 Vaso de precipitados de 250 ml. Pipetee 3. 7. Cuide de no perder la identificación de las muestras.5 ml. tripie. . tripie y tela de asbestos Escobetilla. La reacción que en esta parte ha practicado es la: . . Aspártico. cheque el pH de las muestras. teniendo mucho cuidado de identificar bien las sustancias. Arginina y Gelatina. Vaya sacando los tubos del baño de agua hirviendo a medida que vayan dando la reacción positiva. Con los vasos así titulados vaya a la mesa de reactivos y tome más o menos 15 ml. con los nombres de las muestras que van a contener y que son: Albúmina. Con papel indicador. Reacción de Sakaguchi: Identifica Arginina Es responsabilidad del alumno consultar los libros de texto para conocer los fundamentos científicos en que se basa cada una de las reacciones arriba mencionadas. 5. Reacción de Millon: Identifica Tirosinas en solución o en Proteínas. 2 Pipetas de 5 ml. ajústelo con mucho cuidado. PROCEDIMIENTO REACCIÓN DE LA NINHIDRINA (Pronuncie Ninidrina) 1.1 % a cada uno de los siete tubos. MATERIAL NECESARIO: Gradilla 20 tubos de ensaye de 15 x 150 1 Vaso de precipitados de 600 ml.

4. Observe el resultado. que son: Tirosina. 2. Coloque en su gradilla 5 tubos de ensaye y numérelos o identifíquelos de alguna manera con los siguientes nombres: Tirosina. 5. 3. 3. Añada 5 gotas del Reactivo de Millon a cada uno de los cuatro tubos. REACCIÓN DE MILLON (pronuncie Mílon) 1. Con mucho cuidado añada a cada uno de los cinco tubos 1. de Acido Nítrico concentrado (incoloro). Pipetee 2. Pipetee 3 ml. 2. Arginina. Coloque en ese baño de hielo 3 tubos de ensaye numerados o identificados como: Aspártico. Albúmina y Gelatina. Triptófano. de Hidróxido de Amonio Concentrado. Albúmina y Gelatina.0 ml. Coloque en su gradilla 4 tubos de ensaye y numérelos o identifíquelos de acuerdo a las muestras que va a probar. se desarrollará un anillo de color naranja 8.0 ml. Saque los tubos de ensaye del baño de agua hirviendo y enfríelos en agua corriente. 3. 4. Prepare un baño de hielo. Albúmina. Identifíque las muestras que estaban en los tubos que dieron reacción positiva.0 ml. Lleve los tubos al baño de agua hirviendo y déjelos ahí por cinco minutos. Alanina. Con sumo cuidado. 5. Si la reacción es positiva. Coloque los tubos en el baño de agua hirviendo y déjelos por cinco minutos. de las soluciones correspondientes. Lo que acaba de realizar es la prueba llamada: Reacción Millon. poniendo hielo picado en su vaso de precipitados de 600 ml. de . Saque del baño de agua hirviendo los tubos y observe el color desarrollado en algunos de los tubos. Anote sus observaciones en su ‘Hoja de Datos’. 6. 7. Pipetee 5. NO AGITE. resbale lentamente con una pipeta. de las soluciones a los correspondientes tubos.0 ml. 2. por la pared de cada tubo. La prueba que acaba de demostrar es la: Reacción Xantoprotéica Reacción de Sakaguchi 1. 2. Reacción Xantoprotéica 1. Alanina. de las soluciones correspondientes a los túbos así identificados.31 Reaccion de la Ninhidrina. 6. En su ‘Hoja de Datos’ anote sus observaciones y resultados.

0 ml. de Hidróxido de Sodio al 10 % a cada uno de los tres tubos. Disolverlos en 25 ml. sus observaciones y resultados. de Acido Nítrico. Lo que acaba de practicar es la prueba de la: Reacción de Sakaguchi.0 ml. 9.) Pesar 25 gramos de Mercurio. Después de un minuto añada 1. de Hipobromito alcalino a cada uno de los tres tubos. de NaOH al 5 % Alfa-Naftol al 0. de solución de Alfa-Naftol al 0. Se requiere de calentamiento Por lo que lo mejor es hacerlo en una plancha caliente colocada En la campana pues los humos que salen son tóxicos. Una vez disuelto el mercurio.2 gramos de Alfa-Naftol Disolverlos en 100 ml. 7. PREPARACIÓN DE REACTIVOS Solución de Ninhidrina al 0. de Etanol de 95 % Aforar a 350 ml. de Alcohol Etilico de 95 % Nota: Este reactivo es muy inestable. Reactivo de Millon (100 ml. con agua destilada.32 4.1 % (350 ml.) Pesar 40 gramos de Urea . 5.) Pesar 0. Mezcle bien por inversión del tubo.0 ml. Hay que prepararlo inmediata Mente antes de usarlo. 8. 6. Observe el desarrollo de un color rojizo que indica que la prueba es positiva. de Agua Destilada.0 ml. Añada 1. Añada 1. Hipobromito Alcalino (100 ml.02 % a cada uno de los tres tubos. Nota: Las proporciones de Mercurio-Nítrico-Agua deben ser 1-1-2. enfríe la solución en agua corriente Añada entonces 50 ml. Como es difícil pesar con exactitud el mercurio. de solución de Urea al 40 % (Para destruir el exceso de Hipobromito). Urea al 40 % (100 ml.) Pesar 350 miligramos de Ninhidrina Disolverlos en 35 ml. Añada 2.8 gramos de Bromo y disolverlos en 100 ml. lo mejor pesar Una determinada cantidad de mercurio y ajustar las cantidades De los otros reactivos a esa cantidad de mercurio.2 % (100 ml. conservando Siempre las proporciones mencionadas.) Pesar 0. Anote en la ‘Hoja de Datos’.

) Pesar 500 miligramos de Albúmina Disolver en 500 ml. . . Soluciones de Aminoácidos y Proteínas (Todos al 0. . de Agua Destilada. por ejemplo la Tirosina. de Agua Destilada. . de Agua Destilada. . agregue un poquito de ácido Clohídrico y calor. de Agua Destilada. Hidróxido de Amonio concentrado. Hidróxido de Sodio al 10 (100 ml. .33 Disolverlos en 100 ml. ♦ Arginina (100 ml. de Agua Destilada.1 %) ♦ Albúmina (500 ml.) Pesar 250 miligramos de Tirosina Disolverlos en 250 ml. de Agua Destilada. .100 ml. . de Agua Destilada. . Nota: Si alguno de los aminoácidos no se disuelve bien en Agua Destilada. . .. ♦ Gelatina (500 ml. ♦ Tirosina (250 ml.) Pesar 500 miligramos de Alanina Disolverlos en 500 ml. ♦ Triptófano (300 ml.) Pesar 100 miligramos de Acido Aspártico Disolverlos en 100 ml. Disolverlos en 300 ml. .) Pesar 5 gramos de NaOH Disolverlos en 100 ml. Acido Nítrico concentrado . . . de Agua Destilada. ♦ Alanina (500 ml. Hidróxido de Sodio al 5 % (100 ml.) Pesar 500 miligramos de Gelatina Disolverlos en 500 ml. . .) Pesar 300 miligramos de Triptófano. . ♦ Acido Aspártico (100 ml. . 100 ml. . .) Pesar 10 gramos de NaOH Disolverlos en 100 ml. Acido Sulfúrico concentrado .) Pesar 100 miligramos de Arginina Disolverlos en 100 ml. . de Agua Destilada. de Agua Destilada. . 200 ml.

1 2 3 4 Reacción Xantoprotéica Muestra __________ __________ __________ __________ Color __________ __________ __________ __________ Tiempo _________ _________ _________ _________ Tubo No.34 DATOS EXPERIMENTALES OBTENIDOS EXPERIMENTO Reacción de la Nimhidrina Tuno No. 1 2 3 4 5 Muestra __________ __________ __________ __________ __________ Color __________ __________ __________ __________ __________ Tiempo _________ _________ _________ _________ _________ Reacción de Sakaguchi Tubo No. 1 2 3 4 5 6 7 Muestra Albúmina Alanina Tirosina Triptófano Aspártico Arginina Gelatina Color ________ ________ ________ ________ ________ ________ ________ Tiempo ________ ________ ________ _______ ________ ________ ________ Proteina o AA ________ ________ ________ ________ ________ ________ ________ Reacción de Millon Tubo No. 1 2 3 Muestra __________ __________ __________ Color __________ __________ __________ Tiempo _________ _________ _________ .

¿Cuáles son las características de solubilidad de los aminoácidos? 3.En sus cursos de Química Inorgánica. 1. ¿Cuál de las dos configuraciones de los aminoácidos se encuentra exclusivamente en la estructura de las proteínas? 2.35 FUNDAMENTO DE LAS REACCIONES Escriba brevemente el fundamento de las reacciones practicadas.. Si es necesario consulte el libro de texto. ¿recuerda haber tocado ácido reacción era? Nítrico? ¿Que pasó y qué . Reacción de la Ninhidrina Reacción de Millon Reacción Xantoprotéica Reacción de Sakaguchi CUESTIONARIO. o pida a su Instructor le indique donde puede encontrarlos.

Con excepción de Prolina.36 LECTURAS EXPERIMENTO 5 La hidrólisis completa de las proteínas da como resultado una mezcla de los 20 aminoácidos componentes de las proteínas. por lo que se considera mque todos los aminoácidos que forman parte de las proteínas en plantas y animales están en configuración L. podrán sobrellevar reacciones específicas para ese grupo particular. Por eso se dice que los aminoácidos son compuestos α-amino-α-carboxílicos. Tales reacciones . como su nombre lo indica. los dos grupos unidos al mismo carbono α de la molécula. excepto Glicina. o en mezcla racémica. o en el grupo carboxilo o en ambos. Todos los aminoácidos tienen varias reacciones en común. Se sabe que la configuración de los grupos asimétricos de los aminoácidos de plantas y animales es la misma que la del LGliceraldehido. y químicamente pueden existir en la forma D (dextro) o en la forma L (levo). poseen al menos un átomo de carbono asimétrico. Son aquellas que se llevan al cabo en el grupo amino. aquellos aminoácidos que contienen cadena lateral con un grupo reactivo. tienen un grupo funcional ácido y un grupo funcional amino. todos los aminoácidos. Además. Todos los aminoácidos.

con un máximo de absorción de 440 nanómetros. llamada también de Hofmann. debido a la formación de sales. Como esta absorción es casi una función linear de la cantidad original de los grupos amino. Los cloruros interfieren con la reacción. esta reacciónsirve para estimar cuantitativamente las aminas primarias. los aminoácidos son fácilmente solubles en agua. la Tirosina y la Cisteína tienen características contrarias. Si la solución que se prueba es alcalina. es específica para determinar Tirosina. La Cisteína es difícilmente soluble tanto en agua fría como en caliente. o sea en este caso de solubilidad en ácidos o bases diluidas. De hecho lo que se determina son los grupos hidroxifenilos que puedan nitrarse fácilmente. también sirve para determinar cuantitativamente a los aminoácidos.37 son de interés. Los aminoácidos son solubles en ácidos y bases diluidas. Esto es mucho más difícil y normalmente ya no se hace. Reacción Xantoproteica La reacción es debida a la nitración del anillo bencénico con el ácido nítrico concentrado. El color rosa rojo que se forma al reaccionar la Tirosina con el reactivo. Cuando se añade el reactivo a una solución proteica. reacciona con un mol adicional de ninhidrina oxidada y un mol de ninhidrina reducida para dar una sustancia de color azul violeta. que corresponde a la proteína coagulada por el calor. aunque aumenta su solubilidad en agua caliente. para dar productos de color amarillo. El amoniaco entonces. Por otro lado la evolución de bióxido de carbono se podría seguir manométricamente como una estimación segura de la cantidad de los aminoácidos presentes en la muestra. En el caso de los iminoácidos como la Prolina. En las . tendrá que neutralizarse primero con un poco de clorhídrico. Es una reacción general dada por aminas primarias cuyo carbón alfa posea un átomo de hidrógeno. bióxido de carbono y el correspondiente aldehido. La Tirosina. Reacción de Millon Esta reacción. La ninhidrina es un agente oxidante poderoso y lleva al cabo la deaminación oxidativa de los grupos αamino. es muy poco soluble en agua fría. y si no hay compuestos que interfieran. El reactivo es una solución de Nitrato Mercúrico con Acido Nítrico. En general. que presenta un máximo de absorción a 570 nanómetros. algo solubles o insolubles en alcohol y totalmente insolubles en eter. La Prolina es soluble en alcohol y eter. Pero. asi como la forma reducida de la ninhidrina. como siempre. se cree que se debe a un complejo Mercúrico con los derivados nitrofenol. el producto que se forma tiene color amarillo. liberando amoniaco. se forma primero un precipitado blanco. pues de lo contrario se precipitaría el mercurio del reactivo. pues es universalmente empleada para detectar cualitativa y cuantitativamente a los aminoácidos. probablemente porque el ácido nítrico forma cloro libre que destruye el compuesto colorido. Por eso las proteínas o derivados proteicos pueden dar positiva esta reacción. primero porque permiten la detección y estimación de algunos aminoácidos en particular. ese coágulo se pondrá de color rosa rojo al prolongar un poco el calentamiento. en las que forman sales de aminoácidos. la Tirosina es poco soluble y la Cisteína insoluble. que se tornan anaranjados al añadir álcali. en particular. y segundo poraue esas reacciones permiten modificar a las proteínas químicamente. Reacción de la Ninhidrina Esta reacción es de bastante importancia. Para los aminoácidos esta es la unica reacción de color. pero si la proteína contenía Tirosina. verdaderamente importante.

nitritos y cloruros en exceso impiden la reacción. Reacción del Biuret. como la gelatina. En esta sesión se practicarán las siguientes formas de precipitar a las proteínas: . y lentamente se añade una capa de sulfúrico concentrado. . La arginina libre da la prueba positiva aun a concentraciones tan bajas como de 4 microgramos por mililitro. histidina o triptófano.38 condiciones del experimento solo la Tirosina y el Triptófano darán positiva la prueba. se formará primero un precipitado blanco al añadir el nítrico concentrado. ‘Salting out’ . Los cloratos. Carga de las proteínas . De ahí que sea una indicación de la presencia de Arginina libre p de proteínas que contengan Arginina. Se desconoce la naturaleza de los productos que se forman. Las manchas amarillas que aparecen en la piel después del contacto con ácido nítrico se deben precisamente a la reacción xantoproteica del nítrico con los aminoácidos de las proteínas de la piel. . LA prueba consiste en tratar la muestra con Alfa-Naftol e hipoclorito de sodio o hipobromito de sodio. . Precipitación diferencial . se formará un anillo de color violeta en la interfase de los líquidos. y si la solución se hace alcalina. PRACTICA 6: PRECIPITACION DE PROTEÍNAS Revisión de Conceptos . Formación de sales. La fenilalanina no por que es más difícil de nitrar. para lo cual requeriría ácido sulfúrico como catalizador. nitratos. Proteínas que no contengan Triptófano. . ese precipitado se vuelve amarillo. Al calentar. El alumno debe tener claras las distintas formas que hay de precipitar a las proteínas y sus usos. Cuando se agrega el reactivo a una solución que contenga Triptófano o una proteína con triptófano. Solventes orgánicos. El aminoácido Triptófano contiene un grupo indol y por eso la reacción es específica para Triptófano. con lo cual se desarrollará un color rojo intenso. Precipitación por Salación o ‘salting out’. Reacción de Hopkins-Cole Los derivados Indol. El desarrollo del color se altera o se previene por completo por la presencia de amino. Si se prueba una solución de proteína que contenga Tirosina o Triptófano. dan productos de condensación cuando se tratan con aldehidos aromáticos en presencia de ácido sulfúrico o clorhídrico. Punto Isoeléctrico. darán negativa la prueba. Precipitación por Formación de Sales. el precipitado finalmente se torna anaranjado. . . El tirptófano puro no da la reacción a menos que contenga indicios de iones férricos o cúpricos. Precipitación por Solventes orgánicos. Reacción de Sakaguchi Es una reacción de los compuestos que contengan grupo Guanido o guanidino.

que ya está en solución al 50 % de Sulfato de Amonio. Puede filtrar directamente a una probeta para calcular la cantidad de filtrado que se obtuvo. añadiendo 50 ml. Filtre a través de papel filtro ordinario. agréguele Sulfato de Amonio sólido para llevarlo al 100 % de saturación. 10. 9 tubos de ensaye de 13 x 100 Escobetilla. Descarte la yema y vacíe la clara en un vaso de 2.39 Es responsabilidad del alumno el consultar los libros de texto para conocer los fundamentos científicos de las diversas formas de precipitar a las proteínas. de Cloruro de Sodio al 1 % 7. Filtre a través de papel filtro ordinario rápido. El precipitado contiene la ovoglobulina y el filtrado contiene la ovoalbúmina todavía en solución. 5. Deje reposar unos 10 minutos. de filtrado habrá de añadir 37. Embudo Pipeta de 5 ml. Disuelva este precipitado en un vaso de precipitados de 100 ml. (Toda solución proteica si se agita produce espuma. 8. 2 vasos de precipitados de 50 ml. Probeta de 50 o 100 ml. Rompa un huevo y separe la yema de la clara. 4 tubos de ensaye de 15 x 150 Además: Cada grupo se responsabilizará de traer un huevo y un pañuelo Limpio de tejido no muy cerrado. 4. Añada un volumen igual de una solución saturada de Sulfato de Amonio. Si la proteína es enzima se desnaturaliza): 3. Se precipita la ovoalbúmina. 9. Se mide la cantidad de filtrado y se calculan los gramos de sulfato de amonio que hay que añadir sabiendo que por cada 100 ml. Mida el volumen de filtrado obtenido y vacíelo a otro vaso de precipitados de 250 ml. Disuelva este nuevo precipitado en otro vaso de precipitados de 100 ml. precipitados de 250 ml. No agite vigorosamente pues provocaría la producción de espuma. MATERIAL NECESARIO Gradilla 10 tubos de ensaye de 13 x 100 Agitador 2 vasos de precipitados de 250 ml. Conserve estas soluciones para hacer la siguiente reacción.de Cloruro de Sodio al 1 %. Agite suavemente para que se disuelva bien el sulfato de amonio.5 gramos. Agite suavemente y deje reposar por unos 10 minutos. Agite suavemente la clara. Al filtrado. 6. Lo que acaba de hacer es la: Precipitación de la Ovoalbúmina y la Ovoglobulina por Salación . Filtre a través de gaza doble o de un pañuelo limpio de tejido no muy cerrado. así como los fundamentos de la reacción del Biuret. añadiendo 50 ml. PROCEDIMIENTO PRECIPITACIÓN POR SALACIÓN (SALTING OUT) 1. En la ‘Hoja de Datos’ deberá mencionar esos fundamentos. cosa que no es recomendable.

5. Coloque en la gradilla cuatro tubos de ensaye de 15 x 150 e identifíquelos de alguna manera. PRECIPITACIÓN POR SOLVENTES ORGÁNICOS. Anote sus resultados y observaciones en la ‘Hoja de Datos’. de Acido Clorhídrico 0.0 ml.0 ml. Pipetee 3.0 ml.1 N al tubo uno. Lo que acaba de hacer es la: Detección de Proteinas Por la reacción del BIURET. Pipetee 1. de solución de ovoalbúmina al tubo número 2 y 2.1 %. 2. del Reactivo de Biuret ya preparado a cada uno de los tres tubos.7 al tubo tres. Anote sus resultados y observaciones en la ‘Hoja de Datos’. 3. 4. Coloque en su gradilla 3 tubos de ensaye de 13 x 100 e identifíquelos de alguna manera.0 ml. Agite bien y deje reposar por unos 10 minutos. que indica la precipitación. 2. 6. 5. ya preparada. de Hidróxido de Sodio 0. de Agua Destilada al tubo número cuatro. 4. para lo cual en necesario primero hacer curva patrón con una serie de tubos de ensaye a los cuales se les pipetean cantidades crecientes de proteína.0 ml. Nota: El experimento se puede hacer cuantitativo. Lo que acaba de hacer es la Precipitación de la Ovoalbúmina con solvente orgánico a distintos pHs. Pipetee 2.0 ml. 3. Pipetee 1. Observe el color desarrollado en los tubos dos y tres que deben ser positivos para la reacción 6. Se grafican los datos en papel milimétrico. A esa gráfica se refiere cualquier problema de cantidad de proteína. de solución amortiguadora de Acetato pH 4. (Estas son las soluciones que obtuvo en la primera parte).0 ml. a los tubos uno. de agua destilada al tubo número 1.1 N al tubo dos. de solución de ovoglobulina al tubo número 3. de Albúmina de huevo al 0. Pipetee 4.0 ml. 7. se hace la reacción y se mide la densidad óptica de cada uno de los tubos a 550 nanómetros. 8.0 ml.40 REACCIÓN DEL BIURET 1. Pipetee 1. 1. . dos y tres. Pipetee 5. Observe la turbidez relativa de los tubos. 9. de Etanol al 95 % a cada uno de los cuatro tubos. Agregue 2.0 ml. Pipetee 2.

Acido Clorhídrico 0. Anote sus resultados y observaciones en la ‘Hoja de Datos’.0 ml.5 ml. Pipetee 0. Enfríar y aforar a 1 litro con Agua Destilada. usando calentamiento si es necesario. Lo que acaba de hacer es la: Precipitación de Ovoalbúmina Por formación de SALES. 3. Observe la formación de precipitado en los distintos tubos.) Pesar 600 gramos de Sulfato de Amonio Disolverlos en Agua Destilada y aforar a 800 ml.5 ml. Albúmina de Huevo al 0.) .0 ml. Añadir con constante agitación 300 ml. 7. Pipetee 0. Coloque seis tubos de ensaye de 13 x 100 en su gradilla e identifíquelos de alguna manera. de Agua Destilada. Pipetee 2.1 N (100 ml. 2. de Agua Destilada. PREPARACIÓN DE REACTIVOS Sulfato de amonio sólido. de Agua Destilada a los tubos dos. ya preparada.) Pesar 400 miligramos de Albúmina de Huevo Disolverlos en 400 ml. Cloruro de Sodio al 1 % ( 2 litros) Pesar 20 gramos de Cloruro de Sodio Disolverlos en dos litros de Agua Destilada. 8. de Hidróxido de Sodio al 10 %. 4.5 ml. 5. tres y cinco.5 gramos de Sulfato de Cobre pentahidratado y 6 gramos de Tartrato de Sodio y Potasio Disolverlos en 500 ml. (300 gramos) Solución saturada de Sulfato de Amonio (800 ml. a los tubos uno.83 ml.1 N (100 ml.41 PRECIPITACIÓN POR FORMACIÓN DE SALES 1. Pipetee 0. de Cloruro de Mercurio al 5 % a los tubos uno y dos. Reactivo de Biuret (1 litro) Pesar 1. 6.1 %. con Agua Destilada. Hidróxido de Sodio 0.) Medir 0. de Nitrato de Plata al 1 % a los tubos tres y cuatro. de Acido Clorhídirico concentrado Aforar a 100 ml. de Albúmina de huevo al 0. Pipetee 2. cuatro y seis. de Acido Tricloroacético al 10 % a los tubos cinco y seis.1 (400 ml.

) Solución A: Acido Acético 0. de Agua Destilada.) El etanol viene de fábrica a 96 o 95 % por lo que se puede usar Sin más dilusión.4 ml.42 Pesar 400 miligramos de Hidróxido de Sodio Disolverlos en 100 ml.16 ml.6 de la solución B Aforar a 100 ml.) Pesar 2.2 M Pesar 1. 1 2 3 Turbidez _____________ _____________ _____________ .5 gramos de Cloruro de Mercurio Disolverlos en 50 ml. de Acido Acético Aforar a 100 ml. Solución B: Acetato de Sodio 0. con Agua Destilada. Solución Amortiguadora de Acetato pH 4.2 N Medir 1. Cloruro de Mercurio al 5 % (50 ml. Acido Tricloroacético al 10 % (50 ml.72 de Acetato de Sodio trihidratado. con Agua Destilada. Nitrato de Plata al 5% (50 ml.) Pesar 5 gramos de Acido Tricloroacético Disolverlos en 50 ml. de Agua Destilada DATOS EXPERIMENTALES OBTENIDOS EXPERIMENTO 6 Precipitación por ‘Salting out’ Total en ml. Etanol de 95 % (400 ml.) Pesar 2.5 gramos de Nitrato de Plata Disolverlos en 50 ml. de filtrado obtenido: ________________ Cantidad de Sulfato de Amonio Sólido agregado al filtrado de la solución ________________________ Reacción del Biuret Tubo No. de la solución A y 26. Disolverlos en 100 ml.64 gramos de Acetato de Sodio anhidro O 2. 1 2 3 Color _____________ _____________ _____________ Tiempo _____________ _____________ _____________ De Ovoalbúmina: Precipitación por Solventes Orgánicos Tubo No. de Agua Destilada. de Agua destilada. Buffer: Mezclar 23. de Agua Destilada.7 (100 ml.

43 4 _____________ Precipitación por Formación de Sales Tubo No. Precipitación por Formación de Sales. Conociendo lo que es el ‘Salting out’. en general. ¿Qué proteínas precipitan al 50 % de saturación de Sulfato de Amonio. y que proteínas precipitan al 100 % de saturación? . Si es necesario consulte el libro de texto. CUESTIONARIO 1. ¿Cuál es. la solubilidad de las proteínas globulares y a qué se debe esta solubilidad? 2. ¿qué significará el procedimiento del ‘Salting in’? 3. 1 2 3 4 5 6 Precipitado _____________ _____________ _____________ _____________ _____________ _____________ FUNDAMENTO DE LOS PROCEDIMIENTOS Escriba concretamente cual es el fundamento de cada uno de los procedimientos realizados. Precipitación por Salación (Salting out) Reacción del Biuret Precipitación por Solventes Orgánicos. ¿Investigue por qué el Sulfato de Amonio es la sal más empleada en la precipitación de proteínas? 4.

pero se disuelven en soluciones neutras de sales como el cloruro de sodio. . Por lo general la solubilidad de las proteínas es variable. Podemos. sea totalmente o coloidalmente soluble. pero también solubles en soluciones salinas. Le conviene investigar qué es una Diálisis. y que por consiguiente pueden reaccionar se entre sí o con iones de cargas opuestas o con el agua. soluciones salinas.44 5. De las proteínas globulares. C) proteína-iones pequeños. y para permanecer en solución las globulinas necesitan una cierta concentración de sal. precipitando cuando el contenido de sal disminuye. B) proteína-agua. cuando están en su estado nativo. Cuando están desnaturalizadas las proteínas pierden parte de su solubilidad. El punto clave para entender la precipitación de las proteínas es que la proteína es una molécula cargada tanto positiva como negativamente. Si la interacción proteína-proteína es grande y la interacción proteína-agua es pequeña la proteína tenderá a ser insoluble. ácidos y álcalis diluidos.proteína-proteína. Cuando se dice que una proteína es Coloidalmente soluble se quiere indicar o bien que las moléculas proteicas son de tamaño tan grande que incluso dispersas en solución tienen el tamaño y superficie que caracteriza a las partículas coloidales. las albúminas son solubles en agua pura. A. por tanto. Si la situación es la contraria. La mayoría de las proteínas globulares es soluble en agua. señalar tres tipos de interacciones de una proteína en solución. o que hay alguna fuerza que las hace formar agregados de tamaño coloidal. desdoblándolas a sus correspondientes aminoácidos. Las proteínas coaguladas son insolubles en agua. cómo se lleva al cabo y para qué sirve. los que las hidrolizan. Se disuelven en los ácidos minerales y álcalis fuertes. LECTURAS EXPERIMENTO 6 La precipitación de proteínas es uno de los procedimientos más empleados en los procesos metodológicos de la bioquímica moderna De ahí que sea necesario tener claros los principios en que se basan los diversos tipos de precipitaciones. o sea que predominan las interacciones proteína-agua. Las globulinas son insolubles en agua pura..

La sal más empleada para este efecto es el Sulfato de Amonio. el fosfotungstico. El ión del metal pesado muy probablemente se combina con la forma aniónica de la proteína.proteína y aumente la proteína-agua. de ahí que este tipo de precipitación cuando se usa para purificar proteínas con actividad biológica como las enzimas. Reacción de Biuret . proteinato de plata. y así. a una solución acuosa de proteínas. Se forma entonces un precipitado reversible. etc. La mayoría de las globulinas animales se precipitan con sulfato de amonio al 50 % de saturación. pues pueden tener efecto en la precipitación.proteína o disminuya la interacción proteína-agua. cualquier cosa que aumente o favorezca la interacción proteína. electrolítos. presencia de metales pesados. tricloroacetato de proteína. favoreciendo así la precipitación. sulfato de cobre. se baja la constante dieléctrica del agua disminuyendo efectivamente la interacción proteína-agua y aumentando la interacción proteína-proteína. por ejemplo: Tannato de proteína. las proteínas se desnaturalizan. las distintas proteínas precipitarán a distintas concentraciones de sal. Se forma entonces un precipitado que podríamos llamar. precipitan la proteína al combinarse el radical ácido del reactivo.45 entonces las proteínas tienden a ser solubles. Precipitación por formación de sales Las proteínas precipitan de sus soluciones por algunas sales de metales pesados como cloruro de mercurio. existe como ion negativo. En el punto isoeléctrico de la proteína la carga neta es cero. etc. favoreciendo su precipitación y cualquier cosa que disminuya la interacción proteína. fosfotungstato de proteína. etc. Como las proteínas varían en la proporción de cargas superficiales.. ya que dentro del grupo de las globulinas se puede llegar a una separación o fraccionamiento de proteínas. Precipitación por Salación (salting out) Si disminuye la concentración efectiva del agua.. proporcionando esto un método para lo que se llama la “precipitación diferencial” de las proteínas. aumentará la solubilidad de la proteína. Precipitación isoeléctrica Una manera muy sencilla de precipitar a las proteínas es el ajustar el pH de su solución a su punto isoeléctrico. disminuirá la solubilidad de la proteína. Por consiguiente. La gran cantidad de sal estará robándole a la proteína las moléculas de agua que la solubilizan. El procedimiento en general se llama en inglés “salting out” En español se llamado de varias formas. favoreciéndose la precipitación de la proteína. que son ciertos ácidos como el pícrico. en una solución proteica añadiendo una sal muy soluble. al combinarse con el ión del metal o catión formará lo que podríamos llamar “Proteinatos”. La proteína en el lado alcalino de su punto isoeléctrico. De hecho la precipitación por salación es aun más fina. por ejemplo proteinato de mercurio. Una solución saturada de Sulfato de Amonio es aquella que tiene 75 gramos de sulfato de amonio por 100 ml. nitrato de plata. el tannico. En cambio los reactivos llamados “reactivos alcaloidales”. se tenga que hacer a bajas temperaturas. etc. favoreciéndose entonces la precipitación por ser ese el punto de menor solubilidad en el agua. Las albúminas se precipitan con soluciones de sulfato de amonio al 100 % de saturación. Esto nos da la oportunidad de separar las albúminas de las globulinas. siendo el más empleado el “salado”. el metafosfórico. En este tipo de precipitación sí hay que tener en cuenta factores como pH. con la forma catiónica de la proteína que predomina en el lado ácido de su punto isoeléctrico. Si esto sucede arriba de cero grados. son solo variar la concentración de sulfato de amonio. de agua Precipitación por Solventes Orgánicos Al añadir solventes orgánicos como Etanol o Acetona. que se disolverá tanto del lado alcalino como del lado ácido del punto isoeléctrico. se aumentará la interacción proteína-proteína.

Se puede convenientemente dividir la práctica en dos sesiones. por lo cual es propia para Proteínas y péptidos. Si no se dispone de bolsas de diálisis se puede hacer la prueba del Biuret con la proteína precipitada con Sulfato de Amonio . La precipitación por punto isoeléctrico se puede demostrar con una solución de Acetato de caseina 0. . Reacción de Bial para identificación de ácido Ribonucléico. dos de cada cadena peptídica. Separación de ácidos Deoxiribonucléicos y Ribonucléicos.46 El Biuret es un reactivo de sulfato de cobre diluido en álcali fuerte. En la ‘Hoja de Datos’ deberá mencionar esos fundamentos. Utilizando la fórmula de Henderson-Hasselbach se podrá calcular el pH de cada uno de los tubos y así determinar el punto isoeléctrico de la caseina. en la primera se hace el aislamiento de los ácidos nucléicos a partir del hígado de res. El color azul morado de la reacción positiva se debe a un complejo de coordinación entre el catión divalente de cobre y cuatro átomos de nitrógeno. Acido Ribonucléico .La cantidad de sal interfiere un poco con la aparición del color. Es un reactivo muy bueno para demostrar presencia de proteínas e incluso cuantificarlas. Doble hélice WatsonCrick El alumno debe tener clara la manera en que se forma la doble hélice de Watson-Crick. y en la segunda se separan y se identifican. La intensidad del color de la reacción es proporcional a la cantidad de proteína en la muestra.1 N. Los procedimientos que se practicarán en esta sesión de Laboratorio son los siguientes: . . . pero si se trata de una prueba cualitativa solamente no habrá problema PRACTICA 7: AISLAMIENTO E IDENTIFICACIÓN DE ACIDOS NUCLEICOS (DOS SESIONES) Revisión de Conceptos . Aislamiento de los Acidos Nucléicos a partir de hígado de res. y cuales son sus características . para la formación del color. Reacción de Dische para identificación de ácido Deoxiribonucléico. Poliribonucleótidos . Es responsabilidad del alumno consultar los libros de texto para conocer los fundamentos científicos de cada uno de los procedimientos arriba mencionados antes de hacer la práctica. . Los dipéptidos y los aminoácidos no dan positiva la reacción. Aquí se puede ver la influencia del pH en este tipo de precipitación La precipitación con metales pesados y con reactivos alcaloidales dará un precipitado más o menos grueso. de 1 a 5 miligramos. Acido Deoxiribonucléico . La prueba la dan positiva todos los componentes que tengan dos o más uniones peptídicas. Para demostrar la precipitación proteica con solventes orgánicos se utiliza el etanol. excepto treonina y serina. Esta reacción requiere relativamente grandes cantidades de proteína.

Lo grueso que queda en la fibra de vidrio se descarta. prepare un baño de agua hirviendo. Déjelo por 30 minutos. Córte el hígado con tijeras. Deje que se enfríe. cuchillo o navaja. en fragmentos lo más pequeños posible y viértalos directamente al vaso de precipitados de 600 ml. suficientemente grande. con tapón Embudo Tubo de ensaye de 15 x 150 Mechero. Conecte la licuadora y homogenice el hígado por 30 segundos. tijeras o cuchillo. de Cloruro de Sodio al 10 %. 2. Traer también con qué cortar el hígado: navaja. Probeta de 50 0 100 ml. Erlenmeyer de 250 ml. Prepare un recipiente con hielo. 4. Vierta el homogenado al Erlenmeyer de 250 ml. colocados en su Erlenmeyer de 250 ml. 5. e introduzca en él un vaso de precipitados de 100 ml. Se pueden juntar varios grupos para traer el hígado necesario para todos los grupos. 6. 8. Cuba para hielo Vaso de precipitados de 600 ml. Añada al vaso de precipitados los 40 ml. tripie y tela de asbestos y un vaso de precipitados de 600 ml. PROCEDIMIENTO AISLAMIENTO DE ACIDOS NUCLEICOS 1. 3. Viértalo todo a la licuadora. SEGUNDA PARTE Cuba para hielo 10 tubos de ensaye de 13 x 100 Vaso de precipitados de 250 ml. Pese 10 o 15 gramos de hígado de res. tripie y tela de asbestos. Tápelo sin apretar y llévelo al baño de agua hirviendo. . Además: Cada grupo se responsabilizará de traer para la primera parte unos 15 gramos de Hígado de Res. Gradilla Mechero. Vaso de precipitados de 100 ml.. Vierta el homogenado a una probeta para medir el volumen obtenido 7. tripie y tela de asbestos Escobetilla. Enfríe también ahí 40 ml. Tanto para la primera como para la segunda parte se necesita Hielo También aquí se pueden juntar varios grupos para comprarlo. que está en el baño de hielo. Así mismo con su mechero. No llene todo el vaso y use agua destilada. de Cloruro de Sodio al 10 % helado. 2 pipetas de 5 ml. Filtre la suspensión caliente a través de fibra de vidrio hacia una probeta para medir el volumen de filtrado obtenido. sumergido completamente en el hielo. Pipeta de 1 ml.47 MATERIAL NECESARIO PRIMERA PARTE.

Prepare un baño de hielo como en la parte anterior y enfríe en él. sin dejar que se vaya ningún sólido y luego filtre. y 2. Transfiera el precipitado a un tubo de ensaye de 15 x 150. Este tratamiento quita el Glucógeno que pueda haber y que interferiría con la reacción de Bial) 8. de Hidróxido de Sodio 1. Centrifugue la suspensión. prepare un baño de agua hirviendo. A esta fracción se le hará la prueba de Bial. repartiéndola si es necesario en dos tubos. 7.0 ml. Mezcle bien y deje reposar por 10 minutos. Anote sus resultados y observaciones en la ‘Hoja de Datos’. y añada 2. Añada 4 ml. primero con 10 ml. agréguele 4.0 ml. El precipitado contiene el ADN no hidrolizado. Lo que acaba de terminar es la: Separación de los Acidos Ribonucléicos y los Deoxiribonucléicos Reacción de Bial Con su mechero.0 ml. El 11. precipitado de Acidos Nucléicos queda en el filtro. Decante cuidadosamente el sobrenadante. 13. de filtrado. A esta fracción se le hará la prueba de Dische. de etanol). Del sobrenadante obtenido en el número 4 pase 2. Vuelva a centrifugar y descarte el lavado. SEGUNDA PARTE Separacion de los dos tipos de Acidos Nucléicos 1. Suspenda bien el precipitado. Deje secar el precipitado al aire. (Si la solución se vuelve turbia. Tape el tubo y déjelo reposar toda la noche o hasta la siguiente sesión de Laboratorio.5 volúmenes de Etanol de 95% (Por ejemplo si se obtuvieron 20 ml. Sin sacar el tubo de ensaye del baño de hielo.0 ml. Disuelva este precipitado en 5. a un tubo de ensaye de 13 x 100 y añádale 5.0 N. por cinco o diez minutos el tubo de ensaye donde están los ácidos nucleicos tratados con álcali.0 ml. de agua y una gota de ácido clorhídrico 6.48 9. se añadirán 50 ml. de Acido Clorhídrico 6. Cubra el tubo y mezcle por inversión. Lave el precipitado en el mismo papel filtro.0 ml. Esta es su fracción de RNA. 5. 6. Esta es su fracción de ADN.N.0 N. de Hidróxido de Sodio 1. 10. El procedimiento que acaba de terminar es el: Aislamiento de todos los Acidos Nucléicos. de la manera acostumbrada. Decante lo más posible de la solución sobrenadante. que contiene el ARN hidrolizado y consérvelo para terminar de tratarlo como se indica en el número 7. Lave ese precipitado con 3. 4. A esta fracción se le hará la prueba de Dische. Los Acidos Nucléicos se sedimentan. Pase el filtrado a un vaso de precipitados de 100 ml. de éter etílico agregándolos despacio. . de Etanol de 95 %. tripie y tela de asbestos y su vaso de precipitados de 250 ml. de Acido Tricloroacético al 5%. 2. de alcohol de 95 % y luego con 10 ml.N 3. 12. enfríela en baño de hielo por 10 minutos y vuelva a centrifugar.

2. de la ‘fracción de ADN’ al tubo número uno. de agua destilada al tubo número tres. Etanol al 95 % (2 litros) Eter Etílico (200 ml. de la ‘fracción de RNA’ al tubo número uno.0 ml. del Reactivo de Bial ya preparado a cada uno de los tres tubos. Coloque en su gradilla tres tubos de ensaye de 13 x 100 e identifíquelos de alguna manera. ya preparado.) Hidróxido de Sodio 1. Pipetee 2. del Reactivo de Dische. 5. Lo que acaba de demostrar es la: Reacción de BIAL Reacción de Dische (tambien se conoce como la reacción de la Difenilamina) 1. Mezcle el contenido de 6. Pipetee 5.0 ml. . 5. a cada uno de los tres tubos. 6. Observe el color azul violaceo que aparece en la reacción positiva. los tubos por agitación y déjelos en el baño de agua hirviendo por 10 minutos. Mezcle bien el contenido de los tubos y déjelos en el baño de agua hirviendo por 15 minutos.0 N (250 ml. Anote sus observaciones y resultados en la ‘Hoja de Datos’. de la ‘fracción de ARN’ al tubo número dos. 4.0 ml. Observe la aparición de un color verde. de la ‘fracción de DNA’ al tubo número dos.0 ml. 2. Solamente un tubo debe darla positiva. 3. Coloque en su gradilla tres tubos de ensaye de 13 x 100 e idéntifíquelos de alguna manera. Pipetee 2. que significa la reacción positiva. Anote sus resultados y observaciones en la ‘Hoja de Datos’. Disolverlos en 1 litro de Agua Destilada. 7. Pipetee 2. El único tubo que la dará es el que contiene la ‘fracción de RNA’.0 ml.0 ml. Agregue 5. 4. Pipetee 2.) Pesar 10 gramos de Hidróxido de Sodio. Pipetee 2. 3.49 1.0 ml. Lo que acaba de practicar es la: Reacción de DISCHE o de la difenilamina PREPARACIÓN DE REACTIVOS Cloruro de Sodio al 10 % (1 litro) Pesar 100 gramos de Cloruro de Sodio.

de Acido Clorhídrico concentrado.) Pesar 5 gramos de Acido Tricloroacético Aforarlos a 100 ml. de Acido Sulfúrico concentrado Si se prepara con cierto tiempo de anticipación. Disolverla en 350 ml. Aforarlos a 100 ml. de Acido Acético Glacial Agregar 9. con Agua Destilada.50 Aforarlos a 250 ml. Nota: Si la Difenilamina no está blanca hay que recristalizarla.) Medir 50 ml. calentándola y dejándola cristalizar en frío. DATOS EXPERIMENTALES OBTENIDOS EXPERIMENTO 7 Aislamiento de Ácidos Nucleicos Gramos de Hígado de Res Originales ________________ Volumen Obtenido después de la Homogenización _____________________ Volumen de filtrado después del calentamiento ___________________ Separación de Acidos Nucleicos Volumen de la ‘fracción de ARN’ _________________ Volumen de la ‘fracción de ADN’_________________ Reacción de Bial .) Pesar 8. con Agua Destilada Acido Tricloroacético al 5% (100 ml. Reactivo de Bial (350 ml. Acido Clorhídrico 6. disolviéndola en alcohol de 70 %.0 N (100 ml.75 gramos de Difenilamina. Reactivo de Dische (350 ml.) Igual que en la práctica número uno pero a doble cantidad. con Agua Destilada. se guarda en el refriGerador y se saca un par de horas antes de usarla.0 ml.

CUESTIONARIO . Si es necesario consulte su libro de texto. Aislamiento de los ácidos nucleicos Separación de los Acidos Nucleicos.51 Tubo No. Reacción de Bial Reacción de Dische. 1 2 3 Color Tiempo ___________ ___________ ___________ ___________ ___________ ___________ FUNDAMENTO DE LOS PROCEDIMIENTOS Escriba brevemente el fundamento científico de los procedimientos y reacciones aquí practicadas. 1 2 4 Color Tiempo ___________ ___________ ___________ ___________ ___________ ___________ Reacción de Dische Tubo No.

La molécula de ARN actúa en el proceso de traducción del mensaje genético a estructura proteica. es el material genético de las células. . se puede decir. Sin embargo no todas estas moléculas se encuentran en el núcleo de la célula como el nombre lo haría esperar. LECTURAS EXPERIMENTO 7 Ácidos Nucleicos es una expresión que designa a todo un conjunto de moléculas con estructura general de poliribonucleótidos y polideoxiribonucleótidos. El carbohidrato es Ribosa en vez de deoxiribosa. unidas entre sí por puentes de hidrógeno. y que en su molécula tiene codificadas a todas las características de los demás constituyentes de la célula.52 1. estructura y función particular. el ARN ribosomal (ARNr) y los ARNs de transferencia (ARNt). Es un polideoxiribonucleotido capaz de replicarse. es indispensable para la síntesis de todas las proteínas celulares. ¿Porqué los primeros pasos que se siguen para aislar ácidos nucleicos hay que hacerlos entre cero y cuatro grados de temperatura? 4. Sin embargo el término Acidos Nucléicos se sigue empleando universalmente para designar a todo este conjunto de moléculas. ¿Qué diferencia hay entre la estructura y función del DNA y la estructura y función del RNA? 2. para formar la doble hélice propuesta por Watson y Crik. y Uracilo sustituye a Timina como una de las bases pirimidínicas. Anótelas. Cada uno de estos tres tiene su composición. o pirimidínica (citosina o timina). Este proceso es muy complicado y requiere de tres distintos tipos de ácidos ribonucleicos: el ARN mensajero (ARNm). Sin embargo Uracilo también puede unirse a Adenina. Cada molécula de ADN está formada por dos cadenas sencillas complementarias. El Acido Desoxiribonucleico o ADN (DNA en inglés). del hidroxilo 3 de un monómero al hidroxilo 5 del siguiente monómero. prescindiendo de su localización particular en las células. y así. ¿Cuál de los ácidos nucleicos tiene mayor peso molecular y cual menor y por qué? 3. y en esa forma. que puede ser púrica (adenina o guanina). El acido Ribonucleico o ARN (RNA en ingles). Lo que forma la columna vertebral de cada cadena sencilla de ADN es una cadena polimérica de 2-deoxiribosas unidas entre sí por uniones fosfodiester. En la posición 1 de cada deoxiribosa hay una base nitrogenada. Así mismo la estructura de los Ribosomas y de los RNA de transferencia. que tiene el control de todos los procesos vitales. tiene dos diferencias básicas con el ADN. Le conviene tener clara y precisa la estructura molecular de la Doble Hélice del DNA con todas sus características.

Una vez extraidos se pueden precipitar con alcohol o ácido. para dar el color.0 N mientras que el ARN se hidroliza fácilmente. Todos los pasos hasta antes de la desnaturalización de las proteínas. El ARN tiene pesos moleculares menores y por lo general es de cadena sencilla. para evitar la acción de las enzimas nucleasas. b) Desnaturalización y remoción de las proteínas y c) precipitación de los ácidos nucleicos. que romperían las cadenas y evitarían el aislamiento de los ácidos nucleicos como tales. Para aislar a los Acidos Nucleicos. Reacción de Bial Esta reacción se describe en el experimento uno. debido al rompimiento de los puentes de hidrógeno que unen a las dos cadenas. fructosa que por la acción del ácido da Hidroximetilfurfural. lo cual hace que las soluciones de ARN sean mucho menos viscosas. para estar seguro de que se conocen los fundamentos de la reacción. Esto tiene como consecuencia que las soluciones de ADN sean extremadamente viscosas y que baste calentar las soluciones para que disminuya esa viscosidad. Los reactivos de Bial y Dische se pueden aplicar directamente a las soluciones de ARN y ADN. . dará positiva la reacción. La identificación se hace por reacciones de color. Reacción de Dische (Difenilamina) En esta reacción se produce un color azul debido a la presencia de la 2-deoxiribosa. El intermediario responsable del color azul es el aldehido omega-hidroxilevulínico. libres de otros componentes tisulares. porque los ácidos fuertes que se emplean en estos reactivos hidrolizan a los nucleótidos. y los azúcares liberados reaccionan con los reactivos cromogénicos.53 El ADN es de muy alto peso molecular. El ADN es estable a la acción del Hidróxido de Sodio 1. Toda sustancia que dé un compuesto aldehídico como intermediario. Los azúcares unidos a las bases en los nucleotidos NO dan positiva la reacción. La intensidad del color verde de la reacción se puede usar para mediciones cuantitativas. Esto da la posibilidad de separar a ambos cuando están en mezcla. a un máximo de absorción de 620 nanómetros. debido a la rpesenbcia del hidroxilo en el carbono dos de la ribosa. Para extraer a los ácidos nucléicos de los tejidos se puede usar las soluciones de sales neutras o los álcalis. y con fruto se puede ir nuevamente a consultar las lecturas de ese ejercicio. y es una doble hélice de estructura más o menos rígida. al que se convierte la deoxiribosa por la acción del ácido acético o sulfúrico. produce un color verde con este reactivo La La intensidad del color azul de la reacción positiva se puede usar para mediciones cuantitativas. se siguen normalmente los siguientes pasos: a) rotura de las membranas celulares por Homogenización. o con fenol. deben llevarse al cabo a cero grados centígrados. El hidroxilevulaldehido se condensa con la difenilamina para dar el color azul. El máximo de absorción es de 595 nanómetros.

La deoxiribosa reacciona ligera pero mediblemente con el reactivo de Bial. Cada grupo se responsabilizará de traer a la práctica la leche homogenizada.54 Para hacer las reacciones cuantitativas se deben tener los patrones puros para poder comparar las intensidades de color. cuáles son sus productos y sus condiciones. PRÁCTICA 8: ACCIÓN DE LA LIPASA PANCREÁTICA SOBRE LA LECHE HOMOGENIZADA Revisión de conceptos Hidrólisis de lípidos Pancreatina El alumno debe revisar cómo se lleva al cabo la hidrólisis de los lípidos. Este es un ejercicio muy sencillo con el cual se demostrará la acción enzimática de la lipasa Pancreática. en forma titrimética. mientras que para el ADN se tiene que usar un patrón de ADN purificado. Hay que tener cuidado con las reacciones cruzadas. Para ARN se puede usar como patrón a la Ribosa pura. MATERIAL NECESARIO 5 tubos de ensaye de 15 x 150 5 vasos de precipitados de 250 ml. Como cada grupo va a requerir solamente 50 ml. 1 gradilla 1 bureta para titulación. se puede poner de acuerdo todo el grupo para ver quien la trae para todo el grupo. Para preparar los estándares basta hacer soluciones de 50 a 250 microgramos por mililitro. así que el cálculo colorimétrico de ARN en presencia de ADN debe tener en cuenta la absorbancia contribuida por el ADN. PROCEDIMIENTO . En cambio la reacción de Dische para el ADN en presencia de ARN no tienen ninguna interferencia. Para hacer un análisis verdaderamente cuantitativo hay que sacar la proporción del fósforo y de las bases para obtener el verdadero porcentaje de ribosa y deoxiribosa. Se deducirá la hidrólisis de los lípidos y la existencia de los productos.

la Acción Enzimática de La Lipasa Pancreática.5 ml.50 miligramos Etanol de 70 % …………….3 litros. de KOH consumidos en la titulación _____________________________ _____________________________ _____________________________ ml. A los 10 minutos saque el tubo 2 del baño. 10.50 ml.1 % (50 ml. 7.4 (ver el ejercicio anterior) Checar el pH y ajustarlo.55 1. y agítelos 4.4 gramos Agua Destilada ……………. Hidróxido de Potasio al 0.. que ya contenga 25 ml. de KOH después de restar el testigo. A los 20 minutos saque el tubo número 3. Alcohol etílico de 95 % (1.05 N hasta un color rosa permanente. 2. Añádale 0.. 6. _____________________________ _____________________________ _____________________________ . Lleve los demás tubos a un baño de agua a 37°C anotando la hora exacta. a 7. por lo tanto para obtener los valores que va a reportar tiene que restarle a todos los tubos. 5. de Fenoftaleina y titúlelo de la misma manera que en el caso anterior.5 ml.5 litros) DATOS EXPERIMENTALES OBTENIDOS EXPERIMENTO 8 Tubo 1 2 3 ml. si es necesario. Agite bien el contenido del primer vaso de precipitados. de leche homogenizada a cada uno de los cinco tubos. de KOH consumidos en cada tubo. de Pancreatina al 1 % a cada uno de los cinco tubos.. Coloque en su gradilla 5 tubos de ensaye de 15 x 150 y numérelos de alguna manera para su identificación.. a los 30 minutos el tubo número 4 y a los 40 minutos el tubo número 5. Inmediatamente vacíe el contenido del tubo 1 a un vaso de precipitados de 250 ml.2 gramos Agua destilada……………… 200 ml. PREPARACIÓN DE REACTIVOS.) Pancreatina…………………. de fenoftaleina y titúlelo con KOH al 0. Calcule los ml.05 N (3 litros) Hidróxido de Potasio ………8. 9.4 Fenolfaleina al 0.) Fenoftaleina ……………….0 ml. Añada 10 ml. Deles el mismo tratamiento que el tubo número 1. 8. de alcohol etílico. de alcohol etílico de 95 grados. Pancreatina al 1 % (200 ml. Añádale 0. el valor obtenido en el tubo 1. Añada 3. En este ejercicio se demostró en forma titrimética. Para disolver la pancreatina hay que usar agitación suave y es preferible Disolverla en Buffer de Fosfatos p11 7. El tubo número 1 es el testigo. 3. vacíe su contenido a otro vaso de precipitados con 25 ml.

56 4 5 _____________________________ _____________________________ _____________________________ _____________________________ FUNDAMENTO DE LA REACCIÓN Fundamento de la reacción de la Lipasa Fundamento de la determinación titrimétrica CUESTIONARIO 1.1. Se cree que esto se debe a que la enzima se adsorbe a su sustracto emulsificado.) tiene el nombre técnico de Triacil Glicerol acilhidrolasa. ¿Por qué el KOH consumido en la titulación.1. y las específicas para las uniones beta. Contiene siempre diversas fracciones proteicas de muy diversas masas moleculares. Antiguamente se llamaba Esteapsina. Se extrae de diferentes fuentes biológicas. o sea triacilgliceroles de ácidos grasos de cadena larga. ro se hidrolizan rápidamente las uniones alfa y alfa prima.3. La lipasa (E. y la velocidad inicial de reacción está en función del número de moléculas de enzima adsorbidas en la interfase. mientras que los sustractos naturales de las Esterasas. Las lipasas pancreáticas existen en dos tipos: las específicas para romper la unión éster en posición alfa a prima de los triglicéridos. Es necesario trabajar con emulsiones de los sustractos. Uno de los emulsificantes más comúnmente empleados es el Alcohol Polivinílico . y luego lentamente se rompen las uniones beta.000 hasta 200. Los sustractos naturales de las lipasas son aceites o grasas. Estas esterasas hidrolizan sustractos hemulsificados y no atacan a sustractos en veraddera solución. son los ésteres de dos de bajo peso molecular. que van desde 39. se almacenan en la vesícula biliar y al momento de las comidas se vierten al intestino delgado inducidas por la hormona Colecistocinina. por medio de enzimas lipolíticas elaboradas en el Páncreas. La hidrólisis de los triacilgliceroles que consumen los animales superiores se lleva al cabo principalmente en el intestino delgado. La actividad enzimática se mide por titulación de la cantidad de ácidos grasos liberados de los ésteres. Estas reacciones se aceleran con las sales biliares como Taurocolato o glucocolato de sodio. que emulsifican y solubilizan a los lípidos.C. Se le llama Pancreatina a un extracto de pandreas con fuerte actividad lipolítica. que se sintetiza en el mismo intestino delgado. Las sales se producen en el hígado. ¿Porqué podemos usar leche homogenizada en este ejercicio? 2. Esta diferencia se basa en su especificidad preferencial selectiva. todas ellas con actividad lipolítica. Las dos clases de enzimas son sumamente específicas en cuanto a la naturaleza del ácido graso o del alcohol. La hidrólisis completa de los triacilgliceroles procede entonces por pasos. aumenta en cantidad a medida que el tiempo de incubación es mayor? LECTURAS PRÁCTICA 8 Entre las clases de enzimas que catalizan la hidrólisis de diversos ésteres hay diferencias entre las lipasas y las esterasas.000 faltones. que tienen efecto no en la especificidad sino en la velocidad de la reacción. 3.

Productos de la hidrólisis . .Método para medirlos El alumno debe recordar bien lo que es una hidrólisis enzimática. puesto que en la leche homogenizada ya están las grasas emulsificadas y vienen en glóbulos finamente divididos. MATERIAL NECESARIO.57 (PVA). Consiguientemente en este caso no habrá necesidad de una emulsificación. 5 Matraces Erlenmeyer de 250 ml. 1 Vasos de precipitados de 250 ml. Bureta con soporte y pinzas 2 Pipetas de 10 ml Gotero Agitador Mechero El alumno deberá traer una hoja de papel milimétrico para graficar los resultados.Hidrólisis enzimática de las proteínas. PRÁCTICA 9: HIDRÓLISIS ENZIMÁTICA DE PROTEINAS POR LA ACCIÓN DE LA TRIPSINA Revisión de conceptos: . El ejercicio es parecido a los anteriores pero en este caso se trata de una Proteasa. 1 Probeta de 50 o 100 ml. la tripsina. El uso de la leche liomogenizada es fácil y da excelentes resultados para mostrar la actividad de las lipasas. Oleato de sodio etc. pero se pueden usar otros emulsificantes como bentonita. PROCEDIMIENTO . Así mismo debe recordar la composición de la Gelatina. goma arábiga. En este ejercicio se demostrará la acción enzimática de una enzima que hidroliza a las proteínas.

PREPARACIÓN DE REACTIVOS Gelatina al 5 % (1 litro) Gelatina …………………………………………. 138 ml.. 5.06 M ……………1.250 ml. 1. y los últimos l0 ml. a los 40 minutos. A los 20 minutos saque otros 10 ml. 6. Tenga mucho cuidado para que el color sea igual en las cinco titulaciones. .06 M (200 ml. . (Con mucho cuidado para que no vaya a saltar la mezcla y se desperdicie. 2.2 % y agite por dos segundos. Fosfato Disódico 0.. A todas las muestras se les da el mismo tratamiento que a la muestra de cero tiempo.2 % (250 ml) Tripsina……………………………………………. Tripsina al 0.02 % hasta que aparezca un color rosa permanente. Tome inmediatamente 10 ml.5 litros. de Gelatina al 5 % (conservada en estado líquido en baño maría).. Esta gelatina se debe mantener líquida en baño de agua caliente hasta el momento de hacer la práctica. Solución Amortiguadora de fosfatos…….58 1. Agua Destilada hasta aforar a …………………….1 litro. y vacíelos aun vaso de precipitados de 250 ml. A los diez minutos de que la mezcla de reacción esté en el baño a 37°C tome otra muestra de 10 ml. 50 gramos Solución amortiguadora de fosfatos pH 7.22 gramos Agua destilada.) Fosfato Monopotásico (KH2PO4).06 M ………. de solución de formol neutralizado y 5 gotas de fenoftaleína. otros diez.06 M (1..) Enfríe con agua de la llave y añada 15 ml.5 iltros) Solución de Fosfáto disódico 0. y proceda con el mismo tratamiento que a la muestra de cero tiempo.150 ml. y llévelo a fuego directo por dos minutos.….4 ……. Checar el pH y ajustarlo si es necesario. en un erlenmeyer de 250 ml. 12 H20)……… 32. Fosfato Monopotásico 0.. Titule las cinco muestras con hidróxido de sodio al 0.2 12 ml. Esta será la muestra de cero tiempo. . Agua Destilada ……………………………………..5 litros) Fosfato Disódico (Na2HPO4. Si es necesario use pinzas de tubo de ensaye para sostener al erlenmeyer.0.……. Solución amortiguadora de fosfatos pH 7. 3. hasta aforar a …………………. Mida en su probeta 50 ml. 800 ml. Lleve INMEDIATAMENTE.63 gramos Agua destilada 200 ml. 7.5 gramos.4 (1. A los 30 minutos. Solución de Fosfato monopotásico 0.1 . En este ejercicio se aprendió a detectar en forma titrimétrica la: Hidrólisis enzimática de las Proteínas. Añada 10 ml de solución de Tripsina al 0. la mezcla a un baño maría de 37°C y anote la hora exacta 4.

..0 gramos Agua Destilada....... Hidróxido de sodio 0.. Alcohol de 70 %........100 miligramos.... 30 min.... (Se requieren aproximadamente unos 75 ml......... 10 min.. 30 min....... 100 ml..... 800 miligramos................... 20 min....... Hidróxido de sodio 0........... Agua destilada................... Fenolftaleína (100 ml.......... 40 min......100 ml.... 20 min..................25 ml............ DATOS EXPERIMENTALES OBTENIDOS Muestra a Solución de NaOH 0. 5 litros..........02 Cantidad de NaOH deducidos el tiempo 0 0 min........2 N.......02 N............. En la misma gráfica trace otra curva de tiempo contra nitrógeno de aminoácidos tomando en cuenta que 1 ml de solución de hidróxido de sodio 0..59 Formol neutralizado (1 .....1 N es equivalente a 1 ..1 ...........) Fenoftaleína..........................................2 N (100 ml).............................................. 40 min......................... _______________ _______________ _______________ _______________ _______________ ...................... ______________ ______________ ______________ ______________ ______________ _______________ _______________ _______________ _______________ _______________ En una hoja de papel milimétrico aparte trace una gráfica poniendo en las ordenadas el volumen de álcali gastado y en las abscisas el tiempo de la reacción...........5 litros Fenoftaleina …………………………………………...... Muestra a 0 min.................. 10 min...............Hasta que la mezcla adquiera un color Rojo violeta pálido permanente por 30 segundos........4 miligramos de nitrógeno amínico........4........ Nitrógeno amínico mgs........ Hidróxido de sodio............5 litros) Formaldehido Comercial (30-40%) ……………….) Hidróxido de sodio 0..... (5 litros) Hidróxido de sodio......

señalando su acción específica. por la acción de la Enterocinasa. 3.21. Es una proteasa de las más específicas.1. se consideran entre otras. que es la forma inactiva o precursor de la Tripsina misma.11.4. Estos compuestos inhiben a la tripsina de la misma manera que lo hacen con la enzima colinesterasa y acetilcolinesterasa.4.21.). En este grupo de enzimas. la Ulastasa (E. Se llaman así por tener una Serina en el sitio activo.). ¿Es la gelatina un buen alimento? Porqué si o por qué no. La queratina puede solubilizarse por reducción de sus puentes disulfhídricos. El colágeno es la proteína estructural del tejido conjuntivo. La Tripsina hidroliza péptidos. pero la inhibición por calor. ¿Cuál es el mecanismo de acción de la tripsina? 5. 6. etc. Por otro lado los compuestos organofosforados como el dietilo de paranitrofenilfosfato (DPF). la fenilacetamida. La actividad enzirnática de la tripsina se puede inhibir por ciertas a sustancias como la p-aminobenzidina.C. . la acetamida.4.).4. utilizada como sustracto en este ejercicio? 2. que cuando pierde sus seis primeros aminoácidos del término amino.21. la etilamina. así como enzimas que no son propiamente proteolíticas. 2. Si el colágeno se calienta por largo tiempo con agua. 3. la butilamina. ¿Qué es la gelatina.). El colágeno se hace entonces soluble.1. proteína de masa molecular 23. la Quimotripsina (EC.4. mientras que la queratina está en las capas de la epidermis.4.) y la Fosfatasa Alcalina (liC. 3.21. además de la Tripsina. Enumere por lo menos 5 enzimas proteolíticas. 3. la Trombina (E. la Subtilisina (E. en las uniones que involucran al grupo carboxilo de LArginina o L-Lisina. huesos y ligamentos.) forma parte de un grupo de enzimas “serina proteasas”. separándose así las cisteínas unidas que estaban unidas entre si.5.1.60 FUNDAMENTO DE LA REACCION Fundamento de la reacción de la tripsina. o desnaturalización es irreversible.3. ¿Cuál es el zimógeno de la tripsina? LECTURAS PRACTICA 9 La Tripsina (E. se convierte a Tripsina activa. serina que es esencial para la actividad de la enzima. o por otra molécula de Tripsina ya activada.000 daltons. En los animales superiores se sintetiza en Páncreas en forma de Tripsinógeno. la inhiben específica y totalmente como a todas las esterasas. ésteres.C. El Tripsinógeno es una proteína de masa molecular de 24. 3. Es el principal componente de los tendones.C. como la fosforilasa (E.1.C.21.). CUESTIONARIO 1.4. Actualmente se conoce perfectamente su secuencia de aminoácidos.C. su estructura terciaria y su mecanismo de acción. El calor también inhibe a la enzima. En la piel se encuentra en la dermis. 3. amidas. dónde se encuentra y que relación tiene con la tripsina? 4. Esta conversión parece que encierra la hidrólisis de algunas uniones peptídicas débiles. ¿Qué es un zimógeno y cuáles son los medios para activarlo? 7. 3. Fundamento de la metodología para detección de la actividad enzimática de la tripsina.14.281 daltons. etc.1. ¿Qué es la avidina. se solubiliza y se convierte en la proteína conocida como Gelatina..

o si la respiración se ve entonces interrumpida. PRACTICA 10: PRESENCIA DEL ÁCIDO CÍTRICO Y TARTÁRICO EN TEJIDOS VEGETALES OBJETIVO Identificación cualitativa del ácido cítrico y tartárico en tomate. Mientras más tiempo actúa la enzima. Pero no existe triptófano. La formación de estos geles depende del pH y de la fuerza iónica de la solución. que aporta la porción principal de! acetil CoA que se incorpora al ciclo.6 %. y ácido glutámico (11%). Estos ácidos pueden ser cuantificados al determinar su capacidad amortiguadora. La gelación se atribuye a la formación de uniones de hidrógeno entre pares de uniones peptídicas. estrechamente relacionado con el mecanismo y la regulación de la biosíntesis de hexosa en las plantas fotosintéticas se halla el fenómeno de la fotorrespiración. El contenido de arginina es de 8. Hidroxiprolina (13. se necesita tener una muestra de cero tiempos. para restar el valor inicial de cero tiempo a todos los demás valores que se obtengan de la acción de la enzima. Los ácidos orgánicos en . En las plantas superiores actúan simultáneamente el ciclo de los ácidos tricarboxilicos como el del glioxilato. Las soluciones de gelatina son muy viscosas y forman geles duros a temperatura ambiente. y es activado por la fosforilación del fosfoenzima. INTRODUCCION. Las células de las plantas verdes contienen rnitocondrias. Esta respiración “lumínica” llamada fotorrespiración desvía al poder reductor fotoinducido de la biosíntesis de la glucosa. La fotorrespiración es muy activa en plantas de zonas templadas pero se encuentra en plantas de origen tropical. Se ha demostrado que las plantas respiran realmente bajo la acción de la luz. La tripsina al romper las uniones peptídicas de la gelatina va dejando grupos carboxilo libres. Por lo tanto varios ácidos orgánicos se encuentran en los tejidos de las plantas.3 % y el de Lisina es de 3. a expensas de los sustratos producidos por la fotosíntesis durante períodos previos de iluminación. Las reacciones del ciclo de los ácidos tricarboxílicos en las plantas superiores se hallan localizadas en las mitocondrias. está el 63 % de los aminoácidos del colágeno y de la gelatina. como producto de almacenamiento de las plantas o como intermediarios de los procesos metabólicos. Sin embargo. resulta disminuida por la fosforilación del ATP dependiente del componente deshidrogenásico. al tiempo que efectúan la fotosíntesis. Como desde el principio del experimento.1 %). El formol neutralizado se añade para que se una con los grupos amino libres no cargados. La actividad del complejo deL piruvato deshidrogenasa.6 %). Surge entonces el problema de si las células de las plantas verdes respiran también cuando están iluminadas y durante su fotosíntesis.000 daltons. tales células exhiben una respiración mitocondrial y una fosforilación oxidativa en la oscuridad.61 La gelatina tiene una masa molecular promedio de 60. además de cloroplastos. el primero para proporcionar energía mediante la fosforilación oxidativa y el segundo para proporcionar succinato destinado a la formación de un nuevo glúcido procedente de las grasas. el tipo de respiración que tiene efecto a la luz no es mitocondrial. Entre glicina (26. cuando están en concentraciones de más del 2 %. hacia la reducción del oxigeno. aun sin actuar la enzima puede haber grupos carboxilo titulables. y hacer más exacta la titulación de los grupos carboxilo. La condensación del acetil CoA con el oxaloacetato para rendir citrato es el punto de control primario del ciclo de los ácidos tricarboxílicos en la mayoría de los tejidos vegetales de origen tropical. Por otro lado. más grupos 1carboxilo titulables habrá en la solución. Prolina (13 %).

Evaporar el éter en baño maría. Disolver el residuo en 15 ml de H2O. Acidificar hasta pH 1.O1N (HgO +H2S04 I.05N. . 1 5. filtrar y efectuar las siguientes reacciones utilizando el filtrado. Utilizando un embudo de separación.O) Éter Permanganato de potasio 0.01 N Resorcinol al 2% PROCEDIMIENTO • 1. descongelarlas a temperatura ambiente y exprimirlos. Durante la segunda fase de la fotosíntesis no se requiere de luz y se le conoce como fase . Peachímetro ó Potenciómetro Cuchillo Probeta de 20 ml SUSTANCIAS Reactivo de Denigé 0.05N Ac. empleando una hoja de planta verde y solución de iodo. sulfórico 0. MATERIAL Y EQUIPO Baño maría Agitador Pipeta de 5 ml Embudo de separación Determinador de pH. Prueba para ácido cítrico: Tomar 4 ml del filtrado y añadir 2 ml del reactivo de Denigé. Prueba para ácido tartárico: Tomar 3 ml del filtrado y añadir 3 gotas de resorcinol al 2% y después añadir 2 ml (H2S04 concentrado. cortarla en pequeñas fracciones.01 N. 2.62 particular pueden ser determinados mediante reacciones químicas específicas o por métodos enzimáticos. 3. -FH. 4. Quitar la cáscara a un tomate. CUESTIONARIO Haz una lista de los ácidos orgánicos que se encuentran en las plantas y su función en el metabolismo de las mismas PRÁCTICA 11: PRODUCCIÓN DE ALMIDÓN DURANTE LA FOTOSÍNTESIS OBJETIVO Demostración de la producción de almidón durante la fotosíntesis. utilizandoH2SO4 0. INTRODUCCIÓN. Hervir la solución y añadir lentamente 15 gotas de KMnO4 0. extraer tres veces con pequeñas porciones de éter.

3. 2. hasta que se haya extraído la clorofila y transferir el disco a una caja de petri que contenga solución diluida de jodo. MATERIALES Y EQUIPOS Papel aluminio Lámpara de mesa con foco de 100 W 1 Vaso de precipitado de 250 ml Perforador de corcho 2 Caja de petri 2 Pipetas de 5 ml 1 Tripié 1 Mechero Baño maría Parrilla eléctrica SUSTANCIAS Hojas verdes de tamaño grande Etanol (grado industrial) Solución de I/KI (Iodo con Ioduro de Potasio) PROCEDIMIENTO 1. la luz es indispensable para que se realice el proceso fotosintético ya que en su ausencia no ocurre la síntesis del almidón. El producto final de la fotosíntesis depende de la especie de planta que se trate. . 2. Al día siguiente descubra la hoja y usando un perforador de corcho corte discos de 1 a 2 cm de diámetro de las dos partes de la hoja. y luego extraer la clorofila con alcohol caliente sobre la parilla eléctrica. (! CUIDADO¡ Puede provocar incendio) cambiar el etanol en caso de ser necesario. Realizar con dibujos todas las observaciones indicando con color las áreas de cada una de las partes de la hoja. y se fabrican carbohidratos utilizando como fuente de energía al ATP y NADPH. Comparar la forma en que se han coloreado los discos provenientes de cada una de las dos partes de la hoja. Colocar los discos en agua caliente hasta ablandar las paredes lunares. producidas en la fase luminosa. CUESTIONARIO 1. Cubra la mitad de la hoja de la planta con papel aluminio y exponerla a la luz emitida por un foco de 100 watts a una distancia de 60 a 90 cm. aunque la mayoría de las hojas almacenan almidón. Escribir la reacción que se verifica entre la molécula de almidón y la solución de yodo.63 oscura en la cual hay fijación de CO2. durante 24 horas. 4.

Escriba la estructura química de la molécula de clorofila y explicar cuál es la función durante la fotosíntesis. 4.64 3. Escriba qué experimento realizó Calvin para llegar a proponer el ciclo de la biosíntesis de la glucosa a partir de CO2 . Escriba y explique qué ocurre durante la primera fase de la fotosíntesis y cómo repercute durante la fase obscura de la hoja empleada en su experimento. 5.