INSTRUCCIONES DE USO MEDIOS EN PLACA LISTOS PARA USAR

PA-254447.01 Rev.: Junio de 2003

BD MacConkey II Agar / Columbia CNA Agar with 5% Sheep Blood (Biplate)

USO PREVISTO
BD MacConkey II Agar / Columbia CNA Agar with 5% Sheep Blood (Biplate) (agar MacConkey II BD / agar Columbia CNA con sangre de carnero al 5% [biplaca]) se utiliza para el aislamiento selectivo de bacterias gram negativas y gram positivas a partir de muestras clnicas.

PRINCIPIOS Y EXPLICACION DEL PROCEDIMIENTO

Mtodo microbiolgico. El agar MacConkey es una de las primeras frmulas (publicadas en 1900 por MacConkey) para el aislamiento, cultivo e identificacin de Enterobacteriaceae y determinados organismos no fermentadores1,2 . Posteriormente, este medio fue modificado varias veces3,4. El agar MacConkey es slo ligeramente selectivo, dado que la concentracin de sales biliares, que inhiben los microorganismos gram positivos, es baja en comparacin con otros medios en placa entricos. Se recomienda el uso de este medio en muestras clnicas con posible flora microbiana mixta, tal como procedentes de la orina, del sistema respiratorio, de heridas y otras, porque permite la agrupacin preliminar de bacterias entricas y otras bacterias gram negativas en organismos fermentadores y no fermentadores de lactosa4-6. El agar MacConkey tambin se utiliza en el examen microbiolgico de alimentos7. La frmula del agar MacConkey II se dise para mejorar la inhibicin de la proliferacin de la especie Proteus, lograr una diferenciacin ms definitiva de los organismos fermentadores y no fermentadores de lactosa y alcanzar un crecimiento superior de las bacterias entricas. En el agar MacConkey II, las peptonas proporcionan los nutrientes. El cristal violeta inhibe las bacterias gram positivas, en especial los enterococos y estafilococos. La diferenciacin de los microorganismos entricos se logra mediante la combinacin de lactosa y el indicador de pH rojo neutro. Se producen colonias incoloras o de color de rosa a rojo segn la capacidad del aislado para fermentar los carbohidratos4. En 1966, Ellner et al describieron el desarrollo de una frmula de agar sangre que se ha designado como agar Columbia8. Este medio, que permite obtener colonias ms grandes y un crecimiento ms profuso que las bases de agar sangre comparables, se utiliza en aquellos medios que contienen sangre as como en frmulas selectivas. Ellner et al descubrieron que un medio que contiene 10 mg de colistina y 15 mg de cido nalidxico por litro en una base de agar Columbia, enriquecido con sangre de carnero al 5%, favorece el crecimiento de estafilococos, estreptococos hemolticos y enterococos, al tiempo que inhibe el crecimiento de especies de Proteus, Klebsiella y Pseudomonas8,9. El agar Columbia proporciona un medio con una base altamente nutritiva. La adicin de los agentes antimicrobianos, colistina y cido nalidxico hace que este medio sea selectivo para los microorganismos gram positivos, especialmente estreptococos y estafilococos. La sangre de carnero permite la deteccin de las reacciones hemolticas4,5,9. La combinacin de estos dos medios en una biplaca se utiliza para el aislamiento selectivo de bacterias gram negativas y gram positivas a partir de muestras clnicas.

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REACTIVOS
BD MacConkey II Agar / Columbia CNA Agar with 5% Sheep Blood (Biplate) Frmulas* por litro de agua purificada
MacConkey II Agar Digerido pancretico de gelatina Digerido pancretico de casena Digerido pptico de tejido animal Lactosa Sales biliares Cloruro sdico Rojo neutro Cristal violeta Agar pH 7,1 0,2 17,0 g 1,5 1,5 10,0 1,5 5,0 0,03 0,001 13,5 Columbia CNA Agar with 5% Sheep Blood Peptonas 20,0 g Extracto de levadura 3,5 Digerido trptico de corazn de res 3,0 Almidn de maz 1,0 Cloruro sdico 5,0 Colistina 0,01 Acido nalidxico 0,015 Agar 15,0 Sangre de carnero, desfibrinada 5% pH 7,3 0,2

*Ajustada y/o suplementada para satisfacer los criterios de rendimiento.

PRECAUCIONES
. Solamente para uso profesional. No utilizar las placas si muestran evidencia de contaminacin microbiana, decoloracin, deshidratacin, rajaduras o cualquier otro signo de deterioro. Consultar los procedimientos de manipulacin asptica, riesgos biolgicos y desecho del producto usado en el documento INSTRUCCIONES GENERALES DE USO.

ALMACENAMIENTO Y VIDA UTIL

Al recibir las placas, almacenarlas en un lugar oscuro a una temperatura de 2 8 C, en su envase original hasta momentos antes de su utilizacin. Evitar la congelacin y el sobrecalentamiento. Las placas pueden inocularse hasta la fecha de caducidad (vase la etiqueta del paquete) e incubarse durante los perodos de incubacin recomendados. Las placas de pilas abiertas de 10 unidades pueden utilizarse durante una semana cuando se almacenan en un rea limpia a una temperatura de 2 8 C.

CONTROL DE CALIDAD DEL USUARIO

Inocular muestras representativas con las cepas siguientes (para obtener los detalles, vase el documento INSTRUCCIONES GENERALES DE USO). Incubar en atmsfera aerobia durante 24 h a 35 37 C.
Cepas Escherichia coli ATCC 25922 Proteus mirabilis ATCC 12453 Salmonella Typhimurium ATCC 14028 Shigella flexneri ATCC 12022 Enterococcus faecalis ATCC 29212 Staphylococcus aureus ATCC 25923 Streptococcus pyogenes ATCC 19615 Streptococcus pneumoniae ATCC 6305 Sin inocular PA-254447.01 MacConkey II Agar Crecimiento de bueno a excelente, colonias de color rosa a rojo con precipitados biliares Crecimiento de bueno a excelente; colonias de color de beige a amarronado, inhibicin de la proliferacin Crecimiento de bueno a excelente; colonias de color beige Crecimiento de bueno a excelente; colonias de color beige Inhibicin (parcial a) completa Inhibicin completa. Sin analizar Sin analizar Rosa claro, ligeramente opalescente -2Columbia CNA Agar with 5% Sheep Blood Inhibicin completa Inhibicin de parcial a completa; inhibicin de la proliferacin Sin analizar Sin analizar Crecimiento de bueno a excelente, colonias pequeas de color gris Colonias de color de blanco a amarillento, con beta-hemlisis Colonias pequeas grisceas; beta-hemlisis Colonias pequeas de color de verde a gris; alfa-hemlisis Rojo (de color sangre)

PROCEDIMIENTO
Materiales suministrados BD MacConkey II Agar / Columbia CNA Agar with 5% Sheep Blood (biplacas Stacker de 90 mm). Controladas microbiolgicamente. Material no suministrado: Medios de cultivo auxiliar, reactivos y el equipo de laboratorio que se requiera. Tipos de muestras Los medios contenidos en esta biplaca se utilizan para el aislamiento selectivo de varias bacterias gram negativas y gram positivas a partir de todos los tipos de muestras clnicas (vase tambin CARACTERISTICAS DEL RENDIMIENTO Y LIMITACIONES DEL PROCEDIMIENTO)10. PROCEDIMIENTO DE ANALISIS Extender las muestras tan pronto como sea posible despus de recibirlas en el laboratorio. La placa de extensin se utiliza principalmente para aislar los cultivos puros de las muestras con flora mixta. Para inocular esta biplaca con muestras de torundas, primero hacer girar la torunda sobre una superficie pequea del agar Columbia CNA con sangre de cordero al 5%, para luego extenderse sobre una pequea superficie de agar MacConkey II. Con un asa nueva para cada uno de los medios, extender la muestra para aislamiento a partir de las reas inoculadas. Incubar en aire ambiente durante 24 48 h a 35 2 C. No se recomienda incubar el agar MacConkey en una atmsfera aerobia enriquecida con dixido de carbono11. Dado que existen organismos gram positivos y gram negativos que son inhibidos en ambos medios, es necesario incluir una placa de agar sangre no selectivo, por ejemplo, BD Columbia Agar with 5% Sheep Blood que se incuba durante 24 48 h a 35 2 C en una atmsfera aerobia enriquecida con dixido de carbono. Resultados Los resultados caractersticos de crecimiento en BD MacConkey II Agar / Columbia CNA Agar with 5% Sheep Blood (Biplate) son los siguientes:
Organismos E. coli Enterobacter Klebsiella Proteus Salmonella Shigella Pseudomonas Estafilococos Estreptococos Enterococos MacConkey II Agar De color de rosa a rojo rosceo (pueden estar rodeadas de una zona con precipitacin de bilis) Mucoides, de color rosa Mucoides, de color rosa Incoloras, inhibicin de la proliferacin Incoloras Incoloras Irregulares, de incoloras a color rosa Inhibicin de parcial a completa Inhibicin completa. Inhibicin de parcial a completa Columbia CNA Agar with 5% Sheep Blood Inhibicin de parcial a completa Inhibicin de parcial a completa Inhibicin de parcial a completa Inhibicin de parcial a completa; inhibicin de la proliferacin Inhibicin de parcial a completa Inhibicin de parcial a completa Inhibicin de parcial a completa Crecimiento; colonias de blancas a amarillas, de pequeas a medianas, con o sin beta-hemlisis Crecimiento; colonias de minsculas a medianas, con o sin beta o alfa-hemlisis Crecimiento; colonias de minsculas a medianas; posiblemente con bordes grisceos, por lo general no-hemolticas

Tambin pueden crecer en estos medios otras bacterias gram negativas y gram positivas, no incluidas en la lista anterior. Consultar las referencias para conocer los detalles y la interpretacin del crecimiento5,9.
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Se requieren ms pruebas bioqumicas y, si se indica, inmunolgicas con cultivos puros para lograr una identificacin completa de los aislados5,6,9.

CARACTERISTICAS DEL RENDIMIENTO Y LIMITACIONES DEL PROCEDIMIENTO

MacConkey II Agar es uno de los medios estndar utilizados para el tratamiento primario en placas de las muestras clnicas y para diversos materiales no clnicos. En este medio crecern todos los organismos de la familia Enterobacteriaceae y varios bacilos gram negativos, por ejemplo, Pseudomonas y otros gneros relacionados5-7,9. Los organismos no fermentadores y otros bacilos gram negativos sensibles a los componentes selectivos no crecen en este medio. Consultar los captulos correspondientes en las referencias antes de utilizar el medio para organismos especficos5,9,10. Se ha descrito la inhibicin de algunas Enterobacteriaceae y Pseudomonas aeruginosa en agar MacConkey cuando se incuban en una atmsfera enriquecida con CO211. Columbia CNA Agar with 5% Sheep Blood es un medio estndar para el aislamiento y cultivo de muchos microorganismos gram positivos de crecimiento aerobio, por ejemplo, estreptococos, estafilococos, corineformes, las especies de Listeria y otros5,9. En este medio pueden crecer bacterias gram negativas que exhiben resistencia a los ingredientes selectivos. Este medio no inhibe las especies de Candida y otros hongos. Aunque se trata de bacterias gram positivas, en el Columbia CNA Agar with 5% Sheep Blood se pueden inhibir los microorganismos aerbicos formadores de esporas, por ejemplo, las especies de Bacillus. Debe tenerse en cuenta que este medio posee un contenido relativamente elevado de carbohidratos y, por tanto, los estreptococos beta-hemolticos pueden producir una reaccin hemoltica verdosa que se podra tomar errneamente por una alfa hemlisis. Aunque una gran variedad de bacterias gram positivas y gram negativas crecen en uno de los medios contenidos en BD MacConkey II Agar / Columbia CNA Agar with 5% Sheep Blood (Biplate), es necesario incluir un medio no selectivo para el aislamiento primario de todos los patgenos que pueden estar presentes en una muestra10. BD Columbia Agar with 5% Sheep Blood se utiliza con frecuencia como medio en placa primario no selectivo con dicho propsito. Para el aislamiento de organismos exigentes, tales como Neisseria o Haemophilus, la muestra tambin debe inocularse en una placa de agar chocolate, por ejemplo, BD Chocolate Agar (GC II Agar with IsoVitaleX) si se prev la presencia de estos organismos. Aunque ciertas pruebas diagnsticas pueden efectuarse directamente en este medio, se requieren pruebas bioqumicas y, si as se indica, pruebas inmunolgicas con cultivos puros para lograr la identificacin completa de los aislados.

REFERENCIAS
1. MacConkey, A.T. 1900. Note on a new medium for the growth and differentiation of the Bacillus coli communis and the Bacillus typhi abdominalis. The Lancet, Part II:20. 2. MacConkey, A. 1905. Lactose-fermenting bacteria in faeces. J. Hyg. 5:333-379. 3. Levine, M., and H.W. Schoenlein. 1930. A compilation of culture media for the cultivation of microorganisms. The Williams & Wilkins Company, Baltimore. 4. MacFaddin, J.F. 1985. Media for isolation-cultivation- identification-maintenance of medical bacteria, vol. I. Williams & Wilkins, Baltimore. 5. Baron, E.J., L.R. Peterson, and S.M. Finegold. 1994. Bailey & Scott's diagnostic microbiology, 9th ed. Mosby-Year Book, Inc., St. Louis. 6. Farmer, J.J., III. 2003. Enterobacteriaceae: introduction and identification. In: Murray, P. R., E. J. Baron, J.H. Jorgensen, M. A. Pfaller, and R. H. Yolken (ed.). Manual of clinical microbiology, 8thed. American Society for Microbiology, Washington, D.C. 7. Downes, F.P., and K. Ito. 2001. Compendium of methods for the microbiological examination of foods. 4th edition. American Public Health Association (APHA). Washington, D.C. USA. 8. Ellner, P.D., C.J. Stoessel, E. Drakeford, and F. Vasi. 1966. A new culture medium for medical bacteriology. Am. J. Clin. Pathol. 45: 502-504.
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9. Murray, P. R., E. J. Baron, J.H. Jorgensen, M. A. Pfaller, and R. H. Yolken (ed.). 2003. Manual of clinical microbiology, 8th ed. American Society for Microbiology, Washington, D.C. 10. Thomson, R.B., and J.M. Miller. 2003. Specimen collection, transport, and processing: bacteriology. In: Murray, P. R., E. J. Baron, J.H. Jorgensen, M. A. Pfaller, and R. H. Yolken (ed.). Manual of clinical microbiology, 8th ed. American Society for Microbiology, Washington, D.C. 11. Mazura-Reetz, G. T. Neblett, and J. M. Galperin. 1979. MacConkey Agar: CO2 vs. ambient incubation. Abst. Ann. Mtg. American Society for Microbiology. C179.

ENVASE/DISPONIBILIDAD
BD MacConkey II Agar / BD Columbia CNA Agar with 5% Sheep Blood (Biplate) N de cat. 254447 Medios en placa listos para usar, 20 placas

INFORMACIN ADICIONAL
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