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UNIVERSIDADE FEDERAL DE SO JOO DEL-REI CURSO DE FARMCIA DISCIPLINA: FITOQUMICA Cromatografia gasosa Professora: Luciana Alves R.

dos Santos Lima

Introduo A cromatografia gasosa (CG) um mtodo fsico de separao dos componentes de uma mistura atravs da fase gasosa mvel sobre um sorvente estacionrio. A cromatografia gasosa em seu incio foi dividida em duas categorias principais: Cromatografia gs-lquido: ocorre a partio de uma amostra entre uma fase gasosa mvel e uma camada delgada de lquido no voltil que recobre um suporte inerte. Cromatografia gs-slido: emprega um slido com grande rea superficial como fase estacionria. Maioria das aplicaes atuais (CG).

Introduo medida que aumenta o carter inico do composto e, portanto, diminui a sua volatilidade, tambm reduzida a possibilidade de separao via cromatografia gasosa. A CG utilizada para a separao de amostras volatilizveis, isto , os analitos a serem separados devem apresentar uma razovel presso de vapor temperatura de separao. Introduo medida que aumenta o carter inico do composto e, portanto, diminui a sua volatilidade, tambm reduzida a possibilidade de separao via cromatografia gasosa. A CG utilizada para a separao de amostras volatilizveis, isto , os analitos a serem separados devem apresentar uma razovel presso de vapor temperatura de separao. Compostos polares e no polares com pouca volatilidade podem ser separados por cromatografia lquida.

Cromatografia gasosa e cromatografia gasosa de alta resoluo A CG reinou absoluta at o incio da dcada de 80, tendo sido substituda quase integralmente pela cromatografia gasosa de alta resoluo (CGAR). Essa modalidade de cromatografia se diferencia da CG por apresentar picos muito mais finos, aumentando enormemente a resoluo. A CGAR s pode ocorrer em colunas capilares de alta resoluo. Colunas capilares convencionais e colunas de slica fundida de maior dimetro s apresentam resoluo medocre.

Cromatografia gasosa e cromatografia gasosa de alta resoluo Caractersticas Parmetros tpicos Conseqncia relativa Recheada Tubular aberta Recheada Tubular aberta Comprimento (L) 1,5-6 5-50 Menor N Maior resoluo Dimetro, dc, int (mm) 2-4 0,2-0,7 Maior fluxo de gs Menor alargamento de banda Vazo gs (mL/min) 10-60 0,5-15 Vazo elevada Limpeza do injetor devido a vazo baixa Perda de carga (psi) 10-40 3-40 Grande, limitando na prtica o L Bem menor para colunas tpicas Quantidade de analito 10 g/pico 50 ng/pico -Injeo crtica Quantidade de amostra (L) 0,1-10 0,1-3 Maior volume e concentrao Menor volume e mais diluda Quantidade relativa de fase lquida Espessura do filme, df, (m) 100-1000 1-10 1 0,05-1,0 Menor sensibilidade a contaminantes Processos de alterao de fase lquida so importantes Gs de arraste N2, He H2, He Maior tempo de anlise Perigo de incndio e exploso Razo sinal/rudo 1 100 Menor preciso quantitativa Maior sensibilidade e reprodutibilidade Gama de possibilidades --Maior seleo de fases buscando melhor resoluo Menor seleo de fases, sem prejuzo para a RS

Cromatografia gasosa e cromatografia gasosa de alta resoluo Um conhecimento mais aprofundado do comportamento da CGAR permite otimizar anlises de modo a obter uma resoluo adequada no menor tempo possvel. O uso das variveis apresentadas garante uma separao razovel para a maioria das aplicaes. Varivel Valores tpicos T L dc df u Vazo Gs de arraste Volume injetado Programada, isoterma inicial para injeo de amostra, gradiente de temperatura de 1-10 C, isoterma final. 10-25 m 0,2-0,3 mm 0,15-0,3 m 50 cm/s 1-2 mL/min H2 (He) 1 L

Aparelhagem para CG Os componentes essenciais da cromatografia gasosa so mostrados a seguir: Esquema de um cromatgrafo gasoso

Aparelhagem para CG Em linhas gerais, o gs de arraste ao entrar no cromatgrafo passa pelo injetor, que deve estar aquecido de modo a promover a rpida vaporizao da amostra e, chega coluna arrastando consigo o aerossol da amostra. Depois de separados na coluna, os componentes atravessam o detector e o sinal , ento, enviado e registrado na forma de um cromatograma.

Aparelhagem para CG a) Gs de arraste: O gs de arraste usado o hlio, o nitrognio, o hidrognio e o argnio. A escolha do gs depende de fatores tais como: disponibilidade, pureza exigida, consumo e tipo de detector empregado.

Aparelhagem para CG a) Gs de arraste: O hlio (ou o hidrognio) o preferido quando se usam detectores por condutividade trmica. Em CG emprega-se mais comumente o nitrognio (e a um custo mais elevado o hlio). Em CGAR, o hidrognio ou hlio (mais caro).

Aparelhagem para CG a) Gs de arraste: Associados a esta fonte de gs de arraste esto os reguladores de presso e os medidores de vazo que permitem controlar e monitorar o escoamento do gs de arraste.

Aparelhagem para CG b) Sistema de injeo de amostra: O dispositivo comumente empregado para amostras lquidas a micro-seringa com agulha hipodrmica. Na CGAR, a introduo da amostra crucial para garantir a alta resoluo. Como o processo cromatogrfico s tende a alargar os picos, quanto menor a largura inicial, melhor ser a resoluo final.

Aparelhagem para CG b) Sistema de injeo de amostra: Tcnicas de injeo com seringa Operao da seringa -agulha fria -agulha aquecida -lavagem com solvente -expulso com ar -agulha cheia

Aparelhagem para CG b) Sistema de injeo de amostra: Tcnicas de injeo com seringa Operao do injetor -Vaporizao com diviso de fluxo -Vaporizao sem diviso de fluxo -Introduo direta -Vaporizao com temperatura programvel -Na coluna -A frio na coluna -Com esfriamento na coluna instantnea progressiva

Aparelhagem para CG b) Sistema de injeo de amostra: A injeo com diviso de fluxo a mais recomendada, pois garante uma banda inicial de amostra estreita e uma quantidade de amostra compatvel com as colunas capilares. Sua deficincia est na baixa sensibilidade resultante do descarte da maior parte da amostra.

Aparelhagem para CG b) Sistema de injeo de amostra: A injeo sem diviso de fluxo aumenta a sensibilidade, mas para manter elevada resoluo necessita de cuidados especiais durante e logo aps a transferncia da amostra da cmara de vaporizao para o interior da coluna.

Aparelhagem para CG b) Sistema de injeo de amostra: A injeo na coluna a frio precisa de cuidados similares injeo sem diviso de fluxo, mas garante que no haja discriminao de componentes de alto ponto de ebulio ou termosensveis. A amostra integralmente transferida em fase lquida para o interior do capilar.

Aparelhagem para CG b) Sistema de injeo de amostra: As injees com ou sem diviso de fluxo envolvem a transferncia da soluo da amostra para uma cmara de vaporizao aquecida. A agulha aquecida rapidamente de forma que a amostra ao ser injetada vaporiza, embora parcialmente, no seu interior.

Aparelhagem para CG b) Sistema de injeo de amostra: Desvantagens: Compostos de menor presso de vapor podem ficar depositados no interior da agulha, sendo removidos do sistema. Na cmara de vaporizao, os compostos menos volteis tambm podem se depositar e os mais reativos podem se degradar pelo contato com as paredes do liner ou com o recheio.

Aparelhagem para CG c) Coluna: A separao efetiva dos componentes da amostra efetuada na coluna cromatogrfica, onde so fatores importantes para se ter uma resoluo desejada: Natureza do tubo, do suporte slido, o tipo e a quantidade da fase slida. O mtodo de recheio, o comprimento e a temperatura.

Aparelhagem para CG c) Coluna:

As colunas podem ser divididas em dois grupos principais: Colunas recheadas Colunas tubulares abertas O material dos tubos geralmente cobre, ao inox, alumnio e vidro.

Aparelhagem para CG c) Coluna: O material usado como suporte deve ter granulometria uniforme, boas caractersticas operacionais (resistncia suficiente para no quebrar durante a operao) e ser capaz de constituir um leito uniforme na coluna.

c) Coluna: A rea especfica do material deve ser elevada a fim de promover a distribuio pelicular da fase lquida e assegurar o rpido equilbrio entre as fases estacionria e mvel. Aparelhagem para CG c) Coluna: A rea especfica do material deve ser elevada a fim de promover a distribuio pelicular da fase lquida e assegurar o rpido equilbrio entre as fases estacionria e mvel. Aparelhagem para CG Os suportes mais empregados so feitos de diatomceas.

Aparelhagem para CG c) Coluna: Diversos polmeros porosos foram desenvolvidos como recheios, por exemplo, copolmeros de estireno modificados por diferentes monmeros. Vrios outros polmeros, com destaque os polietilenoglicis e as polisiloxanas, tem sido empregados como fase estacionria.

Aparelhagem para CG c) Coluna: Constituio genrica Polaridade Limites de T (C) Hidrocarboneto Copolmero de estireno e divinilbenzeno Apolar Apolar 20 a 200 Polisiloxanas substitudas Apolar, intermediria apolar -20 a 350 Polimetafenilter Polar 20 a 400 Polietileno-propilenoglicol ca. 10/90 Polar -20 a 200 Polietileno-propilenoglicol ca. 40/60 Polar 0 a 220 Polietilenoglicol octadecilter Polar 0 a 240 Polietilenoglicol Mr 200-40000 Polar 0 a 250 Polietilenoglicol Mr 40000000 Polar 140 a 300

Aparelhagem para CG As colunas tubulares abertas so adotadas devido ao poder superior de resoluo de misturas complexas. Esse poder conseqncia do grande nmero de pratos tericos que pode ser atingido em colunas longas deste tipo, com uma queda de presso relativamente pequena. c) Coluna:

Aparelhagem para CG Colunas capilares para CGAR: Capilares de vidro ou slica fundida Dimetro interno menor que 0,3 mm df menor que 0,5 mm e desativados com agentes silanizantes e ou similares, que permitem a compatibilizao do filme da fase estacionria com esta superfcie c) Coluna:

Aparelhagem para CG d) Forno de colunas: A coluna fica dentro de um forno com controle termosttico, de modo que a sua temperatura reprodutvel. Nos cromatgrafos modernos esta reprodutibilidade de 0,01 C. A temperatura de operao pode ir da ambiente at 450 C.

Aparelhagem para CG d) Forno de colunas: Na operao isotrmica, a temperatura se mantm constante durante todo o processo. muito comum o uso da programao da temperatura, quando a temperatura variada a uma taxa constante. Nos cromatgrafos modernos, possvel estabelecer vrias rampas de temperatura em uma mesma anlise.

Aparelhagem para CG e) Detectores: Situado na sada da coluna de separao, sua funo a de medir as pequenas quantidades dos componentes separados, presentes na corrente do gs de arraste que elui da coluna. O sinal de sada do detector enviado a um registrador ou sistema de dados tais como, integrador ou computador, que finalmente traa o cromatograma.

Aparelhagem para CG e) Detectores: O tipo de detector depende de fatores tais como a natureza dos componentes separados e o nvel de concentrao a ser medido. Os detectores so de fato transdutores, isto , transformam as molculas que chegam cmara de deteco, em sinal eltrico.

Aparelhagem para CG e) Detectores: Os detectores mais usados na cromatografia gasosa so: por condutividade trmica, por ionizao de chama, por captura de eltrons, detector de nitrognio e fsforo e espectrmetro de massas.

Aparelhagem para CG e) Detectores: Detector por condutividade trmica: universal, no destrutivo e sensvel concentrao. Deteco de gases permanentes, hidrocarbonetos leves e compostos que no respondem bem ao detector por ionizao de chama.

Aparelhagem para CG e) Detectores: Detector por ionizao em chama: o efluente da coluna, misturado com o hidrognio e queimado ao ar, produzem uma chama (2100 C) que tem energia suficiente para ionizar as molculas do soluto que tenham potenciais de ionizao baixos, formando um plasma.

Aparelhagem para CG e) Detectores: Possui grande aplicabilidade, sendo um detector quase universal na cromatografia gasosa de compostos orgnicos. A elevada sensibilidade, a alta estabilidade, resposta rpida, dentre outros, faz com que seja o detector mais popular de uso corrente.

Aparelhagem para CG e) Detectores:

Detector por captura de eltrons: baseia-se na captura de eltrons pelos compostos que tm afinidade por eltrons livres, o detector mede a diminuio da corrente eltrica resultante do processo de deteco. usado na anlise de traos de pesticidas e drogas. A limpeza essencial e os gases de arraste devem ser muito puros e secos.

Aparelhagem para CG e) Detectores:

Espectrmetro de massas: bem mais caro, mas est se tornando o mais popular devido sua eficincia na anlise de misturas complexas. Alm de fornecer o espectro de massas das substncias, tambm permite gerar fragmentos. Isso permite a resoluo das substncias que coeluem e apresentam fragmentos diferentes, o que aumenta muito o poder de separao da cromatografia.

Aplicaes de CG Identificao e quantificao dos componentes de biodiesel:

Aplicaes de CG Identificao e quantificao dos Comparao dos tempos de reteno com aqueles dos steres metlicos 0,165 16,915 5,561 51,460 19,121 0,807 5,656 7,527 9,393 9,636 10,024 10,567 5,693 7,505 9,360 9,572 10,022 10,621 C14 (0) C16 (0) C18 (0) C18 (1) C18 (2) C18 (3) %trtrConstituintes ACS-1 Padro Aplicaes de CG Identificao e quantificao dos Comparao dos tempos de reteno com aqueles dos steres metlicos 0,165 16,915 5,561 51,460 19,121 0,807 5,656 7,527 9,393 9,636 10,024 10,567 5,693 7,505 9,360 9,572 10,022 10,621 C14 (0) C16 (0) C18 (0) C18 (1) C18 (2) C18 (3) %trtrConstituintes

componentes de biodiesel: dos constituintes de ACS-1 presentes no padro.

componentes de biodiesel: dos constituintes de ACS-1 presentes no padro.

ACS-1 Padro

Aplicaes de CG Identificao e quantificao dos componentes de biodiesel: OO CH3(CH2)12 (CH2)7 OCH3 OCH3 CH3(CH2)7 Miristato de metila C14(0) Oleato de metila C18(1) OO (CH2)7 OCH3 OCH3 CH3(CH2)4 CH3(CH2)14 Palmitato de metila C16(0) Linolato de metila C18(2) OO CH3(CH2)16 (CH2)7 OCH3 OCH3 CH3CH2 Estearato de metila C18(0) Linolenato de metila C18(3)

Aplicaes de CG Aplicaes tpicas do CGAR de alta temperatura

Referncias AQUINO NETO, F. R. & NUNES, D. S. S. Cromatografia: princpios bsicos e tcnicas afins. Rio de Janeiro: Editora Intercincia, 2003. Alberto dos Santos Pereira e Francisco Radler de Aquino Neto. ESTADO DA ARTE DA CROMATOGRAFIA GASOSA DE ALTA RESOLUO E ALTA TEMPERATURA. QUMICA NOVA, 23 (3), 370-379, 2000.