Conocimientos bsicos para la tincin de citologa cervico-vaginal

Manual de tincin
Cit. Claudia Elizabeth Mares Alatorre Septiembre del 2008

Anlisis del procedimiento de tincin para la citologa cervico-vaginal, en una visin global.

Conocimientos bsicos para la tincin de citologa cervico-vaginal Septiembre del 2008

Introduccin.

Este es un trabajo de investigacin especialmente elaborado a peticin de la Dra. Ana Mara Gallardo Muiz. Directora del Laboratorio Regional de Citologa Exfoliativa del IMSS seccin Jalisco. Esperando sirva de apoyo en la tcnica del procedimiento de tincin de citologas cervico-vaginales.

Conocimientos bsicos para la tincin de citologa cervico-vaginal Septiembre del 2008 Polticas de operacin, normas y lineamientos. La Norma Oficial Mexicana NOM 014 SSA2-1994, para la prevencin, deteccin, diagnstico, tratamiento y vigilancia epidemiolgica (modificada 2006), es un documento tcnico de observancia obligatoria para todas las unidades de los sectores pblico, social y privado en el mbito nacional, y las actividades y tareas en el laboratorio de citologa encuentran su sustento bsicamente en ella. La vigilancia para la aplicacin de los lineamientos respecto a la tincin y montaje en los laboratorios de citologa crvico-uterina corresponde a la Secretaria de Salud tanto del nivel federal, como estatal, en sus respectivos mbitos de competencia. El director o coordinador del laboratorio deber verificar que el personal encargado de la tincin y montaje de las muestras citolgicas realice las actividades correspondientes. El incumplimiento de estas polticas y normas se sancionar conforme a la Ley Federal de Responsabilidades de los Servicios Pblicos. Propsito. Realizar un proceso de calidad, el tcnico en tincin o el citotecnlogo capacitado para la tincin y montaje de las muestras citolgicas. Campo de aplicacin. La coloracin descrita se aplica a las laminillas portadoras de muestras de frotis crvico vaginal para realizar el diagnstico citolgico. Requisitos para una tincin de calidad. El procesamiento manual de las muestras de frotis cervical fijado comprende los siguientes sub-pasos: Reparacin ocasional de las lminas quebradas aceptadas. Preparacin y manejo de la batera de tincin. Tincin de las muestras. Montaje de las muestras. Distribucin de las lminas en las bandejas. La tcnica ser exitosa si: Todas las lminas aceptadas son procesadas en el tiempo establecido y se mantiene su integridad (no se quiebran) e identificacin durante el procesamiento. Todas las lminas estn teidas en forma apropiada lo que significa: I. Una buena definicin del detalle nuclear. II. Una transparencia del citoplasma. III. Una diferenciacin celular. Todas las lminas estn montadas adecuadamente, lo que significa que el frotis est protegido de la sequedad del aire, encogimiento y de desteirse por la oxidacin y, adems, proporciona una imagen transparente en el microscopio. 3

Conocimientos bsicos para la tincin de citologa cervico-vaginal Septiembre del 2008 Las bandejas para los citotecnlogos estn preparadas correctamente lo que significa que contienen el nmero de lminas que corresponde, estn libres entre s (no pegadas), y colocadas en el orden correlativo del nmero de registro citolgico. Los insumos involucrados en el procesamiento de las muestras se usan eficientemente. El personal se mantiene libre de problemas de salud asociada al trabajo en la sala de procesamiento de muestras.

rea de tincin. Caractersticas: Fsicamente separada de otros espacios. Con una excelente ventilacin hacia el exterior, ya que debido a los contaminantes qumicos, es un rea de alto riesgo. Sealizadas las medidas a tomar en caso de siniestro. Con regadera anti-incendios y extintores. Campana de extraccin de gases tanto para la tincin, como para el montaje. Se recomienda que los insumos sean de buena calidad. Contar con un rea de bodega protegida de incendios para los reactivos y tinciones inflamables. La sala debe contar con un sector de lavado, equipado con lavadero. Los recursos de una sala de procesamiento manual se clasifica en: a. Mobiliario. b. Equipos. c. Insumos.

Mobiliario y equipos del rea de procesamiento de muestras. Mobiliario. Lavatorio dotado de llaves de agua potable con filtro de agua, en lo posible de acero inoxidable. Mesn de acero inoxidable de 190 x 70 x 90 cm. donde esta montado el lavatorio. Mesas altas de laboratorio de 190 x 70 x 90 cm. en lo posible, de acero inoxidable. Estantes con vidriera para insumos. Sillas. Equipos e insumos. Campana de extraccin de gases. Horno de secado de lminas (opcional). Mechero de Bunsen. Cronmetro. Cubetas de tincin de 1000 ml. con tapa. Gradilla de tincin para laminillas. 4

Conocimientos bsicos para la tincin de citologa cervico-vaginal Septiembre del 2008 Bandejas para lectura de laminillas con capacidad para 60 y de 10 laminillas por corrida cmodas. Probetas graduadas de 1000, 500, 100 y 10 ml de vidrio. Frascos de Erlenmeyer de Pyrex de 1000 y 2000 ml. Vasos de precipitado de Pyrex de 10, 100 y 1000 ml. Embudo de plstico. Pipetas graduadas de 10 ml. Garrafn de agua destilada. Papel filtro Whatman no. 4 Frascos de vidrio color oscuro para almacenamiento 1000 ml. Gasa para montar y limpiar laminillas. Balanza. Pinza pequea. Lpiz con punta de diamante. Lminas portaobjetos de vidrio de 75 x 25 x 0.6 a 1.2 mm. Laminas cubreobjetos de vidrio de 50 x 24 x 0.25 mm. Guantes desechables Insumos. (Colorantes y reactivos.) Hematoxilina de Harris. Colorante OG 6 Colorante EA 50 Acido clorhdrico fumante. Etanol 96% Etanol 100% CH3CH2OH Xilol. C6H4(CH3)2 Medio de montaje. (resina sinttica para extendidos, blsamo de Canad o liquido para montaje). Otros (carbonato de litio, hidrxido de amonio, cido Fosfotngsticico o reactivos para hacer colorantes)

Campana de extraccin de gases. La campana de extraccin de gases generalmente tiene una velocidad de 100 pies por minuto. Se usa para los gases y vapores riesgosos generados al interior del espacio de la campana sean capturados antes de entrar a la zona de respiracin del operador. Sirve para reducir la exposicin a contaminantes areos. Tanto la batera de tincin como el montaje de lminas requieren campana de extraccin de gases. Cubetas de tincin. Las cubetas de tincin grandes permiten disminuir significativamente el tiempo de tincin. Se recomienda utilizar cubetas de vidrio o de buen acero inoxidable diseadas especialmente para tincin citolgica o histopatolgica. Al contar con tapas hermticas disminuye considerablemente la evaporacin de los colorantes y alcoholes. Material de laboratorio.

Conocimientos bsicos para la tincin de citologa cervico-vaginal Septiembre del 2008 La cantidad de material de laboratorio como probetas, embudos, mecheros, etc., varan segn si se compran colorantes listos para usarse o se compran los ingredientes para prepararlos. Portaobjetos y cubreobjetos. Conviene comprar material de vidrio de buena calidad. Insumos. En cuanto a insumos, los Laboratorios de Citologa tienen distintas modalidades de adquisicin de los insumos para el procesamiento de las muestras y de dicha modalidad dependern los insumos especficos requeridos. Las cantidades necesarias de insumos son afectadas por el rendimiento de la batera de tincin.

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Principio y ventaja del mtodo de tincin de Papanicolaou. La tincin de Papanicolaou es un mtodo de tincin poli crmico que consta de una tincin nuclear y un contraste citoplasmtico. Tiene como ventaja: a. Una buena definicin del detalle nuclear, evidenciando el patrn de cromatina de las clulas. b. Un aspecto transparente de los citoplasmas y una diferenciacin celular, que permite apreciar grados de maduracin celular y actividad metablica. Es un mtodo basado en la diferenciacin de color de los diversos componentes celulares, se aplica a los diversos tipos celulares para el diagnstico de cambios malignos y la tipificacin celular. La tincin de Papanicolaou tiene cuatros pasos principales: Fijacin (realizada al momento de tomar la muestra). Tincin del ncleo con la hematoxilina. Tincin del citoplasma con Orange G y EA. Aclaramiento. La tincin de Papanicolaou usa tres colorantes: Hematoxilina. OG 6 EA 50 Los pasos de la tincin estn entremezclados con soluciones que hidratan, deshidratan y enjuagan las clulas. Coloracin bsica Hematoxilina de Harris Coloracin cida. Eosina. Orange G.

Tincin. Es importante sealar que ste es un procedimiento que tiene variaciones e incluso preferencias personales en la coloracin.

Enjuague. El enjuague se realiza con agua corriente y/o agua destilada, pero siempre hay que verificar que el pH del agua se encuentre entre 6.5 y 7. Hidratacin. La hidratacin antes del colorante de hematoxilina puede ser: Gradual usando alcohol en concentraciones decrecientes 80-70-50 % Abrupta, sumergiendo el material celular desde altas concentraciones de alcohol y al agua directamente. 7

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Tincin Existen

del ncleo. dos mtodos para teir el ncleo: Mtodo progresivo. Se tie el ncleo con la intensidad de color deseada. Mtodo regresivo. Se sobre-tie con hematoxilina no acidificada, luego se remueve el exceso de tincin con cido clorhdrico diluido. Despus de la hematoxilina, las laminillas se lavan en agua.

Tincin del citoplasma. Orange G 6, es una tincin monocromtica y compuesta. Colorante. Hematoxilina de Harris. OG 6 EA 50

EA 50, es una tincin

policroma

Elementos celulares. Afinidad por la cromatina. Tie el ncleo. Tie la queratina. Penetra rpidamente al citoplasma. Tie el citoplasma de las clulas escamosas cianoflas y eosinoflas. Nuclolos y cilios.

Aclaramiento. Es el paso final de la tincin y produce transparencia celular. Se suele usar Xilol como solucin aclaradora. Montaje. Objetivo del montaje. Es la unin del portaobjetos mediante un medio de montaje que cubre el rea bajo el cubreobjetos para: Obtener una muestra cubierta. Proteger la muestra contra el secado y arrugamiento del material celular. Sellar, evitando as la oxidacin de la muestra. Caractersticas del medio de montaje. 1. Debe ser soluble en el agente aclarante. 2. Debe tener un ndice de refraccin que coincida con la muestra y el cubreobjetos, logrando una imagen lo ms transparente posible. 3. Debe tener un pH neutro.

Conocimientos bsicos para la tincin de citologa cervico-vaginal Septiembre del 2008 Preparacin de soluciones. Fundamentos. Las soluciones son mezclas homogneas de dos o mas sustancias. Una solucin es una mezcla de un soluto en un disolvente, entendindose por soluto la sustancia que esta en menor proporcin y disolvente la sustancia que esta en mayor proporcin. Existen soluciones solidas, liquidas y gaseosas. Tipos de soluciones: Para conocer la cantidad de soluto que hay en un volumen dado de solucin es necesario conocer la concentracin de nuestra solucin: las cantidades relativas de soluto y disolvente. Si el soluto se encuentra en exceso con respecto a la cantidad de disolucin del disolvente se tendr una solucin saturada. Una solucin saturada permite definir con precisin la solubilidad de un slido en un liquido. La solubilidad es la capacidad de una determinada sustancia para disolverse en un liquido. Puede expresarse en: moles por litro. Gramos por litro. Porcentaje de soluto/disolvente. Cuando se mezclan un soluto y un disolvente se libera energa porque las partculas del soluto y del disolvente se atraen. Soluciones empricas: Son aquellas en las que las cantidades de soluto o de solvente se conocen en forma relativa pero no exacta. Estas soluciones se utilizan principalmente en anlisis cualitativo y dentro de estas se encuentran: Solucin diluida: Formada por una mnima cantidad de soluto en relacin de la cantidad de disolvente. Ejemplo: solucin de HCL al 5% Solucin saturada: Es la que a la temperatura ambiente del disolvente disuelve el mximo del soluto posible. Ejemplo: solucin saturada de Li2CO3 (carbonato de litio). Solucin sobresaturada: Es aquella que contiene mas soluto del indicado por la concentracin de equilibrio. Ejemplo: cuando en la solucin saturada de Li2CO3, al prepararse se agrega una cantidad mayor de carbonato de litio de la requerida.

Conocimientos bsicos para la tincin de citologa cervico-vaginal Septiembre del 2008 Macroscpicamente observamos una solucin mas blanquecina y en el fondo del recipiente se observan grnulos de Li2CO3 que no se disolvieron por la sobre-saturacin. Para preparar este tipo de solucin se debe disolver el soluto a una temperatura mayor que la temperatura de equilibrio. Soluciones de concentracin conocida. Son aquellas en las que se conoce el contenido del soluto respecto a la cantidad del disolvente o de solucin. Este tipo de soluciones se utilizan en anlisis cuantitativo y dentro de estas se encuentran: Solucin porcentual. % Solucin formal. F Solucin molar. M Solucin normal. N Partes por milln. ppm Fraccin mol. Solucin titulo. X T

SOLUCIN PORCENTUAL. El porcentaje normalmente se utiliza para especificar la concentracin de la solucin preparada al diluir un liquido puro en otro liquido. Por ejemplo, una solucin acuosa de metanol al 5% indica que dicha solucin se preparo al diluir 5 ml de metanol puro con agua hasta 100ml de solucin

Preparacin de colorantes La preparacin de los colorantes en el Laboratorio permite disminuir los costos de la batera de tincin. Preparacin de los colorantes para la citologa cervino-uterina adaptada de Koss. Hematoxilina de Harris. Reactivos para preparar 1000 ml de hematoxilina de Harris. Hematoxilina cristales obscuros 5g Etanol 100% CH3CH2OH 50 ml Sulfato de amonio y aluminio 100 g Agua destilada 1000 ml Oxido de mercurio (HgO) 2.5 g Procedimiento para prepara hematoxilina. a. Disolver cristales de hematoxilina en etanol. b. Disolver el sulfato de amonio y aluminio en agua destilada por calentamiento. c. Aadir la solucin de hematoxilina a la solucin de sulfato. d. Hacer que la mezcla anterior alcance la temperatura de 95C. 10

Conocimientos bsicos para la tincin de citologa cervico-vaginal Septiembre del 2008 e. Retirar de la llama, aadir lentamente y agitando el xido de mercurio hasta que la solucin tome un color prpura oscuro. f. Introducir inmediatamente la solucin en un bao de agua fra. g. Filtrar la solucin cuando est fra. h. Guardar la solucin en frascos de color marrn oscuro y dejar en reposo durante 48 hrs. i. Para el uso: diluir la cantidad requerida con un volumen igual de agua destilada y filtrar de nuevo. Esta preparacin tiene una duracin de meses a aos. Orange G 6 Existen al menos dos frmulas para la tincin Orange G, una de las cuales es OG 6 y la otra OG modificado. Se detallara a continuacin la frmula OG 6. Reactivos para preparar 1000 ml de Orange 6. Cristales de Orange G 10 g Agua destilada 100 ml Etanol al 95% 1000 ml Acido fosfotngstico 0.15 g Procedimiento para preparar Orange G 6 1) SOLUCIN MADRE 1 Preparar una solucin acuosa de Orange G al 10% del siguiente modo: disolver 10 g de cristales de Orange G (color ndex Number 16230) en 100 ml de agua destilada. Agitar bien y dejar en reposo durante una semana antes del uso. 2) SOLUCIN MADRE 2 Preparar una solucin al 0.5% del siguiente modo: tomar 50 ml de la solucin madre N1 y aadir etanol al 95% hasta un volumen de 1000 ml. 3) COLORACION FINAL. Tomar 1000 ml de la solucin madre N2 y aadir 0.15 g de cido fosfotngstico. Mezclar bien. Conservar en frasco de color marrn oscuro con tapn. Utilizar la concentracin mxima. Filtrar antes de uso. Eosina Alcohol 50 Existen varias formas para preparar el colorante EA 50. Se describe a continuacin la preparacin de EA 50. Reactivos para preparar 2000 ml de EA 50 Eosina amarillenta 10 g Pardo Bismark amarillento 10 g Verde luz SF amarillento 10 g Agua destilada 300 ml Etanol al 95% 2000 ml Acido fosfotngstico 4g 11

Conocimientos bsicos para la tincin de citologa cervico-vaginal Septiembre del 2008 Carbonato de litio saturado 20 g Procedimiento para preparar EA 50 a) Soluciones acuosas madres Preparar soluciones al 10% separadas de cada uno de los colorantes del siguiente modo: Disolver 10 g de eosina en 100 ml de agua destilada. Disolver 10 g de pardo Bismark en 100 ml de agua destilada. Disolver 10 g de verde luz SF en 100 ml de agua destilada. b) Colorante final Soluciones alcohlicas preparadas en base a las soluciones acuosas. Tomar 50 ml de solucin madre de eosina, 10 ml de solucin madre de pardo Bismark y 12.5 ml de solucin de verde luz SF y aadir etanol al 95% hasta obtener la mezcla de 2000 ml. Aadir 4g de cido fosfotngstico y 20 gotas de solucin de carbonato de litio saturada. Mezclar bien. Conservar la solucin en frascos de color marrn oscuro hermticamente cerrados. Utilizar la concentracin mxima. Filtrar antes del uso. La solucin madre saturada de carbonato de litio se prepara con : + Carbonato de litio (Li2CO3) 1.5 g + Agua destilada 100 ml La solucin de trabajo saturada de carbonato de litio se prepara agregando 30 gotas de solucin madre a 1000 ml de agua destilada.

Solucin de cido clorhdrico al 0.5 % Reactivos Acido clorhdrico 1N HCL Acido clorhdrico Agua destilada 60 ml Completar a 1000 ml

Acido clorhdrico 12N (fumante) 5 ml Completar a 1000 ml

Procedimiento. Preparar una solucin al 5% de cido clorhdrico agregando 60 ml de cido clorhdrico IN, a una probeta graduada de 1000 ml con 700 ml de agua destilada aproximadamente, deje enfriar y agregue agua destilada adicional a la probeta para completar un volumen total de 1000 ml. si tiene cido clorhdrico fumante o concentrado, con una concentracin de aproximadamente 12N, debe usar solo 5 ml de acido clorhdrico.

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Conocimientos bsicos para la tincin de citologa cervico-vaginal Septiembre del 2008 Solucin amoniacal al 0.5 % Preparar una solucin al 5% de hidrxido de amonio agregando 5 ml de hidrxido de amonio y completar un volumen de 1000 ml. Resina o liquido para montaje. Existen varias opciones como medio de montaje: a. Blsamo de Canad. ndice de refraccin 1.53 es una oleorresina natural, se obtiene del abeto. Desventajas: Toma color amarillo. Se decoloran las placas. Demora mucho tiempo en secarse. La lmina se necesita secar en un horno despus del montaje. b. Resina sinttica. Debe ser de buena calidad, de tal manera que se adhiera rpida y firmemente al cubreobjetos. Ventajas: Se conserva transparente. El secado en horno es opcional. c. Estelln. ndice de refraccin 1.49. Sinttico. Es una combinacin de resinas (solucin de polmeros) disueltos en xilol o neoclear. Ventajas: Seca en 20 minutos. Se conserva transparente. Las placas duran aproximadamente 5 aos sin decolorarse. d. Neomount. Puede considerarse esta opcin que especficamente utiliza neoclear.

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Conocimientos bsicos para la tincin de citologa cervico-vaginal Septiembre del 2008 Cuidados a los colorantes. Se debern tener los siguientes cuidados: 1. Verificar que las soluciones estn rotuladas indicando: A. Fecha de preparacin. B. Nombre de la solucin. C. Titulacin. D. Concentracin. E. Requisitos para almacenar. F. Advertencias para su manejo. G. Fecha de vencimiento. 2. Conservar los colorantes en: A. Envases oscuros B. Bien tapados porque son sensibles a la luz. C. Se * oxidan a temperatura ambiente. D. Almacenar las soluciones inflamables en un rea aprobada anti-fuego. E. No manejar los colorantes cerca de estufas o fuentes oxidantes. F. Almacenar las soluciones de tincin entre 15C Y 25C. despus de abrir el frasco si es almacenado entre 15C y 25C es utilizable hasta la fecha de caducidad indicada. *oxidacin. Corrosin seca, reaccin de un material con el medio ambiente. Reaccin de un material con el oxigeno, si este oxido es estable se formara una capa en la superficie, el material aumenta su peso y volumen. 3. El tren A. B. 4. Batera A. de tincin se cambiara: Cada 2000 laminillas teidas. Cada 6 u 8 semanas. de tincin: Preparar una batera de tincin exclusiva para las muestras de examen de Papanicolaou. B. Rotular las cubetas. C. Los colorantes se deben filtrar inmediatamente antes de llenar las cubetas, usando un embudo y papel filtro. D. La batera de tincin requiere estar bajo campana de extraccin de gases. E. La batera de tincin debe encontrarse en una sala con buena ventilacin. 5. Si el laboratorio procesa muestras no ginecolgicas, ests deben teirse en una batera diferente, pera prevenir el riesgo de contaminacin cruzada. 6. Se deber realizar dos tipos de mantenimiento en los colorantes: A. Mantenimiento general. Filtrar los colorantes cada 8 das para remover cualquier material celular que se haya desprendido usando papel filtro. 14

Conocimientos bsicos para la tincin de citologa cervico-vaginal Septiembre del 2008 Si se usa un papel filtro de mediana velocidad se retiene la mayora de las partculas microscpicas produciendo un filtrado claro. El papel filtro tiene un nmero que indica su poder de retencin. Limpiar las cajas de todo residuo de colorante y verificar que estn libres de sedimentos. Controlar diariamente el nivel de las soluciones de la batera de tincin. Rellenar las cubetas si falta solucin. Tapar las cubetas con soluciones y colorantes cuando no se usen y el mayor tiempo posible cuando estn en uso, para evitar evaporacin. B. Mantenimiento especfico. En la hematoxilina, se debe retirar la capa de aspecto metlico que se forma sobre el colorante con papel absorbente o filtracin. El Orange G y EA deben ser remplazados cada semana. El HCl al 0.5 % debe ser remplazado diariamente. El etanol es altamente *higroscpico. Es indispensable mantenerlo bien tapado. *higroscpico. Todos los compuestos que atraen agua, estos compuestos son utilizados como desecantes. Los alcoholes para re- hidratar y deshidratar usados antes de la tincin del citoplasma, deberan remplazarse semanalmente. Descartar los alcoholes de enjuague si estn muy teidos. Los alcoholes usados despus de la tincin del citoplasma se cambian generalmente de un modo rotatorio, es decir, se descarta el alcohol que sigue a la tincin y los otros dos se mueven a la 1ra y 2da posicin. Los alcoholes absolutos deben ser mantenidos libres de agua con el agregado de pellets de Silica Gel con esto se puede disminuir el riesgo de la contaminacin acuosa del xilol. El xilol debe cambiarse si aparece teido con colorantes del citoplasma. Si tiene agua la solucin aparece como lechosa y se puede alterar el aclaramiento.

Tincin de las muestras. 1.-Poner las lminas en los carros de tincin, ordenadas y todas en la misma posicin. El tcnico debe trabajar con guantes. 2.-Se especifica el procedimiento detallado de tincin con el mtodo regresivo para tincin nuclear.

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Conocimientos bsicos para la tincin de citologa cervico-vaginal Septiembre del 2008 3.-Se recomienda que cada laboratorio mantenga por escrito su procedimiento de tincin en un lugar visible de la sala de procesamiento de tincin y en un lugar visible de la sala de procesamiento para contribuir a una rutina de tincin estable. Eliminacin del fijador. Para iniciar el proceso de tincin nuclear es necesario eliminar el fijador de las laminillas, que usualmente es en base a polietilenglicol. Para ello se realiza un lavado con agua destilada o sumergiendo las lminas en etanol al 95%, seguido por un lavado con agua destilada. Evitar problemas con los alcoholes o colorantes. Los carros de tincin deben ser completamente escurridos entre una y otra cubeta para evitar la dilucin de los colorantes o la alteracin de los alcoholes, sin llegar al secado del frotis lo que producira una coloracin irregular. Se recomienda que el carro de tincin repose por unos segundos en papel absorbente despus que ha sido retirado de una cubeta. Tiempos de inmersin. Cada inmersin del carro de tincin con laminas en las cubetas de soluciones o colorantes debe durar 1 0 2 segundos y se efecta suavemente sin llegar a tocar la base de la cubeta, para que no se desprendan las clulas. Intentar mantener las cubetas tapadas el mayor tiempo posible durante el proceso de tincin. Las lminas teidas se deben mantener en una cubeta con xilol hasta el momento del montaje. Asear cuidadosamente los materiales ocupados y la superficie de trabajo una vez terminada la tincin de un conjunto de lminas. Lavarse cuidadosamente las manos.

Montaje de las lminas. Todo el procedimiento de montaje de las lminas debe realizarse bajo campana de extraccin de gases si se usan medios de montaje con solventes. Tomar, bajo la campana de extraccin de gases, la laminilla teida y retirarla de la canastilla. Revisar que est seca la parte posterior de la muestra, antes de iniciar el montaje. Utilizar un medio de montaje de preferencia de secado rpido. Aplicar una gota de resina sobre el portaobjetos y colocar sobre ste el cubreobjetos. Retirar el excedente de resina y colocarla sobre la charola ordenadamente. Cuidados que se deben tener con la resina: 1. Cuidar que no se formen burbujas 2. No se agregue resina en exceso. 16

Conocimientos bsicos para la tincin de citologa cervico-vaginal Septiembre del 2008 3. Limpiar con gasa los bordes. 4. Separar una de otra las laminillas para evitar que no se peguen. Asear cuidadosamente todos los implementos usados para procesar muestras o descartarlos despus del uso. Puede ocurrir contaminacin cruzada durante el montaje si el gotario o la pipeta usada para aplicar el medio de montaje toca las clulas de una muestra y despus de otra muestra. Lavar cuidadosamente las manos.

Reparar las laminillas quebradas aceptadas. Cuando se ha aceptado una lmina quebrada, el trozo del portaobjeto donde se encuentra la mayor parte del frotis extendido, se adosa con un clip a un portaobjeto en un buen estado y de este modo se somete a tincin.

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OBJETIVO DE CADA REACTIVO.

Funcin general. Hematoxilina OG 6 y EA 50 C6H4(CH3)2 Xilol CH3CH2OH Alcohol absoluto. Alcohol etlico

Tincin nuclear. Tincin citoplasmtica. Aclaramiento. Deshidratacin total. La funcin principal es deshidratar, puede ser sucesiva, gradual o abrupta segn el lugar que ocupe dentro de la tincin. La funcin secundaria es el enjuague Enjuague. Remueve el exceso de hematoxilina.

Agua Solucin de HCL .05% Funcin especifica. Reactivo. Hematoxilina.

Sulfato de potasio y aluminio.

Funcin en el colorante. El componente activo es la hematena (tiene cargas negativas) que se obtiene de la oxidacin (maduracin) *Mordiente. Piedra alumbre. Color mbar claro. Con esta sustancia se da color a la hematoxilina.

Funcin en la clula. Una vez que se da la maduracin toma un color rojo vinoso, tonalidad que toman los ncleos. Suministra cargas positivas, que actan como puentes qumicos para unirse a las cargas negativas de la hematena y del cido fosfrico de las cadenas de DNA nuclear. Graba el color en las clulas. Incrementa la precisin de la tincin nuclear.

CH3COOH glacial. Acido actico glacial. Alcohol 96% Agua destilada

HgO. Oxido de mercurio. (Rojo o amarillo). Reactivo. Orange G

Diferenciador. Estabiliza el colorante. Previene la oxidacin. Evita la contaminacin con hongos Medio de trasporte para disolver el sulfato de potasio y aluminio por calentamiento. Activa la hematoxilina para obtener POR OXIDACIN la hematena. (Maduracin). Funcin en el colorante. Cristales. Colorante especifico para teir clulas queratinizadas. 18

LA HEMATEINA da la tonalidad a los ncleos.

Funcin en la clula. Penetra rpidamente al citoplasma. Tie el citoplasma del

Conocimientos bsicos para la tincin de citologa cervico-vaginal Septiembre del 2008 epitelio escamoso simple maduro y queratinizado. Graba el color en la clula.

Acido fosfotngstico. Etanol 95% Agua destilada.

*Mordiente. Evita la contaminacin con hongos. Medio de trasporte para Disolver los cristales de Orange G Funcin en el colorante. Colorante de fondo contraste.

Reactivo. Eosina amarillenta.

Verde luz SF amarillento.

Colorante diferencial.

Vesuvina o Pardo Bismark amarillento. Acido fosfotngstico.

Reactivo de contraste.

*Mordiente

Funcin en la clula. o En unin con el colorante nuclear da tono rosa al citoplasma. Colorea el citoplasma de las clulas escamosas, nuclolos y eritrocitos. Da tono verde azul a los citoplasmas de: Clulas intermedias. Clulas de la capa profunda. Clulas columnares. Histiocitos. Leucocitos. Determina los colores verde-azul o rosa de los citoplasmas. Une el light green con las protenas de la clula. Graba el color en la clula.

Li2CO3 Carbonato de litio. Alcohol 96% Agua destilada.

Diferenciador. Evita la contaminacin con hongos. Medio de transporte. Bsico para soluciones madre. Disolver reactivos. Como solucin acuosa saturada en combinacin con el carbonato de litio.

*MORDIENTE. Un reactivo mordiente es el que sirve de intermedio eficaz para fijar los colorantes. Graba el color en la clula. Resultados de tincin. Componente. Coloracin. Ncleo. Coloracin perfecta. 19

Funcin. Colorante nuclear.

Conocimientos bsicos para la tincin de citologa cervico-vaginal Septiembre del 2008 Cromatina. Membrana nuclear. Nuclolo. Citoplasma. Color azul o prpura. Color azul o prpura. Color rojo, rosado o naranja. Color eosinfilo y/o cianfilo. Color amarillo o naranja, si hay presencia de queratina. Coloracin homognea, estable y transparente. Dar coloracin perfecta a todos los componentes del ncleo. Colorante citoplasmtico. Permitir la diferenciacin entre las clulas

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Problemas con la tincin.

Coloracin nuclear demasiado plida. Fijador con aerosol: Mal agitado antes de usar. Aplicado muy cerca o muy lejos del frotis. Deficiente remocin del fijador de los frotis. Hematoxilina: Contaminada con fijador, esto reduce su capacidad de penetrar al ncleo. Tiempo insuficiente con hematoxilina. Hematoxilina diluida con agua porque las lminas no fueron bien estiladas. Hematoxilina poco madura. HCL: Muy concentrado. Demasiadas inmersiones en HCL. HCL mal removido. Tincin antigua, sobre-usada o usada por mucho tiempo. Frotis desecado antes de ser fijado. Lavado en agua corriente con mucho cloro (muy acida) o por tiempo excesivo blanquea el ncleo. Otros. Clulas sobre-teidas en caso de frotis irregular con reas gruesas y finas. En frotis hemorrgicos el pH cambia y hay mayor afinidad por la hematoxilina. Laminas fijadas en alcohol de mayor concentracin. La muestra fue sobre-teida con hematoxilina. Mal enjuague. Se hicieron pocas inmersiones en HCL. La concentracin de HCL es ms baja que la recomendada. Otros. Laminas despus de OG 6 y EA sometidas mucho tiempo o a muchas inmersiones en alcohol que remueve el 21

Coloracin nuclear muy oscura.

Citoplasma plido

Conocimientos bsicos para la tincin de citologa cervico-vaginal Septiembre del 2008 color del citoplasma y lo deja muy plido. Falta de colores citoplasmticos Colorantes OG y EA estn agotados. contrastante. Color del citoplasma no consistente. Frotis secado al aire antes de la fijacin. Niveles de soluciones insuficientes en una o mas cubetas. Deficiente remocin de polietilenglicol del fijador Lminas demasiado tiempo en el alcohol o soluciones aclarantes despus de OG y EA. Tiempo excesivo en hematoxilina. La hematoxilina no se removi antes de OG y EA. Lavado de las lminas entre soluciones inadecuadas. Lavado insuficiente despus de los colorantes. Estilado inapropiado de lminas entre enjuagues. El pH del agua destilada no es suficientemente alcalino. Variacin de la temperatura del agua. Grosor irregular de la muestra. Sumersin inadecuada de las lminas en las cubetas de otros colorantes. Otros. Citoplasma demasiado verde o azul o Debe revisarse la tincin EA, puede tener rosado. un exceso de colorante verde u otra variacin. Citoplasma rojizo o rosado sin Frotis seco antes de ser fijado. diferenciacin. Presencia de bacterias cocceas en el frotis. Colorante agotado que debe reemplazarse. Citoplasma gris o prpura. Exceso de tincin de hematoxilina o mala remocin de ella con HCL. Lmina irregularmente teida. Fijador con aerosol mal agitado antes de usar. La fijacin es irregular. Lminas muy plidas en general. Fijador con aerosol aplicado muy cerca o muy lejos del frotis. Apariencia deslustrada, griscea nebulosa Mala remocin del fijador antes de las clulas de las lminas. de teir. Se han contaminado con agua las soluciones deshidratadoras y 22

Conocimientos bsicos para la tincin de citologa cervico-vaginal Septiembre del 2008 aclarantes. Contaminacin cruzada de las lminas. Clulas desprendidas de un frotis que se adhieren a otro cuando quedan suspendidas en el liquido de alguna cubeta de la batera de tincin. Se reconoce al microscopio ya que se observa en un plano visual diferente o porque presentan una coloracin distinta y acentuada. Para disminuir el riesgo de contaminacin cruzada se requiere: Mantener una batera de tincin exclusiva para las muestras ginecolgicas. Filtrar los colorantes y las soluciones diariamente. Agitar suavemente los canastillos de tincin. Usar un sistema de filtro separador.

Problemas en el montaje de lminas. Espesamiento del medio de montaje. La evaporacin del solvente del medio de montaje produce espesamiento. Es necesario verificar la viscosidad del medio de montaje. Burbujas en la lmina. La evaporacin muy rpida del solvente genera burbujas de aire en el medio de montaje a medida que se seca. Coloracin caf del ncleo o citoplasma. Cuando los frotis se dejan secar antes de ser montados y cubiertos con resina puede ocurrir este fenmeno. La observacin de reas de de color pardo indica la presencia de aire en el proceso de montaje. Para arreglarlas se ponen al xilol, despus alcohol absoluto. Alcohol 95%, agua corriente y se retie el citoplasma (OG y EA). Hongos en las lminas Se presenta en sitios muy hmedos y con calor. Se evita no exponiendo las lminas al aire y filtrando los lquidos de la batera de tincin.

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Conocimientos bsicos para la tincin de citologa cervico-vaginal Septiembre del 2008

Mtodos de coloracin.
Manual de procedimientos de Lima 2000. Mtodo de coloracin Merck.

ALCOHOL 96%

10 seg

ALCOHOL 96-80-70-50 % H2O

H2O HEMATOXILINA H2O SOLN HCL 0.5% H2O SOLN AMONICAL 0.5% H20 ALCOHOL 96% OG 6 ALCOHOL 96% ALCOHOL 96% EA 36 ALCOHOL 96% ALCOHOL 96% ALCOHOL ABSOLUTO ALCOHOL ABSOLUTO XILOL XILOL XILOL 10 seg 2 min 5 seg 5 seg 2 min 5 seg 5 seg 10 seg 10 seg 10 seg 10 seg 10 seg 1 min 1-4 veces 1-3 min

HEMATOXILINA

3 min

ALCOHOL 50-70-80-96 % OG 6 ALCOHOL 96% ALCOHOL 96% EA 31 o 50 ALCOHOL 96% ALCOHOL 96% ALCOHOL ABSOLUTO 5 min 3 min 3 min

ALCOHOL-XILOL XILOL XILOL 2 min

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Conocimientos bsicos para la tincin de citologa cervico-vaginal Septiembre del 2008 Manual de procedimientos OMS. 2002 Tincin e interpretacin. 2006 Alcohol 96 % H20 3 min H2O H2O DESTILADA HEMATOXILINA H2O SOLN HCL 0.5% H2O DESTILADA Alcohol 96 % Alcohol 96 % Alcohol 96 % OG 6 ALCOHOL 96% ALCOHOL 96% ALCOHOL 96% EA 50 ALCOHOL 96% 3-5 inmersiones 10 inmersiones 10 inmersiones 10 inmersiones 10 inmersiones 1.5-6 minutos 10 inmersiones 10 inmersiones 10 inmersiones 1.5-6 minutos 10 inmersiones 10 inmersiones 10 inmersiones 10 inmersiones 2-5 min

HEMATOXILINA H2O SOLN HCL 0.5% H20 ALCOHOL 96% ALCOHOL 96%

3 min 3 min 20 inmersiones 5 min 10 inmersiones 10 inmersiones

OG 6 ALCOHOL 96% ALCOHOL 96%

2 min 10 inmersiones 10 inmersiones

EA 50 ALCOHOL 96% ALCOHOL 96% ALCOHOL ABSOLUTO ALCOHOL ABSOLUTO ALCOHOL ABSOLUTO XILOL XILOL XILOL

1.5 min 10 inmersiones 10 inmersiones 10 inmersiones 10 inmersiones 10 inmersiones 10 inmersiones 10 inmersiones mantenimiento

ALCOHOL ABSOLUTO ALCOHOL ABSOLUTO ALCOHOL ABSOLUTO XILOL XILOL XILOL

10 inmersiones 10 inmersiones 10 inmersiones 10 minutos 10 minutos 10 minutos

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Conocimientos bsicos para la tincin de citologa cervico-vaginal Septiembre del 2008 Introduccin al citodiagnstico. 1975 Atlas of Cytology. Papanicolaou. 1954,1956 y 1963

ALCOHOL 96% H20 HEMATOXILINA H20 SOLN HCL 0.5% H20 SOLN AMONICAL 1% H20 ALCOHOL 96%

15-20 min 10-15 seg 3 minutos

ALCOHOL 80-70-50 % H2O DESTILADA HEMATOXILINA H2O SOLN HCL 0.25% H20 6 tiempos 6 minutos 6 minutos

10-15 seg 2-5 seg

10-15 seg 4-7 seg

10-15 seg 25-30 seg ALCOHOL 50-70-8095 %

OG 6 ALCOHOL 96%

2 20

minutos seg

OG 6 ALCOHOL 95% ALCOHOL 95%

1.5 MINUTOS

EA 50 ALCOHOL 96% ALCOHOL 96% ALCOHOL 96% ALCOHOL ABSOLUTO ALCOHOL ABSOLUTO XILOL XILOL XILOL

3 10 10 10 10 10 20 20 20

minutos seg seg seg seg seg seg seg seg

EA 50 ALCOHOL 95% ALCOHOL 95% ALCOHOL 95% ALCOHOL ABSOLUTO

1.5 MINUTOS

ALCOHO-XILOL 50%

XILOL

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Conocimientos bsicos para la tincin de citologa cervico-vaginal Septiembre del 2008

Observaciones.
Cada inmersin de la canastilla debe durar 1 o 2 segundos. Se efecta suavemente sin llegar a tocar la base de la cubeta desprendan las clulas y para evitar el quebrar la cubeta. Preparacin de colorantes. para que no se

Algunos mtodos de tincin proponen el uso de una solucin amoniacal al 5%, tambin se puede utilizar una solucin saturada de carbonato de litio o agua caliente, si el agua es alta en su concentracin mineral se puede utilizar a temperatura ambiente. Se utiliza para obtener un cambio abrupto del pH cido obtenido y provocar un viraje celular o azulamiento, gracias a la descolorizacin controlada, para llegar a una tincin nuclear que sea ptima.

Para madurar la hematoxilina se puede utilizar como agente oxidante el oxido de mercurio o el yodatato de sodio, en algunos manuales indican la utilizacin de 1 ml de cido actico por cada 200 ml de colorante para intensificar la tincin nuclear. 24 hrs antes de usar, (para la conservacin del colorante).

Para madurar el OG 6 y EA 50 se puede agregar 0.5 g de cido fosfotngstico en una solucin de 5ml. 24 hrs antes de usar.

Si el xilol se nota blanco pero sin burbujas se pude agregar unas gotas de alcohol absoluto para que disminuir lo turbio del xilol.

Para retirar todo el fijador se puede agregar unas gotas de la solucin de HCL 5% al alcohol antes de la hematoxilina.

Se pueden utilizar concentrados de EA 36 (eosina original en la tincin de Papanicolaou porque la diferenciacin entre las clulas basofilas o acidofilas es mejor), EA 50 o EA 65.

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Reactivos
OG-6 COLORANTE PAPANICOLAU Solucin colorante utilizada en laboratorios de histopatologa para tincin celular segn procedimiento de Papanicolaou. Se OG-500 Envase con 500 ml. complementa con la Hematoxilina de Harris y con el EA-50 OG-1000 Envase con 1000 ml. de Papanicolaou. C16H10N2O7S2Na2 P.M. 452. 38 CAS: 1936-15-8

f rojo

xi

EA-50 COLORANTE PAPANICOLAU Solucin colorante utilizada en laboratorios de histopatologa para tincin celular segn procedimiento de Papanicolaou. EA-500 Envase con 500 ml. Se complementa con la Hematoxilina de Harris y con el OG-6 de Papanicolaou. EA-1000 Envase con 1000 ml. Papanicolaou.

f rojo

HEMATOXILINA DE HARRIS Solucin colorante utilizada en laboratorios de histopatologa Para tincin celular segn procedimiento de Papanicolaou. Se HH-500 Envase con 500 ml. complementa con Los colorantes EA-50 y con el OG-6 de HH-1000 Envase con 1000 ml. Papanicolaou. C16H14O6 P.M. 302. 29 CAS: 517-28-2

f rojo

xn

ACIDO ACETICO GLACIAL A.C.S. SOLUCIONES CH3COOH P.M. 60.05 1 lt = 1.05 kg Material corrosivo CAS 64-19-07 MK Index 10,47 ACG-500 Envase con 500 ml. ACG-1000 Envase con 1000 ml.

c Bco.

xn

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ACIDO CLORHIDRICO A.C.S. SOLUCIONES 3 0 HCl 37% aprox. P.M. 36.46 1 lt = 1.9 kg Material corrosivo CAS 7647-01-0 MK Index 10,4682 ACL-500 Envase con 500 ml. ACL-1000 Envase con 1000 ml.

c Bco.
HIDROXIDO DE AMONIO ACS PREPARACIONES NH4OH P.M. 35.05

xn

CAS 7783-28-0 MK Index 10,561

t Bco.

RESINA SINTETICA AL 60% EN XILOL Medio de montaje para microscopa. RSX-560 Envase con 500 ml. RSX-1060 Envase con 1000 ml.

xn Rojo.

xi

ALCOHOL ETILICO ABSOLUTO A.C.S. CH3CH2OH P.M. 46.07 Lquido combustible CAS 64-17-5 MK Index 10,212 AEA- 1000 Envase con 1000 ml. AEA-3500 Envase con 3.5 litros AEA-18000 envase con 18 litros.

f Rojo.

xn

XILOL ACS C6H4(CH3)2 P.M. 106.17 Lquido inflamable. CAS 1330-20-7 MK Index 10,9890 XL-1000 Envase con 1 litro. XL-3500 Envase con 3.5 litros. XL-18000 Envase con 18 litros.

xi
Rojo.

xn

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EOSINA AMARILLENTA Solucin colorante saturada en alcohol EOAA-250 Envase con 250 ml. C20H6Br4 Na2O5 P.M. 691. 88 EOAA-500 Envase con 500 ml. CAS: 17372-87-1 EOAA-1000 Envase con 1000 ml.

f Rojo.
PARDO DE BISMARCK Solucin colorante alcohlica saturada utilizada como contraste en histologa. PB-250 Envase con 250 ml. C18H20Cl2N6 P.M. 419. 33 PB-500 Envase con 500 ml. PB-1000 Envase con 1000 ml.

f Rojo.

xn

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Conocimientos bsicos para la tincin de citologa cervico-vaginal Septiembre del 2008

IDENTIFICACION DE LOS CODIGOS INFORMATIVOS DE PELIGRO, ALMACENAJE, PROTECCION Y ADVERTENCIAS DE USO UNIVERSAL.
Smbolos de Peligro E F R sustancias explosivas sustancias inflamables sustancias radioactivas C O T sustancias corrosivas sustancias oxidantes sustancias txicas

Smbolos de Peligro menor XN sustancias dainas XI sustancias irritantes

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Cdigos de Control de Almacenaje Corrosivo Mnimo o sin riesgo Oxidante Txico Inflamable

Sugerencias de Proteccin y Transporte Lentes de proteccin Campana de extraccin Guantes resistentes a corrosivos Transporte terrestre permitido Gafas y proteccin facial Mandil resistente a corrosivos Transporte areo permitido Bata de laboratorio

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Cdigos de niveles de peligro segn NFPA

Salud (color azul). Reactividad (amarillo). Valores: 0 mnimo. 1 ligero. Flamabilidad (color rojo). 0 mnimo. +93C 1 Moderado. +37C 2 Alto. +33C 3 Severo. -23C

2 moderado.

3 alto.

4 severo.

Riesgos especficos (color blanco): OXY oxidante. ACID cidos. ALG alcalinos. CORR corrosivos. RIESGO PARA LA SALUD

W no usar agua.

Corresponde al riesgo de toxicidad de una sustancia qumica, cuando es inhalada, ingerida o absorbida a travs de la piel y considera daos agudos y crnicos, producto de exposiciones nicas o continas.
GRADO DE RIESGO SIGNIFICADO

Sustancia No Txica

Sustancia Ligeramente Nociva, a la cual una exposicin nica o continua en el tiempo podra causar una irritacin o lesin residual leve.

Sustancia Moderadamente Txica o Nociva, a la cual una exposicin intensa o continuada, podra causar una incapacidad temporal o posible lesin residual, a menos que se de un tratamiento mdico rpido. Sustancia Txica en Grado Severo, donde una exposicin breve o prolongada, podra causar una importante lesin temporal o residual, an cuando se de un tratamiento mdico rpido Sustancia Extremadamente Txica o Venenosa, donde una corta o larga exposicin puede causar la muerte o lesin residual importante, an cuando se de un tratamiento mdico rpido.

RIESGO DE INFLAMACION Corresponde a la susceptibilidad de una sustancia qumica a inflamarse, lo que queda determinado por su temperatura de inflamacin.

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GRADO DE RIESGO SIGNIFICADO

Sustancia No Combustible. En este grado se incluye cualquier sustancia que no se quema en el aire cuando est expuesta a una temperatura de 816C por un perodo de 5 minutos.

Sustancia Levemente Combustible, que debe ser calentada para que se produzca su ignicin. En este grado se incluyen: 1 - Sustancias con temperatura de inflamacin de 93C - Sustancias que se queman en el aire al ser expuestas a una temperatura de 816C, por un perodo de 5 minutos. Sustancia Combustible o Moderadamente Inflamable, que debe ser calentada 2 para que se produzca su ignicin. En este grado se incluye: - Sustancias con temperatura de inflamacin superior a los 37C, pero inferiores a 93C Sustancia Inflamable en Grado Severo, que puede ser encendida en cualquier condicin de temperatura ambiental. En este grado se incluyen: 3 - Sustancias con temperatura de inflamacin entre 22.8C y 37.8C - Sustancias con temperatura de inflamacin menor que 22.8C y temperatura de ebullicin igual o mayor que 37.8C Sustancia Extremadamente Inflamable, que entran en combustin con facilidad. En este grado se incluyen: 4 - Sustancias con temperatura de inflamacin menor que 22.8C y temperatura de ebullicin menor que 37.8C - Gases inflamables

RIESGO DE REACTIVIDAD Y OXIDACION Corresponde al riesgo de reactividad y oxidacin de una sustancia qumica, cuando entra en contacto con el aire, agua, otros productos qumicos y materiales o condiciones de temperatura y presiones elevadas.

GRADO DE RIESGO

SIGNIFICADO

Sustancia Estable, no reactiva ni oxidante.

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Sustancia Normalmente Estable. Se incluyen en este grado: 1 - Sustancias que pueden volverse inestables en caso de exponerse a temperaturas y/o presiones elevadas. - Sustancias que pueden reaccionar con el agua, aire u otros productos y generar energa, pero no violentamente. Sustancia de Moderada Estabilidad. Se incluyen en este grado: 2 - Sustancias que pueden experimentar cambios violentos, pero sin detonar. - Sustancias que reaccionan violentamente, o forman mezclas potencialmente explosivas con el agua, o reacciones similares con el aire u otros productos. Sustancia de Severa Reactividad u Oxidante. Se incluyen en este grado: - Sustancias que por s mismas, son capaces de detonar o de reaccionar en forma explosiva con fuente iniciadora fuerte, golpes mecnicos o trmicos, a temperaturas o presiones elevadas. - Sustancias que pueden explosar con el agua, sin necesidad de calor, confinamiento o reacciones similares con el aire u otros productos. Sustancia de Extremada Reactividad o fuertemente Oxidante. Se incluyen en este grado: 4 - Sustancia que por s misma o por golpes mecnicos o trmicos, es capaz de detonar o de reaccionar en forma explosiva a temperaturas y presiones normales.

RIESGO POR CONTACTO Corresponde al riesgo por contacto de una sustancia qumica con alguna parte del cuerpo de una persona, con la consecuencia de efectos agudos o crnicos.

GRADO DE RIESGO

SIGNIFICADO

Sustancia Sin Riesgo por Contacto

Sustancia Levemente Irritante, que puede producir una ligera inflamacin de la piel u otras reas del cuerpo con que entra en contacto, producto de una exposicin nica o contnua en el tiempo. Sustancia Irritante, Moderadamente Corrosiva o Nociva si ingresa por la piel, que en contacto con la piel u otra zona del cuerpo, puede generar inflamaciones o quemaduras qumicas moderadas o un efecto txico menor. Sustancia Corrosiva o Txica si Ingresa por la piel en Grado Severo, que puede producir importantes quemaduras qumicas en partes del cuerpo o un efecto txico importante, con posibilidad de dao permanente. Sustancia Extremadamente Corrosiva o Txica si ingresa por la piel, que genera graves quemaduras qumicas y ulceraciones en el cuerpo o efecto txico extremo, con dao permanente esperado.

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Conocimientos bsicos para la tincin de citologa cervico-vaginal Septiembre del 2008

ALMACENAMIENTO CONSIDERACIONES GENERALES Un adecuado almacenamiento de las sustancias qumicas, tiene como objetivo primordial el evitar que se lleguen a juntar productos qumicos incompatibles, ya que de ocurrir as, se pueden producir reacciones violentas con la posibilidad de que se generen incendios, explosiones y/o emanaciones de gases venenosos o corrosivos que pueden comprometer a las personas, instalaciones y/o medio ambiente. Para cumplir con el propsito planteado, las sustancias qumicas deben almacenarse en sus respectivos envases, en lugares seguros, considerndose los riesgos inherentes y la incompatibilidad con otros productos qumicos y las condiciones del medio, como el calor, fuentes de ignicin, luz y humedad. En relacin a los reactivos qumicos para anlisis y sus soluciones, nuestra Empresa propone, en base a normas norteamericanas, realizar una separacin considerando cinco categoras de riesgo, de acuerdo a caractersticas qumicas similares. Posteriormente, los productos qumicos deben ser almacenados en bodegas y/o cabinas.

CODIGO DE ALMACENAJE WINKLER De acuerdo a las consideraciones indicadas y con el propsito de lograr un almacenamiento seguro de sustancias qumicas, nuestra Empresa utiliza el Cdigo de Almacenaje Winkler, en base a colores representativos, como son el Rojo (Inflamables), Amarillo (Oxidantes), Blanco (Corrosivos), Azul (Txicos) y Verde (Normal). Para casos especiales de productos qumicos pertenecientes al mismo grupo de riesgo, pero que presentan un peligro especial, sobre el color correspondiente, se escribe la palabra SEPARADO, lo que significa que se deben guardar en la misma rea, pero alejados del resto de las sustancias qumicas
Cdigo de Almacenaje Winkler

Clasificacin

Significado

Inflamables

rea de almacenamiento de reactivos y soluciones qumicas con riesgo de inflamacin. Rojo Sustancias qumicas que presentan riesgo de incendio. SEPARADO

rea de almacenaje de reactivos y soluciones qumicas con riesgo de oxidacin y reactividad. Oxidantes Sustancias qumicas que pueden reaccionar violentamente con el aire, agua u otras condiciones o productos qumicos. Posibilitan la ocurrencia de incendios y lo acrecientan si estn presentes. Amarillo SEPARADO

Corrosivos

rea de almacenamiento de reactivos y soluciones qumicas con riesgo por contacto. Sustancias qumicas que pueden ocasionar quemaduras en la piel, ojos y membranas mucosas.

Blanco SEPARADO

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Conocimientos bsicos para la tincin de citologa cervico-vaginal Septiembre del 2008

Txicos

rea de almacenamiento de reactivos y soluciones qumicas con riesgo para la salud. Azul Sustancias qumicas txicas por inhalacin, ingestin o absorcin a travs de la piel. SEPARADO

rea general de almacenamiento de reactivos y soluciones qumicas. Normal Sustancias qumicas que no ofrecen un riesgo importante para ser clasificadas en alguno de los grupos anteriores. Verde

Importancia: Resultados que se obtienen al mezclarse reactivos en el caso de accidente. Corrosivos + inflamables= explosin/fuego. Corrosivos + txicos = gas txico. Inflamables + oxidantes = explosin/fuego. cidos + bases = humos corrosivos/calor.

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Conocimientos bsicos para la tincin de citologa cervico-vaginal Septiembre del 2008 ORGANIZACIN INTERNACIONAL DEL TRABAJO. (OIT) Las frases que figuran entre parntesis ya no estn ya en vigor. Naturaleza de los riesgos especficos atribuidos a sustancias y preparaciones peligrosas R1 Explosivo en estado seco. R2 Riesgo de explosin por choque, friccin, fuego u otras fuentes de ignicin. R3 Alto riesgo de explosin por choque, friccin, fuego u otras fuentes de ignicin. R4 Forma compuestos metlicos explosivos muy sensibles. R5 Peligro de explosin en caso de calentamiento. R6 Peligro de explosin, en contacto o sin contacto con el aire. R7 Puede provocar incendios. R8 Peligro de fuego en contacto con materiales combustibles. R9 Peligro de explosin al mezclar con materiales combustibles. R10 Inflamable. R11 Fcilmente inflamable. R12 Extremadamente inflamable. (R13 Gas licuado extremadamente inflamable.) R14 Reacciona violentamente con el agua. R15 Reacciona con el agua liberando gases fcilmente inflamables. R16 Puede explosionar en mezcla con sustancias comburentes. R17 Se inflama espontneamente en contacto con el aire. R18 Al usarlo pueden formarse mezclas aire-vapor explosivas/inflamables. R19 Puede formar perxidos explosivos. R20 Nocivo por inhalacin. Nocivo en contacto con la piel. R21 R22 Nocivo por ingestin. R23 Txico por inhalacin. R24 Txico en contacto con la piel. R25 Txico por ingestin. R26 Muy txico por inhalacin. R27 Muy txico en contacto con la piel. R28 Muy txico por ingestin. R29 En contacto con el agua libera gases txicos. R30 Puede inflamarse fcilmente al usarlo. R31 En contacto con cidos libera gases txicos. R32 En contacto con cidos libera gases muy txicos. R33 Peligro de efectos acumulativos. R34 Provoca quemaduras. R35 Provoca quemaduras graves. R36 Irrita los ojos. 38

Conocimientos bsicos para la tincin de citologa cervico-vaginal Septiembre del 2008 R37 R38 R39 R40 R41 R42 R43 R44 R45 R46 (R47 R48 R49 R50 R51 R52 R53 R54 R55 R56 R57 R58 R59 R60 R61 R62 R63 R64 Irrita las vas respiratorias. Irrita la piel. Peligro de efectos irreversibles muy graves. Posibilidad de efectos irreversibles. Riesgo de lesiones oculares graves. Posibilidad de sensibilizacin por inhalacin. Posibilidad de sensibilizacin por contacto con la piel. Riesgo de explosin al calentarlo en ambiente confinado. Puede causar cncer. Puede causar alteraciones genticas hereditarias. Puede provocar defectos congnitos.) Riesgo de efectos graves para la salud en caso de exposicin prolongada. Puede causar cncer por inhalacin. Muy txico para los organismos acuticos. Txico para los organismos acuticos. Nocivo para los organismos acuticos. Puede provocar a largo plazo efectos negativos en el medio ambiente acutico. Txico para la flora. Txico para la fauna. Txico para los organismos del suelo. Txico para las abejas. Puede provocar a largo plazo efectos negativos en el medio ambiente. Peligroso para la capa de ozono. Puede perjudicar la fertilidad. Riesgo durante el embarazo de efectos adversos para el feto. Posible riesgo de perjudicar la fertilidad. Posible riesgo durante el embarazo de efectos adversos para el feto. Puede perjudicar a los nios alimentados con leche materna.

Combinacin de Frases R R14/15 R15/29 R20/21 R20/22 R20/21/22 R21/22 R23/24 R23/25 R23/24/25 R24/25 Reacciona violentamente con el agua, liberando gases extremadamente inflamables. En contacto con el agua, libera gases txicos y extremadamente inflamables. Nocivo por inhalacin y en contacto con la piel. Nocivo por inhalacin y por ingestin. Nocivo por inhalacin, por ingestin y en contacto con la piel. Nocivo en contacto con la piel y por ingestin. Txico por inhalacin y en contacto con la piel. Txico por inhalacin y por ingestin. Txico por inhalacin, por ingestin y en contacto con la piel. Txico en contacto con la piel y por ingestin. 39

Conocimientos bsicos para la tincin de citologa cervico-vaginal Septiembre del 2008 R26/27 R26/28 R26/27/28 R27/28 R36/37 R36/38 R36/37/38 R37/38 R39/23 R39/24 R39/25 R39/23/24 Muy txico por inhalacin y en contacto con la piel. Muy txico por inhalacin y por ingestin. Muy txico por inhalacin, por ingestin y en contacto con la piel. Muy txico en contacto con la piel y por ingestin. Irrita los ojos y las vas respiratorias. Irrita los ojos y la piel. Irrita los ojos, la piel y las vas respiratorias. Irrita las vas respiratorias y la piel. Txico: peligro de efectos irreversibles muy graves por inhalacin. Txico: peligro de efectos irreversibles muy graves por contacto con la piel. Txico: peligro de efectos irreversibles muy graves por ingestin. Txico: peligro de efectos irreversibles muy graves por inhalacin y contacto con la piel. R39/23/25 Txico: peligro de efectos irreversibles muy graves por inhalacin e ingestin. R39/24/25 Txico: peligro de efectos irreversibles muy graves por contacto con la piel e ingestin. R39/23/24/25 Txico: peligro de efectos irreversibles muy graves por inhalacin, contacto con la piel e ingestin. R39/26 Muy txico: peligro de efectos irreversibles muy graves por inhalacin. R39/27 Muy txico: peligro de efectos irreversibles muy graves por contacto con la piel. R39/28 Muy txico: peligro de efectos irreversibles muy graves por ingestin. R39/26/27 Muy txico: peligro de efectos irreversibles muy graves por inhalacin y contacto con la piel. R39/26/28 Muy txico: peligro de efectos irreversibles muy graves por inhalacin e ingestin. R39/27/28 Muy txico: peligro de efectos irreversibles muy graves por contacto con la piel e ingestin. R39/26/27/28 Muy txico: peligro de efectos irreversibles muy graves por inhalacin, contacto con la piel e ingestin. R40/20 Nocivo: posibilidad de efectos irreversibles por inhalacin. R40/21 Nocivo: posibilidad de efectos irreversibles en contacto con la piel. R40/22 Nocivo: posibilidad de efectos irreversibles por ingestin. R40/20/21 Nocivo: posibilidad de efectos irreversibles por inhalacin y contacto con la piel. R40/20/22 Nocivo: posibilidad de efectos irreversibles por inhalacin e ingestin. R40/21/22 Nocivo: posibilidad de efectos irreversibles en contacto con la piel e ingestin. R40/20/21/22 Nocivo: posibilidad de efectos irreversibles por inhalacin, contacto con la piel e ingestin. R42/43 Posibilidad de sensibilizacin por inhalacin y en contacto con la piel. R48/20 Nocivo: riesgo de efectos graves para la salud en caso de exposicin prolongada por inhalacin. R48/21 Nocivo: riesgo de efectos graves para la salud en caso de exposicin prolongada por contacto con la piel. R48/22 Nocivo: riesgo de efectos graves para la salud en caso de exposicin prolongada por ingestin. 40

Conocimientos bsicos para la tincin de citologa cervico-vaginal Septiembre del 2008 Nocivo: riesgo de efectos graves para la salud en caso de exposicin prolongada por inhalacin y contacto con la piel. R48/20/22 Nocivo: riesgo de efectos graves para la salud en caso de exposicin prolongada por inhalacin e ingestin. R48/21/22 Nocivo: riesgo de efectos graves para la salud en caso de exposicin prolongada por contacto con la piel e ingestin. R48/20/21/22 Nocivo: riesgo de efectos graves para la salud en caso de exposicin prolongada por inhalacin, contacto con la piel e ingestin. R48/23 Txico: riesgo de efectos graves para la salud en caso de exposicin prolongada por inhalacin. R48/24 Txico: riesgo de efectos graves para la salud en caso de exposicin prolongada por contacto con la piel. R48/25 Txico: riesgo de efectos graves para la salud en caso de exposicin prolongada por ingestin. R48/23/24 Txico: riesgo de efectos graves para la salud en caso de exposicin prolongada por inhalacin y contacto con la piel. R48/23/25 Txico: riesgo de efectos graves para la salud en caso de exposicin prolongada por inhalacin e ingestin. R48/24/25 Txico: riesgo de efectos graves para la salud en caso de exposicin prolongada por contacto con la piel e ingestin. R48/23/24/25 Txico: riesgo de efectos graves para la salud en caso de exposicin prolongada por inhalacin, contacto con la piel e ingestin. R50/53 Muy txico para los organismos acuticos, puede provocar a largo plazo efectos negativos en el medio ambiente acutico. R51/53 Txico para los organismos acuticos, puede provocar a largo plazo efectos negativos en el medio ambiente acutico. R52/53 Nocivo para los organismos acuticos, puede provocar a largo plazo efectos negativos en el medio ambiente acutico. Frases de Seguridad empleadas Las frases que figuran entre parntesis ya no estn ya en vigor. S1 S2 S3 S4 S5 S6 S7 S8 S9 S12 S13 Consrvese bajo llave. Mantngase fuera del alcance de los nios. Consrvese en lugar fresco. Mantngase lejos de locales habitados. Consrvese en ... (lquido apropiado a especificar por el fabricante). Consrvese en ... (gas inerte a especificar por el fabricante). Mantngase el recipiente bien cerrado. Mantngase el recipiente en lugar seco. Consrvese el recipiente en lugar bien ventilado. No cerrar el recipiente hermticamente. Mantngase lejos de alimentos, bebidas y piensos. 41 R48/20/21

Conocimientos bsicos para la tincin de citologa cervico-vaginal Septiembre del 2008 S14 S15 S16 S17 S18 S20 S21 S22 S23 Consrvese lejos de ... (materiales incompatibles a especificar por el fabricante). Conservar alejado del calor. Conservar alejado de toda llama o fuente de chispas - No fumar. Mantngase lejos de materiales combustibles. Maniplese y brase el recipiente con prudencia. No comer ni beber durante su utilizacin. No fumar durante su utilizacin. No respirar el polvo. No respirar los gases/humos/vapores/aerosoles [denominacin(es) adecuada(s) a especificar por el fabricante]. S24 Evtese el contacto con la piel. S25 Evtese el contacto con los ojos. S26 En caso de contacto con los ojos, lvense inmediata y abundantemente con agua y acdase a un mdico. S27 Qutese inmediatamente la ropa manchada o salpicada. S28 En caso de contacto con la piel, lvese inmediata y abundantemente con ... (productos a especificar por el fabricante). S29 No tirar los residuos por el desage. S30 No echar jams agua a este producto. S33 Evtese la acumulacin de cargas electrostticas. (S34 Evite cualquier choque o friccin.) S35 Elimnense los residuos del producto y sus recipientes con todas las precauciones posibles. S36 sese indumentaria protectora adecuada. S37 sense guantes adecuados. S38 En caso de ventilacin insuficiente, sese el equipo respiratorio adecuado. S39 sese proteccin para los ojos/la cara. S40 Para limpiar el suelo y los objetos contaminados por este producto, sese ... (a especificar por el fabricante). S41 En caso de incendio y/o explosin, no respire los humos. S42 Durante las fumigaciones/pulverizaciones, sese equipo respiratorio adecuado. [Denominacin(es) adecuada(s) a especificar por el fabricante]. S43 En caso de incendio, utilizar ... (los medios de extincin los debe especificar el fabricante). (Si el agua aumenta el riesgo, se deber aadir: "No usar nunca agua"). (S44 Si siente malestar, acdase al mdico y, si es posible, mustrele la etiqueta.) S45 En caso de accidente o malestar, acdase inmediatamente al mdico (si es posible, mustrele la etiqueta). S46 En caso de ingestin, acdase inmediatamente al mdico y mustrele la etiqueta o el envase. S47 Consrvese a una temperatura no superior a ...C (a especificar por el fabricante). S48 Consrvese hmedo con... (medio apropiado a especificar por el fabricante). S49 Consrvese nicamente en el recipiente de origen. 42

Conocimientos bsicos para la tincin de citologa cervico-vaginal Septiembre del 2008 S50 No mezclar con... (a especificar por el fabricante). S51 sese nicamente en lugares bien ventilados. S52 No usar sobre grandes superficies en locales habitados. S53 Evtese la exposicin. Recbense instrucciones especiales antes del uso. (S54 Obtenga el permiso de las autoridades de control de contaminacin antes de eliminar el producto hacia las plantas de tratamiento de aguas residuales.) (S55 Trate el producto, aplicando las mejores tcnicas disponibles, antes de verterlo al desage o al medio acutico.) S56 Elimnense esta sustancia y su recipiente en un punto de recogida pblica de residuos especiales o peligrosos. S57 Utilcese un envase de seguridad adecuado para evitar la contaminacin del medio ambiente. (S58 A la hora de eliminar el producto, considrelo como residuo peligroso.) S59 Remitirse al fabricante o proveedor para obtener informacin sobre su recuperacin/ reciclado. S60 Elimnense el producto y su recipiente como residuos peligrosos. S61 Evtese su liberacin al medio ambiente. Recbense instrucciones especficas de la ficha de datos de seguridad. S62 En caso de ingestin no provocar el vmito: acdase inmediatamente al mdico y mustrele la etiqueta o el envase. Combinacin de Frases S S1/2 S3/7 (S3/9 (S3/7/9 S3/9/14 Consrvese bajo llave y mantngase fuera del alcance de los nios. Consrvese el recipiente bien cerrado y en lugar fresco. Consrvese en lugar fresco y bien ventilado.) Consrvese el recipiente bien cerrado, en un lugar fresco y bien ventilado.) Consrvese en lugar fresco y bien ventilado y lejos de... (materiales incompatibles, a especificar por el fabricante). S3/9/49 Consrvese nicamente en el recipiente de origen, en lugar fresco y bien ventilado. S3/9/14/49 Consrvese nicamente en el recipiente de origen, en lugar fresco y bien ventilado y lejos de... (materiales incompatibles, a especificar por el fabricante). S3/14 Consrvese en lugar fresco y lejos de... (materiales incompatibles, a especificar por el fabricante). S7/8 Mantngase el recipiente bien cerrado y en lugar seco. S7/9 Mantngase el recipiente bien cerrado y en lugar bien ventilado. S20/21 No comer, ni beber, ni fumar durante su utilizacin. S24/25 Evtese el contacto con los ojos y la piel. S36/37 sense indumentaria y guantes de proteccin adecuados. S36/39 sense indumentaria adecuada y proteccin para los ojos/la cara. S37/39 sense guantes adecuados y proteccin para los ojos/la cara. S36/37/39 sense indumentaria y guantes adecuados y proteccin para los ojos/la cara. S47/49 Consrvese nicamente en el recipiente de origen y a temperatura no superior a... 43

Conocimientos bsicos para la tincin de citologa cervico-vaginal Septiembre del 2008 C (a especificar por el fabricante). Consrvese el recipiente bien cerrado y en lugar fresco. Mantngase el recipiente bien cerrado y consrvese a una temperatura no superior a... C (a especificar por el fabricante). No tirar los residuos por el desage. Elimnense esta sustancia y su recipiente en un punto de recogida pblica de residuos especiales o peligrosos.

S3/7 S7/47

S29/56

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Reglas bsicas de seguridad en el laboratorio.

Orden y limpieza en el laboratorio. Estos 2 aspectos son fundamentales para reducir el riesgo y las condiciones inseguras. Hbitos en el trabajo. Trate de trabajar lo ms cmodo posible, la ergonoma es importante. No trabaje en forma apresurada. Mantenga su espacio limpio y ordenado. Nunca corra en el laboratorio. Nunca haga bromas (en acciones) en el laboratorio. No deje puertas y gabinetes abiertos. Recomendaciones generales. Use su sentido comn. Conozca las reglas de seguridad y pngalas en prctica. Asegrese que conoce los procedimientos de emergencia. Reporte todo incidente o accidente. No trabajar nunca una persona sola en el laboratorio y muy especialmente en el caso de realizarlo fuera de las horas habituales.

No trasporte frascos de vidrio o aparatos debajo del brazo. No guarde piezas de vidrio u objetos punzantes de cualquier tipo en los bolsillos de la bata o ropa. No ingerir alimentos en el laboratorio. No fumar dentro del laboratorio. Manipular las sustancias voltiles, inflamables y explosivas en la campana de extraccin o en un lugar ventilado. Ubicar salidas de emergencia, extintores, regadera y botiqun. Usar lentes de seguridad. Lavarse las manos con frecuencia cuando este en constante contacto con sustancias qumicas. Nunca pipetear con la boca. Tener a la mano material absorbente, para utilizar en caso de derrames. Etiquetar los frascos con las soluciones que contengan. Cuando trabaje con lquidos flamables evitar tener mecheros encendidos cerca. Leer siempre las etiquetas de los frascos reactivos. Cuando manipule reactivos no se lleve las manos a la boca. Nunca adicione agua a un acido concentrado. Para diluir cidos estos se deben agregar poco a poco al agua y agitar constantemente la dilucin, de lo contrario el calor que se desprende en la reaccin puede proyectar el cido.

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Conocimientos bsicos para la tincin de citologa cervico-vaginal Septiembre del 2008 Ropa y accesorios. El cabello largo y la ropa suelta o la joyera debe asegurarse cuando se trabaja en un laboratorio. Pueden quedar atrapados en equipos o maquinaria en movimiento. La ropa o cabello pueden quemarse. No se deben utilizar sandalias o zapatos descubiertos. Se recomienda utilizar bata de manga larga, de preferencia de algodn. Antes de retirarse del laboratorio. Recoja los materiales, equipos, etc. Desconecte todos los equipos que no son necesarios, cerrar llaves de agua, gas, etc. Contar con puertas de acceso y salidas de emergencia, regaderas, controles maestros de energa, botiqun y diferentes tipos de extintores.

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Hematoxilina

Frmula: C16H14O6.xH2O

La hematoxilina es un colorante natural, fue usada alrededor de 1863, se utiliza en combinacin con sales de aluminio, hierro, cromo, cobre o tungsteno, en algunos manuales en donde se incluye la preparacin de colorantes a esta combinacin de sales se les conocer como alumbre, termino utilizado desde la edad media. Este colorante se utiliza para la tincin de los ncleos en las clulas. es un compuesto que se obtiene de la planta leguminosa Haematoxylum campechianum, conocida tambin con el nombre de Palo de Campeche. Es un producto natural que al ser oxidado constituye una substancia de color morado oscuro denominada hematena (esta se forma por la oxidacin de la hematoxilina. Este proceso, es conocido como maduracin). Esta maduracin tambin puede ocurrir espontneamente si las soluciones de hematoxilina se dejan en reposo por varios das. Tal como se obtiene de la planta e incluso luego de sufrir el proceso de oxidacin, su capacidad de tincin es muy limitada. Por lo tanto, debe combinarse con iones metlicos, especialmente las sales de hierro (III) o aluminio (II), que actan como mordientes. Si bien la hematoxilina es una sal neutra, suele ser denominada como un colorante bsico, ya que el componente cromgeno reside en el complejo catinico (bsico) de la misma. Es de notar que la tincin histolgica por hematoxilina no indica tanto la constitucin qumica de los componentes celulares, sino la densidad de cargas elctricas negativas de los mismos. Se utiliza para teir los componentes aninicos (cidos) de los tejidos, a los que da una coloracin violeta. Tie intensamente los ncleos de las clulas, dado que estos contienen cidos nucleicos ricos en radicales cidos. La hematoxilina puede combinarse junto con otros tintes, tales como la eosina o el cido pcrico, y en conjunto son capaces de teir otras estructuras citoplasmticas

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Hay dos procedimientos de hematoxilina usados en los laboratorios; los mtodos de Harris (regresivo)(en histologa, tambin tie las estructuras tisulares, citoplasma, tejido conectivo, entre otros) y de Mayer (progresivo).

Eosina

C20H6Br4Na2O5

es un colorante cido de color rosado oscuro usado en preparaciones histolgicas cuya propiedad est basado en su polaridad negativa lo que le permite enlazarse con constituyentes celulares de carga positiva. Por ello colorea componentes y orgnulos citoplasmticos mas no los nucleares (por estar el ADN cargado negativamente). Aquellos componentes que se tien con eosina son conocidos como acidfilos o eosinfilos. Los dems componentes que se tien con colorantes bsicos se les llama basfilos. Existen dos tipos: eosina B y eosina Y, las cuales producen los mismos resultados. Para reforzar la tonalidad rosada de la eosina, con anticipacin se diluye la eosina al 1% con agua destilada y se prepara con cido actico glacial (1 gota por cada 100 ml de eosina al 1%). Esta solucin se calienta a 60 grados C por media hora (30 minutos). Hematoxilina Eosina Es costumbre y rutina histolgica usar la eosina conjuntamente con la hematoxilina para teir tejidos a ser observados bajo el microscopio. Una vez completada el procedimiento de tincin de los tejidos, los ncleos de las clulas se vern de color morado oscuro (producto de la hematoxilina) y el citoplasma, as como las fibras de colgeno se vern de color rojo o rosado oscuro.

ORANGE G
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C16H10N2Na207S2
Es un colorante del que se habla muy poco y al que se le da poca importancia. Solucin colorante modificada por su punto de solubilidad en Etanol para obtener una tincin bien definida de las clulas con citoplasma orangeoflicas. Formulada para la identificacin de sustancias orangeoflicas, como sustancia queratsica en clulas queratinizadas; dndole un tinte anaranjado encendido. Su tiempo ptimo de tincin es de 2 minutos La Queratina o Keratina es una sustancia proteica, muy rica en azufre, que constituye el componente principal de las capas ms externas de la epidermis de los vertebrados y de otros rganos derivados del ectodermo, como pelos, uas, plumas, cuernos o pezuas. La queratina es la responsable de la dureza y resistencia de los cuernos y uas. Es una protena con una estructura secundaria, es decir, la estructura primaria de la protena, se pliega sobre s misma, adquiriendo tres dimensiones. sta forma nueva, tiene forma de espiral, llamndose as protena -hlice. Esta estructura se mantiene con esa forma tan caracterstica gracias a los puentes de hidrgeno y a las fuerzas hidrofbicas, que mantienen unidos los aminocidos de dicha protena. Todo esto unido, le da a la protena esa especial dureza caracterstica.

Frmulas de preparacin de colorantes y soluciones de Mtodos Histotecnlogicos del Instituto de Patologa de las Fuerzas Armadas de los Estados Unidos DE Amrica (AFIP). Hematoxilina de Mayer. Soln matriz. Alumbre de amonio o de potasio. Agua destilada. Hematoxilina. Yodato de sodio. Acido ctrico. Hidrato de cloral.

50.0 gr 1000 ml 1.0 gr 0.2 gr 1.0 gr 50.0 gr

En lugar de los 0.2 gr de yodatato de sodio se pueden usar 20 ml de una soln al 2% de yodatato de sodio. Adalos directamente a la soln matriz despus de que la hematoxilina se haya disuelto. Disuelva el alumbre en el agua destilada usando un agitador. Aada la hematoxilina y despus el yodatato de sodio, revolver por 10 minutos y despus aadir el acido ctrico. Revolver 10 minutos y agregar el hidrato de cloral y revuelva hasta que todo este disuelto. 50

Conocimientos bsicos para la tincin de citologa cervico-vaginal Septiembre del 2008 La soln resultante tendr un color vino oscuro, si se ha preparado correctamente. 1 ml de la soln de agua ligeramente tibia aadida, la tornara azul inmediatamente. Hematoxilina de Harris. Hematoxilina. Etanol al 100%. Alumbre de potasio o de amonio. Agua destilada. Oxido rojo de mercurio. Acido actico glacial

5.0 gr 50.0 ml 100.0 gr 2.5 gr 20 ml

Use un frasco de 2000 ml para el alumbre y el agua, y uno mas pequeo para el etanol y la hematoxilina. Disuelva el alumbre de potasio en el agua destilada con la ayuda de calor y de un agitador. Agite para disolver la hematoxilina en el alcohol, a temperatura ambiente. Remueva el alumbre y el agua destilada de la fuente de calor. Lentamente combine las dos soluciones. Devuelva las soluciones ya combinadas a la fuente de calor y hgalas hervir, aproximadamente 1 minuto. Remueva del calor y lentamente aada el xido de mercurio (si lo hace rpido, la reaccin har que la solucin se derrame). Devuelva la soln a la fuente de calor hasta que tome un color prpura oscuro, remuvala del calor, y pngala en un recipiente con agua fra hasta que baje la temperatura. Aada 20 ml de acido actico glacial para intensificar la tincin nuclear. Filtre la solucin cada vez antes de usar. Soln de Eosina Solucin matriz. 1 gr de eosina amarillenta, hidrosoluble en 20 ml de agua destilada. Aada 80 ml de etanol al 95%. Solucin diaria. 1 parte de solucin matriz y aadir 3 partes de etanol al 80% y 0.5 ml de cido actico glacial por cada 100 ml de colorante. Soln de acido actico al 1% 1 ml de acido actico glacial en 99 ml de agua amoniacal. Soln de HCL al 1% 1 ml de HCL en 99 ml de etanol al 70% Agua amoniacal. 2 a 4 ml de hidrxido de amonio al 28% en 800 ml a 1000 ml de agua destilada. Soln de carbonato de Litio Solucin saturada. 51

Conocimientos bsicos para la tincin de citologa cervico-vaginal Septiembre del 2008 1.54 gr de carbonato de litio en 100ml de agua destilada.

Medios de montaje. Hay tres medios de montaje que se pueden utilizar; resinas naturales, resinas sintticas y medios acuosos. El blsamo de Canad (resina natural) fue la ms utilizada, sin embargo, el largo tiempo que tomaba en secar la hizo imprctica para usos rutinarios. Adems puede reducir la intensidad de la tincin despus de algunos aos. Los medios acuosos se usan cuando los tintes o estructuras estn alterados o destruidos por causa de deshidratacin o de medios basados en xileno. Tcnicas para la preparacin de las soluciones colorantes y reactivos utilizados en la tcnica de coloracin de Papanicolaou. Avances en citologa, ao 22, nm. 2, 1972 pgs. 2,3 Hematoxilina de Harris. Hematoxilina. Alcohol etlico absoluto. Alumbre de potasio. Agua destilada. Oxido rojo de mercurio. 5.0 gr 50.0 ml 100.0 ml 1000.0 ml 2.5 gr

Disuelva la hematoxilina en alcohol y el alumbre en agua con ayuda de calor. Qutese del calor y mezcle las dos soluciones. Luego llvese a ebullicin lo mas rpido posible (1 minuto o menos) y remueva continuamente. Qutese del calor y agregue el oxido de mercurio lentamente. Calintese de nuevo a poca temperatura hasta que tome un color purpura obscuro. Retrese del calor y pngase en un recipiente con agua fra para enfriar la solucin. El colorante est listo para usarse tan pronto como se enfre. Fltrese antes de usar. Orange G-6 Orange G Agua destilada Alcohol etlico de 95% Acido fosfotngstico. 10.0 gr 100 ml 1000 ml 0.15 gr

Disuelva 10 grs de Orange G en 100 cc de agua destilada. Agtese bien y permtase reposar por una semana. Despus de reposar, ponga 50 cc de la solucin preparada y 950 cc de alcohol etlico de 95%. Agregue 0.15 grs de cido fosfotngstico; mzclelo bien y almacnese en botellas obscuras. Fltrese antes de usar. 52

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Solucin EA-36 (equivalente a EA-50) Eosina (amarillenta) Pardo Bismarck Light green S.F. (Amarillento) Agua destilada Alcohol etlico de 95%. Acido fosfotngstico. Soln acuosa saturada de carbonato de litio 10.0 gr 10.0 gr 10.0 gr 300.0 ml 2000.0 ml 4.0 gr 20 gotas

Preparar por separado 10 grs de eosina en 100 cc de agua destilada; 10 grs de light green S,F en 100 cc de agua destilada. En un recipiente coloque 22.5 ml de solucin de eosina; agregue 450 ml de alcohol de 95%, 5 ml de soln de pardo Bismarck, 450 ml de alcohol de 95%., 4.5 ml de soln de light green y otros 450 ml de alcohol de 95%. Disolver 2 gr de cido fosfotngstico en el mortero y mezclar con el resto de los colorantes, finalmente agregue 10 gotas de carbonato de litio. Filtrar antes de usar. Alcohol acido. 1 ml de HCL EN 100 ml de alcohol etlico de 96% Alcohol amoniacal. I ml de amoniaco con 100 ml de alcohol etlico de 96%

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ndice.
Polticas de operacin, normas y lineamientos.3 rea de tincin..4 Principio y ventaja del mtodo de Papanicolaou.7

Tincin7 Preparacin de soluciones (fundamentos).9 Preparacin de colorantes.10 Cuidados y conservacin de los colorantes..14 Preparacin de la batera de tincin y su mantenimiento15 Funcin general y especifica de los colorantes y reactivos..18 Problemas con la tincin22 Mtodos de coloracin24 Observaciones (en los reactivos).27 Reactivos (etiquetado).28 Identificacin de los cdigos informativos de peligro, proteccin.31 Almacenamiento.33 Frases de riesgo y seguridad (OIT).38 Reglas bsicas de seguridad en el laboratorio..45 Historia de colorantes y formulas para prepararlos..48 ndice54 Bibliografa55

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Bibliografa.
Qumica General Aplicada. Instituto Politcnico Nacional. Unidad Profesional Interdisciplinaria de Biotecnologa 2006. Tincin e interpretacin de la muestra de Citologa Cervical 2006. Procedimientos para diagnostico en citologa crvico-vaginal. Instituto Nacional se Salud. Lima Per 2000 y 2005. Procedimientos de laboratorio de Citologa. Organizacin Mundial de la Salud 2002. Soluciones de Papanicolaou, soluciones polcromas Merck. Introduccin al Citodiagnstico. U de G. Gustavo Lpez Amado. Mtodos histotecnolgicos de AFIP www.cdc.gov/ncidod/hip/Isolat/isolat.htm www.cdc.gov/od/ohs/biosfty/bmbl4/bmbl4toc.htm Andrion A, Pira E. Whats new in maneging health hazards in pathology departments. Pathol Res Pract 1994;190 (12:1214-23 Roy DR. Histology and pathology laboratorios. Chemical hazard prevention an medical/health surveillance. AAOHN J 1999;47(5):199205. Papanicolaou, GN: A new procedure for staining vaginals smears. Science, 95:438-439,1942. Bales CE, Durfe GR. Cytologic Techniques. En: Koss LG, Editor. DIagnostic Cytology and its Histologics basis. Vol 2. 4ta ed. Philadelphia: JB Lippincott Co.:1992 p 1481-1484. Homquist MD.Cytopreparatory Techniques. En Keebler CM, Somrak TM, EDITORES. The Manual of Cytotechnology 7 edicin. Chicago SACO press 1993 p 411-448 SEALAB. Identificacin de cdigos de reactivos.

Guadalajara Jalisco Mxico. Septiembre 2008 Sugerencias www.elyellizabetheli@gmail.com 55

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