INFORME DE LABORATORIO No.

I TITULACION DE AMINOACIDOS

Presentado por: DIANA BOLAOS JULIAN ACOSTA GABRIEL VALENCIA Presentado a: IVAN REVELO SALAZAR Ing. De Alimentos

UNIVERSIDAD DE NARIO FACULTAD DE INGENIERIA AGROINDUSTRIAL INGENIERIA AGROINDUSTRIAL SAN JUAN DE PASTO 2004

INFORME DE LABORATORIO No. I TITULACION DE AMINOACIDOS

Presentado por: DIANA BOLAOS JULIAN ACOSTA GABRIEL VALENCIA

UNIVERSIDAD DE NARIO FACULTAD DE INGENIERIA AGROINDUSTRIAL INGENIERIA AGROINDUSTRIAL SAN JUAN DE PASTO 2004

INTRODUCCION

Para nosotros como estudiantes de Ingeniera Agroindustrial es importante saber los diferentes compuestos y caractersticas de las materias primas que utilizaremos en la elaboracin de los diversos productos transformados.

Sabiendo que una de las fuentes fundamentales de alimentacin humana como animal se centra en el consumo de protena, nos vemos en la necesidad de averiguar las unidades estructurales bsicas como son los aminocidos, los cuales tienen ciertas caractersticas que nos ayudan a la identificacin de los mismos y as poder saber que alimento los contiene y en que proporcin estn presentes; ya que algunas veces tenemos algn tipo de materia prima y nos vemos en la necesidad de saber que clase de aminocidos presenta.

OBJETIVOS

Conocer las propiedades cido base que presentan los aminocidos y saber que utilidad le podemos dar. Partiendo de una titulacin cido base identificar cuatro aminocidos desconocidos. Saber la importancia que tiene la identificacin de un aminocido en la Agroindustria. Conocer los grupos disociables que presentan estos aminocidos (tericos). Comprender porque esta determinado el punto isoelectrico de un aminocido.

REACTIVOS PREVIOS Preparacin de soluciones. Se realiz loscalculos para preparar 50 ml de las soluciones en agua: Solucin de cido clorhidrico (HCl) 1.0 N (25 ml). Solucin de aminoacido polar y/o Hidrofilico 0,05 N a pH 1.5 (50 ml) Solucin de Hidrxido de Sodio (NaOH) 0,012 y 2,0 N MATERIALES Y EQUIPOS 1 Agitador magntico 1 /2 " x 5 /16" 1 Balanza Analtica 1 Botella lavadora con agua de 500 ml 4 Bulbos para pipeta Pasteur 1 Bureta de 50 ml 1 Electrodo convinado para hidrgeno 1 Embudo de talle largo 1 Espatula 1 Espatula micro 3 Matraces Volumtricos de 25 ml 2 Matraces volumtricos de 50 ml 1 Parrilla magntica 1 Pinza para Bureta 4 Pipetas Pasteur 3 Pipetas Serolgicas de 5 ml 1 Potencimetro 1 Probeta de 50 ml 1 Soporte Universal 1 Termmetro de -10 a 200C 4 Vasos de precipitados de 30 ml 6 Vasos de Precipitados de 50 ml 1 Vaso de precipitados de 100 ml 1 Vaso de precipitados de 250 ml REACTIVOS Y SUSTANCIAS Acetona (MW 58.08 g / mol) cido Clorhidrico concentrado ( MW 36.47 g / mol) Agua Destilada (MW 18.016 g / mol) Bicarbonato de sodio (MW 84.00 g / mol) Etanol (MW 46.07 g / mol) Fenolftalehina (MW 318.31 g / mol) Hidrxido de Sodio (MW 40.01 g /mol) Solucin pH 1.5 de aminocido 0,05 M Solucin estandar pH 4 Solucin estandar pH 7

PROCEDIMIENTO

Teniendo 5 ml de cada una de las cuatro muestras de aminocidos (M1, M2, M3 y M4) cada una en su respectivo vaso de precipitados se procedi a medir el PH de cada una de las muestras con el Peachmetro. Se realiz el montaje del equipo de titulacin, el cual anterior a la practica se limpio con agua y jabon y se procedi a purgar con NaOH 0,012 N luego se aadi 1 gota de Fenolftaleina a cada muestra de aminocidos; se realiz la titulacin de la muestra M1 con NaOH 0.012N y se anoto los mililitros requeridos o utilizados de NaOH 0.012 N, para neutralizar el aminocido respectivo, despus de la titulacin se volvi a purgar la bureta se empeso a titular con NaOH 2N cada una de las muestras M2, M3 y M4, anotando tambien los mililitros requeridos para cada miestra; finalmente se tomo todas las muestras tituladas y se les midio el PH, los resultados obtenidos los expresaremos en la tabla 1 de los resultados.

MARCO TEORICO AMINOACIDOS Son sustancias cristalinas, casi siempre de sabor dulce. Son las unidades estructurales bsicas de las protenas. Los aminocidos constan de un grupo amino (-NH2), un grupo carboxilo(-COOH), un tomo de hidrogeno y un grupo distintivo R (cadena lateral), unidos al tomo de carbono (adyacente a un carboxilo) as:

Los aminocidos son las unidades elementales constitutivas de las molculas denominadas Protenas. Son pues, y en un muy elemental smil, los "ladrillos" con los cuales el organismo reconstituye permanentemente sus protenas especficas consumidas por la sola accin de vivir. Los alimentos que ingerimos nos proveen protenas. Pero tales protenas no se absorben normalmente en tal constitucin sino que, luego de su desdoblamiento ("hidrlisis" o rotura), causado por el proceso de digestin, atraviesan la pared intestinal en forma de aminocidos y cadenas cortas de pptidos. Esas sustancias se incorporan inicialmente al torrente sanguneo y, desde all, son distribuidas hacia los tejidos que las necesitan para formar las protenas, consumidas durante el ciclo vital. Se sabe que de los 20 aminocidos proteicos conocidos, 8 resultan indispensables (o esenciales) para la vida humana y 2 resultan "semiindispensables". Son estos 10 aminocidos los que requieren ser incorporados al organismo en su cotidiana alimentacin y, con ms razn, en los momentos en que el organismo ms los necesita: en la disfuncin o enfermedad. Los aminocidos esenciales ms problemticos son el triptfano, la lisina y la metionina. Es tpica su carencia en poblaciones en las que los cereales o los tubrculos constituyen la base de la alimentacin. Los dficit de aminocidos esenciales afectan mucho ms a los nios que a los adultos. Hay que destacar que, si falta uno solo de ellos (aminocido esenciales) no ser posible sintetizar ninguna de las protenas en la que sea requerido dicho aminocido. Esto puede dar lugar a diferentes tipos de desnutricin, segn cual sea el aminocido limitante. El conjunto de los aminocidos esenciales slo est presente en las protenas de origen animal. En la mayora de los vegetales siempre hay alguno que no est presente en cantidades suficientes. Se define el valor o

calidad biolgica de una determinada protena por su capacidad de aportar todos los aminocidos necesarios para los seres humanos. La calidad biolgica de una protena ser mayor cuanto ms similar sea su composicin a la de las protenas de nuestro cuerpo. De hecho, la leche materna es el patrn con el que se compara el valor biolgico de las dems protenas de la dieta.

PROPIEDADES CIDO-BASE DE LOS AMINOCIDOS Los aminocidos son slidos cristalinos, incoloros, no voltiles, que funden con descomposicin a temperaturas superiores a 200. El carcter salino de los aminocidos puede explicarse con facilidad si a los aminocidos en estado slido o en solucin neutra se les asigna una estructura inica dipolar. Como los aminocidos contienen grupos cidos y bsicos en la misma molcula, puede postularse una reaccin de neutralizacin intramolecular, la cual conduce a la formacin de una sal. El grupo carboxilo pierde un protn, formando un ion carboxilato y el grupo amino se protona para dar un ion amonio. A esta estructura se le llama ion dipolar o zwiterin. La forma predominante del aminocido depende del pH de la solucin. En una solucin bsica, el grupo NH3+ se desprotona para formar un grupo amino libre y la molcula tienen una carga negativa general. En soluciones cidas, el grupo COOse protona para formar un grupo COOH libre y la molcula tiene una carga positiva completa. El pKa es el logaritmo negativo de la constante de un grupo ionizable. Cuando la proporcin de la concentracin de la forma sin protonar a la protonada es igual a 1, el logaritmo de base diez se cancela y pKa puede definirse como el pH al que las concentraciones de las formas protonada o sin protonar de una especie ionizable es igual. El pKa es igual al pH tambin cuando el grupo ionizable est en su mejor capacidad amortiguadora. PUNTOS ISOELCTRICOS Y CONSTANTE DE IONIZACIN El pH al cual un aminocido existe en solucin como sal interna recibe el nombre de pH isoelectrico o sea que el aminocido es elctricamente neutro y no muestra tendencia a emigrar a algn electrodo. El pH isoelctrico de los aminodios neutros vara de 4.8 a 6.3, el de los cidos flucta entre 2.8 y 3.2 y el de los aminocidos bsicos escila entre 7.6 y 10.8. El valor de pKa del grupo carboxilo alfa de los aminocidos neutros es aproximadamente 2-3, y el del grupo amino alfa puede determinarse promediando los valores de pKa de los dos grupos ionizables. Los aminocidos que contienen cadenas laterales cidas o bsicas poseen un pKa caracterstico, el cual se determina titulando el aminocido con soluciones valoradas de cido y base.

Hay sustancias que pueden actuar como cidos o bases a los cuales se les da el nombre de anfolitos. Los aminocidos son un ejemplo de estas sustancias. Los aminocidos son cidos dbiles por lo que su disociacin alcanza el equilibrio. Este equilibrio tiene una constante que es Ka. Adems de estos grupos, muchos aminocidos tienen otros grupos ionizables, que introducen otros pasos o valores de pKa a sus curvas de titulacin. Estos grupos no incluidos en los enlaces peptdicos son los que determinan las propiedades inicas de las protenas. Para grupos diaminomonocarboxlicos la titulacin de cido a base va del grupo carboxlico, el grupo -amino y el grupo amino distal. Para cidos monoaminodicarboxlicos su titulacin va del grupo -carboxlico, grupo carboxlico distal y por ltimo el grupo -amino. CURVAS DE TITULACIN En una titulacin, luego de la neutralizacin completa, las curvas e aproximan al pH 1 y 13 asintticamente. Las curvas experimentales se debe tomar en cuenta la cantidad de cido o base usados en la titulacin del solvente. Cuando hay una titulacin y el pH se acerca al pKa, la mitad del equivalente de cido se ha consumido y el grupo carboxlico est medio ionizado y es ms efectivo como amortiguador. La adicin de cido resulta en la titulacin de la solucin. La titulacin del grupo amonio con base sigue una curva a la regin alcalina. Para cada titulacin la concentracin de las especies protonadas o no protonadas de cada in a cualquier pH se calcula con la ecuacin de Handerson-Hasselbach. Muchos aminocidos contienen grupos carboxlicos y amino y valores de pKa parecidos a los de la glicina. SEPARACIN Y ANLISIS DE MEZCLAS DE AMINOCIDOS A menudo se tienen mezclas de aminocidos que se desean analizar. Antes de poder cuantificar estas mezclas es necesario separarlas. Tres mtodos de separacin han sido frecuentemente empleados en los laboratorios: Cromatografa de capa fina. Este mtodo se basa en la separacin de las molculas adsorbidas a una capa muy delgada de gel de slice, mediante el flujo de una columna de solvente que se deja ascender mediante capilaridad. La separacin se realiza en base a la polaridad de las molculas y la mezcla de solventes ms empleada ha sido butanol:agua:ac. actico (4:1:1, ms detalles). Cromatografa lquida en columnas de intercambio aninico. En este caso, los aminocidos se hacen pasar por una columna de resina con un grupo catinico. Los aminocidos, segn su carga se van a unir a la columna y luego, mediante un cambio gradual en el pH del solvente que se aplica a la columna, se va eluyendo cada aminocido a un pH distinto (segn su punto isoelctrico). Como algunos

aminocidos son ms dificiles de separar que otros, a menudo es necesario emplear una columna corta para separar un grupo de aminocidos y una columna larga para separar los aminocidos restantes (ms detalles). Cromatografa lquida de alta resolucin en columnas de fase reversa. Este mtodo consiste en aplicar los aminocidos disueltos en una fase acuosa acidificada a una columna de slice unida a una cadena hidrocarbonada. Los aminocidos, segun su polaridad se van a unir a la columna y entonces el eluyente se mezcla gradualmente con cantidades cada vez mayores de un solvente menos polar que el agua. Los aminocidos van siendo lavados de la columna conforme la polaridad del solvente baja lo suficiente (ms detalles y un cromatograma). Los aminocidos pueden identificarse mediante su reaccin con ninhidrina, mediante su absorbencia UV o mediante fluorescencia (si estn marcados con un grupo fluorescente), ya sea en la placa de slice, o conforme eluyen de la columna.

APLICACIN AGROINDUSTRIAL EN LA FORMULACIN Y DISEO DE NUEVOS PRODUCTOS O MEJORAMIENTO DE PRODUCTOS YA EXISTENTES. APLICACIN 1 Tras el parto, todas las hembras de cualquier especie de mamferos segregan leche para nutrir a sus cras. El producto de la secrecin durante las primeras fases de la lactacin recibe el nombre de CALOSTRO. Se trata de un liquido amarillo y espeso cuya composicin difiere tanto en el aspecto cuantitativo, como el cualitativo de la leche en especial en lo que se refiere a sus compuestos nitrogenados. El calostro del ganado bovino no solo ofrece mayor riqueza proteica sino que tambin difiere de la leche normal en la relacin que guardan entre s las distintas protenas; es ms rica en albminas y globulinas y contiene ms amoniaco. En el calostro se han identificado inmunoglobulinas, a las que se cree responsables de la inmunidad frente a ciertas infecciones que el mamfero recin nacido adquiere al mamar. PROBLEMA Despus de que la vaca ha dado cran esta puede tener complicaciones u afecciones (como fiebre en la ubre, mastitis, entre otras ) que alteren los pasos de lactancia normales; tras este problema , la vaca no puede amamantar a su cra y transferirle a esta los anticuerpos y nutrientes necesarios para que resista a los ataques de enfermedades y desnutricin por esta razn es conveniente obtener un producto a partir del calostro de la vaca fortalecido, que contenga adems de las inmunoglobulinas que contiene la leche de vaca las inmunoglobulinas que contiene el calostro y por ende su composicin de aminocidos que van a ser posible que el animal adquiera inmunidad a las enfermedades y obtenga de manera casi natural lo que a el le falta. El producto propuesto es leche de vaca fortalecida con un contenido adecuado de inmunoglobulinas que complementen las capacidades inmunolgicas de su cra Aprovechando as las propiedades del Acido L Glutminico cuya funcin tiene gran importancia en el funcionamiento del Sistema Nervioso Central y acta como estimulante del sistema inmunologico, como tambin las propiedades de la lisina que es uno de los ms importantes aminocidos porque, en asociacin con varios aminocidos ms, interviene en diversas funciones, incluyendo el crecimiento, reparacin de tejidos, anticuerpos del sistema inmunolgico y sntesis de hormonas. INMUNOGLOBULINAS Las Inmunoglobulinas son protenas anticuerpo altamente especficas que son producidas en respuesta a antgenos especficos. Su propsito es reconocer cuerpos extraos invasores como las bacterias y mantener al organismo libre de

ellos. Los anticuerpos o inmunoglobulinas son producidos por los linfocitos B en su forma unida a la membrana. Este anticuerpo unido a la membrana constituye el receptor de antgenos de la clula B. Los linfocitos B secretan anticuerpos slo tras su diferenciacin, inducida por la interaccin del antgeno con el anticuerpo de membrana de este tipo celular. Esta interaccin constituye la fase de reconocimiento de la inmunidad humoral. Una inmunoglobulina tpica consta de una estructura cuaternaria formada por cuatro cadenas polipeptdicas: dos cadenas largas idnticas llamadas pesadas (de unos 55 o 70 KDa cada una) y dos cortas llamadas ligeras (24 KDa). Ambos tipos de cadenas contienen una serie de unidades homlogas repetidas, de unos 110 aminocidos de longitud, plegadas independientemente para formar un motivo globular comn conocido como dominio de las inmunoglobulinas (dominio Ig). Estos dominios Ig contienen dos capas de hoja plegada &beta con 3-4 porciones de cadena polipeptdica antiparalela. La superfamilia de las inmunoglobulinas engloba a una serie de protenas de relevancia inmunitaria que contienen regiones con el mismo motivo, y que estn relacionadas estructuralmente. Se cree que todos los segementos gnicos que codifican los dominios Ig han evolucionado de un mismo gen ancestral. Las clases de anticuerpos se denominan isotipos. La clasificacin se ha realizado en funcin de diferencias fsico-qumicas, como masa molar, carga y solubilidad, as como por su comportamiento como antgenos. Estos isotipos, a su vez se pueden dividir en subtipos en algunos casos.

Inmunoglobulina G (IgG) Subtipos: IgG1, IgG2, IgG3, IgG4 Inmunoglobulina A (IgA) Subtipos: IgA1, IgA2 Inmunoglobulina M (IgM) Inmunoglobulina D (IgD) Inmunoglobulina E (IgE)

APLICACIN AGROINDUSTRIAL 2 Producir un nuevo producto a partir de la calabaza PUR DE CALABAZA, como alimento directo; ya que la utilizacin de la calabaza se ha visto reducida por la falta de innovacin y desconocimiento de sus propiedades tanto alimentadrias como medicinales, haciendo que este producto pase de ser tipico de la regin a complementar la dieta alimentaria del pais y posiblemente del extranjero.

ESTE PRODUCTO PRESENTA LAS SIGUIENTES CARACTERSTICAS DEACUERDO A LA COMPOSICIN DE LA CALABAZA. Componentes activos: Aminocidos: alanina, arginina, cucurbitina, cistina, glicina, histidina, isoleucina, lisina. ( Frutos y semillas ) cidos: linoleico, asprtico (Es muy importante para la desintoxicacin del Hgado y su correcto funcionamiento. El cido L- Asprtico se combina con otros aminocidos formando molculas capases de absorber toxinas del torrente sanguneo), oleico y palmtico ( Flores, frutos y semillas ) saliclico ( semillas) Vitaminas: Vitamina A y B ( Niacina, Tiamina) - Flores, frutos y semillas. Grasas: lecitina (semillas) Fibras ( frutos y semillas) Minerales: calcio, cobalto, boro, magnesio, zinc, potasio, hierro...(frutos) Azcares: sacarosa. Nos encontramos con un alimento que posee un gran valor diurtico, por su alto contenido en fibras y su escaso poder calorfico, siendo muy aconsejable su uso en casos de obesidad y estreimiento. Es muy rico en vitamina A y tambin contiene vitamina C. ES MUY RICA EN AMINOCIDOS CUYA CONTRIBUCIN A LA SALUD PUEDE SER LA SIGUIENTE: La presencia de la alanina contribuye a la sntesis de las protenas. La arginina interviene en el crecimiento de los msculos y en la reparacin de las heridas. El cido asprtico es muy til en la eliminacin del amoniaco. La glicina favorece el sistema inmunitario. La histidina es un estimulante y vasodilatador, por lo que es aconsejable comer esta planta en casos de presin arterial alta. La isoleucina es necesaria para alcanzar un crecimiento adecuado y la lisina interviene tambin en el crecimiento y en la formacin de las hormonas y anticuerpos Valor alimentario del calabacn por cada 100gr. Caloras 24 gr. Protenas1,2 gr. Grasas0,25 gr. Fibra0,46 gr. Hidratos5,5 gr. PROPIEDADES MEDICINALES Uso interno

Vermfugo y tenfugo: ( Para eliminar las lombrices intestinales y durante mucho tiempo para eliminar la tenia. Aqu influye el aminocido cucurbitina) ( En el primer caso pueden comerse las semillas sin cscara a voluntad. Para expulsar la tenia se recomienda machacar 50 gr. de semillas frescas, mezclarlas con azcar o miel y con agua. Comer la mezcla como nica comida del da, repartida en tres porciones correspondientes al desayuno, merienda y cena. Despus de una horas de reposo, se deben controlar las deposiciones para ver si se ha expulsado el parsito. En caso de no haberlo hecho, repetir el tratamiento otro da.) Por otra parte, la ingestin de semillas , por su contenido en cido saliclico, ayuda a prevenir la aparicin de enfermedades reumticas. Laxante: Favorece el transito intestinal con la ventaja de no ser irritante para el aparato digestivo Anti-prosttica: Muy til para el tratamiento de la hipertrofia prosttica benigna. Al poseer un componente denominado cucurbitacina que influye en la dihidrotestosterona , evitando que esta produzca el aumento de la prstata. Al mismo tiempo, al tratarse de una planta con propiedades diurticas, permite vaciar la vejiga urinaria, paliando los efectos desagradables de esta patologa.

APLICACIN 3 DERIVADOS PROTEICOS DE LA INDUSTRIA AZUCARERA A partir de la industria azucarera se obtienen varias fuentes proteicas de amplia difusin comercial. Una se recupera como subproducto en la produccin de alcoholes: levadura Saccharomyces. La otra, llamada levadura torula, se fabrica mediante la biomasa proteica que se extrae de la reproduccin continua de Candida spp desarrollada en mieles finales como sustrato. Esta ltima se puede utilizar en forma de alimento directo o como suplemento alimenticio, para los concentrados comerciales. LEVADURA TORULA El uso ms generalizado de la levadura torula en la alimentacin porcina es como fuente de vitaminas del complejo B y lisina por el alto contenido de estos nutrientes en aquella. A pesar de ser una fuente proteica (45-50% PB en MS) no se utiliza como tal (con excepcin de Cuba) y ha sido bajo el nivel de inclusin en las raciones, entre 3 y 5%. El problema fundamental que limita el uso de la levadura torula como fuente proteica, es su alto costo de produccin. Se necesitan 4-4,5 toneladas de miel final por cada tonelada de levadura seca que se produzca, de manera que mientras la miel final tenga valor competitivo como sustrato para la produccin de alcoholes, se

exporte o se utilice directamente como suplemento en la alimentacin animal, es difcil lograr precios competitivos para la levadura torula como fuente proteica. No obstante, si se enfoca como estrategia alimentaria en pases productores de azcar que no disponen de fuentes proteicas nacionales como por ejemplo la soya, la situacin puede reconsiderarse. A partir de la caa es posible producir, con un rendimiento de 60 t/h, alrededor de 5 t/h de levadura. Si adems se cuenta con una infraestructura para la produccin de levadura torula, con tecnologas que simplifiquen los procesos productivos, los costos de produccin se reducen considerablemente. Tabla 1: Composicin qumica de la levadura torula Indicador (% ) Materia seca 94,0 Protena bruta 45-53 (N x 6,25) Cenizas 7-10 Extracto etreo 1,0-1,5 Fibra bruta Energa bruta 19,7 (MJ/kg MS) La composicin qumica de la levadura torula, segn diferentes fuentes se muestra en la Tabla 1. La torula es una fuente proteica de considerable riqueza en nitrgeno. Estn presentes en su composicin qumica tres aspectos importantes que deben ser considerados por los nutricionistas: Esta levadura como todo organismo de alta velocidad de crecimiento tiene una concentracin relativamente elevada de nitrgeno no proteico, en especial, de cidos nucleicos. La composicin aminoacdica de la levadura torula demuestra su riqueza en lisina y una relativamente baja concentracin de aminocidos sulfurados (Tabla 2)

Tabla 2 Composicin de aminocidos de la levadura torula obtenida a partir de mieles finales de caa Aminocidos gr (% ) Alanina Arginina Ac. Asprtico Ac. Glutmico Glicina Histidina Isoleucina Leucina Lisina Metionina Fenilalanina Prolina Serina Treonina Tirosina Valina 2,72 1,93 3,86 5,54 2,08 0,68 2,02 2,45 2,99 0,65 1,70 1,58 2,16 2,03 1,49 2,15 3,15 - 3,16 1,77 - 1,86 4,18 - 4,33 5,46 - 6,35 1,98 - 2,10 0,81 - 0,91 3,07 - 3,39 2,22 - 2,69 3,32 - 3,61 0,0 - 0,66 2,48 - 2,63 1,55 - 1,71 2,36 - 2,42 2,20 - 2,35 1,80 - 2,05 1,71 - 1,79

BIBLIOGRAFA

BAUM, STUART. Introduccin a la Qumica Orgnica y Biolgica. 1 ed. Compaa Editorial Continental, S.A. de C.V. Mxico (1981) 538pp. WADE, L. Qumica Orgnica. 2 ed. Prentice-Hall Hispanoamericana, S.A Mxico (1993) P.p. 1312 FISHER H. J. y HART F. L. Analisis moderno de los alimentos, Ed Acribia, Espaa 1991, Pag 620. FENNEMA OWEN R. Quimica de los Alimentos, Ed Acribia, Espaa 1993, Pag 1095. PAGINAS WEB.

RESULTADOS

Datos Tericos :

TABLA 1. Titulacin de tres de los AA problema con NaOH 0.1 M

mm NaOH gastados titulacin 0 3 6 9 12 15 18 21 24 27 30 33 36 39 42 45 48 51
PH

Ac. Asprtico
pK1 pK2 pK3 PH

Ac. Glutmico
pK1 pK2 pK3 pH

Leucina
pK1 pK2

2 2 2 2.3 3.1 3.2 2.09

2 2.1 2.4 2.6 2.19

2 2.4 2.8

2.36

3.1 3.7 3.1 8.8 9.2 9.8 10.7

3.5 4 8.6

3.86

4.3 9.8 10.7 9.67

4.25

9.64

9 9.8 10.7

9.62

Los datos anteriormente anotados fueron obtenidos de un informe de un laboratorio de Quimica Analtica, para cido aspartico, Leucina, Glicina, cido glutamico. Tabla 2 Valores de pKa y pI de los aminocidos a (25 C) Aminocido Alanina pKa1 ( -COO-) 2,35 pKa2 ( -NH3) 9,69 pKaR3 (R=cadena lateral) 6,02 pI

Arginina Asparagina A. Aspartico Cistena Glutamina A. Glutmico Glicocola Histidina Isoleucina Leucina Lisina Metionina Fenilalanina Prolina Serina Treonina Triptofano Tirosina Valina

2,17 2,02 2,09 1,96 2,17 2,19 2,34 1,82 2,36 2,36 2,18 2,28 1,83 1,99 2,21 2,71 2,38 2,20 2,32

9,04 8,80 9,82 10,28 9,13 9,67 9,78 9,17 9,68 9,64 8,95 9,21 9,24 10,6 9,15 9,62 9,39 9,11 9,62

12,48

3,86 8,18 4,25

6,00

10,53

10,07

10,76 5,41 2,97* 5,07* 5,65 3,22* 6,06 7,58* 6,02 6,00 9,74 5,75 5,53 6,30 5,68 6,16 5,89 5,65 5,97

* en estos aminocidos la ionizacion del grupo R ocurre antes que la ionizacion del
grupo -NH3

Datos Experimentales : Tabla 3 PH inicial 0.73 0.61 0.67 0.55 ml NaOH 0,012 N gasto 198.7 ml NaOH 2 N gastados 1.4 2.1 2 PH final 8.54 8.37 8.48 8.76 T promedio C 18.7 18.7 18.9 19

Como podemos ver en la tabla se trabaj con dos concentraciones normales; lo cual nos afect en los ml gastados en las titulaciones, para corregir esto, homogeneizamos las concentraciones a 2 N as: C1 V 1 = C 2 V 2 C1 = 0.012 N V1 = 198.7 ml C2 = 2 N V2 = ?

V2 = (C1 V1 / C2) = 0.012 x198.7 / 2 = 1.19 ml Teniendo homogeneizadas las concentraciones en Normalidad se las pas a Molaridaad para facilitar los analisis:

2N = 2 eq - gramo de NaOH / 1 L de solucin y como Molaridad = M= moles de soluto / L solucin Para obtener el numero de moles presentes en 2 eq gramos basta tener en cuenta la siguiente regla "EL PESO DE UN EQUIVALENTE GRAMO DE UN HIDRXIDO O BASE SE HALLA DIVIDIENDO EL PESO DE UNA MOL POR EL NUMERO DE OH QUE APARECEN EN LA FRMULA", y puesto que el nmero de OH que aparece en la frmula es 1, existir igual cantidad de equivalentes gramo que de moles.

2 eq gramo = 2 moles de NaOH 2N = 2M mililitros de NaOH 2 M gastados en la titulacin : M1 = 1.19 ml M3 = 2.1 ml M2 = 1.4 ml M4 = 2 ml

Pasamos los datos anteriores (concentracin 2 M) a concentracin de 0.1 M para poder compararlos con los datos tericos.

Molaridad Tabla 4 V1 C1 C2 V2 M1 1.19 ml 2M 0.1 M ? ml M2 1.4 ml 2M 0.1 M ? ml M3 2.1 ml 2M 0.1 M ? ml M4 2 ml 2M 0.1 M ? ml

Aplicando la frmula C1 V1 = C2 V2 Se obtuvieron los siguientes datos : Tabla 5 MUESTRAS M1 M2 M3 M4 ml NaOH 0,1 M 23.8 28 42 40

COMPARACIN DE DATOS EXPERIMENTALES VS TERICOS

Para esta comparacin no solo nos basaremos en los datos anteriores sino en las caractersticas qumicas de cada uno de dichos aminocidos; utilizando como base sus grupos ionizables como son el COO- , NH3 y el radical R. Sabiendo que el cido Asprtico y el Ac, Glutmico necesitan de mayor cantidad de NaOH 0,1 M que la Leucina y Valina. Entonces hacemos la comparacin de la tabla 1 con la tabla 2 as: Tomaremos el pH final con el punto en el cual se ioniza el grupo NH2 .
-

M1, gast 23,8 ml no se tiene datos que se parescan a un aminocido que tenga un pK2 cerca de este volumen.

M2, gast 28 ml, debido a que este volumen de titulacin la leucina tiene su pK2 en el rango de 27 - 30 ml podemos afirmar que: M2 = Leucina

M3 gast 42 ml debido a que este volumen de titulacin, el Ac. Aspartico tiene su pK2 en el rango de 45 - 48 ml podemos decir que M3 = Ac. Asprtico (ya que es el que ms ml gast).

M4, gast 40 ml, y el Ac Glutmico tiene su pK2 en el rango de 33 - 36 ml afirmamos que M3 = Ac. Glutmico (ya que es el que ms se acerca a este dato).

Por descarte podemos decir que M1 = Valina (de este aminocido no tenemos valores tericos).

CONCLUSIONES

En conclusin los aminocidos de las muestras son:

M1 = VALINA M2 = LEUCINA M3 = Ac. ASPARTICO

M4 = Ac. GLUTAMICO

Los resultados aqu expuestos y determinados por nosotros no son muy confiables ya que la titulacin relizada para conocer a cual aminocido

correspondia cada muestra comenz con un pH inicial de 0.65; mientras que los datos tericos comienza con un pH inicial de 2