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Segundo Laboratorio
Agua, pH y Acción Amortiguadora de los Aminoácidos
I. Introducción
Por otro lado tenemos que una de las múltiples funciones de los aminoácidos es que,
tanto aminoácidos libres, así como, algunos que aún formando parte de las proteínas,
pueden potencialmente funcionar como buffers. Esto se debe gracias a que los
aminoácidos en un medio acuoso contienen un grupo carboxilo que funciona como
ácido débil, y un grupo amino que funciona como base débil.
II. Objetivos
III. Procedimiento
b) Beaker 2 (Problema 2): 8ml de agua destilada + 1ml de ácido acético + 1ml de
acetato de sodio + 2 gotas de anaranjado de metilo.
b) Beaker 2 (Problema 2): 8ml de agua destilada + 1ml de ácido acético + 1ml de
acetato de sodio + 2 gotas de fenolftaleína.
Se toman los beakers 1 y 2 se procede a titular con gotas de hidróxido de sodio 0.1N
hasta observar un cambio de color en comparación con el beaker 3.
Cuente y anote las gotas utilizadas en cada caso.
1. Se toman 2 beakers y se agrega 10ml de glicina 0.1N a cada uno y se procede a medir
el pH de la misma (pH basal)
2. Se toma uno de los beakers y con el electrodo del pHmeter dentro de la solución, se
procede a titular con HCl 0.1N de la siguiente manera:
3. Se toma el otro beaker con glicina y con el electrodo del pHmeter dentro de la
solución, se procede a titular con NaOH 0.1N de la misma forma descrita en el paso
anterior.
pH Basal de Glicina
Volúmen pH Volúmen pH
HCl NaOH
Laboratorio de Bioquímica y Biología Molecular I
Tercer Laboratorio
Actividad de la Anhidrasa Carbónica y Acidez Titulable
I. Introducción
Uno de los órganos que contribuye con el mantenimiento del pH a nivel sistémico
son los riñones durante la formación de la orina. En el laboratorio podemos determinar
la cantidad de H+ añadidos al líquido tubular (orina) que se han combinado con el
amortiguador de fosfato y otros amortiguadores orgánicos. El procedimiento consiste en
titular la orina con una base fuerte como NaOH hasta un pH de 7.4, que es el pH
normal del plasma. El número de miliequivalentes de NaOH necesarios para hacer que el
pH de la orina vuelva a 7.4 es igual al número de miliequivalentes de H+ añadidos a la
orina que se han combinado con el amortiguador de fosfato y otros amortiguadores
orgánicos. El ácido titulable medido no incluye a los H+ unidos a NH4+ porque el pK
de la reacción del amoníaco/amonio es de 9.2 y sólo llevamos con NaOH hasta un pH
de 7.4.
II. Objetivos
NOTA: Todos los tubos se preparan y se mantienen en hielo para lograr y mantener
una temperatura de 4 grados centígrados.
4. Luego se colocan los tubos en una corriente de CO2 y se tomará el tiempo necesario
para que el contenido de cada tubo de ensayo cambie de color.
3. Con el electrodo del pHmeter dentro del beaker se titulan los 25 ml de orina
con NaOH 0.1N hasta llegar a un pH de 7.4.
I. Introducción
Las proteínas son las biomoléculas más abundantes después del agua y desempeñan
un gran número de funciones, que las caracterizan como componentes escenciales e
indispensables para la vida. Virtualmente todos los procesos en los organismos vivos
dependen de este tipo de moléculas. Por ejemplo, las enzimas y las hormonas
polipeptidicas dirigen y regulan el metabolismo en el cuerpo, mientras que las proteínas
contractiles del músculo permiten el movimiento. En el hueso, forman el esqueleto
necesario para el depósito de cristales de calcio y fosfato, actuando como lo hacen las
varillas en el concreto armado. En el torrente sanguíneo, las proteínas como la
hemoglobina y la albúmina plasmática son moléculas escenciales para la vida, igualmente
las inmunoglobulinas participan en la destrucción de bacterias y virus. En resumen, las
proteínas realizan una increible diversidad de funciones.
Las proteínas no son más que polímeros de 20 L alfa aminoácidos unidos mediante
enlaces peptídicos y van a mostrar una amplia variación en sus tamaños, formas y
propiedades. Sus propiedades químicas y fisiológicas dependen no sólo de su tamaño y
forma, sino tambien de las propiedades de los aminoácidos que las componen.
II. Objetivos
III. Procedimiento
2. Reacción de Biuret: La reacción de Biuret está dada por aquellas sustancias cuyas
moléculas contienen 2 grupos carbamino (-CO.NH) ligados directamente o a través
de un solo átomo de carbono o nitrógeno. Sustancias similares que contienen en
lugar del grupo carbamino, grupos CS.NH, también responden a la prueba. Esto
implica que compuestos no proteicos que contienen los grupos necesarios
responderán a la prueba. Las proteínas disuelven el hidróxido cúprico del reactivo y
forman compuestos coloreados violeta o violeta-rosado que depende de la naturaleza
de las proteínas.
I. Introducción
La leche es un alimento muy nutritivo, ya que contiene proteínas, lípidos, lactosa, sales
inorgánicas y vitaminas. La caseína es la proteína principal, siendo esta una proteína
conjugada que posee fósforo como grupo prostético.
Como muchas otras proteínas de origen animal, esta es de un alto valor biológico, ya que
posee todos los aminoácidos escenciales para el desarrollo y crecimiento normal del hombre.
II. Objetivos
III. Procedimiento
2) Suspenda el precipitado del paso anterior en 50 ml de etanol al 95% y agite. Filtre con
una gaza o al vacío hasta sacar el máximo de líquido. Guarde el filtrado para la
determinación de fosfatos y cloruros identificandolo como filtrado alcohólico. Repita el
proceso añadiendo 50 ml de una solución alcohol-éter 1:1 y filtre al vacío. Guarde el
filtrado para la determinación de fosfatos y cloruros identificandolo como filtrado
alcohol-éter.
En 3 tubos de ensayo diferentes añada 0.5 gramos de la caseína obtenida y realice las
pruebas de Biuret, Millón y Xantoproteica. Observe y anote los resultados.
Tabla de resultados
I. Introducción
Virtualmente todas las reacciones que ocurren en el organismo están mediadas por
enzimas, proteínas catalíticas que incrementan la velocidad de las reacciones sin que ellas se
consuman durante el proceso que ellas catalizan. Sin enzimas la vida no sería posible ya que
las mismas llevan a cabo funciones capitales relacionadas con la salud y la enfermedad.
Otros factores que afectan la velocidad de las reacciones catalizadas por enzimas son
los cambios en la concentración, ya sea, de los sustratos sobre los cuales actúa la enzima, así
como, cambios en la concentración de la propia enzima. También la cinética enzimática
puede verse afectada debido a la presencia de sustancias inductoras o inhibidoras de la
actividad enzimática.
II. Objetivos
III. Procedimiento
1. Tome 4 tubos de ensayo y agregue a cada uno de ellos 1 ml de solución saliva 1:9 y
luego, lleve cada tubo a la temperatura indicada para cada uno de ellos en el cuadro
que aparece más adelante y deje incubar durante 5 minutos.
1. Tome 7 tubos de ensayo y agregue a cada uno de ellos 1.5 ml de solución saliva 1:9 y
luego, agregue 3 ml de la solución buffer correspondiente a cada tubo (indicado en el
cuadro que aparece más adelante). Deje en incubación durante cinco minutos.
4. Al cabo de los 12 minutos, realice la prueba de Benedict a cada uno de los tubos de
ensayo.
1. Tome 6 tubos de ensayo y agregue a cada uno de ellos 1 ml de solución saliva 2:8,
añada luego, a cada tubo, 1 ml de la sustancia indicada en el cuadro que aparece más
adelante, deje en incubación durante cinco minutos.
3. Proceda a realizar la prueba de Yodo a cada tubo a los 0, 5, 10, y 15 minutos luego de
agregado el almidón.
4. Al cabo de los 15 minutos, realice la prueba de Benedict a cada uno de los tubos de
ensayo.
I. Introducción
II. Objetivos
III. Procedimiento
RESULTADOS
Carbohidrato Molish Benedict Seliwanoff Bial
Glucosa 1%
Maltosa 1%
Manosa 1%
Ribosa 1%
Galactosa 1%
Fructosa 1%
Lactosa 1%
Sacarosa 1%
Agua destilada
I. Introducción
Hay ciertos ácidos grasos poliinsaturados esenciales que deben ser suministrados en la
dieta como lo es el ácido linoleico dándole esto mayor valor nutricional.
Los lípidos se clasifican de varias formas, una de ellas es atendiendo a que posean en
su composición ácidos grasos (Lípidos saponificables) o no lo posean (Lípidos
insaponificables), dividiendose así en dos grupos:
1. Lípidos saponificables
A. Simples
1. Acilglicéridos
2. Céridos
B. Complejos
1. Fosfolípidos
2. Glucolípidos
2. Lípidos insaponificables
A. Terpenos
B. Esteroides
C. Prostaglandinas
Los triglicéridos son los más abundantes en los vegetales y uperio uperiors. Se
acumulan en los depósitos grasos y en las semillas como forma de reserva alimenticia.
II. Objetivos
III. Procedimiento
Los lípidos son insolubles en agua. Cuando se agitan fuertemente en ella se dividen en
pequeñísimas gotas formando una emulsión de aspecto lechoso, que es transitoria, pues
desaparece en reposo por reagrupación de las gotitas de grasa en una capa que, por su menor
densidad, se sitúa sobre el agua.
Por el contrario, las grasas son solubles en disolventes orgánicos, como el éter,
cloroformo, acetona, benceno, etc. Su solubilidad en alcoholes dependerá del tamaño del
mismo así como de su ramificación (a mayor número de carbonos más soluble será el lípido
no así con la ramificación).
Procedimiento:
Tome 10 tubos de ensayo y añada a cada tubo 2 mL de cada una de las siguientes
sustancias o disolventes: Agua destilada, ácido clorhídrico concentrado, benceno,
cloroformo, tetracloruro de carbono, éter, alcohol metílico, alcohol etílico, alcohol
isopropílico, alcohol butílico . A todos los tubos añada 1 mL de aceite. Observe los
resultados.
Es una medida del grado de insaturación de los componentes de una grasa. Será tanto
mayor cuanto mayor sea el número de dobles enlaces (C=C) por unidad de grasa,
utilizándose por ello para comprobar la pureza y la identidad de las grasas. Es la cantidad
(gramos) de yodo absorbidos por 100 gramos de grasa.
Procedimiento:
• Control: - 10 ml de Cloroformo.
- 12 ml de yodo Hanus.
• Experimento: - 10 ml de Cloroformo.
- 12 ml de yodo Hanus.
- 1.0 ml de aceite.
2) Lleve estos dos matraces, debidamente tapados, a la oscuridad por un período de 30 mins.
Agitar ambos matraces cada 5 minutos.
4) Titular el exceso de yodo de cada matraz con tiosulfato de sodio 0.1N hasta que la mezcla
contenida en cada matraz tome una coloración amarillenta. Una vez que esto suceda, tape
cada matraz y agítelo para conseguir que cualquier cantidad de yodo libre quede atrapado en
la capa de cloroformo y se ponga en contacto con la solución de yoduro de potasio.
Cálculos:
Calcule los gramos de yodo absorbidos por cada 100 grs. de grasa.
1) Para esto primero necesitamos saber qué cantidad de yodo se consumió en el matraz
problema. Esto lo conseguimos restando la cantidad de tiosulfato de sodio 0.1N requeridos
por el blanco menos la cantidad de tiosulfato de sodio 0.1N requeridos por el problema ya
que esto representa el tiosulfato equivalente al yodo absorbido por la materia grasa.
Ej. Suponiendo que el matraz control consumió 50 ml de tiosulfato mientras que el experimento sólo
consumió 20 ml : 50-20 = 30ml que representan los ml de yodo consumidos ya que 1 ml de tiosulfato
equivale a 1 ml de yodo.
2) Con una regla de tres busque los mililitros de yodo consumidos por 100 gramos de grasa.
4) Por ultimo debes calcular el número de yodo en base al peso de la grasa, calculando la
misma utilizando la formula de la densidad. D=m/V donde D = densidad, m = masa, V=
volumen. D= 0.916 para la grasas.
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Esta prueba es otra prueba cualitativa que podemos aplicar a los lípidos. Esta nos
permite ver si el tipo de lípido es saponificable (contiene ácidos grasos) o no (no contiene
ácidos grasos).
En los lípidos saponificables nos orienta hacia cuál sería el peso molecular de la
molécula expresando una relación inversa entre esta molécula y el número de saponificación.
Se describe una relación inversa ya que a menor peso de la molécula mayor cantidad de
moléculas existirán en cierta cantidad grasa dada, así que mayor cantidad de ácidos grasos
habrán. Debido a esto último también habrán muchos grupos carboxílicos con los cuales
reacciona el KOH. Por lo tanto, mayor cantidad de KOH consumida dará un número mayor
de saponificación.
Procedimiento:
2) Conecte cada matraz a un condensador de reflujo enfriado por aire y lleve a baño de maría
por 30 minutos. Agite con frecuencia.
3) Añada 1mL de fenolftaleína (indicador de medio básico) a cada matraz y luego titule con
HCl 0.5N para corregir cualquier consumo de álcali del control. Anote los mL consumidos
por cada matraz.
Cálculos:
Calcule los miligramos de KOH necesarios para saponificar 1 gramo de materia grasa.
1) Para esto primero necesitamos saber qué cantidad de KOH que se consumió en el matraz
problema que lo conseguimos restando la cantidad HCl 0.5N consumidos por el blanco
menos la cantidad de HCl 0.5N requeridos por el problema.
Ej. Suponiendo que el matraz control consumió 50 mL de HCl mientras que el experimento sólo consumió
20 mL : 50-20 = 30mL.
2) Como lo deseado es saber los gramos de grasa y no los ml de ella, convierta los mL
consumidos a gramos con la fórmula de la densidad de la grasa: D=m/V donde D =
densidad, m = masa, V= volumen. D= 0.916 para la grasas.
3) Con una regla de tres busque los mililitros de HCl consumidos por 1 gramo de grasa.
Ej. 9.16 gr de grasa (usados en el experimento) ---- 30 mL de HCl consumidos
1 gramos de grasa ---- -x
4) Por ultimo ajuste estos mL de HCl a su equivalente en KOH que es lo que nos interesa.
Esto lo puedes lograr por la siguiente regla de tres:
I. Introducción
Estructura Primaria.
En todas las células vivas hay ácidos nucleicos; en su mayoría están constituyendo las
nucleoproteínas, complejos formados por proteínas básicas (protaminase histonas) y ácidos
nucleicos. Desde que Miescher aislara por vez primera una nucleoproteína, en 1869, se han
puesto a prueba numerosas técnicas para separar los ácidos nucleicos de las proteínas a las
que están unidas. Se sabe que no todos los ácidos nucleicos son iguales; en los tejidos
constituidos por células provistas de grandes núcleos, como el Timo, predomina un tipo de
ácido nucleico, llamado antes ácido timonucleico; en otras células, que tienen núcleos
diminutos, como las levaduras, predomina un tipo distinto: ácido nucleico de levadura. Estos
dos tipos de ácidos nucleicos se denominan hoy, atendiendo a su composición química,
ácido desoxirribonucleico (ADN) y ribonucleico (ARN) respectivamente.
El ADN está fundamentalmente compuesto de fosfato, las bases púricas: adenina y guanina,
las bases pirimídicas: timina y citosina, y el azúcar 2-desoxi-d-ribosa.
El ARN difiere del ADN por contener la base pirimídicas uracilo en lugar de la timina y el
azúcar d-ribosa en lugar de la 2-desoxi-d-ribosa.
Los datos que hoy poseemos ponen de manifiesto la existencia de una fórmula química
básica, común a ambos tipos de ácidos nucleicos y consistente en una cadena o esqueleto
constituido por grupos alternados de fosfato de azúcar furanosa unidos por enlaces regulares
3’5’fosfodiester. Las bases púricas o pirimídicas se unen a este esqueleto o cadena de azúcar–
fosfato a través de enlaces Beta–N–glicósilo en la posición 1’de la ribosa o de la
desoxirribosa.
Estructura Secundaria.
Los diversos estudios fisioquímicos del ADN en solución acuosa han demostrado que se
trata de un polímero del elevado peso molecular (5x10 elevado a la sexta potencia) y que
ofrece una configuración mas bien rígida y distendida. Entre las consecuencias de su elevado
peso molecular y de la rigidez de sus moléculas se destaca la elevada viscosidad de las
soluciones acuosas de ADN. Solución con 10–4 g/ml de ADN, es dos veces más viscosa
que el agua. Otra consecuencia de las citadas propiedades de la molécula de ADN es la gran
facilidad con que las fuerzas de fricción (agitación a gran velocidad, paso a través de una
pipeta o jeringa) reducen su peso molecular por rotura de su cadena. Es prácticamente
imposible obtener a partir de material biológico ADN sin que tenga cierto grado de fricción,
por lo que es muy probable que los pesos moleculares del ADN aislado (5x10 a la sexta
potencia) tengan poco que ver con el tamaño de la molécula del ADN en vitro.
El ADN fibroso aislado tiene un modelo de difracción de rayos X muy neto, indicio
experimental directo de una estructura secundaria muy regular. Watson y Crick propusieron
en 1953 una estructura secundaria del ADN, que dedujeron de éstos modelos de difracción
de rayos X, y que estaban de acuerdo con las observaciones de Chargaff (4), mostrando que
ciertos pares de base de ADN, se presentan en cantidades equimoleculares. Esta estructura
de Watson y Crick está constituida por dos cadenas de ADN que se enrollan helicoidalmente
en torno a un eje central común, originando una molécula de cadena doble y de unos 20
Amgstron de diámetro. Las cadenas de azúcar-fosfato están situadas en la parte externa de
estas hélices orientadas con dirección de enrollamiento a la derecha; las bases púricas y
pirimídicas se encuentran enlazadas por puentes de hidrógeno, en la parte interna de las
citadas hélices, con los planos de sus anillos orientados perpendicularmente al eje central.
Sólo se tolera el apareamiento de bases entre la adenina y la timina o uracilo, en el caso del
RNA, y entre la guanina y citosina.
Nucleoproteínas.
Como se dijo anteriormente, los ácidos nucleicos se encuentran conjugados con proteínas.
Las nucleoproteínas el ADN y ARN pueden degradarse en sus components y ser
identificados por separados.
II. Objetivos
III. Procedimiento
A. Identificación de la Ribosa.
El reactivo de Bial está compuesto por iones férricos, etanol y orcinol. Consiste en la
formación de un producto de color azul-verdoso entre el furfural y el orcinol en medio
clorhídrico. Es específico de pentosas.
C. Identificación de Fosfatos.