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MARIA EMMA CONTIN OLIVEIRA DE ANTONIO

PERMEAO CUTNEA IN VITRO COMO FERRAMENTA AUXILIAR PARA O ESTUDO DE FORMULAES SEMI-SLIDAS DE CETOCONAZOL PARA APLICAES TPICAS

Dissertao apresentada ao Programa de Ps-Graduao em Cincias Farmacuticas PPGCF do Setor de Cincias da Sade, do Departamento de Farmcia da Universidade Federal do Paran UFPR como requisito parcial obteno do grau de Mestre em Cincias Farmacuticas Orientadora: Profa. Dra. Mayumi Eliza O. Sato

CURITIBA 2007

Mayumi, pelo companheirismo de sempre. Ao meu marido Eliseu pela pacincia e dedicao. Aos meus filhos, Fernanda, Lucas e Ricardo, pelas horas em que eu no estive presente. Dedico.

AGRADECIMENTOS
Agradeo a Deus, pela presena constante. Ao Programa de Ps-Graduao em Cincias Farmacuticas, em especial as professoras. Dra. Almeriane Maria Weffort Santos e Dra Mrcia do Rocio Duarte, prezadas coordenadora e vice-coordenadora do mesmo, pela oportunidade proporcionada viabilizando este trabalho de pesquisa, e a sra. Regina Montrezol, secretaria do Programa, sempre pronta a atender com carinho todas as solicitaes feitas. Profa. Dra. Mayumi Eliza Otsuka Sato, pelos conhecimentos, dedicao e amizade transmitidos durante toda a orientao deste trabalho. Ao Prof. Dr. Aguinaldo Jos do Nascimento, pela bondade e pelos preciosos esclarecimentos prestados. Aos Profs.drs. Letcia Carpentieri e Itamar Francisco Andreazza pelo carinho e estmulo a mim demonstrado. Farmacutica Maria da Graa Teixeira de Toledo pela alegria, amizade e ajuda nas anlises. s estagirias, Fernanda Venncio da Silva e Sulyn Fderle, pela amizade e pelo apoio na execuo das tarefas. Aos meus pais, Agostinho Alves de Oliveira e Elizabeth Contin de Oliveira, pelo que me proporcionaram estes anos todos. minha irm Maria Ester de Oliveira Kloss, pelo incentivo e auxlio. Ao meu marido, Eliseu Ricardo de Antonio, e meus filhos, Fernanda Oliveira de Antonio, Lucas Oliveira de Antonio e Ricardo Oliveira de Antonio, pelo amor e dedicao demonstrados a todo o momento. A todos que direta e indiretamente colaboraram na execuo deste trabalho.

RESUMO
Os antifngicos imidazlicos, por seu largo espectro de ao e baixa toxicidade so usados em grande nmero de formulaes para uso tpico e sistmico. Os produtos dermatolgicos utilizando veculos emulsionados, so eficazes como carreadores de frmacos antifngicos, e de boa aceitao pela populao. O cetoconazol um imidazlico utilizado em grande nmero de formulaes do mercado, e foi o frmaco selecionado para este trabalho, por possuir um medicamento de referncia, Nizoral, e medicamentos genricos na forma farmacutica emulso para uso tpico, todos devidamente registrados e de acordo com os critrios e atribuies previstos na legislao brasileira. Estas formulaes foram objetos deste estudo, cuja proposta foi reproduzir os parmetros organolpticos e fsicos do medicamento de referncia, em formulaes simuladas no laboratrio, e nestas e nas formulaes genricas selecionadas, tentar elucidar questes como modo de elaborao e incorporao do frmaco, e a relao destas variveis tecnolgicas, com os diferentes excipientes disponveis e normalmente utilizados no preparo de formas farmacuticas emulsionadas. Por metodologia in vitro, foi avaliada a permeao cutnea das formulaes mencionadas, e para sua realizao utilizaram-se clulas de difuso, onde no compartimento doador trabalhou-se com duas tomadas de amostra (2,0g e 0,2g). A membrana permeante foi a pele de orelhas de porco, e a soluo receptora, tampo fosfato pH 7,4 adicionado de etanol 10%. As coletas para o estudo de permeao cutnea foram feitas em tempos especficos. Nos intervalos de 1h, 3h, 6h, 12h e 24h, foram coletadas as membranas expostas permeao, para a verificao da reteno cutnea. As anlises foram realizadas por CLAE com deteco no UV, no comprimento de onda de 225nm, utilizando como fase mvel, metanol e soluo de acetato de amnio 0,5% (20:80). Das consideraes feitas e das observaes prticas, pde-se concluir que embora em conformidade com as normas vigentes, os medicamentos genricos possuem diferentes comportamentos, decorrentes das diversas variveis tecnolgicas a que se submetem, e tais diferenas, podem acarretar comprometimento na eficcia do produto, fatos que devem ser comprovados com testes clnicos. Sugere-se a criao de procedimentos de controle de qualidade especficos para os semi-slidos, considerando o enorme potencial cutneo como via de liberao para novos medicamentos. Palavras-chave: Cetoconazol; Absoro cutnea; Estudo in vitro de permeao cutnea; Medicamentos Genricos.

ABSTRACT
The imidazolic anti-fungals, due to their large spectrum of action and low toxicity, are used in great number of formulations for topical and systemic use. The dermatologic products using emulsified vehicles are effective as carriers for antifungal medicines, and highly accepted by population. The cetoconazol is an imidazolic compound used in great number of market formulations, and it was the selected drug in this work, for its presence in the reference medicine Nizoral, a generic pharmaceutical form of emulsion for topical use, all properly registered and in agreement with the criteria and attributions foreseen in the Brazilian legislation. The aim of this study was to reproduce the physical and organoleptic parameters of the reference medicine and in simulated formulations, and to try to elucidate subjects such as ways of medicine elaboration and incorporation, and the relationship of these varied technological variables with the different available excipients normally used in the preparation of emulsified pharmaceutical products. The evaluation of the mentioned formulations was investigated by using an in vitro skin permeation method, and in order to do this, diffusion cells was used, so the donor compartment was filled out with two samples (2,0g and 0,2g). The permeant-membrane used was the pig ear skins, and the receptor solution was the phosphate buffer solution, pH 7.4, added with 10 % ethanol. At pre-established time intervals samples of the medium were collected for the study of cutaneous permeation. At intervals of 1, 3, 6, 12 and 24 hr, the exposed membranes were removed, to monitor skin penetration. The analyses were carried out by HPLC with UV detection at 225 nm wavelength, using methanol and 0.5 % ammonium acetate solution (20:80) as mobile phase. From the considerations and practical observations it can be concluded that, although in accordance with the effective norms, the generic medicines possess different behaviors, as a result of submission to several technological variables, and these differences can compromise the effectiveness of the product, facts that should be proven with clinic tests. It is suggested the creation of specific quality control procedures for the semisolids, considering the skin as having enormous potential as route for new medicines. Keywords: Ketoconazole; Skin absorption; In vitro study of absorption; Generic medicine. Percutaneous

LISTA DE FIGURAS

Figura 01

Esquema representativo das vias de penetrao do frmaco atravs do estrato crneo (via transcelular e via 26 intercelular) Fora de cisalhamento aplicada sobre um fludo Curva de fluxo de fludos no propriedades dependentes do tempo Estrutura molecular do cetoconazol newtonianos de 41 44 49

Figura 02 Figura 03 Figura 04 Figura 05

Esquema da clula de difuso (Microette Plus-Hanson Research ) empregada nos estudos de liberao e 59 permeao cutnea in vitro Orelhas de porco prontas para dissecao (a) e (b) e aps 80 dissecao (c) Orelhas de porco prontas para o estudo do in vitro de 81 permeao cutnea Sistema de difuso contendo 6 clulas Perfil cromatogrfico cetoconazol caracterstico para o frmaco 81 86

Figura 06 Figura 07 Figura 08 Figura 09 Figura 10 Figura 11 Figura 12 Figura 13 Figura 14 Figura 15 Figura 16 Figura 17 Figura 18 Figura 19

Cromatogramas ilustrando a curva analtica de calibrao 87 do cetoconazol em metanol Curva analtica de calibrao do cetoconazol Curva de fluxo da formulao de referncia (E) Curva da viscosidade da formulao de referncia (E) 88 97 97

Cromatograma do cetoconazol padro em soluo 105 receptora Cromatogramas das concentraes utilizadas na curva 106 analtica do cetoconazol em soluo receptora Curva analtica do cetoconazol em soluo receptora 107

Estudo in vitro de permeao cutnea da formulao (E) 108 nas 24h Estudo in vitro de permeao cutnea do cetoconazol na 109 formulao (A1) nas 24h Estudo in vitro de reteno cutnea do cetoconazol na 112 formulao (A1) nas 24h

Figura 20 Figura 21

Estudo in vitro de reteno cutnea do cetoconazol da 112 formulao (E) nas 24h Cromatogramas caractersticos da reteno cutnea do cetoconazol nas formulaes no-inicas simuladas no 113 laboratrio Cromatogramas caractersticos da reteno cutnea das 117 especialidades farmacuticas do comrcio Comparativo entre a quantidade retida e a no retida de 120 cetoconazol na formulao(E)-amostra 1-24h (%) Comparativo entre a quantidade retida e a no retida de 120 cetoconazol na formulao(E)-amostra 2 24h (%) Perfil de reteno cutnea (%) nas tomadas de amostra 1 121 e 2-formulao (E) Perfil de reteno cutnea (%) nas tomadas de amostra 1 121 e 2-formulao (A1) Clculo da equao da reta para a obteno do tempo 122 de meia-vida da formulao (E)-tomada de amostra 1 Clculo da equao da reta para a obteno do tempo 123 de meia-vida da formulao (E) tomada de amostra 2 Valores de t para todas as formulaes na tomada de 124 amostra 1 nas 24h Valores de t para todas as formulaes na tomada de 124 amostra 2 nas 24h Valores de t para todas as formulaes em estudo na 126 tomada de amostra 1 nas 24h (exceto G) Valores de t para todas as formulaes em estudo na 126 tomada de amostra 2 nas 24h (exceto G) Interferncia da tomada de amostra no tempo de meia127 vida Interferncia dos emolientes no tempo de meia-vida 127 Interferncia dos emolientes, tomada de amostra e tempo 128 de meia-vida Interferncia do modo de elaborao das emulses no 128 tempo de meia-vida Interferncia do modo de elaborao e tomada de 129 amostra no tempo de meia-vida Interferncia do modo de incorporao do frmaco no 129 tempo de meia-vida

Figura 22 Figura 23 Figura 24 Figura 25 Figura 26 Figura 27 Figura 28 Figura 29 Figura 30 Figura 31 Figura 32 Figura 33 Figura 34 Figura 35 Figura 36 Figura 37 Figura 38

Figura 39 Figura 40 Figura 41

Interferncia do modo de incorporao e tomada de 130 amostra no tempo de meia-vida Valor Total (VT) da reteno cutnea mdia (g/cm2) Anlise por regresso linear da formulao (A1) em relao formulao (E) (g/cm2) 131 132

LISTA DE TABELAS
Tabela 01 Tabela 02 Tabela 03 Tabela 04 Tabela 05 Tabela 06 Tabela 07 Tabela 08 Tabela 09 Tabela 10 Tabela 11 Tabela 12 Tabela 13 Tabela 14 Tabela 15 Tabela 16 Tabela 17a Tabela 17b Curva analtica do cetoconazol em metanol Composio das especialidades farmaceuticas. Composio das especialidades farmacuticas (F), (G), (I) Formulaes no-inicas segundo o sistema EHL. Efeito dos emolientes na formulao contendo o frmaco solubilizado Formulaes emulsionante no-inicas contendo no-inica 76 cera auto 77 78 79 86 e 95 96 98 70 71 72 75

Componentes da Soluo Receptora (SR) Curva analtica do cetoconazol em soluo receptora Anlise por CLAE da soluo padro do cetoconazol Determinao das caractersticas fsico-qumicas da formulao (E) organolpticas

Estudo do comportamento reolgico da formulao (E) Parmetros de qualidade das formulaes genricas

Composio da formulao base no inica pelo 100 sistema EHL Composio da formulao base no-inica contendo 101 cera auto emulsionante Parmetros de qualidade das formulaes no inicas simuladas no laboratrio 102 104 Teor em cetoconazol nas formulaes Resultados do estudo de reteno cutnea do 110 cetoconazol nas formulaes simuladas no laboratrio Resultados do estudo de reteno cutnea do cetoconazol na formulao de referncia (E) e nas formulaes simuladas no laboratrio

111

Tabela 18a

Resultados do estudo de reteno cutnea do cetoconazol nas especialidades farmacuticas genricas do comrcio 116

Tabela 18b

Tabela 19a Tabela 19b Tabela 20 Tabela 21 Tabela 22 Tabela 23 Tabela 24

Resultados do estudo de reteno cutnea do cetoconazol nas especialidades farmacuticas genricas do comrcio 116 Resultados do estudo das formulaes aps o trmino do estudo in vitro (%) 119 Resultados do estudo das formulaes aps o trmino do estudo in vitro (%) Valores dos t (1) e t (2) para todas as formulaes Valores dos t (1) e t (2) para todas as formulaes exceto (G) Mdia s das retenes cutneas nas tomadas de amostras 1 e 2 Anlise da reteno cutnea por regresso linear Porcentuais de reteno cutnea do cetoconazol na pele nas diversas formulaes 119 123 125 131 133 134

LISTA DE ABREVIATURAS E SIGLAS


A/O CLAE EHL O/A OECD ppm UV gua em leo Cromatografia lquida de alta eficincia Equilbrio hidrfilo-lipfilo leo em gua Organization for Economic Co-Operation and development Partes por milho Ultravioleta

SUMRIO 1 2 3
3.1
3.2 3.2.1 3.2.2 3.3 3.3.1 3.3.2 3.4 3.4.1

INTRODUO OBJETIVOS REVISO DA LITERATURA


PELE
BIOQUMICA DA PELE Queratinizao Lipdios da Superfcie da Pele FUNO BARREIRA E A PERMEABILIDADE CUTNEA Passos Importantes na Absoro Percutnea Interferentes na Absoro Cutnea FORMAS FARMACUTICAS SEMI-SLIDAS DE USO TPICO Emulses

17 20 21 21 22 22 23 24 26 28 34 34 39 40 40 45 47 47 48 50

3.4.1.1 Sistema EHL 3.4.1.2 Estabilidade das emulses 3.4.1.3 Reologia das emulses 3.5 3.6 3.6.1 3.6.2 3.6.3 3.6.4 3.7 3.7.1 3.7.2 3.7.3 3.7.4 MEDICAMENTOS GENRICOS E MEDICAMENTO REFERNCIA AGENTES ANTIFNGICOS Imidazis Cetoconazol Farmacodinmica e Farmacocintica

Determinao Analtica do Cetoconazol em Preparaes 51 Famacuticas

ESTUDOS DE PERMEAO E RETENO CUTNEA IN VITRO

54

Mtodos de Estudo da Permeao e Reteno Cutnea de 54 Frmacos Fundamentos da Permeao Cutnea In vitro 56 Aparelhos utilizados nos Estudo de Permeao Cutnea In vitro 58 Membranas e Solues Receptoras Utilizadas no Estudo de 60 Permeao Cutnea In vitro, em Clulas Tipo Franz

4 4.1 4.1.1 4.1.2 4.1.3 4.2 4.2.1

MATERIAL E MTODOS MATERIAIS Frmacos e Medicamentos em Estudo Matrias- primas e Reagentes Equipamentos e Utenslios MTODOS Cromatografia lquida de alta eficincia (CLAE)

66 66 66 66 67 68 68 68 69 69 71

4.2.1.1 Condies cromatogrficas 4.2.1.2 Fase Mvel 4.2.2 4.3 4.3.1 4.3.2 4.3.3 4.4 4.4.1 4.4.1.1 4.4.2 4.5 4.5.1 4.5.2 4.5.3 4.5.4 4.5.5 4.6 Construo da curva analtica do cetoconazol por CLAE COMPOSIO FARMACUTICAS. QUALITATIVA DAS ESPECIALIDADES

Preparo das Formulaes para a determinao do Teor em 72 Cetoconazol Determinao das Caractersticas Organolpticas e Fsico- 73 qumicas. Estudo do Comportamento Reolgico DESENVOLVIMENTO DAS FORMULAES SIMULADAS NO LABORATRIO NO-INICAS 73 74

Desenvolvimento de Formulaes No-Inicas pelo sistema 74 EHL Desenvolvimento de diferentes emolientes formulaes no-inicas contendo 75 76

Formulaes No-Inicas contendo Cera Auto Emulsionante ESTUDO DA PERMEAO CETOCONAZOL. Escolha da Soluo Receptora Elaborao da Curva Analtica Preparo das Membranas Permeantes. Ensaio de Permeao Cutnea In vitro do cetoconazol Estudo de Reteno Cutnea In vitro do Cetoconazol ANLISE ESTATSTICA CUTNEA IN VITRO

DO 78 78 79 79 81 82 84 85

RESULTADOS E DISCUSSO

5.1
5.2 5.3 5.3.1 5.3.2 5.3.3 5.3.4 5.4

MTODO ANALTICO
CURVA ANALTICA DO CETOCONAZOL POR CLAE ANLISE PRELIMINAR DAS ESPECIALIDADES FARMACUTICAS Composio Geral Modo de Elaborao Incorporao do Frmaco Cetoconazol Elementos Oleosos das Formulaes

85 85 89 89 90 91 92

AVALIAO DOS PARAMETROS DE QUALIDADE DA FORMULAO DE REFERENCIA (E) DAS DEMAIS ESPECIALIDADES 94 FARMACUTICAS DO COMRCIO Teor em Cetoconazol Caractersticas Organolpticas e Formulao de Referncia (E) e Farmacuticas do Comrcio Fsico-qumicas da das Especialidades 94

5.4.1 5.4.2

94

5.4.3

Estudo do Comportamento Reolgico da Formulao de Referencia (E) e das Especialidades Farmacuticas do 96 Comrcio SELEO DAS EMULSES NO INICAS SIMULADAS NO 100 LABORATRIO Avaliao dos Parmetros de Qualidade das Formulaes 102 No-Inicas Simuladas no Laboratrio Comparativo dos Teores de Cetoconazol Obtidos por CLAE 103 Para Todas as Formulaes

5.5 5.5.1 5.5.2 5.6 5.6.1 5.6.2 5.7 5.7.1 5.7.2 5.7.3 5.8 5.8.1 5.8.2

ESTUDO IN VITRO DE PERMEAO E RETENO CUTNEA

105

Elaborao da Curva Analtica do Cetoconazol em Soluo 105 Receptora Membrana Permeante ESTUDO IN VITRO DE PERMEAO CUTNEA Anlise da Soluo Receptora Anlise da Membrana Permeante Anlise das Formulaes Aps o Trmino do Estudo In vitro ANLISE ESTATSTICA DOS RESULTADOS DE RETENO CUTNEA Clculo da Cintica de Reteno Cutnea 106 108 108 110 118 122 122

Anlise da Quantidade Total de Frmaco Retido na Pele nas 130 24h

5.8.3

Clculo do Porcentual de Reteno Cutnea por Regresso Linear das Diferentes Formulaes em Funo da Referncia 132 (E) 135 137

6 CONCLUSES REFERNCIAS

1 INTRODUO
Estudos in vitro de liberao e absoro cutnea, so extremamente importantes na otimizao das tcnicas de elaborao e da escolha adequada dos componentes das formas farmacuticas de liberao drmica (CHIEN, 2005). No possuem interferentes como nos mtodos in vivo (BARRY, 1983) e freqentemente so realizados para a verificao do comportamento de diferentes veculos das formulaes (LEVEQUE et al., 2003, PERSHING; CORLETT; JORGENSEN, 1993). As vantagens dos mtodos in vitro sobre os in vivo so que nos primeiros podem ser controladas as condies de estudo, no havendo os interferentes biolgicos; alm de no serem dispendiosos e facilmente realizveis (ALLEN; POPOVICH; ANSEL, 2007, CHIEN, 2005). Nos estudos in vitro podem-se usar tanto peles humanas como as de espcies animais, sendo a pele de orelha de porco muito utilizada, por possuir caractersticas semelhantes s da pele humana (ANDEGA; KANIKKANNAN; SINGH, 2001, AULTON, 2005). Em produtos dermatolgicos, onde desejvel que o frmaco administrado tenha pequeno fluxo e alta retentividade atravs das membranas (TOUITOU; MEIDAN; HORWITZ, 1998), estes estudos in vitro so realizados de modo que o frmaco seja liberado da formulao onde est veiculado, e se difunda atravs de uma membrana para uma soluo receptora, a qual deve garantir condies termodinmicas favorveis ao frmaco (LPEZ et al., 1998, OECD, 2004). Os estudos in vitro so uma ferramenta muito valiosa e determinante na avaliao do comportamento de formulaes semi-slidas de uso tpico, diante das inmeras variveis que comprometem o processo de fabricao. Atravs deles se obtm dados que possibilitam um maior entendimento dos fatos ocorridos, desde a aplicao na pele, liberao do frmaco da forma farmacutica, reteno e absoro cutnea. (CAMPOS, 1994, NOKHODCHI et al., 2003).

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Para este trabalho, o frmaco selecionado foi o cetoconazol, um antifngico imidazlico com largo espectro de ao e alguma atividade antibacteriana (FITZPATRICK et al., 1997, FUCHS; WANNMACHER, 1998, KOROLKOVAS, 1998). Justifica-se a nfase s formulaes tpicas com cetoconazol, por serem eficazes em muitos tratamentos de micoses superficiais de pele e mucosas, sem significantes efeitos adversos. O frmaco cetoconazol pela rota oral, ao contrrio, pode provocar efeitos indesejveis como hepatoxicidade e interferncia no metabolismo da testosterona (KOROLKOVAS, 1998, LOW; WANGBOONSKUL, 1999; ROYCHOWDHURY; DAS, 1996). As formulaes emulsionadas oferecem boa aderncia pele e normalmente apresentam comportamento reolgico caracterstico do tipo pseudoplstico que faz com que se deformem e fluam com facilidade quando aplicadas superfcie cutnea, sendo as mais utilizadas como veculo dermatolgico (LABA, 1993). No Brasil o Nizoral descrito como medicamento referncia para o frmaco cetoconazol (BRASIL, 2007), sendo o creme dermatolgico utilizado pela via tpica. Vrios medicamentos genricos so disponveis no mercado brasileiro para uso tpico, na mesma concentrao e forma farmacutica que o medicamento de referncia (BRASIL, 2007). Segundo a Agncia Nacional de Vigilncia Sanitria (ANVISA) (BRASIL, 2003), os medicamentos genricos de aplicao (Guia tpica esto e dispensados substituio de de estudos estudos de de bioequivalncia para iseno

bioequivalncia), bastando a comprovao da equivalncia farmacutica para manter a intercambialidade destes com o medicamento de referncia (BRASIL, 2003). No h ainda mtodo analtico reconhecido oficialmente, para a quantificao do cetoconazol em emulses, embora diferentes tcnicas analticas sejam propostas na literatura cientfica para este fim (KEDORHACKMAN et al., 2006, VELIKINAC et al., 2004).

19

A adequada elaborao e utilizao das bases dermatolgicas, a verificao da interferncia dos componentes nelas utilizados, em especial os emolientes e emulsionantes, a forma de incorporao do frmaco e a importncia dos testes in vitro na verificao da liberao e permeao de frmacos de uso tpico, levaram escolha do objeto de estudo deste trabalho onde formulaes contendo o antifngico cetoconazol simuladas no laboratrio e outras especialidades farmacuticas contendo o frmaco cetoconazol, referncia. As anlises realizadas tiveram como objetivo, alm de demonstrar diferenas no comportamento quanto liberao e reteno cutnea do frmaco cetoconazol, realar a importncia dos estudos in vitro como suporte na pesquisa e controle de qualidade de formulaes de uso tpico contendo este frmaco, para as quais no h exigncia de estudos biofarmacuticos por parte da ANVISA. foram analisadas comparativamente ao medicamento

2 OBJETIVOS
2.1 OBJETIVO GERAL
Este estudo teve como objetivo averiguar o comportamento

decorrente das variveis tecnolgicas a que so submetidas as formulaes farmacuticas semi-slidas de uso tpico, e o comprometimento destas com a eficcia do produto final. Para tanto se avaliou a liberao e absoro percutnea do cetoconazol em estudo in vitro, nas formulaes simuladas no laboratrio e nas especialidades farmacuticas disponveis no mercado brasileiro. 2.1.1 Objetivos Especficos a) selecionar mtodo analtico para a quantificao do cetoconazol em formas farmacuticas emulsionadas; b) analisar o medicamento de referncia (Nizoral), as especialidades farmacuticas contendo o frmaco cetoconazol e as formulaes desenvolvidas no laboratrio com relao aos aspectos organolpticos, teor do frmaco, pH e viscosidade; c) realizar para cada formulao, dois ensaios por metodologia in vitro de liberao, reteno e absoro cutnea do cetoconazol, tomando como variveis as tomadas de amostra; d) verificar a interferncia dos emolientes e emulsionantes, modo de elaborao e modo de incorporao do frmaco, por meio dos estudos in vitro de permeao e reteno cutnea.

3 REVISO DE LITERATURA
A estrutura adotada para o referencial terico segue um

encaminhamento lgico para possibilitar o entendimento das variveis que compem o processo de absoro cutnea. Desta forma, suas relaes com o tema proposto visam: a) possibilitar a compreenso, sobre caractersticas e funes da pele, e fatores que interferem na absoro cutnea; b) conhecer sobre os medicamentos antifngicos tpicos, em especial com cetoconazol; propor formulaes e analis-las em funo de um medicamento de referncia; c) conhecer sobre as metodologias in vitro de permeao cutnea, e possibilitar as anlises dos medicamentos simulados e referncia do comrcio, em confronto com a legislao para genricos vigente no Pas.

3.1

PELE
A pele o mais extenso rgo do corpo humano, aproximadamente

5% do peso total e o principal meio de comunicao com o exterior. Em um indivduo adulto de peso e altura mdios, a superfcie da pele de 2m2, seu peso correspondente a 4,2 kg, e recebe cerca de um tero do sangue circulante no corpo. Constitui um limite anatmico e uma barreira de proteo contra ataques fsicos, qumicos e contra microorganismos, imprescindvel existncia de vida, alm de outras caractersticas peculiares que variam com sua localizao e funo especficas (CHIEN, 2005, FITZPATRICK, 1997). Microscopicamente a pele um rgo composto de multicamadas, mas geralmente descrito por trs camadas, que num corte perpendicular visto de fora para dentro, so: epiderme, derme e hipoderme.

22

3.2 BIOQUMICA DA PELE


O pH da superfcie cutnea para muitos autores, um importante indicador funcional da pele e sua determinao na superfcie cutnea, modernamente por metodologias cada vez menos invasivas de estudo cutneo, tm motivado muitos pesquisadores. Um exemplo de moderno equipamento o Phmeter que avalia o pH superficial da pele, por potenciometria direta, isto , por meio de um eletrodo especial, o qual permite sensibilidade de determinao da ordem de 0,1 unidades de pH (LEONARDI; GASPAR; CAMPOS, 2002, RIEGER, 2000). O pH da superfcie cutnea devido produo de cido ltico, conferindo superfcie da mesma, o que se convencionou chamar de manto cido cutneo. Desta maneira, a pele apresenta pH levemente cido (4,6 5,8), o que contribui para aes bactericida e fungicida em sua superfcie. A proteinase, ativa no pH fisiolgico da pele pode participar modulando a resposta inflamatria nas injrias celulares (LEONARDI; GASPAR; CAMPOS, 2002, RIEGER, 2000). As secrees cutneas apresentam aprecivel capacidade tamponante, fato importante, uma vez que o pH da pele freqentemente alterado em conseqncia da utilizao de produtos tpicos inadequados, deixando-a exposta a agentes agressores especialmente microorganismos (LEONARDI; GASPAR; CAMPOS, 2002, RIEGER, 2000). Alguns processos importantes esto envolvidos na manuteno do equilbrio da superfcie cutnea, como: 3.2.1 Queratinizao o processo pelo qual se formam as protenas caractersticas dos plos, das unhas e da epiderme, e consiste na oxidao de duas molculas de cistena para constituir uma de cistina (CHIEN, 2005).

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Testes histoqumicos indicam que na regio da camada granular da pele humana normal, h um sistema de alta energia, responsvel pela sntese de queratina a partir de polipeptdios no citoplasma das clulas epidrmicas. Por intermdio da queratinizao a epiderme consegue exercer suas principais funes: construir uma camada crnea resistente e impermevel e produzir uma camada de Malpighi com grande coeso assegurada por desmossomas, elasticidade uma vez que a pr-queratina pobre em enxofre (CHIEN, 2005). Cornificao: o processo onde as clulas vivas so convertidas em material crneo. a modificao que ocorre em plos, unhas e clulas epidrmicas, associada a morte celular e perda de suas organelas. 3.2.2 Lipdios da Superfcie da Pele O contedo lipdico extracelular (sebo), produto das glndulas sebceas, basicamente uma mistura de lipdios polares denominados triglicerdios, cidos graxos livres, ceras, esteris (colesterol), esqualeno e parafinas. As ceramidas representam at 50% deste contedo. Os cidos graxos livres conferem ao sebo, atividades bactericidas e fungicidas. A pele contm dois cidos graxos insaturados essenciais, o cido linolico e o cido araquidnico. cido linolico tem sido relatado em vrios trabalhos como importante na regulao das funes barreira da pele. cido araquidnico pode contribuir no guarnecimento de prostaglandinas (FORSLIND et al.,1997). Mais de um tero dos lipdios do estrato crneo tem comprimento de cadeia maior que 22 carbonos, enquanto nas membranas celulares h a predominncia de lipdios com 16 a 18 carbonos (CHIEN, 2005). Segundo Forslind et al. (1997), o sebo produzido em maior quantidade na testa, menor no tronco e em quantidades mnimas nas extremidades e fatores como a idade, mudanas significativas de estao e de clima, afetam a taxa de produo e o contedo dos lipdios da superfcie cutnea.

24

3.3

FUNO BARREIRA E A PERMEABILIDADE CUTNEA


A pele desempenha muitas e variadas funes, mas em relao

permeao cutnea humana a funo mais importante a de proteo (FORSLIND et al., 1997). O local da pele conhecido como zona barreira, representada por trs distintas camadas o estrato crneo, epiderme vivel, e derme alm da rede de capilares sanguneos, folculos pilosos, glndulas sebceas, e sudorparas (CHIEN, 2005), o responsvel pela proteo da pele, agindo como barreira contra agentes externos como descrito a seguir: a) Barreira microbiolgica: o estrato crneo a primeira barreira para microorganismos, e muito embora o manto cido (produzido pelas secrees ecrinas e sebceas a pH 4,2-5,6) no seja muitas vezes suficiente para defender a pele contra as bactrias, existem ainda secrees pelas glndulas da pele de cidos graxos de cadeia curta, os quais inibem o crescimento de fungos e bactrias (AULTON, 1988); b) Barreira qumica: uma importante funo da pele humana barrar a entrada de molculas indesejveis de fora para dentro, enquanto controla a perda de gua, eletrlitos e outros constituintes endgenos. O estrato crneo praticamente impermevel a todas as substncias qumicas no gasosas agindo assim como passo limitante para a absoro percutnea (AULTON, 1988); c) Barreira radiao: para a pele exposta luz do sol, a radiao ultravioleta 290-400nm a mais danosa, e desta exposio trs principais reaes agudas so percebidas, eritema, pigmentao (produo de melanina como resultado da estimulao dos melancitos) e engrossamento da epiderme. Reaes crnicas exposio desta radiao incluem envelhecimento e cnceres de pele (AULTON, 1988);

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d) Barreira ao calor e regulador trmico: a pele (estrato crneo), por sua extenso por todo o corpo, o primeiro rgo responsvel pela manuteno da temperatura do corpo em 37C, tendo papel importante a circulao perifrica, as glndulas e demais constituintes (AULTON, 1988); e) Barreira eltrica e mecnica: a pele possui uma resistncia e impedncia muito maior que outros tecidos biolgicos, e exerce proteo contra agresses mecnicas, atravs de engrossamentos e calosidades (AULTON, 1988). A denominao permeao percutnea de substncias em um sistema transdrmico ou em preparaes dermatolgicas, representa o caminho destas atravs das camadas da pele at a corrente linftica e sangnea, que lhes transportaro at os rgos os quais as retero de acordo com suas respectivas afinidades (JATO, 1997). Em preparaes dermatolgicas, embora seja importante que o frmaco penetre alm da superfcie, normalmente no se deseja que o medicamento penetre na circulao sistmica (JATO, 1997). Em mdia, na superfcie cutnea existem 40-70 folculos pilosos e 200-250 ductos sebceos por metro quadrado de rea de pele e por eles a absoro cutnea muito intensa (CHIEN, 2005, JATO, 1997), entretanto, estes apndices da pele representam apenas 0,1% da superfcie cutnea total, e desta maneira, a absoro percutnea pela via transepidrmica se torna a principal via de permeao de absoro de frmacos (ANSEL; POPOVICH; ALLEN, 2000). As vias seguidas pelo frmaco na permeao percutnea so descritas e ilustradas na Figura 1: a) por difuso atravs das clulas penetrao transcelular (atravs dos cornecitos e matriz lipdica intercelular);

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b) por difuso entre as clulas penetrao intercelular (por entre os cornecitos e pela matriz lipdica); c) por difuso atravs dos folculos pilosos, glndulas sudorparas e sebceas, e anexos pilosebceos penetrao transanexal (ANSEL; POPOVICH; ALLEN, 2000). Em quaisquer dos caminhos que a permeao possa ocorrer, a estrutura do estrato crneo obriga o frmaco a se difundir atravs das bicamadas lipdicas intercelulares (ROUGIER, 1983).

Figura 1

Esquema representativo das vias de penetrao do frmaco atravs do estrato crneo (via transcelular e via intercecular)

Fonte:

MARTINS; VEIGA (2002)

3.3.1 Passos Importantes na Absoro Percutnea Na absoro cutnea, interferem os seguintes fatores: a) liberao do frmaco do veculo;

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b) penetrao atravs das barreiras da pele; c) ativao da resposta farmacolgica. Estes passos determinantes para a absoro cutnea so afetados por fatores como tipo, condio e a presena de umidade na pele (ANSEL; POPOVICH; ALLEN, 2000) a natureza do frmaco (propriedades fsicas e qumicas) e do veculo utilizado (CAMPOS, 1994, JATO, 1997). As partculas do frmaco inicialmente precisam ser solubilizadas para que ento possam sofrer partio e se difundir passivamente para a interface veculo/estrato crneo. Algumas substncias podem se ligar ou ficar retidas em determinados locais deste, ou ento sofrer nova partio para uma segunda interface estrato crneo/epiderme vivel (ALLEN; POPOVICH; ANSEL, 2007). O processo de difuso ocorre espontaneamente sendo acompanhado de perda de energia livre (G) do sistema. A difuso pode ser definida como, a transferncia espontnea de um componente de uma regio com alto potencial qumico, para uma regio com potencial mais baixo, sendo o gradiente de concentrao a fora condutora neste processo (AULTON, 2005). As leis que descrevem o fenmeno de difuso, normalmente so expressas em termos de gradientes de concentrao como, por exemplo, a primeira Lei de Fick, que indica que a taxa de difuso proporcional ao gradiente de concentrao, conforme a eq. (1): J = dm/ dt = - D dC /dx Onde: O fluxo J do frmaco expresso em termos de quantidade (dm) transportada em determinado tempo (dt) atravs de um plano por unidade de rea (dC/dx) fornece o gradiente de concentrao D que o coeficiente de difuso expresso em unidades de rea por unidade de tempo (AULTON, 2005). (1)

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A segunda Lei de Fick geralmente empregada em experimentos onde se emprega uma e membrana no outro permeante separando dois a compartimentos, tendo-se num deles a maior concentrao do frmaco (compartimento doador) (compartimento receptor) concentrao zero (sink conditions) mantendo assim o gradiente de concentrao, a quantidade acumulada do frmaco (m) que passa atravs da membrana, por unidade de rea e como funo do tempo at alcanar o estado de equilbrio pode ser expressa na eq. (2) a seguir: (dm/dt) = DC0K / h Onde: C0 a concentrao constante do frmaco na soluo doadora, K o coeficiente de partio do soluto entre o veculo e a membrana, h a espessura da membrana. Quando plotados em um grfico o tempo de absoro (t) e a quantidade acumulada absorvida (m) por unidade de rea de membrana como funo do tempo, o equilbrio verificado quando o grfico se torna linear, e os dados desta poro linear, extrapolados, de modo a obter o intercepto da curva quando m = 0 fornecem o lag time (tempo que leva para comear a ocorrer a absoro) (AULTON, 2005). 3.3.2 Interferentes da Absoro Percutnea Pelo fato da pele ser composta de complexas e heterogneas camadas laminares, onde cada lmina contribui com uma resistncia difusional especfica, e por fatores inerentes ao frmaco alm de outras variveis envolvidas no processo, o processo de absoro percutnea pode ser favorecido ou no por situaes especficas, e algumas destas caractersticas so relatadas a seguir. (2)

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Sendo o fluxo do soluto proporcional ao gradiente de concentrao atravs membranas, ento para um mximo de fluxo necessrio que a soluo doadora seja saturada, e isto pode ser conseguido otimizando-se a solubilidade do frmaco atravs da melhor composio do veculo, e da escolha da soluo no compartimento receptor pela experimentao com uma srie de solventes apropriados (ALLEN; POPOVICH; ANSEL, 2007, AULTON, 2005, JATO,1997, MARTINS; VEIGA, 2002). O coeficiente de partio fator importante para estabelecer o fluxo do frmaco atravs da membrana. Quando a membrana a maior fonte de resistncia difusional no processo, a magnitude do coeficiente de partio muito importante, e isto freqentemente ocorre na permeao percutnea, quando a impermeabilidade do estrato cneo o passo limitante na absoro, sendo ento o coeficiente de partio estrato crneo/veculo crucialmente importante para o estabelecimento da alta concentrao inicial do frmaco na primeira camada da membrana (ALLEN, POPOVICH, ANSEL, 2007; AULTON, 2005; JATO,1997); Embora a concentrao diferencial do frmaco entre as duas fases, doadora e receptora, seja a fora condutora para o processo de difuso, o gradiente qumico potencial ou gradiente de atividade o parmetro fundamental. A atividade termodinmica do frmaco na fase doadora ou a membrana pode ser radicalmente alterada por mudanas no pH, formao de complexos ou a presena de tensoativos, ou cosolventes. Tais fatores tambm modificam o coeficiente de partio efetivo (AULTON, 2005). cidos e bases fracas se dissociam em diferentes graus dependendo do pH do meio e do seu pKa ou pKb, e o lado onde a proporo do frmaco no ionizado for maior (somente as molculas no ionizadas do frmaco passam facilmente atravs das membranas lipdicas) ir determinar o gradiente efetivo atravs da membrana (AULTON, 2005, LEONARDI; GASPAR; CAMPOS, 2002). Misturas cosolventes polares tais como propilenoglicol e gua podem produzir solues saturadas e maximizar o gradiente de concentrao atravs do estrato crneo. No entanto o coeficiente de partio de um

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frmaco entre o veculo e estrato crneo diminui, com a solubilidade do frmaco na mistura solvente. Este dado importante, quando no se deseja a promoo da penetrao do frmaco, ento na formulao deve-se proceder a solubilizao deste no veculo at prximo da saturao (AULTON, 2005). O efeito do uso dos tensoativos na pele relatado como sendo no abaixamento da tenso interfacial e mudanas na conformao protica do estrato crneo. A formao de complexos afeta a permeao do frmaco de maneira semelhante a solubilizao micelar. Quando o complexo se forma ocorre mudanas na aparente solubilidade e aparente coeficiente de partio do frmaco (AULTON, 2005); O manto superficial (0,4-10m) dificilmente afeta a absoro percutnea. Os apndices podem ser uma rota importante apenas para ons e molculas grandes polares (pesos moleculares acima de 500 Daltons) os quais tm dificuldade de atravessar o estrato crneo intacto. Pela via epidrmica, as molculas penetram pelo estrato crneo ou intercelularmente ou transcelularmente. Na queratina intracelular presente na formao em mosaico das regies polar e no polar, frmacos se dissolvem e se difundem de acordo com suas afinidades qumicas. Os lipdios neutros da via intercelular provm uma rota alternativa (AULTON, 2005, JATO, 1997). O dinmico processo de absoro percutnea sofre variaes de fatores biolgicos tais como idade e a condio e a localizao da pele. A literatura relata que peles do feto e de tecido jovem so mais permeveis que as de tecido adulto. A condio da pele importante uma vez que muitos solventes rompem ou modificam a complexa estrutura da camada crnea intacta. Em estados doentis onde h a caracterizao de modificao na camada crnea, uma maior permeao percutnea verificada. A espessura e a natureza da camada crnea promovem variaes na permeabilidade cutnea, assim como a densidade dos apndices cutneos.Peles de diferentes animais diferem largamente na espessura, densidade de glndulas e de folculos pilosos e ainda no suprimento sanguneo, entre outros fatores, os afetam as rotas de

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penetrao

resistncia

permeao.

Estudos

comparativos

demonstraram que as peles de macacos e porcos so mais prximas humana sendo embora mais permeveis que esta, a pele de ratos sem pelos tem algumas caractersticas similares humana, sendo tambm mais permeveis que esta (AULTON, 2005). As interaes frmaco/pele e a hidratao da pele so fatores importantes na absoro percutnea. Quando a gua satura a pele, sua permeabilidade aumenta acentuadamente. Muitos compostos podem possibilitar esta funo, como cidos graxos livres, pirrolidonas, uria, sdio, clcio, potssio, lactato, complexos entre protena-acar ou misturas destes compostos. Pode ser particularmente importante, a interao do frmaco com a pele, resultando em reservatrio do frmaco na camada crnea, como acontece com os filtros solares e produtos tpicos contendo esterides (AULTON, 2005, MARTINS; VEIGA, 2002). Igualmente importantes so as interaes veculo/pele. O veculo pode modificar o estado e a permeabilidade da pele: alterando sua hidratao, veculos oclusivos como leos e gorduras reduzem ou previnindo a perda de gua, aumentando a umidade da pele e assim promovem a penetrao; grande variao na temperatura pode aumentar a taxa de penetrao na pele humana at dez vezes, veculos oclusivos aumentam a temperatura da pele em alguns graus, se mas seu efeito ao sobre a permeabilidade cutnea pequeno comparado efeito da

hidratao; uso de promotores de absoro (meios qumicos), substncias que podem temporariamente diminuir a impermeabilidade da pele, e sendo seguros e no txicos, podem ser usados clinicamente para aumentar a penetrao de frmacos (FEMENA-FONT et al., 2005). Um promotor de penetrao cutnea ideal, segundo Femena- Font al. (2005), logo aps sua remoo deve permitir a rpida recuperao da propriedade barreira da pele; deve ter outros atributos como, ser compatvel com o frmaco e demais excipientes; ser um bom solvente para o frmaco aumentando a efetiva concentrao do frmaco no veculo e deve possibilitar boa espalhabilidade da formulao e agradvel sensao na pele; deve

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possibilitar sua incorporao em todas os tipos de preparaes usadas topicamente alm de no possuir cheiro, odor, cor e ser economicamente vivel, alguns exemplos de promotores com estas caractersticas so o miristato de isopropila, steres do cido nicotnico; fosfolipdios hidrogenados de soja; leos essenciais, etanol; n-octanol e decanol e terpenos (NOKHODCHI, 2003). Dificilmente uma s substncia possuir todas estas propriedades desejadas (AULTON, 2005, MARTINS; VEIGA, 2002). Por segurana e eficincia o melhor promotor de penetrao a gua. Todas as substncias penetram melhor atravs da pele hidratada que da pele seca, ento qualquer substncia qumica inativa, no txica que promova hidratao da camada crnea pode ser considerada como um promotor de penetrao. Os mais efetivos promotores de absoro so os solventes aprticos como o dimetilsulfxido (DMSO), dimetilformamida (DMF) e dimetilacetamida (DMA), possuindo vrios dos atributos mencionados para um promotor ideal. As pirrolidonas podem ser usadas com uma srie de frmacos para promover a penetrao e tambm estabelecer um reservatrio do frmaco no estrato crneo e unhas. Os agentes de superfcie podem promover a absoro pelos apndices por reduzir a tenso superficial. Os tensoativos, especialmente os aninicos alteram a conformao em hlice das protenas do estrato crneo. Estudos de Nokhodchi et al. (2003), relatam que tanto os tensoativos aninicos quanto os no inicos tm o poder de aumentar a penetrao de alguns frmacos pouco solveis em gua e que a concentrao destes tem importante papel na solubilidade aparente do frmaco. O Tween 80, segundo os resultados destes estudos, aumenta a capacidade de penetrao do lorazepam via ambos o mecanismo molecular hidroflico e o lipoflico, pois sua estrutura lhe confere ambas as caractersticas lipoflicas e hidroflicas na molcula o que permite uma maior partio entre os lipdios e protenas. Derivados de longas cadeias dos sulfxidos tais como o decilmetilsulfxido, em baixas concentraes, provavelmente exercem seu efeito como promotores.

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Baixas concentraes de propilenoglicol e lcool no so potentes promotores. Em estudos de Fang et al. (2003), o frmaco lipoflico flurbiprofeno foi veiculado num hidrogel formado com polmeros de celulose, e nestes, a presena de propilenoglicol proporcionou maior solubilizao do frmaco no veculo, e embora tenha havido retardamento no incio do fluxo, no houve alterao da taxa de liberao do frmaco para a pele. Em estudo de outros autores, o propilenoglicol quando em combinao com o cido olico e/ou lcool olico, mostra eficiente ao promotora da permeao cutnea, para algumas molculas (ALLEN; POPOVICH; ANSEL, 2007, AULTON, 2005, MARTINS; VEIGA, 2002). As interaes fmaco/veculo so tambm muito importantes na absoro percutnea, quando a impermeabilidade do estrato crneo no o fator determinante, e sim a liberao do frmaco no veculo, o passo limitante para a penetrao cutnea. Isto acontece quando a difuso do frmaco no veculo excepcionalmente baixa ou quando o veculo possui a capacidade de controlar a liberao do frmaco (sistemas de liberao de frmacos com taxa controlada) (AULTON, 2005).

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3.4

FORMAS FARMACUTICAS SEMI-SLIDAS DE USO TPICO


Em geral, os medicamentos destinados pele, podem ser de

aplicao tpica ou sistmica. As formas farmacuticas semi-slidas de uso tpico so preparaes destinadas a uma ao sobre a pele e mucosas, acessveis ao meio externo. Os medicamentos sistmicos so administrados pela via oral, medicamentos injetveis, ou atravs de sistemas transdrmicos e se distribuem por todo o organismo. Os frmacos contidos em uma formulao tpica so incorporados aos excipientes e assim, conforme as combinaes entre eles, as preparaes tpicas apresentam composio e consistncia diversas. Os excipientes determinam a natureza, a consistncia e tambm o grau de penetrabilidade. As formas farmacuticas dermatolgicas usadas com maior freqncia so pomadas, cremes, loes e solues tpicas, embora outras formas farmacuticas como pastas, linimentos; ps; gis; tinturas; e aerossis sejam tambm usadas, mas em menor proporo (ALLEN; POPOVICH; ANSEL, 2007). Entre as formas farmacuticas semi-slidas descritas na literatura, merecem destaque os cremes, em especial os do tipo O/A, por apresentarem facilidade de aplicao, espalhabilidade sobre a pele e facilidade de veiculao de frmacos. Os cremes constituem formas farmacuticas semi-slidas obtidas por emulso. Sua natureza anfiflica e similaridade com a epiderme humana permitem elevada eficincia na veiculao de frmacos (ALLEN; POPOVICH; ANSEL, 2007, AULTON, 2005;). 3.4.1 Emulses Pela emulsificao, h a possibilidade de misturas estveis e homogneas de dois lquidos imiscveis ou relativamente imiscveis entre si.

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Tem-se uma emulso quando um lquido estiver dividido (fase interna, dispersa ou descontnua) em pequenssimos glbulos no seio de outro (fase externa, dispersante ou contnua). As emulses so classificadas de acordo com a natureza lipoflica (ou hidrofbica) da fase dispersante em sistemas leo em gua (O/A) ou sistemas gua em leo (A/O), e ainda de acordo com a sua utilizao, em de uso interno ou externo: a) para uso interno: as emulses administradas por via oral so exclusivamente do tipo O/A; b) para uso externo: podem ser tanto O/A quanto A/O, dependendo da natureza do frmaco a ser incorporado, da via de administrao, tipo de emolientes na formulao e condio da superfcie cutnea (ANSEL; POPOVICH; ALLEN, 2000). A miscibilidade ou a solubilidade em leo e em gua do frmaco que vai ser usado numa preparao emulsificada, fator determinante para a escolha do veculo adequado, sendo os frmacos quando incorporados na fase interna da emulso, menos irritantes para a pele (LACHMAN; LIEBERMAN; KANIG, 2001). A fase aquosa em geral gua destilada ou deionizada, j que a presena de sais de clcio na gua dura seriam elementos desestabilizadores da emulso. Nesta fase podem ser incorporados os elementos hidrossolves; frmacos, conservantes, tampes, corretivos de pH, antioxidantes, conservantes, sequestrantes, corantes, edulcorantes, aromatizantes (LACHMAN; LIEBERMAN; KANIG, 2001); A fase oleosa composta de componentes oleosos ou emolientes e responsvel por caractersticas importantes da emulso que podem ser moduladas conforme a natureza do elemento oleoso escolhido. Esta escolha pode ser baseada em vrios critrios, como propriedades fsico-qumicas (estabilidade frente a cidos e bases, ponto de fuso,

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polaridade), e estrutura qumica do emoliente, a qual responsvel pela grande maioria das propriedades que as emulses apresentam ao serem aplicadas pele (espalhabilidade, grau de absoro, da emolincia, umidade e lubrificao, toxicidade, viscosidade, controle

comedogenicidade), e permite ainda predizer sobre a estabilidade das mesmas frente hidrlise cida e alcalina. Alguns exemplos so steres de cidos e lcoois graxos; leos de origem vegetal como os de ssamo, arroz, semente de algodo; hidrocarbonetos derivados do petrleo e triglicerdios de origem animal. Pela anlise preliminar e seleo dos emolientes podemse influenciar os parmetros tecnolgicos, sensoriais e mercadolgicos, de maneira controlada (SANCTIS, 2000). As caractersticas impostas emulso pela utilizao de um ou combinao de emolientes especficos, interferem no processo de permeao cutnea do frmaco nela veiculado (AULTON, 2005). O agente emulsivo, alm de facilitar a obteno da fase dispersa, contribui para a estabilizao termodinmica da emulso por provocar modificaes nas propriedades reolgicas da mesma (JATO, 1997) So substncias que reduzem a tenso interfacial entre a gua e o leo, e assim reduzem a energia que necessria para dispender um lquido no outro. Os tensoativos so substncias formadoras de filme em volta de cada gotcula da fase dispersa, de modo a originar uma barreira (mecnica) que evite a coalescncia das gotculas quando contatam umas com as outras (JATO,1997, LACHMAN; LIEBERMAN; KANIG, 2001). Os filmes formados, dependendo da natureza do agente emulsivo podem ser representados por uma camada monomolecular, multimolecular ou partculas slidas finamente divididas (JATO, 1997). Os agentes emulsivos sintticos em relao estrutura molecular e a natureza de seus grupos polares podem ser classificados em tensoativos anfteros, aninicos, catinicos e no-inicos. Estes agentes contm grupos lipfilos e hidrfilos sendo que a parte lipfila, geralmente a responsvel pela atividade superficial Os agentes emulsivos no-inicos no tm tendncia a se ionizar, e dependendo de sua natureza podem formar

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emulso O/A ou A/O (LACHMAN; LIEBERMAN; KANIG, 2001). Em soluo aquosa possuem grupo polarizado, mas no ionizvel. A poro hidroflica pode ser um lcool, glicerol, sorbitol, poliglicol, polietilenoglicol, polipropilenoglicol, amidoglicol e alcanolamidas. A parte hidrofbica pode ser representada por um grupo alquil ou grupo alquil aril. Os no-inicos so os mais empregados em emulses destinadas ao uso tpico. Os lcoois e steres polioxietilnicos onde a frao lipoflica representada pelos cidos, esterico; palmtico; olico e ricinolico so os mais empregados atualmente e considerados os menos irritantes para a pele, pois no desnaturam as protenas. Exemplos importantes so os steres de glicerol, steres de glicis, steres de polietilenoglicis, steres de sorbitano e lcoois graxos etoxilados. Os derivados de lanolina, fraes ricas em esteris etoxilados, so emulsionantes primrios muito complexos, mas com boas propriedades eudrmicas. Estes tensoativos so eficazes na faixa de pH de 3-10 (ANSEL; POPOVICH; ALLEN, 2000). A relao do volume da fase interna com o da fase externa, e a natureza inica so caractersticas importantes e primordiais na escolha do tensoativo na elaborao da emulso desejada (JATO, 1997, SANCTIS, 2000); Alm das substncias mencionadas, outros componentes so utilizados como reguladores da viscosidade entre estes esto os polmeros hidrfilos e hidrocolides derivados da celulose (quando a fase externa for aquosa) e lanolina e substncias com caractersticas plsticas, (quando a fase externa for oleosa) (LACHMAN; LIEBERMAN; KANIG, 2001). Os emulsificantes auxiliares so denominados espessantes, normalmente hidroflicos, evitam a coalescncia das emulses por aumentar a viscosidade da fase externa (goma xantana, caraia, arbica, polmeros carboxivinlicos, derivados de celulose, e outros) (LACHMAN; LIEBERMAN; KANIG, 2001). Os umectantes so substncias utilizadas para impedir ou retardar a formao de cristais devido evaporao ou secagem completa da fase aquosa. Exemplos de umectantes mais empregados so a glicerina, o propilenoglicol e o sorbitol (LACHMAN; LIEBERMAN; KANIG, 2001).

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Os

silicones,

os

polissiloxanos,

possuem

inrcia

qumica,

muito

especialmente em relao oxidao. A elevao de temperatura afeta pouco, a sua viscosidade. Fixam-se superfcie de diversos materiais, tornando-os hidrofbicos (o grupo siloxano se orienta para a superfcie contactante, e os radicais orgnicos hidrofbicos se voltam para o exterior). O aquecimento exalta a hidrorepelncia, pois ao serem aquecidas as molculas dos silicones desdobram-se, criando mais pontos de apoio na superfcie de contacto. So destitudos de toxicidade e a aplicao cutnea mesmo prolongada no produz irritao (LACHMAN; LIEBERMAN; KANIG, 2001). Entre os antioxidantes e conservantes (preservantes), os mais utilizados nas preparaes semi-slidas para uso tpico so os que atuam por mecanismos preventivos impedindo a auto-oxidao na presena de metais. Entre estes, o butilhidroxitouleno (BHT) recomendado como uma alternativa ao tocoferol numa concentrao de 10 ppm para estabilizar a parafina lquida Os steres do cido glico so muito utilizados (propil, octil e dodecil ster) para leos fixos em concentraes acima de 0,001% e para leos essenciais em concentraes acima de 0,1%.(AULTON, 1988). Os steres do cido para-hidroxibenzico (metil, etil, propil e butil) e seus sais largamente usados para a conservao das emulses, nas concentraes de 0,1 0,2%. O metabissulfito de sdio possui efeito antioxidante e inibidor sobre a proliferao de microorganismos, mais efetivo na faixa de pH 7-9. Ainda utilizado o clorocresol, em concentraes em torno de 0,1%, com atividade reduzida na presena de leos fixos de origem animal ou vegetal, e em pH alcalino; o fenoxietanol (0,5-1,0%), que devido a sua inefetividade frente a bactricas Gram-negativas, geralmente associado a outros preservantes como os steres do cido para-hidrobenzico; o bronopol (0,02%), geralmente em combinao com outros preservantes; os compostos quaternrios de amnio, usados principalmente como antispticos para administrao tpica, e a cetrimida, utilizado como agente emulsificante primrio.

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Normalmente alm da estabilizao do frmaco, o uso destes agentes potencializa a ao conservante por promover a quelao dos metais essenciais ao crescimento dos microorganismos, sendo o cido ctrico, o agente sequestrante de metais mais usados na proteo dos leos devido sua inocuidade e o EDTA (cido etilenodiaminotetractico e seu sal sdico), desprovido de toxicidade largamente aplicado na proteo de preparaes farmacuticas (LACHMAN; LIEBERMAN; KANIG, 2001). 3.4.1.1 Sistema EHL Os emulsificantes geralmente possuem uma parte hidrfila e uma lipfila, com predominncia de uma delas (fato que influencia o tipo de emulso formada). Segundo o equilbrio hidrfilo-lipfilo (EHL), para cada substncia se atribui um nmero ou valor de EHL, que indica a polaridade da substncia. Os valores usuais so de 1-20, embora cheguem a 40. Os nmeros mais elevados correspondem aos elementos altamente polares ou hidroflicos, e os mais baixos aos menos polares ou lipoflicos (LACHMAN; LIEBERMAN; KANIG, 2001). No sistema EHL tambm se atribui um valor de EHL aos leos e substncias semelhantes, e quando da elaborao da emulso, escolhemse os emulsificantes que possuam o valor de EHL mais prximo ao valor da fase oleosa da emulso pretendida. Os agentes emulsificantes so compostos tensoativos com valores de EHL de 3 a 6, e numa emulso reduzem a tenso interfacial entre o leo e a gua, minimizando a energia superficial pela formao de glbulos (so altamente lipoflicos). Estes valores de EHL so utilizados para os clculos da porcentagem necessria do emulsificante, sendo muitas vezes utilizada uma mistura deles com timos resultados (ANSEL; POPOVICH; ALLEN, 2000; LACHMAN; LIEBERMAN; KANIG, 2001).

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3.4.1.2 Estabilidade das emulses As emulses so termodinamicamente instveis, possuindo um tempo de vida limitado e a instabilidade destas formulaes farmacuticas pode ser detectada em alguns casos por uma mudana na aparncia fsica, na cor, no odor e na textura, enquanto em outros casos, podem ocorrer alteraes qumicas que no so evidentes e que s podem ser verificadas por anlises qumicas (LACHMAN; LIEBERMAN; KANIG, 2001). Os dados obtidos pelo estudo da estabilidade de uma formulao, levam a previso do prazo de validade esperado para o produto e se necessrio a um novo procedimento para a formulao (TADROS, 2004, VOIGT, 1982). Uma emulso considerada estvel quando mantm os constituintes da fase oleosa dispersa na fase dispersante, ou vice-versa, mesmo, quando submetida a tenses decorrentes de temperatura, agitao e gravidade. Durante o desenvolvimento da uma formulao para abreviar os conhecimentos sobre a compatibilidade da formulao, sobre a embalagem e prazo de validade do produto pronto, se faz uso de condies exageradas de temperatura, umidade, luz e outros, para avaliar a estabilidade das formulaes farmacuticas (TADROS, 2004). 3.4.1.3 Reologia das emulses Reologia o estudo da deformao e fluidez dos materiais sob a influncia de foras externas. Tecnicamente definida como a resistncia ao fluxo ou ao movimento (CHIEN, 2005). As propriedades reolgicas de produtos farmacuticos so sempre de fundamental importncia, seja na elaborao, no desenvolvimento ou na avaliao de formas farmacuticas (AULTON, 2005). Na elaborao de produtos farmacuticos semi-slidos, se faz necessrio a padronizao do desenvolvimento e da produo, a fim de se obter e conquistar a credibilidade dos consumidores, e caracterstica muito

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importante para aceitao neste tipo de produto a observao da aparncia (principalmente a consistncia). Estes mesmos produtos precisam ter garantido sua qualidade e estabilidade quando transportados de um local a outro, e para isto so submetidos a mtodos de anlise para detectar mudanas devido ao estresse mecnico, e s flutuaes de temperatura (BRUMMER; GODERSKY, 1999). A viscosidade de materiais no-newtonianos determinada pelo viscosmetro rotacional, capaz de produzir diferentes velocidades de cisalhamento, medir a tenso de cisalhamento e criar um grfico com os resultados obtidos (AULTON, 2005). As medidas reolgicas provm informaes sobre a estabilidade fsica e a consistncia da emulso. essencial realizar as medidas reolgicas como funo da temperatura (TADROS, 2004). Diferentes foras agem sobre os materiais, em funo das condies de estocagem, processamento ou condies de aplicao e a resultante destas foras, pode modificar o comportamento reolgico destes materiais. Considerando-se um fludo contido entre duas placas planas paralelas de rea A, separadas por uma distncia y, uma fora F aplicada na parte superior, movimentando a placa a uma velocidade v, constante em relao placa inferior, que mantida fixa (Figura 2).

Figura 2 Fora sobre um fludo

de

cisalhamento

aplicada

Fonte:http://www.deq.ufpe.br/disciplinas/MecFluidos/REOGIA_ DE_FLUIDOS.pdf

42

Somente poucos materiais seguem a lei de Newton, isto , exibem uma direta proporcionalidade entre a tenso () e a taxa de cisalhamento () segundo mostra a eq. (3), conhecida como equao de Newton, onde () definida como viscosidade absoluta, dinmica (constante), isto inclui lquidos de baixo peso molecular (gua, glicerina, clorofrmio); solues verdadeiras (xaropes); e sistemas coloidais polimricos muito diludos.

= .
As dimenses de viscosidade () so:

(3)

Pascal/(1/segundo) = Pascal . s (Pa.s), onde: 1 Pascal (Pa) = 10 dyn./cm2 , 1 Pa.s= 10 poise, 100cP = 1 poise 1 cP = 1 m Pa.s sendo 1cP = 1centi-poise, 1000 m Pa s = 1 Pa.s

Na representao grfica, a curva de fluxo ou reograma em coordenadas cartesianas dos fludos newtonianos, mostra uma relao linear e passa pela origem, sendo a sua inclinao, igual a viscosidade nica do fludo. Outra forma de analisar o comportamento do fludo verificando a relao entre a viscosidade e a taxa de cisalhamento (curva da viscosidade). Para o fludo newtoniano, esta relao uma reta paralela aos eixos das taxas de cisalhamentos (viscosidade constante) (LABA, 1993, TADROS, 2004). Todo fludo cuja relao entre a tenso de cisalhamento e a taxa de cisalhamento, no constante, denominado de no newtoniano, considerando ainda a temperatura e a presso constantes e o escoamento laminar. Estes fludos so classificados de acordo com o aspecto da curva de fluxo e a correlao com algum modelo ou equao matemtica. A viscosidade destes fludos no nica, e varia com a magnitude da taxa de cisalhamento, eq. (4), e denominada viscosidade aparente (a). Esta viscosidade s vlida para uma determinada taxa de cisalhamento,

43

portanto sempre que citada, deve vir acompanhada da taxa de cisalhamento correspondente,

a=./

(4)

A maioria das preparaes farmacuticas possui comportamento noNewtoniano (AULTON 1988, BRUMMER; GODERSKY, 1998, LABA, 1993). Grande nmero de fludos no-newtonianos se comporta como pseudoplstico, sendo as emulses, disperses e suspenses, exemplos deste comportamento. Nos fludos com comportamento pseudoplstico, h um decrscimo da viscosidade em decorrncia do aumento da taxa de cisalhamento, comportamento tambm referido como shear thinning, ou afinamento, significa que a resistncia do material ao fluxo decresce e a energia requerida para manter este fluxo diminui, quando as taxas de cisalhamento aumentam. Em alguns casos, h aumento da viscosidade, quando as taxas de cisalhamento aumentam, comportamento tpico de pastas as quais contenham plasticizantes, ou estruturas contendo polmeros no inicos. Nestes casos o comportamento dito dilatante (AULTON, 1988, BRUMMER; GODERSKY, 1999, LABA, 1993). H materiais que apresentam uma dependncia da tenso de cisalhamento com o tempo, para uma taxa de cisalhamento constante. A mecnica dos fludos classifica estes fludos em reopticos e tixotrpicos, conforme mostra a figura 3. So reopticos quando a tenso cisalhante ou a viscosidade aumenta com o tempo, mantendo-se a mesma taxa de deformao. So tixotrpicos os fludos que apresentam diminuio da taxa cisalhante ou da viscosidade, com o tempo de aplicao de certa taxa de cisalhamento. Ambos os fenmenos so reversveis, sendo a reopexia um fenmeno raro de acontecer (AULTON, 2005; LABA, 1993).

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Figura 3

Curva de fluxo de fludos no newtonianos de propriedades dependentes do tempo

Fonte:http://www.setor1.com.br/analises/reologia/ cuva inde htm

A tixotropia o mais comum dos dois fenmenos, e se observa quando pela retirada da fora aplicada sobre o material as condies iniciais vo sendo restabelecidas em certo espao de tempo, que pode durar desde alguns segundos at meses. O fluxo tixotrpico de grande utilidade nas emulses, trata-se de uma transformao gel-sol reversvel. A matriz rgida que serve para a estabilizao da emulso (forma gel) quando submetida a tenso (por agitao por exemplo), sofre amolecimento (forma sol), com as caractersticas de uma forma farmacutica lquida, para facilidade de uso. (ANSEL; POPOVICH; ALLEN, 2000). Para verificar graficamente a existncia de tixotropia, determina-se a velocidade de cisalhamento em ciclos nos quais se aumenta e diminui a tenso de cisalhamento. Se as curvas obtidas em cada direo forem diferentes, se obtm uma rea de histerese, que caracteriza bem o fluxo tixotrpico (ANSEL; POPOVICH; ALLEN, 2000).

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3.5 MEDICAMENTOS GENRICOS E MEDICAMENTO REFERNCIA A ANVISA Agncia Nacional de Vigilncia Sanitria, instituio regulatria vinculada ao Ministrio da Sade, entre outras atribuies tem como finalidade a proteo da sade da populao, por intermdio do controle sanitrio da produo e da comercializao de produtos e servios submetidos vigilncia sanitria, inclusive dos ambientes, dos processos, dos insumos e das tecnologias a eles relacionados. O medicamento genrico est inserido na Poltica Nacional de Medicamentos atravs da Diretriz do Uso Racional de Medicamentos. A promulgao de Lei n 9787 em 10 de fevereiro de 1999 (BRASIL, 1999), que estabeleceu o medicamento genrico, foi o incio das inmeras atribuies tomadas pelo Ministrio da Sade e pela ANVISA para atender esta diretriz e aumentar o acesso da populao a medicamentos eficazes, seguros e de qualidade, a preos reduzidos. A regulamentao desta lei se deu em agosto de 1999 atravs da RDC n 391 (BRASIL, 1999), que estabeleceu o regulamento tcnico para o registro de medicamentos genricos, tendo como base as normas adotadas por pases EUA, Canad, e a Comunidade Europia. Desde ento novas resolues vo sendo institudas pela necessidade de complementao e melhoria das aes fiscalizadoras, sendo a RDC n 16 de 2 de maro de 2007, vigente atualmente no Pas (BRASIL, 2007; STORPIRTIS, 1999). Os medicamentos genricos contm em sua embalagem, logo abaixo do nome do frmaco que os identifica, a frase "Medicamento Genrico e so identificados por uma grande letra "G" azul impressa sobre uma tarja amarela, situada na parte inferior das embalagens do produto. o que estabelece a Resoluo RDC n 333, de 19 de novembro de 2003 (BRASIL, 2003). As bases tcnico-cientficas da intercambiabilidade tm como suporte as definies da Lei 9.787 (BRASIL, 1999), e da Resoluo RDC n 16 (BRASIL,

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2007), que entre outras atribuies traz a definio de medicamento genrico e medicamento de referncia Medicamento referncia: produto inovador registrado no rgo federal responsvel pela vigilncia sanitria e comercializado no Pas, cuja eficcia, segurana e qualidade foram comprovadas cientificamente junto ao rgo federal competente, por ocasio do registro. Medicamento genrico: medicamento similar ao medicamento de referncia ou inovador, que se pretende ser com este intercambivel, geralmente produzido aps expirao ou renncia da proteo patentria ou de outros direitos de exclusividade, comprovada a sua eficcia, segurana e qualidade, e designado pela DCB (Denominao Comum Brasileira) ou na sua ausncia, pela DCI (Denominao Comum Internacional). As formulaes de uso tpico esto dispensadas de estudos de bioequivalncia segundo a ANVISA, RDC N 897 de maio de 2003: Guia para iseno e substituio de estudos de bioequivalncia, (BRASIL, 2003). O antifngico tpico com o cetoconazol, consta da lista de indicaes teraputicas do rgo de Vigilncia Sanitria segundo a ANVISA, RDC n 84, 2002, (BRASIL, 2002) e topicamente o cetoconazol tem sido usado em formulaes a 2%, sendo aplicado no tratamento de infeces superficiais de pele e mucosas (REYNOLDS, 1989). O Nizoral (Janssen- Cilag) o medicamento de referncia para o cetoconazol sendo Nizoral creme (20mg/g) a especialidade farmacutica tpica de referncia contendo o cetoconazol, do mercado, e neste trabalho foi utilizado e denominado formulao (E).

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3.6 AGENTES ANTIFNGICOS


A grande semelhana estrutural das clulas fngicas com as dos mamferos e a resistncia de suas paredes justificam o fato dos antifngicos atualmente disponveis serem poucos e consideravelmente mais txicos que os agentes antibacterianos (TRABULSI, et al.,1999). Cada vez mais aumenta a resistncia dos fungos aos agentes teraputicos disponveis, conseqentemente, h um aumento cada vez maior da incidncia das infeces micticas. Este aumento atribudo maior expectativa de vida, quimioterapia oncolgica, ao maior uso de tratamentos por via parenteral, transplantes de rgos, crescimento da populao imunocomprometida e uso cada vez mais freqente de antifngicos como profilaxia e tratamento emprico (FITZPATRICK et al., 1997, FUCHS; WANNMACHER, 1998). Os agentes antifngicos mais antigos como os cidos undecilnico, benzico e saliclico esto caindo em desuso, mas as vezes so usados em combinao com outros antifngicos tpicos, com o objetivo de aumentar a penetrao cutnea (TRABULSI, et al.,1999). 3.6.1 Imidazis At 1970, poucos agentes antifngicos eram conhecidos, e

apresentavam muitas restries em seus usos, devido a toxicidade, estreito espectro de atividade, baixa atividade farmacolgica e dificuldades na administrao parenteral. Esta nova classe de agentes antifngicos imidazlicos foi introduzida na teraputica, por sua versatilidade de administrao, baixa toxicidade e abrangente espectro de atividade, sendo pouco freqente, os fungos desenvolverem resistncia a estes agentes (FITZPATRICK et al., 1997, KEDOR-HACKMANN; NERY; SANTORO, 1994). Os agentes imidazlicos possuem atividade espectro similar, so ativos contra todos os fungos causadores de infeces superficiais de pele e

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mucosas. So muito eficazes poucos txicos e com baixos nveis de resistncia (FUCHS; WANNMACHER, 1998). A ao principal de um frmaco imidazlico localizada ao nvel de membrana celular. A via citocromo P-450, dependente de C14 lanosterol dimetilase, inibida, e esta a responsvel pela produo de ergosterol que componente necessrio na constituio da parede celular do fungo (PERSHING; CORLETT; JORGENSEN, 1993). A terapia com frmacos imidazlicos comercialmente disponvel para uma variedade de rotas de administrao: parenteral, intravenosa, oral ou tpica. Os vrios imidazis e rotas de administrao, no entanto tem diferentes indicaes e toxicidades, dependendo da severidade e do tipo de dermatfito. A maioria das micoses superficiais mucocutneas pode ser tratada com medicamentos tpicos, sendo necessrios produtos sistmicos, somente em algumas situaes (PERSHING; CORLETT; JORGENSEN, 1993). Atualmente existem umas sries de imidazis substitudos como o tiabendazol, miconazol, clotrimazol, econazol e sulconazol e no Brasil so mais usados o clotrimazol, miconazol, econazol, tioconazol, isoconazol, oxiconazol e cetoconazol (FUCHS; WANNMACHER, 1998). Os compostos imidazlicos, so os de escolha nas micoses cutneas e de mucosas, mas uma efetiva terapia requer que o substncia ativa seja liberado no stio de infeco numa adequada concentrao para produzir um efeito farmacolgico (FUCHS; WANNMACHER, 1998). 3.6.2 Cetoconazol O cetoconazol apresenta-se como um p branco ou quase branco, praticamente insolvel na gua, facilmente solvel no cloreto de metileno, solvel no metanol e ligeiramente solvel no lcool, com ponto de fuso entre 148C e 152C, peso molecular 531,43 (UNITED STATES PHARMACOPEIA, 2006).

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A designao comum do cetoconazol (+)-cis-1-acetil-4-[4-[[2-(2,4diclorofenil)-2-(1H-imidazol-1ilmetil)-1,3-dioxolan-4-il] metoxi] fenil] piperazina (MECK INDEX, 1989). O frmaco puro deve conter no mnimo 98% e no mximo 102% (UNITED STATES PHARMACOPEIA, 2006) de C26H28Cl2N4O4. Sua estrutura (Figura 4) apresenta dois grupos bsicos, a piperazina e o imidazol com valores de pKa de 2,94 e 6,51, respectivamente.

N CH O H 3C C N N
O O
2

Cl Cl

CH

Figura 4 Estrutura molecular do cetoconazol

A solubilidade em gua e a atividade antimictica so dependentes da porcentagem de protonao do grupo piperazina. Esta decresce drasticamente quando o pH do meio maior que o ponto isoeltrico do grupo piperaznico Sendo uma base fraca, escassamente solvel em gua (4,5g/mL), com habilidade para permear a mucosa do intestino desde a parte apical at a basolateral (log P=4,3) classificada como frmaco pertencente classe II no Sistema de Classificao Biofarmacutica (BCS). Frmacos pertencentes classe II so ditos de alta permeabilidade, mas com solubilidade insuficiente em meio aquoso, para que a dose total seja dissolvida no trato gastrointestinal, sob condies normais (GALIA et al.; 1998). Vrios estudos foram realizados para o cetoconazol para a verificao das variaes das suas propriedades fisico-qumicas em relao ao efeito da recristalizao e nestes, a observao de formas polimorfas pela fuso e a

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verificao da recristalizao devido ao uso de solventes de uso rotineiro na indstria farmacutica, foram evidenciadas por tcnicas termoanalticas como a calorimetria diferencial exploratria (DSC), por difrao de raios X. espectroscopia por Infravermelho e por CLAE (VISERAS; SALEM; RODRIGUEZGALAM, 1995). Os resultados destas mostraram mudanas nos eventos trmicos de temperatura e no comportamento das raias das diferentes recristalizaes frente as anlise de DSC e difrao de raios X. A espectroscopia por Infravermelho indicou no haver mudanas na estrutura qumica do cetoconazol. A CLAE mostrou decrscimo na solubilidade e nenhuma degradao foi RODRIGUEZ-GALAM, 1995). 3.6.3 Farmacodinmica e Farmacocintica O cetoconazol um antifngico de amplo espectro com ao sistmica e tpica, antiadrenal e antineoplsico. fungisttico, mas dependendo da concentrao pode ser fungicida (KOROLKOVAS, 1998). Tem atividade in vitro contra a maioria dos dermatfitos como Blastomices dermatitidis, Candida sp, Coccidioides immitis, Histoplasma capsulatum, Paracoccidioides brasiliensis, Phialofora sp, Trichophyton sp, Epidermophyton sp e Microsporum sp. ativo tambm contra Pityrosporum orbiculare (antigamente com o nome de Malassezia furfur) e Cryptococcus neoformans (FUCHS; WANNAMACHER, 1998, ZECEVIC; TOSKIC-RADOJICIC, 1993). O cetoconazol possui uma farmacocintica reportada como bifsica, com um respectivamente t (tempo de meia-vida) inicial de 2 horas e um t terminal de 8 horas. Em humanos a dose oral usual (1-6 meses) 200 mg. O t mdio de eliminao relatado 3,3 h, sendo apenas 0,22% do frmaco excretado na urina de forma inalterada, sugerindo um quase completo metabolismo. relatado ainda que o cetoconazol possa ser retido e acumulado principalmente nas camadas da pele e ser seguro clinicamente relatada (VISERAS; SALEM;

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(FUCHS; WANNMACHER, 1998, REYNOLDS, 1989, RICHARDSON; GANGOLLI, 1994). 3.6.4 Determinao Farmacuticas A literatura oficial (UNITED STATES PHARMACOPOEIA, 2006), descreve mtodos analticos para a determinao quantitativa do cetoconazol em comprimidos e suspenses orais, mas nenhum mtodo validado foi encontrado para a determinao em formas farmacuticas emulsionadas (KEDOR-HACKMANN et al., 2006). Alguns dos mtodos analticos recomendados pela literatura cientfica para a determinao quantitativa do cetoconazol em formas farmacuticas e materiais biolgicos no so: espectrofotometria (UV) na luz visvel e espectrofotometria ultravioleta (KEDOR-HACKMANN; NERY; Analtica do Cetoconazol em Preparaes

SANTORO, 1994), espectrofluorometria (PASCUCCI; BENNETT; NARANG, 1983); cromatografia em camada delgada (ROYCHOWDTHURY; DAS, 1996), cromatografia lquida de alta eficincia (CLAE) com vrios sistemas de deteco tal como UV (ABDEL-MOETY et al. 2002, VELIKINAC et al. 2004), com arranjo de diodos, deteco eletroqumica, tcnicas voltamtricas e polarigrficas (KEDOR-HACKMANN et al., 2006). A tcnica por CLAE desenvolvida por (PASCUCCI; BENNETT; NARANG, 1983), se mostrou sensvel, rpida e reprodutvel, oferecendo vantagens sobre os mtodos microbiolgicos. A deteco fluoromtrica oferece um aumento na sensibilidade, quando da quantificao do cetoconazol em fludos biolgicos por CLAE. Para a determinao de alguns antifngicos derivados dos azis como clotrimazol, cetoconazol e fluconazol em suas formas puras e em formulaes farmacuticas, o mtodo por CLAE, tem sido aplicado com sucesso como um mtodo indicador da estabilidade (PIETRA et al., 1992, ROYCHOWDTHURY; DAS, 1996). A determinao quantitativa do cetoconazol em preparaes farmacuticas comerciais (comprimidos e cremes) foi realizada por tcnicas

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de espectrofotometria no ultravioleta e cromatografia de alta eficincia na extrao, onde os resultados entre os dois mtodos no foram compatveis, mas foi demonstrada a maior acuracidade do mtodo por CLAE, pelos resultados de recuperao do frmaco, mostrando que este poderia ser uma alternativa para os mtodos espectrofotomtricos (KEDOR-HACKMANN; NERY; SANTORO, 1994). Muitos mtodos envolvendo uma variedade de diferentes tcnicas analticas tm sido publicados para o doseamento do cetoconazol. Muito poucos destes se referem a quantificao do cetoconazol em preparaes farmacuticas, e no mencionado corretamente a interferncia dos excipientes ou outros componentes residuais das formulaes. Quatro impurezas so relatadas como associadas ao cetoconazol e suas respectivas estruturas so relatadas nestes estudos, onde o cetoconazol quantificado sem a interferncia das mesmas utilizando como fase estacionria o octadecilsilano e fase mvel soluo tampo fosfato em um adequado pH contendo ainda acetonitrila. A dietilamina, por ser uma amina de baixo peso molecular, foi empregada para mascarar os grupos silanis residuais. A metodologia foi seletiva e capaz de quantificar o cetoconazol em baixas concentraes em vrias preparaes farmacuticas (comprimidos, cremes e xampus), sem a interferncia das impurezas e dos excipientes das formulaes, sendo o pH fator importante na separao do cetoconazol, ocorrendo tima separao a pH 4,0 (LOW; WANGBOONSKUL, 1999). O cetoconazol tambm tem sido determinado por CLAE na presena de seus produtos de degradao cida e sem a interferncia dos excipientes nos trabalhos de Velikinac et al. (2004), onde utilizado metanol e soluo de acetado de amnio 0,5% (80:20) como fase mvel. Este estudo realiza metodologias por CLAE e eletroforese caplilar, comparando os resultados, onde CLAE mostrou-se mais sensvel e especfico para a quantificao do cetoconazol em formas farmacuticas emulsionadas A eletroforese capilar pode ser usada para a separao de misturas de antifngicos imidazlicos ou separao de enantimeros.

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Nos trabalhos de Kedor-Hackmann et al. (2006) foi realizada a determinao espectrofotomtrica do cetoconazol em emulses utilizando a primeira derivada no UV comparativamente a determinao por CLAE. Neste ltimo, a fase mvel utilizada foi uma mistura de trietilamina em metanol (1:500 v/v): soluo de acetato de amnio em gua (1:200 p/v), 75:25v/v. As condies de anlise foram fluxo de 1,0mL por minuto, tempo de corrida 6 minutos, temperatura ambiente (24C2C), com deteco no UV com comprimento de onda 225nm.

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3.7

ESTUDOS DE PERMEAO E RETENO CUTNEA IN VITRO


A seguir, so apresentados os mtodos de estudo de permeao e

reteno cutnea. 3.7.1 Mtodos de Estudo da Permeao e Reteno Cutnea de Frmacos Estudos sobre a penetrao cutnea de frmacos so extremamente importantes na otimizao da elaborao de formas farmacuticas de liberao, drmicas e transdrmicas (LEVEQUE et al., 2003). Mtodos para quantificar a liberao e absoro de frmacos atravs da pele podem ser divididos em duas categorias: in vivo e in vitro. Mtodos in vivo tm sido freqentemente usados com propsitos regulatrios, e se desenvolvem com experimentos com animais. Eles tm algumas vantagens sobre os mtodos in vitro, que incluem a gerao de uma cintica sistmica e informaes sobre o metabolismo. As desvantagens so o uso de animais vivos, a diferena de permeabilidade existente entre as peles das diversas espcies de animais (a pele de animal normalmente mais permevel que a humana, e desta maneira pode-se superestimar os resultados para permeao cutnea humana), a necessidade de um material radio-marcado para facilitar a obteno dos resultados (CHIEN, 2005). As caractersticas in vivo, nem sempre sero satisfatoriamente reproduzidas, todavia sabendo-se que o passo limitante para a permeao cutnea in vivo a difuso atravs do estrato crneo, uma metodologia in vitro bem fundamentada poder produzir resultados bastante coerentes com os in vivo (BARRY, 1983, FRANZ, 1975, 1978). As vantagens dos mtodos in vitro sobre os mtodos in vivo so que os primeiros podem ser usados igualmente bem com peles humanas e com as de espcies animais (porcos, macacos, ratos ou camundongos, sem plos); podem-se fazer muitas replicatas das anlises, no se utilizando animais

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vivos, podem-se administrar as condies do estudo especialmente a temperatura, e vrias formas fsicas podem ser investigadas, alm disso, so facilmente realizveis e no so dispendiosos. Como limitaes, haveria a dificuldade de obteno das membranas (usando pele humana), de armazenagem, custos e variabilidade da permeao, as condies da circulao sangunea podem no ser reproduzidas totalmente (no levam em conta o metabolismo cutneo), o transporte de molculas de baixa solubilidade aquosa no possvel (a menos que um solvente como, por exemplo, o etanol seja adicionado para aumentar a solubilidade em gua), no leva em conta o efeito de possveis degradaes e separaes do estrato crneo do resto da epiderme e nem a ocorrncia de mudanas fisiolgicas e anatmicas, inevitveis, devido ausncia da circulao sangnea (ALLEN; PROPOVICH; ANSEL, 2007, CHIEN, 2005, VENTER et al., 2001). Segundo Barry (1983), a pele retirada de animais pode variar em qualidade e permeabiliade, caractersticas verificadas em estudos onde quantificaram experimentalmente as diferenas entre as peles humanas tanto in vitro quanto in vivo, em relao penetrabilidade do soluto. A variao intraespcie humana calculada por meio do coeficiente de variao, em teste in vivo foi de cerca de 30% e a interespcie 45%. Os parmetros in vitro mostraram 45% para a intraespcie e 65% para interespcie. A absoro cutnea primeiramente um processo passivo, e os estudos realizados em adequadas condies in vitro tm produzido resultados que confirmam a aplicabilidade do estudo, para grande quantidade de substncias qumicas (CHIEN, 2005; WESTER, R. C.; MAIBACH, 1989). Estas prticas so teis, por exemplo, para prover informaes sobre as diferenas na liberao de determinado frmaco quando em diferentes veculos (OECD, 2002; OECD, 2004). So teis para avaliar parmetros fsicoqumicos tais como o coeficiente de partio, o fluxo e coeficiente de difuso dos frmacos (BARRY, 1983).

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3.7.2 Fundamentos da Permeao Cutnea In vitro Em produtos dermatolgicos desejvel que o frmaco administrado tenha pequeno fluxo e alta retentividade nas membranas. Ao contrrio, nos produtos transdrmicos, o efeito desejvel sistmico e, portanto, esperamse baixa retentividade do frmaco nas membranas e um grande fluxo atravs das mesmas (TOUITOU; MEIDAN; HORWITZ, 1998). Uma terapia efetiva nas enfermidades cutneas requer que o agente ativo seja liberado no stio de infeco, em concentraes adequadas para produzir o efeito farmacolgico. No caso de infeces superficiais da pele, onde o agente patognico reside sobre ou entre as camadas mais externas da pele, o produto teraputico deve ser liberado no estrato crneo em concentraes adequadas para inibir o crescimento do agente patognico (PERSHING; CORLETT; JORGENSEN, 1993). Para produtos dermatolgicos, estes estudos so realizados de modo que o frmaco seja liberado da formulao onde est veiculado, e se difunda atravs de uma membrana que pode ser de origem natural (humana ou animal) ou artificial, para uma soluo receptora (OECD, 2004). A pele humana obtida de cirurgias de mama, ou a partir de cadveres, tem sido utilizada, mas muitos pesquisadores tm realizado seus estudos usando peles animais como MEIDAN; HORWITZ, 1998). O coeficiente de partio (log P) geralmente usado para predizer a penetrao no estrato crneo. Considera-se log P entre 2 e 3 como timo para liberao tpica, no entanto, tais consideraes se referem mais a pequenas molculas, com menos cadeias de grupos polares (ABDULMAJED; HEARD, 2004). No estudo de permeao cutnea in vitro, as condies termodinmicas devem ser mantidas para que o processo ocorra com eficincia. O veculo doador deve manter a membrana exposta a uma constante concentrao do permeante, e a fase receptora cujas amostras modelo, sendo a de porco, estruturalmente mais prxima da humana, um das mais usadas (TOUITOU;

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so colhidas em intervalos de tempo pr-determinados, deve garantir condies termodinmicas favorveis ao frmaco. Efetua-se ento a determinao analtica da concentrao do frmaco liberado (OECD, 2004 PHARMACOPEIAL FORUM, 2006). Todos estes pontos devem ser examinados, com bastante cuidado quando os experimentos so realizados com substncias com limitada solubilidade em gua (LPEZ et al., 1998). A liberao do frmaco a partir do medicamento e a partio deste para a membrana so verificadas pela quantificao do frmaco restante na formulao aps o intervalo total do estudo de permeao e pela anlise feita na pele aps o estudo in vitro (CHIEN, 2005). A determinao da concentrao do frmaco na pele, ao final do perodo de exposio, requer a remoo do excesso de formulao, seguido de extrao em um adequado solvente. Usando ento uma tcnica analtica sensvel como CLAE, se quantifica o frmaco extrado. A quantidade de frmaco retido nas camadas da pele igual quantidade inicial menos a quantidade final de frmaco presente (TOUITOU; MEIDAN; HORWITZ, 1998). Vrios compostos de aplicao tpica exibindo uma larga variedade de propriedades fsico-qumicas e estruturas qumicas foram examinados por Reifenrath et al. (1994), quanto penetrao na pele, demonstrando a capacidade barreira da pele total e no somente do estrato crneo e das camadas epidmicas, para as substncias aplicadas topicamente, e sendo os estudos destes autores citados nos trabalhos de Touitou; Meidan e Horwitz, (1998). Embora estas determinaes na pele total sejam fceis e rapidamente realizadas, elas tm a desvantagem de no fornecer dados sobre a real localizao do frmaco. A camada crnea, a camada mais externa da pele pode ser separada do resto da epiderme + derme por processos especiais. Desta maneira pode-se refinar os resultados, aplicando vrias e distintas extraes nas diferentes camadas de pele separadas. A rea mais externa da pele (camada crnea) que ficou exposta a permeao, pode sofrer o processo chamado de tape-stripping, ou seja, nela so passados fitas adesivas cujas caractersticas e nmero de extraes

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variam de acordo com as diversas tcnicas, e so padronizados para cada frmaco. Estas fitas adesivas so recohidas em um solvente capaz de solubilizar o frmaco, e as solues obtidas so analisadas por mtodo analtico, normalmente por CLAE (TOUITOU; MEIDAN; HORWITZ, 1998). Este mtodo tem como limitao no remover totalmente o estrato crneo (OTTO et al., 2005). Nos estudos in vitro, aps a remoo do estrato crneo, a pele restante, o conjunto epiderme sem estrato crneo + derme picotada e submetida extrao do frmaco retido, com o uso de solventes adequados. A penetrao atravs da camada barreira geralmente tambm quantificada por amostragens da soluo receptora em intervalos de tempo durante o perodo total de estudo, ento todas as solues so analisadas por mtodos analticos sensveis (BARRY, 1983). Vrias tcnicas analticas podem ser usadas para medir a concentrao do permeante, mas cintilografia, cromatografia gasosa e cromatografia lquida de alta eficincia, so as mais utilizadas devido sensibilidade destes mtodos, os quais monitoram a liberao do frmaco em estudo, na soluo receptora, ou a taxa de perda do frmaco a partir da fase doadora. 3.7.3 Aparelhos Utilizados nos Estudos de Permeao Cutnea In vitro Para avaliao da liberao de frmacos de sistemas transdrmicos in vitro, a literatura oficial (UNITED STATES PHARMACOPEIA, 2006) disponibiliza e fornece as especificaes respectivas de vrios aparatos, a saber: a) Aparato 5 com p e disco; b) Aparato 6 - com cilindro rotatrio; c) Aparato 7 com suportes recprocos; d) Aparato 8 clulas de difuso. Para a avaliao das formas farmacuticas emulsionadas de uso dermatolgico, a literatura cientfica relata o uso estudos de permeao e

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reteno cutnea, in vitro, utilizando a clula de difuso ou de Franz (FRANZ, 1975, 1978), esquematizada na Figura 5, e que se baseia em dois sistemas de funcionamento: de fluxo contnuo (aonde a soluo receptora continuamente vai sendo bombeada), e de fluxo esttico (aonde a soluo receptora constante durante todo o experimento). O sistema de difuso de Franz bastante utilizado devido ao seu baixo custo, boa reprodutibilidade dos resultados e realizao em pequeno espao de tempo, comparativamente a outras tcnicas (LEVEQUE et al., 2003).

Figura 5 Esquema da clula de difuso (Microette PlusHanson Research ) empregada nos estudos de liberao e permeao cutnea in vitro Qualquer que seja a clula de difuso escolhida, ela consistir de um compartimento doador e um compartimento receptor entre os quais a pele posicionada. Cada aparelho tem certo nmero de clulas de difuso, e estas tm todas, uma igual superfcie de rea (numa faixa de 0,3 a 5cm2). A pele preparada posicionada na clula de modo que o estrato crneo fique para cima. O sistema deve possibilitar agitao constante, temperatura controlada e facilidade de amostragens da soluo receptora (OECD, 2004).

60

3.7.4 Membranas

Solues

Receptoras

Utilizadas

nos

Estudos

de

Permeao Cutnea in vitro, em Clulas Tipo Franz Os estudos de liberao e permeao cutnea in vitro tm seus resultados mais prximos dos obtidos in vivo quando se utilizam membranas permeantes. A investigao da permeabilidade da membrana freqentemente realizada por metodologias in vitro, que tm sido estabelecidas como teis ferramentas para a estimativa da penetrao cutnea de frmacos, especialmente devido dificuldade em realiz-las em estudos in vivo, e j em 1975, estudos de Franz sobre absoro percutnea in vitro de doze compostos orgnicos utilizando pele humana, obtiveram boa correlao nos resultados em comparao com os testes in vivo. Segundo este autor, a permeao cutnea realizada com pele humana armazenada por um perodo de 3 meses em congelador, no alterou as caractersticas de permeao cutnea desta, em relao aos mesmos compostos orgnicos (FRANZ, 1975). Nos trabalhos de Bronaugh e Franz (1986), com pele humana, trs frmacos (cafena, cido benzico e testosterona), foram analisados em estudos de absoro cutnea in vitro e in vivo quando solubilizados em trs diferentes veculos (vaselina slida, gel de etilenoglicol e gel hidroflico) e nas condies do experimento, a cafena penetrou mais rapidamente, quando veiculada na vaselina slida, e a maior absoro do frmaco testosterona foi quando veiculado em gel hidroflico, o cido benzico mostrou resultados de difcil interpretao. Os autores Toruan-Purba; Tabibi e Mendes (1993), estudaram a permeao cutnea tentando buscar membranas animais, como alternativas para as membranas naturais humanas. A membrana natural de cobra foi utilizada (Elaphe obsoleta), mostrando vantagens na utilizao sobre a pele retirada de cadveres humanos, pela fcil obteno e por no haver necessidade de sacrificar o animal.

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A membrana artificial de silicone foi utilizada no estudo de permeao cutnea das solues saturadas dos frmacos cianofenol e cianonaftaleno solubilizados em diferentes veculos (gua, etanol e polietilenoglicol 400).Os resultados demonstraram que os veculos podem ter um importante grau de penetrao por si s, e ainda podem afetar o grau de permeao dos frmacos neles solubilizados. gua destilada foi usada como soluo receptora sendo freqentemente agitada e mantida a 25C (WATKINSON et al., 1995). Derivados sintticos da capsaicina, a nonivamida (NVA) e o acetato de nonivamida sdica (SNA) foram analisados em estudo de permeao utilizando diferentes propores etanol-soluo tampo pH 7,4 como soluo receptora, a 37C. A proporo mais adequada para o estudo em questo foi a utilizao de 50% de etanol e 50% de soluo tampo pH 7,4. Vrias formulaes bases, com diferentes hidrofilicidades contendo os frmacos, e ainda diversos tipos de pele foram analisados. O fluxo atravs das membranas foi calculado e se mostrou menor para a pele humana, seguida da de porco, coelho, rato, silicone e camundongo, para ambos os frmacos estudados quando em bases hidroflicas (FANG et al., 1995). Os psoralenos, 8-metoxipsoraleno; 5-metoxipsoraleno e 4,5,8trimetilpsoraleno (comumente usados no tratamento de psorase e vitiligo) foram avaliados em clulas de difuso de Franz em estudo de permeao cutnea utilizando como soluo receptora 1,4% de soro albumina humana em soluo tampo fosfato pH 7,4. A escolha desta soluo foi feita pela similaridade com a composio do fludo intersticial da pele. As solubilidades e tambm dos respectivos coeficientes de partio, foram avaliados. A quantidade acumulada do permeado no tempo total do estudo (24h), foi inversamente correlacionada com a lipofilicidade do frmaco. Os resultados do estudo de permeao nas 24 horas permitiram predizer que o 4,5,8trimetilpsoraleno o mais conveniente frmaco para aplicao tpica em terapia especfica contra o vitiligo e psorase, devido a sua fraca penetrabilidade. Os resultados tambm permitiram demonstrar a influncia da polaridade molecular na permeao cutnea (SAD et al., 1997).

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O captopril pode ser ionizado em soluo aquosa e afetar a capacidade de absoro cutnea. As caractersticas de permeao cutnea desta espcie inica foram verificadas atravs de pele de rato, em clulas de difuso tipo Franz horizontal, utilizando soluo tampo McIlvaine como soluo receptora sob vrias condies de pH, e utilizando tensoativos como possveis promotores da permeao. Os resultados obtidos permitiram dizer que entre os tensoativos no inicos o efeito promotor mais pronunciado quando a hidrofilicidade dos mesmos mais acentuada (WU et al., 1996). A verificao da permeao cutnea e da histopatologia de anlogos da capsaicina foi feita por Lee et al. (1997), utilizando clulas de difuso tipo Franz vertical, e soluo receptora salina isotnica a 32C. Peles de camundongo, de hamsters, ratos fmea, e humana, foram utilizadas e os resultados foram significativos para a utilizao desta nova formulao como sistema de liberao em formulaes transdrmicas. O fluxo do frmaco se mostrou mais alto quando peles de camundongos sem plos foram usadas, entretanto mais baixo quando se utilizou pele de hamsters. Solues saturadas 75% em soluo tampo pH 6,2 comparativamente a solues saturadas com excesso dos mesmos componentes, de uma srie homloga de fenil-lcoois, foram estudadas in vitro, em clulas de difuso vertical do tipo esttico, utiizando-se como soluo receptora soluo salina-tampo pH 7,4, temperatura 37C. Ficou demonstrado principalmente a importncia de se estabelecer as condies experimentais na determinao do coeficiente de permeabilidade (LPEZ et al., 1998). A mucosa bucal de porco foi utilizada no estudo de permeao in vitro em clulas de Franz do leo essencial de Salvia desoleana Atzei & Picci e deste veiculado em preparaes do tipo microemulso, hidrogel e microemulso-hidrogel, objetivando a otimizao da permeabilidade deste leo por meio de um acelerador da permeao: o dietilenoglicol monoetilter (TRANSCUTOL). A mistura gua-etanol (3:2 v/v) foi usada no compartimento receptor de volume 4,8 mL, com o objetivo de solubilizar os

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componentes do leo essencial, e estes foram capazes de permear a mucosa bucal de porco (CESCHEL et al., 2000).Todas as formulaes mostraram um alto coeficiente de permeabilidade em comparao com o leo essencial puro. Este leo essencial foi considerado til para uma possvel aplicao no campo da estomatologia. Peles de orelhas de porco e peles de cadveres humanos foram utilizadas num estudo de comparao do efeito dos lcoois graxos (saturados e insaturados), como promotores na permeao cutnea in vitro da melatonina, em clulas de difuso de Franz (PERMEGEAR), utilizando como soluo receptora tampo fosfato pH 7,4. Maior fluxo foi observado com os lcoois graxos saturados e com nmero de carbonos entre 8 a 10. Acima de 10 carbonos, entretanto, houve um decrscimo na permeao cutnea em ambas as peles utilizadas. Os lcoois insaturados mostraram aumentar a penetrao cutnea da melatonina de acordo com o aumento do nmero de duplas ligaes a partir de uma (lcool olico) para trs (lcool linolico). Com um nmero superior a trs duplas ligaes, entretanto, houve uma diminuio do fluxo atravs de ambas pele de porco e pele humana. A presena de duplas ligaes pode favorecer a formao de torceduras (ns) na estrutura lipdica da pele, permitindo a permeao de gua atravs desta. O mecanismo pelo qual os lcoois graxos aumentam a permeabilidade cutnea parece envolver o rompimento das densas camadas lipdicas as quais preenchem o espao extracelular (ANDEGA; KANIKKANNAN; SINGH, 2001). As peles de porco so usadas devido a sua similaridade com a pele humana em termos de morfologia e caractersticas de permeabilidade (caractersticas morfolgicas e funcionais semelhantes pele humana) (OECD, 2004). As fibras elsticas na derme, as enzimas presentes na epiderme, o tempo de turnover do tecido epidermal, as protenas queratnicas e a espessura da epiderme da pele de porco, so caractersticas de similaridade pele humana, havendo diferenas, no entanto em relao constituio do tecido gorduroso e na vascularizao das glndulas cutnea. No obstante, os fatos mencionados, a peles de

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ratos so freqentemente utilizados devido ao maior nmero de estudos sobre toxicidade j desenvolvidos nestes animais em relao aos demais (ANDEGA, KANIKKANNAN; SINGH, 2001). A liberao do frmaco flurbiprofeno veiculado numa hidrogel, foi veridicada num estudo de difuso em clulas de Franz, tendo na fase doadora a tomada de amostra de 1g da formulao e na fase receptora soluo contendo 10mL de tampo fosfato-citrato pH 7,4. O estudo foi conduzido frente a diversos polmeros de celulose e incorporao de cosolventes, demonstrando a interferncia dos veculos na liberao e permeao cutnea deste frmaco (FANG et al., 2003). Segundo a OECD (2004), a soluo receptora deve ser compatvel com a metodologia de anlise e elaborada com o conhecimento dos parmetros de solubilidade e estabilidade da substncia a ser testada e no modelo esttico de clulas de difuso, o volume recomendado entre 220mL. A OECD tambm preconiza para substncias lipoflicas, a utilizao de solventes orgnicos como etanol (mistura etanol: gua, 1:1) e 6% de polietilenoglicol 20 olel ter em gua para garantia da solubilidade das mesmas na soluo receptora. Membranas sintticas como polidimetilsiloxano (PDMS) podem ser empregadas para estudar a partio na camada barreira da pele humana. Estas membranas representando membranas artificiais e membranas de porco naturais foram usadas no estudo de liberao de dois frmacos, um hidroflico a cafena (log P 0,07), e um lipoflico a testosterona (log P 3,32), objetivando a determinao dos respectivos coeficientes de permeabilidade e caracterizando a distribuio estatstica dos dados. Os resultados nas duas membranas foram similares. Respectivamente para a cafena e para a testosterona, como solues receptoras foram utilizadas a soluo tampo fosfato pH 7,4, e soluo tampo fosfato adicionada de etanol em clulas de difuso de Franz (KHAN et al., 2005). Para a determinao da penetrao cutnea da ciclosporina atravs da membrana de porco, foi utilizado em clulas de difuso de Franz na fase doadora uma tomada de amostra de 100mg de uma soluo 4%(p/p) em

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propilenoglicoluma, e na fase receptora, soluo composta de soluo tampo fosfato pH 7,2 100mM, contendo 10% de etanol. Estudos anteriores tm demonstrado a utilizao de solues receptoras contendo at em torno de 33% de etanol para aumentar a solubilidade dos frmacos nestas. Os resultados das anlises das concentraes retidas no estrato crneo e na epiderme sem estrato crneo + derme foi determinada aps 12 horas da aplicao sobre a pele, aps vrios procedimentos de extrao e anlise por CLAE, pela acuracidade e preciso obtidos, foram importantes para a elaborao de adequadas formas farmacuticas considerando as vantagens teraputicas da administrao deste frmaco por via tpica, no tratamento das infeces cutneas (LOPES; BENTLEY, 2005). A pele de rato foi tambm utilizada em estudo in vitro em clulas de difuso de Franz, para a verificao da ao de promotores da permeabilidade cutnea, por Nokhodchi et al. (2003), e os resultados foram compatveis com os obtidos em peles humanas. Membranas de ratos fmeas com 4 a 6 semanas retiradas da parte dorsal da pele sem plos foram usadas em estudo de liberao in vitro em sistema de difuso de Franz (Microette Hanson Research Corporation), das micropartculas de vitamina E contidas em formas farmacuticas semi-slidas emulses O/A e A/O. Para frmacos altamente insolveis, em meio aquoso, as vezes se torna necessrio (para que as sink conditions sejam mantidas) adicionar a esta soluo algum componente que facilite a solubilizao, sendo muito usados os tensoativos no-inicos como o polissorbato 80. Como soluo receptora foi utilizado 7mL de soluo isotnica tampo fosfato pH 7,2 contendo 2 mM de polissorbato 80 (ALENCASTRE, 2006)

4 MATERIAL E MTODOS
4.1 MATERIAIS

4.1.1 Frmacos e Medicamentos em Estudo Padro secundrio cetoconazol Sigma - Aldrich Matria - prima Cetoconazol Globe Qumica Medicamentos contendo cetoconazol 2%do comrcio brasileiro: Medicamento de referncia - creme Nizoral Janssen Cilag [formulao (E)] Medicamentos genricos formulaes (F), (G), (H), (I), (J) e (K). 4.1.2 Matrias- primas e Reagentes Acetato de amnio P.A cido clordrico P.A. gua puificada- grau analtico I PURITECH-PERMUTION lcool cetlico lcool cetoestearlico lcool cetoestearlico 20 OE VOLPO CS 20 lcool cetoestearlico 20 OE - EUMULGIN B12 lcool estearlico lcool etlico absoluto P.A Cera autoemulsionante no inica (lcool cetoestearlico e lcool cetoestearlico etoxilado, estearato de sorbitano e monooleato de sorbitano etoxilado 20OE)- POLAWAX NF Fosfato monobsico de potssio P.A. Hidrxido de sdio - P.A. Metanol - grau CLAE J. T. BAKER

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Metilparabeno NIPAGIN Miristato de isopropila - CRODAMOL IPM Monoestearato de sorbitano - SPAN60 Monoleato de sorbitano SPAN80 Monoleato de sorbitano etoxilado TWEEN80 (POLISSORBATO 80) Oleato de decila CETIOL V Peles de orelhas de porco Matadouro Basso Propilenoglicol Propilparabeno - NIPAZOL Edetato de sdio ou cido etilenodiaminotetractico dissdico (EDTA) Triglicerdios do cido cprico e caprlico CRODAMOL GTCC Vaselina lquida 4.1.3 Equipamentos e Utenslios Agitador magntico - MICROQUMICA - modelo MQAMA 301 Balana analtica METTLER TOLEDO - modelo AG 245 Balana analtica - GEHAKA modelo BG 2000 Banho-maria NOVA TCNICA modelo NT 265 Bisturi Capela Centrfuga EXCELSA BABY FANEM Embalagens primrias potes plsticos de polietileno com parede dupla Estufa-FANEM Filtros de seringas com porosidade 0,2m -SARTORIUS RC15 Geladeira - ELECTROLUX Lminas para bisturi tamanho 15 e 24 Membranas filtrantes de acetato de celulose com porosidade 0,45m SARTORIUS AG modelo PTFE Micropipetas automticas ajustveis 100L -1000 L- BRAND pHmetro digital GEHAKA modelo PG 2000

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Pina anatmica Pipetas calibradas 0,5mL 5,0mL Pipetas volumtricas 1mL; 2mL; 3mL;5mL;10mL Sistema com clulas de difuso e sistema de agitao mecnica PERMEGEAR Sistema de filtrao vcuo Ultraturrex - IKA modelo T18 basic Ultra-som ELMA TRANSSONIC 460/H Viscosmetro BROOKFIELDDVII+ (anlise dos dados pelo programa WINGATHER V1.1 Engineering Laboratories)

4.2

MTODOS

4.2.1 Cromatografia Lquida de Alta Eficincia (CLAE) 4.2.1.1Condies cromatogrficas: Cromatgrafo VARIAN 210 com bomba ternria, trs pistes, injetor Rheodyne (loop de 20 L). Coluna cromatogrfica C18 de fase reversa de 150 x 4,6mm com tamanho das partculas 5m, modelo MICROSORB MV 100 C 18. Detector UV de arranjo de Fotodiodos com varivel comprimento de onda PROSTAR 320 operando no comprimento de onda de 225nm. Injeo automtica, condio isocrtica Fase mvel*- mistura da soluo de acetato de amnio 0,5% em gua ultrapura e Metanol (20:80 v/v). Tempo de reteno - 4,66 0,24 min Tempo de corrida 6 min Temperatura da anlise temperatura ambiente (25C) Temperatura da amostra nos vials - 15C Fluxo -1,0mL /min

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Injeo em triplicata - 20L Lavagens da agulha trs vezes com metanoL

4.2.1.2 Fase Mvel Com base na metodologia proposta por Velikinac et al. (2004), utilizouse como fase mvel a soluo de acetato de amnio 0,5% adicionada ao metanol (20:80v/v). A mistura foi em seguida filtrada, utilizando o sistema filtrante e filtros de papel com 0,45m e deaerada por sonicao por 30 minutos em Ultrasom. Esta soluo foi previamente preparada no momento da realizao das anlises. 4.2.2 Construo da Curva Analtica do Cetoconazol por CLAE A curva analtica foi construda com 8 pontos (VELIKINAC et al. 2004). Segundo a metodologia descrita na Resoluo RE n 899 da ANVISA em Guia para validao de mtodos analticos (BRASIL, 2003), so necessrios no mnimo 5 concentraes diferentes, e procedimentos alternativos devem ser justificados. Com trs pesagens em dias diferentes, a soluo estoque padro de cetoconazol foi preparada utilizando-se uma amostra de 10mg de cetoconazol padro secundrio, solubilizado em metanol em um balo volumtrico de 10mL, sendo em seguida o volume ajustado at a marca com o mesmo solvente. Obteve-se desta maneira solues de concentrao 1000g/mL. Estas solues foram diludas em triplicata (n=9), obtendo-se uma srie de solues finais com concentraes de 6, 10, 12,5, 25, 50, 125, 250 e 500g/mL, Tabela 1, e uma soluo padro em metanol com concentrao 100g/mL, sendo esta ltima, utilizada como soluo padro nas determinaes por CLAE.

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Tabela 1
Amostras
1 2 3 4 5 6 7 8

Curva analtica do cetoconazol em metanol


Soluo Estoque(mL) 1mg/mL
0,15 0,25 0,31 0,63 1,25 3,13 6,25 12,15

Metanol (mL)
q.s.25 q.s.25 q.s.25 q.s.25 q.s.25 q.s.25 q.s.25 q.s.25

Concentrao obtida g/mL


6,0 10,0 12,5 25,0 50,0 125,0 250,0 500,0

No cromatgrafo foram feitas injees de 20L. Os picos obtidos no tempo de reteno atribudo ao cetoconazol, proporcionaram o clculo das reas para cada concentrao, obtendo-se a equao da reta (equao de regresso linear), os coeficientes de correlao e determinao, por meio dos mnimos quadrados. O desvio padro relativo (DPR), foi obtido para cada ponto da curva.

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4.3 COMPOSIO QUALITATIVA DAS ESPECIALIDADES FARMACUTICAS


A Tabela 2 a seguir descreve a composio qualitativa da formulao referncia (E) e das especialidade farmacuticas do comrcio, utilizadas neste trabalho e aqui designadas (H, J, K), Tabela 2 Composio das especialidades farmacuticas (E);(H);(J);(K)
Especialidades Farmacuticas E
lcool cetlico ................................ lcool cetoestearlico Monoestearato de sorbitano Polissorbatos Miristato de Isopropila Propilenoglicol Sulfito de sdio gua purificada Cetoconazol 20mg/g creme ................................. ................................. ................................. Estearato de sorbitano Polissorbato 60 Miristato de Isopropila Propilenoglicol Sulfito de sdio gua deionizada Cetoconazol 20mg/g creme Vaselina branca Metilparabeno Propilparabeno

H
............................. lcool estearlico ..............................

J
.................................... .................................... lcool cetoestearlico Estearato de sorbitano Polissorbato 60 e 80 Miristato de isopropila Propilenoglicol Sulfito de sdio gua purificada Cetoconazol 20mg/g creme .................................... .................................... ....................................

K
lcool cetlico ................................ lcool cetoestearlico Monoestearato de sorbitano Polissorbato 60 Miristato de isopropila Propilenoglicol Sulfito de sdio gua purificada Cetoconazol 20mg/g creme .................................. .................................. ..................................

Nota: Formulao (E) Nizoral creme 2% (Janssen-Cilag l)

A Tabela 3 traz a descrio da composio qualitativa das demais especialidades farmacuticas do comrcio utilizadas neste trabalho, e designadas como (F, G, I).

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Tabela 3 Composio das especialidades farmacuticas (F);(G);(I)


Especialidades Farmacuticas F
Cera emulsionante Lanolina anidra leo mineral Vaselina Propilenoglicol Dimeticonol Fenoxietanol Metilparabeno Butilparabeno Etilparabeno Propilparabeno Sullfito de sdio Acido ctrico Citrato de sdio gua deionizada Cetoconazol 20mg/g creme lcool cetoestearlico lcool cetoestearlico etoxilado Oleato de decila Propilenoglicol Edetato de sdio Metilparabeno Propilparabeno Metabissulfito de sdio gua purificada Cetoconazol creme ....................................... ....................................... ....................................... ....................................... Cetoconazol creme ......................................... ......................................... ......................................... 20mg/g 20mg/g Vaselina lquida Propilenoglicol Glicerina Parabenos Butilhidroxitolueno Sulfito de sdio EDTA sdico gua purificada Monoestearato sorbitano Miristato de Isopropila de autoSimeticone

I
Cera auto-emulsionante

4.3.1 Preparo das Formulaes para a Determinao do Teor em Cetoconazol Para esta determinao, amostras de cada uma das especialidades farmacuticas descritas nas tabelas 2 e 3, foram preparadas segundo Velikinac (2004), conforme descrito a seguir: uma quantidade da formulao creme, equivalente a 50mg de cetoconazol foi previamente pesada e

73

sonicada com 25mL em Ultra-som por 30 min, sendo a soluo transferida para um funil de separao onde se procedeu a agitao enrgica por 10 minutos. Aps este procedimento o sobrenadante filtrado por papel de filtro, foi coletado em balo volumtrico de 100mL, sendo o precipitado reservado a parte. Este procedimento de extrao foi repetido por mais duas vezes. O precipitado total resultante foi submetido a centrifugao por 20 min a 3000rpm e as solues extradas aps filtrao foram adicionadas ao balo contendo as pores sobrenadantes filtradas, sendo o volume completado com metanol at 10mL. Uma alquota de 2mL da soluo sobrenadante final, foi diluda em balo de 10mL com metanol (soluo estoque 100g/mL) (VELIKINAC et al., 2004). Amostras de 1mL destas solues estoque foram analisadas em triplicata por CLAE, nas condies cromatogrficas estabelecidas no item 4.2.1 e os valores obtidos serviram para o clculo do teor do cetoconazol nas formulaes. 4.3.2 Determinao das Caractersticas Organolpticas e Fsico-qumicas Os parmetros adotados como caractersticas organolpticas foram cor, aspecto (observados a olho nu) e odor, como parmetros fsicoqumicos a medida do pH e fsicos a viscosidade. A composio qualitativa e as caractersticas observadas para a formulao (E), serviram de ponto de partida para a elaborao no laboratrio, das formulaes no inicas desenvolvidas para este projeto de estudo. 4.3.3 Estudo do Comportamento Reolgico Utilizando o programa WINGATHER V1.1 ( Engineering Laboratories) no Viscosmetro rotacional de BROOKFIELD.DVII +, spindle S70 e temperatura 20C estabeleceram-se uma seqncia de velocidades de cisalhamento crescentes e decrescentes que serviram para obteno do tipo de comportamento reolgico de cada formulao.

74

4.4

DESENVOLVIMENTO DAS FORMULAES NO - INICAS SIMULADAS NO

LABORATRIO Foram simuladas 10 formulaes no laboratrio baseadas na

composio qualitativa da formulao de referncia (E), tendo como modo de elaborao o sistema EHL. Paralelamente, 3 formulaes contendo cera auto emulsionante, foram elaboradas. Em todas estas, manteve-se o mesmo emoliente da formulao (E). 4.4.1 Desenvolvimento de Formulaes No-Inicas pelo Sistema EHL A Tabela 4 descreve a composio das formulaes elaboradas pelo sistema EHL, as quais aps 48 horas do preparo foram analisadas conforme os itens 4.3.2 e 4.3.3. Com base nestes estudos, a formulao base foi selecionada. Duas amostras da formulao base foram preparadas e nelas se procedeu a incorporao do frmaco na concentrao de 2%, sendo que na primeira o cetoconazol foi previamente solubilizado quente no propilenoglicol e acrescentado a fase aquosa da emulso (A1), e na segunda apenas disperso em propilenoglicol frio, e incorporado aps a formulao pronta (B). Aps 48 horas em repouso, estas duas novas formulaes foram avaliadas (a estabilidade das emulses foi verificada apenas visando selecionar a melhor preparao e no a determinao do prazo de validade das mesmas) conforme descrito nos itens 4.3.1, 4.3.2 e 4.3.3.

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Tabela 4

Formulaes no-inicas segundo o sistema EHL


Formulaes No-Inicas (EHL)

Matria-prima Alcool Cetlico Alcool Estearlico Alcool Cetoestearlico lcool cetoestearlico etoxilado 20 OE Polissorbato 80 Monoestearato de sorbitano Miristato de Isopropila Propilenoglicol EDTA dissdico Metabissulfito Sdico BHT Agua Purificada Cetoconazol

F1 2,5 2,5 -----2,0 ----------5,0 5,0 0,2 0,2 0,1 q.s 2,0

F2 3,5 2,5 -----2,0 1,0 1,0 5,0 5,0 0,2 0,2 0,1 q.s. 2,0

F3 2,5 3,5 -----2,0 1,0 1,0 5,0 5,0 0,2 0,2 q.s. 2,0

F4 3,5 3,5 -----2,0 1,0 1,0 5,0 5,0 0,2 0,2 0,1 q.s. 2,0

F5 3,5 3,5 -----2,0 1,0 1,0 5,0 7,0 0,2 0,2 q.s. 2,0

F6 3,5 3,5 -----2,0 1,0 -----7,0 5,0 0,2 0,2 0,1 q.s. 2,0

F7 5,0 5,0 3,0 2,0 1,0 1,0 5,0 5,0 0,2 0,2 q.s. 2,0

F8 5,0 5,0 2,0 3,0 1,0 ----5,0 5,0 0,2 0,2 0,1 q.s. 2,0

F9 6,0 6,0 ----3,0 1,0 1,0 10,0 5,0 0,2 0,2 -----q.s. 2,0

F10 ---------12,0 2,0 1,0 1,0 10,0 5,0 0,2 0,2 q.s. 2,0

NOTA: Os valores constantes desta tabela so expressos em porcentagem

4.4.1.1

Desenvolvimento de formulaes no-inicas contendo diferentes emolientes

A composio da formulao base escolhida, contendo o frmaco solubilizado (A1), foi elaborada, e outras trs formulaes apenas pela substituio do emoliente miristato de isopropila isopropila por oleato de decila (A2), vaselina lquida (A3), e triglicerdios dos cidos cprico e caprlico (A4), foram respectivamente preparadas, conforme mostra a Tabela 5.

76

Tabela 5 Efeito dos emolientes na formulao no-inica contendo o frmaco solubilizado


Formulao base
lcool cetlico lcool estearlico lcool cetoestearlico etoxilado 20OE Miristato de EMOLIENTE Propilenoglicol Metabisssulfito de sdio Edetato de sdio Monoestearato de sorbitano Polissorbato 80 Cetoconazol gua purificada NOTA: As formulaes acima seguiram o sistema EHL isopropila Oleato de decila Vaselina lquida Triglicerdios dos cidos cprico e caprlico

A1

A2

A3

A4

4.4.2 Formulaes No-Inicas contendo Cera Auto Emulsionante Foram elaboradas trs formulaes (F11, F12 e F13) ambas contendo a mesma cera auto emulsionante (mistura de lcool cetoestearlico, lcool cetoestearlico etoxilado, estearato de sorbitano e monoestearato de sorbitano etoxilado 20 OE) em diferentes propores (Tabela 6), e ainda o mesmo emoliente, miristato de isopropila (presente na formulao de referncia). Aps seleo da melhor composio da formulao base, elaborou-se duas novas formulaes onde na primeira o cetoconazol foi solubilizado quente em propilenoglicol e acrescentado fase aquosa da emulso (C) e na segunda, apenas disperso em propilenoglicol e incorporado emulso j pronta (D).

77

Todas as formulaes aps 48h de preparo foram analisadas nos mesmos parmetros estabelecidas em 4.3.1; 4.3.2 e 4.3.3.

Tabela 6 Formulaes no-inicas contendo cera auto emulsionante


Matria-prima
lcool cetoestearlico e lcool cetoestearlico etoxilado , estearato de sorbitano e monoleato de sorbitano etoxilado (20OE) Miristato de isopropila Propilparabeno Metabissulfito de sdio EDTA sdico Metilparabeno Propilenoglicol gua purificada Cetoconazol 10% 0,1% 0,2% 0,2% 0,2% 5,0% q.s.100% 2,0% 10% 0,1% 0,2% 0,2% 0,2% 5,0% q.s.100% 2,0% 10% 0,1% 0,2% 0,2% 0,2% 5,0% q.s.100% 2,0% 15% 14% 13%

F11

F12

F13

78

4.5 ESTUDO DE PERMEAO CUTNEA IN VITRO DO CETOCONAZOL


Para este estudo, inicialmente foi necessria a realizao de testes prvios de solubilidade do frmaco cetoconazol, visando a escolha da soluo receptora. Em seguida foi realizado o preparo das membranas permeantes (pele de orelhas de porco) para a utilizao nas clulas de difuso. 4.5.1 Escolha da Soluo Receptora A escolha da soluo receptora a ser utilizada no estudo da permeao cutnea in vitro foi baseada na solubilizao da quantidade total do frmaco presente na tomada de amostra (2g e 0,2g das formulaes contendo 2% do frmaco cetoconazol) no volume de soluo receptora empregado no teste in vitro (11mL). A (Tabela 7) exemplifica vrias propores de vrios componentes testados para este fim. A composio selecionada serviu para a elaborao da curva analtica. Tabela 7
Etanol
10% 20% 30% 40% 10% ----10%

Componentes da Soluo Receptora (SR)


Polissorbato 80
------------10% ---

Polietilenoglicol20 olel ter


-----------15% 15% --3,0%

Tampo fosfato pH 7,4


q.s100 q.s100 q.s100 q.s100 q.s100 q.s100 q.s100 q.s100

79

Preparo da soluo tampo fosfato pH 7,4 Esta soluo preparada segundo a Farmacopia Americana, (USP 29, 2006), confeccionada adicionando-se 50ml de soluo de fosfato monobsico de sdio (KH2PO4) 0,2M 39,1ml de soluo de hidrxido de sdio (NaOH) 0,2M. O pH foi verificado em pHmetro e procedido os ajustes para pH 7,4, com HCL puro ou sol de NAOH 10%. 4.5.2 Elaborao da Curva Analtica Para a elaborao da curva analtica preparou-se uma soluo com 10mg de cetoconazol padro secundrio em 100mL em etanol P.A., obtendo-se uma concentrao 100g/mL. A partir desta soluo estoque, prepararam-se diluies obtendo as concentraes: 2; 4; 6; 8 e 10g/mL, conforme a Tabela 8. O coeficiente de regresso linear, e a equao da reta foram determinados. Tabela 8
Amostra
1 2 3 4 5

Curva analtica do cetoconazol em soluo receptora


Soluo Estoque (mL)*
0,50 1,00 1,50 2,00 2,50

Etanol (mL)
2,0 1,5 1,0 0,5 -----

Tampo fosfato pH 7,4 (mL)


q.s.25 q.s.25 q.s.25 q.s.25 q.s.25

Concentrao (g/mL)
2 4 6 8 10

Nota: soluo estoque 100g/mL.

4.5.3 Preparo das Membranas Permeantes As membranas naturais utilizadas neste estudo foram obtidas por dissecao de peles de orelhas de porcos, jovens e albinos, e recmabatidos. Inicialmente as orelhas foram lavadas em gua purificada sendo o excesso de gua retirado com papel absorvente. Aps a seleo das peles

80

ntegras (livres de leses, arranhes ou manchas) os plos foram cortados com tesoura. Em seguida com auxlio de pina anatmica e bisturi, procedeu-se a dissecao extraindo-se a epiderme conjuntamente com a derme, e descartando a hipoderme (tecidos subcutneos e gordurosos presentes abaixo da derme) (Figura 6).

Figura 6 Orelhas de porco prontas para dissecao (a) e (b) e aps dissecao (c)

As amostras de peles assim dissecadas foram cortadas em tamanhos padronizados e adequadas utilizao na rea de permeao, e ento acondicionadas em filme plstico e papel alumnio, e mantidas em congelador at o momento do uso (por no mximo 1 ms) (Figura 8). Quando solicitadas estas peles foram retiradas do congelador e descongeladas temperatura ambiente, sendo ento cada fragmento de pele colocado numa clula de difuso.

81

Figura 7 Orelhas de porco prontas para o estudo in vitro de permeao cutnea

4.5.4 Ensaio de Permeao Cutnea in vitro do Cetoconazol O sistema de difuso utilizado (Figura 8), constou de 6 clulas de difuso, sendo uma delas utilizada para controle das anlises (placebo).

Figura 8

Sistema de difuso contendo 6 clulas (PERMEGEAR)

Os fragmentos de membranas devidamente preparados e descritos no tem 4.5.3 foram colocados sobre as clulas de difuso, com a epiderme voltada para o compartimento doador e a derme voltada para o

82

compartimento receptor, o qual foi preenchido com a soluo receptora, tendo-se o cuidado de evitar a formao de bolhas. temperatura de 37C 0,5C, duas tomadas de amostra de cada formulao (uma contendo 2,0g e outra 0,2g), todas contendo 2% de cetoconazol, foram espalhadas uniformemente sobre a membrana permeante colocada sobre a rea disponvel para a permeao (1,89cm2) nas clulas de difuso, sendo ento o sistema de agitao acionado. Cada clula foi ento coberta com filme plstico e papel alumnio, ficando assim durante todo o tempo do experimento. Amostras de 1mL da soluo receptora, foram coletadas nos intervalos de tempo de 15 min, 30 min, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 24h, sendo reposto igual volume de nova soluo receptora, mantendo-se desta maneira o volume constante no compartimento receptor. Os estudos foram feitos em triplicata, com um branco (sem o frmaco) para todas as formulaes e nas duas tomadas de amostra. Nas formulaes genricas e referncia utilizou-se como controle apenas um fragmento de membrana, o qual sofreu os mesmos procedimentos realizados para as amostras. As amostras coletadas foram analisadas por CLAE nas condies cromatogrficas j especificadas em 4.2.1 a partir da curva analtica do cetoconazol na soluo receptora. Os valores permeados obtidos por CLAE servem para o clculo dos parmetros cinticos (escolha do modelo cintico correspondente), tempo de latncia (Lag Time) e fluxo (J) do cetoconazol atavs da membrana. 4.5.5 Estudo de Reteno Cutnea in vitro do Cetoconazol A anlise da reteno cutnea foi realizada aps o trmino do tempo total estabelecido para o estudo de permeao cutnea in vitro (24h), e tambm nos tempos de 1h, 3h, 6h e 12 h.

83

As peles foram analisadas em todos estes tempos de coleta para todas as formulaes e nas duas quantidades de tomada de amostra (2,0g e 0,2g), igual procedimento foi realizado tambm com os placebos. Aps o trmino do tempo de permeao cutnea estipulado, retiraram-se as membranas do aparelho de difuso e destas, com o auxlio de uma esptula as amostras dos cremes que sobraram, colocando-os em recipiente contendo metanol (25mL) e sonicando em seguida segundo descrito no item 4.3.1. Aps diluio 1:10 em metanol estas solues foram analisadas por CLAE, obtendo-se assim os valores do cetoconazol no-retido nas peles. As peles foram lavadas com soluo receptora (e as lavagens foram submetidas anlise). A rea da pele exposta permeao foi delimitada, recortada e picotada com auxlio de bisturi e lmina e os fragmentos recolhidos em frascos contendo metanol (25mL), e ento submetidos a sonicao em Ultra-som por 20 min. Aps este tempo os fragmentos em soluo metanlica foram triturados (Ultraturrex) at a total dilacerao da pele. A suspenso obtida foi novamente sonicada (30 minutos). A mistura assim obtida foi filtrada por papel de filtro (0,45m) para balo volumtrico de 50mL e o volume completado com metanol. O cetoconazol foi assim determinado em todos os filtrados obtidos, por CLAE, utilizando-se a curva analtica do cetoconazol em metanol conforme j descrito no tem 4.2.2. Desta maneira, determinouse a quantidade de cetoconazol retido nas peles para todas as formulaes e em todos os tempos de anlise.

84

4.6

ANLISE ESTATSTICA Os mtodos estatsticos empregados foram baseados na anlise de

regresso linear. Os dados cinticos de tempo de meia vida foram calculados pela equao (EDGINTON; SHERMAN, 1971).

onde pode ser calculado quanto da concentrao inicial (Co) permanece aps o tempo t. A constante de proporcionalidade k, e o valor de e 2,7183. O grfico cartesiano de ln (Co-C) versus t fornece uma linha reta, com a declividade b representando a constante de proporcionalidade. A recproca da declividade, conhecida como vida mdia, multiplicada por 0,693 (logaritmo natural de 2) fornece o tempo de meia vida (t/) que o tempo exato em que 50% da concentrao inicial encontrada. A associao entre os dados de dois pares de formulaes foi tambm analisada e pela regresso linear. Um valor de coeficiente de correlao superior a 0,9 indica uma boa associao entre as duas variveis e a aceitabilidade da comparao. A vantagem desse tipo de comparao sobre as comparaes de mdias (valores pontuais) que as comparaes so visualizadas em toda a dimenso dos valores obtidos, sejam altos mdios ou baixos. Por tradio, consideram-se no eixo x os dados ditos de referncia e no eixo y os dados para comparao. Uma anlise de regresso linear produz uma equao (y = ax + b), onde a, o coeficiente linear, e b a declividade da reta. O valor de b = 1 indica a mesma grandeza dos valores x e y. Um valor de b > 1 indica maiores valores para y que os dos x, isto , os dados para comparao so maiores. Um valor de b < 1 indica maiores valores para x do que os dos y, isto , os dados de referncia so maiores. O valor de b multiplicado por 100 indica a relao percentual da grandeza dos dados de absoro entre duas formulaes estudadas.

5 RESULTADOS E DISCUSSO
A partir dos procedimentos metodolgicos apresentados no captulo anterior, os resultados so adiante estruturados de acordo com os mtodos adotados.

5.1 MTODO ANALTICO


Para a realizao dos ensaios de reteno e permeao cutnea do cetoconazol, nas formas semi-slidas de uso tpico (emulses), foi necessrio primeiramente a escolha de um mtodo analtico validado para a quantificao deste frmaco. Algumas metodologias analticas foram encontradas para este fim na literatura cientfica, mas a que se mostrou mais sensvel e reprodutvel foi a metodologia proposta por Velikinac et al., (2004), onde utilizado CLAE com deteco no UV na anlise do medicamento refernciaNIZORAL creme a 2%. Por haver concordncia entre os resultados obtidos no laboratrio e os propostos pelo autor quanto ao medicamento referncia, utilizamos este mtodo analtico em nossa proposta metodolgica, adequando-o s demais formulaes farmacuticas.

5.2

CURVA ANALTICA DO CETOCONAZOL POR CLAE


A determinao do frmaco na soluo padro por CLAE foi feita em

triplicata e em trs dias diferentes, e com a preparao de nova fase mvel a cada dia, conforme a Tabela 9. Obteve-se repetibilidade entre os resultados intradia, e coerncia entre os resultados interdia, sendo isto demonstrado pelos valores de desvio padro relativo.

86

Tabela 9

Anlise por CLAE da soluo padro do cetoconazol


Anlise 1 Anlise 2
100,98 100,08 100,01

Soluo Padro (100g/mL)

Anlise 3
100,95 99,99 100,34

Mdia
100,65 99,95 100,14 100,25

DPR
0,54 0,15 0,17 0,29

1 100,03 2 99,78 3 100,08 Mdia Geral Fonte: (VELIKINAC et al.,2004).

A Figura 9 ilustra o cromatograma do cetoconazol padro (100g/mL), preparado segundo o item 4.2.1 da metodologia, e evidencia o tempo de reteno caracterstico do frmaco, entre 4 e 5 minutos.

Figura 9 Perfil cromatogrfico caracterstico para o frmaco cetoconazol


Nota: Soluo metanlica de cetoconazol padro 100g/mL

A Figura 10 mostra os cromatogramas obtidos para as diversas concentraes utilizadas na elaborao da curva analtica, evidenciando em todos o tempo de reteno caracterstico entre 4 e 5 minutos para o cetoconazol. A curva analtica do cetoconazol em metanol realizada segundo o item 4.2.2 da metodologia, mostrou-se linear (intercepto da reta: y= + 3,72.

87

105x + 1,93. 106), e sensvel nas concentraes entre 6 e 500g/mL, indicando que nesta faixa de valores os resultados gerados mostram proporcionalidade concentrao do frmaco. O coeficiente de determinao (r= 0,9992) e coeficiente de correlao (r= 0,9996) demonstram haver correlao linear entre as variveis analisadas. Segundo Lanas (2004), coeficiente de determinao 0,98 j satisfatrio. Segundo a ANVISA, o coeficiente de correlao deve ser igual ou superior a 0,95 (BRASIL, 2003).

cetoconazol

Figura 10 Cromatogramas ilustrando a curva analtica de calibrao do cetoconazol em metanol

Figura

11

mostra

representao

grfica

do

tratamento

matemtico aplicado curva analtica do cetoconazol em metanol, de acordo com item 4.2.2 da metodologia.

88

y Replicates

5 3

150000000

P e 100000000 a k S i z e

50000000

0 100 200 Amount 300 400

Figura 11 Curva analtica de calibrao do cetoconazol

89

5.3

ANLISE PRELIMINAR DAS ESPECIALIDADES FARMACUTICAS

Foram analisadas, uma formulao de referncia denominada formulao (E) e formulaes genricas (BRASIL, 2007) denominadas (F), (G), (H), (I), (J), (K). Os critrios adotados para a escolha destas formulaes dentre as demais do mercado, foram composio qualitativa e tipo de emolientes. As anlises foram sempre feitas comparativamente ao medicamento de referncia. 5.3.1 Composio Geral Conforme descrito na Tabela 2 do item 4.3 da metodologia, a formulao (E) possui emulsionantes no inicos como o lcool cetlico, lcool cetoestearlico, monoestearato de sorbitano e polissorbato, como agentes estabilizadores e de consistncia das emulses. Como emoliente possui o miristato de isopropila, que lhe confere grande espalhabilidade e lubricidade pele. O propilenoglicol est presente como umectante e provavelmente solubilizante do cetoconazol. O sulfito de sdio um dos antioxidantes de escolha quando da utilizao do frmaco cetoconazol. Na formulao (E) no foram indicados os agentes preservantes (conservantes e antioxidantes). As especialidades farmacuticas (H), (J), (K), descritas na metodologia no tem 4.3, foram selecionadas por possurem emulsionantes no inicos e o mesmo emoliente miristato de isopropila, integrantes da formulao de referncia (E). O emoliente miristato de isopropila est presente em todas as formulaes analisadas, exceto em (F) e (G). Na formulao (H) h a combinao miristato de isopropila e vaselina branca. Na formulao (I) h a combinao miristato de isopropila e vaselina lquida. Na formulao (F), h a combinao da lanolina com vaselina lquida. Na formulao (G) oleato de decila, e o simeticone, esto presentes.

90

Muitas vezes os emolientes so usados em combinao entre si, para dar pele uma sensao exclusiva, e nestes casos preciso a verificao de que os mesmos sejam compatveis e estveis no sistema escolhido (KLEIN, 2005). As formulaes (F) e (I) possuem ceras auto emulsionantes (produtos no declarados). A formulao (G) possui emulsionantes semelhantes a (E). O antioxidante sulfito de sdio est presente em (E), (H), (J), (K) e (I), sendo que nesta ltima formulao h tambm o butilhidroxitolueno (BHT). O antioxidante EDTA, ou EDTA sdico, est presente apenas em (G) e (I). Os compostos derivados dos parabenos (conservantes), se encontram em (F), G), (I) e (H). O fenoxietanol se apresenta em combinao com os conservantes parabnicos na formulao (F). Derivados dos silicones como dimeticonol e simeticone, aparecem respectivamente em (F) e (G). Todas as especialidades farmacuticas analisadas, bem como a formulao de referncia, possuem em sua composio o propilenoglicol como agente umectante, sendo que a formulao (I) possui tambm a glicerina. Com ao umectante o propilenoglicol e a glicerina so adicionados s formulaes em concentraes prximas de 5% a fim de reduzir a evaporao da gua na pele, e prevenir o ressecamento das formulaes (concentraes muito altas podem remover a umidade natural da pele, desidratando-a). O propilenoglicol recomendado para solubilizar compostos hidrolisveis (AULTON, 2005), e ele provavelmente foi empregado tambm com a finalidade de auxiliar a solubilizao do frmaco. A glicerina possui caractersticas especiais quando utilizada em produtos para uso tpico, pois sua viscosidade confere-lhe uma aderncia prolongada s superfcies em que aplicada (AULTON, 2005, LACHMAN; LIEBERMAN; KANIG, 2001). 5.3.2 Modo de Elaborao As formulaes do comrcio (E), (G), (H), (J) e (K) pela descrio da composio apresentada, provavelmente seguiram o sistema EHL como

91

modelo na elaborao das formulaes. As ceras auto emulsionantes esto presentes nas formulaes (F) e (I), e nestas os emulsionantes primrio e o secundrio fazem parte do mesmo composto em propores balanceadas para promover estabilidade e consistncia, embora, em algumas formulaes note-se a necessidade da adio de agentes espessantes para que a viscosidade seja a pretendida (AULTON, 2005). Os emulsionantes no-inicos, que por sua baixa toxicidade so mais adequados que os aninicos para utilizao por via tpica, por via oral e parenteral, possuem poucos problemas de compatibilidade com outras substncias, e, so menos sensveis s variaes de pH ou a adio de eletrlitos. Formam um grupo muito numeroso, possibilitando emulses A/O ou O/A. O monoestearato de sorbitano (ster de sorbitano) presente na maioria das formulaes analisadas, de carter lipoflico e usado freqentemente associado aos polissorbatos que so derivados dos steres de sorbitano e de polietilenoglicol conferindo-lhes vrios graus de hidrofilia e lipofilia, pela mudana no tipo do cido graxo e no nmero de cadeias de polioxietileno. Os mais utilizados comercialmente so os polissorbatos 80 (monooelato de sorbitano de com 20 moles 20 de polioxietileno) de e 60 Os (monoestearato sorbitano com moles polioxietileno).

polissorbatos so compatveis com a maioria dos materiais aninicos, catinicos e no-inicos. Possuem pH neutro e so estveis a altas concentraes de eletrlitos, com baixa toxicidade. Estudos sobre a relao entre o poder de solubilizao e o coeficiente de partio do polissorbato 80, na elaborao de emulses, mostraram haver uma relao linear entre estes dois parmetros, podendo-se predizer a habilidade do polissorbato 80 em solubilizar um frmaco pelo seu respectivo log P (UNEZ; YALKOWSKY, 2000). 5.3.3 Incorporao do Frmaco Cetoconazol

92

O cetoconazol uma base fraca, e na prtica, os frmacos debilmente cidos ou bsicos so mais solveis quando esto ionizados mas normalmente instveis nestas condies. Esta condio acontece com a maioria dos frmacos, e recursos so utilizados para que se alcance a solubilizao com a manuteno da estabilidade. Entre estes recursos utilizados esto a incluso de solventes miscveis na gua (reduzem a polaridade do solvente), ou a adio de solues tampes (acetato, citrato, lactato, fosfato e ascorbato) (JATO, 1997). A formulao (F), apresenta em sua composio, cido ctrico e citrato de sdio, provavelmente exercendo uma atividade tamponante para o cetoconazol. O cetoconazol pode sofrer processos de degradao como hidrlise e oxidao, especialmente em meio aquoso, se no for formulado adequadamente, sendo necessrio, portanto a adequada solubilizao e adio de agentes antioxidantes (SKIBA et al., 2000). Os antioxidantes como o butilhidroxitolueno (BHT), presente apenas na formulao (I), so mais usados para evitar a oxidao do sistema oleoso. O mestabissulfito de sdio e o agente sequestrante etilenodiaminotetractico (EDTA) na forma dissdica formam a combinao antioxidante de escolha para o frmaco cetoconazol (LACHMAN; LIEBERMAN; KANIG, 2001). Os steres do cido para hidroxibenzico, como o metil, etil, propil e butil sters e seus sais, so conservantes, usados nas concentraes 0,1-0,2%, sendo citados nas formulaes (H), (F), (G) e (I). O fenoxietanol efetivo contra alguns tipos de microrganismos e por isso geralmente associado aos steres do cido parahidroxibenzico. Normalmente usado na concentrao 0,5-1,0%, est presente apenas na formulao (F) (ANSEL; POPOVICH; ALLEN, 2000). 5.3.4 Elementos Oleosos das Formulaes Deve-se levar em considerao que os elementos oleosos que so muito variados e podem estar isolados ou em combinao,

93

desempenhando muitas funes, atuam sobre o parmetro viscosidade do produto final e no transporte do frmaco atravs da pele (AULTON, 2005). Alguns exemplos mais utilizados, como vaselina lquida, vaselina slida, miristato de isopropila, triglicerdios dos cidos cprico e caprlico, parafina lquida, leos de silicones, agem como solubilizantes das substncias ativas, asseguram importantes propriedades de espalhamento, de emolincia, lubricidade e de hidrorepelncia. Miristato de isopropila um ster de cadeia ramificada, largamente utilizado em produtos para o cuidado pessoal e farmacutico, grande poder de espalhabilidade, lubrificante, cosolvente, plasticizante, baixo ponto de turbidez, diluente para leos vegetais e minerais, grande poder de aumentar o poder solvente dos demais excipientes sendo compatvel com leos mineral e vegetal, steres sintticos, silicones de baixa viscosidade e etanol (LACHMAN; LIEBERMAN; KANIG, 2001). A vaselina lquida, tambm chamada de parafina lquida, petrovaselina ou leo mineral, considerada um sistema coloidal constitudo de uma mistura de hidrocarbonetos lquidos de elevado ponto de ebulio obtidos do petrleo, est presente na composio de (F), (I) e (H). A capacidade de absoro de gua pelas vaselinas pode ser grandemente aumentada pela adio de agentes molhantes ou emulsivos de vrias espcies (ANSEL; POPOVICH; ALLEN, 2000). A lanolina anidra no muito usada como tensoativo por causar reaes alrgicas e por necessitar de antioxidantes. usada como emoliente em baixas concentraes em alguns cremes (JATO, 1997). Os derivados de lanolina so emulsionantes primrios no inicos complexos, ricos em esteris etoxilados, uma mistura de lcoois graxos com steres do colesterol e outros esteris com cidos graxos. Estas lanolinas modificadas possuem alto teor em colesterol (geralmente superior a 15%), menor viscosidade e maior poder de penetrao que a lanolina anidra. Quando usada em combinao com vaselinas (hidrofbicas) incrementam sua capacidade de fixao de gua. A literatura relata o uso de lanolina em torno de 14%, com um aumento na capacidade de absoro de 50% (JATO, 1997). A lanolina mencionada na formulao (F).

94

Os silicones fixam-se superfcie de vrios materiais tornando-os hidrofbicos. Esta propriedade comum tambm aos leos minerais, mas mais intensa no caso dos silicones. Eles possuem boa aderncia pele, fraca tenso superficial, servindo como agentes antiespumantes. No so txicos quando aplicados em produtos de uso tpico, no rancificam e possuem propriedades hidrorepelentes. A formulao (G) possui o simeticone, um derivado do silicone, e ainda oleato de decila como emoliente o qual um bom dissolvente de frmacos solveis ou miscveis com leos. uma mistura de steres do cido olico com lcoois superiores naturais no saturados, e um bom excipiente do ponto de vista de penetrao cutnea (ALLEN; POPOVICH; ANSEL, 2007). 5.4 AVALIAO DOS PARMETROS DE QUALIDADE DA FORMULAO DE REFERNCIA (E) E DAS DEMAIS ESPECIALIDADES FARMACUTICAS DO COMRCIO 5.4.1 Teor em Cetoconazol A formulao de referncia foi preparada para anlise por CLAE segundo o tem 4.3.1 da metodologia. A anlise foi feita em triplicata e em trs dias diferentes, e o resultado obtido (100,03% 0,92) para o teor, representa a mdia e o desvio padro de trs determinaes. O desvio padro relativo foi calculado em 0,92%. Estes resultados esto em concordncia com os obtidos no trabalho de Velikinac et al. (2004),que para a mesma anlise, obteve a porcentagem de recuperao 99,32% e desvio padro relativo 1,20%. Da mesma maneira, as formulaes genricas obtidas do comrcio, foram preparadas e analisadas. 5.4.2 Caractersticas Organolpticas e Fsico-qumicas da Formulao de Referncia (E) e das Especialidades Farmacuticas do Comrcio

95

Na Tabela 10, encontram-se observadas para a formulao (E).

relacionados

as

caractersticas

Tabela 10 Determinao das caractersticas organolpticas e fsicoqumicas da formulao de referncia (E)


Caractersticas organolpticas
Cor: branca Aspecto: homogneo, opaco, boa consistncia Odor: caracterstico

Caractersticas fsico-qumicas
pH 7,04 / 20C Viscosidade 4.258 cP (BROOKFIELD DVII+, Spindle S70; 67,7s-1; 3282dyn/cm2; 20C).

A viscosidade, que define a consistncia das emulses, e que pode ser um ponto crtico em relao a aceitao e continuidade do uso do medicamento por parte do paciente, se mostrou adequada. A formulao apresentou boa espalhabilidade, e formao de fino filme sobre a pele, caractersticas estas desejadas para um creme dermatolgico. A formulao tem aspecto opaco sem muito brilho. Estas caractersticas so importantes se observadas do ponto de vista do consumidor que relaciona emulses opacas e sem brilho idia de m qualidade, elaborao ou composio inadequada. Igualmente importante a aparncia, pois bolhas de ar tambm conferem um aspecto negativo s emulses. Do ponto de vista tecnolgico, a aparncia pode estar relacionada com a fase interna, com o tamanho das partculas que por sua vez tem relao principalmente com o tipo e com a quantidade do emulsionante utilizado, com a diferena de densidade entre as fases, e com as condies aplicadas durante o processo: agitao, temperatura e tcnica de emulsificao (RIEGER, 2000). Entre os parmetros fsico-qumicos examinados o pH 7,04 (20C) mostrou-se dentro da faixa fisiolgica (5-8), e provavelmente o de melhor estabilidade para o frmaco na formulao empregada (LEONARDI; GASPAR; CAMPOS, 2002, RIEGER, 2000, SKIBA et al., 2000).

96

A todas as formulaes em estudo foram aplicados os mesmos critrios de anlise dos empregados para a formulao (E), e os resultados obtidos so relatados posteriormente. 5.4.3 Estudo do Comportamento reolgico da Formulao de Referncia (E) e das Especialidades Farmacuticas do Comrcio A Tabela 11 mostra os resultados do comportamento reolgico obtido para a formulao (E). Da Tabela 11 foram plotados em um grfico a tenso de cisalhamento (shear stress) nas ordenadas, e a taxa de cisalhamento nas abcissas (shear rate), obtendose os reogramas caractersticos, sendo que para a formulao de referncia, evidenciaram comportamento pseudoplstico tpico de produtos semi-slidos e tambm, a presena de tixotropia (LABA, 1993). Tabela 11 Estudo do comportamento reolgico da formulao (E)
FORMULAO(E)
Velocidade (rpm) 40 50 60 70 80 100 80 70 60 50 40 Torque (%) 28,1 30,6 33,4 35,6 37,8 41,5 37,9 35,8 34,3 31,2 28,2 viscosidade (cP) 7358 6589 5989 5135 4678 4258 4478 4610 4989 5676 6134 Tenso de cisalhamento (dyn/cm) 1790 2298 2645 2878 3089 3282 2676 2345 2130 1989 1760 Taxa de cisalhamento (s-1) 27,1 33,8 40,6 47,4 54,2 67,7 54,2 47,4 40,6 33,8 27,1

Nota: as determinaes foram feitas a 20C, no viscosmetro de Brookfield DVII +. Spindle S70

97

A Figura 12 (curva de fluxo) e a Figura 13 (curva de viscosidade) ilustram o comportamento pseudoplstico com tixotropia obtido para a formulao (E).

Curva de Fluxo Formulao (E)


4000

Cisalhamento

Tenso de

(dyn/cm2)

3000 2000 1000 0 0 20 40 60 Taxa de Cisalhamento (s-1) 80


Seqncia1

Seqncia2

Figura 12 Curva de fluxo da formulao de referncia (E)

Curva de Viscosidade Formulao (E)


Viscosidade (cP)
8000 6000 4000 2000 0 0 20 40 60
-1

Seqncia1

Seqncia2

80

Taxa de Cisalhamento (s )

Figura 13

Curva da viscosidade formulao de referncia (E)

da

Ainda na Tabela 11, nota-se o valor da viscosidade () 4258 cP a qual est relacionada maior taxa de cisalhamento aplicada (67,7s-1), e tenso de cisalhamento (3282dyn/cm2), na temperatura de 20C. Este valor de viscosidade, chamada viscosidade estacionria por alguns autores (por ser a menor viscosidade possvel para que a formulao no perca sua estrutura

98

inicial, e assim sua estabilidade) foi utilizado como comparativo entre as demais formulaes analisadas (BRUMMER; GODERSKY, 1999). O mesmo programa e as mesmas condies empregadas para a formulao de referncia foram tambm empregados para as demais formulaes do comrcio. Os reogramas das formulaes genricas (H); (J); (K); (F); (G); (I), apresentaram comportamento pseudoplstico e com exceo da (H) e da (K) todas as demais aparentaram tixotropia. A Tabela 12 relaciona os resultados obtidos para as formulaes do comrcio, conforme relatados nos itens 5.4.1, 5.4.2 e 5.4.3 deste captulo.

Tabela 12
Formulaes

Parmetros de qualidade das formulaes genricas


Caractersticas organolpticas Caractersticas Fsico-qumicas Viscosidade

Cor

Aspecto

Odor

pH

Teor (%)
100,600,70 101,281,24 100,030,27

H J K

Branca,brilhosa Branca,brilhosa Branca,brilhosa

Homogneo Homogneo Homogneo Perolado Homogneo Perolado Homogneo Homogneo

Caracterstico Caracterstico Caracterstico

6,54 6,75 6,89

4268cP 4265cP 10510cP

F G I

Branca,brilhosa

Caracterstico

6,98

2079cP

99,430,711

Branca,brilhosa Branca,opaca

Caracterstico Caracterstico

6,86 6,37

3998cP 3114cP

99,370,56 97,030,25

Todas mostraram aspecto homogneo, sendo (F) e (K) peroladas, e com exceo da (I), todas as formulaes apresentaram brilho intenso. As formulaes apresentaram cor branca e odor caracterstico, com pH dentro da faixa ideal. A consistncia dos cremes variou consideravelmente, sendo a

99

maior viscosidade demonstrada pela formulao (K) e a menor viscosidade, pela formulao (F). O valor elevado da viscosidade da formulao (K) 10.510 cP conferiu sensorial semelhante pomada embora com melhor espalhabilidade que este tipo de forma farmacutica. A viscosidade atingida na mxima taxa de cisalhamento foi menor para a formulao (F) 2079cP e maior para a formulao (K) 10.510cP. A formulao (I) tambm teve o valor da viscosidade mais baixo em relao as demais. Ainda para a formulao (I), o teor obtido foi abaixo das demais formulaes. Em menor ou maior grau, o estudo reolgico das formulaes genricas, embora demonstrando o comportamento pseudoplstico tpico de produtos semi-slidos, mostrou diferenas nos valores das viscosidades estacionrias sendo apresentados na ordem crescente: (F) < (I) < (G) < (J) < (H) < (K) Embora as formulaes (E) e (K) tenham em comum, mesma forma farmacutica, excipientes de mesma funo, mesmo teor do frmaco, conforme preconiza a legislao vigente para os produtos genricos, suas viscosidades estacionrias so bastante diferentes, provavelmente devido a proporo diferenciada dos excipientes. A alterao nos valores deste parmetro fsico justificam a anlise do comportamento das mesmas formulaes, em relao a liberao do frmaco da forma farmacutica e em relao a absoro cutnea.

100

5.5

SELEO DAS EMULSES NO INICAS SIMULADAS NO LABORATRIO Pelas caractersticas de homogeneidade, organolpticas e fsicas

(viscosidade), pH, e melhor estabilidade (dentro dos critrios adotados, no visando a determinao do prazo de validade e sim apenas a mellhor composio), selecionou-se a formulao base denominada (F9), e a partir desta, conforme descrito no item 4.4 da metodologia, elaborou-se as formulaes (A1), onde o frmaco, a 2%, foi solubilizado quente em propilenoglicol e incorporado a fase aquosa da emulso, e (B), onde o frmaco, a 2%, foi apenas disperso no propilenoglicol e adicionado a emulso j pronta. A Tabela 13 relaciona os componentes e quantidades utilizadas em (F9), - fase oleosa (1), e fase aquosa (2) - elaborada pelo sistema EHL, menciona as funes de cada componente e mostra a fase (3), onde o frmaco foi adicionado. Tabela 13
COMPONENTE FASE OLEOSA (1) lcool cetlico lcool estearlico lcool cetoestearlico etoxilado 20OE Monoestearato de sorbitano Miristato de isopropila Polissorbato 80 FASE AQUOSA (2) Propilenoglicol Metabissulfito de sdio EDTA sdico gua purificada FASE FRMACO (3) Cetoconazol Propilenoglicol 6,0% 6,0% 3,0% 1,0% 10,0% 1,0% 2,5% 0,2% 0,2% q.s.100,0% 2,0% 2,5% Espessante Espessante Emulsionante Emulsionante Emoliente Emulsionante Umectante Antioxidante Sequestrante Veculo Frmaco Solubilizante

Composio da formulao base no_inica pelo sistema EHL


CONCENTRAO FUNO

101

Conforme descrito no item 4.4.1.1 da metodologia, as formulaes (A2), (A3) e (A4), da mesma forma que (A1), ou seja, contendo o frmaco solubilizado, foram elaboradas com diferentes emolientes a fim de avaliar em ensaio de permeao cutnea, a interferncia destes como promotores de absoro. Com o mesmo emoliente da formulao de referncia (miristato de isopropila) e objetivando possveis interferncias do sistema de elaborao das formulaes na permeao cutnea, foram elaboradas preparaes contendo cera auto emulsionante. A Tabela 14 ilustra as respectivas funes de cada componente de (F12). As formulaes tendo o frmaco solubilizado e disperso no interior do veculo neste estudo foram denominadas (C) e (D), respectivamente. Tabela 14 Composio da formulao base no-inica contendo cera auto emulsionante
COMPONENTE
FASE OLEOSA (1) lcool cetoestearlico e lcool cetoestearlico etoxilado, estearato de sorbitano e monoleato de sorbitano etoxilado (20OE) Miristato de isopropila Propilparabeno FASE AQUOSA (2) Propilenoglicol Metabissulfito de sdio EDTA sdico Metilparabeno gua purificada FASE FRMACO (3) Cetoconazol Propilenoglicol

CONCENTRAO

FUNO

14,0% 10,0%

0,1% 2,5% 0,2% 0,2% 0,2% q.s.100,0% 2,0% 2,5%

Emulsionante Emoliente Conservante Umectante Antioxidante Sequestrante Conservante Veculo Princpio ativo Solubilizante

Todas as formulaes descritas no item 4.4.2 da metodologia apresentaram boa espalhabilidade, emolincia, homogeneidade, brilho e adequadas caractersticas fsicas, nas condies analisadas. A escolha por

102

(F12) foi pelo parmetro fsico, viscosidade, a qual se mostrou mais similar formulao de referncia (E). 5.5.1 Avaliao dos Parmetros de Qualidade das Formulaes No-inicas Simuladas no Laboratrio A Tabela 15 relaciona os resultados encontrados quanto aos parmetros de qualidade para as formulaes no-inicas desenvolvidas no laboratrio. Tabela 15 Parmetros de qualidade das formulaes no inicas simuladas no laboratrio
Caractersticas organolpticas Caractersticas fsicas
Teor (%)

Formulaes

Cor Branca,brilhante Branca,brilhante Branca,brilhante Branca,brilhante Branca,brilhante Branca, opaca Branca, opaca

Aspecto Homogneo Homogneo Homogneo Homogneo Homogneo Homogneo Homogneo

Odor Caracterstico Caracterstico Caracterstico Caracterstico Caracterstico Caracterstico Caracterstico

pH
6,82 6,55 6,31 6,34 6,74 7,12 7,06

Viscosidade 4271cP 4132cP 3125cP 4375cP 4453cP 4213cP 4396cP 99,36 0,92 100,40 0,58 101,64 1,26 101,24 0,54 96,13 0,55 101,03 1,25 97,67 0,59

A1 A2 A3 A4 B C D

A solubilizao do frmaco nas formulaes obtidas pelo sistema EHL e com cera autoemulsionante, (A1), (A2), (A3), (A4), (C), parece no interferir na viscosidade. Nas formulaes (B) e (D), o teor encontrado foram os mais baixos, sugerindo que a melhor maneira de incorporar o frmaco seja durante o preparo da emulso. O emoliente, vaselina lquida, interferiu na viscosidade da formulao (A3), mais baixa que as demais formulaes simuladas no laboratrio, seguida da formulao com oleato de decila (A2), miristato de isopropila

103

(A1) e triglicerdios dos cidos cprico e caprlico (A4). As modificaes observadas, no entanto, no alteraram a consistncia das emulses. A composio em emulsionantes elevou o pH para (C) e (D), e tambm alterou as caractersticas organolpticas, sendo estas mais opacas que as demais formulaes. O conhecimento a respeito dos excipientes utilizados e as possveis interaes destes com a pele, a necessidade da verificao da qualidade da emulso produzida sob vrias condies de estresse, so condies importantes para a obteno de uma forma farmacutica segura e eficaz alm de estvel, e os estudos reolgicos podem trazer grandes contribuies pois revelam alteraes importantes nos parmetros de qualidade que podem conduzir investigao dos fatores de instabilidade (TADROS, 2004). O comportamento reolgico de todas as formulaes simuladas no laboratrio foi do tipo pseudoplstico sendo o esperado para produtos semislidos, e com tixotropia evidente apenas para (A1), (A2), (A3) e (A4).

5.5.2 Comparativo dos Teores de Cetoconazol Obtidos por CLAE Para Todas
as Formulaes Utilizando-se a metodologia j descrita no item 4.3.1, realizou-se a quantificao do cetoconazol nas especialidades farmacuticas do comrcio e nas simuladas no laboratrio. Os dados esto relatados na Tabela 16. Houve exatido do mtodo verificado pela aproximao dos resultados obtidos para o teor em cetoconazol nas formulaes com o valor tido como verdadeiro. Os valores de desvio padro relativo ou coeficiente de variao abaixo de 2% demonstram uma boa preciso do mtodo.

104

Tabela 16
Formulao

Teor em cetoconazol nas formulaes


Teor Teor esperado* encontrado (mg/g ) (mg/g)
20 20 20 20 20 20 20 20 20 20 20 20 20 20 19,87 20,08 20,30 20,45 19,25 20,21 19,60 20,01 19,89 19,87 20,09 19,41 20,26 20,13

Teor (%)

CV ou DPR (%)
0,92 0,57 1,24 0,53 0,57 1,24 0,58 0,92 0,71 0,56 0,70 0,26 1,22 0,28

A1 A2 A3 A4 B C D E F G H I J K

99,36 0,92 100,40 0,58 101,64 1,26 101,24 0,54 96,13 0,55 101,03 1,25 97,67 0,57 100,03 0,92 99,43 0,71 99,31 0,56 100,60 0,70 97,03 0,25 101,28 1,24 100,03 0,28

Nota: os resultados para o teor representam a mdia de trs determinaes por CLAE

105

5.6 ESTUDO IN VITRO DE PERMEAO E RETENO CUTNEA


Para a seleo da soluo receptora, foram analisados vrios agentes solubilizantes para o cetoconazol como polissorbato 80, polietilenoglicol oleilter, e tampes a vrios valores de pH. Pela garantia de melhor integridade das colunas nas anlises por CLAE, e melhor estabilidade do frmaco, optouse pela mistura etanlica (etanol: soluo tampo fosfato pH 7,4 90:10). 5.6 1 Elaborao da Curva Analtica do Cetoconazol em Soluo Receptora A Figura 14 evidencia o cromatograma da soluo padro do cetoconazol em soluo receptora com concentrao 10g/mL mostrando tempo de reteno entre 4 e 6 minutos, tpico do cetoconazol.

Figura 14 Cromatograma do cetoconazol padro em soluo receptora

A Figura 15 demonstra a srie de diluies analisadas em soluo receptora realizada segundo o item 4.5.2 da metodologia.

106

Figura 15 Cromatogramas das concentraes utilizadas na curva analtica do cetoconazol em soluo receptora A Figura 16 representa o trabalho matemtico aplicado a esta curva. A curva construda mostrou boa linearidade com coeficiente de determinao r2 = 0,995316 e coeficiente de correlao r= 0,997655, com equao de regresso linear +3,96 . 105x 8,68 . 104. A soluo receptora selecionada foi capaz de solubilizar o frmaco na concentrao utilizada, e, portanto adequada para a utilizao no ensaio in vitro de permeao cutnea do cetoconazol, e a curva analtica construda tornou possvel a quantificao do frmaco em diversas concentraes nas amostras de soluo receptora, quando coletadas durante a realizao do estudo. 5.6.2 Membrana Permeante As peles de orelhas de porco foram selecionadas para esta pesquisa, por serem de fcil aquisio e manipulao, histolgica e bioquimicamente similares pele humana, e com caractersticas de permeabilidade cutneas bem prximas a estas (ANDEGA; KANIKKANNAN; SINGH, 2001). Foram preparadas segundo item 4.5.3 da metodologia

107

4000000

3000000

P e a k 2000000 S i z e

1000000

0 2.5 5.0 7.5

Amount

Figura 16 Curva analtica do cetoconazol em soluo receptora

108

5.7 ESTUDO IN VITRO DE PERMEAO CUTNEA


As anlises foram conduzidas inicialmente para a formulao de referncia e em seguida para todas as outras formulaes. 5.7.1 Anlise da soluo receptora Ao total, as 14 especialidades farmacuticas (1 formulao referncia, 6 formulaes genricas do comrcio e 7 formulaes simuladas no laboratrio) foram analisadas em duas tomadas de amostra diferentes. As anlises, quanto permeao cutnea, foram feitas nos tempos 15, 30, 60, 120, 180, 240, 300, 360, 420, 480, 540, 600, 660, 720, 1440 min, conforme o item 4.7.3 da metodologia. Para os ensaios in vitro de permeao cutnea utilizaram-se doses infinitas das formulaes de tal forma que a concentrao do frmaco no compartimento doador permanecesse em contnuo excesso (OECD, 2004). Nas anlises feitas para a formulao referncia, segundo o tem 4.5.4 da metodologia, no tempo de reteno entre 4 e 5 min, nada foi observado nas amostras coletadas durante as 24h, conforme demonstra a Figura 17.

Figura 17 Estudo in vitro de permeao cutnea da formulao (E) nas 24h A Figura 18 ilustra o estudo de permeao cutnea da formulao simulada no laboratrio, contendo o frmaco incorporado

109

durante a preparao da emulso e contendo o emoliente miristato de isopropila, neste estudo denominada: (A1). Nada se observou no tempo de reteno caracterstico do cetoconazol, demonstrando, portanto no haver permeao cutnea no perodo de 24h analisado.

Figura 18 Estudo in vitro de permeao cutnea da formulao (A1) nas 24h Os resultados encontrados para a permeao cutnea do

cetoconazol no tempo analisado, so coerentes com a literatura cientfica, onde mencionado que a formulao tpica contendo 2% do frmaco, praticamente no absorvida (KOROLKOVAS, 1995), no tem absoro significativa (FUCHS; WANNMACHER, 1998) atravs da pele e mucosas, portanto uma ao tpica. O estudo de permeao cutnea in vitro foi realizado com todas as formulaes, e todas as solues permeantes analisadas no mostraram a presena do cetoconazol, no perodo analisado de 24h. Segundo a OECD (2004), quando se usam doses infinitas, um perodo de exposio acima de 24h mais apropriado quando se deseja atingir o estado de equilbrio dinmico e desta maneira conhecer o respectivo coeficiente de permeabilidade do produto analisado. Ao presente trabalho interessa estimar os valores para a reteno cutnea dentro das 24h, e estes foram calculados, pela quantificao do frmaco na rea da membrana que foi exposta permeao, e tambm pelo doseamento da formulao

110

restante aps cada intervalo de tempo (1, 3, 6, 12 e 24 h, conforme item 4.5.5 da metodologia. A soma do valor permeado com o valor retido deve ser igual a quantidade do frmaco adicionado inicialmente. 5.7.2 Anlise da Membrana Permeante Cada uma das tomadas de amostra de cada uma das formulaes, quanto reteno cutnea, foi verificada nos tempos de 1, 3, 6, 12 e 24 h, na epiderme total mais a derme. As solues das lavagens das peles aps a permeao foram analisadas por CLAE conforme descrito na metodologia nos itens 4.5.4 e 4.5.5, e nestas no se verificou a presena do cetoconazol. As Tabelas 17a e 17b demonstram os valores obtidos para as formulaes (A1), (A2), (A3) (A4), (B) (C) e (D) e formulao de referncia (E) e percebe-se, embora no de maneira significativa, haver aumento (%) na reteno cutnea com a tomada de amostra menor (0,2g), em todas as anlises. Tabela 17a Resultados do estudo de reteno cutnea do cetoconazol nas formulaes simuladas no laboratrio
Tempo (h)

FORMULAES
A1 R (g/cm2) 8.851 0,04 9.993 0,12 17.025 0,21 21.183 0,22 22.183 0,09 968 0,04 1.149 0,04 1.858 0,02 2.142 0,02 2.252 0,02 R (%) 22,13 24,98 42.56 52,96 55,46 24,22 28,74 46,46 53,55 56,31 R (g/cm2) 9.489 013 12.308 010 20.404 0,13 23.365 0,13 25.105 0,32 1.118 0,06 1.378 0,05 2.094 0,03 2.338 0,10 2.543 0,10 A2 R (%) 23,72 30,77 51,01 58,41 62,76 27,96 34,45 52,37 58,47 63,59 R (g/cm2) 10.206 0,03 16.277 0,02 22.979 0,03 25168 0,03 26.751 0,03 1.260 0,03 1.858 0,04 2.331 0,04 2.606 0,03 2.787 0,04 A3 R (%) 25,52 40,69 57,45 62,92 66,88 31,50 46,46 58,28 65,17 69,69 R (g/cm2) 8.985 0,04 10.111 ,07 14.198 0,12 18.632 0,06 20.656 0,03 1.055 0,02 1.197 0,03 1.575 0,02 1.929 0,03 2.157 0,03 A4 R (%) 22,46 25,28 35,50 46,58 51,64 26,38 29,93 39,38 48,23 53,94

1 Amostra 1 Amostra 2 3 6 12 24 1 3 6 12 24

111

Tabela 17b Resultados do estudo de reteno cutnea do cetoconazol na formulao de referncia (E) e nas formulaes simuladas no laboratrio
Tempo (hs) FORMULAES B R (g/cm2) 2.945 0,08 5.646 0,23 11.859 0,18 16.277 0,47 18.270 0,71 457 0,02 788 0,02 1.362 0,03 1.670 0,02 1.874 0,04 R (%) 7,36 14,12 29,65 40,69 45,68 11,42 19,69 34,06 41,74 46,86 R (g/cm2) 4.803 008 11552 0,04 18.041 0,05 21.286 0,06 23.428 0,08 929 0,06 1.339 0,03 1.874 0,04 2.307 0,01 2.473 0,02 C R (%) 12,01 28,88 45,10 53,22 58,57 23,23 33,47 46,86 57,68 61,82 R (g/cm2) 3.134 0,06 7.009 0,05 11.891 0,07 18.561 0,10 20.136 0,04 457 0,04 890 0,04 1.473 0,02 1.945 0,02 2.024 0,08 D R (%) 7,84 17,52 29,73 46,40 50,34 11,42 22,25 36,82 48,63 50,60 R (g/cm2) 7.678 0,14 11.175 0,11 17.427 0,04 21.215 0,11 22.609 0,04 961 0,03 1.252 0,06 1.859 0,03 2.213 0,04 2.378 0,02 E R (%) 19,20 27,94 43,57 53,04 56,52 24,02 31,30 46,46 55,32 59,46

1 3 Amostra 1 Amostra 2 Nota: 6 12 24 1 3 6 12 24

R = quantidade retida na pele, mdia de trs determinaes Em destaque , os resultados obtidos para a formulao de referncia (E)

A utilizao de controles contendo a mesma matriz a ser analisada em todas as formulaes elaboradas no laboratrio, permitiu de maneira simplificada verificar a existncia de seletividade do mtodo proposto, parmetro que foi tambm observado pela no interferncia dos excipientes em nenhuma das formulaes testadas. Como controles utilizaram-se formulaes sem o frmaco exceto no caso das formulaes genricas, onde se usou como controle um fragmento de pele. Em todos estes controles, procedeu-se o estudo in vitro nas mesmas condies que nas formulaes estudadas. A Figura 19 ilustra os cromatogramas referentes ao estudo de reteno cutnea para a formulao (A1) e a Figura 20, para a formulao referncia (E), respectivamente nas duas tomadas de amostra (2,0g, tomada de amostra 1; e 0,2g, tomada de amostra 2).

112

Figura 19 Estudo in vitro de reteno cutnea do cetoconazol na formulao (A1) nas 24h

Figura 20 Estudo in vitro de reteno cutnea do cetoconazol da formulao (E) nas 24h
Nota: tomada de amostra 1 no tempo de 6 h tomada de amostra 2 no tempo de 6 h

113

A Figura 21 mostra os cromatogramas obtidos nos estudos de reteno cutnea do cetoconazol nas formulaes simuladas no laboratrio e referncia.

Cetoconazol

Figura 21 Cromatogramas caractersticos da reteno cutnea do cetoconazol nas formulaes noinicas simuladas no laboratrio
Nota: (A3), (A2), (C), (E), (A1), (A4), (D), (B), no tempo 24 h

A formulao com o frmaco apenas incorporado a formulao j pronta (B), e elaborada segundo o sistema EHL, mostrou mais baixa reteno que (E) e mais baixa que as formulaes (A1), (A2), (A3) e (A4). A formulao referncia (E) e a formulao (A1) tiveram resultados bem prximos na reteno cutnea total, 56,52% e 55,46% respectivamente nas 24 h, em relao a amostra 1, e 59,46% e 56,31% em relao a amostra 2, respectivamente. Estes resultados eram esperados, uma vez que se procurou seguir a formulao referncia como modelo de composio qualitativa, modo de elaborao e incorporao do frmaco. As formulaes (E), (A1) e (B), possuem a mesma composio qualitativa, o mesmo emoliente e o mesmo teor do frmaco. Entre as formulaes (A1) e (B) a diferena est presente no modo de incorporao do frmaco. Assim os resultados de reteno cutnea obtidos sugerem que o frmaco adicionado durante a preparao da emulso, como em (A1) tenha possibilitado um aumento da reteno cutnea. Este fato fica tambm evidenciado pelos resultados observados para as formulaes (C) e

114

(D), que foram elaboradas no pelo sistema EHL, mas sim, com ceras auto emulsionantes, ento no o modo de elaborao, mas a maneira de incorporao do frmaco parece ser neste caso o fator principal responsvel pelo aumento da reteno cutnea verificado para a formulao (C). Emulsionantes no-inicos como lcool cetoestearlico etoxilado, lcool cetlico, lcool estearlico, lcool cetoestearlico, podem ser utilizados isoladamente como emulsificantes primrios e secundrios fazendo parte da fase oleosa da formulao, aumentando a viscosidade e contribuindo para a estabilidade do sistema (JATO, 1997). Podem tambm fazer parte da constituio de ceras auto emulsionantes como o caso da cera utilizada na preparao das formulaes (C) e (D), o Polawax NF, (que contm lcool cetoestearlico com steres de sorbitano polioxietilnicos). A base auto emulsionante Polawax NF, forma rede de cristais lquidos, pela formao de uma srie de bicamadas lamelares de molculas de emulsificante, e desta maneira evita a coalescncia das gotculas melhorando a estabilidade do produto. Este comportamento provavelmente acontea devido a uma diminuio da atrao de Van der Waals entre duas gotculas de leo, alm disto, os cristais lquidos conferem poder hidratante s formulaes por mimetizar as bicamadas celulares das membranas celulares. Pode ser estabelecido que com o crescimento da cadeia polioxietilnica, a capacidade de reteno de gua interlamelar de uma emulso O/A tambm aumenta (CRODA; 2006). A gua interlamelar est em equilbrio dinmico com a gua do sistema, ou seja, quando a gua do sistema evapora a gua ligada interlamelarmente se transforma em gua do sistema, isto prolonga a hidrofilia das formulaes, com conseqncias benficas para o consumidor (AULTON, 2005). Houve variao na reteno cutnea total (24 horas) em relao ao tipo de emoliente, e os valores crescentes observados foram (A4) < (A1) < (A2) < (A3), percebendo-se ento que para a mesma composio de excipientes, a melhor reteno cutnea foi obtida quando o emoliente

115

usado foi a vaselina lquida, seguido do oleato de decila, miristato de isopropila, e triglicerdios dos cidos cprico e caprlico. A mistura de triglicerdios de cadeia mdia, principalmente cidos cprico e caprlico foi usada na elaborao da formulao (A4). Com importantes propriedades de espalhabilidade, lubrificao, diluente de ativos e emolincia, so uma alternativa aos leos minerais e vegetais, com vantagem destes ltimos, por possurem semelhana a composio lipdica da pele humana (SANCTIS, 2000), reforando a importncia do emprego deste nas formulaes tpicas. Este agente promotor mostrou poder de penetrao cutnea semelhante ao do miristato de isopropila, do oleato de decila e da vaselina lquida, sendo este fato verificado pelos resultados obtidos na reteno cutnea das formulaes (A1), (A2) e (A3) respectivamente, comparativamente a (A4). Todos estes componentes podem agir como modificadores da penetrao cutnea, os quais aumentam a habilidade da pele para absorver frmacos por alterarem o domnio lipdico do estrato crneo e os elementos proticos do tecido, ou por aumentar a partio do frmaco atravs do estrato crneo. Compostos constitudos de lcoois graxos, teis como cosolventes, tm se mostrado efetivo como facilitadores da penetrao cutnea (ANDEGA; KANIKKANNAN; SINGH, 2001). A literatura preconiza que em muitos casos a velocidade de liberao de um frmaco muito mais rpida a partir de emulses formadas em seu EHL timo (ALLEN; POPOVICH; ANSEL, 2007, JATO, 1997). Observa-se este fato pelos resultados obtidos para as formulaes elaboradas ou presumivelmente elaboradas pelo sistema EHL, na primeira hora do estudo de reteno cutnea, em ambas as tomadas de amostra (2,0g e 0,2g). As Tabelas 18a e 18b mostram os resultados obtidos nos estudos de reteno cutnea das formulaes genricas.

116

Tabela 18a Resultados do estudo de reteno cutnea do cetoconazol nas especialidades farmacuticas genricas do comrcio
Tempo (hs) FORMULAES F R (g/cm2) 6.599 0,03 12624 0,06 20.759 0,09 26.862 0,36 31.004 015 899 0,05 1.528 0,04 2.244 0,03 2.961 0,03 3.371 0,05 R (%) 16,50 31,56 51,90 67,15 77,51 22,25 38,19 56,11 74,03 84,26 R (g/cm2) 5.544 0,08 11.860 0,06 18.774 0,08 19.152 0,09 25.641 0,10 780 0,08 1.386 0,04 1.914 0,03 2.063 0,04 2.646 0,03 G R (%) 13,86 29,65 46,94 47,88 64,10 19,49 34,65 47,84 51,58 66,15 R (g/cm2) 7.151 0,05 9.277 0,08 16.593 0,13 19.806 0,03 22.223 0,06 921 0,04 1.221 0,03 1.764 0,07 2.158 0,05 2.252 0,08 H R (%) 17,88 23,19 41,48 49,51 55,56 23,03 30,52 44,10 53,94 56,31

1 3 Amostra 1 Amostra 2 6 12 24 1 3 6 12 24

Tabela 18b Resultados do estudo de reteno cutnea do cetoconazol nas especialidades farmacuticas genricas do comrcio
FORMULAES I
R (g/cm2) 6.402 0,18 11.765 0,26 18.869 0,35 25.036 0,40 27.192 0,08 1.323 0,03 1.733 0,15 2.418 0,05 2.788 0,02 2.851 0,02 R (%) 16,01 29,41 47,17 64,34 67,98 33,08 43,31 60,44 69,69 71,27 R (g/cm2) 7.343 0,18 10.214 0,21 17.175 0,17 20.144 0,22 22.389 0,43 977 0,06 1.205 0,04 1.874 0,05 2.071 0,05 2.268 0,08

Tempo (hs)

J
R (%) 18,37 25,53 42,94 50,36 55,97 24,41 30,12 46,86 51,78 56,70 R (g/cm2)

K
R (%) 10,73 16,16 29,43 34,67 40,30 13,78 22,25 32,88 36,62 41,93

1 Amostra 1 3 6 12 24 1 Amostra 2 3 6 12 24

4.292 0,04 6.465 0,17 11.773 0,05 13.868 0,04 16.120 0,08 551 0,06 890 0,31 1.315 0,08 1.465 0,04 1.677 0,02

Nota:*R = quantidade retida na pele

117

A Figura 22 ilustra os cromatogramas obtidos no estudo de reteno cutnea realizado com as especialidades farmacuticas genricas do comrcio, nas 24h.

CETOCONAZOL

Figura 22

Nota: No tempo 24 horas,

Cromatogramas caractersticos da reteno cutnea das especialidades farmacuticas do comrcio


(F), (I) (G), (J), (H), (K)

Pela observao das caractersticas organolpticas e fsicas da formulao (K) e fazendo-se a relao com os dados da reteno cutnea, pode-se sugerir que a viscosidade muito maior que a da formulao referncia, possa ter contribudo para a diminuio da capacidade de reteno cutnea desta formulao. A formulao (K), apesar de possuir a mesma composio qualitativa que (E), proporcionou nas mesmas condies de anlise, valor de reteno cutnea total, abaixo desta. Isto poderia ser explicado pelo fato de que na prtica o valor de EHL timo requerido para uma emulso, calculado empiricamente, dependente de diversos fatores como, o procedimento de preparao, a temperatura de elaborao e a forma de resfriamento. Tambm a adio de aditivos, principalmente de eletrlitos a uma emulso, pode modificar o EHL timo.

118

A concentrao total da mistura emulsificante muito importante, se ela variar, o valor de EHL crtico tambm ir variar. Com concentraes muito baixas se torna invivel a obteno de emulses estveis e, em concentraes muito altas no se obtm emulses verdadeiras, mas outro tipo de estruturas mais complexas (JATO, 1997). Em relao aos emolientes, o oleato de decila, presente na formulao (G) e tambm na formulao simulada no laboratrio (A2), ambas as formulaes com semelhante viscosidade, parece ter sido o agente promotor da reteno cutnea, uma vez que as duas formulaes possuindo diferentes excipientes em suas composies, apresentaram valores semelhantes de reteno cutnea. Entre as formulaes genricas, elaboradas no sistema EHL e com o emoliente miristato de isopropila, os valores porcentuais de reteno cutnea obtidos para as formulaes (K), (H) e (J) foram 40,30%, 55,56% e 55,94% respectivamente, nas 24 h e na tomada de amostra 1. Os valores de (H) e (J) so prximos e coerentes com (E) 56,52% para as mesmas 24 h na tomada de amostra 1. Isso era esperado devido as trs formulaes apresentarem semelhana na composio qualitativa dos excipientes e provavelmente deva existir proximidade tambm na composio quantitativa e modo de elaborao. 5.7 3 Anlise das Formulaes Aps o Trmino do Estudo In Vitro O excesso de emulso (de cada formulao) que restou sobre a membrana aps o tempo total de permeao, foi retirado com auxlio de esptula e analisado conforme descrito no item 4.5.4 e 4.5.5, por CLAE . Os valores da Tabela 19 foram usados para aferir os dados obtidos na reteno cutnea, especialmente onde foram detectados uma quantidade muito pequena de cetoconazol. Ao final do tempo estipulado (1, 3, 6, 12 e 24 h), para o estudo in vitro, os valores obtidos das permeaes atravs da pele, somados aos da concentrao do frmaco retido na pele e ainda a quantidade deste que

119

permaneceu na formulao e no foi liberado, permitiu estimar o total de recuperao do cetoconazol, que foi em torno de 100% para todas as formulaes e nas duas tomadas de amostra. Segundo a OECD (2004), a recuperao deve ser 100 10%. Tabela 19a Resultados do estudo das formulaes aps o trmino do estudo in vitro (%)
Tempo (hs)

A1
NR(%) 77,18 0,51 74,61 0,58 57,18 0,74 46,88 0,07 43,80 0,19 75,69 0,04 70,92 0,02 52,96 0,06 45,85 0,06 42,88 0,06

A2
NR(%) 76,19 0,12 68,78 0,23 48,96 0,03 41,37 0,38 36,81 0,03 71,60 0,08 65,17 0,09 47,04 0,06 41,17 0,24 35,19 0,05

FORMULAES A3 A4
NR(%) 74,45 0,13 59,19 0,11 42,50 0,11 37,04 0,06 33,07 0,11 67,65 0,23 52,71 0,19 41,46 0,05 34,10 0,21 29,69 0,01 NR(%) 77,50 0,10 74,39 0,17 64,42 0,24 53,24 0,19 47,81 0,30 73,31 0,22 69,29 0,11 59,98 0,14 51,02 0,13 45,46 0,20

B
NR(%) 92,02 0,08 85,84 0,23 70,25 0,18 49,14 0,47 54,06 0,71 88,52 0,10 80,13 0,06 65,60 0,15 58,04 0,04 52,19 0,15

C
NR(%) 87,03 0,28 71,04 0,16 54,82 0,02 45,99 0,77 41,04 0,03 76,75 0,24 66,02 0,04 53,02 0,06 41,98 0,03 37,75 0,07

E
NR(%) 80,71 0,29 71,51 1,62 56,41 0,02 46,87 0,02 43,36 0,34 24,02 0,03 68,65 0,03 53,17 0,02 44,23 0,06 40,13 0,04

1 Amostra 1 Amostra 2 3 6 12 24 1 3 6 12 24

Tabela 19b Resultados do estudo das formulaes aps o trmino do estudo in vitro (%)
Tempo

(hs)

D
NR(%) 91,8 0,81 82,01 0,50 70,15 0,24 53,52 0,48 49,24 1,20 87,23 0,07 77,35 0,06 62,81 0,14 50,71 0,21 48,63 0,11

F
NR(%) 83,36 0,60 68,17 0,40 47,61 0,67 32,66 0,60 22,46 0,09 77,04 0,32 60,50 0,27 43,67 0,02 25,81 0,05 15,52 0,02

FORMULAES G H
NR(%) 85,88 0,41 70,29 0,50 52,69 0,32 51,73 0,34 36,81 0,25 80,42 0,02 64,92 0,04 51,98 0,26 48,40 0,14 32,98 0,31 NR(%) 81,66 0,88 76,44 0,50 58,38 0,51 50,20 0,07 44,31 0,21 75,35 0,23 68,83 0,04 55,52 0,08 44.73 0,17 43,42 0,14

I
NR(%) 83,82 0,22 70,40 0,28 52,63 0,31 35,50 0,25 31,90 0,95 66,67 0,06 56,56 0,05 39,33 0,09 30,17 0,03 28,50 0,02

J
NR(%) 81,38 0,68 74,31 0,12 56,65 1,14 49,36 0,43 43,77 0,33 74,42 0,25 68,42 0,28 51,73 0,23 47,54 0,35 40,81 0,37

K
NR(%) 89,05 0,34 83,41 0,38 70,41 0,28 65,18 0,26 59,33 0,51 85,85 0,13 77,42 0,15 66,83 0,11 63,17 0,12 57,94 0,02

1 Amostra 1
3 6 12 24 1

Amostra 2

3 6 12 24

Nota: NR = quantidade do frmaco no retido na pele, e que restou na formulao sem ser liberado

120

As Figuras 23 e 24 demonstram as porcentagens de reteno e no reteno nas duas tomadas de amostra, durante o tempo proposto (24 h).

90% 80% 70% 60% 50% 40% 30% 20% 10% 0%


QUANTIDADE NO RETIDA

QUANTIDADE RETIDA

TEMPO (HORAS)

12

24
QUANTIDADE RETIDA
QUANTIDADE NO RETIDA

Figura 23 Comparativo entre a quantidade retida e no retida de cetoconazol (%) na formulao (E) amostra 1- 24h

80% 70% 60% 50% 40% 30% 20% 10% 0%


QUANTIDADE NO RETIDA

QUANTIDADE RETIDA

TEMPO (HORAS)

12

24

QUANTIDADE RETIDA
QUANTIDADE NO RETIDA

Figura 24

Comparativo entre a quantidade retida e no retida de cetoconazol (%) na formulao (E)amostra 2 24h

121

As Figuras 25 e 26 comparam as retenes cutneas de 24 h de estudo in vitro, das duas tomadas de amostra, nas formulaes (E) e (A1) respectivamente.

70,00% 60,00%
quantidade retida
E1 (%)
E2 (%)

50,00% 40,00% 30,00% 20,00% 10,00% 0,00% 0 3 6 9 12 tempo (hs) 15 18 21 24

Figura 25

Perfil de reteno cutnea (%) nas tomadas de amostra 1 e 2 - formulao (E)

60,00%

50,00%

40,00%

quantidade retida

30,00%

20,00%

A1 -1 (%)
10,00%

A1 -2 (%)

0,00% 0 3 6 9 12 15 18 21 24

Tempo (horas)

Figura 26

Perfil de reteno cutnea (%) nas tomadas de amostra 1 e 2-formulao (A1)

122

5.8

ANLISE ESTATSTICA CUTNEA

DOS

RESULTADOS

DE

RETENO

Os resultados aps tratamento estatstico, so relatados a seguir. 5.8.1 Clculo da Cintica de Reteno Cutnea Em geral o estudo cintico comea com a medida da concentrao do frmaco em intervalos determinados, sob um conjunto especfico de parmetros. Os dados coletados no estudo cintico podem servir para calcular a velocidade da reao e a constante da velocidade que a velocidade com que o frmaco se degrada nas condies da experincia. Os dados podem ser ainda utilizados, para determinar a meia-vida experimental do frmaco, que definida como o tempo no qual ocorre a degradao de 50% de sua concentrao inicial. A meia-vida expressa em t1/2 ou t meio, e neste estudo foi calculada como o tempo mdio que cada formulao, em cada tomada de amostra, levou para ter uma reteno cutnea de 50% no tempo de 24 h. As Figuras 27 e 28, ilustram o mtodo estatstico da regresso linear para o clculo do t para a formulao (E) nas tomadas de amostra 1 e 2.

12 10 ln (Co-C) 8 6 4 2 0 0 2 4 6 8 10 12 14 Tempo (h) y = -0,2214x + 9,9047 R2 = 0,9951

Figura 27 Clculo da equao da reta para a obteno do tempo de meia-vida da formulao (E) tomada de amostra 1

123

8 7 6 ln (Co-C) 5 4 3 2 1 0 0 2 4 6 8 10 12 14 Tempo (h) y = -0,2013x + 7,5185 R2 = 0,9931

Figura 28 Clculo da equao da reta para a obteno do tempo de meia-vida da formulao (E) tomada de amostra 2

Clculos semelhantes aos praticados para a formulao (E) foram feitos para todas as demais formulaes nas duas tomadas de amostra nas 24 horas totais. Desta maneira, obteve-se o t-meio de todas as formulaes listados na Tabela 20, sendo designado t (1) o tempo de meia-vida para a tomada de amostra 1, e t (2) o tempo de meia-vida para a amostra 2 (EDGINTON; SHERMAN,1971). Tabela 20
Formulaes E A1 A2 A3 A4 B C D F G H I J K MDIA MDIA t(1) e t(2)

Valores dos t (1) e t (2) para todas as formulaes


t(1) 3,130081 2,798869 3,32853 3,22026 4,182257 3,618799 3,528513 3,15 4,248927 6,888668 3,982759 2,814785 3,867188 4,439462 3,799936 3,799936 3,654928 h:min 03:11:00 02:48:00 03:20:00 03:13:00 04:10:00 03:37:00 03:31:00 03:09:00 04:15:00 06:53:00 04:00:00 02:48:00 03:51:00 04:26:00 3,727432 t(2) 3,442623 2,957746 3,768352 3,61691 3,130081 3,85 3,362445 2,496398 4,210207 6,780822 2,803398 2,323944 3,875839 4,55023 3,654928 43,644 h:min 03:26:00 02:57:00 03:46:00 03:36:00 03:08:00 03:51:00 03:21:00 02:30:00 04:12:00 06:46:00 02:48:00 02:20:00 03:52:00 04:33:00 03:44

124

Os clculos do tempo de meia-vida foram obtidos a partir dos valores (g/cm2) de reteno cutnea apresentados anteriormente, nas Tabelas 17 e 18 deste captulo. AS Figuras 29 e 30 demonstram os resultados obtidos para as duas tomadas de amostra de todas as formulaes em relao ao t-meio.
8 7 6 t1/2 (h) 5 4 3 2 1 0 E A1 A2 A3 A4 B C D F G H I J K

amostra 1

Figura 29 Valores de t para todas as formulaes na tomada de amostra 1 nas 24 h


8 7 6 t1/2 (h) 5 4 3 2 1 0 E A1 A2 A3 A4 B C D F G H I J K

amostra 2

Figura 30 Valores dos t para todas as formulaes na tomada de amostra 2 nas 24 h


Nota: Os resultados representam a mdia de trs determinaes independentes, sendo a linha azul central o tempo de meia vida mdio de reteno cutnea

125

Pelos valores exacerbados obtidos para a formulao (G), para o tempo de meia-vida, os quais diferiram muito dos valores encontrados para as demais formulaes, optou-se por elimin-los para os clculos seguintes. A Tabela 21 traz o clculo dos tempos de meia-vida mdios para cada uma da tomadas de amostra, aps ter sido eliminado os valores de (G). Tabela 21
Formulaes
E A1 A2 A3 A4 B C D F H I J K MDIA
MDIA t(1) e t(2)

Valores dos t (1) e t (2) para todas as formulaes, exceto (G)


t(1)
3,130081 2,798869 3,32853 3,22026 4,182257 3,618799 3,528513 3,15 4,248927 3,982759 2,814785 3,867188 4,439462 3,56
3,56 e 3,53 = 3,55

h:min
03:11:00 02:48:00 03:20:00 03:13:00 04:10:00 03:37:00 03:31:00 03:09:00 04:15:00 04:00:00 02:48:00 03:51:00 04:26:00

t(2)
3,442623 2,957746 3,768352 3,61691 3,130081 3,85 3,362445 2,496398 4,210207 2,803398 2,323944 3,875839 4,55023 3,53

h:min
03:26:00 02:57:00 03:46:00 03:36:00 03:08:00 03:51:00 03:21:00 02:30:00 04:12:00 02:48:00 02:20:00 03:52:00 04:33:00
03:33

Pelo valor mdio obtido para o tempo de meia-vida de 3 h e 33 min, entende-se que as formulaes levam em torno deste tempo para terem o frmaco retido em 50 %, na pele. Embora haja diferenas como para a formulao (K), tempo de meiavida em torno de 4h e 30min, e para a formulao (I) em torno de 2h e 40min, elas no so significativas, e apresentam correlao com os dados obtidos para a reteno cutnea. A formulao (K), no tempo de meia-vida obtido, apresenta cerca de 20% da reteno cutnea total que foi de 40,3%, e a formulao (I), no tempo de meia-vida obtido apresenta em torno de 30% da reteno cutnea total que foi de 68%. Esta correlao foi obtida para as demais formulaes, demonstrando o tempo de meia-vida pode ser um dado importante no estudo da

126

interferncia dos excipientes e das variveis tecnolgicas envolvidas no processo de elaborao das emulses. Os resultados apresentados anteriormente nas Figuras 29 e 30, ficam sem a formulao (G), caracterizados conforme as Figuras 31 e 32.

5,0 4,5 4,0 3,5 3,0 2,5 2,0 1,5 1,0 0,5 0,0 E A1 A2 A3 A4 B D C F H I J K amostra 1

Figura 31 Valores dos t para as formulaes em estudo na tomada de amostra 1 nas 24 h

t1/2 (h)
t1/2 (h)

5,0 4,5 4,0 3,5 3,0 2,5 2,0 1,5 1,0 0,5 0,0 E A1 A2 A3 A4 B D C F H I J K amostra 2

Figura 32 Valores dos t para as formulaes em estudo na tomada de amostra 2 nas 24 h


Nota: Os resultados representam a mdia de trs determinaes independentes, e a flecha vermelha indica o tempo de meia vida mdio de reteno cutnea

127

Para as diversas formulaes as duas tomadas de amostra no mostraram diferenas significativas em relao cintica, ou seja, para as duas tomadas de amostra o tempo de meia-vida no diferiu significativamente, como demonstrado na Figura 33.

4,5 4,0 3,5 3,0 2,5 2,0 1,5 1,0 0,5 0,0 1 Tomada 2

Figura 33 Interferncia da tomada de amostra no tempo de meia-vida Analisando-se a Figura 34, em relao aos diferentes emolientes utilizados nas formulaes, percebe-se que o tempo de meia-vida sofre interferncia da composio da formulao.

t (1/2)
t (1/2)

5 4 3 2 1 0 Mdia geral E A1 A2 A3 A4 A3E

Emolientes

Figura 34 Interferncia dos emolientes no tempo de meia-vida

128

A Figura 35 mostra as formulaes simuladas no laboratrio e as especialidades farmacuticas do comrcio em relao ao tipo de emolientes, comparativamente a formulao de referncia (E) e ainda em relao as duas tomadas de amostra sendo A1, as formulaes que contm miristato de isopropila, A2, as formulaes que contm oleato de decila, A3, as formulaes que contm vaselina lquida e A3E, as formulaes que possuem a combinao miristato de isopropila e vaselina lquida.
5 4 t (1/2) 3 2 1 0 1 E 2 1 A1 2 1 A2 2 1 A3 2 1 A4 2 1 A3E 2

Emolientes x Tomadas

Figura 35 Interferncia dos emolientes, tomada de amostra e tempo de meia-vida A Figura 36 ilustra o comportamento das formulaes quanto ao modo de elaborao da emulso.
4,5 4,0 3,5 3,0 2,5 2,0 1,5 1,0 0,5 0,0 Mdia geral ehl Elaborao cera

Figura 36 Interferncia do modo de elaborao das emulses no tempo de meia-vida


Nota: A linha vermelha central representa o tempo de meia vida mdio.

t (1/2)

129

A Figura 37 relaciona modo de elaborao e as tomadas de amostra ao tempo de meia-vida.

4,5 4,0 3,5 3,0 2,5 2,0 1,5 1,0 0,5 0,0 1 ehl Elaborao x Tomada 2 1 cera 2

t (1/2)

Figura

37

Interferncia do modo de elaborao e tomada de amostra no tempo de meiavida

Nota: A linha vermelha central representa o tempo de meia vida mdio.

A Figura 38 mostra a relao do tempo de meia-vida com a incorporao do frmaco, para a formulao de referncia e as demais formulaes.
4,5 4,0 3,5 3,0 t (1/2) 2,5 2,0 1,5 1,0 0,5 0,0 Mdia geral padro solubilizao incorporaao

Incorporao

Figura

38

Nota: A linha vermelha central representa o tempo de meia vida mdio.

Interferncia do modo de incorporao do frmaco no tempo de meia-vida

130

A Figura 39 mostra a relao do tempo de meia-vida e a incorporao do frmaco, considerando o padro nas duas tomadas de amostra.
4,5 4,0 3,5 3,0 2,5 2,0 1,5 1,0 0,5 0,0 1 padro 2 1 2 1 2

t (1/2)

solubilizao Incorporao x Tomada

incorporaao

Figura

39

Interferncia do modo de incorporao e tomada de amostra no tempo de meia-vida

Os componentes da formulao, a maneira de sua elaborao, a maneira de incorporao do frmaco o tipo de emoliente ou a combinao de emolientes empregados so fatores que em maior ou menor proporo parecem interferir no comportamento do frmaco quando administrado topicamente quanto ao tempo de meia-vida, e os emolientes parecem ter maior influncia. 5.8.2 Anlise da Quantidade Total de Frmaco Retido na Pele nas 24 horas O valor da reteno total (VT) para cada formulao durante todo o perodo analisado, ou seja, nas 5 determinaes para cada tomada de amostra, apresentado na Tabela 22, calculando-se em seguida a mdia destas retenes.

131

Tabela 22 Mdia das retenes cutneas nas tomadas de amostras 1 e 2


Formulaes
E A A2 A3 A4 B C D F G H I J K mdia

Nmero de anlises
10 10 10 10 10 10 10 10 10 10 10 10 10 10

Mdia(g/cm2)
16020,90 15847,65 18134,55 20276,55 14516,78 10999,80 15822,45 12146,40 19569,38 16194,15 15009,75 17992,80 15453,90 10503,68 15606,34

Figura

40

ilustra

estes

dados,

mostrando

haver

diferenas

significativas entre as formulaes quando se considera o valor mdio total das retenes, nas 5 determinaes feitas durante as 24 h para cada tomada de amostra, o que justifica uma anlise das retenes mdias nas formulaes em separado.
35000 30000 25000 VT 20000 15000 10000 5000 0 E A A2 A3 A4 B C D F G H I J K Formulaes

Figura 40 Valor Total (VT) da reteno cutnea mdia (g/cm2)


Nota 1: Mdia de 10 determinaes. Nota 2: A barra de erros representa o desvio padro.

132

5.8.3 Clculo do Porcentual de Reteno Cutnea por Regresso Linear das Diferentes Formulaes em Funo da Referncia (E) A anlise por regresso linear tem sido preconizada como instrumento de clculo para utilizao em controle de qualidade, e neste trabalho mostrou resultados significativos (EDGINTON; SHERMAN, 1971). Todas as formulaes tiveram seus clculos realizados da mesma maneira que a apresentada para a formulao (A1), e comparados com a formulao de referncia. A Figura 41 ilustra o mtodo da regresso linear utilizado para obteno das estimativas estatsticas.

25000 20000 A 1 15000 10000 5000 0 0 5000 10000 E 15000 20000 25000 y = 0,9826x + 38,539 2 R =1

Figura 41 Anlise por regresso linear da formulao (A1) em relao formulao referncia (E) 2) (g/cm

A declividade (b) significa o valor de y, para o valor unitrio de x. Em porcentagem, significa, a porcentagem de y quando x for 100%. Portanto, podem-se avaliar quanto os valores das retenes das diversas formulaes so maiores ou menores que a referncia (E), pela anlise do percentual da declividade. A Tabela 23 apresenta estes dados. Notem-se os valores de R obtidos, todos prximos da unidade, mostrando boa correlao entre os dados analisados (LANAS, 2004). Da tabela

133

tambm se salienta os valores de b, obtidos para as declividades das diversas formulaes. Tabela 23 Anlise da reteno cutnea por regresso linear
Incorporao Codificao Elaborao Emolientes

Amostra

eb

ea

A1 A2 A3 A4 B C D F G H I J K

simulada simulada simulada simulada simulada simulada simulada genricas genricas genricas genricas genricas genricas

sol sol sol sol inc inc sol

EHL EHL EHL EHL EHL cera cera cera cera EHL cera EHL EHL

E A2 A3 A4 E E E E A2 A3E A3E E E

0,998 0,999 0,995 0,994 0,981 0,994 0,979 0,992 0,987 0,998 0,994 0,999 0,996

0,98 1,12 1,22 0,87 0,77 1,03 0,85 1,30 1,05 0,95 1,17 0,97 0,68

0,02 0,02 0,04 0,03 0,05 0,04 0,06 0,06 0,06 0,02 0,05 0,01 0,02

38,54 77,51 429,50 291,31 -701,13 -334,32 -753,61 -644,81 -308,45 -131,90 -296,76 -68,84 -210,59

275,56 220,98 531,24 415,56 650,73 489,06 757,82 692,41 715,04 254,32 557,89 152,75 268,28

Notas: sol frmaco solubilizado Inc frmaco incorporado aps a formulao pronta EHL formulao elaborada no sistema EHL E emoliente miristato de isopropila A2 emoliente oleato de decila A3 emoliente vaselina lquida A4 emoliente triglicerdios dos cidos cprico e caprlico A3E combinao dos emolientes vaselina lquida e miristato de Isopropila R coeficiente de correlao b declividade da reta eb erro em relao a declividade (coeficiente angular da reta) a coeficiente linear da reta ea erro em relao ao coeficiente linear

Calculando os dados da declividade (b) em porcentagem, obtiveramse os valores encontrados na Tabela 24, com os quais as formulaes puderam ser organizadas em trs grupos, onde valores prximos a 100%, (valor de declividade igual a unidade) com desvios para mais ou menos 5%, representam o grupo de formulaes que se aproximam do comportamento da formulao de referncia em relao a % de reteno cutnea. Valores superiores e inferiores em 10% do valor do grupo 100% demonstram que

134

nestes

dois

grupos

de

formulaes,

reteno

cutnea

foi

significativamente maior ou menor respectivamente, que a demonstrada pela formulao de referncia. Tabela 24 Porcentuais de reteno do cetoconazol na pele nas diversas formulaes
Formulao Tipo da formulao Tipo de Modo de Tipo de Declividade incorporao do elaborao emolientes (%) frmaco Observado

F A3 I A2 G C A1 J H A4 D B K E

genricas formulao genricas formulao genricas formulao formulao genricas genricas formulao formulao formulao genricas padrao

= solubilizado = solubilizado = incorporado solubilizado = = solubilizado solubilizado Incorporado = padro

cera EHL EHLa EHL cera cera EHL EHL EHL EHL cera EHL EHL EHL

E A3 A3E A2 A2 E E E A3E A4 E E E E

130 122 117 112 105 103 98 97 95 87 85 77 68

>10% >10% >10% >10% entre +5 e -5% entre +5 e -5% entre +5 e -5% entre +5 e -5% entre +5 e -5% <10% <10% <10% <10%

Como se observa o grupo de formulaes (G), (C), (A1), (J), (H) obteve comportamento semelhante ao padro (formulao de referncia), ou seja, a porcentagem de reteno cutnea observada no estudo in vitro por estas formulaes, mostrou por anlise de regresso linear ser em acordo com o medicamento de referncia. Da mesma maneira, as formulaes (F), (A3), (I) e (A2), apresentarem valores superiores, e as formulaes (A4), (D), (B), e (K) valores inferiores a 10% em relao ao medicamento referncia. Os resultados expressivos acima justificam a realizao deste trabalho, onde se observa que todas as variveis buscadas como incorporao do frmaco, modo de elaborao, tipo de emulsificantes e emolientes, alm de variveis no processo de preparao da emulso, so importantes, e que a mudana de um destes parmetros pode ocasionar um comportamento diferente. A mudana do comportamento do medicamento muitas vezes indesejado o que justifica a realizao dos estudos in vitro.

6 CONCLUSES
As definies e atribuies da legislao vigente em relao aos medicamentos genricos e, as bases tcnico cientficas da intercambiabilidade de medicamentos, levaram-nos ao desenvolvimento deste trabalho, e pelos resultados alcanados obtivemos a comprovao da hiptese formulada para esta pesquisa, pois o ensaio in vitro realizado confirmou que os procedimentos metodolgicos adotados podem detectar desvios no comportamento da penetrao percutnea entre modelos de referncia disponveis e medicamentos fabricados por vrios laboratrios farmacuticos, decorrentes das inmeras variveis tecnolgicos adotadas. A relevncia deste estudo est centrada na ampliao de mtodos para a gesto da qualidade dos medicamentos, introduzindo um processo in vitro, que pela eficincia e praticidade na utilizao, implica em ampla aplicabilidade. Cabendo comentar, porm que esta considerao no elimina a necessidade de estudos mais aprofundados visando o aperfeioamento dos referenciais terico-conceituais e metodolgicos. Os objetivos especficos, que uma vez alcanados tornaram possvel alcanar a finalidade geral desta pesquisa, podem ser expressos nas consideraes feitas a seguir: Caractersticas organolpticas qumicas, fsicas e comportamento reolgico, semelhantes ao medicamento referncia puderam ser obtidos em formulaes desenvolvidas no laboratrio, pela combinao dos componentes da forma farmacutica emulsionadas.

136

Os ensaios de permeao cutnea in vitro das formulaes referncia, genricas e simuladas no laboratrio, demonstraram haver uma relao direta entre a viscosidade, o teor do frmaco, e a reteno e que pela variao dos emolientes e emulsionantes, assim como outras variveis do processo de fabricao, tambm so verificadas alteraes na reteno cutnea. Variaes significativas na quantidade de frmaco retido pela pele foram observadas entre os medicamentos genricos e o referncia por anlise de regresso linear, estabelecendo-se desvios, para mais ou menos 10% na reteno cutnea em relao ao medicamento de referncia. Cabendo notar que a formulao (A1) que objetivou simular o medicamento referncia nos aspectos possveis analisados, obteve comportamento similar a este no ensaio in vitro de permeao e reteno cutnea, ressaltando a importncia desta metodologia na avaliao do comportamento dos medicamentos genricos. Os resultados obtidos nos permitem externar a preocupao para com os medicamentos genricos na forma semi-slida, especialmente pelo grande nmero destes freqentemente lanados no mercado brasileiro, para os quais no h exigncia legal em relao aos testes para a averiguao da eficcia. A resoluo vigente exige apenas a equivalncia farmacutica e o emprego de excipientes com a mesma funo, mas pelos resultados obtidos percebe-se que alteraes na composio, tcnicas de preparo, teor e outras variveis, resultam em diferenas na permeao cutnea in vitro. Pelo exposto acima, realamos a importncia dos estudos in vitro, para a averiguao da qualidade dos medicamentos genricos em relao ao medicamento referncia, a fim de atender s expectativas da populao usuria de tais medicamentos.

137

REFERNCIAS
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