ESCUELA PROFESIONAL DE BIOLOGÍA

Hemoaglutinación
ASIGNATURA : Virología DOCENTE : Dra. Graciela Albino Cornejo. ALUMNO : Rómulo Aycachi Inga. CICLO : 2007 - I

Lambayeque, Agosto del 2007.

HEMOAGLUTINACIÓN
I. Introducción: La hemoaglutinación es un método donde no se mide la capacidad infecciosa de las partículas virales. Es una técnica indirecta para medir partículas virales, pues en realidad mediante esta técnica se mide la cantidad de partículas hemoaglutinantes (proteínas virales) independientemente si estas están incluidas en la partícula viral o libres como antígeno. La hemoaglutinación es uno de los métodos indirectos más comunes para cuantificar partículas virales y/o antígenos virales hemoaglutinantes en suspensión. En esta los eritrocitos se pueden sensibilizar con diversos antígenos y se pueden usar como un sistema indicador. Así, si se descubren los anticuerpos, la reacción se revelará como una hemoaglutinación que se puede advertir a simple vista. Existe una gran cantidad de antígenos que se pueden unir a los glóbulos rojos, entre ellos los carbohidratos que se adhieren con rapidez. En el caso de las proteínas se requiere un proceso de pretratamiento con ácido tánico o con cloruro de cromo. Este sistema se usa para demostrar anticuerpos contra toxinas como la de la difteria o del tétanos. También para descubrir anticuerpos contra el virus de la fiebre amarilla, VZV, influenza, parainfluenza y dengue. Un virus hemaglutinante es aquel capaz de aglutinar glóbulos rojos de determinada especie animal, p.ej. los virus ya mencionados anteriormente. El título de una hemoaglutinación está determinado por la última dilución de una serie, en donde se observa, macroscópicamente, una malla formada por la unión del virus y/o antígeno libre a receptores en la membrana de los glóbulos rojos y en la siguiente dilución un sedimento o “botón” de glóbulos rojos. II. • Objetivo: Reconocer el virus de New Castle mediante la HA directa en observaciones de la acción del virus sobre el eritrocito. Materiales: Material Biológico: • • Virus New Castle cepa “La Sota” (vacuna). Glóbulos Rojos lavados de pollo. Para el caso de seres humanos: usar grupo sanguíneo “O”.

III.

Material de Laboratorio: • • • Solución Salina Fisiológica. Gradillas. Tubos de ensayo. 2

• • • IV.

Pipetas. Espejo. Centrífuga.

Procedimiento: A. Preparación de Glóbulos Rojos Lavados : • • • • • • • Extraer la sangre de pollo (previamente vacunado); y conservarla en un tubo con anticoagulante. Centrifugar a 1500 rpm por 5 min. Eliminamos el sobrenadante (plasma). Agregar al tubo (Paquete Celular) solución salina fisiológica y mezclar. Volver a centrifugar a 1500 rpm por 5min. Eliminamos el sobrenadante y volvemos a repetir el proceso de lavado 2 – 3 veces más. Luego, tomamos de 0.7 ml. de glóbulos rojos del paquete celular y lo suspendemos en 100 ml. de SSF, para obtener el 0.7 % de glóbulos rojos lavados.

B. Reacción de Hemoaglutinación : • • • Colocamos 8 tubos en un gradilla, colocándole al primero 0.8 ml. de SSF y del tubo 2 al 8 añadir 0.5 ml. de Suero Fisiológico. Luego, con una pipeta coger 0.2 ml. de cepa de New Castle y depositarla en el tubo N° 01 (dilución 1/5). Luego tomamos 0.5 ml. del tubo 01 y lo depositarmos en el tubo Nº 02, (dilución 1/10). Repetir hasta obtener las diluciones 1/20, 1/40, 1/80, 1/160, 1/320, 1/640 (el tubo N° 08 es el control se le añadirá 0.5 ml. de la cepa New Castle). Luego, a cada tubo colocamos 0.5 ml. de los glóbulos rojos lavados al 0.7 % (incluyendo el tubo control). Luego dejamos reposar al medio ambiente por 15 a 20 minutos. Pasado el tiempo, colocamos debajo de la gradilla un espejo, para observar si hay “hemoaglutinación positiva” (formación de una malla delgada, gris) o hemoaglutinación negativa (se observa un punto rojo). La última dilución en la cual aparece HA es el título del virus (este es el inverso de dicha dilución). En la hemoaglutinación directa se coloca el virus con los glóbulos rojos (los virus aglutinan al glóbulo rojo). En la hemoaglutinación indirecta sensibilizamos al glóbulo rojo (las glucoporteínas aglutinan glóbulos rojos).

• • •

• • •

3

Las pruebas desarrolladas en tubo se conocen como macropruebas y las realizadas en placas (microplacas) se conocen como microplacas.

IV.

Resultados: En la práctica se tubo una batería de 8 tubos con diluciones desde 1/5 hasta 1/320, siendo el octavo tubo el control. Al realizar la prueba de Hemoaglutinación se tubo como HA (+) a los seis primeros tubos 1/5 (+), 1/10 (+), 1/20 (+), …, 1/160 (+). Como la ultima dilución para la HA (+) es la de 1/160, su inversa es el título de la HA. Entonces el título de la HA es 160. Conclusiones: • Se logró reconocer el virus de New Castle mediante la Hemoaglutinación Directa, por su acción sobre los glóbulos rojos de pollo. El titulo se encuentra en la antepenúltima dilución (1/160). Referencias: ARBIZA, J. y colb. (2005). Curso de Microbiología: Módulo de Virología Práctico 2005. Universidad Politécnica Andrés Bello. Santa Fe de Bogotá. CRESPO, María del Pilar (2004) El diagnóstico viral por laboratorio. Clínica Fundación Valle del Lili. Cali. Artículos varios. Diagnóstico Viral. Versión de Lufi 2004. PDF.

V.

VI.

4

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