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Para determinar la masa de fitoplancton en las muestras tomadas del canal Mandry se llevó a cabo el método de espectrofotometría.

Este consiste en recolectar muestras de cada estrata en el cuerpo de agua, evitando que las mismas sean expuestas a la luz. En este caso las muestras fueron de 1 litro por estrata. Hecho esto se procedió a filtra la muestra con el propósito de concentrar el fitoplacton. El filtrado por estrata fue de 200ml, a excepción del fondo el cual fue filtrado a 150 ml. Esto ya que la alta concentración de pigmento que se hallaba en el mismo obstruía la membrana del filtro. Ya filtrado, a cada membrana por estrata se le añadieron 2 ml de acetona alcalinizado como homogenizador de tejidos. Hecho esto se procedió a centrifugar cada una de las muestras para clarificar las mismas. El extracto clarificado obtenido se colocó en celdas que contenían 2 ml de esta y se procedió a utilizar el espectrofotómetro para contabilizar el largo de onda de las muestras. Una vez finalizada la espectrofotometría se procedió a realizar los cálculos correspondientes para determinar la biomasa midiendo la concentración de pigmentos fotosintéticos en las muestras obtenidas de las estratas de agua. En este caso se realizaron los mismos utilizando el método tricromático, aplicable a muestras donde no se encuentra feofitina-a. La feofitina-a es un producto de degradación de la clorofila-a, cuya

región de absorción máxima coincide con la del pigmento parental. Para determinar la concentración de clorofila-a y de feofitina-a en una muestra de agua hay que acidificar el extracto. La adición de ácido al extracto va a ocasionar que la clorofila-a presente pierda su átomo de magnesio y esto hace que la misma se convierta en feofitina-a. La acidificación del extracto también evita que algunos pigmentos accesorios absorban al mismo largo de onda de la feofitina-a. Cuando una solución de clorofila-a pura es convertida a feofitina-a mediante acidificación la razón es: (DO664nm antes de la acidificación)/(DO665nm después de la acidificación) = 1.70 [DO = densidad óptica].

Este valor es utilizado para corregir la concentración de clorofila-a por la feofitina-a presente. Los extractos con una razón: (DO664nm-antes de la acidificación)/(DO665nm-después de la acidificación) = 1.70 Estos no contienen feofitina-a. Esto quiere decir que los fototrofos atrapados en la muestra se encontraban en un excelente estado fisiológico al momento de realizarse el muestreo. Estas soluciones soluciones puras de feofitina-a no van a registrar reducción en la absorbancia a 665nm luego de la acidificación, presentando entonces una razón: (DO664nm-antes de la acidificación)/(DO665nm-después de la acidificación) = 1.0.

Por consiguiente, las muestras de agua donde hallan mezclas de clorofila-a y feofitina-a presentarán una razón de absorción 664nm/665nm que variará entre 1.0 y 1.7. Esto fue lo que sucedió en nuestro caso. El metodo tricromático consiste en corregir los valores de absorbancia de 664, 647 y 630nm por la turbidez del extracto, restándole a cada uno de ellos la lectura obtenida a 750nm. Una ves corregidos los valores de absorbancia, se calcularon las concentraciones de clorofila a, b y c en el extracto utilizando las siguientes expresiones:
Ca = 11.85 (DO664) - 1.54(DO647) - 0.08(DO630) Cb = 21.03 (DO647) - 5.43(DO664) - 2.66(DO630) Cc = 24.52 (DO630) - 7.60(DO647) - 1. 67(DO664)

Las cuales Ca, Cb y Cc son las concentraciones de clorofila-a, clorofila-b y Clorofila-c respectivamente. Ya determinadas las concentraciones se procedió a calcular la cantidad de pigmento en cada muestra de estrata con la siguiente ecuación: Clorofila-a (mg/m3)= Ca X Vol Extracto (L) Vol Muestra Filtrada (m3)

Midiendo la concentración de clorofila-a se pudo estimar la biomasa de la mayor parte del fitoplancton (en este caso diatomeas) presente en el cuerpo de agua de Mandry. De acuerdo a los resultados en las muestras de superficie se obtuvo que en la primera muestra había mayor biomasa en comparación con la segunda. En el caso de la segunda indica que había una posible cantidad de organismos fotosintéticos en la superficie, puesto que las mismas carecen del pigmento a ser medido. Las muestras de columna indicaron un patrón de aumento en cuanto a concentración de clorofila –a se refiere, lo cual implica que había una cantidad significativa de cianobacterias y diatomeas. En el caso de las muestras de fondo se obtuvo la mayor cantidad de biomasa entre las estratas, indicativo de mayor cantidad de organismos (cianobacterias, diatomeas, posible algas) en el fondo que en el resto de las estratas del cuerpo de agua.