AUTOMATIZACIÓN EN QUÍMICA ANALÍTICA 1. Introducción. 2. Definiciones y conceptos 3. Objetivos de la automatización en Química Analítica 4.

Automatización de las distintas etapas del proceso analítico 5. 6. 7. Analizadores automáticos. Clasificación Analizadores continuos. Análisis por inyección en flujo. Sensores químicos

Bibliografía
M. Valcárcel, M. D. Luque de Castro. “Automatic Methods of Analysis”. Elsevier. Amsterdam. 1988. M. Valcárcel, M. S. Cárdenas. “ Automatización y Miniaturización en Química Analítica”. Springer-Verlag Ibérica. Barcelona. 2000. P.B. Stockwell. “Automatic Chemical Analysis”. Taylor & Francis. Londres 1996. M. Valcárcel, M. D. Luque de Castro. “Análisis por inyección en Flujo”. Monte de Piedad y Caja de Ahorros de Córdoba. 1984

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INTRODUCCIÓN
La AUTOMATIZACIÓN, sustitución parcial o total de la participación humana en el proceso de medida química, es una TENDENCIA, hoy consolidada, en Química Analítica. TENDENCIAS DE LA QUÍMICA ANALÍTICA AUTOMATIZACIÓN

MINIATURIZACIÓN

SIMPLIFICACIÓN

Ejemplo: recorte de prensa EL PAÍS, miércoles 17 de noviembre de 2004 “ES EXTRAÑO EXPLORAR UN MUNDO QUE VES SÓLO COMO UN PUNTITO EN EL CIELO”

OBJETIVOS
Conocer la terminología utilizada en el ámbito general de la automatización Ser capaz de evaluar críticamente las ventajas e inconvenientes derivados de la sustitución de la participación humana en los procesos analíticos. Conocer las posibilidades de automatización de las diferentes etapas del proceso de medida química. Conocer las distintas configuraciones de los analizadores, comerciales o no, diseñadas para tratar de llevar a cabo el proceso analítico de forma totalmente automática: analizadores discontinuos, analizadores continuos y sensores.

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DEFINICIONES Y CONCEPTOS (1) Mecanización Producción de movimiento en lugar del operador humano “Empleo de mecanismos para reemplazar. mejorar o extender el esfuerzo humano” Toma de decisiones IN TE LI GE NC OPERADOR HUMANO O RZ UE SF E ID NT SE OS MECANIZACIÓN INSTRUMENTACIÓN IA SISTEMAS AUTOMÁTICOS AUTOMATIZACIÓN Sistema de retroalimentación “feed back” DEFINICIONES Y CONCEPTOS (3) PROCESO ANALIZADOR INSTRUMENTO APARATO DISPOSITIVO TÉCNICA 3 .

DEFINICIONES Y CONCEPTOS Instrumentación Producción y suministro de información “Sistema utilizado para observar. aparatos e instrumentos para sustituir mejorar o ampliar el esfuerzo. medir o comunicar una propiedad que reemplaza o mejora la intervención humana” empleo del instrumento: Automatización “Empleo combinado de dispositivos. los sentidos y la inteligencia humanos en el desarrollo de un proceso” Toma de decisiones IN TE LI GE NC IA OPERADOR HUMANO FU ES Z ER O ID NT SE OS MECANIZACIÓN INSTRUMENTACIÓN SISTEMAS AUTOMÁTICOS AUTOMATIZACIÓN Sistema de retroalimentación “feed back” DEFINICIONES Y CONCEPTOS (4) TÉCNICA PROCESO DE MEDIDA QUÍMICA OPERACIONES PREVIAS MEDIDA Y TRANSDUCCIÓN DE LA SEÑAL TOMA Y TRATAMIENTO DE DATOS MAYOR NIVEL DE CONCRECIÓN MÉTODO PROCEDIMIENTO 4 .

sensibilidad. CAMPO de APLICACIÓN Hacer factible una técnica o método FACTOR HUMANO Reducción de errores y costes debido al factor humano Mayor seguridad Estímulo personal Menor control de Químico sobre el proceso Sobrevaloración de las posibilidades de automatización Restricciones legales Pérdida de flexibilidad de herramientas y procesos AUTOMATIZACIÓN DE LAS DISTINTAS ETAPAS DEL PROCESO ANALÍTICO El PROCESO DE MEDIDA QUÍMICA (PMQ) Operaciones previas MUESTREO TRATAMIENTO de MUESTRA REACCIÓN ANALÍTICA MEDIDA y TRANSDUCCIÓN de la SEÑAL ANALÍTICA ADQUISICIÓN y TRATAMIENTO de DATOS OPERACIONES PREVIAS ALTERNATIVAS ROBOTS SENSORES TÉCNICAS CONTINUAS DE SEPARACIÓN INTRODUCCIÓN DIRECTA DE MUESTRAS NUEVOS TIPOS DE ENERGÍA (ultrasonidos. exactitud.OBJETIVOS DE LA AUTOMATIZACIÓN EN QUÍMICA ANALÍTICA OBJETIVOS VENTAJAS INCONVENIENTES INFORMACIÓN Producción de más y mejor información Rentabilizar al máximo los datos analíticos generados CALIDAD Mejorar las propiedades analíticas: precisión. láser) ANALIZADORES DE PROCESOS MÓDULOS DE TRATAMIENTO MUESTRA 5 . PRODUCTIVIDAD Aumentar la frecuencia de muestreo Reducir el consumo de muestra y reactivo. microondas. selectividad.

AUTOMATIZACIÓN de las DOS ÚLTIMAS ETAPAS Salida A/D Registrador Toma y tratamiento de datos Micropocesador Ordenador Lectura Registro Envío a unidad central Toma y tratamiento de datos Lectura Registro Envío a unidad central Ordenador Control de parámetros instrumentales 6 .MUESTREADORES AUTOMÁTICOS Reactivo Jeringa de reactivo BRAZO MECÁNICO Jeringa de muestra Desecho Jeringa 1 2 3 4 Disolución de lavado Desecho 1. Introducción de la muestra en la copa del analizador. MUESTRA DISOLUCIÓN de LAVADO Aspiración de un volumen de muestra. 2. Aspiración de la disolución de lavado. 4. 3. Descarga al desecho.

su análisis.AUTOMATIZACIÓN de las DOS ÚLTIMAS ETAPAS FUENTE MONOCROMADOR S S DETECTOR AMPLIFICADOR A/D A/D A/D A/D D/A INTERFASE PASIVA IMPRESORA INTERFASE ACTIVA ORDENADOR TRATAMIENTO DE DATOS SISTEMAS DE GESTIÓN DE LA INFORMACIÓN EN EL LABORATORIO: LIMS (Laboratory Information Management Systems) Sistema informático integrado que combina la adquisición de datos.la generación de informes y funciones de gestión del laboratorio Analizador 1 Instrumento 2 teléfono INTERNET Base de datos científico técnicos RED Ordenador adquisición datos Analizador 2 Instrumento 1 Base de datos Organización Base de datos “Cliente” 7 .

ANALIZADORES AUTOMÁTICOS: CLASIFICACIÓN Según GRADO DE AUTOMATIZACIÓN AUTOMÁTICOS SEMIAUTOMÁTICOS Según TIPOS DE ANALIZADORES Según TRANSPORTE DE MUESTRA/REACTIVOS DISCONTINUOS CONTINUOS ROBOTIZADOS MUESTRA Líquidos DE Sólidos Gases Según DISEÑO Comerciales No Comerciales ANALIZADORES AUTOMÁTICOS Muestra Reactivo Mezcla Tiempo Detector Manualmente Analizador discontinuo (tipo cinta) Analizador continuo Muestras balanza Robot reactivos Analizador robotizado Detector/ ordenador 8 .

ANALIZADOR DISCONTÍNUO SECUENCIAL (No requieren manipulación. Esta automatizado incluso el cierre y apertura) Reactivos en rotor central Pipetas para muestra y reactivos Cubetas de reacción Muestras (en rotor o en cinta) Brazo de transporte ANALIZADOR DISCONTINUO Bandeja de reactivos Cubeta 9 .

φ = 0.ANALIZADORES ROBOTIZADOS www.5-0.mwg-biotech.8 mm) Conectores Bomba Peristáltica Coil de reacción INYECCIÓN CARGA Loop o bucle de inyección Válvula de inyección de dos posiciones (6 vías) 10 .com COMPONENTES DE UN ANALIZADOR FIA Tubos (teflón o PVC.strobotics.com www.

bioanalytical.com ANALIZADORES DE INYECCIÓN EN FLUJO (FIA.COMPONENTES DE UN ANALIZADOR FIA (2) CELDAS DE FLUJO Voltametría/amperometría celda de capa fina A. Flow Injection Analysis) Muestra Portador Bomba Válvula Detector (con celda de flujo) Registrador / ordenador T tr Respuesta H M ta ∆t tiempo 11 . R W R espectrofotometría fluorimetría W Bioanalytical Systems. Inc. www.

Inyección de la muestra 2. para adaptarse a las condiciones de flujo laminar 2. Dispersión controlada de la zona de muestra inyectada 3.PRINCIPIOS DEL FIA El FIA se basa en una combinación de tres principios: 1. Control reproducible del tiempo transcurrido desde la inyección hasta la detección Fenómenos de transporte que contribuyen a la dispersión: 1. Convección. Difusión Flujo laminar Difusión axial Difusión radial COEFICIENTE DE DISPERSIÓN. D Coeficiente de dispersión: D = C° / Cmax La señal obtenida en un sistema FIA es el resultado de dos procesos que se producen simultáneamente: 1. Proceso físico: Dispersión 2. Proceso químico: reacción analítica Ninguno de los dos procesos alcanza el equilibrio FIA: MÉTODO CINÉTICO DE TIEMPO FIJO 12 .

La sensibilidad 2. Q (mL/min).L (cm) Al aumentar L aumenta D 3. Al aumentar Q disminuye D Debe tenerse en cuenta el efecto de D sobre: 1. ICP.Parámetros instrumentales que afectan a D 1. Volumen de muestra inyectada.3 2 Se utiliza dispersión limitada: 1. a Zn 213. S(µL). La velocidad de muestreo f(anchura de pico) CLASIFICACIÓN DE SISTEMAS FIA SEGÚN D S= 60 µL Q=1.5 mm) y longitud. 0.9 nm D b 1 1.5 10 s S 0 S Modo normal de aspiración Sistema FIA 13 . Al aumentar S disminuye D 2. Medidas de conductividad Inyección automática de muestra en instrumentos de absorción atómica. Dimensiones de los tubos entre la válvula de inyección y la celda de flujo: Diámetro interno (φ=0. Caudal.5 mL/min Sistemas con Dispersión limitada Dispersión media Dispersión alta Dispersión reducida D = 1-2 D =2-10 D > 10 D<1 (FIA como transporte) (FIA con conversión) (se necesita dilución) (con preconcentración) FIA con DISPERSIÓN LIMITADA (D = 1-2) bomba M D residuos Para mantener dispersión limitada debe limitarse la distancia entre inyector y detector portador 1 5 min. 2. Medidas con electrodos selectivos (pH).

En ocasiones se desarrollan sistemas multicanal.+ Fe3+ desecho HgCl2 + 2 SCNFe(SCN)2+ Volumen inyectado: 30 µL Velocidad de muestreo: 120 muestras/hora 14 .FIA CON DISPERSIÓN MEDIA (D = 2-10) Se utilizan cuando el analito debe reaccionar con diferentes reactivos Para formar un producto detectable (FIA con conversión) Se obtienen los típicos Fiagramas Con concentraciones en el máximo que corresponderían al 50% . con varios puntos de confluencia de distintas corrientes de reactivos entre el inyector y el detector FIA CON DISPERSIÓN MEDIA .FIA MONOCANAL Determinación espectrofotométrica de ClHg(SCN)2 + 2 ClHg(SCN)2 Fe3+ SCN.10% de las introducidas originalmente en El sistema Para obtener dispersión media se debe insertar un “coil” de reacción.

SbH3 .FIA con CONVERSIÓN (FIA multicanal) Ejemplo en el que se aprovechan efectos de discriminación cinética SCN.81 0.+ 5-Br-PADAP + Oxidante ml/min Portador acuoso 5-Br-PADAP Dicromato 0. Sb. Cu. Sn4+ Atomización: AsH3 . SbH3.23 M (50µl) 2 MH+ Producto coloreado (metaestable) mezcla 30 cm reacción D 60 cm 570 nm residuos B Señal del analito Respuesta del detecto Patrones µmol/l No-fumadores Fumadores fumadores Señal de fondo (background) 10 mAbs tiempo 0. SnH4 As. Sn + nH2 Me0 15 . SbH3 .GENERACIÓN DE HIDRUROS Muestra Gas (al atomizador) Separador gas/líquido Gas de purga Líquido (desecho) Carrier HX NaBH4 Generación de hidruros: As3+. Co) AsH3.80 0. SnH4 BH4HX Me0 (lento) As. Sn Reacciones laterales/interferencias: Descomposición del reactivo(NaBH4) en medio ácido Me2+ (Ni. Sb. Sb3+. SnH4 BH4- AsH3 .25 A 10 min Barrido SISTEMAS FIA .

Se utiliza para procesar muestras muy concentradas.FIA CON DISPERSIÓN ALTA Da lugar a una gran dilución de la muestra inyectada Para obtener D alto: inyectar un pequeño volumen de muestra y utilizar Tubos de mezcla entre inyector y detector largos. diluyéndolas en el sistema hasta que la concentración del analito quede dentro del intervalo de respuesta lineal del detector. Diálisis SISTEMAS DE ACONDICIONAMIENTO DE LA MUESTRA ON-LINE Corriente donora Corriente aceptora F FIA CON DISPERSIÓN REDUCIDA SISTEMAS CON PRECONCENTRACIÓN Y ACONDICIONAMIENTO DE LA MUESTRA ON-LINE Intercambio iónico Muestra Eluyente F Columna con cambiador iónico 16 .

La fase Aq se descarta. S Aq Org desecho desecho a b c F La elección de los materiales de los distintos componentes y su orientación son críticos. En un separador (c) se descarta la fase acuosa y la fase orgánica se conduce a una celda de flujo (F). Debe tenerse en cuenta que la fase acuosa se adhiere al vidrio y la orgánica se adhiere al teflón. 17 . La mezcla de ambas se produce en (b.SISTEMA FIA CON EXTRACCIÓN LÍQUIDO-LÍQUIDO EN CONTINUO La muestra (S) se inyecta en una corriente de portador acuoso (Aq) que se une en (a) con una corriente de fase orgánica (Org). segmentador). En el segmentador la fase orgánica entra por un tubo de vidrio y se adhiere a un tubo de teflón (1) SISTEMA FIA CON EXTRACCIÓN LÍQUIDO-LÍQUIDO EN CONTINUO SEGMENTADOR org aq SEPARADOR con forma de T fase orgánica mas densa que la acuosa Una fina tira de teflón (2) sirve de guía para la fase Org a través de la T de vidrio desecho SEPARADOR DE MEMBRANA Si la fase orgánica es menos densa que la acuosa org Membrana de teflón desecho 2 org aq org La membrana de teflón permite que sólo la fase Org penetre a través de sus poros hidrofóbicos.

como el tiempo de parada. Por tanto es esencial que el tiempo de retardo sea reproducible en los diferentes ensayos. Si la reacción de transformación del analito no alcanza el equilibrio de camino al detector. ANALYTE BLANK DELAY TIME Tiempo de retardo FLOW 18 . Se mide la pendiente del fiagrama durante el tiempo de parada. se puede obtener una porción de la curva cinética a medida que el producto de reacción (amarillo) se va acumulando en la celda de flujo. se pone en marcha un reloj electrónico (T). SISTEMAS DE FLUJO DETENIDO (“STOPPED-FLOW”) (2) El analito (rojo) se dispersa en la corriente de reactivo (azul) en el camino al detector mientras que el producto (amarillo) se va formando. recuperándose la línea de base. Finalmente.SISTEMAS DE FLUJO DETENIDO (“STOPPED-FLOW”) T R DETECTOR Los sistemas de flujo detenido se basan en parar una porción del bolo de muestra en la celda de flujo. se restaura el flujo y la muestra se impulsa hacia el deshecho. En estos sistemas se seleccionan tanto el tiempo que transcurre desde la inyección de la muestra hasta que se detiene el flujo (tiempo de retardo). Cuando se inyecta la muestra.

selectiva y reversible a los cambios de concentración de una especie química en una muestra compleja. continua.SENSORES QUÍMICOS Esquema general de un sensor químico ELEMENTO DE RECONOCIMIENTO TRANSDUCTOR ELECTRÓNICA Un sensor es un dispositivo que responde de forma directa. Consta de un elemento de reconocimiento molecular (que produce una interacción selectiva (específica) con el analito). rápida. Elementos de reconocimiento molecular empleados en el desarrollo de sensores Componentes de reconocimiento molecular Bióticos Abióticos Bioafinidad Biocatalíticos Reactivos inmunológicos Nucleótidos ADN/ARN Enzimas Células Tejidos Cambiadores líquidos Ligandos neutros Membranas sólidas Polímeros Molecularmente impresos 19 . en contacto físico con un transductor. idealmente sin tratamiento previo de la misma.

que separa el electrolito interno de la disolución de prueba.+ H3O+ NO2. Electrodo de referencia Electrodo selectivo Electrolito interno 123.+ NO3.+ 2H3O+ S2.4 mV Disolución de prueba Analito CO2 SO2 NO2 H2 S Membrana permeable a gases Reacción en electrolito interno CO2 + 2 H2O SO2 + 2 H2O 2NO2 + 3H2O H2S + 2H2O HCO3.+ H3O+ HSO3. Se resumen los distintos tipos de transductor que pueden ser utilizados SENSORES POTENCIOMÉTRICOS DE GASES Son celdas electroquímicas compuestas por: 1. 2. Un electrodo de membrana sensible a un ión y un electrodo de referencia.analito Proceso de reconocimiento selectivo Transducción Energía Electroquímicos Ópticos Piezoeléctricos (de masa) Térmicos Amperométrico Potenciométrico Conductimétrico Respuesta-Procesamiento de datos Secuencia de procesos en la operación de un sensor químico. en contacto con un electrolito interno.+ 2H3O+ Electrodo selectivo Electrodo vidrio (pH) Electrodo vidrio (pH) Electrodo vidrio (pH) o electrodo de NO3Electrodo de Ag2S 20 . Una membrana polimérica permeable a gases.

21 . 21 d. x HCO3-(aq) + H+(aq) Electrolito interno.05916 log Keq [HCO3-]i [CO2]x E = L + 0. de prueba. Sensor de CO2 Membrana de vidrio sensible a H+ CO2(aq) + H2O CO2(g) CO2(aq) HCO3-(aq) + H+(aq) Electrolito interno (NaHCO3/NaCl) Membrana polimérica Microporosa (PTFE) Aire atrapado Disolución de prueba Función de respuesta del sensor de CO2 CO2(aq) Dlon.SENSORES POTENCIOMÉTRICOS DE GASES.) K+ (Na+) Tiempo de respuesta 1 min 35 s Rango de linealidad 5×10-5-10-3 M 5×10-5-10-1 M Estabilidad del sensor 10 d.05916 log (aH+)i E = C + 0. >60 d. ⇒ (aH+)i = Keq [HCO3-] i [CO2]x Respuesta del sensor de CO2 E = C + 0. Sensor de Urea (NH2)2CO Ureasa 2 NH3 + CO2 Transductor (Electrodo selectivo) pH NH4+ Capa de enzima inmovilizada Métodos de inmovilización del enzima Encapsulación en membranas de diálisis Inclusión en gel de poliacrilamida Inclusión + enlace covalente En ácido poliacrílico Entrecruzamiento con albúmina (glutaraldehido) Interferencias Control pH (tampón dil.05916 log [CO2]x BIOSENSORES POTENCIOMÉTRICOS. de prueba Poros membrana CO2(g) Electrolito interno CO2(aq) Equilibrio global: CO2(aq) + H2O Dlon. i CO2(aq) + H2O Keq = HCO3-(aq) + H+(aq) (aH+)i [HCO3-]i [CO2]x . [HCO3-] i ≈ cte. >30 d.

25 i. Sensor de oxígeno de Clark Proceso catódico: O2 + 2 H+ + 2 eProceso anódico: 2 Ag(s) + 2 Cl-(aq) -600 Eap. = 2 δ2 (D/q) test ≈ 20 – 50 s SENSORES AMPEROMÉTRICOS ENZIMÁTICOS 1./ mV 3. Empleo de un mediador de transferencia electrónica (Med) (el O2 se sustituye por un aceptor de electrones no fisiológico) e- Medred E(FAD) E ox SH2 SH2 Medox E(FADH2) Ered S S Sensor Enzima y mediador inmovilizados Disolución 22 . Basados en el empleo de enzimas oxidasas Señal (i/ µA) Eapl = cte E SH2 + O2 SH2 + E(FAD) S + H2O2 E(FADH2) + S E(FAD) + H2O2 Reacción electródica 1. Medida del peróxido de hidrógeno generado transductor E(FADH2) + O2 H2O2 O2 + 2 H+ + 2 e- Enzima inmovilizada 2./ µA H2O2 2AgCl(s) + 2 e- Electrolito interno (KCl) Ánodo de Ag/AgCl Cátodo de Pt Membrana de Polímero (PTFE) Características de respuesta Corriente de difusión estacionaria: i = nFA ε δ D Co* q δ= espesor de la membrana ε= porosidad de la memb.SENSORES AMPEROMÉTRICOS. q = factor de tortuosidad Tiempo de respuesta: test.

SENSORES AMPEROMÉTRICOS ENZIMÁTICOS 2. Basados en el empleo de enzimas deshidrogenasas E S + NADH + H+ DIFICULTADES Cinética lenta Mecanismo complejo Selectividad Estabilidad Reproducibilidad SH2 + NAD+ NADH electrodo NAD+ + 2e- + H+ EMPLEO DE MEDIADORES DE TRANSFERENCIA ELECTRÓNICA Medred NAD+ E SH2 SH2 Medox NADH S S Electrodo Disolución 23 .

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