Cellules et organes du système immunitaire

IMMUNITE : Ensemble des mécanismes biologiques permettant à un organisme de : - RECONNAÎTRE et de TOLERER le SOI, - RECONNAÎTRE et de REJETER le NON SOI (substances étrangères, agents infectieux, ses propres constituants altérés…)

SYSTEME IMMUNITAIRE : Ensemble de cellules, d’organes et de molécules

Cellules Immunocompétentes
Moëlle osseuse sang
polynucléaires PN/PE/PB

Cellule souche myéloide Cellule souche hématopoïétique

Progéniteur Granulocytes monocytes

Monocyte macrophage dendritiques

Lymphocyte B

Cellule souche lymphoïde

Lymphocyte T Lymphocyte NK

Cellules Immunocompétentes
IMMUNITE NON SPECIFIQUE
Monocytes, macrophages, polynucléaires

IMMUNITE SPECIFIQUE
 Cellules présentatrices d’antigène - macrophage - cellules de langherans - cellules dendritiques - lymphocyte B

Lymphocytes NK

 Lymphocytes T  Lymphocytes B

ACTION IMMEDIATE

ACTION RETARDEE, MEMOIRE

Origine et Distribution des cellules lymphoïdes
thymus LT CD8 c

LT CD4 h

CSL Moelle osseuse LB Ac

Production différenciation

Organes Lymphoïdes primaires

sang

Organes Lymphoïdes périphériques Effection

NK c

Organes et tissus lymphoïdes
 Organes lymphoïdes primaires ou centraux
- Thymus - Moelle Osseuse

 Organes et tissus lymphoïdes secondaires ou périphériques
- ganglions lymphatiques - rate - tissu lymphoïde associé aux bronches - amygdales végétations - ganglions mésentériques - plaques de peyer - tissus lymphoïde urogénital

Organes et tissus lymphoïdes
Organes lymphoïdes primaires
Organes lymphoïdes secondaires
Anneau de Waldeyer Ganglions Amygdales végétations Thymus Tissu lymphoïde associé aux bronches Ganglions lymphatiques Moëlle osseuse

Rate
Ganglions mésentériques Plaques de Peyer Tissus lymphoïdes uro-génital

Maturation des cellules lymphoïdes : dans les organes lymphoïdes primaires
Moelle Osseuse CD34 Cellule Souche hématopoïétique Cellule Souche lymphoïde IL3, SCF IL7, SCF

Pro-B

B naïf Organes Lymphoïdes secondaires IL2, IL7

Thymus
FT= thymuline, thymosines a1, thymopoiétine

Pro-T

SCF, FT

T naïf

Localisation et composition du Thymus

Vue générale

Médullaire (nombreux corpuscules de hassal)

Rôle du Thymus
•multiplication intense (plusieurs millions de cellules produites par jour): les précurseurs CD 34+44+ issus de la MO entrent par voie sanguine et se multiplient au niveau du cortex superficiel. (cellules doubles négatives). •maturation, différentiation: les cellules acquièrent progressivement: le récepteur à l ’antigène TcR (réarrangement des gènes du TcR) les marqueurs de cellules matures (CD2, CD3, CD4, CD8) (cellules doubles positives au niveau du cortex profond) •sélection des lymphocytes: double. Permet la tolérance au soi Positive survie des thymocytes qui reconnaissent le CMH Cellules simples positives Négative destruction des thymocytes qui reconnaissent trop fortement le soi (médullaire)

Maturation thymique des lymphocytes T
48 low 4 low 8 low
Réarrangement TCR productif 4+8+ TCR Reco MHC S+ 4+8+ TCR reconnaissance Antigènes du soi S-

prolifération Region sous-capsulaire

DN

Réarrangement TCR Non productif Non reconnaissance MHC

APOPTOSIS DP

macrophage Cortex région cortico-médullaire Medullaire
SP

Pas de reconnaissance Ag du soi S4-84+8+ TCR

vaisseaux

4+8TCR

4-8+ TCR

Complexe CD3
TCR

_
CD3

_

Reconnaissance CD3

_ _

_ _
+ + +

- -

- Transduction du signal

__

LYMPHOCYTES T – Structure du TCR
chaîne chaîne Alpha Beta

Région hypervariable

CHO

CHO

Région Variable “V”

CHO

CHO

Région Constante “C”

Pont disulfure

+ +

+

Region transmembranaire Queue Cytoplasmique

Notion de répertoire antigénique
1 cellule T  1 récepteur à l’antigène, 10 13-15 TcR différents
ex: TcR chaîne β:
V1, V2, V3 … D1, D2… J1, J2… C1 ADN non réarrangé Réarrangement D-J

RAG,
Recombinase Activating gene

V1, V2, V3 …

D2J6 C1

enz de réparation Endonucléase TdT
Terminal Desoxynucleotidyl transferase

Réarrangement V-D-J V2 D2J6 C1 ADN réarrangé Ly T β α

 Transcription, épissage, traduction chaîne β TCR

Sélection positive et négative dans le thymus

Anatomie du Thymus

Thymocytes précoces DN

Thymocytes corticaux DP

Thymocytes médullaires SP

Evolution du Thymus avec l’âge

Marqueurs des cellules T
TCR CD2, CD5, CD7 CD3 CD4 CD8 CD28 CD40L IL2R LFA1, ICAM-1 CD45 RA / RO récepteur à l’antigène marqueurs de lignée T transduction du signal liaison MHC Cl II liaison MHC Cl I co-activation / B7 co-activation / CD40 récepteur à l’IL2 molécules d’adhésion marqueur de différenciation

SYNAPSE IMMUNOLOGIQUE (1)
adhésion

Cellule T CD4

CD-2

Reconnaissance 1er signal LFA-1 TCR

Costimulation 2ème signal CD28

IL-1 IL-6 TNF-alpha IL-12 IL-15

CD4
peptide

TNF-beta IFN-gamma GM-CSF IL-4

Cellule présentatrice

LFA-3

ICAM-1

Class II MHC

B7-1/B7-2 (CD80/CD86)

SYNAPSE IMMUNOLOGIQUE (2) Cellule T CD8
adhesion 1ier signal reconnaissance

LFA-1

TCR

CD-2

2ieme signal costimulation: absent

peptid e

CD8

Cellule cible

ICAM-1

Class I MHC

LFA-3

Anatomie de la moëlle osseuse

fonctions de la moëlle osseuse

MO assure 3 fonctions: •Maintien d ’un contingent de cellules souches •Maturation et différentiation des prolymphocytes B en lymphocytes B matures aptes à coloniser les organes lymphoïdes secondaires •L ’hébergement des B activés par l ’antigène en provenance des organes secondaires et qui se transforment en plasmocytes sécréteurs d ’anticorps

Maturation des lymphocytes B dans la MO
Moelle Osseuse CD34 prolifération CD19- CD20 Pseudo BCR
uH + psylambda

CSL Pro-B Pré-B I Pré-B II B naïfs

BCR H + L
IgM

Périphérie

IgM IgD

B matures

LES LYMPHOCYTES B

BCR

- BCR : immunoglobuline membranaire - ≅105 BCR identiques / LB - Reconnaissance directe d’ un Ag (conformationnelle)

LB

BCR BCR

épitope

antigène

LYMPHOCYTES B – Structure du BCR
Chaîne légère
VL CL CH1 VH

Chaîne lourde
CH2 CH3

Ig-β

Ig-α

Ig-α

Ig-β

Notion de répertoire antigénique
1 cellule B  1 récepteur à l’antigène, >10 13-15 BcR différents

Configuration germinale de l’ADN

Maturation dans la MO des lymphocytes B

Marqueurs des cellules B
BCR CD19, CD20 Igα (CD79a)/ Igβ (CD79b) CD21 CD22, CD72 CD40 CD80/86 récepteur à l’antigène marqueurs de lignée B transduction du signal Récepteur c3d/EBV, transduction molécules d’adhésion co-activation / CD40L co-activation / CD28

Les cellules NK
• Population hétérogène de cellules lymphoïdes, Cytotoxicité +++ • répartition tissulaire: - représentent 10-15 % des lymphocytes du sang périphérique (Grands lymphocytes granuleux avec granules lytiques: perforine, granzymes) - foie, rate +++ - tissus inflammés • Différenciation au contact du micro-environnement médullaire Progéniteur commun avec les LT, expriment certains marqueurs des T (CD2 par ex)

Les cellules NK
Cellules de l’immunité innée : Pas de récepteur spécifique de l ’Ag
fonctions • élimination des cellules infectées (bactéries, virus, parasites)(phase précoce de l ’infection) • surveillance des tumeurs (diminution de l ’expression HLA-1 dans les tumeurs pour échapper aux LT cytotoxiques) • participation à la régulation d ’une réponse spécifique: par la synthèse de nombreuses cytokines (IFN-_, TNF-_) NK activées par: • des cellules allogéniques ou xénogéniques (CMH différent) • des cellules du soi avec un défaut d ’expression du CMH classe 1 (HLA-E protège les cellules normales de la lyse par NK) •les cytokines produites lors d ’une réaction inflammatoire

NK, à l ’interface de l ’immunité innée et de l ’immunité adaptative

Marqueurs des cellules NK
KIR, LIR, CD94 NKp44, 46, 30, NKG2D CD16 LFA-1, CD18/11, CD56 CD2 RIL2, RIL12, RIL15 … NK récepteurs / CMH Cl I Récepteurs de cytotoxicité naturelle Récepteur Fc IgG molécules d’adhésion co-activation récepteurs de cytokines

 CD3-, CD56+ et/ ou CD16+

Organes et tissus lymphoïdes
Organes lymphoïdes primaires
Organes lymphoïdes secondaires
Anneau de Waldeyer Ganglions Amygdales végétations Thymus Tissu lymphoïde associé aux bronches Ganglions lymphatiques Moëlle osseuse

Rate
Ganglions mésentériques Plaques de Peyer Tissus lymphoïdes uro-génital

Le réseau lymphatique

Les ganglions lymphatiques
- environ 1000 dans tout l’organisme : surveillance de nombreux territoires
- petit organe réniforme, de 1 à 15 mm de diamètre - disposés sur le trajet des voies lymphatiques La circulation lymphatique s’effectue dans un seul sens : tissus ⇒ ganglions ⇒ sang
Pénétration de l ’Ag

Lymphocytes naïfs Lymphocytes activés lymphocytes mémoires Vue générale

Structure d’un ganglion lymphatique
- zone CORTICALE : amas ovalaires de lymphocytes B - avant stimulation antigénique : follicule PRIMAIRE - 3 à 5 j après avoir rencontré l’Ag : follicule SECONDAIRE - zone PARACORTICALE : aire thymo-dépendante riche en lymphocytes T et en CPA - zone MEDULLAIRE : zone mixte comprenant des lymphocytes B et T, plasmocytes et macrophages

Zone corticale Zone paracorticale Zone médullaire

La Réponse Immune Spécifique Schéma général / ganglion
Lymphatique afférent Ag périphérie CD4 artère

+/- DC
IDC / FDC Follicule lymphoïde B CD8 Lymphatique efférent

Lymphatique afférent artère

Maturation finale des LB Ac

Lymphatique efférent

Effecteurs T Ly mémoires CTL

Recirculation des lymphocytes
Lymphocytes naïfs dans la circulation sanguine : arrivée dans le ganglion Retour des lymphocytes dans le sang par le canal thoracique

Chimiokines/ R de chimiokines +++

Les antigènes des aires infectées vont dans les ganglions via le système lymphatique

La rate
- forme ovale, organe lymphoïde le plus volumineux (≈ 12 cm de L)
- située dans l’hypochondre gauche - branchée sur la circulation sanguine : rôle +++ épuration du sang (100 à 200 ml/mn) : capture des Ag injectés dans la circulation sanguine organe PHAGOCYTAIRE principal : macrophages +++ ex : patients splénectomisés : susceptibilité particulière aux infections bactériennes à germes capsulés - pas de drainage par une circulation lymphatique

Structure de la rate : pulpe blanche et pulpe rouge
- la pulpe rouge : occupe le plus grand espace, réseau de sinus veineux
et de cordons cellulaires (cordons de Billroth) ≈ FILTRE A ANTIGENES Destruction des hématies - la pulpe blanche : tissus lymphoïdes sous forme de manchons autour des rameaux artériels, entourés de la zone marginale ≈ LIEU DE LA REPONSE IMMUNITAIRE

Coupe transversale

Structure de la rate : pulpe blanche

Structure de la rate
Capsule fibreuse Zone T artériole Zone B

Vue générale

Pulpe rouge / pulpe blanche

Tissu lymphoïde annexé aux muqueuses : MALT (Mucosal Associated Lymphoïd Tissue)
- assure la protection de plus de 400 m2 de muqueuses
(respiratoire, digestive, urogénitale, oculaire…) - comporte du tissus lymphoïde diffus (qui infiltre toutes les muqueuses) et des structures individualisées (plaque de Peyer, appendice, amygdales) - prépondérance de la réponse humorale avec IgA sécrétoires +++ (capables de traverser les muqueuses et donc d’en assurer leur protection) fonction importante dans les réactions immunitaires locales - développement tardif système lié à l’environnement et capable de s’adapter en permanence

Tissu lymphoïde annexé aux muqueuses : MALT (Mucosal Associated Lymphoïd Tissue)
- on peut individualiser différents systèmes:
- nasopharynx: NALT (Nasopharyns Associated Lymphoïd Tissue) - Voies aériennes supérieures : BALT (Bronchus Associated Lymphoïd Tissue) - Tube digestif : GALT (Gut Associated Lymphoïd Tissue) : contient à lui seul plus de cellules immunitaires que le reste de l’organisme - glande mammaire: synthétisent les IgA sécrétoires du lait maternel pour la protection du tube digestif du nouveau-né

Système lymphoïde du tube digestif – GALT Plaques de Peyer

Répartition tissulaire des populations lymphocytaires
Lymphocytes T Lymphocytes B Lymphocytes NK

Sang périphérique Moelle osseuse Thymus Ganglions Rate

70-80 %

10-15 %

10-15 %

5-10 %

80-90 %

5-10 %

99 % 70-80 %

<1 % 20-30 %

<1% <1 %

30-40 %

50-60 %

1-5 %

Circulation des Lymphocytes
ORGANES LYMPHOIDES PRIMAIRES Moelle Osseuse / Thymus PRODUCTION Cellules naïves sang Via HEV Chkines/ R chkines +++ ORGANES LYMPHOIDES SECONDAIRES Ganglions, rate, tissus lymphoïde associé aux muqueuses ACTIVATION, DIFERENCIATION Cellules mémoires > naïves ORGANES LYMPHOIDES TERTIAIRES Lieu de l’aggression FONCTIONS EFFECTRICES Lymphe

Passage trans-endothélial des Lymphocytes
Flux sanguin

Roulement du lymphocyte Activation Adhérence primaire du lymphocyte réversible Adhérence secondaire irréversible transmigration

Lymphocytes L sélectine CD62L Cellules endothéliales ELAM-1

Intégrines CCR7 / CXCR5 LFA-1/ VLA4 ICAMS CCL21, 19 / CXCL13 Tissus

Etapes de la réponse immune Spécifique
Ly T CD4 naïf TCR spécifique de l’Ag
CD4 Th1 CD8 CTL

IL2

cytokines

LB

CMH CPA/Ag

CD4 Th2

+ Ag 6. Mort 5. Effecteurs

4. Différenciation 3. Prolifération clonale 2. Activation 1. Reconnaissance Spécifique 5’. Mémoire

Les lymphocytes : caractérisation dans le sang périphérique
Morphologie : -Haut rapport nucléo-cytoplasmique, noyau à chromatine mottée - 7 – 12 micromètres - cytoplasme petit, basophile, quelques (peu) granulations azurophiles

Petit lymphocyte

Lymphocyte à grains

ANTICORPS MONOCLONAUX comparaison Ac polyclonaux/monoclonaux
2 1

Déterminants 3 antigéniques
4 3

1

2 4

lymphocytes

Cellules de myélome fusion 2 4 hybridomes clonage

1
1 2 3 4

3 lymphocytes anticorps 1 2 3

Ac1 Ac2 Ac3 Ac4

4

Mélange d’anticorps : antisérum Ac1,Ac2,Ac3,Ac4

Acm1 Acm2 Acm3 Acm4

Ac polyclonaux

Ac monoclonaux

ANTICORPS MONOCLONAUX

Molécules de surface propres à des lignées cellulaires
antigènes de différentiation ou classes de différentiation (CD)

Ateliers Internationaux (Workshops)
comparaison de plusieurs Acm provenant de laboratoires ≠ caractérisant 1 ou des épitopes ≠ d’une même molécule

PRINCIPALES SOUS POPULATIONS DE LYMPHOCYTES T
< 10% Τ sg > 90% Τ sg

TCR γδ

TCR αβ

CD4CD8-

CD4CD8+

CD4+
Restriction CMH cl II

CD8+
Restriction CMH cl I

Cellules cytotoxiques répertoire restreint

NUMERATION DES LT CD4+/CD8+
Immunofluorescence à l’aide d’Acm anti-CD4 ou CD8 2 phases 1) marquage sang total Ac anti-CD4, Anti-CD8 couplés à des fluorochromes anti-CD4-FITC, anti-CD8-PE lyse des hématies 2) analyse cytomètre sur 10,000 cellules 1 à 3 min/prélèvement

10-20 min

10-20 min

30 min-1 heure 40-50 prélèvements/j

Triple marquage pour cytométrie en flux

Incubation

Lavage

Analyse

Principe de la cytométrie en flux
Informations sur: - taille - structure - fluorescence 488 nm
HLADR CD4

543 nm FITC 578 nm PE

LASER

CELL

CD3

CD45R0

PerCP 680 nm

λ excitation

λ émission

Exemple sur sang total lysé
1000 800

Structure

400

600

Polynucléaires Neutrophiles

200

Monocytes Lymphocytes
0 200 400 600 800 1000

Débris cellulaires

0

Taille

Exemple sur sang total lysé
1000 800

Structure

400

600

Polynucléaires Neutrophiles

200

Monocytes Lymphocytes
0 200 400 600 800 1000

Débris cellulaires

0

Taille

Exemple sur sang total lysé Analyse en « 3 couleurs »
10 4 10 3 10 3 10 4

CD4 FITC

CD8 PE
10 4

10 2

10 1

10 0

10 10 0

0

10 1

10 2

10 0

10 1

10 2

10 3

10 4

10 1

10 2

10 3

10 4

10 3

CD3 APC CD8 PE

CD4 FITC

10 0 10 0

10 1

10 2

10 1

10 2

10 3

10 4

CD3 APC

CD4+, CD3-, (ex monocyte)
10 4

Exemple sur sang total lysé Analyse en « 3 couleurs »
CD8 CD8 PE CD4+, CD3+
10 3 10 1 10 2 10 4

CD4 FITC

10 1

10 2

10 3

10 0

CD3+,CD4(ex: CD8)
10 4 10 1 10 2 10 3 10 4

10

0

CD4
10 0 10 1 10 2 10 3 10 4

10 0

CD3 APC CD8 PE DN (ex LB) CD8+, CD3ex NK

CD4 FITC

10 3

10 1

10 2

CD8+, CD3+

10 0

CD3+,CD8(ex:CD4)
10 0 10 1 10 2 10 3 10 4

CD3 APC

NUMERATION DES LT CD4+/CD8+ résultats
 Expression en % des lymphocytes circulants et en valeurs absolues  Normes établies chez le sujet « normal »
(Laboratoire d ’Immunologie Cellulaire et Tissulaire GH.P.S.) CD4 CD8 CD4/CD8

 Contrôle de qualité inter-laboratoires
pour les CD4 pour les CD8 différences faibles ≈ 1.2% différences + grandes ≈ 3%

Valeurs normales de l’adulte
Laboratoire d’Immunologie cellulaire de la Pitié-Salpêtrière

CD4+ CD3+

46,6% (SD = 8)

858/mm3 (SD = 260) et > 450/mm3 482/mm3 (SD = 164)

CD8+ CD3+

26% (SD = 5)

CD8+ totaux

30,1% (SD = 6)

555/mm3 (SD = 165)

Ratio CD4+ CD3+ / CD8+CD3+

> 0.68

VARIATION DES SOUS POPULATIONS LYMPHOCYTAIRES AVEC L’AGE
Sang J1-11 mois de cordon Lymphocytes % .103/mm3 Cellules T CD3+ % .103/mm3 Cellules T CD4+ % .103/mm3 Cellules T CD8+ % .103/mm3 CD4/CD8 41 5.4 55 3 35 2 29 1.5 1.2 (0.8-1.8) 47 4 64 2.5 41 2 21 0.9 1.9 (1.5-2.9) 1-6 ans 7-17 ans 18-70 ans

46 3.5 64 2.5 37 1.6 29 0.9 1.3 (1-1.6)

40 2.5 70 1.8 37 0.8 30 0.8 1.3 (1-1.4)

32 2 72 1.4 42 0.8 21 0.7 1.2 (1-1.5)

LYMPHOCYTES SANGUINS PERIPHERIQUES sous populations
Lymphocytes totaux T-NK: CD2 T: CD3/TCR T auxiliaires: CD4 naïfs: CD45RA mémoires: CD45RO T cytox/suppr: CD8 15-30% 5-15% 5-15% 30-60% 100% 80-90% 60-80%

NK: CD16-56, 57 B: CD19

LA LYMPHOPENIE CD4 PATIENTS VIH Marqueur simple du déficit immunitaire T
1ère phase séroconversion 2ème phase asymptomatique 3ème phase 4ème phase progression SIDA virus

CD4 mois Années

RESTAURATION IMMUNITAIRE augmentation des CD4
CD4/mm3

traitement

500 400 300 200 100

Redistribution 1-5 CD4/mm3/j

CD4 totaux CD4 mémoires CD4 naives Régénération 0.1 CD4/mm3/j

Sign up to vote on this title
UsefulNot useful