MICROBIOLOGIA APLICADA Manual de Laboratorio

APENDICE C
PREPARACION DE SOLUCIONES Y REACTIVOS

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1. AGUA DE DILUCION CON SOLUCION BUFFER. Solucin I Disolver 34 g de fosfato monobsico de potasio (KH2 PO4) en 500 mL de agua destilada. Ajustar el pH a 7.2 con NaOH 1N. Aforar a un litro con agua destilada. Solucin II Disolver 50 g de sulfato de magnesio (MgSO4.7H2O) en 1000 mL de agua destilada. Preparacin: En un matraz volumtrico aadir 1.25 mL de la solucin I y 5 mL de la II. Aforar a un litro con agua destilada.

2. VOGES PROSKAUER. A. Solucin de alfa naftol -naftol.............................................. 5.0 g Alcohol etlico (95%)................... cbp 100 mL Preparacin: Disolver el alfa naftol en el alcohol. B. KOH Hidrxido de potasio qumicamente puro.......................... 40 g Creatina............................................................................. 0.3 g Agua destilada........................................................... cbp 100 mL

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Preparacin: Agregar el hidrxido de potasio a 75 mL de agua destilada, agitando y enfriando constantemente. Cuando la solucin est ms menos a temperatura ambiente (25 C) agregar la creatina y suficiente agua destilada para obtener un volumen final de 100 mL.

3. REACTIVO DE ROJO DE METILO. Rojo de metilo............................. 0.1 g Alcohol etlico (95%).................. 250 mL Agua destilada........................... 250 mL Preparacin: Disolver el colorante en el alcohol. Agregar el agua destilada. Filtrar la preparacin. 4. REACTIVO DE KOVAC. Para-dimetil-amino-Benzaldehdo............................. 1 g Alcohol amlico butlico......................................... 80 mL Acido clorhdrico qumicamente puro...................... 20 mL Preparacin: Disolver el para-dimetil-amino-benzaldehdo en alcohol butlico amlico. Aadir el cido clorhdrico. Conservar en un frasco mbar con tapn de vidrio, en sitio oscuro. Tambin se sugiere que esta solucin se refrigere. NOTA: El reactivo debe tener una coloracin amarillo claro caf claro.

5. MEZCLA CROMICA. Dicromato de potasio..................... 6.5 g Agua destilada................................ 10 mL

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Acido sulfrico............................... 100 mL Preparacin: Disolver el dicromato en agua. Calentar la solucin ligeramente y dejar enfriar. Agregar el cido poco a poco, mezclando con cuidado.

6. SOLUCION SALINA DE PEPTONA. Peptona........................................... 1 g Cloruro de Sodio.......................... 8.5 g Agua destilada.................... cbp 1000 mL Preparacin: Disolver los componentes hirvindolos en aproximadamente 950 mL de agua. Ajustar el pH con solucin de Hidrxido de Sodio 1 mol/L o Acido Clorhdrico 1 mol/L de modo que despus de la esterilizacin sea de 7.0 0.1. Aforar a 1000 mL con agua destilada. Distribuir en volmenes convenientes. Esterilizar en autoclave durante 15 minutos a 15 libras de presin (121 C).

7. SOLUCION SALINA. (Isotnica) Cloruro de Sodio....................................... 8.5 g Agua destilada........................................ 1000 mL Preparacin: Disolver el reactivo en el agua destilada.

8. PIROGALOL ALCALINO. Anaerobiosis.

Usado

para

conseguir

condiciones

de

Pirogalol......................................................... 3 g Tierra de infusorios...................................... 18 g Carbonato de Potasio.................................... 3 g

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Preparacin: Mezclar el pirogalol y la tierra de infusorios y adicionar el carbonato de potasio en un mortero. Mezclar al momento de usarse, despus de 5 horas pierde actividad. Para su uso se pone una pequea porcin en un saquito de papel filtro.

9. SULFATO DE ZINC, GRAVEDAD ESPECIFICA DE 1.3. Sulfato de zinc................................ 800 g Agua Destilada............................. 1000 mL Preparacin: Disolver 800 g de Sulfato de Zinc en 1000 mL de agua destilada y agitar en la parrilla elctrica hasta homogeneizar. Medir la densidad con un hidrmetro. Para alcanzar la densidad deseada, agregar reactivo agua segn el caso.

10. REACTIVO PARA OXIDASA. Clorhidrato de tetrametil-p-fenilendiamina................... 0.1 g Agua destilada................................................... cbp 1000 mL Preparacin: Disolver el reactivo en el agua destilada. NOTA: Este reactivo no es estable y por consiguiente debe prepararse para utilizarlo en pequeas cantidades cada vez que se necesite.

11. REACTIVO PARA OXIDASA. (Alternativa). N, N-Clorhidrato de dimetil-p-fenilendiamina................... 1.0 g Agua destilada.......................................................... cbp 100 mL pH = 5.5

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Preparacin: Disolver el reactivo en el agua destilada. NOTA: Este reactivo deber ser preparado al momento de usarse.

12. REACTIVO PARA LA PRUEBA DE CITOCROMO-OXIDASA. Solucin al 1% de Oxalato de p-aminodimetilanilina.

13. ONPG. Prueba de -Galactosidasa. O-nitrofenil --D-galactopiransido........................... 1.0 g (0.0003M) Agua destilada...........................................................1000 mL Preparacin: Disolver el reactivo en el agua destilada. 14. REACTIVO PARA LA PRUEBA DE LA CATALASA. Solucin acuosa de Perxido de Hidrgeno de 10 volmenes %.

15. ACIDO TRICLOROACETICO. Reactivo para la prueba de la hidrlisis de gelatina. Acido tricloroactico qumicamente puro......... 5 g Agua destilada.......................................... 100 mL Preparacin: Disolver el cido, agitando constantemente. NOTA: Tambin existen preparaciones comerciales de cido tricloroactico al 5%.

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16. SOLUCION DE () NAFTILAMINA. Reactivo para la reduccin del nitrato.

- naftilamina.................................................... 5 g Acido sulfrico concentrado y Q. P................... 8 mL Agua destilada............................................... 992 mL Preparacin: Agregar el cido al agua destilada y mezclar perfectamente; luego, introducir el -naftilamina y agitar hasta que el ingrediente se disuelva. 17. ACIDO SULFANILICO. Reactivo para la prueba del nitrito. Acido sulfanlico qumicamente puro.................8 g Acido sulfrico qumicamente puro.................48 mL Agua destilada...............................................cbp 1000 mL Preparacin: Agregar el cido sulfrico en 500 mL de agua destilada agitando y enfriando constantemente. A continuacin, aadir el cido sulfanlico, agitando y enfriando tambin de un modo constante. Por ltimo, agregar agua destilada hasta obtener un volumen final de 1000 mL. 18. PRUEBA PARA LA REDUCCION DE NITRATO. (general). Disolucin A Acido sulfanlico................................. 8 g Acido actico 5N.......................... 1000 mL Disolucin B Alfa-naftilamina............................ 5 g Acido actico 5N.................... 1000 mL Fltrese a travs de algodn absorbente lavado.

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