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Inmunologia Kuby 6th español

Inmunologia Kuby 6th español

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Las moléculas de anticuerpo tienen una estructura común de
cuatro cadenas peptídicas (fg. 4-6). Esta estructura se integra
con dos cadenas ligeras (L) (del inglés light) idénticas, consis-
tentes en polipéptidos de unos 22 000 Da, y dos cadenas pesa-
das (H)
(del inglés heavy), polipéptidos más grandes de unos
55 000 Da o más. Cada cadena ligera está unida a una cadena
pesada por un enlace disulfuro y por interacciones no covalen-
tes, como puentes salinos, enlaces de hidrógeno e interacciones
hidrófobas, para formar un heterodímero (H-L). Las dos combi-
naciones idénticas de cadena pesada y ligera (H-L) están unidas
entre sí por interacciones no covalentes similares y por puentes
disulfuro para formar la estructura de anticuerpo básica de cua-
tro cadenas (H-L)2, un dímero de dímeros. Como se verá más
adelante, el número exacto y las posiciones precisas de estos en-
laces disulfuro intercadenas diferen entre las clases y subclases
de anticuerpo.

Aproximadamente los 110 primeros aminoácidos de la
región amino terminal de una cadena ligera o pesada varían
mucho entre anticuerpos de distinta especifcidad. Estos seg-
mentos de secuencia muy variable se conocen como regiones
V: VL en las cadenas ligeras y VH en las pesadas. Todas las di-
ferencias de especifcidad que poseen los distintos anticuerpos
pueden seguirse hasta variaciones en las secuencias de ami-
noácidos de las regiones V. De hecho, la mayor parte de las
diferencias entre los anticuerpos se encuentra dentro de áreas
de las regiones V llamadas regiones determinantes de comple-
mentariedad (CDR); estas CDR, tanto en la cadena ligera como
en la pesada, son las que constituyen los sitios de unión de an-
tígeno en la molécula de anticuerpo. En contraste, dentro de
cada clase específca de anticuerpo se observan mucho menos
diferencias cuando se comparan secuencias a lo largo del resto
de la molécula. Las regiones de secuencia relativamente cons-
tante más allá de las regiones variables se han designado regio-
nes C: CL en la cadena ligera y CH en la pesada. Los anticuerpos
son glucoproteínas; con pocas excepciones, los sitios de fja-
ción de carbohidratos están restringidos a la región constante.
No se comprende por completo el papel de la glucosilación de
anticuerpos, pero es probable que incremente la solubilidad
de las moléculas. La glucosilación inapropiada, o la falta

de ella, afecta la rapidez con que se eliminan anticuerpos del
suero y disminuye la efciencia de la interacción entre el anti-
cuerpo y otras proteínas.

Métodos químicos y enzimáticos revelaron
la estructura básica del anticuerpo

El conocimiento de la estructura básica del anticuerpo derivó
de una diversidad de observaciones experimentales. Cuando la
fracción globulínica del suero se separa en fracciones de peso
molecular alto y bajo, los anticuerpos de alrededor de 150 000
Da, que se designan en conjunto como inmunoglobulina G
(IgG), se encuentran en la fracción de peso molecular bajo. En
un experimento fundamental, la digestión breve de IgG con la
enzima papaína produjo tres fragmentos, dos de los cuales eran
idénticos y un tercero muy diferente (fg. 4-7). Los dos fragmen-
tos idénticos (cada uno de 45 000 Da) tenían actividad de unión
de antígeno y se denominaron fragmentos Fab (del inglés frag-
ment antigen binding, fragmento de unión de antígeno). El otro
fragmento (50 000 Da) carecía por completo de actividad de
unión de antígeno. Debido a que se observó que se cristaliza-
ba durante el almacenamiento en frío, se llamó fragmento Fc

FIGURA 4-6 Diagrama esquemático de la estructura de las
inmunoglobulinas deducida por análisis de las secuencias de
aminoácidos.
Cada cadena pesada y ligera en una molécula de
inmunoglobulina contiene una región variable (V) amino terminal
(color agua y pardo, respectivamente), que incluye 100 a 110 ami-
noácidos, y difiere de un anticuerpo al siguiente. El resto de cada
cadena en la molécula —las regiones constantes (C) (colores púr-
pura y rojo)— muestra una variación limitada que define los dos
subtipos de cadena ligera y las cinco subclases de cadena pesada.
Algunas cadenas pesadas ( , y ) contienen asimismo una región
de bisagra rica en prolina (negro). Las porciones amino terminales,
que corresponden a las regiones V, se unen a antígeno; los otros
dominios median las funciones efectoras. Las cadenas pesadas
y , que carecen de una región de bisagra, contienen un dominio
adicional en la parte media de la molécula. CHO indica un grupo
carbohidrato unido a la cadena pesada.

SS
SS

SS

SS

SS

SS

CHO

CHO

COO–

Cadena ligera
κ o λ

C

H

2

C

H

3

S

S

S

S

V

H

C

H

1

S

S

S

S

V

L

C

L

S

S

S

S

C

H

1

V

H

S

S

S

S

C

L

V

L

S

S

S

S

Cadena pesada
µ, γ, α, δ o

Bisagra

N

H

3

+

N

H

3+

N

H

3+

N

H

3

+

COO–

C

O

O–

C

O

O

Actividad
efectora

Unión

de
antígeno

CH2

CH3

446

2

1

4

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86 PARTEII

RESPUESTAS DE LAS CÉLULAS B Y T

(del inglés fragment crystallizable, fragmento cristalizable). La
digestión con pepsina, una enzima proteolítica diferente, tam-
bién demostró que las propiedades de unión de antígeno de un
anticuerpo pueden separarse del resto de la molécula. La diges-
tión con pepsina generó un fragmento único de 100 000 Da,
compuesto por dos subunidades parecidas al Fab, al que se de-
nominó fragmento F(ab')2, que une antígeno. El fragmento Fc
no se recuperó de la digestión con pepsina porque se escindió en
múltiples péptidos pequeños.
Un fenómeno fundamental para inferir la estructura multica-
tenaria de la IgG se observó al someter la molécula a reducción
con mercaptoetanol y alquilación, un tratamiento químico que
rompe de manera irreversible enlaces disulfuro pero no enlaces
peptídicos. Si después del tratamiento la muestra se somete a
cromatografía en una columna que separa moléculas por tama-
ño, es evidente que la molécula de IgG intacta de 150 000 Da
está compuesta, de hecho, por subunidades. Cada molécula de
IgG contiene dos cadenas polipeptídicas más grandes de unos
50 000 Da, que se designan cadenas pesadas (H), y dos cadenas
más pequeñas, de unos 22 000 Da, que se denominan cadenas
ligeras (L) (fg. 4-7).
Los anticuerpos en sí se utilizaron para determinar cómo se
relacionaban los productos de la digestión enzimática —Fab,
F(ab )2 y Fc— con los de la reducción de las cadenas pesada
y ligera. Esta duda se resolvió al emplear antisuero de cabras
inmunizadas con cualesquiera de los fragmentos Fab o Fc de

FIGURA 4-7 Estructura prototípica de la IgG que mues-
tra la configuración de la cadena y los enlaces disulfuro
intercadena.
Se indican los fragmentos que se producen mediante
digestión enzimática con pepsina o papaína o por escisión de los
enlaces disulfuro con mercaptoetanol. Las cadenas ligeras (L) se in-
dican en gris y las pesadas (H) en azul.

IgG de conejo. El anticuerpo contra el fragmento Fab reaccionó
con las cadenas H y L, en tanto que el anticuerpo anti-Fc sólo
lo hizo con la cadena H. Estas observaciones llevaron a concluir
que el fragmento Fab consiste en una porción de una cadena
pesada más una cadena ligera intacta, y que el Fc sólo contiene
componentes de cadena pesada. Con base en estos resultados y
los mencionados con anterioridad, se dedujo la estructura de
la IgG que se muestra en la fgura 4-6. Según este modelo, la
molécula de IgG se integra con dos cadenas H y dos L idénticas
enlazadas por puentes disulfuro.
Era de esperar que el paso siguiente en la obtención de una
imagen de la estructura de los anticuerpos fuera determinar su
secuencia de aminoácidos, pero entonces surgió otro problema.
La población de anticuerpos en la fracción de gammaglobuli-
na sérica consta de un espectro heterogéneo de anticuerpos:
muchos anticuerpos distintos, cada uno presente en pequeñas
cantidades. Incluso si la inmunización se realiza con un con-
jugado hapteno-portador, la población de anticuerpos creados
contra el hapteno es heterogénea, porque múltiples anticuer-
pos reconocen diferentes epítopos del hapteno. Sin embargo,
para el análisis de la secuencia de aminoácidos se requiere una
muestra pura de la molécula en estudio. Este obstáculo para el
análisis de la secuencia fue superado mediante el uso de inmu-
noglobulinas de pacientes con mieloma múltiple, un cáncer
de células plasmáticas productoras de anticuerpos. Las células
plasmáticas de una persona normal son células en etapa fnal
que secretan una especie molecular de anticuerpo única por
un período limitado y a continuación mueren. En contraste,
una clona de células plasmáticas en una persona con mieloma
múltiple escapa a los controles normales de su lapso de vida y
proliferación y no constituye una célula en etapa fnal; por el
contrario, las células se dividen una y otra vez sin regulación y
no requieren ninguna activación por antígeno que las induzca
a proliferar. Aunque esta célula plasmática cancerosa, llamada
célula de mieloma, se ha transformado, no lo hacen su ma-
quinaria de síntesis de proteínas ni sus funciones secretorias;
por consiguiente, la célula secreta aún anticuerpo homogéneo
desde el punto de vista molecular. Este anticuerpo no se di-
ferencia de las moléculas normales de anticuerpo, aunque se
denomina proteína de mieloma para indicar su origen. En un
sujeto afectado con mieloma múltiple, la proteína de mielo-
ma puede constituir 95% de las inmunoglobulinas séricas. En
muchos enfermos, las células de mieloma secretan asimismo
cantidades excesivas de cadenas ligeras. La profusión de estas
últimas se descubrió por primera vez en la orina de pacientes
con mieloma y se les llamó proteínas de Bence-Jones, en ho-
nor de quienes las descubrieron.
El mieloma múltiple afecta también a otros animales. En
ratones puede surgir de manera espontánea, al igual que en el
ser humano; también es posible crear condiciones que favore-
cen la inducción de un mieloma al inyectar aceite mineral en
la cavidad peritoneal. Las clonas de células plasmáticas ma-
lignas que se desarrollan se conocen como plasmacitomas y
muchas de ellas se designan MOPC, término que alude a la
inducción de células de plasmacitoma con aceite mineral (mi-
neral-oil induction of plasmacytoma cells). En la actualidad, la
American Type-Culture Collection conserva un gran número
de líneas de MOPC de ratón que secretan diferentes clases de in-
munoglobulinas, como un almacén de líneas celulares sin costo

S

S

Cadena L

F(ab')

2

Fab

Fc

Fab

Digestión
con pepsina

Reducción con
mercaptoetanol

Digestión con papaína

Cadena H

S

Enlaces
disulfuro

Cadenas L

SH

HS

+

+

Fragmentos Fc

Cadenas H

S
SS

S

S

SS
SS

S

S

S
S

SS
SS

SH
SH

S

S

S
S

SH

HS

+

SH
SH

+ +

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ANTÍGENOS Y ANTICUERPOS

CAPÍTULO

4

87

que se utilizan con regularidad en la investigación. En el método
para producir anticuerpos monoclonales de una especifcidad
deseada, cuyos pioneros fueron Georges Köhler y Cesar Mils-
tein (véase más adelante), se hace uso de las líneas de plasma-
citoma. Esta tecnología de hibridoma permite la producción de
anticuerpos homogéneos para estudios estructurales y funcio-
nales y para una variedad de aplicaciones clínicas.

La determinación de las secuencias
de la cadena ligera reveló regiones
constantes y variables

Cuando se compararon las secuencias de aminoácidos de varias
proteínas de Bence-Jones (cadenas ligeras) de diferentes indivi-
duos surgió un patrón notable. Se encontró que la mitad ami-
no terminal de la cadena, que incluía 100 a 110 aminoácidos,
variaba entre diferentes proteínas de Bence-Jones. Esta área se
denominó región variable (V). La mitad carboxilo terminal de
la molécula, llamada región constante (C), tenía dos secuencias
de aminoácidos básicas. Esto llevó a reconocer que había dos
tipos de cadena ligera, y . En el ser humano, 60% de las ca-
denas ligeras son y 40% son , en tanto que en el ratón, 95%
de las cadenas ligeras son y sólo 5% son . Una molécula de
anticuerpo normal sólo contiene un tipo de cadena ligera, sea
o , nunca ambas.

Las secuencias de aminoácidos de las regiones constantes
de las cadenas ligeras muestran diferencias menores que se
utilizan para clasifcarlas en subtipos. En ratones y en el ser hu-
mano existen cuatro subtipos (

1,

2,

3 y

4). Sustituciones de
aminoácidos sólo en unas cuantas posiciones son la causa de las
diferencias de subtipo.

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