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Inmunologia Kuby 6th español

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El anticuerpo y el antígeno soluble que interactúan en una solu-
ción acuosa forman un retículo que por último se convierte en
un precipitado visible. Los anticuerpos que aglomeran antíge-
nos solubles se denominan precipitinas. Aunque la formación
del complejo soluble Ag-Ab ocurre en el transcurso de minutos,
la del precipitado visible se lleva a cabo con mayor lentitud y a
menudo requiere uno o dos días para completarse.
La formación de un retículo de Ag-Ab depende de la valen-
cia tanto del anticuerpo como del antígeno:

■ El anticuerpo debe ser bivalente; no se forma un precipitado

con fragmentos Fab monovalentes.

■ El antígeno debe ser bivalente o polivalente; es decir, debe

tener cuando menos dos copias del mismo epítopo o
presentar diferentes epítopos que reaccionan con distintos
anticuerpos presentes en antisuero policlonal.

Aunque en alguna época los principales tipos de valoración em-
pleados en inmunología fueron diversas modifcaciones de la
reacción de precipitación, se sustituyeron en gran parte por mé-
todos más rápidos y que sólo requieren cantidades muy peque-
ñas de antígeno o anticuerpo porque son mucho más sensibles.
Además, estos métodos modernos de valoración no se limitan a

FIGURA 6-5 La SPR puede usarse para determinar si dife-
rentes anticuerpos se unen al mismo epítopo o a epítopos
diferentes.
a) Ab

1 y Ab

2 reconocen diferentes epítopos del antí-

geno. La inyección inicial de Ab

1 causa un aumento desde el nivel

basal hasta una meseta; la adición ulterior de Ab

2 causa un au-

mento hasta una segunda meseta más alta. Esto indica que Ab

1 y

Ab

2 reaccionan con diferentes epítopos en el antígeno, por ejemplo
dos regiones espacialmente distintas de una proteína. b) Ab

1 y Ab
2

reconocen el mismo epítopo del antígeno. En el primer sensogra-
ma, la adición de Ab

1 revela una respuesta, y la inyección ulterior

de Ab

2 no genera respuesta ulterior. En el segundo sensograma, la

adición de Ab

2 revela primero una respuesta, pero la adición ulterior

de Ab

1 no induce una respuesta ulterior. Este patrón indica que Ab
1

y Ab

2 se unen de manera competitiva, ya que ambos reconocen el
mismo epítopo en el antígeno; la unión de uno bloquea la unión
subsecuente del otro.

a) Ab

1 y Ab

2 se unen a diferentes epítopos del mismo antígeno

b) Ab

1 y Ab

2 se unen al mismo epítopo

Ab

1

Se agrega
Ab

1

Se agrega Ab

2

Ab

2

Epítopos

Tiempo

Tiempo

Tiempo

Unidades de resonancia

Unidades de resonancia

Ab

1

Ab

2

Se agrega
Ab

1

Se agrega
Ab

2

Se agrega
Ab

1

Se agrega
Ab

2

Epítopos

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152 PARTEII

RESPUESTAS DE LAS CÉLULAS B Y T

del agar, la región de equivalencia se establece y alrededor del
foso se forma un anillo de precipitación, un anillo de precipiti-
na (fg. 6-6, parte superior). El área del anillo de precipitina es
proporcional a la concentración de antígeno. La comparación
del área del anillo de precipitina con una curva estándar (que se
obtiene al medir las áreas de precipitina de concentraciones co-
nocidas del antígeno) permite determinar la concentración en
la muestra de antígeno. En el método de Ouchterlony tanto el
antígeno como el anticuerpo se difunden radialmente desde los
fosos uno hacia el otro y por tanto se establece un gradiente de
concentración. Conforme la equivalencia se alcanza, se produce
una línea visible de precipitación, una línea de precipitina (fg.
6-6, parte inferior).

La inmunoelectroforesis combina
electroforesis e inmunodifusión doble

En la inmunoelectroforesis, la mezcla de antígeno se somete
primero a electroforesis a fn de separar sus componentes por
carga. A continuación se cortan cuencos en el gel de agar parale-
los a la dirección del campo eléctrico y se les añade antisuero.
Luego el anticuerpo y el antígeno se difunden uno hacia el otro
y producen líneas de precipitación donde se encuentran en pro-
porciones apropiadas (fg. 6-7). La inmunoelectroforesis se usa

en laboratorios clínicos para detectar la presencia o ausencia de
proteínas en el suero. Una muestra de suero se somete a electro-
foresis y los componentes séricos individuales se identifcan con
antisueros específcos para una proteína o una clase de inmuno-
globulina determinada. Esta técnica es útil para determinar si un
paciente produce cantidades anormalmente bajas de uno o más
isotipos, características de ciertas enfermedades de inmunode-
fciencia. Asimismo puede mostrarse si un paciente produce en
exceso cierta proteína sérica, como albúmina, inmunoglobuli-
na o transferrina. El patrón inmunoelectroforético del suero de
individuos con mieloma múltiple muestra una gran cantidad
de proteína de mieloma. Como la inmunoelectroforesis es una
técnica estrictamente cualitativa que sólo detecta concentracio-
nes de anticuerpo hasta cierto punto altas (mayores de varios
cientos de microgramos por mililitro), su utilidad se limita a la
detección de anormalidades cuantitativas sólo cuando la des-
viación respecto de lo normal es notable, como en los estados de
inmunodefciencia o los trastornos inmunoproliferativos.
Una técnica cuantitativa relacionada, la electroforesis en
cohete
, permite medir las concentraciones de antígeno. En este
método se somete a electroforesis un antígeno con carga nega-
tiva en un gel que contiene anticuerpo. El precipitado que se
forma entre el antígeno y el anticuerpo tiene el aspecto de un

FIGURA 6-6 Diagramas de la inmunodifusión radial (método
de Mancini) y la inmunodifusión doble (método de Ouchter-
lony) en un gel.
En ambos casos se forman complejos insolubles
grandes en el agar en la zona de equivalencia, visibles como líneas de
precipitación (regiones púrpura). En la inmunodifusión radial sólo el
antígeno (rojo) se difunde, en tanto que en la inmunodifusión doble
se difunden tanto el anticuerpo (azul) como el antígeno (rojo).

Prueba

Sensibilidad*
(µg de anticuerpo/ml)

Reacción de precipitación en líquidos

20–200

Reacciones de precipitación en gel

Inmunodifusión radial de Mancini

10–50

Doble inmunodifusión de Ouchterlony20–200

Inmunoelectroforesis

20–200

Electroforesis en cohete

2

Reacciones de aglutinación

Directa

0.3

Aglutinación pasiva

0.006–0.06

Inhibición de la aglutinación

0.006–0.06

Radioinmunoensayo

0.0006–0.006

Ensayo de inmunosorbente ligado
a enzima (ELISA)

~0.0001–0.01

ELISA con quimioluminiscencia

~0.00001–0.01†

Inmunofluorescencia

1.0

Citometría de flujo

0.006–0.06

*

La sensibilidad depende tanto de la afinidad del anticuerpo usado para el
ensayo como de la densidad de epítopos y la distribución del antígeno.

Obsérvese que la sensibilidad de las pruebas ELISA basadas en quimiolumi-
niscencia puede equipararse a la de RIA.

FUENTE: Adaptado de N. R. Rose et al., eds., 1997, Manual of Clinical Labora-
tory Immunology;
5th ed. American Society for Microbiology, Washington, D.C.

CUADRO 6-3

Sensibilidad de diversos
inmunoensayos

INMUNODIFUSIÓN RADIAL

Anticuerpo
incorporado
en agar

Antígeno

Difusión
de antígeno

El precipitado
forma un anillo

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