Universit Abou Bekr Belkad Facult des sciences

Dpartement de Biologie molculaire et cellulaire. 3me anne LMD option Biochimie

Anne 2008/2009

Examen final
Nom :

Corrig
Prnom :

Exercice 1 : A partir du tableau ci-dessous, calculer la molarit et la normalit des diffrentes solutions. Indiquer comment prparer 1 litre de solution N de chaque solution. Acide CH3CO2H HCl H3PO4 H2SO4 M (g.mol-1) 60.05 36.46 98 98.08 Densit 1.05 1.18 1.68 1.83 Puret en % 99.7 37 84 95 M 17.4 12 14.4 17.6 N 17.4 12 43.2 35.5 Solution 1 N 57 ml 83 ml 23 ml 28 ml

Exercice 2 : Les protines de rserve des graines ont t tudies chez le lupin blanc. Pour cela,

elles ont t extraites puis purifies partir de graines mures d'une part et de graines immatures (en cours de formation) d'autre part. Pour ces dernires, trois stades de dveloppement de la graine ont t retenus appels 1, 2 et 3. En fin de purification, les protines appeles globulines ont t spares sur une rsine anionique contenant le groupement -O-CH2-CH2-NH+-(CH2-CH3)2 quilibre dans un tampon phosphate de potassium 25 mM de pH 7,5. Plusieurs fractions ont ainsi t obtenues en utilisant un gradient de sel par palier avec KCl 0M, 0,15M, 0,3M puis 1M. 1- La fraction protique obtenue avec le KCl 0,3 M (fraction C) a t plus spcialement tudie. Pour cela, 200 ml de la fraction ont t prlevs auxquels on a ajout de l'acide trichloroactique. a- Quel est le rle de cet acide ? Rponse : Prcipiter les protines pour concentrer lextrait b- Quelle volume d'acide en solution 50 % faut-il utiliser pour amener la concentration finale des prlvements 10 % d'acide trichloroactique ? Rponse : 50 ml.

c- Aprs une heure 4C, le mlange a t centrifug et le culot lav avec un mlange theralcool (1:1 ; v:v). Quel est le rle de ce mlange ? Rponse : Laver le culot pour liminer les traces dacide trichloroactique.

d- Le dernier culot a t repris dans 100 ml d'un tampon constitu de : tampon Tris-HCl 0,5 M de pH 6,8 ; de SDS 10 % ; de glycrol (100:30:10 ; v :v :v). Calculez le pourcentage final du SDS dans l'chantillon. Rponse : 2.14 %

e- Calculez le pourcentage de glycrol. Rponse : 7.1 %

f- Comment prpare-t-on 25 ml de SDS 10 % partir de la poudre commerciale ? Rponse : 2.5 g de poudre dans une fiole de 100 ml, puis de leau qsp 100 ml.

2- Une lectrophorse a t effectue en prsence de SDS pour les fractions C obtenues pour les trois stades des graines immatures et pour celle obtenue avec les graines mre (les chiffres indiquent les masses molculaires).

a- A partir de cette lectrophorse, proposez une hypothse pour expliquer les vnements qui seraient intervenus entre les stades 1, 2 et 3 d'une part puis dans la graine mre d'autre part. Rponse :Stade 1 : Synthse dune pr-protine de 81000 kDa Stade 2 : Maturation de la protine avec limination dun peptide de 3000 kDa Stade 3 : Fin de cette maturation. Entre le stade 3 et la graine mature, diffrents vnements conduisent trois sous-units possibles avec des clivages diffrents ou successifs et formation de liaisons disulfures.

b- Quel est l'effet du mercaptothanol sur les polypeptides de la graine mre ? Rponse : Ruptures des ponts disulfures. Chaque sous-unit est constitue de 2 polypeptides 69000 ou 66000 ou 42000 tous associs un polypeptide de 20000. c- Proposez sous forme d'un schma une structure quaternaire probable pour cette protine dans la graine mre (on considre que la fraction obtenue est pure). Rponse : Plusieurs schmas sont possibles montrant les ponts disulfures. Un polypeptide de 69000 ou 66000 ou 62000 associ par ce type de liaisons avec un polypeptide de 20000. Cela fait donc trois types de sous-units.