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Inmunobiologa de

Janeway

Inmunobiologa de

Janeway
Kenneth Murphy
Washington University of Medicine, St. Louis

Paul Travers
Anthony Nolan Research Institute, London

Mark Walport
The Wellcome Trust, London
Con la contribucin de: Michael Ehrenstein
University College London, Division of Medicine

Claudia Mauri
University College London, Division of Medicine

Allan Mowat
University of Glasgow

Andrey Shaw
Washington University School of Medicine, St. Louis
Traduccin: Bernardo Rivera Muoz Roberto Palacios Martnez

MXICO BOGOT BUENOS AIRES CARACAS GUATEMALA MADRID NUEVA YORK SAN JUAN SANTIAGO SAO PAULO AUCKLAND LONDRES MILN MONTREAL NUEVA DELHI SAN FRANCISCO SIDNEY SINGAPUR ST. LOUIS TORONTO

Director editorial: Javier de Len Fraga Correccin de estilo: Hctor Barrera Villa Zeballos, Germn Arias Rebatet Supervisora de edicin: Norma Leticia Garca Carbajal Composicin y formacin: Arturo Rocha Hernndez Supervisora de produccin: ngela Salas Caada

NOTA La medicina es una ciencia en constante desarrollo. Conforme surjan nuevos conocimientos, se requerirn cambios de la teraputica. El (los) autor(es) y los editores se han esforzado para que los cuadros de dosificacin medicamentosa sean precisos y acordes con lo establecido en la fecha de publicacin. Sin embargo, ante los posibles errores humanos y cambios en la medicina, ni los editores ni cualquier otra persona que haya participado en la preparacin de la obra garantizan que la informacin contenida en ella sea precisa o completa, tampoco son responsables de errores u omisiones, ni de los resultados que con dicha informacin se obtengan. Convendra recurrir a otras fuentes de datos, por ejemplo, y de manera particular, habr que consultar la hoja informativa que se adjunta con cada medicamento, para tener certeza de que la informacin de esta obra es precisa y no se han introducido cambios en la dosis recomendada o en las contraindicaciones para su administracin. Esto es de particular importancia con respecto a frmacos nuevos o de uso no frecuente. Tambin deber consultarse a los laboratorios para recabar informacin sobre los valores normales.

INMUNOBIOLOGA DE JANEWAY Prohibida la reproduccin total o parcial de esta obra, por cualquier medio, sin autorizacin escrita del editor.

DERECHOS RESERVADOS 2009, respecto a la sptima edicin en espaol por, McGRAW-HILL INTERAMERICANA EDITORES, S.A. de C.V. A subsidiary of The McGraw-Hill Companies, Inc. Prolongacin Paseo de la Reforma 1015, Torre A, Piso 17, Col. Desarrollo Santa Fe, Delegacin lvaro Obregn C.P. 01376, Mxico, D.F. Miembro de la Cmara Nacional de la Industria Editorial Mexicana, Reg. No. 736 ISBN-13: 978-970-10-7347-6 Translated from the seventh English edition of: Janeways Immunobiology Copyright 2008 by Garland Science, Taylor & Francis Group, LLC All Rights Reserved ISBN 13: 978-0-8153-4290-8 1234567890 Impreso en Mxico 08765432109 Printed in Mexico

Prefacio

Este libro est diseado como un texto introductorio para cursos de inmunologa impartidos a estudiantes de medicina, estudiantes de los ltimos semestres de la licenciatura en biologa, alumnos de posgrado y cientficos de otras reas que desean saber ms acerca del sistema inmunitario. Presenta el campo de la inmunologa desde un punto de vista consistente, el de la interaccin del hospedador con un ambiente que contiene muchas especies de microorganismos potencialmente dainos. La justificacin de este enfoque es que la ausencia de uno o ms componentes del sistema inmunitario casi siempre la explica un aumento en la susceptibilidad a una o ms infecciones especficas. As, en primer lugar, el sistema inmunitario existe para proteger al hospedador contra infecciones y su historia evolutiva debe haber sido moldeada en gran medida por este reto. Otros aspectos de la inmunologa, como las alergias, la autoinmunidad, el rechazo de injertos y la inmunidad a tumores, se tratan como variaciones de esta funcin protectora bsica. En estos casos la naturaleza del antgeno es la variable principal. En la sptima edicin, todos los captulos se han actualizado para incorporar nuevas observaciones que amplan el conocimiento y la comprensin del sistema inmunitario. Entre los ejemplos se incluyen nuevas investigaciones sobre receptores NK, mayor comprensin del cometido de la desaminasa de citidina inducida por activacin (AID) en la generacin de la diversidad de anticuerpos, inmunoevasiones vricas, presentacin cruzada de antgenos a clulas T, subconjuntos de clulas dendrticas y de clulas T, y nuevos receptores innatos que reconocen agentes patgenos, por nombrar unos cuantos. El captulo sobre evolucin incluye nuevas y fascinantes percepciones de formas alternativas de inmunidad adaptativa tanto en invertebrados como en organismos superiores. Los captulos clnicos contienen nuevas secciones sobre la enfermedad celiaca y su patogenia, la enfermedad de Crohn y enfoques inmunolgicos para el tratamiento del cncer. Se presentan nuevas preguntas para su discusin al final de cada captulo. Dichas preguntas pueden usarse con fines de revisin, o como temas para discusin en clase o en grupos de estudio informales. El CD-ROM acompaante, Inmunobiologa de Janeway 7 interactiva, se ha ampliado y mejorado. Despus de presentar un panorama general extenso del sistema inmunitario en el captulo 1, la inmunidad innata se expone en el captulo 2 como un importante sistema protector por propio derecho y un precursor necesario de la inmunorreaccin adaptativa. La cobertura de los receptores Toll y otros mecanismos de deteccin de patgenos se ha actualizado para reflejar el rpido avance de este campo en los tres ltimos aos y se ha revisado la descripcin de las diferentes familias de receptores NK activadores e inhibidores de acuerdo con los progresos en su comprensin. El material sobre agentes patgenos, al principio del captulo 10 en ediciones anteriores, se ha cambiado al captulo 2 para presentar una introduccin ms completa a los procesos infecciosos en una fase ms temprana del estudio. Despus de exponer la inmunidad innata, la atencin se dirige a la inmunidad adaptativa, porque se sabe mucho ms de este tema gracias a los esfuerzos de la vasta mayora de los inmunlogos. El tema central del texto siguiente es la seleccin clonal de linfocitos.

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Como en la sexta edicin, en la mayor parte del libro se consideran en conjunto los dos linajes linfocticos (clulas B y clulas T), debido a que desde la perspectiva del autor parece que en ambos tipos celulares actan esencialmente los mismos mecanismos. Un ejemplo es la redistribucin de segmentos gnicos para generar los receptores por medio de los cuales los linfocitos reconocen antgenos (cap. 4). El captulo 5, sobre reconocimiento de antgenos, se ha actualizado para incluir la presentacin cruzada de antgenos por molculas del MHC de clase I y la interferencia por inmunoevasinas virales en la presentacin de antgenos. El captulo 6, sobre sealizacin, se ha revisado para describir las vas de sealizacin de las clulas T con mayor detalle, con una exposicin ms amplia y actualizada de la sealizacin coestimuladora. El captulo 7 se reorganiz de forma sustancial, de modo que el desarrollo de las clulas B y de las T se considera en secciones separadas. En los captulos 8 y 9 se exponen por separado las funciones efectoras de las clulas T y de las clulas B, dado que intervienen diferentes mecanismos. Se actualiz y ampli el tratamiento de las clulas dendrticas y se incluyeron descubrimientos recientes sobre los subconjuntos de clulas T reguladoras y TH17 (cap. 8). Se aprovech la oportunidad para cambiar el enfoque del captulo 10 dedicado a la naturaleza dinmica de la respuesta inmunitaria a la infeccin, de la inmunidad innata a la generacin de memoria inmunitaria. Se incluyen los avances recientes sobre la comprensin de los cambios temporales en los subconjuntos de clulas T durante una respuesta inmunitaria y de la naturaleza de la memoria inmunitaria. Dado su cometido cada vez ms aceptado en la defensa inmunolgica, se cre un nuevo captulo dedicado por completo a la inmunidad de las mucosas (cap. 11). Los captulos 12 a 14 tratan en mayor medida sobre la forma en que enfermedades como VIH/sida, autoinmunidad o alergia pueden ser causadas por inmunodeficiencias heredadas o adquiridas o por disfuncin de mecanismos inmunitarios. En la medida en que ha aumentado la comprensin de las causas de las enfermedades, estos captulos se han ampliado con descripciones de sndromes de los cuales recin se han identificado los defectos gnicos subyacentes. Estos captulos, que describen las fallas que le impiden al sistema inmunitario mantener la salud, van seguidos por otro (cap. 15) dedicado al modo en que la reaccin inmunitaria puede manipularse mediante vacunaciones y otros medios en un intento por combatir no slo enfermedades infecciosas, sino tambin el rechazo de trasplantes y el cncer. Estos cuatro captulos se revisaron y actualizaron a fondo, en especial en lo que respecta a la nueva generacin de tratamientos biolgicos que comienzan a ingresar en la prctica mdica. El libro culmina con el captulo 16 que se encuentra totalmente actualizado sobre la evolucin de los sistemas inmunitarios de los animales. El anlisis de secuencias genmicas de invertebrados y de vertebrados inferiores ha permitido una nueva apreciacin de la versatilidad de las defensas inmunitarias de los invertebrados, y descubrir que el sistema inmunitario adaptativo de los seres humanos basado en anticuerpos y clulas T no es el nico medio por el cual puede generarse inmunidad adaptativa. Incluye un total de 47 casos clnicos. Un cono al margen en la Inmunobiologa de Janeway brinda al lector un vnculo con el caso de estudio relevante, donde la ciencia se aplica en un ambiente clnico. La sptima edicin de Inmunobiologa de Janeway incluye un CD-ROM con animaciones originales sobre inmunologa basadas en las figuras del libro, y videos seleccionados de experimentos con gran atractivo visual. Las animaciones se revisaron y actualizaron para esta edicin, y se incluyen cinco nuevas que abarcan infeccin por VIH, respuesta de DTH, evasinas vricas, reconocimiento innato de patgenos y receptores de patgenos. Todas las animaciones y los videos estn acompaados por una narracin. El CD-ROM tambin contiene las figuras y los cuadros del libro, precargados en PDF. Esta edicin se ha renombrado como Inmunobiologa de Janeway en memoria de Charles A. Janeway, el autor original de este libro y quien fue su continua inspiracin hasta su fallecimiento en 2003. Andrey Shaw, de la Washington Uni-

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versity School of Medicine, St. Louis, revis y actualiz por completo el captulo 6 sobre sealizacin; Allan Mowatt, de la University of Glasgow, hizo lo mismo con el captulo 11, sobre inmunidad de las mucosas, y Claudia Mauri (caps. 12 y 14) y Michael Ehrenstein (caps. 13 y 15), del University College London, revisaron y actualizaron los captulos clnicos. El apndice III, citocinas y sus receptores, fue actualizado y reorganizado por Robert Schreiber, de la Washington University School of Medicine, St. Louis. Joost Oppenheim, del National Cancer Institute, Washington, D.C., actualiz el apndice IV, quimiocinas y sus receptores. Los autores de esta obra tienen una gran deuda de gratitud con ellos por verter su experiencia particular en el libro y por el cuidado y esfuerzo que pusieron en dichas revisiones. Los revisores, ilustradores y editores son los eslabones esenciales que dan cohesin a este libro. Se obtuvieron beneficios de las habilidades editoriales de Eleanor Lawrence, editora de desarrollo del libro desde sus inicios, y de la creatividad y el talento artstico de Matt McClements, el ilustrador desde la segunda edicin. La memoria institucional de ellos proporciona la coherencia global de esta edicin exhaustivamente actualizada. En Garland, Mike Morales dirigi la creacin de atractivas animaciones que dan vida a importantes conceptos. Ninguno de estos esfuerzos habra fructificado sin la hbil (pero paciente) coordinacin de Sigrid Masson y las acertadas sugerencias y continuo apoyo de la editora, Denise Schanck. Kenneth Murphy agradece a Theresa Murphy y a Paul, Mike, Mark y Jason por su estmulo y apoyo. Paul Travers expresa su gratitud a Rose Zamoyska por su infinita paciencia y apoyo. Mark Walport agradece a su esposa, Julia, y a sus hijos, Louise, Robert, Emily y Fiona, por su respaldo irrestricto. Quisiramos expresar nuestro especial agradecimiento a todas aquellas personas que leyeron total o parcialmente los captulos de la sexta edicin, as como las pruebas de la sptima, y nos aconsejaron sobre cmo mejorarlos. Se les nombra por captulo en la pgina ix. Se ha hecho todo lo posible por escribir un libro sin erratas. Sin embargo, el lector podr encontrarlas aqu y all, y sera de gran beneficio para nosotros que usted se tomara la molestia de hacrnoslas saber.

Kenneth Murphy Paul Travers Mark Walport

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Inmunobiologa interactiva

El CD-ROM Inmunobiologa interactiva contiene las figuras y los cuadros del libro en el formato PDF. Los videos y animaciones se ejecutan en una interfaz autocontenida e ilustran de manera dinmica conceptos importantes del libro. Los videos que incluye el CD son: Seccin I 2-1 Reconocimiento innato de patgenos 2-2 Fagocitosis 2-3 Receptores de reconocimiento de patgenos 2-4 Sistema del complemento 2-5 Adhesin y rodamiento 2-6 Rodamiento de leucocitos 2-7 Extravasacin de leucocitos Seccin II 4-1 Recombinacin gnica 5-1 Procesamiento del MHC de clase I 5-2 Infeccin intracelular por Listeria 5-3 Procesamiento del MHC de clase II 5-4 Evasinas vricas Seccin III 6-1 Balsas lipdicas 6-2 Sealizacin por TCR 6-3 Linfocito T activado 6-4 Cinasa de MAP 6-5 Sealizacin por citocinas 6-6 Sealizacin por quimiocinas 6-7 Induccin de la apoptosis 6-8 Apoptosis 7-1 Desarrollo de las clulas T 7-2 Desarrollo de los ganglios linfticos Seccin IV 8-1 Eliminacin de clulas 8-2 Migracin de clulas dendrticas 8-3 Interacciones TCR-APC 8-4 Sinapsis inmunitaria 8-5 Liberacin de grnulos de clulas T 10-1 Respuesta inmunitaria 10-2 Quimiotaxis 10-3 Circulacin de linfocitos 10-4 Conduccin de linfocitos 10-5 Centros germinales Seccin V 11-1 Variacin antignica menor 11-2 Variacin antignica mayor 12-1 Infeccin por VIH 13-1 Respuesta de DTH

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Agradecimientos

Los autores expresan su agradecimiento a los siguientes expertos, quienes leyeron total o parcialmente los captulos indicados de la sexta o de la sptima edicin (o de ambas) y proporcionaron invaluables consejos para desarrollar esta nueva edicin. Captulo 1 Hans Acha-Orbea, Universit de Lausanne; Leslie Berg, University of Massachusetts Medical Center; Michael Cancro, University of Pennsylvania; Elizabeth Godrick, Boston University; Michael Gold, University of British Columbia; Harris Goldstein, Albert Einstein College of Medicine; Kenneth Hunter, University of Nevada, Reno; Derek McKay, McMaster University; Eleanor Metcalf, Uniformed Services University of the Health Sciences, Maryland; Carol Reiss, New York University; Maria Marluce dos Santos Vilela, State University of Campinas Medical School, Brazil; Heather-Zwickey, National College of Natural Medicine, Oregon. Captulo 2 Alan Aderem, Institute for Systems Biology, Washington; John-Atkinson, Washington University School of Medicine, St. Louis; Marco-Colonna, Washington University School of Medicine, St. Louis; Jason-Cyster, University of California, San Francisco; John Kearney, The University of Alabama, Birmingham; Lewis Lanier, University of California, San Francisco; Ruslan Medzhitov, Yale University School of Medicine; Alessandro Moretta, University of Genova, Italy; Gabriel Nunez, University of Michigan Medical School; Kenneth Reid, University of Oxford; Robert Schreiber, Washington University School of Medicine, St. Louis; Caetano Reis e Sousa, Cancer Research UK; Andrea Tenner, University of California, Irvine; Eric Vivier, Universit de la Mditerrane Campus de Luminy; Wayne Yokoyama, Washington University School of Medicine, St. Louis. Captulo 3 David Davies, NIDDK, National Institutes of Health, US; K. Christopher Garcia, Stanford University; David Fremont, Washington University School of Medicine; Bernard Malissen, Centre dImmunologie Marseille-Luminy; Ellis Reinherz, Harvard Medical School; Roy Marriuzza, University of Maryland Biotechnology Institute; Robyn Stanfield, The Scripps Research Institute; Ian Wilson, The Scripps Research Institute. Captulo 4 Fred Alt, Harvard Medical School; David Davies, NIDDK, National Institutes of Health, US; Amy Kenter, University of Illinois, Chicago; Michael Lieber, University of Southern California; John Manis, Harvard Medical School; Michael Neuberger, University of Cambridge; David Schatz, Yale University School of Medicine; Barry Sleckman, Washington University School of Medicine, St. Louis. Captulo 5 Paul Allen, Washington University School of Medicine, St. Louis; Siamak Bahram, Centre de Recherche dImmunologie et dHematologie; Michael

Bevan, University of Washington; Peter Cresswell, Yale University School of Medicine; David Fremont, Washington University School of Medicine, St. Louis; K. Christopher Garcia, Stanford University; Ted Hansen, Washington University School of Medicine, St. Louis; Jim Kaufman, Institute for Animal Health, UK; Philippa Marrack, National Jewish Medical and Research Center, University of Colorado Health Sciences Center, Denver; Jim McCluskey, University of Melbourne, Victoria;- Jacques Neefjes, The Netherlands Cancer Institute, Amsterdam; Chris Nelson, Washington University School of Medicine, St. Louis; Hans-Georg Rammensee, University of Tubingen, Germany; John Trowsdale, University of Cambridge; Emil Unanue, Washington University School of Medicine, St. Louis. Captulo 6 Leslie Berg, University of Massachusetts Medical Center; John Cambier, University of Colorado Health Sciences Center; Doreen Cantrell, University of Dundee, UK; Andy Chan, Genentech, Inc.; Gary Koretzky, University of Pennsylvania School of Medicine; Gabriel Nunez, University of Michigan Medical School; Anton van der Merwe, University of Oxford; Andre Veillette, Institut de Recherches Cliniques de Montral; Art Weiss, University of California, San Francisco. Captulo 7 Avinash Bhandoola, University of Pennsylvania; B.J. Fowlkes, National Institutes of Health, US; Richard Hardy, Fox Chase Cancer Center, Philadelphia; Kris Hogquist, University of Minnesota; John Kearney, The University of Alabama, Birmingham; Dan Littman, New York University School of Medicine; John Monroe, University of Pennsylvania Medical School; David Raulet, University of California, Berkeley; Ellen Robey, University of California, Berkeley; Harinder Singh, University of Chicago; Barry Sleckman, Washington University School of Medicine, St. Louis; Brigitta Stockinger, National Institute for Medical Research, London; Paulo Vieira, Institut Pasteur, Paris; Harald von Boehmer, Harvard Medical School; Rose Zamoyska, National Institute for Medical Research, London. Captulo 8 Rafi Ahmed, Emory University School of Medicine; Michael Bevan, University of Washington; Frank Carbone, University of Melbourne, Victoria; Bill Heath, University of Melbourne, Victoria; Tim Ley, Washington University School of Medicine, St. Louis; Anne OGarra, The National Institute for Medical Research, London; Steve Reiner, University of Pennsylvania School of Medicine; Robert Schreiber, Washington University School of Medicine, St. Louis; Casey Weaver, The University of Alabama, Birmingham; Marco Colonna, Washington University School of Medicine, St. Louis. Captulo 9 Michael Cancro, University of Pennsylvania; Robert H. Carter, The University of Alabama, Birmingham; John Kearney, The University of Alabama, Birmingham; Garnett Kelsoe, Duke University; Michael Neuberger, University of Cambridge.

Captulos 10 y 11 Rafi Ahmed, Emory University School of Medicine; Charles Bangham, Imperial College, London; Jason Cyster, University of California, San Francisco; David Gray, The University of Edinburgh; Dragana Jankovic, National Insitutes of Health; Michael Lamm, Case Western University; Antonio Lanzavecchia, Institute for Research in Biomedicine, Switzerland; Sara Marshall, Imperial College, London; Allan Mowat, University of Glasgow; Gabriel Nunez, University of Michigan Medical School; Michael Oldstone, The Scripps Research Insitute; Michael Russell, SUNY, Buffalo; Federica Sallusto, Institute for Research in Biomedicine, Switzerland; Philippe Sansonetti, Institut Pasteur, Paris; Alan Sher, National Institutes of Health, US. Captulo 12 Mary Collins, University College, London; Alain Fischer, Groupe-Hospitalier Necker-Enfants-Malades, Paris; Raif Geha, Harvard Medical School; Paul Klenerman, University of Oxford; Dan Littman, New York University School of Medicine; Michael Malim, Kings College; Sarah Rowland-Jones, University of Oxford; Adrian Thrasher, University College, London. Captulo 13 Cezmi Akdis, Swiss Institute of Allergy and Asthma Research; Raif Geha, Harvard Medical School; Barry Kay, Imperial College, London; Gabriel Nunez, University of Michigan Medical School; Harald Renz, Philipps Universitt Marburg, Germany; Alan Shaffer, Harvard Medical School.

Captulo 14 Antony Basten, The University of Sydney; Lucienne Chatenaud, Groupe Hospitalier Necker-Enfants-Malades, Paris; Maggie Dallman, Imperial College, London; Anne Davidson, Albert Einstein College of Medicine; Betty Diamond, Albert Einstein College of Medicine; Rikard Holmdahl, Lund University, Sweden; Laurence Turka, University of Pennsylvania School of Medicine; Kathryn Wood, University of Oxford. Captulo 15 Filippo Belardinelli, Istituto Superiore di Sanita, Italy; Benny Chain, University College, London; Lucienne Chatenaud, Groupe Hospitalier Necker-EnfantsMalades, Paris; Robert Schreiber, Washington University School of Medicine, St. Louis; Ralph Steinman, The Rockefeller University; Richard Williams, Imperial College, London. Captulo 16 Max Cooper, The University of Alabama, Birmingham; Jim Kaufman, Institute for Animal Health, UK; Gary Litman, University of South Florida; Ruslan Medzhitov, Yale University School of Medicine. Un especial agradecimiento a Mattew Vogt por su lectura tan cuidadosa a las primeras pruebas de todo el libro.

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Contenido

PARTE I Captulo 1 Captulo 2 PARTE II Captulo 3 Captulo 4 Captulo 5 PARTE III Captulo 6 Captulo 7 PARTE IV Captulo 8 Captulo 9

INTRODUCCIN A LA INMUNOBIOLOGA Y A LA INMUNIDAD INNATA Conceptos bsicos en inmunologa Inmunidad innata EL RECONOCIMIENTO DE ANTGENOS Reconocimiento de antgenos por receptores de clulas B y de clulas T Generacin de receptores de antgenos de los linfocitos Presentacin del antgeno a los linfocitos T DESARROLLO DE REPERTORIOS DE RECEPTORES DE LINFOCITOS MADUROS Sealizacin por medio de receptores del sistema inmunitario Desarrollo y supervivencia de los linfocitos RESPUESTA INMUNITARIA ADAPTATIVA Inmunidad mediada por clulas T Respuesta inmunitaria humoral 323 379 421 459 219 257 111 143 181 1 39

Captulo 10 Dinmica de la inmunidad adaptativa Captulo 11 Sistema inmunitario de las mucosas PARTE V EL SISTEMA INMUNITARIO EN SALUD Y ENFERMEDAD

Captulo 12 Fallas de los mecanismos de defensa del hospedador Captulo 13 Alergia e hipersensibilidad Captulo 14 Autoinmunidad y trasplante Captulo 15 Manipulacin de la respuesta inmunitaria PARTE VI ORGENES DE LAS RESPUESTAS INMUNITARIAS

497 555 599 655

Captulo 16 Evolucin del sistema inmunitario Apndice I Apndice II Caja de herramientas del inmunlogo Antgenos CD

711 735 783 799 802 804 805 806 835

Apndice III Citocinas y sus receptores Apndice IV Quimiocinas y sus receptores Apndice V Biografas Glosario ndice alfabtico Constantes inmunolgicas

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Contenido detallado
INTRODUCCIN A LA INMUNOBIOLOGA Y A LA INMUNIDAD INNATA
Conceptos bsicos en inmunologa 1
3
3 5 5

Los mecanismos efectores de la inmunidad adaptativa


1-18 1-19 Los anticuerpos afrontan formas extracelulares de agentes patgenos y sus productos txicos Las clulas T se necesitan para controlar agentes patgenos intracelulares y para activar respuestas de clulas B a casi todos los antgenos Las clulas T CD4 y CD8 reconocen pptidos unidos a dos clases de molculas del MHC Los defectos del sistema inmunitario originan aumento de la susceptibilidad a infeccin Entender las respuestas inmunitarias adaptativas es importante para el control de alergias, enfermedad autoinmunitaria y rechazo de injerto de rgano La vacunacin es el medio ms ecaz de controlar enfermedades infecciosas

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Parte I
Captulo 1
1-1 1-2

30 32 34

1-20 1-21 1-22

Principios de inmunidad innata y adaptativa


Funciones de la respuesta inmunitaria Las clulas del sistema inmunitario se derivan de precursores en la mdula sea 1-3 La lnea mieloide comprende casi todas las clulas del sistema inmunitario innato 1-4 La lnea linfoide comprende los linfocitos del sistema inmunitario adaptativo y los linfocitos citolticos (asesinos naturales) de la inmunidad innata 1-5 Los linfocitos maduran en la mdula sea o en el timo, y despus se congregan en tejidos linfoides de todo el cuerpo 1-6 Casi todos los agentes infecciosos activan el sistema inmunitario innato e inducen una respuesta inamatoria 1-7 La activacin de clulas presentadoras de antgeno especializadas es un primer paso necesario para la induccin de inmunidad adaptativa 1-8 El sistema inmunitario innato proporciona discriminacin inicial entre lo propio y lo extrao 1-9 Los linfocitos activados por antgenos dan lugar a clonas de clulas efectoras especcas para antgeno que median la inmunidad adaptativa 1-10 La seleccin clonal de linfocitos es el principio fundamental de la inmunidad adaptativa 1-11 La estructura de la molcula de anticuerpo ilustra el enigma fundamental de la inmunidad adaptativa 1-12 Cada linfocito en desarrollo genera un receptor de antgeno singular por medio del reordenamiento de sus segmentos de gen, que codican un receptor 1-13 Las inmunoglobulinas se unen a una amplia variedad de estructuras qumicas, mientras que el receptor de clula T se especializa en reconocer antgenos extraos como fragmentos peptdicos unidos a protenas del complejo mayor de histocompatibilidad 1-14 El desarrollo y la supervivencia de los linfocitos estn determinados por seales recibidas por medio de sus receptores de antgeno 1-15 Los linfocitos encuentran antgenos en los rganos linfoides perifricos y responden a los mismos 1-16 La activacin de linfocitos requiere interaccin con otras clulas y con antgenos 1-17 Los linfocitos activados por antgeno proliferan en los rganos linfoides perifricos, lo que genera clulas efectoras y memoria inmunitaria Resumen

34 36 37 37

1-23

Resumen Resumen del captulo 1

Captulo 2
10 2-1 12 13 2-2 2-3 13 2-4 14 2-5 15

Inmunidad innata

39
40
41 44 46 48 50 52

Primera lnea de defensa del hospedador


Las enfermedades infecciosas son causadas por diversos agentes vivos que se replican en sus hospedadores Los agentes infecciosos deben vencer defensas innatas del hospedador para establecer un foco de infeccin Las supercies epiteliales del cuerpo constituyen las primeras lneas de defensa contra la infeccin Despus de penetrar en los tejidos, muchos patgenos son reconocidos, ingeridos y destruidos por fagocitos El reconocimiento de patgenos y el dao de tejido inician una respuesta inamatoria

Resumen 16

Reconocimiento de patrones en el sistema inmunitario innato


2-6 Receptores con especicidad para molculas de patgeno reconocen modelos de motivos estructurales repetitivos Los receptores tipo Toll son receptores de sealizacin que distinguen entre tipos de patgenos y ayudan a dirigir una respuesta inmunitaria apropiada Los efectos del lipopolisacrido bacteriano sobre macrfagos estn mediados por unin de CD14 a TLR-4 Las protenas NOD actan como detectores intracelulares de infeccin bacteriana La activacin de receptores tipo Toll y protenas NOD desencadena la produccin de citocinas y quimiocinas proinamatorias, y la expresin de molculas coestimuladoras

53
54

17 2-7 18 2-8 18 2-9 23 2-10 23 27

56 57 58

58 59

Resumen

xiii

El sistema de complemento y la inmunidad innata


2-11 El complemento es un sistema de protenas plasmticas que se activa por la presencia de patgenos El complemento interacta con patgenos a n de marcarlos para la destruccin por fagocitos La va clsica se inicia mediante activacin del complejo C1 La va de la lectina es homloga a la va clsica La activacin de complemento est connada en su mayor parte a la supercie sobre la cual se inicia La hidrlisis de C3 inicia la va alternativa del complemento Las protenas de membrana y plasmticas que regulan la formacin y estabilidad de convertasas C3 determinan la extensin de la activacin del complemento en diferentes circunstancias La convertasa C3 unida a supercie deposita grandes nmeros de fragmentos de C3b sobre las supercies de patgenos y genera actividad de convertasa C5 La fagocitosis de patgenos marcados con complemento est mediada por receptores de protenas del complemento Fragmentos pequeos de algunas protenas del complemento pueden iniciar una respuesta inamatoria local Las protenas terminales del complemento se polimerizan para formar poros en membranas que pueden destruir a ciertos patgenos Las protenas de control del complemento regulan las tres vas de la activacin del complemento y protegen al hospedador contra sus efectos destructivos

61
61 62 64 65 67 69

2-32

2-12 2-13 2-14 2-15 2-16 2-17

2-33 2-34

Los linfocitos citolticos portan receptores que activan su funcin destructora en respuesta a ligandos expresados sobre clulas infectadas o clulas tumorales El receptor NKG2D activa una va de sealizacin diferente de la de los otros receptores NK activadores Varias subpoblaciones de linfocitos se comportan como linfocitos similares a los del sistema inmunitario innato

99 100 100 102 103

Resumen Resumen del captulo 2

EL RECONOCIMIENTO Parte II DE ANTGENOS


Captulo 3 Reconocimiento de antgenos por receptores de clulas B y clulas T 111
112
113 113

69

2-18

73

2-19

Estructura de una molcula de anticuerpo tpica


3-1 Los anticuerpos IgG constan de cuatro cadenas de polipptidos Las cadenas pesadas y ligeras de inmunoglobulina se componen de regiones constante y variable La molcula de anticuerpo se puede dividir con facilidad hacia fragmentos distintos desde el punto de vista funcional La molcula de inmunoglobulina es exible, en especial en la regin bisagra Los dominios de una molcula de inmunoglobulina tienen estructura similar

73 3-2 75 3-3

2-20

2-21

114 115 116 118

75

3-4 3-5

2-22

78 81

Resumen

Resumen

Respuestas innatas inducidas a la infeccin


2-23 Los macrfagos activados secretan una gama de citocinas que tienen diversos efectos locales y a distancia Las quimiocinas liberadas por fagocitos y clulas dendrticas reclutan clulas hacia sitios de infeccin Las molculas de adhesin celular controlan interacciones entre leucocitos y clulas endoteliales durante una respuesta inamatoria Los neutrlos constituyen la primera ola de clulas que cruzan la pared del vaso sanguneo para entrar a sitios inamatorios TNF- es una citocina importante que evita la diseminacin local de infeccin pero su liberacin sistmica induce choque Las citocinas liberadas por fagocitos activan la respuesta de fase aguda Los interferones inducidos por infeccin vrica hacen varias contribuciones a la defensa del hospedador Los linfocitos citolticos se activan por interferones y citocinas derivadas de macrfagos para que funcionen como defensa temprana contra ciertas infecciones intracelulares Los linfocitos citolticos poseen receptores para molculas propias que evitan su activacin por clulas no infectadas

82
83 83

Interaccin de la molcula de anticuerpo con antgenos especcos


3-6 3-7 Regiones localizadas de secuencia hipervariable forman el sitio de unin a antgenos Los anticuerpos se unen a antgenos por medio de contactos con aminocidos en CDR, pero los detalles de la unin dependen del tamao y forma del antgeno Los anticuerpos se unen a formas conformacionales sobre la supercie de antgenos Las interacciones antgenos-anticuerpos comprenden diversas fuerzas

118
118

2-24 2-25

119 120 121 122

87

3-8 3-9

2-26

88

2-27

Resumen 90 92 3-11 94 3-12 95 3-13 96

Reconocimiento de antgenos por clulas T


3-10 Los receptores de clulas T son muy similares a los fragmentos Fab de inmunoglobulina Los receptores de clulas T reconocen antgenos en forma de un complejo de un pptido extrao unido a una molcula del MHC Hay dos clases de molculas del MHC con distinta composicin de subunidad pero con estructuras tridimensionales similares Los pptidos se unen de manera estable a molculas del MHC, y tambin ayudan a estabilizar a la molcula del MHC sobre la supercie celular

123
123

2-28 2-29 2-30

125

126

2-31

128

xiv

3-14 3-15 3-16

3-17 3-18 3-19

Las molculas del MHC de clase I se unen a pptidos cortos de 8 a 10 aminocidos por ambos extremos La longitud de los pptidos unidos por molculas del MHC de clase II no est constreida Las estructuras cristalinas de varios complejos de pptido: MHC:receptores de clulas T muestran una orientacin de los mismos receptores similar sobre el complejo de pptido:MHC Las protenas de supercie celular CD4 y CD8 de clulas T son necesarias para una respuesta ecaz a antgenos Las dos clases de molculas del MHC se expresan de manera diferente sobre clulas Un subgrupo diferente de clulas T porta un receptor alternativo formado de cadenas y

4-13 129 4-14 130 4-15 132 4-16 133 135 137 137 138 4-18

La regin constante conere especializacin funcional al anticuerpo Las clulas B indiferenciadas maduras expresan tanto IgM como IgD en su supercie Las formas transmembrana y secretada de las inmunoglobulinas se generan a partir de transcritos alternativos de la cadena pesada La IgM y la IgA pueden formar polmeros

161 163

163 164 166

Resumen

Diversicacin secundaria del repertorio de anticuerpos


4-17 La desaminasa de citidina inducida por activacin introduce mutaciones en genes transcritos en clulas B Los genes de la regin V reordenados se diversican ms por medio de hipermutacin somtica En algunas especies casi toda la diversicacin de los genes de inmunoglobulina ocurre despus del reordenamiento gnico El cambio de clase permite que el mismo exn VH ensamblado se asocie con diferentes genes CH en el transcurso de una respuesta inmunitaria

167
168 169

Resumen Resumen del captulo 3

Captulo 4

Generacin de receptores de antgenos de los linfocitos

143
144
144

4-19

Reordenamiento primario de genes codicadores de inmunoglobulinas


4-1 4-2 Los genes que codican inmunoglobulinas se reordenan en las clulas productoras de anticuerpos Los genes completos que codican una regin variable se generan mediante la recombinacin somtica de segmentos gnicos separados En cada locus de inmunoglobulina hay mltiples segmentos gnicos V contiguos El reordenamiento de los segmentos gnicos V, D y J es guiado por secuencias de DNA anqueadoras La reaccin que recombina segmentos gnicos V, D y J involucra enzimas modicadoras de DNA tanto especcas para linfocitos como ubicuas La diversidad del repertorio de inmunoglobulinas se genera por medio de cuatro procesos principales Los mltiples segmentos gnicos heredados se usan en diferentes combinaciones La adicin y la sustraccin variables de nucletidos en las uniones entre los segmentos gnicos contribuyen con la diversidad de la tercera regin hipervariable

171

4-20

171 175 175

Resumen 145 146 148 Resumen del captulo 4

4-3 4-4 4-5

Captulo 5

Presentacin del antgeno a los linfocitos T

181
182
182

150 153 153

Generacin de ligandos de receptor de clula T


5-1 Las molculas del MHC de clase I y las del MHC de clase II transportan pptidos a la supercie celular desde dos compartimientos intracelulares Los pptidos que se unen a molculas del MHC de clase I se transportan de manera activa desde el citosol hasta el retculo endoplsmico Los pptidos para transporte al interior del retculo endoplsmico se generan en el citosol El transporte retrgrado del retculo endoplsmico al citosol permite que protenas exgenas sean procesadas para la presentacin cruzada por molculas del MHC de clase I Las molculas del MHC de clase I recin sintetizadas se retienen en el retculo endoplsmico hasta que se unen a un pptido Muchos virus producen inmunoevasinas que intereren con la presentacin de antgenos por molculas del MHC de clase I Los pptidos presentados por molculas del MHC de clase II se generan en vesculas endocticas acidicadas La cadena invariable dirige molculas del MHC de clase II recin sintetizadas hacia vesculas intracelulares acidicadas Una molcula especializada parecida a MHC de clase II cataliza la carga de molculas de MHC de clase II con pptidos

4-6 4-7 4-8

5-2

183 184

154 155

5-3 5-4

Resumen

Reordenamiento de los genes de receptores de las clulas T


4-9 Los segmentos gnicos de los receptores de clula T estn ordenados en un patrn similar al de los segmentos gnicos de las inmunoglobulinas y son reordenados por las mismas enzimas La diversidad de los receptores de clula T se concentra en la tercera regin hipervariable Los receptores de clula T : tambin se generan por medio de reordenamiento gnico

155
5-5

186

187

156 157

5-6

4-10 4-11

189

5-7 158 159 5-8

Resumen

190

Variacin estructural de las regiones constantes de las inmunoglobulinas


4-12

192

160

5-9

Las diferentes clases de inmunoglobulinas se distinguen por la estructura de sus regiones constantes de la cadena pesada 160

193

xv

5-10

La unin estable de pptidos a molculas del MHC proporciona una presentacin de antgenos ecaz en la supercie celular

194 195

Sealizacin de los receptores de antgenos y activacin de los linfocitos


6-8 Las cadenas variables de los receptores de antgenos se asocian con cadenas accesorias invariables que llevan a cabo la funcin de sealizacin del receptor Los linfocitos son muy sensibles a sus antgenos especcos La unin al antgeno provoca la fosforilacin de las secuencias ITAM relacionadas con los receptores de antgenos En las clulas T, ITAM totalmente fosforilados se unen a la cinasa ZAP-70 y le permiten activarse La protena ZAP-70 activada fosforila protenas de andamiaje que median muchos de los efectos en ujo descendente de la sealizacin de los receptores de antgenos PLC- se activa por tirosincinasas Tec La activacin de la protena G pequea Ras activa una cascada de cinasa de MAP, lo cual provoca la produccin del factor de transcripcin AP-1 El factor de transcripcin NFAT es activado de manera indirecta por Ca2+ El factor de transcripcin NFB se activa por las acciones de la proteincinasa C La lgica de la sealizacin de los receptores de clulas B es similar a la de la sealizacin de los receptores de clulas T, pero algunos de los componentes de la sealizacin son especcos de las clulas B Los ITAM tambin se encuentran en otros receptores ubicados sobre los leucocitos, que emiten seales para la activacin celular La protena de supercie celular CD28 es un receptor coestimulador para clulas T indiferenciadas Los receptores inhibidores localizados sobre los linfocitos ayudan a regular las respuestas inmunitarias

227
228 229

Resumen

El complejo principal de histocompatibilidad y sus funciones


5-11 Muchas protenas involucradas en el procesamiento y en la presentacin de antgenos son codicadas por genes dentro del complejo principal de histocompatibilidad Los productos protenicos de los genes del MHC de clase I y del MHC de clase II son muy polimrcos El polimorsmo del MHC afecta el reconocimiento de antgenos por las clulas T al inuir sobre la unin a pptidos y sobre los contactos entre el receptor de clula T y la molcula del MHC Las clulas T alorreactivas que reconocen molculas del MHC no propias son muy abundantes Numerosas clulas T responden a superantgenos El polimorsmo del MHC extiende el rango de antgenos a los cuales puede responder el sistema inmunitario Diversos genes con funciones especializadas en inmunidad tambin estn codicados en el MHC Molculas especializadas del MHC de clase I actan como ligandos para la activacin y la inhibicin de linfocitos citolticos naturales La familia CD1 de molculas similares a MHC de clase I se codica fuera del MHC y presenta lpidos microbianos a clulas T restringidas a CD1

196

6-9 6-10

231 233

6-11 197 6-12 199

5-12 5-13

201 204 206 207 208

6-13 6-14

233 234

5-14 5-15 5-16 5-17 5-18

235 236 237

6-15 6-16 6-17

209 6-18 211 212 213 6-19 6-20

239

5-19

240 240 242 244

Resumen Resumen del captulo 5

Resumen

DESARROLLO DE REPERTORIOS Parte III DE RECEPTORES DE LINFOCITOS MADUROS


Captulo 6 Sealizacin por medio de receptores del sistema inmunitario 219
220
220 221 222

Otros receptores y vas de sealizacin


6-21 6-22 6-23 Las citocinas por lo general activan vas de sealizacin rpidas que terminan en el ncleo Los receptores de citocina forman dmeros y trmeros en la unin a ligandos Los receptores de citocina estn asociados a la familia JAK de tirosincinasas que activan factores de transcripcin STAT La sealizacin de citocina termina por medio de un mecanismo de retroalimentacin negativa Los receptores que inducen apoptosis activan proteasas intracelulares especializadas llamadas caspasas La va intrnseca de la apoptosis est mediada por la liberacin de citocromo c desde las mitocondrias Los microbios y sus productos actan mediante receptores de tipo Toll para activar el NFB Pptidos bacterianos, mediadores de respuestas inamatorias, y quimiocinas emiten seales por medio de miembros de la familia de receptores acoplados a protenas G

244
245 245

Principios generales de la transduccin de seales


6-1 6-2 6-3 6-4 6-5 6-6 Los receptores transmembrana convierten seales extracelulares en eventos bioqumicos intracelulares La transduccin de seal intracelular a menudo ocurre en grandes complejos multiprotenicos de sealizacin La activacin de algunos receptores genera molculas pequeas que actan como segundos mensajeros Las protenas G pequeas actan como interruptores moleculares en muchas vas de sealizacin Las protenas de sealizacin se jan en la membrana por medio de diversos mecanismos Las protenas de transduccin de seales estn organizadas en la membrana plasmtica en estructuras llamadas balsas lipdicas La degradacin protenica tiene una funcin importante en la terminacin de las respuestas de sealizacin

245 246

6-24 6-25

247 249 249

6-26 224 6-27 224 6-28 225 226 227

6-7

251 253 253

Resumen Resumen del captulo 6

Resumen

xvi

Captulo 7

Desarrollo y supervivencia de los linfocitos

7-19

257
259
259 262

Desarrollo de linfocitos B
7-1 7-2 7-3 Los linfocitos se derivan de clulas primordiales hematopoyticas en la mdula sea El desarrollo de clulas B empieza por reordenamiento del locus de cadena pesada El receptor de clula pre-B pone a prueba la produccin de una cadena pesada completa, y emite seales para la proliferacin de clulas pro-B La sealizacin de receptores de clulas pre-B inhibe el reordenamiento adicional del locus de cadena pesada e impone exclusin allica Las clulas pre-B reordenan el locus de cadena ligera y expresan inmunoglobulina de supercie celular Las clulas B inmaduras se prueban respecto a reactividad a antgenos propios antes de que salgan de la mdula sea

7-20 7-21

7-22

Las clulas epiteliales de la corteza del timo median la seleccin positiva de los timocitos en desarrollo Las clulas T que reaccionan fuertemente con antgenos ubicuos se eliminan en el timo La seleccin negativa se conduce con ms eciencia por clulas presentadoras de antgeno derivadas de la mdula sea La especicidad, la fuerza, o ambas deben diferir de seales para seleccin negativa y positiva

293 294

296 297 298

264

Resumen

7-4

Supervivencia y maduracin de linfocitos en tejidos linfoides perifricos


266 266 7-23 7-24 Diferentes subgrupos de linfocito se encuentran en ubicaciones particulares en tejidos linfoides perifricos El desarrollo y la organizacin de tejidos linfoides perifricos estn controlados por protenas de la familia del factor de necrosis tumoral Las seales de direccin de linfocitos hacia regiones especcas de tejidos linfoides perifricos estn mediadas por quimiocinas Los linfocitos que encuentran cantidades sucientes de antgenos propios por vez primera en la periferia se eliminan o se desactivan La mayor parte de las clulas B inmaduras que llegan al bazo tienen vida breve y necesitan citocinas y seales positivas por medio de los receptores de clulas T para su maduracin y supervivencia Las clulas B-1 y las clulas B de la zona marginal son subtipos de clulas B distintos con especicidad de receptor de antgeno nico La homeostasis de clula T en la periferia se regula por citocinas e interacciones con MHC propio

299
299

7-5 7-6

268 273

300

7-25

Resumen

302

Desarrollo de clulas T en el timo


7-7 Los progenitores de clulas T se originan en la mdula sea, pero todos los eventos importantes en su desarrollo ocurren en el timo Los precursores de clula T proliferan de manera extensa en el timo, pero casi todos mueren ah Las etapas sucesivas del desarrollo de linfocitos se caracterizan por cambios en molculas de supercie celular Timocitos en diferentes etapas de desarrollo se encuentran en diferentes partes del timo Las clulas T con receptores : o : surgen a partir de un progenitor comn Las clulas T que expresan regiones V de cadena y particulares surgen en una secuencia ordenada en etapas tempranas de la vida La sntesis exitosa de una cadena reordenada permite la produccin de un receptor de clula pre-T que desencadena proliferacin celular y bloquea ms el reordenamiento de gen que codica la cadena Los genes que codican para cadena de clulas T pasan por reordenamientos sucesivos hasta que sobreviene seleccin positiva o muerte celular

273
274 275

7-26

303

7-27

7-8 7-9

304

7-28 277 279 280 7-29

7-10 7-11 7-12

306 307 307

Resumen

Tumores linfoides
282 7-30 7-31 283 7-32 Los tumores de clulas B a menudo ocupan el mismo sitio que sus homlogas normales Los tumores de clulas T corresponden a un nmero pequeo de etapas del desarrollo de dichas clulas Los linfomas de clulas B a menudo portan translocaciones cromosmicas que unen loci de inmunoglobulina a genes que regulan el crecimiento celular

308
308 311

7-13

7-14

286 288

312 313 313 316

Resumen

Resumen Resumen del captulo 7 Preguntas

Seleccin positiva y seleccin negativa de clulas T


7-15 El tipo de MHC del estroma tmico selecciona un repertorio de clulas T maduras capaces de reconocer antgenos extraos presentados por el mismo tipo de MHC Slo timocitos cuyos receptores interactan con complejos pptido propio:MHC propio pueden sobrevivir y madurar La seleccin positiva acta sobre un repertorio de receptores de clulas T con especicidad inherente para molculas del MHC La seleccin positiva coordina la expresin de CD4 o de CD8 con la especicidad de los receptores de clulas T y las funciones efectoras potenciales de las clulas T

288
289 290

RESPUESTA INMUNITARIA Parte IV ADAPTATIVA


Captulo 8 Inmunidad mediada por clulas T 323
Ingreso de clulas T indiferenciadas y clulas presentadoras de antgeno en rganos linfticos perifricos
8-1 Las clulas T indiferenciadas migran por los tejidos linfticos perifricos, muestreando los complejos pptido:MHC en la supercie de las clulas dendrticas

7-16 7-17

291

7-18

325
325

292

xvii

8-2 8-3

8-4 8-5 8-6 8-7

8-8

8-9

8-10

La entrada de los linfocitos en los tejidos linfticos depende de quimiocinas y molculas de adhesin La activacin de integrinas por quimiocinas es la causante de la penetracin de clulas T indiferenciadas en los ganglios linfticos Las respuestas de clulas T se inician en rganos linfticos perifricos por clulas dendrticas activadas Existen dos clases funcionales diferentes de clulas dendrticas Las clulas dendrticas procesan antgenos de una amplia gama de patgenos La sealizacin por TLR inducida por patgenos en clulas dendrticas inmaduras activa su migracin a rganos linfticos y fomenta el procesamiento antignico Las clulas dendrticas plasmocitoides detectan infecciones vricas y generan abundantes interferones tipo I y citocinas proinamatorias Los macrfagos son fagocitos que pueden ser inducidos por patgenos para presentar antgenos extraos a clulas T indiferenciadas Las clulas B son muy ecientes para presentar antgenos que se unen a su inmunoglobulina de supercie

8-22 326 8-23 327 331 332 8-26 334 8-24 8-25

La unin con los receptores de clulas T dirige la liberacin de molculas efectoras y las concentra en la clula blanco Las funciones efectoras de las clulas T son determinadas por el conjunto de molculas efectoras que producen Las citocinas pueden actuar en forma local o a distancia Las citocinas y sus receptores se clasican en familias bien denidas de protenas estructuralmente relacionadas La familia de citocinas TNF consta de protenas trimricas que suelen unirse a la supercie celular

357 358 359

361 362 363

Resumen 336

Citotoxicidad mediada por clulas T


8-27 8-28 Las clulas T citotxicas pueden inducir a las clulas blanco a sufrir la muerte celular programada Las protenas efectoras citotxicas que desencadenan la apoptosis estn contenidas en los grnulos de las clulas T CD8 citotxicas Las clulas T citotxicas destruyen en forma selectiva blancos que expresan un antgeno especco Las clulas T citotxicas tambin actan liberando citocinas

364
364

338

365 367 368 368

339 340 342

8-29 8-30

Resumen

Resumen

Iniciacin de clulas T indiferenciadas por clulas dendrticas activadas por patgenos


8-11 Molculas de adhesin celular median la interaccin inicial de clulas T indiferenciadas con clulas presentadoras de antgenos Las clulas presentadoras de antgenos llevan tres tipos de seales para la expansin clonal y la diferenciacin de clulas T indiferenciadas La coestimulacin de clulas T activadas dependiente de CD28 induce la expresin del factor de crecimiento de clulas T llamado interleucina 2 y el receptor de IL-2 de alta anidad La seal 2 puede modicarse por vas coestimuladoras adicionales El reconocimiento de antgeno en ausencia de coestimulacin causa la desactivacin funcional o la delecin clonal de clulas T perifricas Las clulas T en proliferacin se diferencian en clulas T efectoras que no requieren coestimulacin para actuar Las clulas T se diferencian en varios subgrupos de clulas efectoras funcionalmente distintas Las clulas T CD8 pueden ser activadas de distintas maneras para convertirse en clulas efectoras citotxicas Diversas formas de seal 3 inducen la diferenciacin de clulas T CD4 indiferenciadas por distintas vas efectoras Las clulas T CD4 reguladoras intervienen en el control de respuestas inmunitarias adaptativas

Activacin de macrfagos por clulas TH1 343


343 8-33 344 8-31 8-32 Las clulas TH1 tienen una funcin central en la activacin de los macrfagos La activacin de macrfagos por clulas TH1 promueve la destruccin microbiana y debe ser regulada estrechamente para evitar lesiones hsticas Las clulas TH1 coordinan la respuesta del hospedador a patgenos intracelulares

368
369

8-12

370 371 372 372

8-13

Resumen Resumen del captulo 8 345 346

8-14 8-15

Captulo 9
9-1

Respuesta inmunitaria humoral

379
380

Activacin de clulas B y produccin de anticuerpos


La respuesta inmunitaria humoral inicia cuando clulas B que se unen a antgenos reciben seales emitidas por clulas T auxiliares o por ciertos antgenos microbianos solos Las respuestas de las clulas B a los antgenos aumentan por la coligadura del correceptor de clula B Las clulas T auxiliares activan a clulas B que reconocen el mismo antgeno Pptidos antignicos unidos a molculas del MHC de clase II propias sobre clulas B activan a las clulas T para que sinteticen molculas unidas a membrana y secretadas que pueden activar a una clula B Las clulas B que se han unido a un antgeno mediante su receptor de clula B son atrapadas en las zonas de clulas T de tejidos linfoides secundarios Las clulas plasmticas secretoras de anticuerpos se diferencian a partir de clulas B activadas La segunda fase de una respuesta inmunitaria de clulas B primaria ocurre cuando las clulas B activadas migran hacia folculos y proliferan para formar centros germinales

347 349 349 352 9-2 9-3 9-4

8-16 8-17 8-18 8-19

381 382 383

352 354 356 9-6 9-5

384

8-20

Resumen

386 387

Propiedades generales de las clulas T efectoras y sus citocinas


8-21 Las interacciones de clulas T efectoras con clulas blanco son iniciadas por molculas de adhesin celular no especcas de antgenos

356
357

9-7

388

xviii

9-8

9-9

9-10

9-11 9-12

9-13

Las clulas B del centro germinal experimentan hipermutacin somtica de la regin V y se seleccionan las clulas con mutaciones que mejoran la anidad por el antgeno El cambio de clase en respuestas de anticuerpos dependientes del timo requiere la expresin de ligando CD40 por la clula T auxiliar y es dirigido por citocinas La ligadura del receptor de clula B y CD40, junto con contacto directo con clulas T, se requieren para sostener clulas B de centro germinal Las clulas B de centro germinal se diferencian en clulas plasmticas o en clulas de memoria Las respuestas de las clulas B a antgenos bacterianos que tienen la capacidad intrnseca de activar clulas B no requieren la ayuda de las clulas T Las respuestas de las clulas B a polisacridos bacterianos no requieren la colaboracin de clulas T especcas de pptido

10-2 390 10-3 392 10-4 394 10-5 395 10-6 396 397 399 10-8 10-9 10-7

Resumen

Distribucin y funciones de las clases de inmunoglobulinas


9-14 9-15 Anticuerpos de diferentes clases operan en distintos lugares y tienen distintas funciones efectoras Las protenas de transporte que se unen a las regiones Fc de los anticuerpos transportan isotipos particulares a travs de barreras epiteliales Anticuerpos IgG e IgA de alta anidad pueden neutralizar toxinas bacterianas Los anticuerpos IgG e IgA de alta anidad pueden inhibir la capacidad infecciosa de los virus Los anticuerpos pueden bloquear la adherencia de las bacterias a las clulas hospedadoras Los complejos anticuerpo:antgeno activan la va clsica del complemento al unirse a C1q Los receptores del complemento tienen importancia en la eliminacin de complejos inmunitarios de la circulacin

400
400

10-10 10-11 10-12

402 404 405 406 406 408 409

9-16 9-17 9-18 9-19 9-20

Las respuestas inespeccas de la inmunidad innata son necesarias para que se inicie una respuesta inmunitaria adaptativa Las citocinas producidas durante la fase ms temprana de una infeccin inuyen sobre la diferenciacin de clulas T CD4 hacia el subgrupo TH17 Las citocinas producidas durante las etapas tardas de una infeccin inuyen sobre la diferenciacin de clulas T CD4 hacia clulas TH1 o TH2 Los distintos subgrupos de clulas T CD4 pueden regular la diferenciacin uno del otro Las clulas T efectoras son guiadas hacia sitios de infeccin por quimiocinas y molculas de adhesin recin expresadas Las clulas T efectoras diferenciadas no son una poblacin esttica sino que siguen respondiendo a seales a medida que desempean sus funciones efectoras Las respuestas primarias de clulas T CD8 a patgenos pueden ocurrir en ausencia de auxilio de CD4 En tejidos linfoides aparecen respuestas de anticuerpo bajo la direccin de clulas T auxiliares CD4 Las respuestas de anticuerpo se sostienen en los cordones medulares y la mdula sea Los mecanismos efectores usados para eliminar una infeccin dependen del agente infeccioso La resolucin de una infeccin se acompaa de la muerte de casi todas las clulas efectoras, y la generacin de clulas de memoria

425

426

427 430 432

434 435 437 438 439

441 441

Resumen

Memoria inmunitaria
10-13 10-14 10-15 La memoria inmunitaria es prolongada luego de una infeccin o vacunacin Las respuestas de clulas B de memoria dieren en muchos aspectos de las de clulas B indiferenciadas La inmunizacin repetida permite incrementar la anidad del anticuerpo por la hipermutacin somtica y la seleccin por el antgeno en centros germinales Las clulas T de memoria estn aumentadas de frecuencia en comparacin con las clulas T indiferenciadas especcas para el mismo antgeno, y tienen necesidades de activacin y protenas de supercie celular distintas que las distinguen de las clulas T efectoras Las clulas T de memoria son heterogneas e incluyen subgrupos de memoria central y efector El auxilio de clulas T CD4 se requiere para la memoria de las clulas T CD8, y comprende emisin de seales de CD40 e IL-2 En individuos inmunes, las respuestas secundaria y subsiguientes son atribuibles sobre todo a linfocitos de memoria

442
442 444

Resumen

445

Destruccin de agentes patgenos cubiertos de anticuerpos por medio de receptores Fc


9-21 9-22 Los receptores Fc de clulas accesorias son receptores de sealizacin especcos para Ig de diferentes clases Los receptores Fc son activados por anticuerpos unidos a la supercie de agentes patgenos y les permiten a los fagocitos que los portan ingerir agentes patgenos y destruirlos Los receptores Fc activan linfocitos NK para destruir dianas cubiertas con anticuerpos Las clulas cebadas, los baslos y los eosinlos activados se unen a anticuerpos IgE por medio del receptor Fc de alta anidad La activacin de clulas accesorias mediada por IgE es importante en la resistencia a infecciones por parsitos

10-16

409
410 10-17 411 412 10-19 413 414 415 416 10-18

446 449

9-23 9-24

450

452 453 454

9-25

Resumen Resumen del captulo 10

Resumen Resumen del captulo 9

Captulo 11 Sistema inmunitario de las mucosas


Organizacin del sistema inmunitario de las mucosas
11-1 11-2 El sistema inmunitario de las mucosas protege las supercies internas del cuerpo El sistema inmunitario de las mucosas quiz sea el sistema inmunitario original de vertebrados

459
459
459 461

Captulo 10 Dinmica de la inmunidad adaptativa 421


La evolucin de la respuesta inmunitaria a la infeccin
10-1 La evolucin de una infeccin puede dividirse en varias fases

422
422

xix

11-3 11-4 11-5

11-6

11-7

11-8 11-9 11-10

El tejido linfoide relacionado con la mucosa se localiza en compartimientos denidos en el intestino El intestino tiene rutas y mecanismos distintivos de captacin de antgenos El sistema inmunitario de las mucosas contiene grandes cantidades de linfocitos efectores, incluso en ausencia de enfermedad La circulacin de linfocitos dentro del sistema inmunitario de mucosas est controlada por molculas de adhesin especcas para tejido y receptores de quimiocina La preparacin de linfocitos en un tejido mucoso puede inducir inmunidad protectora en otras supercies mucosas La IgA secretoria es la clase de anticuerpo relacionada con el sistema inmunitario de las mucosas La deciencia de IgA es frecuente en seres humanos, pero puede superarse por medio de IgM secretoria El sistema inmunitario de mucosas contiene linfocitos T poco comunes

12-2 462 12-3 464 12-4 466 12-5 467 12-6 469 469

Algunos virus persisten in vivo al dejar de replicarse hasta que la respuesta inmunitaria disminuye Algunos patgenos resisten a la destruccin por mecanismos de defensa del hospedador, o los aprovechan para sus propios nes La inmunodepresin o las respuestas inmunitarias inapropiadas pueden contribuir a enfermedad persistente Las respuestas inmunitarias pueden contribuir de modo directo a la patogenia Las clulas T reguladoras pueden afectar el resultado de una enfermedad infecciosa

501

502

504 506 506 507

Resumen

Enfermedades por inmunodeciencia


472 472 475 12-9 12-7 12-8 El antecedente de infecciones repetidas sugiere diagnstico de inmunodeciencia Las enfermedades por inmunodeciencia hereditaria se producen por defectos genticos recesivos Las concentraciones bajas de anticuerpos causan incapacidad para eliminar bacterias extracelulares Algunas deciencias de anticuerpos pueden ser causadas por defectos de la funcin de clulas B o T Los defectos de componentes del complemento causan funcin inmunitaria humoral defectuosa Los defectos en clulas fagocticas permiten infecciones bacterianas diseminadas Los defectos de la diferenciacin de clulas T pueden dar por resultado inmunodeciencias combinadas graves Los defectos del reordenamiento de gen que codican los receptores de antgenos originan SCID Los defectos de sealizacin desde receptores de antgenos de clulas T pueden causar inmunodeciencia grave Los defectos genticos de la funcin del timo que bloquean el desarrollo de clulas T causan inmunodeciencias graves Las vas normales de la defensa del hospedador contra bacterias intracelulares se establecen con exactitud por deciencias genticas de IFN- e IL-12, y sus receptores El sndrome linfoproliferativo ligado al cromosoma X se relaciona con infeccin letal por virus de Epstein-Barr y con la aparicin de linfomas Las anomalas genticas en la va citotxica secretora de linfocitos causan linfoproliferacin y respuestas inamatorias descontroladas a infecciones vricas El trasplante de mdula sea o la terapia gnica pueden ser tiles para corregir defectos genticos Las inmunodeciencias secundarias son causas predisponentes importantes de infeccin y muerte

507
507 508 509 512 514 515 517 519

Resumen

Respuesta de las mucosas a la infeccin y regulacin de las respuestas inmunitarias de las mucosas
11-11 11-12 Los agentes patgenos entricos causan una respuesta inamatoria local, y la aparicin de inmunidad protectora El resultado de la infeccin por agentes patgenos intestinales es determinado por una compleja interrelacin entre el microorganismo y la respuesta inmunitaria del hospedador El sistema inmunitario de las mucosas debe mantener un equilibrio entre inmunidad protectora y homeostasis para un gran nmero de antgenos extraos diferentes El intestino sano contiene grandes cantidades de bacterias, pero no genera inmunidad productiva contra ellas Las respuestas inmunitarias planas a bacterias comensales desencadenan enfermedad intestinal Los helmintos intestinales desencadenan fuertes respuestas inmunitarias mediadas por TH2 Otros parsitos eucariticos desencadenan inmunidad protectora y enfermedad en el intestino Las clulas dendrticas en supercies mucosas favorecen la induccin de tolerancia en condiciones siolgicas, y mantienen la presencia de inamacin siolgica

476
476

12-10 12-11 12-12

478

12-13 12-14

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12-15

11-14 11-15 11-16 11-17 11-18

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12-16 485 485 488 12-18 12-17

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488 489 490

12-19

Resumen Resumen del captulo 11

523 525 526 527

12-20 12-21

EL SISTEMA INMUNITARIO Parte V EN SALUD Y ENFERMEDAD


Captulo 12 Fallas de los mecanismos de defensa del hospedador
Evasin y alteracin de defensas inmunitarias
12-1 La variacin antignica permite a los patgenos escapar del sistema inmunitario

Resumen

Sndrome de inmunodeciencia adquirida (sida)


12-22

527
528 530 532

497
498
498 12-23 12-24

La mayora de los individuos infectados por VIH progresa con el tiempo a sida El VIH es un retrovirus que infecta clulas T CD4, clulas dendrticas y macrfagos La variacin gentica en el hospedador puede alterar la tasa de progresin de la enfermedad

xx

12-25 12-26

12-27 12-28 12-29 12-30

12-31

12-32

12-33 12-34

Una deciencia gentica del correceptor CCR5 conere resistencia a la infeccin por VIH in vivo El RNA del VIH se transcribe por la transcriptasa inversa vrica hacia el DNA que se integra en el genoma de la clula hospedadora La replicacin del VIH slo ocurre en clulas T activadas El tejido linfoide es el principal reservorio de infeccin por VIH La respuesta inmunitaria controla el VIH pero no lo elimina La destruccin de la funcin inmunitaria como resultado de infeccin por VIH lleva a incremento de la susceptibilidad a infeccin oportunista y nalmente a la muerte Los frmacos que bloquean la replicacin de VIH producen un rpido decremento de los ttulos de virus infecciosos, y un incremento de las clulas T CD4 El VIH acumula muchas mutaciones en el transcurso de la infeccin y la farmacoterapia pronto va seguida por aparicin de variantes resistentes a frmacos La vacunacin contra VIH es una solucin atractiva, pero plantea muchas dicultades La prevencin y educacin son un mtodo para controlar la diseminacin del VIH y el sida

13-13 532 13-14 534 536 537 538 13-15 13-16

La alergia cutnea se maniesta como urticaria o como eccema crnico La alergia a los alimentos produce reacciones generales y sntomas circunscritos al intestino La enfermedad celiaca es un modelo de inmunopatologa especca de antgeno La alergia puede tratarse inhibiendo la produccin de IgE o las vas efectoras activadas por el enlace cruzado de IgE de la supercie celular

576 577 578

580 583

Resumen

540

Enfermedades por hipersensibilidad


13-17 Antgenos inocuos pueden producir reacciones de hipersensibilidad de tipo II en individuos susceptibles al unirse a las supercies de las clulas sanguneas en la circulacin Las enfermedades generales causadas por la formacin de complejos inmunitarios pueden presentarse tras la administracin de grandes cantidades de antgenos mal catabolizados Las reacciones de hipersensibilidad de tipo tardo son mediadas por las clulas TH1 y por clulas T CD8 citotxicas La mutacin en las molculas reguladoras de la inamacin puede ocasionar respuestas inamatorias de hipersensibilidad que producen enfermedades autoinamatorias La enfermedad de Crohn es una enfermedad inamatoria relativamente comn con una etiologa compleja

583

540 13-18 542 543 545 545 546 13-21 13-19 13-20

583

583 585

Resumen Resumen del captulo 12

588 590 591 591

Captulo 13 Alergia e hipersensibilidad


Sensibilizacin y produccin de IgE
13-1 13-2 13-3 13-4 13-5 Los alergenos suelen entrar a travs de las mucosas en dosis bajas, una va que favorece la produccin de IgE Las enzimas con frecuencia desencadenan alergia El cambio de clase a IgE en los linfocitos B es favorecido por las seales especcas Factores genticos y ambientales contribuyen al desarrollo de la alergia mediada por IgE Las clulas T reguladoras pueden controlar las respuestas alrgicas

555
557
557 558 559 560 565 565

Resumen Resumen del captulo 13

Captulo 14 Autoinmunidad y trasplante


Generacin e interrupcin de la autotolerancia
14-1 14-2 14-3 Una funcin decisiva del sistema inmunitario es distinguir lo propio de lo ajeno Mltiples mecanismos de tolerancia normalmente previenen la autoinmunidad La delecin central o la inactivacin de los linfocitos recin formados es el primer punto de vericacin de la autotolerancia Los linfocitos que jan autoantgenos con anidad relativamente baja por lo general los ignoran pero en algunas circunstancias se vuelven activos Los antgenos en los sitios con privilegio inmunitario no inducen un ataque inmunitario pero pueden servir como blancos Las clulas T autorreactivas que expresan citocinas especcas pueden ser no patgenas o suprimir linfocitos patgenos Las clulas T reguladoras pueden controlar las respuestas autoinmunitarias en diversas etapas

599
600
600 602

Resumen

603

Mecanismos efectores en las reacciones alrgicas


13-6 La mayor parte de la IgE est unida a las clulas e involucra mecanismos efectores del sistema inmunitario por diferentes vas de otros isotipos de anticuerpo Las clulas cebadas residen en tejidos y coordinan reacciones alrgicas Los eosinlos en condiciones normales estn sujetos a un control estricto para prevenir las respuestas txicas inadecuadas Los eosinlos y los baslos producen inamacin y lesin de los tejidos en las reacciones alrgicas Las reacciones alrgicas pueden dividirse en respuestas de fase inmediata y de fase tarda Los efectos clnicos de las reacciones alrgicas varan segn el sitio de activacin de las clulas cebadas La inhalacin de alergenos se acompaa de la aparicin de rinitis y asma

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567 567

14-4

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14-5

13-7 13-8

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571 571 572 574

Resumen

13-10 13-11 13-12

Enfermedades autoinmunitarias y mecanismos patgenos


14-8 Las respuestas inmunitarias adaptativas especcas para autoantgenos pueden ocasionar enfermedades autoinmunitarias

610
610

xxi

14-9

14-10 14-11

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14-13 14-14

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14-16

14-17

Las enfermedades autoinmunitarias pueden clasicarse en agrupamientos que tpicamente son especcos de rganos o generales Mltiples aspectos del sistema inmunitario tpicamente son reclutados en las enfermedades autoinmunitarias Las enfermedades autoinmunitarias crnicas se presentan a travs de la retroalimentacin positiva derivada de la inamacin, la incapacidad para despejar el autoantgeno y de una ampliacin de la respuesta inmunitaria Tanto el anticuerpo como las clulas T efectoras pueden ocasionar lesiones en los tejidos en pacientes con enfermedades autoinmunitarias Los autoanticuerpos dirigidos contra los eritrocitos favorecen su destruccin La jacin de dosis sublticas de complemento a las clulas de los tejidos estimula una respuesta inamatoria potente Los autoanticuerpos contra los receptores producen enfermedad al estimular o bloquear la funcin del receptor Los autoanticuerpos contra los antgenos extracelulares producen lesin inamatoria por mecanismos anes a las reacciones de hipersensibilidad de tipo II y de tipo III Las clulas T especcas para los autoantgenos suelen ocasionar lesin directa en los tejidos y mantener las respuestas de autoanticuerpo

14-30 611 14-31 612 14-32 615 14-33 14-34 617 617 14-35 14-36 14-37

619

En los injertos con MHC idnticos, el rechazo es causado por pptidos de otros aloantgenos unidos a las molculas del MHC del injerto Hay dos formas de presentar aloantgenos del trasplante a las clulas T del receptor Los anticuerpos que reaccionan con el endotelio pueden producir rechazo hiperagudo del injerto El rechazo crnico de rganos es causado por la lesin vascular inamatoria del injerto Diversos rganos son trasplantados en forma sistemtica en medicina clnica Lo opuesto al rechazo del injerto es la enfermedad de injerto contra hospedador Las clulas T reguladoras intervienen en las respuestas inmunitarias alorreactivas El feto es un aloinjerto que es tolerado de forma repetida

640 641 642 643 644 645 646 647 648 648

Resumen 620 Resumen del captulo 14

621

Captulo 15 Manipulacin de la respuesta inmunitaria


Regulacin extrnseca de las respuestas inmunitarias adversas
15-1 Los corticosteroides son antiinamatorios potentes que alteran la transcripcin de muchos genes Los frmacos citotxicos producen inmunosupresin al destruir las clulas en fase de divisin y conllevan efectos secundarios importantes La ciclosporina A, el tacrolims (FK506) y la rapamicina (sirolims) son agentes inmunosupresores potentes que intereren en la sealizacin de las clulas T Los frmacos inmunosupresores son sondas tiles para identicar vas de sealizacin intracelular en los linfocitos Se han utilizado anticuerpos contra molculas de supercie celular para eliminar subgrupos de linfocitos especcos o inhibir la funcin celular Los anticuerpos pueden modicarse mediante tcnicas de ingeniera para reducir su inmunogenicidad en el ser humano Se pueden utilizar anticuerpos monoclonales para prevenir el rechazo de aloinjertos Se pueden utilizar agentes biolgicos para aliviar y suprimir las enfermedades autoinmunitarias El agotamiento o la inhibicin de los linfocitos autorreactivos puede tratar las enfermedades autoinmunitarias La interferencia en las vas coestimuladoras para la activacin de los linfocitos podra ser un tratamiento de las enfermedades autoinmunitarias La induccin de las clulas T reguladoras mediante el tratamiento con anticuerpos puede inhibir las enfermedades autoinmunitarias Diversos frmacos de uso comn tienen propiedades inmunomoduladoras Se puede utilizar la administracin controlada de antgenos para modicar las caractersticas de una respuesta especca de antgeno

655
655
656

622 625

Resumen

Fundamento gentico y ambiental de la autoinmunidad


14-18 14-19 14-20 14-21 Las enfermedades autoinmunitarias tienen un importante componente gentico Un defecto en un solo gen puede ocasionar enfermedad autoinmunitaria Diversos mtodos han permitido esclarecer la base gentica de la autoinmunidad Los genes que predisponen a la autoinmunidad corresponden a categoras que afectan uno o ms de los mecanismos de tolerancia Los genes del MHC tienen una funcin importante en el control de la susceptibilidad a las enfermedades autoinmunitarias Sucesos externos que inician la autoinmunidad Las infecciones pueden desencadenar enfermedades autoinmunitarias al proporcionar un medio que favorece la activacin de los linfocitos La reactividad cruzada entre las molculas extraas en los microorganismos patgenos y las molculas propias pueden desencadenar respuestas contra lo propio y enfermedades autoinmunitarias Los frmacos y las toxinas pueden ocasionar sndromes autoinmunitarios Pueden necesitarse eventos fortuitos para el inicio de la autoinmunidad

626
626 627 628

15-2

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15-11

Resumen

668 670

15-12

Respuestas a los aloantgenos y rechazo de trasplantes 637


14-28 14-29 El rechazo de injerto es una respuesta inmunitaria mediada principalmente por las clulas T La compatibilidad del MHC entre el donador y el receptor mejora el desenlace del trasplante 15-13 638 639

671 672

Resumen

xxii

Utilizacin de la respuesta inmunitaria para atacar tumores


15-14 El desarrollo de tumores trasplantables en los ratones condujo al descubrimiento de las respuestas inmunitarias protectoras contra los tumores Los tumores pueden evadir el rechazo de mltiples maneras Las clulas T pueden reconocer antgenos especcos en tumores humanos y se est probando la transferencia adoptiva de clulas T en pacientes con cncer Anticuerpos monoclonales contra antgenos tumorales, solos o vinculados con toxinas, pueden controlar el crecimiento tumoral La intensicacin de la respuesta inmunitaria a los tumores mediante la vacunacin promete buenos resultados en la prevencin y en el tratamiento del cncer

672
673 674

ORGENES DE LAS RESPUESTAS Parte VI INMUNITARIAS


Captulo 16 Evolucin del sistema inmunitario
Evolucin del sistema inmunitario innato
16-1 La evolucin del sistema inmunitario puede estudiarse al comparar los genes expresados por diferentes especies Es probable que los pptidos antimicrobianos sean las defensas inmunitarias ms antiguas Los receptores de tipo Toll pueden representar el sistema ms antiguo de reconocimiento de agentes patgenos Los genes del receptor de tipo Toll han experimentado diversicacin extensa en algunas especies de invertebrados Un segundo sistema de reconocimiento en Drosophila homlogo a la va del receptor de TNF de los mamferos proporciona proteccin contra bacterias gramnegativas Un sistema de complemento ancestral opsoniza agentes patgenos para su captacin por clulas fagocticas La va de la lectina de activacin del complemento evolucion en los invertebrados

15-15 15-16

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714 716

Resumen

Manipulacin de la respuesta inmunitaria para atacar infecciones


15-19 15-20 Existen varios requisitos para una vacuna ecaz La historia de la vacunacin contra Bordetella pertussis ilustra la importancia de desarrollar una vacuna ecaz que se perciba como segura Se han desarrollado vacunas conjugadas como resultado de la comprensin de la forma en que las clulas T y las B ayudan en una respuesta inmunitaria El uso de adyuvantes es otro mtodo importante para intensicar la inmunogenicidad de las vacunas Las vacunas de virus vivos atenuados suelen ser ms potentes que las vacunas de virus muertos y pueden volverse ms seguras con el empleo de tecnologa de DNA recombinante Se pueden desarrollar vacunas de bacterias vivas atenuadas mediante la seleccin de mutantes no patgenos o desactivados Los pptidos sintticos de antgenos protectores pueden provocar inmunidad protectora La va de vacunacin es un factor importante que determina el xito La inmunidad protectora puede inducirse al inyectar DNA que codica antgenos microbianos y citocinas humanas en el msculo La ecacia de una vacuna puede intensicarse al dirigirla a sitios de presentacin de antgenos Una pregunta importante es si se puede utilizar la vacunacin con nes teraputicos para controlar las infecciones crnicas existentes La modulacin del sistema inmunitario podra utilizarse para inhibir las respuestas inmunopatolgicas a los agentes infecciosos

687
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717 717 719 720

16-6 690 16-7

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691 693

Resumen

15-22 15-23

Evolucin de la respuesta inmunitaria adaptativa


16-8 Algunos invertebrados generan diversidad extensa en un repertorio de genes de tipo inmunoglobulina Los agnatos poseen un sistema inmunitario adaptativo que utiliza reordenamiento gnico somtico para diversicar receptores construidos a partir de dominios LRR La inmunidad adaptativa basada en un repertorio diversicado de genes de tipo inmunoglobulina apareci de manera repentina en los peces cartilaginosos El blanco del transposn pudo haber sido un gen codicador de un receptor de supercie celular que portaba un dominio V de tipo inmunoglobulina Diferentes especies generan diversidad de inmunoglobulinas de distintos modos Los receptores de clula T tanto : como : estn presentes en los peces cartilaginosos Las molculas del MHC clases I y II tambin se encuentran por vez primera en los peces cartilaginosos

720
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700

15-30

Resumen 701 702 702 Resumen del captulo 6

Resumen Resumen del captulo 15

xxiii

Apndice I Caja de herramientas del inmunlogo


Inmunizacin
A-1 A-2 A-3 A-4 Haptenos Rutas de inmunizacin Efectos de la dosis de antgeno Adyuvantes

735
735
736 738 738 738

A-28 A-29 A-30

A-31

Deteccin, medicin e identicacin de anticuerpos, y su uso como instrumentos de investigacin y diagnstico


A-5 A-6 Cromatografa de anidad Radioinmunoanlisis (RIA), prueba de inmunoadsorbente ligado a enzimas (ELISA), y anlisis de inhibicin competitiva Hemaglutinacin y tipicacin de sangre Reaccin de precipitina Dilisis de equilibrio: medicin de la anidad y avidez de anticuerpo Anticuerpos contra inmunoglobulina Pruebas de Coombs y la deteccin de incompatibilidad Rhesus Anticuerpos monoclonales Los bacterifagos despliegan bibliotecas para la produccin de regin V de anticuerpo Microscopia de inmunouorescencia Microscopia inmunoelectrnica Inmunohistoqumica Inmunoprecipitacin y coinmunoprecipitacin Inmunoelectrotransferencia (electrotransferencia Western) El uso de anticuerpos en el aislamiento e identicacin de genes y sus productos

740
741

A-32 A-33 A-34 A-35

Identicacin de especicidad de receptor de clula T usando tetrmeros de MHC:pptido Valoracin de la diversidad del repertorio de clulas T mediante espectrotipicacin Anlisis con biosensor para medir los ndices de asociacin y disociacin de receptores de antgeno por sus ligandos Estimulacin de la proliferacin de linfocitos por medio de tratamiento con mitgenos policlonales o antgeno especco Mediciones de apoptosis con anlisis TUNEL Anlisis para clulas citotxicas Anlisis para clulas T CD4 Micromatriz multignica

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A-7 A-8 A-9 A-10 A-11 A-12 A-13 A-14 A-15 A-16 A-17 A-18 A-19

741 743 744 745 746 747 748 750 751 753 753 754 755 756

Deteccin de inmunidad in vivo


A-36 A-37 A-38 A-39 A-40 A-41 Valoracin de inmunidad protectora Transferencia de inmunidad protectora Prueba de tuberculina Prctica de pruebas para respuestas alrgicas Anlisis de respuestas inmunitarias y competencia inmunitaria en seres humanos Reaccin de Arthus

772
772 773 774 774 775 776

Manipulacin del sistema inmunitario


A-42 A-43 A-44 A-45 A-46 A-47 Transferencia adoptiva de linfocitos Transferencias de clula hematopoytica primordial Agotamiento de clulas T in vivo Eliminacin in vivo de clulas B Ratones transgnicos Delecin de gen por medio de alteracin dirigida

777
777 777 777 778 778 779

Aislamiento de linfocitos
A-20 A-21 A-22 A-23 A-24 Aislamiento de linfocitos de sangre perifrica con tcnica de centrifugacin por gradiente de densidad Aislamiento de linfocitos a partir de tejidos que no son sangre Citometra de ujo y anlisis FACS Aislamiento de linfocitos usando cuentas magnticas cubiertas con anticuerpos Aislamiento de lneas de clulas T homogneas

758
758 758 759 761 761

Apndice II Antgenos CD Apndice III Citocinas y sus receptores Apndice IV Quimiocinas y sus receptores Apndice V Constantes inmunolgicas Biografas Glosario

783 799 802 804 805 806 835

Caracterizacin de especicidad, frecuencia y funcin del linfocito


A-25 A-26 A-27 Cultivo de dilucin limitante Anlisis ELISPOT Identicacin de subgrupos funcionales de clulas T por medio de tincin para citocinas

762
763 763 764

ndice alfabtico

PARTE I

Introduccin a la inmunobiologa y a la inmunidad innata


Captulo 1 Conceptos bsicos en inmunologa
Principios de inmunidad innata y adaptativa Mecanismos efectores de la inmunidad adaptativa

Captulo 2

Inmunidad innata
Primera lnea de defensa del hospedador Reconocimiento de patrones en el sistema inmunitario innato El sistema de complemento y la inmunidad innata Respuestas innatas inducidas a las infecciones

Conceptos bsicos en inmunologa

Inmunologa es el estudio de la defensa del organismo contra las infecciones. El ser humano vive rodeado de microorganismos, muchos de los cuales causan enfermedades. Aun as, pese a esta exposicin continua, slo rara vez sobreviene alguna patologa. De qu manera se defiende el organismo? Cuando ocurre una infeccin, cmo elimina el cuerpo al invasor y se cura por s solo? Por ltimo, por qu se produce inmunidad duradera a muchas enfermedades infecciosas que se encuentran una vez y se superan? stas son preguntas abordadas por la inmunologa, que se estudia para entender las defensas del organismo contra las infecciones en los mbitos celular y molecular. La inmunologa es una ciencia relativamente nueva. Su origen por lo general se atribuye a Edward Jenner (fig. 1-1), quien a finales del siglo XVIII observ que la vacuna, una enfermedad relativamente leve, pareca conferir proteccin contra la viruela, una enfermedad a menudo fatal. En 1796, Jenner demostr que la inoculacin con vacuna poda proteger contra la viruela. Llam al procedimiento vacunacin, y este trmino an se usa para describir la inoculacin de individuos sanos con cepas debilitadas o atenuadas de agentes que causan enfermedades, a fin de proporcionar proteccin contra estas ltimas. Aunque el atrevido experimento de Jenner fue exitoso, se requirieron casi dos siglos para que la vacunacin contra la viruela se hiciera universal, un avance que permiti que en 1979 la Organizacin Mundial de la Salud anunciara que se haba erradicado la viruela (fig. 1-2), tal vez el ms grande triunfo de la medicina moderna. Cuando Jenner introdujo la vacunacin, nada saba de los agentes infecciosos que causan enfermedades: no fue sino hasta finales del siglo XIX que Robert Koch prob que las enfermedades infecciosas se originan por microorganismos, cada uno de los cuales produce una enfermedad particular. Ahora se reconocen cuatro categoras amplias de agentes que causan enfermedades, o agentes patgenos: virus, bacterias, hongos y los microorganismos eucariotas unicelulares y los multicelulares llamados en conjunto parsitos. Los descubrimientos de Koch y de otros grandes microbilogos del siglo XIX extendieron la estrategia de vacunacin de Jenner contra otras enfermedades. Durante el decenio de 1880, Louis Pasteur ide una vacuna contra el clera en pollos y cre una vacuna contra la rabia que result ser un xito espectacular en su primera prueba en un nio mordido por un perro rabioso. Estos triunfos prcticos llevaron a una bsqueda del mecanismo de proteccin y al desarrollo de la ciencia de la inmunologa. A principios del decenio de 1890, Emil von Behring y Shibasaburo Kitasato descubrieron que el suero de animales inmunes a la difteria o al

Fig. 1-1. Edward Jenner. Retrato por John Raphael Smith. Reproducido por cortesa de la Yale University, Harvey Cushing/John Hay Whitney Medical Library.

Captulo 1: Conceptos bsicos en inmunologa

Nmero 30 de pases con uno o ms casos por mes 15

erradicacin ocial de la viruela

0 1965

1970

1975

1980 Ao

Fig. 1-2. La erradicacin de la viruela por medio de vacunacin. Luego de un periodo de tres aos durante el cual no se registraron casos de viruela, la Organizacin Mundial de la Salud pudo anunciar en 1979 que se haba erradicado la viruela, y se suspendi la vacunacin. No obstante, se han retenido algunas reservas en laboratorios, y algunos temen que stas sean una fuente a partir de la cual el virus podra resurgir.

ttanos contena una actividad antitxica especfica, que poda conferir proteccin de corta duracin contra los efectos de las toxinas diftrica o tetnica en personas. Esta actividad se debi a las protenas que ahora se denominan anticuerpos, que se unieron de modo especfico a las toxinas y neutralizaron su actividad. Las respuestas del ser humano contra infecciones provocadas por agentes patgenos potenciales se conocen como respuestas inmunitarias. Una respuesta inmunitaria especfica, como la produccin de anticuerpos contra un agente patgeno particular o sus productos, se conoce como una respuesta inmunitaria adaptativa porque aparece durante el lapso de vida de un individuo como una adaptacin a la infeccin por ese agente patgeno. En muchos casos, una respuesta inmunitaria adaptativa tambin da por resultado el fenmeno conocido como memoria inmunitaria, que confiere inmunidad protectora de por vida a reinfeccin por el mismo agente patgeno. sta es slo una de las caractersticas que distinguen entre respuesta inmunitaria adaptativa y la respuesta inmunitaria innata, o inmunidad innata, que siempre est inmediatamente disponible para combatir una amplia gama de agentes patgenos, pero no lleva a inmunidad duradera, y no es especfica para microorganismo patgeno individual alguno. En la poca en que von Behring creaba la terapia con suero para la difteria, la inmunidad innata se conoca en primera instancia por los estudios del gran inmunlogo ruso Elie Metchnikoff, quien descubri que muchos microorganismos podan ser envueltos y digeridos por clulas fagocticas, que llam macrfagos. Estas clulas siempre estn presentes y listas para actuar y son un componente de primera lnea de las respuestas inmunitarias innatas. En cambio, una respuesta inmunitaria adaptativa tarda en aparecer y es muy especfica; por ejemplo, los anticuerpos contra el virus de la gripe no protegern contra el virus de la poliomielitis. Rpidamente qued claro que poda inducirse formacin de anticuerpos contra una vasta gama de sustancias. Esas sustancias se llamaron antgenos porque podan estimular la generacin de anticuerpos. Mucho tiempo despus se descubri que la produccin de anticuerpos no es la nica funcin de las respuestas inmunitarias adaptativas y el trmino antgeno ahora se usa para describir cualquier sustancia que el sistema inmunitario adaptativo puede reconocer y a la que puede responder. Las protenas, las glucoprotenas y los polisacridos de agentes patgenos son los antgenos a los cuales el sistema inmunitario normalmente responde, pero puede reconocer y responder a una gama mucho ms amplia de estructuras qumicas, de ah su capacidad para producir respuestas inmunitarias alrgicas a metales como el nquel, a frmacos como la penicilina, y a sustancias qumicas orgnicas en las hojas de la hiedra venenosa. Juntas, las respuestas inmunitarias tanto innata como adaptativa proporcionan un sistema de defensa notoriamente eficaz. Muchas infecciones se manejan con buenos resultados por medio de inmunidad innata, y no causan enfermedad; las que no se pueden resolver desencadenan una respuesta inmunitaria adaptativa y, si se superan, a menudo van seguidas por memoria inmunitaria duradera, que evita enfermedad si ocurre reinfeccin. Este libro se enfocar principalmente en los diversos mecanismos de la inmunidad adaptativa, mediante los cuales los leucocitos especializados conocidos como linfocitos reconocen agentes patgenos o clulas infectadas y se dirigen hacia los mismos. Sin embargo, se ver que las acciones del sistema inmunitario innato son un prerrequisito para la aparicin de inmunidad adaptativa y que las clulas que participan en las respuestas inmunitarias innatas tambin lo hacen en las adaptativas. De hecho, casi todas las maneras en las cuales la respuesta inmunitaria adaptativa destruye microorganismos invasores dependen del enlace entre el reconocimiento especfico para antgeno del agente patgeno y la activacin de los mismos mecanismos destructivos que se usan en la inmunidad innata. En este captulo se presentan primero los principios de las inmunidades innata y adaptativa, las clulas del sistema inmunitario, los tejidos en los cuales se desarrollan y los tejidos a travs de los cuales circulan. Luego se esbozan las funciones especializadas de los diferentes tipos de clulas, y los mecanismos por medio de los cuales eliminan infeccin.

Principios de inmunidad innata y adaptativa

Principios de inmunidad innata y adaptativa


El cuerpo est protegido contra agentes infecciosos y el dao que causan, y contra otras sustancias perjudiciales, como toxinas de insectos, mediante diversas clulas y molculas efectoras que, juntas, constituyen el sistema inmunitario. En esta parte del captulo se comentan los principios de mayor importancia que fundamentan a las respuestas inmunitarias, y se presentan las clulas y los tejidos del sistema inmunitario de los cuales depende la respuesta inmunitaria.

1-1

Funciones de la respuesta inmunitaria

Para proteger al individuo con eficacia contra enfermedad, el sistema inmunitario debe satisfacer cuatro tareas principales. La primera es el reconocimiento inmunitario: es necesario detectar la presencia de una infeccin. Esta tarea es llevada a cabo tanto por los leucocitos del sistema inmunitario innato, que proporcionan una respuesta inmediata, como por los linfocitos del sistema inmunitario adaptativo. La segunda tarea es contener la infeccin y de ser posible eliminarla por completo, lo que pone en marcha funciones efectoras inmunitarias, como el sistema de protenas sanguneas del complemento, los anticuerpos y las capacidades destructivas de los linfocitos y de los otros leucocitos. Al mismo tiempo, la respuesta inmunitaria debe mantenerse controlada de modo que no dae por s misma al organismo. De esta manera, la regulacin inmunitaria, o la capacidad del sistema inmunitario para autorregularse, es una importante caracterstica de las respuestas inmunitarias, y el fracaso de esa regulacin contribuye a enfermedades como alergia y enfermedad autoinmunitaria. La cuarta tarea es proteger al individuo contra enfermedades recurrentes debidas a los mismos agentes patgenos. Una caracterstica singular del sistema inmunitario adaptativo es que tiene la capacidad de generar memoria inmunitaria, de modo que una vez expuesta a un agente infeccioso, una persona monta una respuesta inmediata y ms fuerte contra cualquier exposicin subsiguiente al mismo; es decir, tendr inmunidad protectora contra dicho agente. Encontrar maneras de generar inmunidad duradera a agentes patgenos que no la desencadenan de modo natural es uno de los ms grandes desafos que encaran los inmunlogos en la actualidad. Cuando un sujeto tiene contacto por vez primera con un agente infeccioso, las defensas iniciales contra infeccin son barreras fsicas y qumicas que evitan que los microbios entren al cuerpo; stas por lo general no se consideran parte del sistema inmunitario propiamente dicho, y slo es cuando tales barreras son superadas o evadidas que el sistema inmunitario entra en juego. Las primeras clulas en responder son leucocitos fagocticos, como los macrfagos, que forman parte del sistema inmunitario innato. Estas clulas tienen la capacidad para ingerir y matar microbios al producir diversas sustancias qumicas txicas y enzimas degradantes potentes. La inmunidad innata es de origen antiguo, en todos los animales y en todas las plantas se encuentra alguna forma de defensa innata contra las enfermedades. Por ejemplo, se cree que los macrfagos de los seres humanos y de otros vertebrados son los descendientes evolutivos directos de las clulas fagocticas presentes en animales ms simples, como las que Metchnikoff observ en el invertebrado estrella de mar. Las respuestas inmunitarias innatas ocurren con rapidez en el momento de la exposicin a un microorganismo infeccioso. El sistema inmunitario adaptativo, que se superpone con la respuesta inmunitaria innata, pero que tarda das ms que horas en aparecer, tiene la capacidad de eliminar infecciones con mayor eficiencia que la respuesta inmunitaria innata. Slo est presente en vertebrados y depende de funciones de reconocimiento en extremo especficas de linfocitos, que tienen la capacidad para distinguir el agente patgeno particular y enfocar la respuesta inmunitaria ms enrgicamente en l. Estas clulas pueden reconocer antgenos individuales y responder a los mismos, por medio de receptores de antgenos muy especializados sobre la superficie de linfocitos. Los miles de millo-

Captulo 1: Conceptos bsicos en inmunologa

Mdula sea

clula madre hematopoytica pluripotencial

Mdula sea

progenitor linfoide comn

progenitor mieloide comn

progenitor de granulocitos/ macrfagos

progenitor de megacariocitos/ eritrocitos

megacariocitos

eritroblastos

Sangre
Granulocitos (o leucocitos polimorfonucleares)

clula B

clula T

clula NK

clula dendrtica inmadura

neutrlo

eosinlo

baslo

precursor desconocido de monocito clulas cebadas

plaquetas

eritrocito

Ganglios linfticos

Tejidos

clula B

clula T

clula NK

clula dendrtica madura

clula dendrtica inmadura

clula cebada

macrfago

Clulas efectoras

clula plasmtica

clula T activada

clula NK activada

Fig. 1-3. Todos los elementos celulares de la sangre, incluso las clulas del sistema inmunitario, surgen a partir de clulas primordiales hematopoyticas pluripotenciales en la mdula sea. Estas clulas pluripotenciales se dividen y producen dos tipos de clulas primordiales. Un progenitor linfoide comn da lugar a la lnea linfoide (fondo azul) de leucocitos, los linfocitos citolticos naturales (NK) y los linfocitos T y B. Un progenitor mieloide comn da lugar a la lnea mieloide (fondos de color rosado y amarillo), que comprende el resto de los leucocitos, los eritrocitos y los megacariocitos que producen plaquetas importantes en la coagulacin de la sangre. Los linfocitos T y B se distinguen de los otros leucocitos por la posesin de

receptores de antgeno, y entre s por sus sitios de diferenciacin, el timo y la mdula sea, respectivamente. Despus de encontrarse con antgeno, las clulas B se diferencian hacia clulas plasmticas secretoras de anticuerpo, mientras que las clulas T se diferencian hacia clulas T efectoras con diversas funciones. Al contrario de las clulas T y B, las clulas NK carecen de especificidad para antgeno. Los leucocitos restantes son los monocitos, las clulas dendrticas y los neutrfilos, eosinfilos y basfilos. Estos tres ltimos circulan en la sangre y se denominan granulocitos, debido a los grnulos citoplsmicos cuya coloracin imparte a estas clulas un aspecto distintivo en frotis sanguneos, o leucocitos polimorfonucleares, debido a su ncleo de forma irregular. Las clulas dendrticas inmaduras (fondo de color amarillo) son clulas fagocticas que entran a los tejidos; maduran despus de que han encontrado un agente patgeno potencial. El progenitor linfoide comn tambin da lugar a una subpoblacin menor de clulas dendrticas, pero en aras de la sencillez esta va del desarrollo no se ha ilustrado. Sin embargo, dado que hay ms clulas progenitoras mieloides comunes que progenitoras linfoides comunes, casi todas las clulas dendrticas en el cuerpo se desarrollan a partir de progenitores mieloides comunes. Los monocitos entran a los tejidos, donde se diferencian hacia macrfagos fagocticos. An se desconoce la clula precursora que da lugar a clulas cebadas. Estas ltimas tambin entran a los tejidos y completan su maduracin ah.

Principios de inmunidad innata y adaptativa

nes de linfocitos presentes en el cuerpo poseen en conjunto un vasto repertorio de receptores de antgenos, que permite al sistema inmunitario reconocer, y responder, a casi cualquier antgeno al cual una persona tiene probabilidades de quedar expuesta. Al hacer el reconocimiento y la respuesta especficos para un agente patgeno particular, la respuesta inmunitaria adaptativa enfoca los recursos del sistema inmunitario en combatir a ese agente patgeno, lo que permite al cuerpo vencer a agentes patgenos que han evadido la inmunidad innata o la han agobiado. Los anticuerpos y los linfocitos activados producidos durante esta fase de la respuesta tambin persisten despus de que se ha eliminado la infeccin original, y evitan reinfeccin inmediata. Los linfocitos tambin se encargan de la inmunidad duradera que se genera luego de una respuesta inmunitaria adaptativa exitosa a muchos agentes patgenos, de manera que la respuesta a una segunda exposicin al mismo microbio es tanto ms rpida como de mayor magnitud, incluso cuando ocurre muchos aos ms tarde.

1-2

Las clulas del sistema inmunitario se derivan de precursores en la mdula sea

Las respuestas inmunitarias innata y adaptativa dependen de las actividades de los leucocitos. Estas clulas se originan en la mdula sea, y muchas tambin se desarrollan y maduran ah. Despus migran para proteger los tejidos perifricos, algunas de ellas residen dentro de los tejidos, otras circulan en el torrente sanguneo y en un sistema de vasos especializado llamado sistema linftico, que drena lquido extracelular y clulas libres desde los tejidos, los transporta por el cuerpo como linfa, y finalmente se vaca de regreso hacia el sistema vascular sanguneo. Todos los elementos celulares de la sangre, incluso los eritrocitos que transportan oxgeno, las plaquetas que desencadenan la coagulacin de la sangre en tejidos daados y los leucocitos del sistema inmunitario, se derivan de las clulas primordiales hematopoyticas de la mdula sea. Todas estas clulas primordiales pueden dar lugar a todos los diferentes tipos de clulas sanguneas, y suelen conocerse como clulas primordiales hematopoyticas pluripotenciales. Dan lugar a clulas primordiales que tienen potencial de desarrollo ms limitado, que son las progenitoras inmediatas de los eritrocitos, de las plaquetas y de las dos categoras principales de leucocitos, las lneas linfoide y mieloide. En la figura 1-3 se resumen los diferentes tipos de clulas sanguneas y sus relaciones de lnea.

1-3

La lnea mieloide comprende casi todas las clulas del sistema inmunitario innato

El progenitor mieloide comn es el precursor de los macrfagos, de los granulocitos, de las clulas cebadas y de las clulas dendrticas del sistema inmunitario innato, y de megacariocitos y eritrocitos, que no se abordarn aqu. En la figura 1-4 se muestran las clulas de la lnea mieloide. Los macrfagos residen en casi todos los tejidos, y son la forma madura de los monocitos, que circulan en la sangre y migran de modo continuo hacia tejidos, donde se diferencian. Juntos, los monocitos y los macrfagos constituyen uno de los tres tipos de fagocitos en el sistema inmunitario: los otros son los granulocitos (el trmino colectivo para los leucocitos llamados neutrfilos, eosinfilos y basfilos) y las clulas dendrticas. Los macrfagos son clulas de vida relativamente prolongada y desempean varias funciones en todos los aspectos de la respuesta inmunitaria innata y la respuesta inmunitaria adaptativa subsiguiente. Una es fagocitar y matar microorganismos invasores. En esta funcin fagoctica son una importante primera defensa en la inmunidad innata y eliminan tambin agentes patgenos y clulas infectadas a los cuales se dirige una respuesta inmunitaria adaptativa. Tanto los monocitos como los macrfagos son fagocticos, pero casi todas las infecciones ocurren en los tejidos; de esta manera, son principalmente los macrfagos los que realizan esta importante funcin protectora. Una funcin adicional y crucial de los macrfagos es organizar respuestas inmunitarias: ayu-

Captulo 1: Conceptos bsicos en inmunologa

Fig. 1-4. Clulas mieloides en las inmunidades innata y adaptativa. Las clulas de la lnea mieloide desempean diversas funciones importantes en la respuesta inmunitaria. En el resto de este libro estas clulas se representarn en la forma esquemtica que se muestra a la izquierda. En los paneles centrales se muestra una microfotografa de cada tipo de clula. Los macrfagos y los neutrfilos son clulas principalmente fagocticas que fagocitan agentes patgenos y los destruyen en vesculas intracelulares, una funcin que desempean en las respuestas inmunitarias tanto innata como adaptativa. Las clulas dendrticas son fagocticas cuando son inmaduras y pueden captar agentes patgenos; luego de madurar, funcionan como clulas especializadas que presentan antgenos de agentes patgenos a linfocitos T en una forma que pueden reconocer, lo que activa a los linfocitos T e inicia respuestas inmunitarias adaptativas. Los macrfagos tambin pueden presentar antgenos a los linfocitos T, y activar a estos ltimos. Las otras clulas mieloides son principalmente clulas secretorias que liberan el contenido de sus grnulos prominentes en el momento de la activacin por medio de anticuerpos durante una respuesta inmunitaria adaptativa. Se cree que los eosinfilos participan en el ataque a parsitos grandes cubiertos con anticuerpos, como gusanos, mientras que la funcin de los basfilos est menos clara. Las clulas cebadas son clulas hsticas que desencadenan una respuesta inflamatoria local a antgeno al liberar sustancias que actan sobre vasos sanguneos locales; tambin tienen importancia en las respuestas alrgicas. Fotografas cortesa de N. Rooney, R. Steinman, y D. Friend.

Clula
Macrfago

Funcin activada

Fagocitosis y activacin de mecanismos bactericidas Presentacin de antgeno

Clula dendrtica Captacin de antgeno en sitios perifricos Presentacin de antgeno

Neutrlo

Fagocitosis y activacin de mecanismos bactericidas

Eosinlo

Muerte de parsitos cubiertos con anticuerpos

Baslo

Desconocida

Clula cebada Liberacin de grnulos que contienen histamina y agentes activos

Principios de inmunidad innata y adaptativa

dan a inducir inflamacin que, como se ver, es un prerrequisito para una respuesta inmunitaria exitosa y secretan protenas emisoras de seales que activan otras clulas del sistema inmunitario y las reclutan hacia una respuesta inmunitaria. Adems de su participacin especializada en el sistema inmunitario, los macrfagos actan como clulas recolectoras generales en el cuerpo, eliminan clulas muertas y restos celulares. Los granulocitos se llaman as porque tienen grnulos con coloracin densa en el citoplasma; tambin se llaman leucocitos polimorfonucleares debido a su ncleo de forma irregular. Hay tres tipos de granulocitos (neutrfilos, eosinfilos y basfilos) que se distinguen por las diferentes propiedades de coloracin de los grnulos. En comparacin con los macrfagos, son de vida relativamente breve; slo sobreviven algunos das y se producen en nmeros aumentados durante respuestas inmunitarias, cuando abandonan la sangre para migrar hacia sitios de infeccin o inflamacin. Los neutrfilos fagocticos son las clulas ms numerosas y de mayor importancia en las respuestas inmunitarias innatas: captan diversos microorganismos mediante fagocitosis y los destruyen con eficiencia en vesculas intracelulares usando enzimas degradantes y otras sustancias antimicrobianas almacenadas en sus grnulos citoplsmicos. Su funcin se comenta con mayor detalle en el captulo 2. Las deficiencias hereditarias de la funcin de los neutrfilos llevan a infecciones bacterianas abrumadoras, letales si no se tratan. Las funciones protectoras de los eosinfilos y de los basfilos se entienden con menor perfeccin. Sus grnulos contienen diversas enzimas y protenas txicas, que se liberan cuando se activa la clula. Se cree que los eosinfilos y los basfilos son importantes principalmente en la defensa contra los parsitos, que son demasiado grandes como para que los macrfagos o los neutrfilos los ingieran, pero su principal importancia mdica yace en su participacin en reacciones inflamatorias alrgicas, en las cuales sus efectos son dainos ms que protectores. Las funciones de estas clulas se comentan en el captulo 9 y su participacin en la inflamacin de origen alrgico, en el captulo 13. Las clulas cebadas, cuyos precursores transportados por la sangre no se encuentran bien definidos, se diferencian en los tejidos. Aun cuando se conocen mejor por su participacin en la organizacin de respuestas alrgicas (cap. 13), se cree que participan en la proteccin de las superficies internas del cuerpo contra microorganismos patgenos y que participan en la respuesta a gusanos parsitos. Tienen grnulos grandes en el citoplasma que se liberan cuando la clula cebada se activa; stos ayudan a inducir inflamacin. Las clulas dendrticas son la tercera clase de clulas fagocticas del sistema inmunitario. Tienen prolongaciones digitiformes largas, como las dendritas de las clulas nerviosas, que les dan su nombre. Las clulas dendrticas inmaduras migran a travs del torrente sanguneo desde la mdula sea y entran a los tejidos. Captan materia particulada por medio de fagocitosis e ingieren de modo continuo grandes cantidades de lquido extracelular y su contenido mediante un proceso conocido como macropinocitosis. Al igual que los macrfagos y los neutrfilos, degradan los microorganismos patgenos que captan, pero su principal participacin en el sistema inmunitario no es la eliminacin de microorganismos. En cambio, las clulas dendrticas que han encontrado microorganismos invasores maduran hacia clulas capaces de activar una clase particular de linfocitos (los linfocitos T) que se describen ms adelante. Las clulas dendrticas hacen esto al desplegar en su superficie antgenos de microorganismos patgenos, de manera que dicho tipo de linfocitos pueda reconocerlos y responder a los mismos. Como se comenta ms adelante en este captulo, el reconocimiento de antgenos solo no basta para activar un linfocito T que nunca antes ha encontrado su antgeno. Empero, las clulas dendrticas maduras tienen otras propiedades que les permiten activar linfocitos T. Las clulas que pueden presentar antgenos a linfocitos T inactivos, y activarlos por vez primera, se conocen como clulas presentadoras de antgeno (APC), las cuales forman un enlace crucial entre la respuesta inmunitaria innata y la respuesta inmunitaria adaptativa. Los macrfagos tambin pueden actuar como clulas presentadoras de antgeno y son importantes en situaciones particulares. Con todo, las clulas dendrticas son las clulas que se

Captulo 1: Conceptos bsicos en inmunologa

Linfocito citoltico natural (NK)

especializan en presentar antgenos a linfocitos e iniciar respuestas inmunitarias adaptativas.

1-4

La lnea linfoide comprende los linfocitos del sistema inmunitario adaptativo y los linfocitos citolticos (asesinos naturales) de la inmunidad innata

Libera grnulos lticos que matan algunas clulas infectadas por virus

Fig. 1-5. Linfocitos citolticos naturales (NK). Son clulas de aspecto linfoide, granulares, grandes, con importantes funciones en la inmunidad innata, en especial contra infecciones intracelulares, que tienen la capacidad para matar otras clulas. Al contrario de los dems linfocitos, carecen de receptores especficos para antgeno. Fotografa cortesa de B. Smith.

El progenitor linfoide comn en la mdula sea da lugar a los linfocitos especficos para antgeno del sistema inmunitario adaptativo, y a un tipo de linfocito que responde a la presencia de infeccin pero que no es especfico para antgeno y, as, se considera que forma parte del sistema inmunitario innato. Este ltimo linfocito es una clula grande con un citoplasma granular distintivo llamado linfocito citoltico (asesino natural, NK) (fig. 1-5). Estas clulas tienen la capacidad de reconocer y matar algunas clulas anormales, por ejemplo, algunas clulas tumorales y clulas infectadas por virus del herpes. Sus funciones en la inmunidad innata se describen en el captulo 2. Por ltimo, estn los linfocitos especficos para antgeno, en los cuales se enfocar la mayor parte de este libro. A menos que se indique lo contrario, a partir de aqu el trmino linfocito se usar para referirse nicamente a los linfocitos especficos para antgeno. El sistema inmunitario debe tener la capacidad de montar una respuesta inmunitaria contra cualquiera de la amplia variedad de agentes patgenos que una persona tiene probabilidades de encontrar durante su lapso de vida. Los linfocitos en conjunto hacen esto posible por medio de los receptores de antgeno muy variables sobre su superficie, mediante los cuales reconocen antgenos y se unen a los mismos. Cada linfocito madura portando una variante nica de un receptor de antgeno prototipo, de modo que la poblacin de linfocitos expresa un enorme repertorio de receptores que son muy diversos en sus sitios de unin a antgeno. Entre los miles de millones de linfocitos que circulan en el cuerpo en cualquier momento, siempre habr alguno que pueda reconocer un antgeno extrao dado. En ausencia de una infeccin, casi todos los linfocitos que circulan en el organismo son clulas pequeas sin rasgos caractersticos, con pocos organelos citoplsmicos y gran parte de la cromatina nuclear inactiva, como se muestra por su estado condensado (fig. 1-6). Este aspecto es tpico de las clulas inactivas. Apenas sorprende que hasta el decenio de 1960 estas clulas, que ahora son el enfoque central de la inmunologa, se describieran en los libros de texto como carentes de funcin conocida. De hecho, estos linfocitos pequeos no tienen actividad funcional sino hasta que encuentran su antgeno especfico. Los linfocitos que todava no se han activado por medio de antgeno se conocen como linfocitos vrgenes; los que han encontrado su antgeno, se han activado y se han diferenciado ms hacia linfocitos por completo funcionales, se conocen como

Fig. 1-6. Los linfocitos son en su mayor parte clulas pequeas e inactivas. En el panel izquierdo se muestra una microfotografa ptica de un linfocito pequeo en el cual el ncleo se ha coloreado de prpura por medio de tincin con hematoxilina y eosina, rodeado por eritrocitos (que carecen de ncleo). Ntense las placas de cromatina condensada de color prpura ms oscuro del ncleo del linfocito (que indican poca actividad de transcripcin), la falta relativa de citoplasma, y el tamao pequeo. El panel derecho muestra una microfotografa electrnica de transmisin de un linfocito pequeo. De nuevo, ntense las evidencias de inactividad funcional: la cromatina condensada, el citoplasma escaso y la falta de retculo endoplsmico rugoso. Fotografas cortesa de N. Rooney.

Principios de inmunidad innata y adaptativa

linfocitos efectores. Hay dos tipos de linfocitos, los linfocitos B (clulas B) y linfocitos T (clulas T), cada uno con funciones bastante diferentes en el sistema inmunitario y tipos bien determinados de receptores de antgeno. Luego de que el antgeno se une a un receptor de antgeno de clulas B, o receptor de clulas B (BCR), sobre la superficie de la clula B, el linfocito proliferar y se diferenciar hacia una clula plasmtica. Esta es la forma efectora de los linfocitos B y produce anticuerpos, que son una forma secretada del receptor de clulas B y tienen una especificidad de antgeno idntica. De esta manera, el antgeno que activa a una clula B dada se convierte en la diana de los anticuerpos producidos por la progenie de esas clulas. Las molculas de anticuerpos como clase se conocen como inmunoglobulinas (Ig); de este modo, el receptor de antgeno de linfocitos B tambin se conoce como inmunoglobulina de membrana (mIg) o como inmunoglobulina de superficie (sIg). El receptor de antgeno de clulas T, o receptor de clulas T (TCR), se relaciona con inmunoglobulina pero es muy distinto en su estructura y en sus propiedades de reconocimiento. Despus de que una clula T es activada por su primer encuentro con un antgeno, prolifera y se diferencia hacia uno de varios tipos funcionales de linfocitos T efectores. Las funciones de las clulas T caen dentro de tres clases amplias: muerte, activacin y regulacin. Las clulas T citotxicas matan clulas infectadas por virus u otros microorganismos patgenos intracelulares. Las clulas T auxiliares proporcionan seales adicionales esenciales que activan clulas B estimuladas por antgeno para que se diferencien y produzcan anticuerpos; algunas de estas clulas T tambin pueden activar macrfagos a fin de hacerlos ms eficientes para matar agentes patgenos fagocitados. Ms adelante se retoman las funciones de las clulas T citotxicas y auxiliares, y sus acciones se describen en detalle en los captulos 8 y 10. Las clulas T reguladoras suprimen la actividad de otros linfocitos y ayudan a controlar respuestas inmunitarias; se comentan en los captulos 8, 10 y 14. Durante una respuesta inmunitaria, algunas de las clulas B y T activadas mediante antgeno se diferencian hacia clulas de memoria, los linfocitos de los cuales depende la inmunidad duradera que puede aparecer luego de exposicin a enfermedad o vacunacin. Las clulas de memoria se diferenciarn con facilidad hacia clulas efectoras ante una segunda exposicin a su antgeno especfico. La memoria inmunitaria se describe en el captulo 10.

1-5

Los linfocitos maduran en la mdula sea o en el timo, y despus se congregan en tejidos linfoides de todo el cuerpo

Los linfocitos circulan en la sangre y la linfa, y se encuentran tambin en grandes nmeros en tejidos linfoides u rganos linfoides, que son agregados organizados de linfocitos en una red de clulas no linfoides. Los rganos linfoides pueden dividirse a grandes rasgos en rganos linfoides centrales o primarios, donde se generan linfocitos, y rganos linfoides perifricos o secundarios, donde se mantienen los linfocitos vrgenes maduros y se inician respuestas inmunitarias adaptativas. Los rganos linfoides centrales son la mdula sea y el timo, un rgano que se encuentra en la parte alta del trax. Los rganos linfoides perifricos comprenden los ganglios linfticos, el bazo, y los tejidos linfoides de la mucosa del intestino, las vas nasales y respiratorias, las vas urogenitales, y otras mucosas. La localizacin de los principales tejidos linfoides se muestra de manera esquemtica en la figura 1-7, y ms adelante en este captulo se describirn con mayor detalle los rganos linfoides perifricos individuales. Los ganglios linfticos estn interconectados por medio de un sistema de vasos linfticos, que drenan lquido extracelular desde los tejidos, a travs de los ganglios linfticos, y de regreso hacia la sangre. Los linfocitos tanto B como T se originan en la mdula sea, pero slo los linfocitos B maduran ah. Los linfocitos T precursores migran hacia el timo, del cual se deriva su nombre, y maduran ah. La B en los linfocitos B originalmente significaba la bolsa de Fabricio, un rgano linfoide en pollos jvenes en el cual maduran los linfocitos; en idioma ingls puede significar igualmente derivados de la mdula sea (bone marrow). Una vez que han completado la maduracin,

10

Captulo 1: Conceptos bsicos en inmunologa

Fig. 1-7. La distribucin de los tejidos linfoides en el cuerpo. Los linfocitos surgen a partir de clulas primordiales en la mdula sea y se diferencian en los rganos linfoides centrales (amarillo): clulas B en la mdula sea y clulas T en el timo. Migran desde estos tejidos y se transportan en el torrente sanguneo hacia los rganos linfoides perifricos (azul). stos incluyen ganglios linfticos, bazo y tejidos linfoides relacionados con mucosa, como las amgdalas relacionadas con el intestino (las placas de Peyer), y el apndice. Los rganos linfoides perifricos son los sitios de activacin de linfocitos por antgeno, y los linfocitos los recirculan entre la sangre y estos rganos hasta que encuentran su antgeno especfico. Los linfticos drenan lquido extracelular desde los tejidos perifricos, a travs de los ganglios linfticos, y hacia el conducto torcico, que se vaca hacia la vena subclavia izquierda. Este lquido, conocido como linfa, transporta antgenos captados por clulas dendrticas y macrfagos hacia los ganglios linfticos, y recircula linfocitos desde los ganglios linfticos de regreso hacia la sangre. El tejido linfoide tambin se relaciona con otras mucosas, como las que revisten los bronquios (que no se muestran).

adenoide amgdala vena subclavia derecha ganglio linftico


vena subclavia izquierda timo corazn conducto torcico

rin

apndice

bazo placa de Peyer en el intestino delgado intestino grueso

linfticos

mdula sea

ambos tipos de linfocitos entran al torrente sanguneo, como linfocitos vrgenes maduros. Circulan a travs de tejidos linfoides perifricos, en los cuales se inicia una respuesta inmunitaria adaptativa si un linfocito encuentra su antgeno correspondiente. Aun as, antes de esto por lo general ha ocurrido una respuesta inmunitaria innata a la infeccin y ahora se busca cmo esto alerta al resto del sistema inmunitario respecto a la presencia de un agente patgeno.

1-6

Casi todos los agentes infecciosos activan el sistema inmunitario innato e inducen una respuesta inamatoria

La piel y los epitelios mucosos que revisten las vas respiratorias y el intestino son la primera defensa contra agentes patgenos invasores; forman una barrera fsica y qumica contra infeccin. Los microorganismos que violan estas defensas son enfrentados por clulas y molculas que montan una respuesta inmunitaria innata inmediata. Los macrfagos residentes en los tejidos son la primera lnea de defensa contra bacterias, por ejemplo, que reconocen por medio de receptores que se unen a constituyentes comunes de muchas superficies bacterianas. La ocupacin de estos receptores hace que el macrfago fagocite a la bacteria y la degrade internamente, y que secrete protenas llamadas citocinas y quimiocinas, as como otras molculas que tienen actividad biolgica. Ocurren respuestas similares a virus, hongos y parsitos. Citocina es un nombre general para cualquier protena secretada por clulas y que afecta a la conducta de clulas cercanas que portan receptores apropiados. Las quimiocinas son protenas secretadas que atraen clulas que portan receptores de quimiocina, como neutrfilos y monocitos, hacia fuera de la sangre y hacia el tejido infectado (fig. 1-8). Las citocinas y

Principios de inmunidad innata y adaptativa

11

Las bacterias desencadenan la liberacin de citocinas y quimiocinas por los macrfagos

La vasodilatacin y el incremento de la permeabilidad vascular causan enrojecimiento, aumento de la temperatura e hinchazn

Las clulas inamatorias migran hacia el tejido y liberan mediadores inamatorios que causan dolor
neutrlo

citocinas protena lquidos quimiocinas

quimiocinas liberadas por macrfagos activados inician el proceso conocido como inflamacin. La inflamacin de un tejido infectado tiene varios efectos beneficiosos en el combate de la infeccin. Recluta clulas y molculas de inmunidad innata que salen de la sangre y entran al tejido donde se necesitan para destruir al agente patgeno de modo directo. Adems, incrementa el flujo de linfa que porta microbios y clulas portadoras de antgeno hacia tejidos linfoides cercanos, donde activan linfocitos e iniciarn la respuesta inmunitaria adaptativa. Por ltimo, una vez que se ha desencadenado la respuesta inmunitaria adaptativa, la inflamacin tambin recluta a los efectores del sistema inmunitario adaptativo (molculas de anticuerpo y clulas T efectoras) hacia el sitio de infeccin. La inflamacin local y la fagocitosis de bacterias invasoras tambin pueden desencadenarse como resultado de la activacin de un grupo de protenas plasmticas conocidas en conjunto como complemento. La activacin del sistema del complemento por superficies bacterianas conduce a una cascada de reacciones proteolticas que cubre microbios, pero no las clulas propias del cuerpo, con fragmentos de complemento. Receptores del complemento especficos sobre macrfagos reconocen microbios cubiertos con complemento, se unen a ellos, los fagocitan y los destruyen. La inflamacin tradicionalmente se define por cuatro palabras: calor, dolor, rubor y tumor, todas las cuales reflejan los efectos de las citocinas y otros mediadores inflamatorios sobre los vasos sanguneos locales. La dilatacin y la permeabilidad aumentada de vasos sanguneos durante procesos inflamatorios llevan al incremento del flujo sanguneo local y al escape de lquido hacia los tejidos, y explican el aumento de la temperatura, el enrojecimiento y la hinchazn. Las citocinas y los fragmentos de complemento tienen efectos importantes sobre el endotelio que reviste vasos sanguneos; las clulas endoteliales en s tambin producen citocinas en respuesta a infeccin. Las citocinas inflamatorias producen cambios de las propiedades adhesivas de las clulas endoteliales, lo que a su vez hace que los leucocitos circulantes se peguen a las clulas endoteliales y migren entre ellas hacia el sitio de infeccin, al cual son atrados por quimiocinas. La migracin de clulas hacia el tejido y sus acciones locales explican el dolor. Los principales tipos de clulas que se observan durante la fase inicial de una respuesta inflamatoria son macrfagos y neutrfilos; se reclutan grandes nmeros de estos ltimos hacia el tejido infectado e inflamado. De esta manera, los macrfagos y los neutrfilos tambin se conocen como clulas inflamatorias. Al igual que los macrfagos, los neutrfilos tienen receptores de superficie para constituyentes bacterianos comunes y para el complemento, y son las principales clulas que fagocitan y destruyen microorganismos invasores. El flujo de neutrfilos hacia adentro va seguido poco tiempo despus por monocitos, que rpidamente se diferencian hacia macrfagos, lo que refuerza y sostiene la respuesta inmunitaria innata. Ms lentamente, los eosinfilos tambin migran hacia tejidos inflamados y contribuyen tambin con la destruccin de los microorganismos invasivos.

Fig. 1-8. La infeccin desencadena una respuesta inflamatoria. Cuando los macrfagos encuentran bacterias u otros tipos de microorganismos en los tejidos liberan citocinas que aumentan la permeabilidad de los vasos sanguneos, lo que permite el paso de lquido y protenas hacia los tejidos. Tambin producen quimiocinas, que dirigen la migracin de neutrfilos hacia el sitio de infeccin. El grosor de las clulas endoteliales de la pared del vaso sanguneo tambin cambia, de manera que las clulas se adhieren a la pared y tienen la capacidad de desplazarse lentamente por la misma; se muestran primero neutrfilos y despus monocitos que entran al tejido desde un vaso sanguneo. La acumulacin de lquido y clulas en el sitio de infeccin causa el enrojecimiento, la tumefaccin, el calor y el dolor que se conocen en conjunto como inflamacin. Los neutrfilos y los macrfagos son las principales clulas inflamatorias. Ms tarde en una respuesta inmunitaria, los linfocitos activados tambin pueden contribuir a inflamacin.

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Captulo 1: Conceptos bsicos en inmunologa

Adems de destruir de modo directo agentes patgenos, la respuesta inmunitaria innata tiene consecuencias cruciales para el inicio de respuestas inmunitarias adaptativas, como se ve en seguida. Esto lo hace sobre todo mediante clulas dendrticas.

1-7

La activacin de clulas presentadoras de antgeno especializadas es un primer paso necesario para la induccin de inmunidad adaptativa

La induccin de una respuesta inmunitaria adaptativa empieza cuando una clula dendrtica inmadura ingiere un agente patgeno en el tejido infectado. Estas clulas fagocticas especializadas residen en casi todos los tejidos y, al igual que los macrfagos, tienen una vida prolongada en comparacin con otros leucocitos. Se originan en la mdula sea (seccin 1-3), y si bien todava no estn por completo maduras, migran a travs del torrente sanguneo hacia sus estaciones perifricas, donde buscan agentes patgenos en el ambiente local. Al igual que los macrfagos y los neutrfilos, las clulas dendrticas inmaduras portan receptores sobre su superficie que reconocen caractersticas comunes de muchos agentes patgenos, como lipopolisacrido bacteriano. Los componentes microbianos que se unen a estos receptores estimulan a la clula dendrtica para que fagocite al microorganismo patgeno y lo degrade en su interior. Las clulas dendrticas inmaduras tambin estn captando de manera continua material extracelular, incluso partculas de virus y bacterias, por medio del mecanismo de macropinocitosis independiente de receptor y, as, incluso, pueden internalizar y degradar agentes patgenos que sus receptores de superficie celular no detectan. De cualquier modo, la funcin principal de las clulas dendrticas no es destruir agentes patgenos, sino transportar antgenos de dichos agentes hacia rganos linfoides perifricos y ah presentarlos a linfocitos T. En el momento en que capta agentes patgenos y sus componentes, la clula dendrtica migra hacia tejidos linfoides perifricos, donde madura hacia una muy eficaz clula presentadora de antgeno. Despliega fragmentos de antgenos de agentes patgenos sobre su superficie y empieza tambin a producir protenas de superficie celular conocidas como molculas coestimuladoras que, como su nombre lo sugiere, proporcionan seales para actuar junto con antgeno para estimular al linfocito T para que prolifere y se diferencie hacia su forma por completo funcional final (fig. 1-9). Dado que las clulas B no quedan activadas por casi todos los antgenos sin la ayuda de clulas T auxiliares activadas, la activacin de linfocitos T vrgenes es una primera etapa esencial en casi todas las respuestas inmunitarias adaptativas. Las clulas dendrticas activadas tambin secretan citocinas que influyen sobre las respuestas inmunitarias, tanto innata como adaptativa, lo que hace a estas clulas guardabarreras esenciales que determinan si el sistema inmunitario responde a la presencia de agentes infecciosos, y cmo lo hace. La maduracin de las clulas dendrticas y su funcin fundamental en la presentacin de antgenos a clulas T vrgenes se consideran en el captulo 8.
Fig. 1-9. Las clulas dendrticas inician respuestas inmunitarias adaptativas. Las clulas dendrticas inmaduras residentes en un tejido captan agentes patgenos y sus antgenos mediante macropinocitosis y por medio de endocitosis mediada por receptor. Son estimuladas por reconocimiento de la presencia de agentes patgenos para que migren por los linfticos hacia ganglios linfticos regionales, donde llegan como clulas dendrticas no fagocticas por completo maduras que expresan tanto antgeno como las molculas coestimuladoras necesarias para activar a una clula T virgen que reconoce el antgeno, lo que estimula la proliferacin y diferenciacin de linfocitos. Las clulas dendrticas maduras activan a clulas T vrgenes en rganos linfoides, como ganglios linfticos
clulas T vrgenes

Las clulas dendrticas inmaduras residen en tejidos perifricos

Las clulas dendrticas migran por los vasos linfticos hacia ganglios linfticos regionales

macropinosoma clula dendrtica madura

clulas T activadas

ganglio linftico

Mdula del ganglio linftico

Principios de inmunidad innata y adaptativa

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1-8

El sistema inmunitario innato proporciona discriminacin inicial entre lo propio y lo extrao

Los macrfagos expresan receptores para muchos constituyentes microbianos receptor de manosa receptor de LPS (CD14)

Los sistemas de defensa de inmunidad innata son eficaces para combatir muchos agentes patgenos. Como quiera que sea, son restringidos al depender de un repertorio limitado e invariable de receptores para reconocer microorganismos. Los receptores de reconocimiento de agentes patgenos de los macrfagos, de los neutrfilos y de las clulas dendrticas reconocen molculas simples y modelos regulares de estructura molecular conocidos como patrones moleculares vinculados a patgenos (PAMP) que estn presentes en muchos microorganismos, no as en las clulas propias del cuerpo (fig. 1-10). Estos receptores se conocen en general como receptores de reconocimiento de patrones (PRR), y reconocen estructuras como oligosacridos, peptidoglucanos y lipopolisacridos con alto contenido de manosa en la pared celular bacteriana, y CpG DNA desmetilado, que son comunes a muchos agentes patgenos y se han conservado durante la evolucin. De esta manera, el sistema inmunitario innato tiene amplia capacidad para distinguir entre lo propio (el organismo) y lo extrao (agentes patgenos) y montar un ataque contra invasores. Al activarse por medio de sus receptores de reconocimiento de patrones, las clulas dendrticas inmaduras, que forman parte del sistema inmunitario innato, adquieren a su vez la capacidad de activar linfocitos vrgenes, como se coment en la seccin previa. De este modo, la respuesta inmunitaria adaptativa se inicia en esencia por un reconocimiento explcito de lo extrao por el sistema inmunitario innato. Los constituyentes comunes de agentes patgenos, reconocidos por medio de receptores de reconocimiento de patrones, por lo general son bastante distintos de los antgenos especficos para agente patgeno que son reconocidos por los linfocitos. El requerimiento de constituyentes microbianos que no son el antgeno para iniciar una respuesta inmunitaria adaptativa se reconoci experimentalmente mucho tiempo antes del descubrimiento de las clulas dendrticas y su manera de activacin. Se encontr que antgenos purificados, como protenas, a menudo no desencadenaban una respuesta inmunitaria en una inmunizacin experimental; es decir, no fueron inmungenos. Para obtener respuestas inmunitarias adaptativas a antgenos purificados, fue esencial aadir bacterias muertas o extractos bacterianos al antgeno. Este material adicional se llam un adyuvante, puesto que ayud a la respuesta al antgeno inmunizante (la palabra del latn adjuvare significa ayudar). Ahora se sabe que se necesitan adyuvantes, al menos en parte, para activar clulas dendrticas hacia un estado completo de presentacin de antgeno en ausencia de una infeccin. Encontrar adyuvantes idneos an es una parte importante de la preparacin de vacunas; en el Apndice I se describen formulaciones adyuvantes modernas. Los microorganismos pueden evolucionar con mayor rapidez que sus hospedadores, y esto puede explicar por qu las clulas y las molculas del sistema inmunitario innato slo reconocen estructuras moleculares que han permanecido sin cambios durante la evolucin. Como se observa a continuacin, el mecanismo de reconocimiento usado por los linfocitos de la respuesta inmunitaria adaptativa ha evolucionado para vencer las restricciones encaradas por el sistema inmunitario innato. Permite el reconocimiento de una diversidad de antgenos casi infinita, de modo que la respuesta inmunitaria puede dirigirse de manera especfica a cada agente patgeno.

TLR-2

TLR-4

receptor de glucano

receptor recolector

Fig. 1-10. Los macrfagos expresan varios receptores que les permiten reconocer diferentes agentes patgenos. Los macrfagos expresan diversos receptores, cada uno de los cuales tiene la capacidad de reconocer componentes especficos de microbios. Algunos, como los receptores de manosa y de glucano, y el receptor recolector, se unen a carbohidratos de la pared celular de bacterias, levaduras y hongos. Los receptores similares a citocinas pirgenas (TLR) son una importante familia de receptores de reconocimiento de patrones presentes en macrfagos y otras clulas inmunitarias, y tienen la capacidad de unirse a diferentes componentes microbianos; por ejemplo, TLR-2 se une a componentes de la pared celular de bacterias gramnegativas, mientras que TLR-4 se une a componentes de la pared celular de bacterias grampositivas. LPS: lipopolisacrido.

1-9

Los linfocitos activados por antgenos dan lugar a clonas de clulas efectoras especcas para antgeno que median la inmunidad adaptativa

En lugar de portar varios receptores diferentes, cada uno de los cuales reconoce una caracterstica diferente compartida por muchos agentes patgenos, un linfocito virgen porta receptores de antgeno especficos para una estructura qumica nica. No obstante, cada linfocito que surge a partir de los rganos linfoides centrales difiere de los otros en su especificidad de receptor. La diversidad se genera por medio de un mecanismo gentico singular que opera durante el desarrollo

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Captulo 1: Conceptos bsicos en inmunologa

Una clula progenitora nica da lugar a un gran nmero de linfocitos, cada uno con especicidad diferente

Eliminacin de linfocitos inmaduros en potencia autorreactivos por medio de delecin clonal

antgenos propios

antgenos propios

del linfocito en la mdula sea y el timo para generar millones de variantes de los genes que codifican para las molculas receptoras. Esto asegura que los linfocitos en el cuerpo porten en conjunto millones de especificidades de receptor de antgeno diferentes (el repertorio de receptores de linfocitos del individuo). Estos linfocitos estn pasando de modo continuo por un proceso parecido a la seleccin natural; slo los linfocitos que encuentran un antgeno al cual se une su receptor se activarn para proliferar y diferenciarse hacia clulas efectoras. Durante el decenio de 1950, Macfarlane Burnet propuso por vez primera este mecanismo selectivo para explicar porqu una persona produce anticuerpos contra slo los antgenos a los cuales queda expuesta. Burnet postul la preexistencia en el cuerpo de muchas clulas productoras de anticuerpos potenciales diferentes, cada una de las cuales tiene la capacidad para sintetizar anticuerpos de una especificidad diferente y despliega sobre su superficie una versin del anticuerpo unida a membrana: esto sirve como un receptor para el antgeno. En el momento de la unin a antgeno, la clula se activa para dividirse y para producir muchas descendientes idnticas, un proceso conocido como expansin clonal; esta clona de clulas idnticas ahora puede secretar anticuerpos clonotpicos con especificidad idntica a la del receptor de superficie que desencaden por vez primera la activacin y la expansin clonal (fig. 1-11). Burnet llam a esto la teora de la seleccin clonal de la produccin de anticuerpos.

Fondo comn de linfocitos vrgenes maduros

1-10

La seleccin clonal de linfocitos es el principio fundamental de la inmunidad adaptativa

antgeno extrao Proliferacin y diferenciacin de linfocitos especcos activados para formar una clona de clulas efectoras

Las clulas efectoras eliminan antgeno Fig. 1-11. Seleccin clonal. Cada progenitor linfoide da lugar a un nmero grande de linfocitos, cada uno de los cuales porta un receptor de antgeno distinto. Los linfocitos con receptores que se unen a antgenos propios ubicuos son eliminados antes de que maduren por completo, lo que asegura tolerancia de esos antgenos propios. Cuando un antgeno extrao interacta con el receptor sobre un linfocito virgen maduro, esa clula es activada y empieza a dividirse. Da lugar a una clona de progenie idntica; todos los receptores de la misma se unen al mismo antgeno. De este modo, se mantiene la especificidad para antgeno conforme la progenie prolifera y se diferencia hacia clulas efectoras. Una vez que estas clulas efectoras han eliminado el antgeno, la respuesta inmunitaria cesa, aunque se retienen algunos linfocitos para mediar memoria inmunitaria. Fig. 1-12. Los cuatro principios bsicos de la seleccin clonal.

Es notorio que en la poca en que Burnet formul su teora, nada se saba de los receptores de antgenos de los linfocitos; de hecho, la funcin de los linfocitos mismos an era oscura. Los linfocitos no ocuparon el centro del escenario sino hasta principios del decenio de 1960, cuando James Gowans descubri que la eliminacin de los linfocitos pequeos de ratas origin la prdida de todas las respuestas inmunitarias adaptativas conocidas. Estas respuestas inmunitarias se restablecieron con la restitucin de los linfocitos pequeos. Esto llev a percatarse de que los linfocitos deben ser las unidades de seleccin clonal, y sus particularidades biolgicas se convirtieron en el enfoque del nuevo campo de la inmunologa celular. La seleccin clonal de linfocitos con receptores diversos explic muy bien la inmunidad adaptativa, pero suscit un problema conceptual importante. Si los receptores de antgenos de los linfocitos se generan al azar durante el lapso de vida de un individuo, de qu manera se evita que los linfocitos reconozcan antgenos en los tejidos del cuerpo y los ataquen? A finales del decenio de 1940, Ray Owen haba mostrado que terneros gemelos diferentes desde el punto de vista gentico, con una placenta comn y, as, con una circulacin sangunea placentaria compartida, carecan de capacidad de respuesta inmunitaria, o eran tolerantes, a los tejidos del otro: no presentaban una respuesta inmunitaria uno contra

Postulados de la hiptesis de la seleccin clonal


Cada linfocito porta un tipo nico de receptor con especicidad nica La interaccin entre una molcula extraa y un receptor de linfocito capaz de unirse a esa molcula con anidad alta conduce a la activacin de linfocitos Las clulas efectoras diferenciadas derivadas de un linfocito activado portarn receptores de especicidad idntica a la de la clula original a partir de la cual se deriv ese linfocito Los linfocitos que portan receptores especcos para molculas propias ubicuas se eliminan a una etapa temprana del desarrollo de clulas linfoides y, por tanto, estn ausentes del repertorio de linfocitos maduros

Principios de inmunidad innata y adaptativa

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el otro. Despus, en 1953, Peter Medawar mostr que la exposicin de ratones a tejidos extraos durante el desarrollo embrionario hizo que adquirieran tolerancia inmunitaria a estos tejidos. Burnet propuso que los linfocitos en desarrollo que son en potencia autorreactivos se eliminan antes de que puedan madurar, un proceso conocido como delecin clonal. Desde entonces ha resultado estar en lo correcto tambin en esto, aunque los mecanismos de la tolerancia inmunitaria an se estn resolviendo, como se observar cuando se comente el desarrollo de los linfocitos en el captulo 7. La seleccin clonal de linfocitos es el principio nico de mayor importancia en la inmunidad adaptativa. En la figura 1-12 se listan sus cuatro postulados bsicos. El ltimo de los problemas planteados por la teora de la seleccin clonal (de qu modo se genera la diversidad de los receptores de antgeno de linfocitos) se resolvi durante el decenio de 1970, cuando los avances en biologa molecular hicieron posible clonar los genes que codifican para molculas de anticuerpos.

1-11

La estructura de la molcula de anticuerpo ilustra el enigma fundamental de la inmunidad adaptativa

Como se coment, los anticuerpos son la forma secretada del receptor de antgeno de clulas B. Dado que se producen en cantidades muy grandes en respuesta a antgeno, los anticuerpos pueden estudiarse por medio de tcnicas bioqumicas tradicionales; de hecho, su estructura se entendi mucho tiempo antes de que la tecnologa de DNA recombinante hiciera posible estudiar los receptores de antgeno unidos a membrana de clulas B. El dato asombroso que surgi a partir de los estudios bioqumicos fue que las molculas de anticuerpo estn compuestas de dos regiones. Una de ellas es una regin constante que slo adopta una de cuatro o cinco formas distinguibles desde el punto de vista bioqumico; la otra es una regin variable que puede estar compuesta de una variedad al parecer infinita de diferentes secuencias de aminocidos, lo que forma estructuras sutilmente distintas que permiten a los anticuerpos unirse de manera especfica a una variedad de antgenos igual de vasta. Esta divisin se ilustra en la figura 1-13, en la cual el anticuerpo se describe como una molcula en forma de Y. La regin variable determina la especificidad de unin a antgeno del anticuerpo. Hay dos regiones variables idnticas en una molcula de anticuerpo y, as, tiene dos sitios de unin a antgeno idnticos. La regin constante determina la funcin efectora del anticuerpo: es decir, de qu modo el anticuerpo elimina el antgeno una vez que est unido. Cada molcula de anticuerpo tiene un eje de simetra de dos pliegues y est compuesto de dos cadenas pesadas idnticas y dos cadenas ligeras iguales (fig. 1-13, donde las cadenas pesadas se muestran de color verde, y las ligeras, de color

Estructura esquemtica de una molcula de anticuerpo regin variable (sitio de unin a antgeno)

Estructura esquemtica del receptor de clula T

regin variable (sitio de unin antgeno) regin constante

regin constante (funcin efectora)

Fig. 1-13. Estructura esquemtica de receptores de antgeno. Panel izquierdo: una molcula de anticuerpo, secretada por clulas B activadas, tiene una molcula efectora de unin a antgeno. Una versin de esta molcula unida a membrana acta como el receptor de antgeno de clulas B (que no se muestra). Un anticuerpo est compuesto de dos cadenas pesadas (verde), y dos ligeras (amarillo), idnticas. Cada cadena tiene una parte constante (azul sombreado) y una parte variable (rojo sombreado). Cada extremo de la molcula de anticuerpo est formado por una cadena ligera y una pesada, de manera que las partes variables de las dos cadenas se unen, lo que crea una regin variable que contiene el sitio de unin a antgeno. El tallo se forma a partir de las partes constantes de las cadenas pesadas, y adopta un nmero limitado de formas. Esta regin constante participa en la eliminacin del antgeno unido. Panel derecho: un receptor de antgeno de clula T. ste tambin est compuesto de dos cadenas, una cadena (amarillo) y una cadena (verde); cada una tiene una parte variable y una parte constante. Al igual que con la molcula de anticuerpo, las partes variables de las dos cadenas crean una regin variable, que forma el sitio de unin a antgeno. El receptor de clula T no se produce en una forma secretada.

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Captulo 1: Conceptos bsicos en inmunologa

Segmentos de gen heredados

La combinacin nica de segmentos queda unida por reordenamiento de gen somtico

Las cadenas forman pares para dar un receptor nico para cada linfocito

amarillo). Las cadenas tanto pesadas como ligeras tienen regiones variable y constante; las regiones variables de una cadena pesada y de una ligera se combinan para formar un sitio de unin a antgeno, de manera que ambas cadenas contribuyen a la especificidad de unin a antgeno de la molcula de anticuerpo. La estructura de las molculas de anticuerpos se describe en detalle en el captulo 3, y las propiedades funcionales de anticuerpos conferidas por sus regiones constantes se consideran en los captulos 4 y 9. Por el momento, slo se abordarn las propiedades de molculas de anticuerpo como receptores de antgeno, y de qu modo se genera la diversidad de las regiones variables. El receptor de clulas T para antgeno muestra muchas similitudes con el receptor de antgeno de clulas B, y las dos molculas estn claramente relacionadas entre s desde el punto de vista evolutivo; de hecho, el receptor de clula T semeja de manera estrecha una parte de la molcula de anticuerpo. Sin embargo, hay diferencias importantes entre las dos molculas que, como se observar, se relacionan con sus diferentes funciones dentro del sistema inmunitario. El receptor de clulas T (fig. 1-13) est compuesto de dos cadenas a grandes rasgos de igual tamao, llamadas las cadenas y del receptor de clulas T, cada una de las cuales abarca la membrana de la clula T. Cada cadena tiene una regin variable y una regin constante, y la combinacin de las regiones variables de las cadenas y crea un sitio nico para la unin de antgeno. Esta estructura se describe en detalle en el captulo 3, y el modo en el cual se introduce diversidad en las regiones variables se comenta en el captulo 4. Como se observar, la organizacin de los genes que codifican para los receptores de antgeno, y la manera en la cual se introduce diversidad para crear un sitio de unin a antgeno singular es en esencia la misma tanto para el receptor de clulas B como para el receptor de clulas T. Empero, hay una diferencia crucial en el modo en el cual los receptores de clulas B y de clulas T se unen a antgenos; el receptor de clulas T no se une de manera directa a las molculas de antgeno sino que, en cambio, reconoce fragmentos de antgenos unidos sobre la superficie de otras clulas. La naturaleza exacta del antgeno reconocido por clulas T, y el modo en que los antgenos se fragmentan y se transportan hacia las superficies celulares, son el tema del captulo 5. Otra diferencia de la molcula de anticuerpo es que no hay una forma secretada del receptor de clula T; la funcin del receptor es solamente emitir una seal a la clula T de que se ha unido a su antgeno, y los efectos inmunitarios subsiguientes dependen de las acciones de las clulas T en s (cap. 8).

1-12
Fig. 1-14. La diversidad de receptores de antgeno de linfocitos se genera por medio de reordenamientos de segmento de gen somticos. Diferentes partes de las regiones variables de los receptores de antgeno son codificadas por juegos de segmentos de gen. Durante el desarrollo de un linfocito, un miembro de cada juego de segmentos de gen se une al azar a los otros por medio de un proceso irreversible de recombinacin de DNA. Los segmentos de gen yuxtapuestos conforman un gen completo que codifica para la parte variable de la cadena del receptor y es singular para esa clula. Este reordenamiento al azar se repite para el juego de segmentos de gen que codifican para la otra cadena. Los genes reordenados se expresan para producir los dos tipos de cadenas de polipptidos. stas se unen para formar un receptor de antgeno nico sobre la superficie del linfocito. Cada linfocito porta muchas copias de su receptor singular.

Cada linfocito en desarrollo genera un receptor de antgeno singular por medio del reordenamiento de sus segmentos de gen, que codican un receptor

De qu manera un nmero finito de genes codifica receptores de antgenos con un rango de especificidades casi infinito? Esta pregunta se respondi en 1976, cuando Susumu Tonegawa descubri que los genes que codifican regiones variables de inmunoglobulina se heredan como juegos de segmentos de gen, cada uno de los cuales codifica una parte de la regin variable de una de las cadenas polipeptdicas de inmunoglobulina (fig. 1-14). Durante el desarrollo de la clula B en la mdula sea, estos segmentos de gen se unen de modo irreversible mediante recombinacin de DNA y forman un tramo de DNA que codifica una regin variable completa. Puesto que hay muchos segmentos de gen diferentes en cada juego, y diferentes segmentos de gen se unen entre s en diferentes clulas, cada clula genera genes singulares para las regiones variables de las cadenas pesadas y ligeras de la molcula de inmunoglobulina. Una vez que estos eventos de recombinacin han tenido xito en la produccin de un receptor funcional, se impide el reordenamiento adicional. De esta manera, cada linfocito slo expresa una especificidad de receptor. Este mecanismo tiene tres consecuencias importantes. En primer lugar, permite a un nmero limitado de segmentos de gen generar un vasto nmero de protenas diferentes. En segundo lugar, dado que cada clula ensambla un juego diferente de segmentos de gen, cada clula expresa una especificidad de receptor

Principios de inmunidad innata y adaptativa

17

singular. En tercer lugar, puesto que el reordenamiento de segmento de gen comprende un cambio irreversible del DNA de una clula, toda la progenie de esa clula heredar genes que codifican la misma especificidad de receptor. Este orden general ms tarde tambin se confirm para los genes que codifican el receptor de antgeno en las clulas T. La diversidad potencial de los receptores de linfocito generados de este modo es enorme. Apenas algunos cientos de segmentos de gen pueden combinarse de distintas maneras para generar miles de cadenas de receptor diferentes. La diversidad de los receptores de linfocito se amplifica ms por la diversidad de unin, creada al aadir o sustraer nucletidos en el proceso de unin de los segmentos de gen, y por el hecho de que cada receptor se hace al parear dos cadenas variables diferentes, cada una codificada por juegos distintos de segmentos de gen. De este modo, 1 000 cadenas diferentes de cada tipo podran generar 106 receptores de antgeno distintos por medio de esta diversidad de combinaciones. De esta manera, una pequea cantidad de material gentico puede codificar una diversidad de receptores en realidad asombrosa. Slo un subgrupo de estas especificidades de receptor generadas al azar sobrevive a los procesos selectivos que forman el repertorio de linfocitos perifricos; con todo, en un ser humano en cualquier momento hay linfocitos de al menos 108 especificidades diferentes. stas proporcionan la materia prima sobre la cual acta la seleccin clonal.

1-13

Las inmunoglobulinas se unen a una amplia variedad de estructuras qumicas, mientras que el receptor de clula T se especializa en reconocer antgenos extraos como fragmentos peptdicos unidos a protenas del complejo mayor de histocompatibilidad
eptopo antgeno

En principio, el sistema adaptativo puede reconocer casi cualquier estructura qumica como un antgeno, pero los antgenos habituales encontrados en una infeccin son las protenas, las glucoprotenas y los polisacridos de agentes patgenos. Un receptor de antgeno, o un anticuerpo individual, reconoce una pequea parte de la estructura molecular de una molcula antignica, que se conoce como determinante antignico o eptopo (fig. 1-15). Los antgenos macromoleculares, como protenas y glucoprotenas, por lo general tienen muchos eptopos diferentes que pueden ser reconocidos por receptores de antgeno diferentes. Los receptores de antgeno de las clulas B y de las T estn adaptados para reconocer antgenos de dos modos, lo que refleja las participaciones que sus clulas efectoras finalmente tendrn en la destruccin de agentes patgenos. Las clulas B estn especializadas para reconocer los antgenos de superficie sobre agentes patgenos que viven fuera de clulas, y para diferenciarse hacia clulas plasmticas efectoras que secretan anticuerpos para dirigirse a estos agentes patgenos. De esta manera, los receptores de clulas B y sus homlogos anticuerpos tienen la capacidad de unirse a una amplia variedad de estructuras moleculares. Por otra parte, las clulas T efectoras tienen que afrontar agentes patgenos que han entrado a clulas hospedadoras y tienen que ayudar a activar clulas B. Para desempear estas funciones, el receptor de clulas T est especializado para reconocer antgenos que se han generado dentro de clulas y que se estn desplegando sobre su superficie. Las propiedades de reconocimiento del receptor de clula T reflejan esto: slo reconocen un tipo de antgeno (pptidos que se han producido en otra clula hospedadora mediante la desintegracin de protenas y que luego se despliegan sobre la superficie de la clula). Adems, los pptidos slo se reconocen si estn unidos a un tipo particular de protena de superficie celular. Estas son las glucoprotenas de membrana conocidas como molculas del MHC, que se codifican en una agrupacin de genes llamados el complejo mayor de histocompatibilidad, cuya sigla es MHC. De este modo, el antgeno reconocido por receptores de clulas T es un complejo de un antgeno pptido extrao y una molcula del MHC (fig. 1-16). En los captulos 3 y 5, se describe de qu manera estos antgenos compuestos son reconocidos por receptores de clulas T y cmo se generan, respectivamente.

anticuerpo

Fig. 1-15. Los antgenos son las molculas reconocidas por la respuesta inmunitaria, mientras que los eptopos son sitios dentro de antgenos a los cuales se unen los receptores de antgeno. Los antgenos pueden ser macromolculas complejas como protenas, segn se muestra en amarillo. Casi todos los antgenos son de mayor tamao que los sitios en el anticuerpo o el receptor de antgeno al cual se unen, y la porcin real del antgeno que est unida se conoce como el determinante antignico, o eptopo, para ese receptor. Los antgenos grandes, como las protenas, pueden contener ms de un eptopo (indicado en rojo y azul) y, as, pueden unirse a diferentes anticuerpos.

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Captulo 1: Conceptos bsicos en inmunologa

Los anticuerpos se unen a eptopos desplegados sobre la supercie de antgenos

Los eptopos reconocidos por receptores de clulas T a menudo estn enterrados

El antgeno primero se debe romper hacia fragmentos de pptido

El pptido eptopo se une a una molcula propia, una molcula del MHC

El receptor de clula T se une a un complejo de molcula del MHC y pptido eptopo

TCR pptido eptopo molcula del MHC molcula del MHC

Fig. 1-16. Un anticuerpo se une a un antgeno de modo directo, mientras que un receptor de clula T se une a un complejo de fragmento de antgeno y molcula propia. Los anticuerpos (primer panel) se unen de manera directa a sus antgenos y reconocen eptopos que forman caractersticas de superficie del antgeno. En cambio, los receptores de clulas T pueden reconocer eptopos que estn enterrados dentro de antgenos y no se pueden reconocer de modo directo (segundo panel). Estos antgenos deben degradarse primero mediante proteinasas (tercer panel), y el eptopo pptido se debe liberar hacia una molcula propia, llamada una molcula del MHC (cuarto panel). Es en esta forma, como un complejo de pptido y molcula del MHC, que los antgenos son reconocidos por receptores de clulas T (quinto panel).

1-14

El desarrollo y la supervivencia de los linfocitos estn determinados por seales recibidas por medio de sus receptores de antgeno

Igual de asombrosa que la generacin de millones de receptores de antgeno diferentes, es la conformacin de este repertorio durante el desarrollo de linfocitos y el mantenimiento de un extenso repertorio en la periferia. De qu modo se mantienen receptores en potencia tiles mientras que los que podran reaccionar contra los antgenos propios de un individuo se eliminan? De qu manera se mantienen relativamente constantes los nmeros de linfocitos perifricos y los porcentajes de clulas B y de clulas T? La respuesta parece ser que durante todo su lapso de vida, desde su desarrollo en los rganos linfoides centrales en adelante, la supervivencia de un linfocito depende de seales recibidas mediante su receptor de antgeno. Si un linfocito no recibe esas seales de supervivencia, muere por medio de una forma de suicidio celular llamado apoptosis o muerte celular programada. Los linfocitos que reaccionan fuertemente contra antgenos propios se eliminan durante el desarrollo por medio de delecin clonal, como lo predijo la teora de seleccin clonal emitida por Burnet, antes de que maduren hacia una etapa en la cual podran infligir dao. En cambio, una falta completa de seales provenientes del receptor de antgeno durante el desarrollo tambin puede llevar a muerte celular. Adems, si un receptor no se usa en el transcurso de un tiempo relativamente breve despus de su ingreso al repertorio en la periferia, la clula que lo porta muere, lo que deja lugar para nuevos linfocitos con receptores diferentes. De este modo, los receptores autorreactivos se eliminan, y los receptores se prueban para asegurar que son en potencia funcionales. En el captulo 7 se examinan los mecanismos que conforman y mantienen el repertorio de receptores de linfocitos. La apoptosis (trmino derivado de una palabra griega que significa la cada de las hojas de los rboles) es un medio general para regular el nmero de clulas en el cuerpo. Se encarga, por ejemplo, de la muerte y el desprendimiento de clulas epiteliales cutneas e intestinales viejas y del recambio de clulas hepticas. Cada da la mdula sea produce millones de neutrfilos, monocitos, eritrocitos y linfocitos nuevos, y esta produccin debe equilibrarse por medio de una prdida igual. Casi todos los leucocitos tienen vida relativamente breve y mueren por apoptosis. Las clulas que mueren son fagocitadas y degradadas en el hgado y el bazo por macrfagos especializados.

1-15

Los linfocitos encuentran antgenos en los rganos linfoides perifricos y responden a los mismos

Los agentes patgenos pueden entrar al cuerpo por medio de muchas vas y establecer una infeccin en cualquier lugar en los tejidos, mientras que en circunstancias normales los linfocitos slo se encuentran en la sangre, la linfa y los rganos linfoides. Entonces, cmo se renen? Los antgenos y los linfocitos finalmente se encuentran unos a otros en los rganos linfoides perifricos (los gan-

Principios de inmunidad innata y adaptativa

19

glios linfticos, el bazo y los tejidos linfoides de las mucosas) (fig. 1-7). Los linfocitos indiferenciados maduros recirculan continuamente por estos tejidos, a los cuales los antgenos de agentes patgenos son transportados desde sitios de infeccin, principalmente por medio de clulas dendrticas. Los rganos linfoides perifricos estn especializados para atrapar clulas dendrticas que portan antgeno y para facilitar el inicio de respuestas inmunitarias adaptativas. Los tejidos linfoides perifricos estn compuestos de agregaciones de linfocitos en un armazn de clulas del estroma que no son leucocitos, que proporcionan la organizacin estructural bsica del tejido y emiten seales de supervivencia para ayudar a sostener la vida de los linfocitos. Adems de los linfocitos, los rganos linfoides perifricos tambin contienen macrfagos y clulas dendrticas residentes. Cuando ocurre una infeccin en un tejido como la piel, el antgeno libre y las clulas dendrticas que portan antgeno viajan desde el sitio de infeccin a travs de los vasos linfticos aferentes hacia los ganglios linfticos de drenaje (fig. 1-17), tejidos linfoides perifricos donde activan linfocitos especficos para antgeno. Los linfocitos activados luego pasan por un periodo de proliferacin y diferenciacin, despus del cual deben abandonar los ganglios linfticos como clulas efectoras por medio del vaso linftico eferente. ste finalmente los regresa al torrente sanguneo (fig. 1-7), que luego los transporta hacia los tejidos donde actuarn. Todo este proceso dura aproximadamente cuatro a seis das desde el momento en que se reconoce el antgeno, lo que significa que una respuesta inmunitaria adaptativa a un antgeno no encontrado antes no se hace efectiva sino hasta alrededor de una semana despus de la infeccin. Los linfocitos indiferenciados que no reconocen su antgeno tambin salen a travs del vaso linftico eferente y son regresados a la sangre, desde la cual siguen recirculando a travs de tejidos linfoides hasta que reconocen antgeno o mueren. Los ganglios linfticos son rganos linfoides muy organizados localizados en los puntos de convergencia de vasos del sistema linftico, que es el extenso sistema que recolecta lquido extracelular desde los tejidos y lo regresa a la sangre (fig. 1-7). Este lquido extracelular se produce de manera continua por medio de filtracin desde la sangre, y se llama linfa. La linfa fluye desde los tejidos perifricos bajo la presin ejercida por su produccin continua, y se transporta por vasos linfticos. Vlvulas unidireccionales en los vasos linfticos evitan un flujo inverso, y los movimientos de una parte del cuerpo en relacin con otra son importantes para impulsar la linfa. Los vasos linfticos aferentes drenan lquido desde los tejidos y transportan agentes patgenos y clulas que portan antgeno desde tejidos infectados hacia los ganglios linfticos (fig. 1-18). Los antgenos libres simplemente se difunden a travs del lquido extracelular hacia el ganglio linftico, mientras que las clulas dendrticas migran de modo activo hacia el ganglio linftico bajo la influencia de quimiocinas quimiotcticas. Las mismas quimiocinas tambin atraen linfocitos desde la sangre, y stos entran a los ganglios linfticos al pasar a travs de las paredes de vasos sanguneos especializados llamados vnulas endoteliales altas (HEV). En los ganglios linfticos, los linfocitos B estn localizados en folculos, que forman la corteza externa del ganglio linftico; las clulas T estn distribuidas de manera ms difusa en las reas paracorticales circundantes, tambin denominadas la corteza profunda o zonas de clulas T (fig. 1-18). Los linfocitos que migran desde la sangre hacia ganglios linfticos entran en las reas paracorticales primero y, dado que son atrados por las mismas quimiocinas, las clulas dendrticas presentadoras de antgeno y los macrfagos tambin quedan localizados ah. El antgeno libre que se difunde a travs del ganglio linftico puede quedar atrapado en estas clulas dendrticas y macrfagos. Esta yuxtaposicin de antgeno, clulas presentadoras de antgeno y clulas T indiferenciadas crea un ambiente ideal en la zona de clulas T en el cual las clulas T indiferenciadas pueden unirse a su antgeno y, as, quedar activadas. Como se mencion, la activacin de clulas B generalmente no slo requiere antgeno, que se une al receptor de clula B, sino tambin la cooperacin de clulas T auxiliares, un tipo de clula T efectora (seccin 1-4). La organizacin del ganglio linftico asegura que antes de entrar a los folculos, las clulas B indiferenciadas

Los linfocitos y la linfa regresan a la sangre mediante el conducto torcico

Los linfocitos vrgenes entran a los ganglios linfticos desde la sangre

corazn

ganglio linftico

tejido perifrico infectado

Antgenos provenientes de sitios de infeccin llegan a los ganglios linfticos por medio de los linfticos
Fig. 1-17. Los linfocitos circulantes encuentran antgeno en rganos linfoides y perifricos. Los linfocitos indiferenciados recirculan constantemente por el tejido linfoide perifrico, aqu ilustrado como un ganglio linftico poplteo, un ganglio linftico situado por detrs de la rodilla. En caso de una infeccin en un pie, ste ser el ganglio linftico de drenaje, donde los linfocitos pueden encontrar sus antgenos especficos y quedar activados. El sistema linftico regresa hacia el torrente sanguneo a los linfocitos tanto activados como no activados.

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Captulo 1: Conceptos bsicos en inmunologa

Fig. 1-18. Organizacin de un ganglio linftico. Como se muestra en el diagrama de la izquierda, de un corte longitudinal de un ganglio linftico, este ltimo consta de una corteza ms externa y una mdula interna. La corteza est compuesta de una corteza externa de clulas B, organizadas hacia folculos linfoides, y reas profundas, o paracorticales, compuestas principalmente de clulas T y clulas dendrticas. Cuando est en proceso una respuesta inmunitaria, algunos de los folculos contienen reas centrales de intensa proliferacin de clulas B, llamadas centros germinales, y se conocen como folculos linfoides secundarios. Estas reacciones son muy notorias, pero a la postre se extinguen como centros germinales senescentes. La linfa que drena desde los espacios extracelulares del cuerpo transporta antgenos en clulas dendrticas fagocticas y macrfagos fagocticos desde los tejidos hacia el ganglio linftico por medio de los linfticos aferentes. stos migran de manera directa desde los senos hacia las partes celulares del ganglio. La linfa sale por los linfticos eferentes en la mdula. La mdula consta de cuerdas de macrfagos y clulas plasmticas secretoras de anticuerpo conocidas como las cuerdas medulares. Los linfocitos vrgenes entran al ganglio desde el torrente sanguneo a travs de vnulas poscapilares especializadas (que no se muestran) y salen con la linfa a travs del linftico eferente. La microscopia ptica muestra un corte transversal a travs de un ganglio linftico, con folculos prominentes que contienen centros germinales. Aumento 7. Fotografa cortesa de N. Rooney.

pasen a travs de las zonas de clulas T, donde pueden encontrar tanto su antgeno como sus clulas T auxiliares cooperadoras, y quedar activadas. Algunos de los folculos de clulas B incluyen centros germinales, donde las clulas B activadas estn proliferando intensamente y diferencindose hacia clulas plasmticas. En seres humanos, el bazo es un rgano del tamao de un puo, situado justo por detrs del estmago (fig. 1-7). Carece de conexin directa con el sistema linftico; en lugar de eso, rene antgeno a partir de la sangre y participa en respuestas inmunitarias a agentes patgenos transportados por la sangre. Los linfocitos entran al bazo y salen del mismo por medio de vasos sanguneos. El bazo tambin rene eritrocitos senescentes y los elimina. Su organizacin se muestra de modo esquemtico en la figura 1-19. Casi todo el bazo est compuesto de pulpa roja, el sitio de eliminacin de eritrocitos. Los linfocitos rodean las arteriolas que corren a travs del bazo, lo que forma reas aisladas de pulpa blanca. La vaina de linfocitos alrededor de una arteriola se llama la vaina linfoide periarteriolar (PALS) y contiene muchas clulas T. Hay folculos linfoides a intervalos a lo largo de esta ltima, y stos contienen principalmente clulas B. Una llamada zona marginal rodea el folculo; tiene pocas clulas T, muchos macrfagos, y una poblacin de clulas B residentes, no circulantes, conocidas como clulas B de la zona marginal, acerca de la cual se sabe poco; se comentan en el captulo 7. Los microbios, antgenos solubles y complejos de antgeno:anticuerpo transportados por la sangre son filtrados desde la sangre por macrfagos y clulas dendrticas inmaduras dentro de la zona marginal. Al igual que con la migracin de clulas dendrticas inmaduras desde los tejidos perifricos hacia las reas de clulas T de los ganglios linfticos, cuando las clulas dendrticas en las zonas marginales esplnicas captan antgenos y quedan activadas, migran hacia las reas de clulas T del bazo, donde pueden presentar a clulas T los antgenos que portan. Casi todos los agentes patgenos entran al cuerpo a travs de las mucosas, y stos tambin quedan expuestos a una vasta carga de otros antgenos potenciales provenientes del aire, los alimentos y la flora microbiana natural del cuerpo. Las mucosas estn protegidas por un extenso sistema de tejidos linfoides conocidos en general como el sistema inmunitario de mucosas o tejido linfoide relacionado con la mucosa (MALT). En conjunto, se estima que el sistema inmunitario de mucosas contiene tantos linfocitos como el resto del cuerpo, y forman un grupo especializado de clulas que obedecen reglas de recirculacin que difieren un poco de las que operan en los otros rganos linfoides perifricos. El tejido linfoide relacionado con el intestino (GALT) comprende las amgdalas, las adenoides, el apndice y estructuras especializadas llamadas placas de Peyer en el

Un ganglio linftico folculo linfoide primario (en su mayor parte clulas B) cuerdas medulares (macrfagos y clulas plasmticas) seno medular arteria vena vaso linftico eferente centro germinal senescente centro germinal seno marginal

seno cortical folculo linfoide secundario (con centro germinal) vaso linftico aferente

rea paracortical (en su mayor parte clulas T)

Principios de inmunidad innata y adaptativa

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intestino delgado, y renen antgeno desde las superficies epiteliales del tubo digestivo. En las placas de Peyer, que son el ms importante y ms organizado de estos tejidos, el antgeno es recolectado por medio de clulas epiteliales especializadas llamadas clulas de los micropliegues o clulas M (fig. 1-20). Los linfociEl bazo

cpsula

pulpa roja

pulpa blanca

vena trabecular

seno venoso

RP PFZ MZ Co

Corte transversal de la pulpa blanca

arteria trabecular

Corte longitudinal de la pulpa blanca

GC

corona de clulas B centro germinal zona marginal zona perifolicular

PALS PFZ

vaina linfoide periarteriolar arteriola central pulpa roja

Fig. 1-19. Organizacin de los tejidos linfoides del bazo. El esquema superior derecho muestra que el bazo consta de pulpa roja (reas de color rosado en el panel superior), que es un sitio de destruccin de eritrocitos, entremezclada con la pulpa blanca. Una ampliacin de un corte pequeo de un bazo humano (centro) muestra la disposicin de reas separadas de pulpa blanca (amarillo y azul) alrededor de arteriolas centrales. Casi toda la pulpa blanca se muestra en corte transversal, con dos porciones en corte longitudinal. Los dos esquemas inferiores muestran agrandamientos de un corte transversal (esquema inferior central) y corte longitudinal (esquema inferior derecho) de la pulpa blanca. La vaina linfoide periarteriolar (PALS), constituida de clulas T, rodea a la arteriola central. Los linfocitos y las clulas dendrticas cargadas de antgeno se unen aqu. Los folculos constan principalmente de clulas B; en los folculos secundarios un centro germinal est rodeado por una corona de clulas B. Los folculos estn rodeados por una llamada zona marginal de linfocitos.

En cada rea de pulpa blanca, sangre que porta tanto linfocitos como antgeno fluye desde una arteria trabecular hacia una arteriola central. Desde esta arteriola de menor calibre se ramifican vasos sanguneos, y finalmente terminan en una zona especializada en el bazo humano llamada la zona perifolicular (PFZ), que rodea a cada zona marginal. A continuacin, las clulas y el antgeno pasan hacia la pulpa blanca a travs de espacios abiertos llenos de sangre en la zona perifolicular. La microfotografa ptica inferior izquierda muestra un corte transversal de la pulpa blanca del bazo humano inmunoteida para clulas B maduras. Tanto el folculo como la PALS estn rodeados por la zona perifolicular. La arteriola perifolicular surge en la PALS (punta de flecha en la parte inferior) atraviesa el folculo, pasa por la zona marginal y se abre hacia la zona perifolicular (puntas de flecha superiores). Co, corona de clulas B folicular; GC, centro germinal; MZ, zona marginal; RP, pulpa roja; puntas de flecha, arteriola central. Fotografa cortesa de N.M. Milicevic.

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Captulo 1: Conceptos bsicos en inmunologa

Fig. 1-20. Organizacin de la placa de Peyer en la mucosa intestinal. Como se muestra en el diagrama de la izquierda, una placa de Peyer contiene muchos folculos de clulas B con centros germinales. Las clulas T ocupan las reas entre folculos, las reas dependientes de clulas T. La capa entre el epitelio de superficie y los folculos se conoce como el domo subepitelial, y contiene muchas clulas dendrticas, clulas T y clulas B. Las placas de Peyer carecen de linfticos aferentes, y el antgeno entra de modo directo desde el intestino a travs de un epitelio especializado formado por las llamadas clulas de los micropliegues (M). Si bien este tejido tiene aspecto muy diferente al de otros rganos linfoides, se mantienen las divisiones bsicas. Al igual que en los ganglios linfticos, los linfocitos entran a las placas de Peyer desde la sangre a travs de las paredes de vnulas endoteliales altas (que no se muestran), y salen por medio del linftico eferente. La microfotografa ptica en el panel a muestra un corte a travs de una placa de Peyer en la pared del intestino de ratn. Puede observarse que la placa de Peyer yace por debajo de los tejidos epiteliales. GC, centro germinal; TDA, rea dependiente de clulas T. El panel b es una microfotografa electrnica de barrido del epitelio relacionado con folculo encerrado en un cuadro en (a), que muestra las clulas M, que carecen de las microvellosidades y la capa mucosa presentes en las clulas epiteliales normales. Cada clula M se observa como un rea hundida en la superficie epitelial. El panel c es una vista con mayor aumento del rea encerrada en un cuadro en (b), que muestra la superficie irregular caracterstica de una clula M. Las clulas M son el sitio de entrada para muchos agentes patgenos y otras partculas. (a) tincin con hematoxilina y eosina. Aumento 100; (b) 5 000; (c) 23 000. Fuente: Mowat, A., Viney, J.: Immunol. Rev. 1997, 156:145-166.

tos forman un folculo que consta de un domo central grande de linfocitos B rodeado por nmeros ms pequeos de linfocitos T. Las clulas dendrticas residentes dentro de la placa de Peyer presentan el antgeno a linfocitos T. Los linfocitos entran a las placas de Peyer desde la sangre y salen a travs de vasos linfticos eferentes. Los linfocitos efectores generados en placas de Peyer viajan a travs del sistema linftico y hacia el torrente sanguneo, desde donde se diseminan de regreso hacia tejidos de mucosa para llevar a cabo sus acciones efectoras. Hay agregados similares pero ms difusos de linfocitos en las vas respiratorias y en otras mucosas: en las vas respiratorias hay tejido linfoide relacionado con la nariz (NALT) y tejido linfoide relacionado con los bronquios (BALT). Al igual que las placas de Peyer, estos tejidos linfoides de mucosas tambin estn cubiertos por clulas M, a travs de las cuales pueden pasar los microbios y los antgenos inhalados que quedan atrapados en el moco que cubre las vas respiratorias. El sistema inmunitario de mucosa se comenta en el captulo 11. Si bien tienen aspecto muy diferente, los ganglios linfticos, el bazo y los tejidos linfoides relacionados con mucosa comparten la misma estructura bsica. Operan con base en el mismo principio; atrapan antgenos y clulas presentadoras de antgeno provenientes de sitios de infeccin y habilitan a estas ltimas para que presenten antgeno a linfocitos pequeos migratorios, lo que induce respuestas inmunitarias adaptativas. Los tejidos linfoides perifricos tambin proporcionan seales de sostn a linfocitos que no encuentran de inmediato su antgeno especfico, de manera que sobreviven y siguen recirculando. Puesto que participan en el inicio de respuestas inmunitarias adaptativas, los tejidos linfoides perifricos no son estructuras estticas, sino que varan de modo bastante notorio, dependiendo de si hay o no infeccin. Los tejidos linfoides de mucosas difusos pueden aparecer en respuesta a infeccin y luego desaparecer, mientras que la estructura de los tejidos organizados cambia de una manera ms definida durante una infeccin. Por ejemplo, los folculos de clulas B de los ganglios linfticos se expanden a medida que los linfocitos B proliferan para formar centros germinales (fig. 1-18), y todo el ganglio linftico se agranda, un fenmeno familiarmente conocido como ganglios hinchados. Por ltimo, pueden encontrarse poblaciones especializadas de linfocitos distribuidas en sitios particulares del cuerpo ms que encontrarse en tejidos linfoides organizados. Esos sitios comprenden el hgado y la lmina propia del intestino, as como la base del revestimiento epitelial del intestino, los epitelios reproductores y, en ratones pero no en seres humanos, la epidermis. Estas poblaciones de linfocitos parecen tener importancia en la proteccin de estos tejidos contra infeccin, y se describen mejor en los captulos 7 y 11.

Las placas de Peyer estn cubiertas por una capa epitelial que contiene clulas especializadas llamadas clulas M que tienen membrana irregular caracterstica
domo subepitelial epitelio relacionado con folculo clula M

vellosidad

domo

centro germinal

clulas T folculo linfticos eferentes

TDA a

GC c

Clula M

Principios de inmunidad innata y adaptativa

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1-16

La activacin de linfocitos requiere interaccin con otras clulas y con antgenos

Como se menciona en las secciones 1-3 y 1-6, los tejidos linfoides perifricos se especializan no slo en atrapar clulas fagocticas que han ingerido antgenos, sino tambin en promover sus interacciones con linfocitos que se necesitan para iniciar una respuesta inmunitaria adaptativa. Todas las respuestas de linfocitos a antgenos requieren no slo la seal que se produce por unin del antgeno a receptores de linfocito, sino tambin una segunda seal, suministrada por otras clulas mediante molculas de superficie celular conocidas en general como molculas coestimuladoras (seccin 1-7). Las clulas T indiferenciadas por lo general son estimuladas por clulas dendrticas activadas (fig. 1-21, panel izquierdo), pero para clulas B indiferenciadas (fig. 1-21, panel derecho) una clula T auxiliar activada suministra la segunda seal. Los macrfagos y las clulas B que presentan antgeno extrao sobre su superficie tambin pueden ser inducidos para expresar molculas coestimuladoras y, as, pueden activar clulas T indiferenciadas. Estas tres clulas presentadoras de antgeno especializadas del sistema inmunitario se ilustran en la figura 1-22. Las clulas dendrticas son las ms importantes de las tres a este respecto, con una participacin fundamental en el inicio de respuestas inmunitarias adaptativas. La induccin de molculas coestimuladoras tiene importancia en el inicio de una respuesta inmunitaria adaptativa, porque el contacto con antgeno sin molculas coestimuladoras acompaantes desactiva a los linfocitos indiferenciados en lugar de activarlos, lo que da pie a delecin clonal o a un estado inactivo conocido como anergia. Este tema se retoma en el captulo 7. De este modo, es necesario aadir un postulado final a la teora de la seleccin clonal. Un linfocito indiferenciado slo puede activarse por clulas que portan no slo antgeno especfico sino tambin molculas coestimuladoras, cuya expresin est regulada por inmunidad innata.

1-17

Los linfocitos activados por antgeno proliferan en los rganos linfoides perifricos, lo que genera clulas efectoras y memoria inmunitaria

La gran diversidad de receptores de linfocitos significa que generalmente habr al menos algunos que puedan unirse a un antgeno extrao dado. Aun as, este nmero ser muy pequeo, y ciertamente no basta para montar una respuesta contra un agente patgeno. Para generar suficientes linfocitos efectores especficos para antgeno a fin de combatir una infeccin, un linfocito con una especificidad de recep-

Unin al antgeno-receptor y coestimulacin de clula T por clula dendrtica

Unin de antgeno-receptor y activacin de clula B por clula T

1 1 2
clula dendrtica Linfocito T Linfocito T

Linfocito B

Proliferacin y diferenciacin de clulas T para adquirir funcin efectora

Proliferacin y diferenciacin de clulas B para adquirir funcin efectora

Fig. 1-21. Se requieren dos seales para la activacin de linfocitos. Adems de recibir una seal por medio de su receptor de antgeno (seal 1), los linfocitos vrgenes maduros tambin deben recibir una segunda seal (seal 2) para quedar activados. Para las clulas T (panel izquierdo) esta segunda seal es suministrada mediante una clula presentadora de antgeno, como la clula dendrtica que se muestra aqu. Para las clulas B (panel derecho), la segunda seal por lo general es proporcionada por una clula T activada, que reconoce pptidos antignicos captados, procesados y presentados por la clula B sobre su superficie.

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Captulo 1: Conceptos bsicos en inmunologa

Clula dendrtica

Macrfago

Linfocito B

i
interactan con muchos tipos de agentes patgenos. Los macrfagos estn especializados para internalizar agentes patgenos extracelulares, en especial luego de que han quedado cubiertos por anticuerpos, y para presentar sus antgenos. Las clulas B tienen receptores especficos para antgeno que les permiten internalizar grandes cantidades de antgeno especfico, procesarlo, y presentarlo. Fotografas cortesa de R.M. Steinman (a); N. Rooney (b, c, e, f); S. Knight (d, g), y P.F. Heap (h, i).

Fig. 1-22. Las clulas presentadoras de antgeno. Los tres tipos de clulas presentadoras de antgeno se muestran como se describirn en todo este libro (fila superior), como se observan en la microscopia ptica (segunda fila; una flecha seala la clula importante), por medio de microscopia electrnica de transmisin (tercera fila) y mediante microscopia electrnica de barrido (fila inferior). Las clulas dendrticas maduras se encuentran en tejidos linfoides y se derivan de clulas dendrticas hsticas inmaduras que

Principios de inmunidad innata y adaptativa

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tor apropiada se activa primero para que prolifere. Slo cuando se ha producido una clona grande de clulas idnticas stas finalmente se diferencian hacia clulas efectoras. Esta expansin clonal es una caracterstica comn a todas las respuestas inmunitarias adaptativas. Al reconocer su antgeno especfico sobre una clula presentadora de antgeno activada, un linfocito indiferenciado deja de migrar y se agranda. La cromatina en su ncleo se hace menos densa, aparecen nuclolos, se incrementa el volumen tanto del ncleo como del citoplasma, y se sintetizan mRNA y protenas nuevos. En el transcurso de algunas horas, la clula tiene un aspecto por completo diferente, y se conoce como un linfoblasto (fig. 1-23). Los linfoblastos ahora empiezan a dividirse; en circunstancias normales se duplican por s mismos dos a cuatro veces cada 24 h durante tres a cinco das, de manera que un linfocito indiferenciado da lugar a una clona de aproximadamente 1 000 clulas hijas de especificidad idntica. stas despus se diferencian hacia clulas efectoras. En el caso de las clulas B, las clulas efectoras diferenciadas son
Fig. 1-23. Micrografas electrnicas de transmisin, de linfocitos en diversas etapas de activacin hacia funcin efectora. Linfocitos en reposo pequeos (panel superior) todava no han tenido contacto con antgeno. Ntense el citoplasma escaso, la falta de retculo endoplsmico rugoso, y la cromatina condensada, todos indicativos de una clula inactiva. sta podra ser una clula T o una B. Los linfocitos circulantes pequeos quedan atrapados en ganglios linfticos cuando sus receptores encuentran antgeno o clulas presentadoras de antgeno. La estimulacin por antgeno induce al linfocito a convertirse en un linfoblasto activo (panel central). Ntense el mayor tamao, el ncleo agrandado y la cromatina ms difusa; de nuevo, los linfoblastos T y B tienen aspecto similar. Esta clula se divide repetidas veces, lo cual va seguido por diferenciacin hacia la funcin efectora. Los paneles inferiores muestran linfocitos T y B efectores. Ntense la gran cantidad de citoplasma, las abundantes mitocondrias, y la presencia de retculo endoplsmico rugoso: datos caractersticos de clulas activas. El retculo endoplsmico rugoso es en especial prominente en las clulas plasmticas (clulas B efectoras), que estn sintetizando y secretando cantidades muy grandes de protena en forma de anticuerpos. Fotografas cortesa de N. Rooney. Clula T efectora

Linfocito pequeo en reposo

Linfoblasto

Clula B efectora (clula plasmtica)

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Captulo 1: Conceptos bsicos en inmunologa

Fig. 1-24. La evolucin de una respuesta de anticuerpos tpica. El primer encuentro con un antgeno produce una respuesta primaria. El antgeno A introducido en el momento cero encuentra poco anticuerpo especfico en el suero. Despus de una fase de retraso (azul claro), aparecen anticuerpos contra el antgeno A (azul oscuro); su concentracin aumenta hasta alcanzar una meseta, y luego declina de manera gradual. Esto es tpico de una respuesta primaria. Cuando se efectan pruebas en el suero para anticuerpos contra otro antgeno, B (amarillo), hay pocos presentes, lo que demuestra la especificidad de la respuesta de anticuerpos. Cuando el animal ms tarde queda expuesto a una mezcla de los antgenos A y B, ocurre una respuesta secundaria muy rpida e intensa. Esto ilustra la memoria inmunitaria, la capacidad del sistema inmunitario para dar una segunda respuesta al mismo antgeno con mayor eficiencia y eficacia, lo que proporciona al hospedador una defensa especfica contra infeccin. Esta es la principal razn para administrar inyecciones de refuerzo despus de una vacunacin inicial. Ntese que la respuesta a B semeja la respuesta inicial o primaria a A, puesto que este es el primer encuentro del hospedador con el antgeno B.

Respuesta primaria

Respuesta secundaria

Anticuerpo 4 (g ml1 suero) 10


103 102 101 100 10
1

fase de retraso

respuesta al antgeno A

102 103 4 8 12 16 20 64
respuesta al antgeno B

68

72

antgeno A

antgenos A+B

Das

las clulas plasmticas, que secretan anticuerpos; en el caso de las clulas T, las clulas efectoras son clulas T citotxicas capaces de destruir clulas infectadas, o clulas T auxiliares que activan otras clulas del sistema inmunitario. Los linfocitos efectores no recirculan como los linfocitos indiferenciados. Algunas clulas T efectoras detectan sitios de infeccin y migran hacia ellos desde la sangre; otras permanecen en los tejidos linfoides y activan clulas B. Algunas clulas plasmticas secretoras de anticuerpos permanecen en los rganos linfoides perifricos, pero casi todas las clulas plasmticas generadas en los ganglios linfticos y el bazo migran hacia la mdula sea, donde se establecen y vierten anticuerpos hacia el sistema vascular sanguneo. Las clulas efectoras generadas en el sistema inmunitario de la mucosa por lo general permanecen dentro de los tejidos de mucosas. Luego de que un linfocito indiferenciado se ha activado, se requieren cuatro a cinco das antes de que la expansin clonal se complete y los linfocitos se hayan diferenciado hacia clulas efectoras. De este modo, la primera respuesta inmunitaria adaptativa a un agente patgeno slo ocurre varios das despus de que empieza la infeccin, y el sistema inmunitario innato la ha detectado. Casi todos los linfocitos generados por medio de la expansin clonal en cualquier respuesta inmunitaria dada finalmente mueren. De cualquier manera, un nmero importante de clulas B y T especficas para antgeno activadas persiste luego de que se ha eliminado el antgeno. Estas clulas se conocen como clulas de memoria y constituyen la base de la memoria inmunitaria. Pueden reactivarse con mucha mayor rapidez que los linfocitos indiferenciados, lo que asegura una respuesta ms rpida y eficaz ante un segundo encuentro con un agente patgeno y, as, por lo general proporcionan inmunidad protectora duradera. Las caractersticas de la memoria inmunitaria se observan con facilidad al comparar la respuesta de anticuerpos de un individuo a una primera inmunizacin o inmunizacin primaria con la misma respuesta desencadenada en el mismo sujeto mediante una inmunizacin secundaria o de refuerzo con el mismo antgeno. La respuesta de anticuerpos secundaria ocurre despus de una fase de retraso ms breve, alcanza una concentracin notoriamente ms alta, y produce anticuerpos de afinidad, o fuerza de unin, ms alta, para el antgeno (fig. 1-24). La afinidad aumentada para antgeno se denomina maduracin de afinidad y es el resultado de eventos que seleccionan receptores de clulas B y, as, anticuerpos, para afinidad progresivamente ms alta para antgeno durante una respuesta inmunitaria. Es importante que los receptores de clulas T no pasan por maduracin de afinidad, y el umbral ms bajo para activacin de clulas T de memoria en comparacin con clulas T indiferenciadas depende del cambio de la capacidad de respuesta de estas clulas, no de un cambio en el receptor. En los captulos 4, 9 y 10 se describen

Los mecanismos efectores de la inmunidad adaptativa

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los mecanismos de estos cambios notorios. Las bases celulares de la memoria inmunitaria son la expansin y la diferenciacin clonales de clulas especficas para el antgeno desencadenante y, por ende, son por completo especficas para antgeno. Es la memoria inmunitaria la que permite la vacunacin exitosa y previene reinfeccin por agentes patgenos que han sido repelidos eficazmente por medio de una respuesta inmunitaria adaptativa. La memoria inmunitaria es la consecuencia biolgica de mayor importancia de la inmunidad adaptativa, aunque su base celular y molecular an no se entiende por completo (cap. 10).

Resumen
Los sistemas de defensa innatos tempranos, que dependen de receptores invariables que reconocen caractersticas comunes de agentes patgenos, tienen importancia crucial, pero pueden ser vencidos por muchos agentes patgenos, y no llevan a memoria inmunitaria. El reconocimiento de un agente patgeno particular y el suministro de proteccin incrementada contra reinfeccin son singulares para la inmunidad adaptativa. Una respuesta inmunitaria adaptativa comprende la seleccin y amplificacin de clonas de linfocitos que portan receptores que reconocen el antgeno extrao. Esta seleccin clonal proporciona el marco terico para entender todas las caractersticas clave de una respuesta inmunitaria adaptativa. Hay dos tipos principales de linfocitos: linfocitos B, que maduran en la mdula sea y son la fuente de anticuerpos circulantes, y linfocitos T, que maduran en el timo y reconocen pptidos de agentes patgenos presentados por molculas del MHC sobre clulas infectadas o clulas presentadoras de antgeno. Cada linfocito porta receptores de superficie con una especificidad de antgeno singular. Estos receptores se generan mediante la recombinacin al azar de segmentos de gen que codifican receptores variables y el apareamiento de cadenas de protena variables distintas: cadenas pesadas y ligeras en inmunoglobulinas, o las dos cadenas de receptores de clula T. Este proceso produce una coleccin grande de linfocitos, cada uno de los cuales porta un receptor distinto, de modo que el repertorio de receptores total pueda reconocer a casi cualquier antgeno. Si el receptor es especfico para un antgeno propio ubicuo, el linfocito se elimina al encontrar el antgeno en etapas tempranas de su desarrollo, mientras que las seales de supervivencia recibidas por medio del receptor de antgeno seleccionan un repertorio de linfocitos en potencia til, y lo mantienen. La inmunidad adaptativa se inicia cuando una respuesta inmunitaria innata no elimina una infeccin nueva, y clulas presentadoras de antgeno activadas que portan antgenos del agente patgeno se liberan hacia los tejidos linfoides de drenaje. Cuando un linfocito recirculante encuentra su antgeno correspondiente en tejidos linfoides perifricos, se induce para proliferar, y su progenie luego se diferencia hacia linfocitos T y B efectores que pueden eliminar el agente infeccioso. Un subgrupo de estos linfocitos en proliferacin se diferencia hacia clulas de memoria, listas para responder con rapidez al mismo agente patgeno si se encuentra de nuevo. Los detalles de estos procesos de reconocimiento, desarrollo y diferenciacin constituyen el principal material de las tres partes principales de este libro.

Los mecanismos efectores de la inmunidad adaptativa


En la primera parte de este captulo se describi cmo los linfocitos indiferenciados se seleccionan mediante antgeno para diferenciarse hacia clonas de linfocitos efectores activados. Ahora se ampliar la exposicin sobre los mecanismos por medio de los cuales los linfocitos efectores activados se dirigen a diferentes agentes patgenos para destruccin en una respuesta inmunitaria adaptativa exitosa. Los distintos estilos de vida de diferentes agentes patgenos requieren diferentes respuestas tanto para su reconocimiento como para su destruccin (fig. 1-25). Los receptores de clulas B reconocen antgenos provenientes del ambien-

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Captulo 1: Conceptos bsicos en inmunologa

Fig. 1-25. Los principales tipos de agentes patgenos que enfrenta el sistema inmunitario, y algunas de las enfermedades que causan.

El sistema inmunitario protege contra cuatro clases de agentes patgenos


Tipo de agente patgeno Bacterias extracelulares, parsitos y hongos extracelulares Ejemplos Streptococcus pneumoniae Clostridium tetani Trypanosoma brucei Pneumocystis jiroveci (antes P. carinii ) Mycobacterium leprae Leishmania donovani Plasmodium falciparum Variola Gripe Varicela Ascaris Schistosoma Enfermedades Neumona Ttanos Enfermedad del sueo Neumona por Pneumocystis Lepra Leishmaniasis Paludismo Viruela Gripe Varicela Ascariasis Esquistosomiasis

Bacterias y parsitos intracelulares

Virus (intracelulares)

Gusanos parsitos (extracelulares)

te extracelular, y se diferencian hacia clulas plasmticas efectoras que secretan anticuerpos de regreso hacia ese ambiente. Los receptores de clulas T estn especializados para detectar antgenos que se han generado dentro de las clulas del cuerpo y esto se refleja en las acciones efectoras de las clulas T. Algunas clulas T efectoras matan directamente clulas infectadas por agentes patgenos intracelulares, como virus, mientras que otras participan en respuestas contra agentes patgenos extracelulares al interactuar con clulas B para ayudarlas a sintetizar anticuerpos. Casi todos los otros mecanismos efectores que eliminan agentes patgenos a los cuales se dirige una respuesta inmunitaria adaptativa son en esencia idnticos a los de la inmunidad innata, y comprenden clulas como macrfagos y neutrfilos, y protenas como el complemento. De hecho, parece probable que la respuesta inmunitaria adaptativa de vertebrados evolucion mediante la adicin tarda de reconocimiento especfico por medio de receptores distribuidos de manera clonal a mecanismos de defensa innatos que ya existan en invertebrados. Esto se comenta en el captulo 16. Se empieza por esbozar las acciones efectoras de anticuerpos, que dependen casi por completo de reclutar clulas y molculas del sistema inmunitario innato.

1-18

Los anticuerpos afrontan formas extracelulares de agentes patgenos y sus productos txicos

Los anticuerpos se encuentran en el componente lquido de la sangre, o plasma, y en lquidos extracelulares. Dado que los lquidos corporales alguna vez se conocieron como humores, la inmunidad mediada por anticuerpos se conoce como inmunidad humoral. Los anticuerpos son molculas en forma de Y cuyos extremos forman dos sitios de unin a antgeno idnticos (fig. 1-13). Estos son muy variables de una molcula a otra, y proporcionan la diversidad requerida para el reconocimiento de antgeno especfico. El tallo de la Y es mucho menos variable. Slo hay cinco formas principales de esta regin constante de un anticuerpo, y stas se conocen como las clases o los isotipos de anticuerpos. La regin constante determina las propiedades funcionales de un anticuerpo (cmo se engranar con los mecanismos efectores que eliminan el antgeno una vez que se reconoce) y cada clase lleva a cabo su funcin particular al engranar un grupo separado de mecanismos efectores. En los captulos 4 y 9 se describen las clases de anticuerpos y sus acciones. El primer modo, y el ms directo, en que los anticuerpos pueden proteger contra agentes patgenos o sus productos es al unirse a ellos y, as, bloquear su acceso

Los mecanismos efectores de la inmunidad adaptativa

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Anticuerpo especco

Toxinas bacterianas

Bacterias en el espacio extracelular

Bacterias en el plasma

clula con receptores para toxina

macrfago

Neutralizacin

Opsonizacin

Activacin del complemento

complemento

Ingestin por macrfagos

Ingestin por macrfagos

Lisis e ingestin

Fig. 1-26. Los anticuerpos pueden participar de tres modos en la defensa del hospedador. Los paneles izquierdos muestran anticuerpos que se unen a una toxina bacteriana y la neutralizan, lo que impide que interacte con las clulas del hospedador y cause enfermedad. La toxina no unida puede reaccionar con receptores en la clula hospedadora, no as el complejo de toxina:anticuerpo. Los anticuerpos tambin neutralizan partculas de virus y clulas bacterianas completas al unirse a ellas y desactivarlas. El complejo de antgeno:anticuerpo finalmente es recolectado y degradado por macrfagos. Los anticuerpos que cubren un antgeno lo hacen reconocible como extrao por fagocitos (macrfagos y neutrfilos), que luego lo ingieren y lo destruyen; esto se llama opsonizacin. Los paneles de enmedio muestran opsonizacin y fagocitosis de una clula bacteriana. Los paneles de la derecha muestran activacin del sistema de complemento por anticuerpos que cubren una clula bacteriana. Los anticuerpos unidos forman un receptor para la primera protena del sistema de complemento, que finalmente forman un complejo protenico sobre la superficie de la bacteria que, en algunos casos, puede matarla de manera directa. De modo ms general, la cubierta con complemento favorece la captacin y destruccin de la bacteria por fagocitos. De esta manera, los anticuerpos se dirigen hacia agentes patgenos y sus productos txicos para eliminacin por fagocitos.

a clulas que podran infectar o destruir (fig. 1-26, paneles izquierdos). Esto se conoce como neutralizacin y tiene importancia para la proteccin contra virus (se evita que entren a clulas y se repliquen) y contra toxinas bacterianas. Como quiera que sea, en el caso de las bacterias, la unin de anticuerpos no basta para suspender su replicacin. En estas circunstancias, la funcin de los anticuerpos es permitir que una clula fagoctica, como un macrfago o un neutrfilo, ingiera la bacteria y la destruya. Muchas bacterias evaden el sistema inmunitario innato porque tienen una cubierta externa no reconocida por los receptores de reconocimiento de patrones de fagocitos. Sin embargo, los antgenos en la cubierta pueden reconocerse mediante anticuerpos, y los fagocitos tienen receptores que se unen a los tallos de los anticuerpos que cubren a la bacteria, lo que conduce a fagocitosis (fig. 1-26, paneles de enmedio). El cubrimiento de agentes patgenos y partculas extraas de esta manera se conoce como opsonizacin. La tercera funcin de los anticuerpos es la activacin del complemento. El complemento, que se comenta en detalle en el captulo 2, se activa primero en la

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Captulo 1: Conceptos bsicos en inmunologa

inmunidad innata por las superficies microbianas, sin la ayuda de anticuerpos. Empero, las regiones constantes de anticuerpos unidas a superficies bacterianas forman receptores para la primera protena del sistema del complemento, de modo que una vez que se producen anticuerpos, la activacin del complemento aumenta. Los componentes del complemento unidos a la superficie bacteriana pueden destruir de manera directa ciertas bacterias, y esto tiene importancia en algunas infecciones bacterianas (fig. 1-26, paneles derechos). Con todo, la principal funcin del complemento, como la de los anticuerpos, es cubrir la superficie del agente patgeno y permitir que los fagocitos envuelvan y destruyan bacterias que de otro modo no reconoceran. El complemento tambin incrementa las acciones bactericidas de los fagocitos; de hecho, se llama as porque complementa las actividades de anticuerpos. Anticuerpos de diferentes clases se encuentran en diferentes compartimientos del cuerpo, y difieren en los mecanismos efectores que reclutan, pero todos los agentes patgenos y las molculas libres unidas por medio de anticuerpos finalmente se suministran a fagocitos para ingestin, degradacin y eliminacin desde el cuerpo (fig. 1-26, paneles inferiores). El sistema de complemento y los fagocitos que los anticuerpos reclutan no son en s especficos para antgeno; dependen de molculas de anticuerpos para marcar las partculas como extraas. La produccin de anticuerpos es la nica funcin efectora de las clulas B. En contraste, las clulas T tienen diversas acciones efectoras.

1-19
Fig. 1-27. Mecanismos de defensa del hospedador contra infeccin intracelular por virus. Las clulas infectadas por virus son reconocidas por clulas T especializadas llamadas clulas T citotxicas, que pueden matar de modo directo a las clulas infectadas. El mecanismo de muerte comprende la activacin de enzimas conocidas como caspasas, que contienen cistena en su sitio activo y producen corte despus de cido asprtico. stas a su vez activan una nucleasa citoslica en la clula infectada, que desdobla DNA del hospedador y vrico. El panel a es una microfotografa electrnica de transmisin que muestra la membrana plasmtica de una clula CHO en cultivo (lnea de clulas ovricas de criceto chino) infectada por virus de la gripe. Pueden observarse brotes de muchas partculas de virus desde la superficie de la clula. Algunas de stas se han marcado con un anticuerpo monoclonal que es especfico para una protena vrica y est acoplado a partculas de oro, que aparecen como los puntos de color negro en la microfotografa. El panel b es una micrografa electrnica de transmisin de una clula infectada por virus (V) rodeada por linfocitos T citotxicos. Ntese la estrecha aposicin de las membranas de la clula infectada por virus y la clula T (T) en el ngulo superior izquierdo de la microfotografa, y la agrupacin de los organelos citoplsmicos en la clula T entre su ncleo y el punto de contacto con la clula infectada. Panel a, cortesa de M. Bui y A. Helenius; panel b, cortesa de N. Rooney.

Las clulas T se necesitan para controlar agentes patgenos intracelulares y para activar respuestas de clulas B a casi todos los antgenos

Los agentes patgenos son accesibles a anticuerpos slo en la sangre y los espacios extracelulares. No obstante, algunas bacterias y algunos parsitos, y todos los virus, se replican dentro de las clulas, donde los anticuerpos no pueden detectarlos. La

Clula infectada por virus

La clula T citotxica mata a la clula infectada

mata Tc

clula T citotxica virus

clula infectada

clula infectada muerta

Los mecanismos efectores de la inmunidad adaptativa

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destruccin de estos invasores es la funcin de los linfocitos T, que se encargan de las respuestas inmunitarias mediadas por clulas de la inmunidad adaptativa. La accin de clulas T citotxicas es la ms directa. Estas clulas T efectoras actan contra clulas infectadas por virus. Los antgenos derivados del virus que se multiplican dentro de la clula infectada se despliegan sobre la superficie de la clula, donde son reconocidos por los receptores de antgeno de clulas T citotxicas. Estas clulas T despus pueden controlar la infeccin al matar las clulas infectadas antes de que se complete la replicacin vrica y se liberen virus nuevos (fig. 1-27). Desde el final de su desarrollo en el timo, los linfocitos T estn compuestos de dos clases principales, una de las cuales porta la protena de superficie celular llamada CD8 y la otra porta una protena llamada CD4. stos no son simplemente marcadores al azar, sino que tienen importancia para la funcin de una clula T, puesto que ayudan a determinar las interacciones de las clulas T con otras clulas. Las clulas T citotxicas portan CD8, mientras que la clase de clulas T comprendidas en activar las clulas que reconocen, ms que en matarlas, portan CD4. Las clulas T CD8 estn destinadas a convertirse en clulas T citotxicas para el momento en que abandonan el timo como linfocitos indiferenciados. En contraste, las clulas T CD4 indiferenciadas pueden diferenciarse hacia diferentes tipos de clulas T efectoras luego de su activacin inicial por antgeno. Los dos tipos principales de clulas T efectoras CD4 se llaman clulas TH1 y TH2, aunque se han descrito ms (cap. 8). Estos dos tipos participan en el combate de infecciones bacterianas, pero de maneras muy diferentes. Las clulas TH1 tienen una funcin doble. La primera es controlar ciertas infecciones bacterianas intracelulares. Algunas bacterias slo crecen en las vesculas intracelulares delimitadas por membrana de macrfagos; los ejemplos importantes son Mycobacterium tuberculosis y M. leprae, los microorganismos patgenos que causan tuberculosis y lepra, respectivamente. Las bacterias fagocitadas por macrfagos por lo general se destruyen en los lisosomas, que contienen diversas enzimas y sustancias antimicrobianas. Las micobacterias y algunas otras bacterias sobreviven dentro de las clulas porque evitan que las vesculas que ocupan se fusionen con lisosomas (fig. 1-28). Estas infecciones pueden controlarse mediante clulas TH1 que reconocen antgenos bacterianos desplegados sobre la superficie de macrfagos. Las clulas TH1 activan a los macrfagos infectados, e inducen la fusin de sus lisosoFig. 1-28. Mecanismo de defensa del hospedador contra infeccin intracelular por micobacterias. Las micobacterias son fagocitadas por macrfagos pero resisten a la destruccin al evitar que las vesculas intracelulares en las cuales residen se fusionen con lisosomas que contienen agentes bactericidas. De esta manera, las bacterias estn protegidas contra la muerte. En macrfagos en reposo, las micobacterias persisten y se replican en estas vesculas. Empero, cuando el fagocito es reconocido y activado por una clula TH1, las vesculas fagocticas se fusionan con lisosomas, y es posible matar a las bacterias. La activacin de macrfagos est controlada por las clulas TH1, tanto para evitar dao de tejido como para ahorrar energa. Las microfotografas pticas (fila inferior) muestran macrfagos en reposo (izquierda) y activados (derecha) infectados por micobacterias. Las clulas se han coloreado con una tincin de color rojo acidorresistente para revelar micobacterias. Estas son prominentes como bastones que se tien de rojo en los macrfagos en reposo, pero se han eliminado de los macrfagos activados. Fotografas cortesa de G. Kaplan.

Macrfago infectado

Macrfago infectado activado

lisosoma

micobacteria activa

TH1

antgeno

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Captulo 1: Conceptos bsicos en inmunologa

MHC clase I pptido

MHC clase II

membrana celular

Fig. 1-29. Molculas del MHC sobre la superficie celular muestran fragmentos pptidos de antgenos. Las molculas del MHC son protenas cuyos dominios extracelulares externos forman una hendidura en la cual est unido un fragmento pptido. Estos fragmentos se derivan de las protenas degradadas dentro de las clulas, incluso antgenos protenicos tanto propios como extraos. La molcula del MHC recin sintetizada se une a los pptidos antes de llegar a la superficie celular. Hay dos clases de molculas del MHC: MHC clase I y MHC clase II, con estructuras y funciones relacionadas pero distintas. Aunque en aras de la sencillez no se muestran aqu, las molculas tanto de MHC clase I como de MHC clase II son trmeros de dos cadenas de protena y el pptido propio o no propio unido.

mas con las vesculas que contienen las bacterias, y estimulan los mecanismos antibacterianos de los macrfagos (fig. 1-28). La segunda funcin de las clulas TH1 es como clulas T auxiliares para estimular la produccin de anticuerpos al producir seales coestimuladoras e interactuar con linfocitos B. En el captulo 9, donde se comenta en detalle la respuesta inmunitaria humoral, se ver que slo algunos antgenos con propiedades especiales pueden activar por s mismos linfocitos B indiferenciados; por lo general se requiere una seal coestimulante, acompaante, que proviene de clulas T (fig. 1-21). Mientras que las clulas TH1 tienen una funcin doble, las clulas TH2 auxiliares se dedican por completo a la activacin de clulas B indiferenciadas para que produzcan anticuerpos. Los investigadores a veces usan el trmino clula T auxiliar para describir todas las clulas T CD4. Aun as, originalmente se acu para describir clulas T que auxilian a las clulas B a producir anticuerpos, antes de que se reconociera la existencia de dos subtipos de clulas T CD4. Cuando se descubri la funcin activadora de macrfagos de las clulas T CD4, la designacin auxiliar se extendi para cubrir tambin stas (de ah la H de la palabra del ingls helper [auxiliar] en TH1). Los autores consideran que este uso extendido es desorientador, y en este libro slo usarn el trmino clula T auxiliar en conexin con la activacin de clulas B para la produccin de anticuerpos, sea por clulas TH1 o TH2. Los linfocitos T indiferenciados reconocen sus antgenos correspondientes sobres clulas presentadoras de antgeno especializadas, que tambin pueden activarlos. De modo similar, las clulas T efectoras reconocen antgenos unidos a molculas del MHC, pero en este caso la clula T ya est activada y, as, no necesita seales coestimuladoras.

1-20

Las clulas T CD4 y CD8 reconocen pptidos unidos a dos clases de molculas del MHC

Fig. 1-30. Las molculas del MHC clase I presentan antgeno derivado de protenas en el citosol. En clulas infectadas por virus, las protenas vricas se sintetizan en el citosol. Los fragmentos pptidos de protenas vricas son transportados hacia el retculo endoplsmico (ER), donde molculas del MHC clase I se unen a ellos, y luego los llevan a la superficie celular.

Los diferentes tipos de clulas T efectoras deben dirigirse para actuar contra las clulas diana apropiadas. Es obvio que el reconocimiento de antgeno es crucial, pero el reconocimiento correcto de la diana tambin se asegura por medio de interacciones adicionales entre las molculas CD8 y CD4 sobre las clulas T y las molculas del MHC en la clula diana. Como se mencion en la seccin 1-13, las clulas T detectan pptidos derivados de antgenos extraos despus de que los antgenos se degradan dentro de las clulas, sus fragmentos pptidos son captados por molculas del MHC, y este complejo se despliega en la superficie celular (fig. 1-16). Hay dos tipos principales de molculas del MHC, llamados MHC clase I y MHC clase II. Tienen estructura un poco diferente, pero ambos muestran una hendidura alargada en la superficie extracelular de la molcula, en la cual un pptido nico queda atrapado durante la sntesis y el montaje de la molcula del MHC dentro de la clula. La molcula del MHC que porta este cargamento de pptido se transporta hacia la superficie celular, donde despliega el pptido a clulas T (fig. 1-29). Las diferencias ms importantes entre las dos clases de molcula del MHC no yacen en su estructura sino en la fuente de los pptidos que atrapan y transportan hacia la superficie celular. Las molculas del MHC clase I recolectan pptidos derivados de protenas sintetizadas en el citosol y, as, tienen la capacidad de desplegar
Fragmentos pptidos de protenas vricas unidos por MHC clase I en ER
Citosol

Los virus infectan a la clula

Protenas vricas sintetizadas en el citosol

Pptidos unidos transportados por MHC clase I hacia la supercie de la clula

Citosol

Retculo endoplsmico

Ncleo

Los mecanismos efectores de la inmunidad adaptativa

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La bacteria infecta a un macrfago y entra a una vescula, lo que produce fragmentos pptidos

Fragmentos bacterianos unidos por MHC clase II en vesculas

Pptidos unidos transportados por MHC clase II hacia la supercie de la clula

Fig. 1-31. Las molculas del MHC clase II presentan antgeno que se origina en vesculas intracelulares. Algunas bacterias infectan clulas y crecen en vesculas intracelulares. Molculas del MHC clase II se unen a pptidos derivados de esas bacterias y los transportan hacia la superficie celular (fila superior). Las molculas del MHC clase II tambin se unen a, y transportan, pptidos derivados de antgeno que ha sido unido e internalizado por captacin mediada por receptor de antgeno de clula B hacia vesculas intracelulares (fila inferior).

Antgeno unido por receptor de supercie de clula B

Antgeno internalizado y degradado hacia fragmentos pptidos

Los fragmentos se unen a MHC clase II y se transportan hacia la supercie celular

anticuerpo

clula B

fragmentos de protenas vricas sobre la superficie celular (fig. 1-30). Las molculas del MHC clase II se unen a pptidos derivados de protenas en vesculas intracelulares y, as, despliegan pptidos derivados de agentes patgenos que viven en vesculas de macrfagos o que son internalizados por clulas fagocticas y clulas B (fig. 1-31). En el captulo 5 se describe exactamente cmo los pptidos de estas diferentes fuentes se ponen a disposicin de los dos tipos de molcula del MHC. Una vez que llegan a la superficie celular con su cargamento de pptido, las dos clases de molculas del MHC son reconocidas por clases funcionales diferentes de clulas T. Esto ocurre porque la molcula CD8 se une de preferencia a molculas del MHC clase I, mientras que CD4 se une de preferencia a molculas del MHC clase II. De esta manera, las molculas del MHC clase I que portan pptidos vricos son reconocidas por clulas T citotxicas que portan CD8, que luego matan a la clula infectada (fig. 1-32); las molculas clase II del MHC que portan pptidos derivados de agentes patgenos captados hacia vesculas son reconocidas por clulas T que portan CD4 (fig. 1-33). De este modo, CD4 y CD8 se conocen como correceptores, dado que estn inextricablemente comprendidos en la emisin de seales hacia la clula T de que el receptor se ha unido al antgeno correcto. Se aseguran ms interacciones tiles por el hecho de que todas las clulas expresan molculas del MHC clase I y, as, cualquier clula infectada por virus
La clula TH1 reconoce el complejo de pptido bacteriano con MHC clase II y activa al macrfago La clula T auxiliar reconoce el complejo de pptido antignico con MHC clase II y activa a la clula B

La clula T citotxica reconoce el complejo de pptido vrico con MHC clase I y mata a la clula infectada

Tc

CD8

mata

MHC clase I

Fig. 1-32. Las clulas T CD8 citotxicas reconocen antgeno presentado por molculas del MHC clase I y matan a la clula. El complejo de pptido:MHC clase I sobre clulas infectadas por virus es detectado por clulas T citotxicas especficas para antgeno. Las clulas T citotxicas estn programadas de antemano para matar las clulas que reconocen.

TH 1

CD4

clula T auxiliar

CD4

activa

MHC clase II
activa

MHC clase II

Fig. 1-33. Las clulas T CD4 reconocen antgeno presentado por molculas del MHC clase II. En el momento del reconocimiento de su antgeno especfico sobre macrfagos infectados, las clulas TH1 activan al macrfago, lo que lleva a la destruccin de las bacterias intracelulares (panel izquierdo). Cuando las clulas T auxiliares TH2 o TH1 reconocen antgenos sobre clulas B, las activan para que proliferen y se diferencien hacia clulas plasmticas productoras de anticuerpos (panel derecho).

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Captulo 1: Conceptos bsicos en inmunologa

puede ser reconocida y eliminada por una clula T citotxica CD8, mientras que las nicas clulas que en circunstancias normales expresan molculas del MHC clase II son las clulas dendrticas, los macrfagos y las clulas B, las clulas que deben activar clulas T CD4, o ser activadas por estas ltimas. Puesto que el receptor de clulas T es especfico para una combinacin de pptido y molcula del MHC, cualquier receptor de clula T dado reconocer una molcula del MHC clase I o una del MHC clase II. Para que sean tiles, los linfocitos T que portan receptores de antgeno que reconocen MHC clase I tambin deben expresar correceptores de CD8, mientras que los linfocitos T que portan receptores especficos para MHC clase II deben expresar CD4. La coincidencia de un receptor de clula T con un correceptor del tipo apropiado ocurre durante el desarrollo de linfocitos, y las clulas T indiferenciadas surgen a partir de los rganos linfocticos centrales que portan la combinacin correcta de receptores y correceptores. La maduracin de clulas T hacia clulas T CD8 o CD4 refleja una prueba de especificidad de receptor de clula T que ocurre durante el desarrollo. La manera exacta en que este proceso selectivo funciona, y cmo maximiza la utilidad del repertorio de clulas T es una pregunta fundamental en inmunologa, y es un importante tema del captulo 7. Al reconocer sus dianas, los diversos tipos de clulas T efectoras son estimulados para que liberen grupos diferentes de molculas efectoras. stas pueden afectar de modo directo a sus clulas blanco o ayudar a reclutar otras clulas efectoras de las maneras que se comentan en el captulo 8. Estas molculas efectoras incluyen muchas citocinas, que tienen una participacin crucial en la expansin clonal de linfocitos, as como en las respuestas inmunitarias innatas y en las acciones efectoras de casi todas las clulas del sistema inmunitario. De este modo, el entendimiento de las acciones de las citocinas es fundamental para comprender las diversas conductas del sistema inmunitario. Las acciones de todas las citocinas conocidas se resumen en el apndice III, algunas se introducen en el captulo 2, y las citocinas derivadas de clulas T se comentan en el captulo 8.

1-21

Los defectos del sistema inmunitario originan aumento de la susceptibilidad a infeccin

Se tiende a dar por sentada la capacidad del sistema inmunitario para liberar al organismo de infeccin y prevenir su recurrencia. De cualquier manera, en algunas personas partes del sistema inmunitario fallan. En las ms graves de estas enfermedades de inmunodeficiencia, la inmunidad adaptativa falta por completo, y la muerte ocurre durante la lactancia por infeccin abrumadora a menos que se pongan en prctica medidas heroicas. Otras fallas menos desastrosas llevan a infecciones recurrentes por tipos particulares de agentes patgenos, dependiendo de la deficiencia particular. Se ha aprendido mucho acerca de las funciones de los distintos componentes del sistema inmunitario del ser humano por medio del estudio de estas inmunodeficiencias, muchas de las cuales se producen por defectos genticos hereditarios. Hace ms de 25 aos, apareci una forma devastadora de inmunodeficiencia, el sndrome de inmunodeficiencia adquirida, o sida, que se produce por agentes infecciosos, los virus de la inmunodeficiencia humana VIH-1 y VIH-2. Esta enfermedad destruye clulas T, clulas dendrticas y macrfagos que portan CD4, lo que da pie a infecciones causadas por bacterias intracelulares y otros agentes patgenos que en circunstancias normales son controlados por esas clulas. Estas infecciones son la principal causa de muerte por esta enfermedad de inmunodeficiencia cada vez ms prevaleciente, que se comenta en detalle en el captulo 12, junto con las inmunodeficiencias hereditarias.

1-22

Entender las respuestas inmunitarias adaptativas es importante para el control de alergias, enfermedad autoinmunitaria y rechazo de injerto de rgano

La principal funcin del sistema inmunitario es proteger al hospedador humano contra agentes infecciosos. Como quiera que sea, muchas enfermedades importan-

Los mecanismos efectores de la inmunidad adaptativa

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tes desde el punto de vista mdico se relacionan con una respuesta inmunitaria normal dirigida contra un antgeno inapropiado, a menudo en ausencia de enfermedad infecciosa. Las respuestas inmunitarias dirigidas a antgenos no infecciosos ocurren en la alergia, en la cual el antgeno es una sustancia extraa inocua, en la enfermedad autoinmunitaria, en la cual la respuesta es a un antgeno propio, y en el rechazo de injerto, en el cual el antgeno es transportado por una clula extraa trasplantada. Los principales antgenos que desencadenan rechazo de injerto son, de hecho, las molculas del MHC, dado que cada una de ellas est presente en muchas versiones diferentes en la poblacin humana (es decir, son muy polimrficas) y la mayora de las personas no emparentadas difiere en el juego de molculas de MHC que expresa. El MHC originalmente se reconoci en ratones como un locus de gen, el locus H2, que control la aceptacin o el rechazo de tejidos trasplantados, mientras que las molculas del MHC en seres humanos se descubrieron por vez primera despus de intentos por usar injertos cutneos provenientes de donadores para tratar a pilotos y vctimas de bombas gravemente quemados durante la Segunda Guerra Mundial. Los pacientes rechazaron los injertos, que fueron reconocidos como extraos por su sistema inmunitario. Lo que se denomina una respuesta inmunitaria exitosa o una falla, y si la respuesta se considera perjudicial o beneficiosa para el hospedador, no depende de la respuesta en s, sino ms bien de la naturaleza del antgeno y de las circunstancias en las cuales ocurre la respuesta (fig. 1-34). Las enfermedades alrgicas, que incluyen asma, son una causa cada vez ms frecuente de minusvalidez en el mundo desarrollado. La autoinmunidad ahora tambin se reconoce como la causa de muchas enfermedades importantes. Una respuesta autoinmunitaria dirigida contra las clulas pancreticas es la principal causa de diabetes en jvenes. En alergias y enfermedades autoinmunitarias, los potentes mecanismos protectores de la respuesta inmunitaria adaptativa causan serio dao al paciente. Las respuestas inmunitarias a antgenos inocuos, a tejidos del cuerpo, o a injertos de rgano son, al igual que todas las otras respuestas inmunitarias, muy especficas. En la actualidad, el modo habitual de tratar estas respuestas es con inmunosupresores, que inhiben todas las respuestas inmunitarias, deseables e indeseables. Si fuera posible suprimir slo las clonas de linfocitos de las cuales depende la respuesta no deseada, la enfermedad se podra curar, o el rgano injertado podra protegerse, sin impedir respuestas inmunitarias protectoras. Hay esperanza de que este sueo de inmunorregulacin especfica para antgeno para controlar respuestas inmunitarias no deseadas pudiera convertirse en una realidad, puesto que es posible inducir experimentalmente supresin de respuestas inmunitarias especficas para antgeno, aunque no se entiende por completo la base molecular de esta supresin. En los captulos 13 a 15 se comenta el estado actual del entendimiento de las alergias, la enfermedad autoinmunitaria, el rechazo de injerto y frmacos inmunosupresores, y en el captulo 14 se aborda la manera en que los mecanismos de la regulacin inmunitaria estn empezando a surgir a partir de un mejor entendimiento de los subgrupos funcionales de linfocitos y las citocinas que los controlan.
Fig. 1-34. Las respuestas inmunitarias pueden ser beneficiosas o perjudiciales, dependiendo de la naturaleza del antgeno. Las respuestas beneficiosas se muestran en recuadros de color blanco, y las perjudiciales en recuadros sombreados de rojo. Cuando la respuesta es beneficiosa, su falta es perjudicial.

Efecto de la respuesta al antgeno Antgeno


Respuesta normal Agente infeccioso Sustancia inocua rgano injertado rgano propio Tumor Inmunidad protectora Alergia Rechazo Autoinmunidad Inmunidad tumoral Respuesta deciente Infeccin recurrente Respuesta nula Aceptacin Autotolerancia Cncer

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Captulo 1: Conceptos bsicos en inmunologa

1-23

La vacunacin es el medio ms ecaz de controlar enfermedades infecciosas

Aun cuando la supresin especfica de respuestas inmunitarias debe esperar avances en la investigacin bsica sobre la regulacin inmunitaria y su aplicacin, la estimulacin deliberada de una respuesta inmunitaria por medio de inmunizacin, o vacunacin, ha logrado muchos xitos durante los dos siglos transcurridos desde el experimento pionero de Jenner. Los programas de inmunizacin masiva han llevado a la erradicacin casi completa de varias enfermedades que solan relacionarse con morbilidad (enfermedad) y mortalidad importantes (fig. 1-35). La inmunizacin se considera tan segura y tan importante que en casi todos los estados de Estados Unidos se exige inmunizar a los nios contra hasta siete enfermedades frecuentes de la niez. Independientemente de lo impresionante de estos logros, todava hay muchas enfermedades para las cuales se carece de vacunas eficaces. Adems, aun cuando en pases desarrollados pueden usarse con eficacia vacunas para enfermedades como sarampin o poliomielitis, problemas tcnicos y econmicos pueden evitar su uso difundido en pases en desarrollo, donde la mortalidad por estas enfermedades todava es alta. Los instrumentos de la inmunologa moderna y la biologa molecular se estn aplicando para crear nuevas vacunas y mejorar las antiguas, y estos avances se comentan en el captulo 15. La perspectiva de controlar estas enfermedades importantes despierta mucho inters.
Fig. 1-35. Campaas de vacunacin exitosas. La difteria, la poliomielitis y el sarampin, y las consecuencias que generan, casi se han eliminado en Estados Unidos, como se muestra en estos tres grficos. La panencefalitis esclerosante subaguda (SSPE) es una enfermedad cerebral que es una consecuencia tarda del sarampin en algunos pacientes. Cuando se previno el sarampin, la SSPE desapareci 15 a 20 aos ms tarde. Con todo, dado que estas enfermedades no se han erradicado en todo el mundo, es necesario mantener la inmunizacin en un porcentaje muy alto de la poblacin a fin de evitar que reaparezcan.

Difteria Casos 100 informados por 100 000 habitantes 10 1.0 0.1 1900 1910 1920 1930 1940 1950 1960 1970 1980 1990 Poliomielitis Casos informados por 100 000 habitantes 40 30 20 10 0 1940
Vacuna oral Vacuna desactivada
Vacuna

1950

1960

1970

1980

1990

Sarampin Casos 600 informados 500 por 100 000 habitantes 400 300 200 100 0 1960 1965 1970 1975 1980 1985 1990
Sarampin SSPE Vacuna

60 50 40 30 20 10 0

Casos de SSPE reportados en Estados Unidos

Resumen del captulo 1

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La seguridad de buena salud es un paso crtico hacia el control y el desarrollo econmico de la poblacin. A un costo muy bajo por persona, pueden salvarse muchas dificultades y aliviar mucho sufrimiento. Muchos agentes patgenos serios han resistido a los esfuerzos por crear vacunas contra ellos, a menudo porque pueden evadir o subvertir los mecanismos protectores de una respuesta inmunitaria adaptativa. En el captulo 12 se examinan algunas de las estrategias evasivas usadas por agentes patgenos exitosos. La conquista de muchas de las principales enfermedades del mundo, incluso del paludismo y las enfermedades diarreicas (los principales asesinos de nios), as como la amenaza ms reciente por el sida, dependen de un mejor entendimiento de los agentes patgenos que las causan y de sus interacciones con las clulas del sistema inmunitario.

Resumen
Los linfocitos tienen dos sistemas de reconocimiento especializados para la deteccin de agentes patgenos extracelulares e intracelulares. Las clulas B tienen molculas de inmunoglobulina de superficie celular como receptores para antgeno, y cuando se activan secretan la inmunoglobulina como anticuerpo soluble que proporciona una defensa contra agentes patgenos en los espacios extracelulares del cuerpo. Las clulas T tienen receptores que reconocen fragmentos peptdicos de agentes patgenos intracelulares, transportados hacia la superficie celular por las glucoprotenas del MHC. Dos clases de molculas del MHC transportan pptidos desde diferentes compartimientos intracelulares hacia la superficie celular para presentarlos a distintos tipos de clulas T efectoras: las clulas T CD8 citotxicas que matan a clulas diana infectadas, y clulas T CD4 que activan principalmente macrfagos y clulas B. De este modo, las clulas T tienen importancia crucial en las respuestas tanto humoral como mediada por clulas de la inmunidad adaptativa. La respuesta inmunitaria adaptativa parece haber establecido reconocimiento de antgeno especfico por medio de receptores muy diversificados en sistemas de defensa innatos, que tienen una participacin fundamental en las acciones efectoras de los linfocitos tanto B como T. La funcin vital de la inmunidad adaptativa en el combate de la infeccin se ilustra por medio de las enfermedades de inmunodeficiencia y los problemas causados por agentes patgenos que tuvieron xito en la evasin o subversin de la respuesta inmunitaria adaptativa. La supresin especfica para antgeno de respuestas inmunitarias adaptativas es el objetivo del tratamiento para enfermedades importantes del ser humano que comprenden activacin inapropiada de linfocitos, mientras que la estimulacin especfica de una respuesta inmunitaria adaptativa es la base de la vacunacin exitosa.

Resumen del captulo 1


El sistema inmunitario defiende al hospedador contra infecciones. La inmunidad innata constituye una primera lnea de defensa, pero carece de la capacidad para reconocer ciertos agentes patgenos y de proporcionar la inmunidad protectora especfica que evita reinfeccin. La inmunidad adaptativa se basa en la seleccin clonal a partir de un repertorio de linfocitos que portan receptores especficos para antgeno muy diversos, que permiten al sistema inmunitario reconocer cualquier antgeno extrao. En la respuesta inmunitaria adaptativa, los linfocitos especficos para antgeno proliferan y se diferencian hacia clonas de linfocitos efectores que eliminan al agente patgeno. La defensa del hospedador requiere diferentes sistemas de reconocimiento y una amplia variedad de mecanismos efectores para buscar y destruir la amplia variedad de agentes patgenos en sus diversos hbitat dentro del cuerpo y en su superficie externa e interna. La respuesta inmunitaria adaptativa no slo puede eliminar un agente patgeno, sino que, en el proceso, tambin genera incremento del nmero de linfocitos de memoria diferenciados por medio de seleccin clonal, y esto permite una respuesta ms rpida y eficaz

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Captulo 1: Conceptos bsicos en inmunologa

en el momento de reinfeccin. La regulacin de respuestas inmunitarias, sea para suprimirlas cuando no se desean o para estimularlas en la prevencin de enfermedades infecciosas, es el principal objetivo mdico de la investigacin en inmunologa.

Referencias generales
Antecedentes histricos Burnet, F.M.: The Clonal Selection Theory of Acquired Immunity. London, Cambridge University Press, 1959. Gowans, J.L.: The lymphocytea disgraceful gap in medical knowledge. Immunol. Today 1996, 17:288291. Landsteiner, K.: The Specicity of Serological Reactions, 3rd ed. Boston, Harvard University Press, 1964. Metchnikoff, E.: Immunity in the Infectious Diseases, 1st ed. New York, Macmillan Press, 1905. Silverstein, A.M.: History of Immunology, 1st ed. London, Academic Press, 1989. Antecedentes biolgicos Alberts, B., Johnson, A., Lewis, J., Raff, M., Roberts, K. and Walter, P.: Molecular Biology of the Cell, 5th ed. New York, Garland Publishing, 2007. Berg, J.M., Stryer, L. and Tymoczko, J.L.: Biochemistry, 5th ed. New York, W.H. Freeman, 2002. Kaufmann, S.E., Sher, A. and Ahmed, R. (Eds): Immunology of Infectious Diseases. Washington, DC: ASM Press, 2001. Mims, C., Nash, A. and Stephen, J.: Mims Pathogenesis of Infectious Disease, 5th ed. London, Academic Press, 2001. Geha, R.S. and Rosen, F.S.: Case Studies in Immunology: A Clinical Companion, 5th ed. New York, Garland Publishing, 2007. Ryan, K.J. (ed): Medical Microbiology, 3rd ed. East Norwalk, CT, Appleton-Lange, 1994. Lodish, H., Berk, A., Kaiser, C.A., Krieger, M., Scott, M.P., Bretscher, A., Ploegh, H., Matsudaira, P.: Molecular Cell Biology, 6th ed. New York, W.H. Freeman, 2008. Revistas primarias dedicadas nica o principalmente a inmunologa Autoimmunity Clinical and Experimental Immunology Comparative and Developmental Immunology European Journal of Immunology Immunity Immunogenetics Immunology Infection and Immunity International Immunology International Journal of Immunogenetics Journal of Autoimmunity Journal of Experimental Medicine Journal of Immunology Nature Immunology Regional Immunology Thymus

Revistas primarias con artculos frecuentes en inmunologa Cell Current Biology EMBO Journal Journal of Biological Chemistry Journal of Cell Biology Journal of Clinical Investigation Molecular Cell Biology Nature Nature Cell Biology Nature Medicine Proceedings of the National Academy of Sciences, USA Science Revistas de revisin en inmunologa Advances in Immunology Annual Reviews in Immunology Contemporary Topics in Microbiology and Immunology Current Opinion in Immunology Immunogenetics Reviews Immunological Reviews Immunology Today Nature Reviews Immunology Research in Immunology Seminars in Immunology The Immunologist Tratados avanzados en inmunologa, compendios, etc. Lachmann, P.J., Peters, D.K., Rosen, F.S., and Walport, M.J. (eds): Clinical Aspects of Immunology, 5th ed. Oxford, Blackwell Scientic Publications, 1993. Mak, T.W. and Simard, J.J.L.: Handbook of Immune Response Genes. New York, Plenum Press, 1998. Paul, W.E. (ed): Fundamental Immunology, 5th ed. New York, Lippincott Williams & Wilkins, 2003. Roitt, I.M. and Delves, P.J. (eds): Encyclopedia of Immunology, 2nd ed (4 vols). London/San Diego, Academic Press, 1998.

39

Inmunidad innata

2
Fig. 2-1. La respuesta a una infeccin inicial ocurre en tres fases. Estas son la fase innata, la respuesta innata inducida temprana y la respuesta inmunitaria adaptativa. Las primeras dos fases dependen del reconocimiento de patgenos por receptores codificados por la lnea germinal del sistema inmunitario innato, mientras que en la inmunidad adaptativa se utilizan receptores especficos de antgeno variables que se producen como resultado de reordenamientos de segmentos gnicos. La inmunidad adaptativa ocurre en etapas tardas, porque las raras clulas B y clulas T especficas del patgeno invasor primero deben pasar por expansin clonal antes de diferenciarse en clulas efectoras que pueden eliminar la infeccin. Los mecanismos efectores que eliminan el agente infeccioso son similares o idnticos en cada fase.

En la mayor parte de este libro se revisan las formas en las cuales la respuesta inmunitaria adaptativa protege al hospedador contra microorganismos que de otro modo pueden causar enfermedad. No obstante, en este captulo se analiza la participacin de las defensas innatas no adaptativas que forman las primeras barreras para la infeccin. Los microorganismos que un individuo sano encuentra a diario slo en ocasiones causan enfermedad perceptible. Casi todos se detectan y destruyen en cuestin de minutos u horas mediante mecanismos de defensa que no dependen de la expansin clonal de linfocitos especficos para antgeno (seccin 1-9) y, as, no requieren un periodo de induccin prolongado: estos son los mecanismos de la inmunidad innata. En la figura 2-1 se resumen el tiempo de evolucin y las diferentes fases de un encuentro con un patgeno nuevo. Algunos mecanismos inmunitarios innatos empiezan a actuar de inmediato al encontrarse con agentes infecciosos. Otros se activan y amplifican en presencia de infeccin y una vez que termina la infeccin vuelven a cifras basales. Los mecanismos inmunitarios innatos no generan memoria inmunitaria protectora a largo plazo. Slo si un microorganismo infeccioso puede violar estas lneas de defensa surgir una respuesta inmunitaria adaptativa, con generacin de clulas efectoras especficas para antgeno dirigidas al patgeno especfico, y clulas de memoria que proporcionan inmunidad duradera contra reinfeccin por el mismo microorganismo. El poder de las respuestas inmunitarias adaptativas se debe a su especificidad para antgeno, que se revisa en los captulos siguientes. Sin embargo, se aprovechan y dependen tambin de muchos de los mecanismos efectores utilizados por el sistema inmunitario innato para eliminar a patgenos, los cuales se describen en este captulo.
Reconocimiento por efectores inespeccos y ampliamente especcos, preformados Reconocimiento de patrones moleculares relacionados con microbio Transporte de antgeno hacia rganos linfoides

Inmunidad innata (inmediata: 0 a 4 h)

Infeccin

Eliminacin del agente infeccioso

Respuesta innata inducida temprana (temprana: 4 a 96 h) Respuesta inmunitaria adaptativa (tarda: > 96 h)

Infeccin

Reclutamiento de inamacin, y activacin de clulas efectoras Reconocimiento por clulas B y T indiferenciadas

Eliminacin del agente infeccioso

Infeccin

Expansin clonal y diferenciacin hacia clulas efectoras

Eliminacin del agente infeccioso

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Captulo 2: Inmunidad innata

Mientras que el sistema inmunitario adaptativo utiliza un gran repertorio de receptores codificados al reordenar segmentos de gen para reconocer una enorme variedad de antgenos (seccin 1-12), la inmunidad innata depende de receptores codificados por lnea germinal para reconocer caractersticas que son comunes para muchos microorganismos. De hecho, los mecanismos de la inmunidad innata discriminan con mucha eficacia entre clulas del hospedador y patgenos, y esta capacidad para distinguir entre lo propio y lo extrao y para reconocer clases amplias de patgenos, contribuye a la induccin de una respuesta inmunitaria adaptativa apropiada. En la primera parte del captulo se consideran las defensas fijas del cuerpo: los epitelios que revisten las superficies interna y externa del mismo, y los fagocitos que yacen por debajo de todas las superficies epiteliales y que fagocitan y digieren microorganismos invasores. Adems de matar microorganismos de manera directa, estos fagocitos inducen la siguiente fase de la respuesta inmunitaria innata, al inducir una respuesta inflamatoria que recluta nuevas clulas fagocticas y molculas efectoras circulantes hacia el sitio de infeccin. En segundo lugar, se hace una descripcin ms detallada del sistema antiguo de receptores con reconocimiento de patrones usado por las clulas fagocticas del sistema inmunitario innato para identificar patgenos y distinguirlos de los antgenos propios. Se revisa cmo, adems de dirigir la destruccin inmediata de patgenos, la estimulacin de algunos de estos receptores sobre macrfagos y clulas dendrticas lleva a que se conviertan en las clulas que pueden presentar con eficacia antgeno a linfocitos T, lo que inicia una respuesta inmunitaria adaptativa. La tercera parte del captulo se dedica a un sistema de protenas plasmticas conocido como el sistema del complemento. Este importante elemento de la llamada inmunidad innata humoral interacta con microorganismos y promueve su eliminacin por clulas fagocticas. En la ltima parte del captulo se describe cmo las citocinas y las quimiocinas producidas por los fagocitos y clulas dendrticas activados inducen las fases ms tardas de la respuesta inmunitaria innata, como la llamada respuesta de fase aguda. Tambin se presenta otra clula del sistema inmunitario innato, los linfocitos citolticos (clulas NK), que contribuyen a defensas innatas del hospedador contra virus y otros microorganismos patgenos intracelulares. En esta fase tienen lugar los primeros pasos hacia el inicio de una respuesta inmunitaria adaptativa, de modo que si las respuestas innatas no eliminan la infeccin, surgir una respuesta inmunitaria completa.

Primera lnea de defensa del hospedador


Los microorganismos que causan enfermedad en seres humanos y animales entran al cuerpo en diferentes sitios y producen sntomas de enfermedad mediante diversos mecanismos. Muchos agentes infecciosos diferentes pueden causar enfermedad y daar tejidos, y se denominan microorganismos patgenos o patgenos. En vertebrados, la invasin microbiana inicialmente es contrarrestada por defensas innatas que preexisten en todos los individuos y empiezan a actuar en el transcurso de minutos luego del encuentro con el agente infeccioso. Slo cuando las defensas innatas del hospedador se superan, es necesaria una respuesta inmunitaria adaptativa. Aunque es obvio que la inmunidad innata es suficiente para evitar que el cuerpo quede rebasado de manera sistemtica por el vasto nmero de microorganismos que viven en l, los patgenos, casi por definicin, han adquirido formas de vencer las defensas innatas del hospedador con mayor eficacia que otros microorganismos. Una vez que han ingresado, se requieren los esfuerzos concertados de respuestas inmunitarias, tanto innata como adaptativa, para eliminarlos del cuerpo. De cualquier modo, incluso en estos casos el sistema inmunitario innato por lo general efecta una valiosa funcin de retraso, al mantener a raya el nmero de patgenos mientras el sistema inmunitario adaptativo se prepara para entrar en accin. En la primera parte de este captulo se describen de forma breve los distintos tipos de patgenos y sus estrategias de invasin, y ms

Primera lnea de defensa del hospedador

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tarde se examinan las defensas innatas que, casi siempre, evitan que los microorganismos establezcan una infeccin. Se revisan las funciones de defensa de las superficies epiteliales del cuerpo, la funcin de pptidos y protenas antimicrobianos, y la defensa de los tejidos del cuerpo por clulas fagocticas (macrfagos y neutrfilos) que se unen a microorganismos invasores y los ingieren.

2-1

Las enfermedades infecciosas son causadas por diversos agentes vivos que se replican en sus hospedadores

Los agentes que causan enfermedad se clasifican en cinco grupos: virus, bacterias, hongos, protozoarios y helmintos (gusanos). Los protozoarios y los gusanos generalmente se agrupan como parsitos, y son estudiados por la parasitologa, mientras que la microbiologa se encarga de virus, bacterias y hongos. En la figura 2-2 se muestran las clases de microorganismos y parsitos que causan enfermedad con ejemplos tpicos de cada una. Las caractersticas de cada patgeno son su modo de transmisin, su mecanismo de replicacin, su mecanismo de patogenia (los medios por los cuales causa enfermedad) y la respuesta que desencadena por parte del hospedador. Los distintos hbitos y ciclos de vida de diferentes patgenos significan que una gama de diferentes mecanismos inmunitarios innatos y adaptativos tienen que desplegarse para su destruccin. Los agentes infecciosos pueden crecer en todos los compartimientos del cuerpo, como se muestra en la figura 2-3. En el captulo 1 se describi que pueden definirse dos compartimientos importantes: extracelular e intracelular. Las respuestas inmunitarias innatas y adaptativas tienen diferentes maneras de afrontar patgenos que se encuentran en estos dos compartimientos. Muchas bacterias viven y se replican en espacios extracelulares, sea dentro de tejidos o sobre la superficie de los epitelios que revisten cavidades corporales. Las bacterias extracelulares por lo general son susceptibles a muerte por fagocitos, un extremo importante del sistema inmunitario innato, pero algunos microorganismos, como especies de Staphylococcus y Streptococcus, estn protegidos por una cpsula de polisacrido que resiste a la fagocitosis. Esto puede superarse hasta cierto grado mediante la ayuda de otro componente de la inmunidad innata (el complemento) que hace a la bacteria ms susceptible a fagocitosis. En la respuesta inmunitaria adaptativa, las bacterias se hacen ms susceptibles a la fagocitosis por la accin combinada de anticuerpos y complemento. Los patgenos intracelulares obligados, como todos los virus, deben invadir las clulas hospedadoras para replicarse, mientras que los patgenos intracelulares facultativos, como las micobacterias, pueden replicarse sea dentro o fuera de las clulas. Debe evitarse que los patgenos intracelulares entren a las clulas, o detectarlos y eliminarlos una vez que lo han hecho. Se pueden subdividir en los que se replican libres en la clula, como los virus y ciertas bacterias (p. ej., Chlamydia, Rickettsia y Listeria) y los que se replican dentro de vesculas intracelulares, como las micobacterias. Los agentes infecciosos que viven dentro de las clulas con frecuencia causan enfermedad al daar o matar a las clulas que los alojan. El sistema inmunitario innato tiene dos medios generales de defensa contra este tipo de patgenos. Los fagocitos pueden captar el patgeno antes de que entre a las clulas, mientras que los linfocitos citolticos pueden reconocer de modo directo y matar clulas infectadas por algunos patgenos intracelulares. Los linfocitos citolticos son esenciales para mantener a raya algunas infecciones vricas en tanto se genera una respuesta inmunitaria adaptativa, luego de lo cual las clulas T citotxicas son capaces de asumir la funcin de matar clulas infectadas por virus. Los patgenos que viven dentro de vesculas de macrfagos pueden hacerse susceptibles a muerte despus de activacin del macrfago como resultado de acciones de linfocitos citolticos o clulas T (fig. 2-3). Una vez que los patgenos han superado las defensas de la inmunidad innata, crecen y se replican en el cuerpo, y causan enfermedades muy diferentes que reflejan las diversas maneras en las cuales daan tejidos (fig. 2-4). Muchas de las bacterias patgenas extracelulares ms peligrosas causan enfermedad al liberar

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Captulo 2: Inmunidad innata

Fig. 2-2. Diversos microorganismos pueden causar enfermedades. Hay cinco tipos de patgenos: virus, bacterias, hongos, protozoarios y gusanos. Se listan algunos patgenos bien conocidos de cada grupo.

Algunas causas comunes de enfermedades en humanos Adenovirus Herpesvirus Virus DNA Poxvirus Parvovirus Papovavirus Hepadnavirus Ortomixovirus Paramixovirus Virus Coronavirus Picornavirus Reovirus Virus RNA Togavirus Flavivirus Arenavirus Rabdovirus Retrovirus Cocos grampositivos Cocos gramnegativos Bacilos grampositivos Bacilos gramnegativos Bacterias Firmicutes Espiroquetas Actinobacterias Protobacterias Clamidias Mollicutes Hongos Ascomicetos Clostridios Espiroquetas Micobacterias Rickettsias Clamidias Micoplasmas Estalococos Estreptococos Neisserias Virus del resfriado, SARS Poliomielitis, coxsackie, hepatitis A, rinovirus Rotavirus, reovirus Rubola, encefalitis transmitida por artrpodo Virus transmitidos por artrpodos (ebre amarilla, dengue) Coriomeningitis linfoctica, ebre de Lassa Rabia Virus de la leucemia humana de clulas T, VIH Staphylococcus aureus Streptococcus pneumoniae, S. pyogenes Neisseria gonorrhoeae, N. meningitidis Corynebacterium diphtheriae, Bacillus anthracis, Listeria monocytogenes Salmonella typhi, Shigella exneri, Campylobacter jejuni, Vibrio cholerae, Yersinia pestis, Pseudomonas aeruginosa, Brucella melitensis, Haemophilus inuenzae, Legionella pneumophilus, Bordetella pertussis Clostridium tetani, C. botulinum, C. perfringens Treponema pallidum, Borrelia burgdorferi, Leptospira interrogans Mycobacterium tuberculosis, M. leprae, M. avium Rickettsia prowazekii Chlamydia trachomatis Mycoplasma pneumoniae Candida albicans, Cryptococcus neoformans, Aspergillus fumigatus, Histoplasma capsulatum. Coccidioides immitis, Pneumocystis carinii Entamoeba histolytica, Giardia intestinalis, Leishmania donovani, Plasmodium falciparum, Trypanosoma brucei, Toxoplasma gondii, Cryptosporidium parvum Intestinales Gusanos Nematodos Tejidos Duelas Sangre, hgado Trichuris trichura, Trichinella spiralis. Enterobius vermicularis, Ascaris lumbricoides, Ancylostoma duodenale, Strongyloides stercoralis Onchocerca volvulus, Loa loa, Dracuncula medinensis Schistosoma mansoni, Clonorchis sinensis Adenovirus humanos (p. ej., tipos 3, 4 y 7) Herpes simple, varicela-zoster, virus de Epstein-Barr, citomegalovirus, HHV8 Variola, virus de la vacuna Parvovirus humano Virus del papiloma Virus de la hepatitis B Virus de la gripe Parotiditis, sarampin, virus sincitial respiratorio

Protozoa

Primera lnea de defensa del hospedador

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Extracelular Espacios intersticiales, sangre, linfa Sitio de infeccin Supercies epiteliales

Intracelular Citoplsmica Vesicular

Virus Bacterias Protozoarios Hongos Gusanos Microorganismos

Neisseria gonorrhoeae Mycoplasma spp. Streptococcus pneumoniae Vibrio cholerae Escherichia coli Helicobacter pylori Candida albicans Gusanos Pptidos antimicrobianos Anticuerpos, en especial IgA

Virus Chlamydia spp. Rickettsia spp. Listeria monocytogenes Protozoarios

Mycobacterium spp. Salmonella typhimurium Yersinia pestis Listeria spp. Legionella pneumophila Cryptococcus neoformans Leishmania spp. Trypanosoma spp. Histoplasma Activacin de macrfagos dependiente de clulas T y de linfocitos citolticos

Fig. 2-3. Los patgenos pueden encontrarse en diversos compartimientos del cuerpo, donde diferentes mecanismos de defensa del hospedador deben combatirlos. Casi todos los patgenos tienen una fase extracelular en la cual son vulnerables a las molculas y clulas circulantes de la inmunidad innata, y a los anticuerpos de la respuesta inmunitaria adaptativa. Todos estos eliminan al microorganismo principalmente al promover su fagocitosis por los fagocitos del sistema inmunitario. Las fases intracelulares de patgenos, como los virus, no son accesibles a estos mecanismos; en cambio, la clula infectada es atacada por los linfocitos citolticos de la inmunidad innata o por las clulas T citotxicas de la inmunidad adaptativa. La activacin de macrfagos como resultado de la actividad de linfocitos NK o de clulas T puede inducir al macrfago para que destruya patgenos que viven dentro de vesculas de macrfagos.

Inmunidad protectora

Complemento Fagocitosis Anticuerpos

Linfocitos citolticos Clulas T citotxicas

toxinas protenicas, contra las cuales el sistema inmunitario innato tiene poca defensa. Para neutralizar la accin de esas toxinas son necesarios anticuerpos muy especficos producidos por el sistema inmunitario adaptativo (fig. 1-26). El dao causado por un agente infeccioso particular tambin depende del sitio donde crece; por ejemplo, en los pulmones Streptococcus pneumoniae causa neumona, mientras que en la sangre causa una enfermedad sistmica rpidamente letal, la septicemia neumoccica. Como se seala en las secciones siguientes, para que un microorganismo invada el cuerpo, primero debe unirse a un epitelio o cruzarlo. Los patgenos intestinales, como Salmonella typhi, el agente causal de la fiebre tifoidea, o Vibrio cholerae, que origina clera, se diseminan por medio de alimentos y agua contaminados con materia fecal, respectivamente. Las respuestas inmunitarias a este tipo de patgeno ocurren en el sistema inmunitario especializado de las mucosas, una vez que han pasado la barrera epitelial (cap. 11). La primera defensa contra microorganismos que invaden a travs del intestino consta de un epitelio intestinal sano, y de la flora intestinal, que compite con los patgenos por nutrientes y por sitios de fijacin epitelial. Casi todos los microorganismos patgenos han evolucionado para ser capaces de superar respuestas inmunitarias innatas y seguir creciendo, lo que produce enfermedad en seres humanos. Se necesita una respuesta inmunitaria adaptativa para eliminarlos, y para prevenir reinfeccin subsiguiente. Otros patgenos nunca son eliminados por completo por el sistema inmunitario, y persisten en el organismo durante aos. Aun as, casi ningn patgeno es universalmente letal. Los que han vivido durante miles de aos en los seres humanos han evolucionado mucho para explotar a sus hospedadores; no pueden alterar su patogenicidad sin alterar el trmino medio que han alcanzado con el sistema inmunitario de los seres humano. Matar al hospedador con rapidez no es mejor para la supervivencia a largo plazo del patgeno que ser eliminado por la respuesta inmunitaria antes de que el microorganismo tenga tiempo para infectar a alguien ms. En resumen, el ser humano se ha adaptado para vivir con sus enemigos, y estos ltimos con el ser humano. Con todo, la preocupacin reciente acerca de cepas muy patgenas de gripe aviar, y el episodio de SARS (sndrome de dificultad respirato-

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Captulo 2: Inmunidad innata

Mecanismos directos de dao de tejidos por patgenos Produccin de exotoxinas Mecanismo patognico Endotoxina Efecto citoptico directo

Mecanismos indirectos de dao de tejidos por patgenos Complejos inmunitarios Anticuerpos contra el hospedador Inmunidad mediada por clulas

Agente infeccioso

Streptococcus pyogenes Staphylococcus aureus Corynebacterium diphtheriae Clostridium tetani Vibrio cholerae

Escherichia coli Haemophilus inuenzae Salmonella typhi Shigella Pseudomonas aeruginosa Yersinia pestis

Variola Varicela-zoster Virus de la hepatitis B Virus de la poliomielitis Virus del sarampin Virus de la gripe Virus del herpes simple Virus del herpes humano 8 (HHV8) Viruela Varicela, herpes zoster Hepatitis Poliomielitis Sarampin, panencefalitis esclerosante subaguda Gripe Herpes labial Sarcoma de Kaposi

Virus de la hepatitis B Paludismo Streptococcus pyogenes Treponema pallidum Casi todas las infecciones agudas Enfermedad renal Depsitos vasculares Glomerulonefritis Dao renal en la slis secundaria Depsitos renales transitorios

Streptococcus pyogenes Mycoplasma pneumoniae

Mycobacterium tuberculosis Mycobacterium leprae Virus de la coriomeningitis linfoctica Borrelia burgdorferi Schistosoma mansoni Virus del herpes simple Tuberculosis Lepra tuberculoide Meningitis asptica Artritis de Lyme Esquistosomiasis Queratitis estromal herptica

Enfermedad

Amigdalitis, escarlatina Furnculos, sndrome de choque txico, intoxicacin alimentaria Difteria Ttanos Clera

Septicemias por gramnegativos Meningitis, neumona Tifoidea Disentera bacilar Infeccin de heridas Peste

Fiebre reumtica Anemia hemoltica

Fig. 2-4. Los patgenos pueden daar tejidos de diferentes maneras. Se muestran los mecanismos de dao, agentes infecciosos representativos y los nombres comunes de las enfermedades relacionadas con cada uno. Los microorganismos liberan exotoxinas y actan en la superficie de clulas hospedadoras, por ejemplo al unirse a receptores. Las endotoxinas, que son componentes intrnsecos de la estructura microbiana, desencadenan la liberacin de citocinas por fagocitos, que producen sntomas locales o sistmicos. Muchos patgenos son citopticos, y daan de modo directo a las clulas que infectan. Por ltimo, una respuesta inmunitaria adaptativa al patgeno puede generar complejos antgeno:anticuerpo que activan neutrfilos y macrfagos, anticuerpos que pueden reaccionar de forma cruzada con tejidos del hospedador, o clulas T que eliminan clulas infectadas. Todos stos son potencialmente dainos para los tejidos del hospedador. Adems, los neutrfilos, las clulas ms abundantes en etapas tempranas de los procesos infecciosos, liberan muchas protenas y molculas pequeas de mediadores inflamatorios que controlan la infeccin y que causan dao hstico (fig. 2-9).

ria aguda/grave) en 2002-2003, causado por un coronavirus proveniente de murcilagos que caus neumona grave en los seres humanos, constituyen un recordatorio de que infecciones nuevas y letales pueden transferirse a seres humanos desde reservorios en animales. stas se conocen como infecciones zoonticas, y es necesario estar alerta en todo momento respecto al surgimiento de nuevos patgenos y nuevas amenazas para la salud. El virus de la inmunodeficiencia humana que causa sida (cap. 12) constituye un aviso de que el ser humano permanece constantemente vulnerable.

2-2

Los agentes infecciosos deben vencer defensas innatas del hospedador para establecer un foco de infeccin

El cuerpo est constantemente expuesto a microorganismos que se hallan en el ambiente, incluso agentes infecciosos expulsados por otros individuos infectados. El contacto con estos microorganismos puede ocurrir por medio de superficies epiteliales externas o internas: la mucosa de las vas respiratorias proporciona una ruta de entrada para microorganismos transportados por el aire, y la mucosa gastrointestinal hace lo mismo para microorganismos en los alimentos y el agua. Las mordeduras y picaduras de insectos, y las heridas, permiten que los microorganismos penetren en la piel, y el contacto directo entre individuos ofrece oportunidades para infeccin de sta, del intestino y la mucosa del aparato reproductor (fig. 2-5). A pesar de esta exposicin, la enfermedad infecciosa afortunadamente se observa con poca frecuencia. Las superficies epiteliales del cuerpo constituyen una barrera eficaz contra casi todos los microorganismos, y se reparan con rapidez si sufren heridas. Adems, casi todos los microorganismos que logran cruzar una superficie epitelial son eliminados con eficiencia por mecanismos inmunitarios innatos que funcionan en los tejidos subyacentes. As, estas defensas casi

Primera lnea de defensa del hospedador

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Vas de infeccin para patgenos Ruta de entrada Mucosas Gotitas inhaladas Vas respiratorias Esporas Bacillus anthracis Agua o alimentos contaminados Salmonella typhi Rotavirus Treponema pallidum Vas de la reproduccin Contacto fsico VIH Epitelios externos Supercie externa Contacto fsico Abrasiones menores en la piel Heridas y abrasiones Heridas por funcin Manipulacin de animales infectados Picaduras de mosquito (Aedes aegypti) Mordeduras o picaduras de insecto Mordeduras de garrapata del ciervo Picaduras de mosquito (Anopheles) Trichophyton Bacillus anthracis Clostridium tetani Francisella tularensis Flavivirus Borrelia burgdorferi Plasmodium spp. Tia de los pies Carbunco cutneo Ttanos Tularemia Sida Carbunco por inhalacin Tifoidea Diarrea Slis Virus de la inuenza Neisseria meningitidis Inuenza Meningitis meningoccica Manera de transmisin Patgeno Enfermedad

Fig. 2-5. Los patgenos infectan el cuerpo por medio de diversas vas.

Tubo digestivo

Fiebre amarilla Enfermedad de Lyme Paludismo

siempre previenen el establecimiento de infeccin. Es difcil saber cuntas infecciones se repelen de este modo, porque no causan sntomas y no se detectan. Est claro que los microorganismos que un humano normal inhala o ingiere, o que entran a travs de heridas menores, se mantienen a raya o se eliminan, porque rara vez causan enfermedad clnica. Ocurre enfermedad cuando un microorganismo logra evadir o superar las defensas innatas del hospedador y establecer un sitio de infeccin local, y despus se replica ah para permitir su transmisin en el cuerpo. En algunos casos, como en el pie de atleta, la infeccin inicial permanece localizada y no causa enfermedad importante. En otros casos, el agente infeccioso provoca dao importante y enfermedad grave a medida que se disemina por los linfticos o el torrente sanguneo, invade y destruye tejidos, o altera el funcionamiento del cuerpo con sus toxinas, como en el caso del microorganismo que causa el ttanos (Clostridium tetani) que secreta neurotoxina muy potente. La diseminacin de un patgeno a menudo se contrarresta inicialmente por una respuesta inflamatoria que recluta ms clulas y molculas efectoras del sistema inmunitario innato desde vasos sanguneos locales (fig. 2-6), mientras que induce coagulacin adicional en el flujo descendente de manera que el microbio no pueda diseminarse por la sangre. Las respuestas inducidas de la inmunidad innata actan durante varios das, tiempo durante el cual se encuentra en proceso la respuesta inmunitaria adaptativa para contrarrestar a los antgenos del patgeno llevados a tejido linfoide local por clulas dendrticas (seccin 1-15). Una respuesta inmunitaria adaptativa difiere de la inmunidad innata en su capacidad para dirigir estructuras que son especficas para cepas y variantes particulares de patgenos.

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Captulo 2: Inmunidad innata

Adhesin al epitelio

Infeccin local, penetracin del epitelio

Infeccin local de tejidos

Inmunidad adaptativa

macrfago hstico

clula dendrtica hstica vaso sanguneo

Proteccin contra infeccin


Complemento, citocinas, quimiocinas, fagocitos, linfocitos citolticos Activacin de macrfagos Las clulas dendrticas emigran hacia ganglios linfticos e inician inmunidad adaptativa La coagulacin de la sangre ayuda a limitar la diseminacin de la infeccin

Flora normal Factores qumicos locales Fagocitos (en especial en los pulmones)

Induccin de cicatrizacin de heridas Las protenas y pptidos antimicrobianos, los fagocitos y el complemento destruyen microorganismos invasores Activacin de clulas T :?

Infeccin eliminada mediante anticuerpo especco Activacin de macrfagos dependiente de clulas T, y clulas T citotxicas

Fig. 2-6. Una infeccin y la respuesta a la misma pueden dividirse en una serie de etapas. Estas fases se ilustran en esta figura para un microorganismo infeccioso que entra a travs de una herida en la piel. Este agente primero debe adherirse a las clulas epiteliales y despus cruzar el epitelio. Una respuesta inmunitaria local puede prevenir que se establezca la infeccin. De no ser as, ayuda a contenerla y transporta tambin el agente infeccioso, a travs de la linfa y dentro de clulas dendrticas, hacia ganglios linfticos locales. Esto inicia la respuesta inmunitaria adaptativa y la eliminacin final de la infeccin. Hay dudas respecto a la funcin de las clulas T : (seccin 2-34), y esto se indica con un signo de interrogacin.

Esta respuesta por lo general elimina la infeccin y protege al hospedador contra reinfeccin por el mismo patgeno, al producir clulas y anticuerpos efectores contra el patgeno, y por la generacin de memoria inmunitaria del microorganismo.

2-3

Las supercies epiteliales del cuerpo constituyen las primeras lneas de defensa contra la infeccin

Las superficies del cuerpo estn defendidas por epitelios, que proporcionan una barrera fsica entre el medio interno y el mundo externo que contiene patgenos (fig. 2-7). Las clulas epiteliales se mantienen juntas mediante zonas de oclusin (uniones intercelulares hermticas), que forman un eficaz sello contra el ambiente externo. Los epitelios comprenden la piel y los revestimientos de las estructuras tubulares del cuerpo (tubo digestivo, vas respiratorias y aparatos urinario y reproductor). Las infecciones slo ocurren cuando el patgeno coloniza o cruza estas barreras, y dado que las capas protectoras secas de la piel constituyen una barrera ms formidable, los patgenos entran ms a menudo por medio de las superficies epiteliales internas, que constituyen la mayor parte de las superficies epiteliales del cuerpo. La importancia de los epitelios en la proteccin contra infeccin es obvia cuando se rompe la barrera, como en presencia de heridas, quemaduras y prdida

Piel

Intestino

Pulmones

Ojos/nariz

Clulas epiteliales unidas mediante zonas de oclusin Mecnica Flujo longitudinal de aire o lquido pH bajo Qumica Fig. 2-7. Muchas barreras evitan que los patgenos crucen epitelios y colonicen tejidos. Los epitelios de superficie proporcionan barreras mecnicas, qumicas y microbiolgicas para las infecciones. cidos grasos Enzimas (pepsina) Pptidos antibacterianos Microbiolgica Flora normal Movimiento de moco por los cilios Lgrimas Cilios nasales Enzimas en lgrimas (lisozima)

Primera lnea de defensa del hospedador

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de la integridad de los epitelios internos del cuerpo, en cuyo caso la infeccin es una importante causa de mortalidad y morbilidad. En ausencia de herida o de alteracin, los patgenos normalmente cruzan barreras epiteliales al unirse a molculas sobre las superficies epiteliales de los rganos internos, o establecer una infeccin al adherirse y colonizar dichas superficies. Esta fijacin especfica permite al patgeno infectar la clula epitelial, daar el epitelio de modo que pueda cruzarse o, en el caso de los patgenos colonizadores, evitar ser desprendidos por el flujo de aire o de lquido por la superficie epitelial. Los epitelios internos se conocen como epitelios mucosos porque secretan un lquido viscoso llamado moco, que contiene muchas glucoprotenas denominadas mucinas. Cuando los microorganismos quedan cubiertos con moco puede evitarse que se adhieran al epitelio, y en epitelios de mucosas como la de las vas respiratorias, los microorganismos pueden expulsarse en el flujo de moco impulsado por el movimiento de los cilios epiteliales. La eficacia del flujo de moco para eliminar infeccin se ilustra por personas con secrecin defectuosa de moco o inhibicin del movimiento ciliar, como ocurre en la fibrosis qustica, una enfermedad hereditaria. Esos individuos suelen presentar infecciones pulmonares causadas por bacterias que colonizan la superficie epitelial pero no la cruzan. En el intestino, el peristaltismo es un mecanismo importante para mantener tanto el alimento como los agentes infecciosos movindose por el cuerpo. La falta de peristaltismo tpicamente se acompaa de crecimiento excesivo de bacterias patgenas dentro de la luz del intestino. Los epitelios de superficie son ms que meras barreras fsicas para la infeccin; tambin producen sustancias qumicas microbicidas o que inhiben el crecimiento microbiano. Por ejemplo, las enzimas antibacterianas lisozima y fosfolipasa A se secretan en las lgrimas y la saliva, y esta ltima contiene varias histatinas (pptidos con alto contenido de histidina con propiedades antimicrobianas). El pH cido del estmago y las enzimas digestivas, sales biliares, cidos grasos y lisolpidos que se encuentran en la parte alta del tubo digestivo, crean una barrera qumica considerable para la infeccin. En partes ms bajas del tubo digestivo, las clulas de Paneth, que residen en la base de las criptas en el intestino delgado por debajo de las clulas primordiales epiteliales, sintetizan pptidos antibacterianos y antimicticos llamados criptidinas o defensinas . Otros epitelios producen pptidos antimicrobianos relacionados, las defensinas , principalmente en las vas respiratorias y aparato urogenital, la piel y la lengua. Los pptidos antimicrobianos participan en las defensas inmunitarias de muchos organismos, incluso en seres humanos y otros vertebrados que pueden montar una respuesta inmunitaria adaptativa. Es an ms notoria la resistencia a la infeccin en insectos y otros invertebrados, e incluso plantas, en los cuales la inmunidad innata es el nico sistema de defensa del hospedador. En todos estos organismos, los pptidos antimicrobianos son una parte importante de las defensas. Los pptidos antimicrobianos, como las defensinas, son pptidos catinicos que se cree matan bacterias al daar la membrana de la clula bacteriana. Las protenas antimicrobianas que funcionan mediante un mecanismo diferente se secretan hacia los lquidos que baan las superficies epiteliales de los pulmones y los intestinos. Estas protenas cubren la superficie de patgenos de manera que los macrfagos los fagocitan con mayor facilidad. Son miembros de una familia de receptores capaces de reconocer caractersticas comunes de superficies microbianas, y se consideran en detalle ms adelante en este captulo. Adems de estas defensas, casi todas las superficies epiteliales se relacionan con flora normal de bacterias no patgenas, conocidas como bacterias comensales, que compiten con microorganismos patgenos por nutrientes y por sitios de fijacin sobre clulas epiteliales. Esta flora tambin puede producir sustancias antimicrobianas, como el cido lctico producido por lactobacilos vaginales, algunas cepas de las cuales tambin producen pptidos antimicrobianos (bacteriocinas). Cuando se mata con antibioticoterapia a bacterias no patgenas, microorganismos patgenos suelen reemplazarlas y causar enfermedad. En ciertas circunstancias las bacterias comensales pueden producir enfermedad. Su supervivencia sobre las superficies del cuerpo del ser humano est regulada por un equilibrio entre el cre-

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Captulo 2: Inmunidad innata

El macrfago expresa receptores para muchos constituyentes bacterianos receptor de manosa receptor de LPS (CD14) TLR-4 receptor de glucano receptor recolector

cimiento de bacterias y la eliminacin por los mecanismos de inmunidad innata; las fallas de esta regulacin, como las producidas por las deficiencias hereditarias de protenas de la inmunidad innata (cap. 12), pueden permitir que bacterias normalmente no patgenas crezcan en exceso y causen enfermedad.

2-4

Despus de penetrar en los tejidos, muchos patgenos son reconocidos, ingeridos y destruidos por fagocitos

La unin de bacterias a receptores de macrfago inicia la liberacin de citocinas y mediadores lpidos pequeos de inamacin mediadores lpidos LPS

quimiocinas citocinas

Los macrfagos fagocitan y digieren bacterias a las cuales se unen

lisosoma fagosoma

fagolisosoma Fig. 2-8. Los patgenos activan a los macrfagos, los cuales los fagocitan e inician respuestas inflamatorias. Los macrfagos derivan de monocitos circulantes. Tienen muchas de las mismas caractersticas pero adquieren nuevas funciones y nuevos receptores cuando se convierten en clulas en reposo en el tejido conjuntivo de todo el cuerpo. Los macrfagos expresan receptores para muchos componentes bacterianos, entre ellos carbohidratos (receptores de manosa y glucano), lpidos (receptor de LPS) y otros componentes derivados de patgenos (receptores de tipo Toll [TLR] y receptor recolector). La unin de bacterias a receptores de los macrfagos estimula la fagocitosis y la captacin de patgenos dentro de vesculas intracelulares, donde son destruidos. La sealizacin por medio de algunos receptores, como los receptores de tipo Toll, en respuesta a componentes bacterianos, causa la secrecin de citocinas proinflamatorias como la interleucina-1 (IL-1), la IL-6 y el factor de necrosis tumoral- (TNF-).

Si un microorganismo cruza una barrera epitelial y empieza a replicarse en los tejidos del hospedador, casi siempre es reconocido de inmediato por los fagocitos mononucleares, o macrfagos, que residen en estos tejidos. Los macrfagos maduran de modo continuo a partir de monocitos que abandonan la circulacin y emigran hacia tejidos de todo el cuerpo. De forma histrica se han asignado diferentes nombres a macrfagos en distintos tejidos; por ejemplo, clulas de la microglia en el tejido neural, y clulas de Kupffer en el hgado; de manera genrica, estas clulas se denominan como fagocitos mononucleares. Se encuentran en nmeros especialmente grandes en el tejido conjuntivo, en la capa submucosa del tubo digestivo, en los pulmones (donde tambin se encuentran tanto en el intersticio como en los alvolos), a lo largo de ciertos vasos sanguneos en el hgado, y en todo el bazo, donde eliminan clulas sanguneas senescentes (que empiezan a envejecer). La segunda familia importante de fagocitos, los neutrfilos, o leucocitos neutroflicos polimorfonucleares (PMN) son clulas de vida breve que abundan en la sangre, pero que no estn presentes en tejidos sanos normales. Estas dos clulas fagocticas tienen una funcin clave en la inmunidad innata porque pueden reconocer, ingerir y destruir muchos patgenos sin la ayuda de una respuesta inmunitaria adaptativa. Puesto que la mayor parte de los microorganismos entra al cuerpo a travs de la mucosa del intestino y del sistema respiratorio, los macrfagos localizados en los tejidos submucosos son las primeras clulas que encuentran a casi todos los patgenos, pero pronto son reforzados por el reclutamiento de grandes nmeros de neutrfilos hacia sitios de infeccin. Los macrfagos y neutrfilos reconocen patgenos por medio de receptores de superficie celular que pueden distinguir entre las molculas de superficie desplegadas por patgenos y las del hospedador. Estos receptores, que se examinan con mayor detalle en este captulo, comprenden el receptor de manosa de macrfago, que se encuentra sobre macrfagos pero no sobre monocitos o neutrfilos; receptores fagocticos, que se unen a muchos ligandos que tienen carga negativa, como los cidos lipoteicoicos, que son componentes de la pared celular de bacterias grampositivas, y CD14 que se encuentra de manera predominante sobre monocitos y macrfagos (fig. 2-8). ste se une al lipopolisacrido presente sobre la superficie de bacterias gramnegativas, y permite que sean reconocidas por otros receptores llamados receptores tipo Toll. En muchos casos, la unin de un patgeno a estos receptores de superficie celular conduce a fagocitosis, seguida por la destruccin del patgeno dentro del fagocito. La fagocitosis es un proceso activo, en el cual el patgeno unido queda rodeado primero por la membrana del fagocito y luego es internalizado en una vescula encerrada por membrana conocida como un fagosoma o vacuola endoctica. El fagosoma a continuacin se acidifica, lo cual destruye a casi todos los patgenos. Adems de ser fagocticos, los macrfagos y los neutrfilos tienen grnulos delimitados por una membrana, llamados lisosomas, que contienen enzimas, protenas y pptidos que pueden atacar al microbio. El fagosoma se fusiona con uno o ms lisosomas y genera un fagolisosoma en el cual se libera el contenido lisosmico para destruir al patgeno (fig. 2-8). Al momento de la fagocitosis, los macrfagos y los neutrfilos producen una variedad de otros compuestos txicos que ayudan a destruir al microorganismo fagocitado (fig. 2-9). Los ms importantes de stos son los pptidos antimicrobianos y el xido ntrico (NO), el anin superxido (O2) y el perxido de hidrgeno (H2O2) que son directamente txicos para las bacterias. El xido ntrico es producido por una forma de gasto alto de xido ntrico-sintasa, iNOS2. El superxido se

Primera lnea de defensa del hospedador

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Clase de mecanismo Acidicacin Productos derivados de oxgeno txicos xidos de nitrgeno txicos Pptidos antimicrobianos Enzimas

Productos especcos pH = ~3.5 a 4.0, bacteriosttico o bactericida Superxido (O2), perxido de hidrgeno (H2O2), oxgeno singleto (1O2), radical hidroxilo (OH), hipoclorito (OCl) xido ntrico (NO) Defensinas y protenas catinicas Lisozima: disuelve paredes celulares de algunas bacterias grampositivas. Hidrolasas cidas: digieren ms a bacterias Lactoferrina (se une a Fe) y protena de unin a vitamina B12

Fig. 2-9. Agentes bactericidas producidos o liberados por fagocitos en el momento de la ingestin de microorganismos. Casi todos estos agentes se sintetizan tanto en los macrfagos como en los neutrfilos. Algunos de ellos son txicos; otros, como la lactoferrina, funcionan al unirse a nutrientes esenciales y al evitar su captacin por las bacterias. Las mismas sustancias pueden ser liberadas por fagocitos que interactan con superficies grandes cubiertas de anticuerpos, como gusanos parasitarios o tejidos del hospedador. Dado que estos agentes tambin son txicos para las clulas hospedadoras, la activacin de los fagocitos puede causar extenso dao hstico durante una infeccin.

Competidores

origina por diversos componentes por una oxidasa NADPH relacionada con la membrana, en un proceso conocido como la explosin respiratoria porque se acompaa de un aumento transitorio del consumo de oxgeno; la enzima superxido dismutasa convierte el superxido en H2O2 (fig. 2-10). Reacciones qumicas y enzimticas adicionales producen una gama de sustancias qumicas txicas a partir del H2O2, entre ellas el radical hidroxilo (OH), hipoclorito (OCl) e hipobromito (OBr). Los neutrfilos son clulas de vida breve; mueren poco despus de lograr una ronda de fagocitosis. Los neutrfilos destruidos son un componente importante del pus que se forma en algunas infecciones por bacterias extracelulares, que, de este modo, se conocen como bacterias formadoras de pus o pigenas. Por el contrario, los macrfagos tienen vida prolongada y siguen generando nuevos lisosomas. Los pacientes con enfermedad granulomatosa crnica tienen una deficiencia gentica de oxidasa NADPH, lo que significa que los fagocitos no producen los derivados de oxgeno txicos caractersticos de la explosin respiratoria y, as, tienen menos capacidad para destruir microorganismos ingeridos y eliminar una infeccin. Las personas con este defecto son extraordinariamente susceptibles a infecciones bacterianas y micticas, en especial durante la lactancia. Los macrfagos pueden fagocitar patgenos y producir la explosin respiratoria de inmediato en el momento en que encuentran un microorganismo infeccioso, y esto puede ser suficiente para evitar que se establezca una infeccin. Durante el siglo XIX, el inmunlogo celular Elie Metchnikoff crea que la respuesta innata de los macrfagos abarcaba toda la defensa del hospedador y, de hecho, ahora est claro que los invertebrados, como la estrella de mar que estaba estu-

Enfermedad granulomatosa crnica

Fig. 2-10. La explosin respiratoria en macrfagos y en neutrfilos es causada por un incremento transitorio del consumo de oxgeno durante la produccin de metabolitos de oxgeno microbicidas. La ingestin de microorganismos activa al fagocito para ensamblar la enzima de mltiples subunidades oxidasa de NADPH a partir de sus componentes. La enzima activa convierte el oxgeno molecular en el ion superxido (O2) y en otros radicales libres de oxgeno. A continuacin, la dismutasa de superxido (SOD) convierte al ion superxido en perxido de hidrgeno (H2O2) que puede matar microorganismos y tambin es convertido por otras enzimas y por reacciones qumicas con iones ferrosos (Fe2+) en hipoclorito (OCl) y en radical hidroxilo (OH) microbicidas.

La enzima NADPH oxidasa est compuesta de varias subunidades vacuola endoctica gp22phox gp91phox

La NADPH oxidasa activada convierte molculas de O2 en el ion superxido O2 O2

Una segunda enzima, la superxido dismutasa, convierte al superxido en perxido de hidrgeno

Las enzimas peroxidasa y el hierro convierten ms al perxido de hidrgeno en iones hipoclorito y radicales hidroxilo OCl
OH

H2O2
peroxidasa

p47phox Rac p40phox

p67phox SOD

Fe2+

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Captulo 2: Inmunidad innata

diando, dependen por completo de la inmunidad innata para vencer la infeccin. Si bien esto no es el caso en seres humanos y otros vertebrados, la respuesta innata de macrfagos an proporciona la primera lnea de defensa que el microorganismo debe vencer para establecer una infeccin que pueda transmitirse a un nuevo hospedador. Un dato clave que distingue entre microorganismos patgenos y no patgenos es su capacidad para vencer defensas inmunitarias innatas. Los patgenos han creado diversas estrategias para evitar la destruccin inmediata por macrfagos. Como se mencion, muchas bacterias patgenas extracelulares se cubren a s mismas con una cpsula de polisacrido gruesa que no es identificada por los receptores de los fagocitos. Otros patgenos, por ejemplo, las micobacterias, han adquirido por evolucin maneras para crecer dentro de fagosomas de macrfagos al inhibir su acidificacin y fusin con lisosomas. Sin esos recursos, un microorganismo debe entrar al cuerpo en nmeros suficientes para simplemente superar las defensas innatas del hospedador inmediatas y para establecer un foco de infeccin. Un segundo efecto importante de la interaccin entre patgenos y macrfagos hsticos es la activacin de macrfagos para liberar pequeas protenas llamadas citocinas y quimiocinas (citocinas quimioatrayentes) y otros mediadores qumicos que establecen un estado de inflamacin en el tejido y atraen neutrfilos y protenas plasmticas hacia el sitio de infeccin. Se cree que el patgeno induce la secrecin de citocinas y quimiocinas mediante seales suministradas por medio de algunos de los receptores a los cuales se une, y ms adelante se explica cmo ocurre esto en respuesta a lipopolisacrido bacteriano. Los receptores que sealan la presencia de patgenos e inducen citocinas tambin tienen otra funcin importante. sta es inducir la expresin de las llamadas molculas coestimuladoras sobre macrfagos y sobre clulas dendrticas, otro tipo de clulas fagocticas presente en los tejidos, lo que permite que estas clulas presentadoras de antgeno inicien una respuesta inmunitaria adaptativa (seccin 1-7). Las citocinas liberadas por macrfagos hacen una importante contribucin tanto a la inflamacin local como a otras respuestas innatas inducidas que ocurren durante los primeros das de una infeccin nueva. Estas respuestas innatas inducidas y la funcin de citocinas individuales se describen en la ltima parte de este captulo. Sin embargo, dado que una respuesta inflamatoria por lo general se inicia en el transcurso de horas luego de infeccin o de herida, aqu se esboza cmo ocurre, y cmo contribuye a la defensa del hospedador.

2-5

El reconocimiento de patgenos y el dao de tejido inician una respuesta inamatoria

Sndromes hereditarios de ebre peridica

Deciencia de adhesin de leucocitos

La inflamacin tiene tres funciones esenciales en el combate de la infeccin. La primera es suministrar molculas y clulas efectoras adicionales a sitios de infeccin, para incrementar la destruccin de microorganismos invasores por los macrfagos de la primera lnea de defensa. La segunda es inducir coagulacin local de sangre, que proporciona una barrera fsica para la diseminacin de la infeccin en el torrente sanguneo. La tercera es promover la reparacin de tejido lesionado, una funcin no inmunitaria que no se comentar ms adelante. La inflamacin en el sitio de infeccin se inicia por la respuesta de macrfagos a patgenos. Las respuestas inflamatorias se caracterizan desde el punto de vista operativo por dolor, enrojecimiento, aumento de la temperatura e hinchazn en el sitio de una infeccin, lo que refleja cuatro tipos de cambio en los vasos sanguneos locales (fig. 2-11). El primero es un incremento del dimetro vascular, que da pie a aumento del flujo sanguneo local, de ah el incremento de temperatura y el enrojecimiento, y una reduccin en la velocidad del flujo sanguneo, en especial a lo largo de las paredes internas de vasos sanguneos de pequeo calibre. El segundo cambio es que las clulas endoteliales que revisten al vaso sanguneo se activan para expresar molculas de adhesin celular que promueven la unin de leucocitos circulantes. La combinacin de flujo sanguneo reducido y molculas

Primera lnea de defensa del hospedador

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Las citocinas producidas por macrfagos causan dilatacin de vasos sanguneos de pequeo calibre locales citocinas

Los leucocitos se mueven hacia la periferia del vaso sanguneo como resultado de incremento de la expresin de molculas de adhesin

Hay extravasacin de leucocitos en el sitio de infeccin

Ocurre coagulacin de la sangre en los microvasos

quimiocinas

de adhesin permite a los leucocitos fijarse al endotelio y migrar hacia los tejidos, un proceso conocido como extravasacin. Todos estos cambios son iniciados por las citocinas y quimiocinas que se producen por macrfagos activados. Una vez que ha empezado la inflamacin, los primeros leucocitos atrados hacia el sitio son neutrfilos. stos van seguidos por monocitos, que se diferencian hacia macrfagos hsticos (fig. 2-12). Los monocitos tambin tienen la capacidad para dar lugar a clulas dendrticas en los tejidos, dependiendo de las seales precisas que reciban desde su entorno; por ejemplo, el factor estimulador de las colonias de granulocitos y macrfagos (GM-CSF) es una citocina que junto con la interleucina 4 (IL-4) inducen al monocito para que se diferencie hacia una clula dendrtica, mientras que el factor estimulador de granulocitos y macrfagos (M-CSF) es una citocina que induce la diferenciacin hacia macrfagos. En las etapas ms tardas de la inflamacin, tambin entran al sitio infectado otros leucocitos, como los eosinfilos (seccin 1-3) y linfocitos. El tercer cambio importante en los vasos sanguneos locales es un aumento de la permeabilidad vascular. De este modo, en lugar de estar estrechamente unidas entre s, las clulas endoteliales que revisten las paredes del vaso sanguneo se separan, lo que lleva a la salida de lquido y protenas desde la sangre, y su acumulacin local en el tejido. Esto explica la hinchazn o edema, y el dolor, as como la acumulacin de protenas plasmticas que ayudan en la defensa del hospedador. Los cambios que ocu-

Fig. 2-11. La infeccin estimula a los macrfagos para que liberen citocinas y quimiocinas que inician una respuesta inflamatoria. Las citocinas producidas por macrfagos hsticos en el sitio de infeccin causan dilatacin de vasos sanguneos de pequeo calibre locales y cambios en las clulas endoteliales de sus paredes. Estos cambios llevan al movimiento de leucocitos, como neutrfilos y monocitos, hacia afuera de los vasos sanguneos (extravasacin) y hacia el tejido infectado, guiados por quimiocinas producidas por los macrfagos activados. Los vasos sanguneos tambin se hacen ms permeables, lo que permite que haya escape de protenas plasmticas y de lquido hacia los tejidos. Juntos, estos cambios causan los signos inflamatorios caractersticos (calor, dolor, rubor y tumor) en el sitio de la infeccin.

El monocito se une a molculas de adhesin sobre el endotelio vascular cerca de sitios de infeccin, y recibe seal de quimiocinas

El monocito migra hacia el tejido circundante

El monocito se diferencia hacia macrfago y migra al sitio de infeccin


Luz del vaso sanguneo

receptor de quimiocina

molculas de adhesin

quimiocina

Tejido

Fig. 2-12. Los monocitos circulantes en la sangre abandonan el torrente sanguneo para migrar hacia sitios de infeccin e inflamacin. Las molculas de adhesin sobre las clulas endoteliales de la pared del vaso sanguneo primero capturan el monocito y hacen que se adhiera al endotelio vascular. A continuacin las quimiocinas unidas a este endotelio emiten seales al monocito para que migre a travs del endotelio hacia el tejido subyacente. El monocito, que ahora se diferencia en un macrfago, sigue migrando, bajo la influencia de quimiocinas liberadas durante respuestas inflamatorias, hacia el sitio de infeccin. Los monocitos que abandonan la sangre de esta manera tambin tienen la capacidad para diferenciarse en clulas dendrticas (que no se muestran), dependiendo de las seales que reciban desde su ambiente.

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Captulo 2: Inmunidad innata

rren en el endotelio como resultado de inflamacin se conocen en general como activacin endotelial. El cuarto cambio, la coagulacin en microvasos en el sitio de infeccin, evita la diseminacin del patgeno por medio de la sangre. Estos cambios se inducen por diversos mediadores inflamatorios liberados como consecuencia de la identificacin de patgenos por macrfagos. Incluyen los mediadores lpidos de la inflamacin (prostaglandinas, leucotrienos y factor activador de plaquetas [PAF]) que son producidos con rapidez por macrfagos por medio de las vas enzimticas que degradan fosfolpidos de membrana. Sus acciones van seguidas por las de las quimiocinas y citocinas sintetizadas y secretadas por macrfagos en respuesta a patgenos. Por ejemplo, la citocina factor de necrosis tumoral- (TNF-) es un activador potente de clulas endoteliales. Como se seala en la tercera parte de este captulo, otra manera en la cual la identificacin de patgenos desencadena con rapidez una respuesta inflamatoria es por medio de activacin del complemento. Uno de los productos de divisin de la va del complemento es un pptido llamado C5a, el cual es un mediador potente de la inflamacin, con varias actividades. Adems de incrementar la permeabilidad vascular e inducir la expresin de algunas molculas de adhesin, acta como un potente quimioatrayente para neutrfilos y monocitos. C5a tambin activa fagocitos y clulas cebadas locales (seccin 1-3), que a su vez son estimulados para liberar sus grnulos que contienen la pequea molcula inflamatoria histamina y la citocina TNF-. Si ha ocurrido herida, la lesin de los vasos sanguneos desencadena de inmediato dos cascadas de enzimas protectoras. Una es el sistema de cinina de proteasas plasmticas que se desencadena por dao de tejido para producir varios mediadores inflamatorios, entre ellos el pptido vasoactivo bradicinina. El sistema de cininas es un ejemplo de una cascada de proteasa, tambin conocida como una cascada de enzima desencadenada, en la cual las enzimas inicialmente se hallan en una forma inactiva o de proenzima. Despus de que el sistema se inicia, una proteasa activa divide y activa a la siguiente proteasa en la serie, y as sucesivamente. La bradicinina causa un aumento de la permeabilidad vascular que promueve la entrada de protenas plasmticas hacia el sitio de lesin de tejidos. Tambin causa dolor, y aunque es desagradable para la vctima, atrae la atencin hacia el problema, y conduce a la inmovilizacin de la parte del cuerpo afectada, lo que ayuda a limitar la diseminacin de la infeccin. El sistema de coagulacin es otra cascada de proteasa que se desencadena en la sangre luego de dao de vasos sanguneos. Su activacin conduce a la formacin de un cogulo de fibrina, cuya funcin normal es prevenir la prdida de sangre. No obstante, en lo que se refiere a la inmunidad innata, el cogulo fsicamente impide la entrada de microorganismos infecciosos hacia el torrente sanguneo. La cascada de cininas y la cascada de coagulacin de la sangre tambin se desencadenan por clulas endoteliales activadas; de este modo, pueden tener funciones importantes en la respuesta inflamatoria a patgenos incluso si no ha ocurrido herida o lesin macroscpica de tejido. De esta manera, en el transcurso de minutos despus de la penetracin de tejidos por un patgeno, la respuesta inflamatoria causa entrada de protenas y clulas que pueden controlar la infeccin. Tambin forma una barrera fsica en la forma de cogulos para limitar la diseminacin de infeccin, y hace al hospedador por completo consciente de la infeccin local.

Resumen
El cuerpo de mamferos es susceptible a infeccin por muchos patgenos, que para causar enfermedad primero deben hacer contacto con el hospedador y luego establecer un foco de infeccin. Estos patgenos difieren mucho en sus estilos de vida, las estructuras de sus superficies, y sus mecanismos de patogenia, de modo que se necesita un grupo igual de diverso de respuestas defensivas por parte del sistema inmunitario del hospedador. La primera fase de la defensa del hospedador consta de los mecanismos que estn presentes y listos para resistir a un invasor en

Reconocimiento de patrones en el sistema inmunitario innato

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cualquier momento. Las superficies epiteliales del cuerpo mantienen a los patgenos fuera y lo protegen contra la colonizacin, y contra virus y bacterias que entran al cuerpo por medio de interacciones de superficie celular especializadas. Sus mecanismos de defensa comprenden la prevencin de adherencia de patgeno, y la secrecin de enzimas antimicrobianas y pptidos. Las bacterias, los virus y los parsitos que superan estas barreras son enfrentados de inmediato por macrfagos hsticos equipados con receptores de superficie que pueden unirse a muchos tipos de patgeno y fagocitarlos. Esto, a su vez, lleva a una respuesta inflamatoria, que causa la acumulacin de neutrfilos y macrfagos fagocticos en el sitio de la infeccin, que ingieren a los microorganismos invasores y los destruyen.

Reconocimiento de patrones en el sistema inmunitario innato


Aunque dicho sistema carece de la especificidad fina de la inmunidad adaptativa que es necesaria para producir memoria inmunitaria, puede distinguir entre lo propio y lo extrao. Ya se coment de qu manera ocurre esto en la respuesta de macrfagos a microbios patgenos. En esta parte del captulo se describen con mayor detalle los receptores que activan la respuesta inmunitaria innata, incluso los que reconocen patgenos de modo directo y que emiten seales para una respuesta inmunitaria innata celular. Los patrones regulares de estructura molecular se encuentran en muchos microorganismos, no as en las clulas propias del cuerpo. Las protenas que reconocen estas caractersticas ocurren como receptores sobre macrfagos, neutrfilos y clulas dendrticas, y como molculas secretadas. Sus caractersticas generales se contrastan con los receptores especficos para antgeno de la inmunidad adaptativa en la figura 2-13. A diferencia de los receptores de antgeno descritos en el captulo 1, los receptores del sistema inmunitario innato no estn distribuidos de manera clonal; en lugar de eso, hay un grupo dado de receptores sobre todas las clulas del mismo tipo de stas. La unin de estos receptores a componentes de patgeno da lugar a respuestas muy rpidas, que se aplican sin el retraso impuesto por la necesidad de que linfocitos actiInmunidad adaptativa No No No No No S S S S

Caracterstica del receptor Especicidad heredada en el genoma Expresado por todas las clulas de un tipo particular (p. ej., macrfagos) Desencadena respuesta inmediata Reconoce clases amplias de patgenos Interacta con una gama de estructuras moleculares de un tipo dado Codicado en mltiples segmentos de gen Necesita reordenamiento de gen Distribucin clonal Capaz de distinguir incluso entre estructuras moleculares estrechamente relacionadas

Inmunidad innata S S S S S No No No No

Fig. 2-13. Comparacin de las caractersticas de las molculas de reconocimiento de los sistemas inmunitarios innato y adaptativo. En el sistema inmunitario innato se utilizan receptores codificados por genes completos heredados por medio de la lnea germinal. En cambio, en el sistema inmunitario adaptativo se usan receptores de antgeno codificados en segmentos gnicos que se ensamblan en genes completos de receptores de clulas T y de clulas B durante el desarrollo de los linfocitos, un proceso que permite que cada clula individual exprese un receptor de especificidad nica. Los receptores del sistema inmunitario innatos se despliegan de modo no clonal (esto es, por todas las clulas de un tipo celular determinado), mientras que los receptores de antgeno del sistema inmunitario adaptativo estn distribuidos de manera clonal sobre linfocitos individuales y su progenie.

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Captulo 2: Inmunidad innata

Bacterias grampositivas cido protena de cido teicoico supercie lipoteicoico

peptidoglucano

vados se dividan y diferencien durante el desarrollo de una respuesta inmunitaria adaptativa. Los receptores de reconocimiento de patrones del sistema inmunitario innato tienen varias funciones. Muchos son receptores fagocticos que estimulan la ingestin de los patgenos que reconocen. Algunos son receptores quimiotcticos, que guan clulas hacia sitios de infeccin. Una tercera funcin es inducir la produccin de molculas efectoras que contribuyen a las respuestas inducidas ms tardas de inmunidad innata, y tambin a inducir protenas que influyen sobre el inicio y la naturaleza de cualquier respuesta inmunitaria adaptativa subsiguiente. En esta parte del captulo primero se exponen las propiedades de reconocimiento de algunos receptores que se unen de modo directo a patgenos. Despus el captulo se enfoca en un sistema de reconocimiento de patgeno y de sealizacin, antiguo desde el punto de vista evolutivo, mediado por receptores llamados receptores tipo Toll, que tiene una participacin clave en la defensa contra infeccin en plantas, insectos adultos, y vertebrados, incluso mamferos.

membrana celular fosfolpido

2-6

Receptores con especicidad para molculas de patgeno reconocen modelos de motivos estructurales repetitivos

Bacterias gramnegativas lipopolisacrido (LPS) protena de supercie

membrana externa lipoprotena peptidoglucano membrana celular

Fig. 2-14. Organizacin de las paredes celulares de bacterias grampositivas y gramnegativas. Las bacterias grampositivas (panel superior) tienen una pared celular compuesta por una capa externa de una matriz repetitiva de molculas de peptidoglucano en la cual la N-acetilglucosamina (hexgonos de color azul claro) y el cido N-acetilmurmico (crculos de color prpura) repetitivos estn unidos mediante puentes peptdicos y forman una red tridimensional extensa. Las protenas de superficie bacteriana y otras molculas, como el cido teicoico, estn embebidas dentro de esta capa de peptidoglucano y los cidos lipoteicoicos enlazan la capa de peptidoglucano a la membrana celular bacteriana en s. La pared celular de bacterias gramnegativas (panel inferior) est compuesta por una matriz delgada interna de peptidoglucano y una membrana lipdica externa, en la cual hay embebidas protenas y el lipopolisacrido (LPS) caracterstico de las bacterias gramnegativas.

Los microorganismos tpicamente portan patrones de repeticin de estructura molecular sobre su superficie. Por ejemplo, las paredes celulares de bacterias grampositivas y gramnegativas estn compuestas de una matriz de protenas, carbohidratos y lpidos en una disposicin repetitiva (fig. 2-14). Los cidos lipoteicoicos de las paredes celulares de bacterias grampositivas, y el lipopolisacrido de la membrana externa de bacterias gramnegativas son, como se observar, importantes en el reconocimiento de bacterias por el sistema inmunitario innato. Otros componentes microbianos tambin tienen una estructura repetitiva. Los flagelos de bacterias estn hechos de subunidades protenicas repetidas, y el DNA bacteriano contiene repeticiones no metiladas del dinucletido CpG. Los virus casi siempre expresan RNA bicatenario como parte de su ciclo de vida. Estas estructuras repetitivas se conocen en general como patrones moleculares relacionados con patgeno (PAMP), y los receptores que los reconocen, como receptores de reconocimiento de patrn (PRR). Un receptor de ese tipo es la lectina de unin a manosa (MBL), que est presente como una protena libre en el plasma sanguneo. Como se comenta en la siguiente parte de este captulo, puede iniciar la va de la lectina de activacin del complemento, pero aqu se revisa en forma breve como un buen ejemplo del reconocimiento de patrones moleculares. El reconocimiento de patgeno y la discriminacin de lo propio por MBL se deben al reconocimiento de una orientacin particular de ciertos residuos de azcar, as como a su espaciamiento (fig. 2-15), que slo est en microbios y no en las clulas hospedadoras. Una vez formado, el complejo de MBL-patgeno se une a fagocitos, sea por medio de interacciones con MBL o a travs de los receptores para complemento de los fagocitos, que tambin se une al patgeno. El resultado es la fagocitosis y destruccin del patgeno (seccin 2-4) y la induccin de otras respuestas celulares, como produccin de quimiocinas. La cobertura de una partcula con protenas que facilitan su fagocitosis se conoce como opsonizacin, y en este captulo y en captulos subsiguientes se presentan otros ejemplos de esta estrategia de defensa. La MBL es un miembro de la familia de protenas colectinas, as llamada porque contiene dominios tanto parecidos a colgeno como de lectina (unin a azcar). Otros miembros de esta familia son las protenas surfactantes A y D (SP-A y SP-D) que estn presentes en el lquido que baa las superficies epiteliales de los pulmones. Ah se unen a la superficie de patgenos y los cubren, lo que los hace ms susceptibles a fagocitosis por macrfagos que han dejado los tejidos subepiteliales para entrar a los alvolos de los pulmones. Los fagocitos tambin estn equipados con varios receptores de superficie celular que reconocen de manera directa superficies de patgenos. Entre stos se encuentra el receptor de manosa de macrfago (fig. 2-8). Este receptor es una

Reconocimiento de patrones en el sistema inmunitario innato

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La lectina jadora de manosa (MBL) tiene dos a seis agrupaciones de dominio de reconocimiento de carbohidrato. Dentro de cada una de las agrupaciones los sitios de unin a carbohidrato tienen una orientacin ja carrete enrollado helicoidal hlice de colgeno

dominios de reconocimiento de carbohidrato

Fig. 2-15. La lectina fijadora de manosa reconoce superficies bacterianas por su espaciamiento particular de residuos de carbohidrato. La protena plasmtica lectina fijadora de manosa (MBL) forma parte del sistema de reconocimiento de patgenos de la inmunidad innata. Se une a ciertas superficies bacterianas que exhiben una disposicin espacial particular de residuos de manosa o de fucosa. La presencia de estos residuos por s sola no basta para asegurar la unin; la orientacin de los sitios de unin en la MBL es fija, y slo si los residuos de manosa y de fucosa tienen el espaciamiento correcto, la MBL podr unirse. Una vez cubiertas con MBL, las bacterias son ms susceptibles a la fagocitosis.

La MBL se une con alta anidad a residuos de manosa y fucosa que tienen el espaciamiento correcto

La MBL no se une a residuos de manosa y fucosa que tienen diferente espaciamiento

lectina de tipo C (dependiente de calcio) unida a la clula que se une a ciertos azcares que se encuentran sobre la superficie de muchas bacterias y algunos virus, entre ellos el virus de la inmunodeficiencia humana (VIH). Sus propiedades de reconocimiento son muy similares a las de la MBL (fig. 2-15) y, al igual que esa protena, es una molcula con mltiples puntas, con varios dominios de reconocimiento de carbohidrato. Como quiera que sea, debido a su receptor de superficie celular transmembrana, puede funcionar de modo directo como un receptor fagoctico. Un segundo grupo de receptores fagocticos, reconocen diversos polmeros aninicos y lipoprotenas de baja densidad acetiladas. Estos receptores son un grupo de molculas heterogneo desde el punto de vista estructural; existen en al menos seis formas moleculares. Algunos receptores fagocticos reconocen estructuras protegidas por cido silico sobre clulas hospedadoras normales. Hay otros blancos de reconocimiento, muchos de los cuales an necesitan caracterizarse. No todos los receptores que reconocen molculas especficas para patgeno son receptores fagocticos. Los polipptidos bacterianos tpicamente empiezan con un residuo metionina formilado, y el receptor fMet-Leu-Phe (fMLP) sobre macrfagos y neutrfilos une a estos pptidos N-formilados. Este es un receptor quimiotctico, y su ligadura gua a los neutrfilos hacia un sitio de infeccin. La unin de patgenos a algunos receptores sobre la superficie de los macrfagos estimula la fagocitosis y tambin enva seales a la clula que desencadenan las respuestas inducidas de la inmunidad innata, como se describe ms adelante en este captulo. La estimulacin de ciertos receptores por productos de patgenos tambin conduce a los macrfagos y a las clulas dendrticas a producir el despliegue de superficie celular de molculas coestimuladoras que les permite actuar como clulas presentadoras de antgeno a linfocitos T, e iniciar una respuesta inmunitaria adaptativa. La

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Captulo 2: Inmunidad innata

Reconocimiento inmunitario innato por receptores tipo Toll Receptor tipo Toll Heterodmero TLR-1:TLR-2 Heterodmero TLR-2:TLR-6 TLR-3 Dmero TLR-4 (ms MD-2 y CD14) Ligando Peptidoglucano Lipoprotenas Lipoarabinomanano (micobacterias) GPI (T. cruzi ) Zimosn (levadura) dsRNA LPS (bacterias gramnegativas) cidos lipoteicoicos (bacterias grampositivas) Flagelina

va de activacin mejor definida de este tipo se desencadena por medio de una familia de receptores transmembrana conservados desde el punto de vista evolutivo, llamados los receptores tipo Toll que parecen funcionar de manera exclusiva como receptores emisores de seales, los cuales se describen a continuacin.

2-7

Los receptores tipo Toll son receptores de sealizacin que distinguen entre tipos de patgenos y ayudan a dirigir una respuesta inmunitaria apropiada

TLR-5

TLR-7

ssRNA

TLR-8 TLR-9

Oligonucletidos con alto contenido de G CpG DNA no metilado

Fig. 2-16. Reconocimiento inmunitario innato por receptores de tipo Toll. Cada uno de los TLR de especificidad conocida reconoce uno o ms patrones moleculares microbianos, por lo general por interaccin directa con molculas sobre la superficie del patgeno. Aunque algunas protenas de receptor de tipo Toll forman heterodmeros (p. ej., TLR-1:TLR-2), esto no es la regla; por ejemplo, el TLR-4 slo puede formar homodmeros. GPI, glucosilfosfatidilinositol; T. cruzi, el parsito protozoario Trypanosoma cruzi; dsRNA, RNA bicatenario; ssRNA, RNA monocatenario.
lipopptidos diacil lipopptidos triacil

agelina TLR-5

LPS TLR-4

TLR-6 TLR-2 TLR-1 TLR-2

Los receptores tipo Toll (TLR) de mamferos pertenecen a un sistema de reconocimiento y de sealizacin antiguo desde el punto de vista evolutivo, originalmente descubierto como resultado de su participacin en el desarrollo embrionario en la mosca de la fruta Drosophila melanogaster. Despus se encontr que participa en la defensa contra infecciones bacterianas y micticas en el insecto adulto, y ahora se sabe que tiene una participacin clave en la respuesta a la infeccin en plantas, insectos adultos, y vertebrados, incluso mamferos. El receptor que media estas funciones en Drosophila se conoce como Toll; por ende, las protenas homlogas en mamferos y otros animales se conocen como los receptores tipo Toll. Hay 10 genes TLR expresados en ratones y seres humanos, y cada una de las 10 protenas que producen se dedica a reconocer un grupo distinto de patrones moleculares que no se encuentran en vertebrados normales. Estos modelos son caractersticos de componentes de microorganismos patgenos en una u otra etapa de infeccin. Dado que slo hay 10 genes TLR funcionales, los receptores tipo Toll tienen especificidad limitada en comparacin con los receptores de antgeno del sistema inmunitario adaptativo, y han evolucionado para reconocer ciertos patrones moleculares relacionados con microbios. De cualquier modo, aunque la diversidad de los receptores tipo Toll es limitada, pueden reconocer elementos de casi todos los microbios patgenos (fig. 2-16). Algunos TLR de mamfero actan como receptores de superficie celular, mientras que otros actan dentro de la clula y estn localizados en las membranas de endosomas, donde detectan patgenos y componentes de los mismos llevados hacia la clula mediante endocitosis o macropinocitosis (fig. 2-17). Un importante receptor tipo Toll en la respuesta a infecciones bacterianas comunes es el TLR-4 sobre macrfagos, que seala la presencia de lipopolisacrido bacteriano mediante asociacin con CD14, el receptor de macrfago para lipopolisacrido, y una protena celular adicional, MD-2. El TLR-4 tambin participa en la respuesta inmunitaria para al menos un virus, el virus sincitial respiratorio, aunque en este caso an se desconoce la naturaleza exacta del ligando estimulador. Otro receptor tipo Toll de mamfero, TLR-2, seala la presencia de un grupo diferente de constituyentes microbianos, que incluyen el cido lipoteicoico (LTA) de bacterias grampositivas, y lipoprotenas de bacterias gramnegativas, aunque no se sabe de qu modo los reconoce. Las respuestas de clulas a la estimulacin de los diversos TLR se dirigen a afrontar un tipo particular de patgeno presente. Por ejemplo, la estimulacin de TLR-3 por RNA bicatenario derivado de virus da pie a la produccin de una citocina antiviral, el interfern, como se comenta con mayor detalle ms

MD-2

TLR-3

TLR-7

dsRNA

ssRNA

TLR-9

CpGDNA

Endosoma

Fig. 2-17. Localizaciones celulares de los receptores de tipo Toll de mamferos. Algunos TLR se localizan sobre la superficie de clulas dendrticas y de macrfagos, donde tienen la capacidad de detectar molculas de patgenos extracelulares. Se cree que los TLR actan como dmeros; slo los que forman heterodmeros se muestran en forma dimrica en esta figura. El resto acta como homodmeros. Los TLR localizados dentro de las clulas, en la

pared del endosoma, pueden reconocer componentes microbianos, como DNA, que slo son accesibles despus de que el microbio se ha desintegrado. Los pptidos diacil y triacil reconocidos por los receptores heterodimricos TLR-6:TLR-2 y TLR-1:TLR-2, respectivamente, derivan del cido lipoteicoico de paredes celulares de bacterias grampositivas y de las lipoprotenas de la superficie de bacterias gramnegativas.

Reconocimiento de patrones en el sistema inmunitario innato

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adelante en este captulo. TLR-4 y TLR-2 inducen seales similares pero distintas, como se muestra por las diferentes respuestas originadas por la sealizacin de lipopolisacrido por medio de TLR-4, y la sealizacin de LTA por medio de TLR-2; por ejemplo, la produccin de TNF- es inducida por LTA y el lipopolisacrido, el cual tambin es capaz de inducir la produccin de interfern (IFN)-.

2-8

Los efectos del lipopolisacrido bacteriano sobre macrfagos estn mediados por unin de CD14 a TLR-4

El lipopolisacrido bacteriano (LPS) es un componente de la pared celular de bacterias gramnegativas, como Salmonella, que desde hace mucho tiempo se ha sabido que induce una reaccin en el hospedador infectado. La inyeccin sistmica de LPS causa un colapso de los sistemas circulatorio y respiratorio, un trastorno conocido como choque. Estos efectos notorios del LPS se observan en seres humanos como choque sptico, el cual es causado por la secrecin excesiva de citocinas, en particular de TNF-, como resultado de una infeccin bacteriana sistmica no controlada, o septicemia. La patogenia del choque sptico se comenta ms adelante en este captulo, y se muestra que es una consecuencia indeseable de las mismas acciones efectoras del TNF- que son importantes para contener infecciones locales. El LPS acta por medio del TLR-4, y los beneficios de la sealizacin de TLR-4 se ilustran con claridad mediante ratones mutantes que carecen de la funcin de TLR-4: aunque son resistentes al choque sptico, son muy sensibles a microorganismos patgenos que portan LPS, como Salmonella typhimurium, un microorganismo patgeno natural de ratones. Se observan los mismos principios en seres humanos infectados por Salmonella typhi, la causa de la fiebre tifoidea. Esta bacteria invade a travs de las mucosas (fig. 2-18) pero puede ser reconocida por macrfagos y otras clulas fagocticas innatas porque expresa LPS y flagelina, que le permite activar dos TLR de superficie celular, TLR-4 y TLR-5 (fig. 2-16), lo que lleva a la produccin de TNF-. De esta manera, la infeccin sistmica por S. typhi puede causar choque sistmico en seres humanos mediante el mismo mecanismo provocado por S. typhimurium en ratones, al inducir una produccin sistmica de TNF-. Aun as, S. typhi, en comn con muchas bacterias patgenas, tiene lo que se llama un sistema de secrecin tipo III, un microhomlogo de una jeringa, que permite a la bacteria secretar molculas de modo directo a travs de la membrana celular de clulas de mamferos y hacia el citosol. Al usar su sistema de secrecin tipo III, S. typhi tiene la capacidad para transferir hacia el citosol del macrfago molculas de proteasa que inhiben la va de sealizacin que conduce a la produccin de TNF-; este puede ser un mecanismo adquirido por la bacteria con la evolucin para hacer menos eficaz la respuesta inmunitaria innata. TLR-4 solo no puede reconocer LPS; se necesitan otras dos protenas de superficie celular, CD14 y MD-2. CD14 se une a LPS y se cree que el complejo de CD14: LPS es el ligando real de TLR-4, pese a que su relacin directa con TLR-4 no se ha demostrado. MD-2 inicialmente se une a TLR-4 dentro de la clula, y es necesario para la direccin correcta de TLR-4 hacia la superficie y su reconocimiento de LPS. Cuando el complejo de TLR-4:MD-2 interacta con LPS unido a CD14, esto enva una seal al ncleo de la clula que activa el factor de transcripcin NFB (fig. 2-19). En el captulo 6 se describen con mayor detalle las vas de sealizacin usadas por TLR. Esta va de sealizacin de NFB se descubri primero como la va usada por el receptor Toll para determinar el patron corporal dorsoventral durante la embriognesis en la mosca de la fruta, y a menudo se denomina la va Toll. En la mosca adulta la misma va lleva a la formacin de pptidos antimicrobianos en respuesta a infeccin. En esencia, todos los TLR usan la misma va de sealizacin en su induccin de respuestas inmunitarias innatas en vertebrados, y las plantas utlizan una va similar en su defensa contra virus y otros patgenos de plantas. De esta manera, la va Toll es una antigua va de sealizacin que parece usarse en la inmunidad innata en casi todos los organismos multicelulares, si no es que en todos.

Fig. 2-18. Ciertos patgenos pueden invadir directamente a travs del epitelio intestinal u otros epitelios internos. En el caso de Salmonella typhi, agente etiolgico de la tifoidea, que se muestra aqu en el proceso de migracin a travs del epitelio intestinal, las protenas flagelina de los flagelos bacterianos son reconocidas por los TLR sobre macrfagos y clulas dendrticas en los tejidos subyacentes. Esto desencadena una respuesta innata que ayuda a controlar la infeccin. Fotografa cortesa de J. Galan.

Deciencia de cinasa relacionada con receptor de interleucina

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Captulo 2: Inmunidad innata

El LPS en lquidos corporales es unido por una protena de fase aguda, la protena de unin a LPS (LBP)
LPS LBP

2-9

Las protenas NOD actan como detectores intracelulares de infeccin bacteriana

MD-2 CD14

complejo de TLR-4:MD-2

El complejo LPS:LBP transere LPS a CD14 sobre la supercie de los fagocitos

Una vez que se une a LPS, CD14 interacta con el receptor tipo Toll 4 (TLR-4:MD2), lo que origina activacin del NFB en el ncleo

Los TLR estn localizados en membranas celulares, sobre la superficie de la clula o en vesculas intracelulares. Otras protenas, que comparten caractersticas de sus dominios de unin a ligando con los TLR, estn presentes en el citosol de la clula, y tienen la capacidad para unirse a productos microbianos y activar NFB, lo que inicia los mismos procesos inflamatorios que los TLR (fig. 2-20). Estas protenas se llaman NOD1 y NOD2, porque adems de un dominio de unin a ligando, contienen un dominio de oligomerizacin de unin a nucletido (NOD). Asimismo, contienen dominios de protena que reclutan caspasas, una familia de proteasas intracelulares, de modo que los genes que codifican para las protenas NOD se denominan como miembros de la familia de genes CARD: NOD1 es codificado por CARD4, y NOD2 por CARD15. Las protenas NOD reconocen fragmentos de proteoglucanos de pared celular bacteriana, NOD1 se une al cido -glutamil diaminopimlico (iE-DAP), un producto de desintegracin de proteoglucanos de bacterias gramnegativas, mientras que NOD2 se une al dipptido muramil, presente en los proteoglucanos de bacterias tanto grampositivas como gramnegativas. De esta manera, NOD2 tiene la capacidad para actuar como un detector general de infeccin bacteriana, mientras que NOD1 se restringe ms a detectar la presencia de bacterias gramnegativas. Conforme a esta funcin, las protenas NOD se expresan en clulas que estn expuestas de modo sistemtico a bacterias, en clulas epiteliales que forman la barrera que las bacterias deben cruzar para establecer una infeccin en el cuerpo, y en los macrfagos y las clulas dendrticas que ingieren bacterias que han logrado entrar al cuerpo. Puesto que los macrfagos y las clulas dendrticas tambin expresan TLR que pueden reconocer proteoglucanos bacterianos, en estas clulas las seales provenientes de NOD1 y NOD2 actan adems de las seales provenientes de los TLR. En las clulas epiteliales, la expresin de TLR es dbil o nula, y en las clulas NOD1 es un activador importante de la respuesta inmunitaria innata. NOD2 parece tener una funcin ms especializada; se expresa fuertemente en las clulas de Paneth del intestino, donde induce la expresin de pptidos antimicrobianos potentes, las defensinas .

2-10
Fig. 2-19. El lipopolisacrido bacteriano emite seales por medio del receptor de tipo Toll TLR-4 para activar el factor de transcripcin NFB. En el plasma, el LPS se une mediante la protena de unin a LPS (LBP) soluble, que despus carga su LPS unido sobre la protena de membrana perifrica atada a glucosilfosfatidilinositol (GPI), CD14. A continuacin este complejo LPS:CD14 activa al TLR-4, que forma complejos con la protena MD-2, para emitir seales hacia el ncleo, lo que activa el factor de transcripcin NFB, que a su vez activa a genes que codifican protenas involucradas en la defensa contra infecciones.

La activacin de receptores tipo Toll y protenas NOD desencadena la produccin de citocinas y quimiocinas proinamatorias, y la expresin de molculas coestimuladoras

En seres humanos y en todos los otros vertebrados estudiados, la activacin del NFB mediante las vas Toll y NOD lleva a la produccin de varios mediadores de inmunidad innata importantes, como citocinas (fig. 2-21) y quimiocinas (fig. 2-46). (En los Apndices III y IV se proporciona una lista detallada de estos mediadores importantes.) La va tambin conduce a la expresin de superficie celular de molculas coestimuladoras esenciales para la induccin de respuestas inmunitarias adaptativas. Los macrfagos y las clulas dendrticas hsticas producen estas protenas llamadas B7.1 (CD80) y B7.2 (CD86), en respuesta a la sealizacin de LPS y por medio del TLR-4 (fig. 2-22). Estas protenas, junto con los pptidos microbianos antignicos presentados por protenas del MHC de clase II sobre clulas dendrticas y macrfagos (seccin 1-18), son las que activan a las clulas T CD4 indiferenciadas (fig. 2-23). Estas clulas, a su vez, se necesitan para iniciar casi todas las respuestas inmunitarias adaptativas. Para encontrar una clula T CD4 indiferenciada, la clula dendrtica presentadora de antgeno debe migrar hacia un ganglio linftico cercano a travs del cual pasan clulas T indiferenciadas circulantes, y esta emigracin es estimulada por citocinas como TNF-, que tambin son inducidas mediante sealizacin por medio de TLR-4. De esta manera, la activacin de la inmunidad adaptativa depende de molculas inducidas como una consecuencia del reconocimiento inmunitario innato de patgenos. Sustancias como el LPS que inducen actividad coestimuladora se han usado durante aos en mezclas que se coinyectan con antgenos protenicos para incre-

Reconocimiento de patrones en el sistema inmunitario innato

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Fig. 2-20. Las protenas intracelulares y las unidas a la membrana actan como sensores de bacterias, al identificar proteoglucanos bacterianos y al activar al NFB para inducir la expresin de genes proinflamatorios. Los TLR ubicados en la superficie celular tienen la capacidad de unirse a componentes microbianos. En el caso del TLR-2, stos son proteoglucanos de la pared celular bacteriana. La unin de proteoglucanos bacterianos al TLR-2 se seala a la clula por medio de la protena adaptadora MyD88, lo que provoca la

activacin del factor de transcripcin NFB y su translocacin hacia el ncleo para inducir la expresin de genes proinflamatorios. La degradacin de proteoglucanos bacterianos produce el dipptido muramil, el ligando para el detector intracelular de componentes bacterianos, NOD2. Por medio de la proteincinasa adaptadora RICK (cinasa de serina-treonina que interacta con receptor), el NOD2 puede activar al NFB, lo que induce a los mismos genes proinflamatorios que el TLR-2.

Los proteoglucanos bacterianos pueden ser reconocidos por TLR en la supercie de las clulas o por protenas NOD en el citosol. Ambos llevan a la activacin del factor de transcripcin NFB y la expresin de genes proinamatorios
TLR-2 proteoglucanos NOD2 dipptido muramil

MyD88

mentar su inmunogenicidad. Estas sustancias se conocen como adyuvantes (Apndice I, seccin A-4), y se encontr empricamente que los mejores adyuvantes contenan componentes microbianos. Una gama de componentes microbianos (fig. 2-16) puede inducir a los macrfagos y las clulas dendrticas de tejidos para que expresen molculas coestimuladoras y citocinas. El perfil exacto de citocinas producidas por el macrfago o la clula dendrtica vara de acuerdo con los receptores estimulados y, como se comenta en los captulos 8 y 10, las citocinas secretadas a su vez influyen sobre el carcter funcional de la respuesta inmunitaria adaptativa que se desarrolla. De este modo, la capacidad del sistema inmunitario innato para distinguir entre diferentes tipos de patgeno se usa para asegurar un tipo apropiado de respuesta inmunitaria adaptativa.

RICK NFB NFB

Resumen
En el sistema inmunitario innato se utilizan diversos receptores para reconocer patgenos y mostrar respuesta a los mismos. Los que reconocen superficies de patgeno de manera directa a menudo se unen a patrones repetitivos, por ejemplo, radicales de carbohidratos o lpidos, que son caractersticas de superficies microbianas pero que no se encuentran en las clulas hospedadoras. Algunos de estos
Fig. 2-21. Entre las citocinas importantes secretadas por macrfagos en respuesta a productos bacterianos se encuentran la IL-1, la IL-6, la CXCL8, la IL-12 y el TNF-. El TNF- es un inductor de respuesta inflamatoria local que ayuda a contener infecciones; tambin tiene efectos sistmicos, muchos de los cuales son perjudiciales (seccin 2-27). La quimiocina CXCL8 tambin participa en la respuesta inflamatoria local; ayuda a atraer neutrfilos hacia el sitio de infeccin. La IL-1, la IL-6 y el TNF- tienen una participacin crucial en la induccin de la respuesta de fase aguda en el hgado (seccin 2-28) e inducen fiebre, que favorece de varios modos la defensa eficaz del hospedador. La IL-12 activa a los linfocitos citolticos naturales (NK) de la respuesta inmunitaria innata y favorece la diferenciacin de clulas T CD4 en el subgrupo TH1 durante una respuesta inmunitaria adaptativa.

Citocinas secretadas por macrfagos y clulas dendrticas Citocina Principal productor Macrfagos Queratinocitos Macrfagos Clulas dendrticas Macrfagos Clulas dendrticas Macrfagos Clulas dendrticas Acta sobre Linfocitos Hgado Linfocitos Hgado Efecto
Aumenta respuestas Induce secrecin de protena de fase aguda Incrementa respuestas Induce secrecin de protena de fase aguda

IL-1

IL-6

CXCL8 (IL-8)

Fagocitos

Quimioatrayente para neutrlos

IL-12

Clulas T indiferenciadas

Desva la respuesta inmunitaria hacia TH1, proinamatoria, secrecin de citocina

TNF-

Macrfagos Clulas dendrticas

Endotelio vascular

Induce cambios en el endotelio vascular (expresin de molculas de adhesin celular [E-selectina y P-selectina], cambios de uniones de clula a clula con aumento de prdida de lquido, coagulacin local de sangre)

60

Captulo 2: Inmunidad innata

clula de Langerhans bacteria

CD14

TLR-4

Fig. 2-22. El LPS bacteriano induce cambios en clulas de Langerhans; las estimula para que migren e inicien la inmunidad adaptativa mediante la activacin de clulas T CD4. Las clulas de Langerhans son clulas dendrticas inmaduras que residen en la piel. Durante una infeccin bacteriana, son activadas por LPS a travs de la va de sealizacin de TLR. Esto induce dos tipos de cambios en ellas. El primero es un cambio de la conducta y de la localizacin. Del estado de reposo en la piel, las clulas de Langerhans se convierten en clulas migratorias activadas en los vasos linfticos aferentes, y finalmente en clulas

dendrticas por completo maduras en los ganglios linfticos regionales. El segundo es una alteracin espectacular de sus molculas de superficie celular. Las clulas de Langerhans en reposo en la piel son muy fagocticas y macropinocticas, pero carecen de la capacidad de activar linfocitos T. Las clulas dendrticas maduras en los ganglios linfticos han perdido la capacidad para ingerir antgenos, pero adquieren la capacidad de estimular clulas T. Esto se debe a un incremento del nmero de molculas del MHC sobre su superficie y a la expresin de las molculas coestimuladoras CD80 (B7.1) y CD86 (B7.2).

CD80

molcula del MHC CD86

receptores, como el receptor de manosa de macrfagos, estimulan de modo directo la fagocitosis, mientras que otros se producen como molculas secretadas que promueven la fagocitosis de patgenos mediante opsonizacin o mediante la activacin del complemento, como se describe en la siguiente parte de este captulo. Los receptores del sistema inmunitario innato que reconocen patgenos tambin tienen importancia en la sealizacin para las respuestas innatas inducidas que se encargan de la inflamacin local, el reclutamiento de nuevas clulas efectoras, la contencin de infeccin local, y el inicio de una respuesta inmunitaria adaptativa. Esas seales pueden transmitirse por medio de una familia de receptores de sealizacin, conocida como los receptores tipo Toll (TLR), que se han conservado mucho a travs del tiempo evolutivo, y sirven para activar la defensa del hospedador por medio de una va de sealizacin que opera en casi todos los organismos multicelulares. En vertebrados, los TLR tambin tienen una funcin clave en permitir el inicio de inmunidad adaptativa. El TLR-4 detecta bacterias gramnegativas por medio de su relacin con la protena de membrana perifrica CD14, que es un receptor para LPS bacteriano. Los otros TLR muestran respuesta a otros patrones moleculares que se encuentran sobre patgenos o dentro de los mismos. Los TLR activan el factor de transcripcin NFB, que despus induce la transcripcin de diversos genes, aun los que codifican para las citocinas, quimiocinas, y molculas coestimuladoras que tienen funciones esenciales en la direccin de la evolucin de la respuesta inmunitaria adaptativa ms tarde durante la infeccin. Mientras que los TLR reconocen la presencia de bacterias y otros microbios fuera de la clula, las protenas citoslicas, las protenas NOD, detectan productos bacterianos similares dentro del citoplasma de la clula y activan la misma va del NFB.

La activacin de clulas T necesita antgenos y seales coestimuladoras Antgeno nulo Fig. 2-23. Para que las clulas T indiferenciadas sean activadas por antgenos, stos deben ser expuestos a ellas por clulas presentadoras de antgenos activadas que tambin expresen molculas coestimuladoras. El antgeno es reconocido por el receptor de clula T en forma de un pptido unido a una molcula del MHC sobre una clula presentadora de antgeno (APC), como un macrfago o una clula dendrtica. Sin embargo, la clula T slo se activa si la clula presentadora de antgeno tambin expresa las molculas coestimuladoras CD80 o CD86.
APC

Coestimulacin nula
anticuerpo extrao

Tanto antgeno como coestimulacin


Patgeno

Receptor de clulas T

CD80 CD28 CD4

MHC de clase II Receptor de clula T

CD4

CD80 o CD86 CD28 CD28

Clula T indiferenciada

Clula T indiferenciada

Clula T indiferenciada

Pptido antignico nulo Respuesta nula

Activacin nula La clula T pierde la capacidad de respuesta

Activacin de clula T

El sistema de complemento y la inmunidad innata

61

El sistema de complemento y la inmunidad innata


El complemento fue descubierto por Jules Bordet hace muchos aos como un componente, lbil al calor, del plasma normal, que aumenta la opsonizacin y la destruccin de bacterias por anticuerpos. Se dijo que esta actividad complementa la actividad antibacteriana de anticuerpos, de ah el nombre. Aun cuando se descubri por primera vez como un extremo efector de la respuesta de anticuerpos, el complemento tambin puede activarse en etapas tempranas de infeccin en ausencia de anticuerpos. De hecho, ahora parece claro que el complemento evolucion primero como parte del sistema inmunitario innato, donde an tiene una importante funcin en cubrir a patgenos y facilitar su destruccin.

2-11

El complemento es un sistema de protenas plasmticas que se activa por la presencia de patgenos

El sistema de complemento consta de un gran nmero de protenas plasmticas que interactan entre s tanto para opsonizar patgenos como para inducir la serie de respuestas inflamatorias que ayudan a combatir una infeccin. Una caracterstica del sistema es que varias protenas del complemento son proteasas que slo quedan activadas luego de divisin, generalmente por otra proteasa especfica. En su forma inactiva, esas enzimas se llaman proenzimas o zimgenos, y se encontraron por vez primera en el intestino. Por ejemplo, la enzima digestiva pepsina, se almacena dentro de clulas y se secreta como un precursor inactivo, el pepsingeno, que slo se divide hacia pepsina en el ambiente cido del estmago. La ventaja para el hospedador de no ser autodigerido es obvia. Los zimgenos precursores del sistema de complemento estn ampliamente distribuidos en los lquidos y tejidos del cuerpo. En sitios de infeccin se activan en forma local por la presencia del patgeno, y desencadenan una serie de eventos inflamatorios potentes. El sistema de complemento queda activado por medio de una cascada de enzimas desencadenada en la cual una proteasa de complemento activa generada por divisin de su precursor zimgeno despus divide su sustrato, otro zimgeno del complemento, hacia su forma enzimtica activa. Esto a su vez divide y activa al siguiente zimgeno en la va del complemento. As, la activacin de un pequeo nmero de protenas del complemento al principio de la va es amplificada enormemente por cada reaccin enzimtica sucesiva, lo que origina la generacin rpida de una respuesta de complemento excesivamente grande. El sistema de coagulacin de la sangre antes mencionado es otro ejemplo de una cascada de enzima desencadenada. En este caso, una pequea lesin de la pared de un vaso sanguneo puede llevar a la formacin de un cogulo grande de sangre. Un sitio clave para la activacin de la va del complemento es la superficie de patgenos, y hay tres vas mediante las cuales puede activarse el complemento (fig. 2-24). Estas vas dependen de diferentes molculas para su inicio, pero convergen para generar el mismo grupo de protenas del complemento efectoras. Tambin hay tres modos en los cuales el sistema de complemento protege contra infeccin (fig. 2-24). En primer lugar, genera grandes nmeros de protenas del complemento activadas que se unen de manera covalente a patgenos, y los opsoniza para fagocitosis por fagocitos que portan receptores para complemento. En segundo lugar, los fragmentos pequeos de algunas protenas del complemento actan como quimioatrayentes para reclutar ms fagocitos hacia el sitio de activacin del complemento, y para activar tambin estos fagocitos. En tercer lugar, los componentes finales en la va del complemento daan ciertas bacterias al crear poros en la membrana bacteriana. Adems de los efectos directos del complemento en la eliminacin de microorganismos infecciosos, tiene importancia en la activacin del sistema inmunitario adaptativo. Esto es en parte una consecuencia de opsonizacin, porque las clulas presentadoras de antgeno portan receptores para complemento que incrementan la captacin de antgenos cubiertos por complemento y la presenta-

62

Captulo 2: Inmunidad innata

Fig. 2-24. Perspectiva general esquemtica de la cascada del complemento. Hay tres vas de activacin del complemento. Una es la va clsica, que se activa por la unin del componente del complemento C1q a anticuerpos que han formado complejos con antgenos mediante la unin directa de C1q a la superficie del patgeno, o mediante la unin de C1q a la protena C reactiva unida al patgeno. La segunda es la va de la lectina, que se induce mediante lectina fijadora de manosa o a travs de las protenas ficolinas, constituyentes normales del suero que se unen a algunas bacterias encapsuladas. La tercera es la va alternativa, que se activa de manera directa sobre la superficie de agentes patgenos. Todas estas vas generan una actividad enzimtica crucial que, a su vez, produce las molculas efectoras del complemento. Las tres consecuencias principales de la activacin del complemento son la opsonizacin y la eliminacin directa de agentes patgenos y el reclutamiento de clulas inflamatorias e inmunocompetentes.

VA CLSICA

VA DE LA LECTINA

VA ALTERNATIVA

Complejos de antgeno: anticuerpo

Unin de lectina a supercies de patgeno

Supercie de patgenos

Activacin del complemento

Reclutamiento de clulas inamatorias e inmunocompetentes

Opsonizacin de patgenos

Destruccin de patgenos

cin de estos antgenos al sistema inmunitario adaptativo. Adems, los linfocitos B portan receptores para protenas del complemento que actan como coestimuladoras, lo que aumenta la respuesta de la clula B a antgenos cubiertos por complemento (cap. 9). El complemento no slo se activa por microorganismos infecciosos. Las clulas moribundas, como las que estn en sitios de lesin isqumica (lesin de tejidos causada por falta de oxgeno) pueden desencadenar la activacin del complemento. Dado que las partculas cubiertas con complemento son captadas con mayor eficiencia por fagocitos, el complemento tiene importancia en la eliminacin eficiente de clulas muertas, daadas y apoptticas y, al hacerlo, protege contra la aparicin de autoinmunidad, el ataque de los antgenos propios del cuerpo por el sistema inmunitario.

2-12

El complemento interacta con patgenos a n de marcarlos para la destruccin por fagocitos

Durante las fases tempranas de una infeccin, la cascada del complemento puede activarse sobre la superficie de un patgeno por medio de una o ms de las tres vas que se muestran en la figura 2-25. La va clsica se inicia por la unin de C1q, la primera protena de la cascada del complemento, a la superficie del patgeno. C1q puede unirse a la superficie de patgenos en una de tres formas. Puede unirse de manera directa a los componentes de superficie de algunas bacterias, incluso de ciertas protenas de paredes de clula bacteriana, y estructuras de superficie polianinicas, como el cido lipoteicoico sobre bacterias grampositivas. En segundo lugar, C1q se une a la protena C reactiva, una protena de fase aguda del plasma humano que se une a residuos fosfocolina en polisacridos bacterianos, como el polisacrido C neumoccico; de ah el nombre protena C reactiva. Ms adelante en el captulo se revisan las protenas de fase aguda de la respuesta innata inducida temprana. En tercer lugar, C1q es un enlace clave entre los mecanismos efectores de las inmunidades innata y adaptativa al unirse a complejos de anticuerpo: antgeno. La va de la lectina se inicia mediante la unin de protenas de unin a carbohidratos a disposiciones de carbohidratos sobre la superficie de patgenos. Estas protenas de unin a carbohidrato comprenden la lectina MBL, que se une a carbohidratos que contienen manosa sobre bacterias o virus (seccin 2-6), y las ficolinas, que se unen a la N-acetilglucosamina presente sobre la superficie de algunos patgenos. Por ltimo, la va alternativa de la activacin del complemento puede iniciarse por la unin del componente C3 del complemento activado de modo espontneo en el plasma a la superficie de un patgeno. En cada va, una secuencia de reacciones genera una proteasa llamada convertasa C3. Estas reacciones se conocen como eventos tempranos de la activacin del complemento, y constan de cascadas de enzimas desencadenadas en las

El sistema de complemento y la inmunidad innata

63

VA CLSICA Complejos de antgeno: anticuerpo (supercies de patgenos)

VA DE LA LECTINA Lectina de unin a manosa o colina se une a carbohidratos sobre supercies de patgenos

VA ALTERNATIVA

Supercies de patgeno

C1q, C1r, C1s C4 C2

MBL/colinas, MASP-2 C4 C2

C3 B D

Convertasa C3

C3a, C5a

C3b

Componentes del complemento terminales C5b C6 C7 C8 C9 Complejo de ataque a membrana, lisis de ciertos microorganismos patgenos y clulas

Mediadores peptdicos de inamacin, reclutamiento de fagocitos

Se une a receptores del complemento sobre fagocitos

Fig. 2-25. Perspectiva de los componentes principales y de las acciones efectoras del complemento. En etapas tempranas en las tres vas de activacin del complemento una serie de reacciones de divisin culmina en la formacin de una enzima activa llamada convertasa de C3, que divide el componente del complemento C3 en C3b y C3a. La produccin de la convertasa de C3 es el punto en el cual convergen las tres vas y se generan las principales funciones efectoras del complemento. C3b se une de modo covalente a la membrana de la clula bacteriana y opsoniza a las bacterias, lo que les permite a los fagocitos internalizarlas. C3a es un mediador peptdico de inflamacin local. C5a y C5b se generan mediante la divisin de C5b por una convertasa de C5 formada por C3b unido a la convertasa de C3 (que no se muestra en este diagrama simplificado). C5a tambin es un potente mediador peptdico de inflamacin. C5b desencadena los eventos tardos en los cuales los componentes terminales del complemento se ensamblan para formar un complejo de ataque de membrana capaz de daar la membrana de ciertos patgenos.

Opsonizacin de patgenos Eliminacin de complejos inmunitarios

cuales los zimgenos del complemento se dividen de manera sucesiva para dar dos fragmentos, el ms grande de los cuales es una proteasa de serina activa. La proteasa activa se retiene en la superficie del patgeno; esto asegura que el siguiente zimgeno del complemento en la va tambin se divida y se active en la superficie del patgeno. Por lo contrario, el fragmento pptido pequeo se libera a partir del sitio de la reaccin y puede actuar como un mediador soluble de inflamacin. Las convertasas C3, formadas por estos eventos tempranos de activacin del complemento se unen de modo covalente a la superficie del patgeno. Aqu, dividen C3 para generar grandes cantidades de C3b, la principal molcula efectora del sistema de complemento, y C3a, un pptido mediador de inflamacin. Las molculas de C3b actan como opsoninas; se unen de manera covalente al patgeno y, as, lo convierten en un blanco para la destruccin por fagocitos equipados con receptores para C3b. C3b tambin se une a la convertasa C3 para formar una convertasa C5 que produce el pptido inflamatorio de mayor importancia y ms potente, C5a, as como un fragmento activo grande, C5b, que inicia los eventos tardos de la activacin del complemento. stos comprenden una secuencia de reacciones de polimerizacin en las cuales un grupo de protenas del complemento conocidas como componentes terminales interactan para formar un complejo de ataque de membrana, que crea un poro en las membranas celulares de ciertos patgenos, que puede llevar a su muerte. La nomenclatura de las protenas del complemento es un obstculo para entender el sistema, y antes de comentar con mayor detalle la cascada del complemento se explica su nomenclatura. Los componentes de la va del complemento clsica y el complejo de ataque de membrana se designan mediante la

64

Captulo 2: Inmunidad innata

Clases de protenas funcionales en el sistema de complemento Unin a complejos de antgeno:anticuerpo y supercie de patgenos Unin a manosa sobre bacterias C1q

MBL

Enzimas activadoras

C1r C1s C2a Bb D MASP-2 C4b C3b C5a C3a C4a C5b C6 C7 C8 C9 CR1 CR2 CR3 CR4 C1qR C1INH C4bp CR1 MCP DAF H I P CD59

Protenas de unin a membrana y opsoninas

Mediadores peptdicos de inamacin

Protenas de ataque de membrana

Receptores del complemento

Protenas reguladoras del complemento

Fig. 2-26. Clases de protenas funcionales en el sistema de complemento.

letra C seguida por un nmero. Los componentes naturales tienen una designacin numrica simple, por ejemplo, C1 y C2, pero por desgracia los componentes se enumeraron en el orden de su descubrimiento ms que en la secuencia de reacciones. La secuencia de reaccin es C1, C4, C2, C3, C5, C6, C7, C8 y C9. Los productos de las reacciones de divisin se designan al aadir letras minsculas; el fragmento de mayor tamao se designa como b, y el de menor tamao como a; de este modo, por ejemplo, C4 se divide hacia C4b, el fragmento grande de C4 que se une de manera covalente a la superficie del patgeno, y C4a, un fragmento pequeo con propiedades proinflamatorias dbiles. Esta regla de nomenclatura tiene una excepcin. Para C2, el fragmento de mayor tamao originalmente se denomin C2a, y este componente C2a, de mayor tamao, contiene la actividad enzimtica. Los componentes de la va alternativa, en lugar de numerarse, se designan mediante letras maysculas, por ejemplo, factor B y factor D. Al igual que en la va clsica, sus productos de divisin se designan mediante la adicin de a y b minsculas: de este modo, el fragmento grande de B se llama Bb, y el fragmento pequeo, Ba. Finalmente, en la va de la lectina, las primeras enzimas en activarse se conocen como las proteasas de serina relacionadas con lectina de unin a manosa, MASP-1 y MASP-2, luego de lo cual la va es en esencia la misma que la va clsica. Los componentes del complemento activados suelen designarse mediante una lnea horizontal, por ejemplo, C2a; empero, los autores del presente libro no usan esta convencin. La formacin de actividad de convertasa C3 es esencial en la activacin del complemento; da pie a la produccin de las principales molculas efectoras, e inicia los fenmenos tardos. En las vas clsica y de la lectina, la convertasa C3 se forma a partir de C4b unido a membrana que forma complejo con C2a, designado C4b2a. En la va alternativa, una convertasa C3 homloga se forma a partir de C3b unido a membrana que forma complejos con Bb, C3bBb. La va alternativa puede actuar como lazo de amplificacin para las tres vas, porque se inicia mediante la unin de C3b. Est claro que una va que lleva a efectos antiinflamatorios y destructivos tan potentes (y que, ms an, tiene una serie de pasos de amplificacin integrados) es potencialmente peligrosa y debe estar sujeta a regulacin estrecha. Una salvaguarda importante es que componentes del complemento activados clave se desactivan con rapidez a menos que se unan a la superficie del patgeno sobre la cual se inici su activacin. Tambin hay varios puntos en la va en los cuales protenas reguladoras actan sobre componentes del complemento para prevenir la activacin inadvertida de complemento sobre superficies de clulas hospedadoras, lo que las protege contra dao accidental. Ms adelante se volvern a abordar estos mecanismos reguladores. Una vez presentados los componentes importantes del complemento, es posible proceder a una descripcin ms detallada de sus funciones. Para ayudar a distinguir los diferentes componentes de acuerdo a sus funciones, se utiliza un cdigo de color en los cuadros de esta parte del captulo, lo cual se presenta en la figura 2-26, donde los componentes del complemento se agrupan segn su funcin.

2-13

La va clsica se inicia mediante activacin del complejo C1

La va clsica tiene una participacin en las inmunidades innata y adaptativa. El primer componente de esta va, C1q, enlaza la respuesta inmunitaria humoral adaptativa al sistema de complemento al unirse a anticuerpos que han formado complejos con antgenos (cap. 9). Sin embargo, la va clsica tambin se puede activar durante respuestas inmunitarias innatas. En el sistema inmunitario se producen anticuerpos llamados anticuerpos naturales cuando hay ausencia manifiesta de infeccin. Tienen especificidad amplia para antgenos propios y microbianos, pueden reaccionar con muchos patgenos y, como en la inmunidad adaptativa, pueden activar el complemento por medio de la unin de C1q. En la seccin 2-34 se revisan con mayor detalle anticuerpos naturales y el subgrupo

El sistema de complemento y la inmunidad innata

65

Fig. 2-27. La primera protena en la va clsica de la activacin del complemento es C1, que es un complejo formado por C1q, C1r y C1s. C1q est compuesto de seis subunidades idnticas con cabezas globulares y colas parecidas a colgeno largas (cuyo aspecto se ha descrito como el de un ramo de tulipanes). Las colas se combinan para unirse a dos molculas,

cada una, de C1r y C1s, lo que forma el complejo C1 C1q:C1r2:C1s2. Las cabezas pueden unirse a las regiones constantes de molculas de inmunoglobulina o de manera directa a la superficie del patgeno, lo que causa un cambio conformacional en C1r, que despus se divide y activa el zimgeno C1s. Fotografa ( 500 000) cortesa de K. B.M. Reid.

C1q

C1s C1r

especializado de linfocitos que los producen. Aqu slo es importante notar que la mayor parte de los anticuerpos naturales que se producen es de la clase conocida como IgM, que es la clase ms eficiente para unirse a C1q; de tal manera, los anticuerpos naturales proporcionan un medio eficaz mediante el cual la activacin del complemento puede dirigirse hacia superficies de patgenos inmediatamente al momento de infeccin. Otra funcin de C1q en la inmunidad innata es que puede unirse de modo directo a la superficie de ciertos patgenos y, as, desencadenar la activacin del complemento en ausencia de anticuerpo. Por ejemplo, puede unirse a protena C reactiva unida a fosfocolina sobre bacterias. Por ende, la activacin de C1 por anticuerpo natural y directamente por superficies de patgeno representa un extremo humoral importante de la inmunidad innata. C1q forma parte del complejo C1, que comprende una molcula de C1q nica unida a dos molculas, cada una, de los zimgenos C1r y C1s. C1q es un hexmero, cada subunidad del cual es a su vez un trmero, lo que forma un dominio globular con una cola parecida a colgeno de triple hlice. En el hexmero C1q las seis cabezas globulares estn enlazadas entre s por sus colas parecidas a colgeno, que rodean el complejo (C1r:C1s)2 (fig. 2-27). La unin de ms de una de las cabezas de C1q a la superficie de un patgeno o a la regin constante de anticuerpos, conocida como regin Fc, en un complejo inmunitario de antgeno y anticuerpo, causa un cambio conformacional en el complejo (C1r:C1s)2, lo que conduce a la activacin de una actividad enzimtica autocataltica en C1r; despus, la forma activa de C1r divide su C1s relacionado para generar una proteasa de serina activa. Una vez activada, la enzima C1s acta sobre los siguientes dos componentes de la va clsica; divide C4 y luego C2 para generar dos fragmentos grandes, C4b y C2a, que juntos forman la convertasa C3 de la va clsica. En el primer paso, C1s divide a C4 para producir C4b, que puede unirse de manera covalente a la superficie del patgeno. El C4b unido de modo covalente, despus se une a una molcula de C2, lo cual la hace susceptible, a su vez, a divisin por C1s. sta divide a C2 para producir el fragmento grande C2a, que es una proteasa de serina. C4b2a, el complejo de C4b con la proteasa de serina activa C2a, permanece enlazado de manera covalente a la superficie del patgeno como la convertasa C3 de la va clsica. Su actividad ms importante es dividir grandes nmeros de molculas de C3 para producir molculas de C3b que cubren la superficie del patgeno. Al mismo tiempo, el otro producto de divisin, C3a, inicia una respuesta inflamatoria local. Estas reacciones, que comprenden la va clsica de la activacin del complemento, se muestran de modo esquemtico en la figura 2-28; las protenas comprendidas, y sus formas activas, se listan en la figura 2-29.

2-14

La va de la lectina es homloga a la va clsica

En la va de la lectina se usan protenas muy similares a C1q para desencadenar la cascada del complemento. Una de estas protenas es la lectina de unin a manosa (MBL) antes mencionada. Se une de manera especfica a residuos de manosa, y a otros azcares, que estn presentes sobre la superficie de muchos patgenos en un modelo que permite unin, como se muestra de modo esquemtico en la figura 2-15. No obstante, en clulas de vertebrados la manosa est cubierta por otros grupos de azcares, en especial por cido silico. De esta manera, la MBL puede ini-

66

Captulo 2: Inmunidad innata

C1s activado divide C4 hacia C4a y C4b, que se une a la supercie microbiana

A continuacin C4b se une a C2, que es dividido por C1s hacia C2a y C2b, lo que forma el complejo C4b2a

C4b2a es una convertasa C3 activa que divide C3 hacia C3a y C3b, que se unen a la supercie microbiana o a la convertasa en s

Una molcula de C4b2a puede dividir hasta 1 000 molculas de C3 hacia C3b. Muchas molculas de C3b se unen a la supercie microbiana

C4 C4a C2 C2b C3 C3a C3 C3a

C1s

C4b2a3b
C3b C4b C4b2a C4b2a C3b

Fig. 2-28. La va clsica de la activacin del complemento genera una convertasa de C3 que deposita grandes cantidades de molculas de C3b sobre la superficie del patgeno. Los pasos en la reaccin se esbozan aqu y se detallan en el texto. La divisin de C4 por C1s expone un grupo reactivo sobre C4b que permite que se una de modo covalente a la superficie del patgeno. A continuacin, C4b se une a C2, y lo hace susceptible a divisin por C1s. El fragmento C2a de mayor tamao es el componente proteasa activo de la convertasa de C3; desdobla muchas molculas de C3 para producir C3b, que se une a la superficie del patgeno, y C3a, un mediador inflamatorio.

ciar activacin del complemento al unirse a la superficie de patgenos, mientras que no queda activada sobre clulas hospedadoras. Se encuentra en concentraciones bajas en el plasma de la mayora de los individuos y, como se describe en la ltima parte de este captulo, su produccin por el hgado se incrementa durante la reaccin de fase aguda inducida como parte de la respuesta inmunitaria innata. La MBL es una molcula de dos a seis cabezas que, al igual que C1q, forma un complejo con dos zimgenos proteasa, que en el caso del complejo de MBL son las proteasas de serina MASP-1 y MASP-2 (fig. 2-30). MASP-2 se encuentra en estrecha relacin con C1r y C1s, y MASP-1 tiene una relacin un poco ms distante; es probable que las cuatro enzimas hayan evolucionado a partir de la duplicacin de un gen que codifica para un precursor comn. Cuando el complejo de MBL se une a la superficie de un patgeno, MASP-2 se activa para dividir C4 y C2. La participacin de MASP-1 en la activacin del complemento, si es que tiene alguna, es dudosa; puede dividir C2 in vitro con tanta eficiencia como MASP-2 y, as, su participacin tal vez sea mejorar la activacin del complemento, incluso si es incapaz de iniciarla. De este modo, la va de la lectina inicia la activacin del complemento de manera muy similar a la va clsica; forma una convertasa C3 a partir de C2a unido a C4b. Las personas con deficiencia de MBL o de MASP-2 experimentan un aumento considerable de infecciones durante etapas tempranas de la niez, lo que indica la importancia de la va de la lectina para la defensa del hospedador. La ventana de edad promedio de susceptibilidad a infecciones relacionadas con deficiencia de MBL ilustra la importancia particular de mecanismos innatos de defensa del hospedador en etapas tempranas de la niez, que es un periodo que antecede a la madurez completa de las respuestas inmunitarias adaptativas del nio, y posterior a la prdida de los anticuerpos maternos transferidos mediante la placenta y el calostro. Las ficolinas, relacionadas en forma y funcin generales con la MBL y C1q, tambin se unen a carbohidratos sobre superficies microbianas y, al igual que las colectinas, activan el complemento por medio de la unin y activacin de MASP1 y MASP-2 (fig. 2-30). En seres humanos hay 3 ficolinas: L, M y H. Las ficolinas difieren de las colectinas porque en lugar de tener un dominio de lectina fijo al tallo parecido a colgeno, tienen un dominio parecido a fibringeno; ste se une a carbohidratos y da a las ficolinas su especificidad general para oligosacridos que contienen N-acetilglucosamina. Al comentar la activacin del complemento mediante estas molculas de activacin innatas se utiliz a la MBL como el prototipo, pero las ficolinas quiz tengan ms importancia en la prctica, porque su concentracin en plasma es mayor que la de MBL.

El sistema de complemento y la inmunidad innata

67

Protenas de la va clsica de activacin del complemento


Componente natural Forma activa C1q C1 (C1q: C1r2:C1s2) Funcin de la forma activa Se une de manera directa a supercies de patgeno o indirecta a anticuerpos unidos a patgenos, lo que permite la autoactivacin de C1r Divide C1s hacia proteasa activa Divide C4 y C2 Se une de modo covalente al patgeno y lo opsoniza. Se une a C2 para divisin mediante C1s Pptido mediador de inamacin (actividad dbil) Enzima activa de la va clsica C3/convertasa C5: divide C3 y C5

Fig. 2-29. Protenas de la va clsica de la activacin del complemento.

C1r C1s

C4b

C4
C4a Lectina de unin a manosa

C2a

C2
C2b Precursor de la cinina C2 vasoactiva Muchas molculas de C3b se unen a la supercie del patgeno y actan como opsoninas. Inicia la amplicacin por medio de la va alternativa. Se une a C5 para divisin por C2b Pptido mediador de inamacin (actividad intermedia)

MASP-1 MASP-2

MASP-1 MASP-2

C3b

C3
C3a

2-15

La activacin de complemento est connada en su mayor parte a la supercie sobre la cual se inicia

Lectina de unin a manosa

Ya se describi que las vas de activacin clsicas del complemento y de la lectina se inician por protenas que se unen a la superficie de patgenos. Durante la cascada de enzimas desencadenadas que sigue, tiene importancia que los eventos activadores se encuentran confinados a este mismo sitio, de modo que la activacin de C3 tambin ocurre sobre la superficie del patgeno y no en el plasma ni sobre la superficie de clulas hospedadoras. Esto se logra principalmente mediante la unin covalente de C4b a la superficie del patgeno. La divisin de C4 expone un enlace tioster muy reactivo sobre la molcula de C4b que le permite unirse de
Fig. 2-30. Las molculas innatas activadoras del complemento forman un complejo con proteasas de serina que se asemeja al complejo C1 del complemento. La lectina fijadora de manosa (MBL) (panel superior) forma agrupaciones de dos a seis cabezas de unin a carbohidratos alrededor de un tallo central formado por las colas parecidas a colgeno de los monmeros de MBL. Esta estructura, fcilmente discernible bajo el microscopio electrnico (paneles medios) se asemeja de manera estrecha a la de C1q. Hay dos proteasas de serina relacionadas con este complejo: proteasa de serina asociada a MBL 1 (MASP-1) y 2 (MASP-2). An no se determina la disposicin estructural de las protenas MASP-1 en el complejo, pero es probable que interacten con la MBL del mismo modo en el cual C1r y C1s interactan con C1q. En el momento de unin de MBL a la superficie bacteriana, MASP-2 queda activada y luego puede activar el sistema de complemento al dividir y activar C4 y C2. Las ficolinas (panel inferior) se asemejan a la MBL en su estructura general, se relacionan con la MASP-1 y con la MASP-2, y pueden activar C4 y C2 despus de unirse a molculas de carbohidratos presentes sobre superficies microbianas. El dominio de unin a carbohidratos de ficolinas es un dominio parecido a fibringeno, ms que el dominio lectina presente en la MBL. Fotografa de MBL cortesa de K.B.M. Reid.

Ficolinas

MASP-1 MASP-2

MASP-1 MASP-2

68

Captulo 2: Inmunidad innata

manera covalente a molculas muy cercanas de su sitio de activacin. En la inmunidad innata, la divisin de C4 se cataliza por un complejo C1 o MBL unido a la superficie del patgeno, y C4b puede unirse a protenas o carbohidratos adyacentes sobre la superficie del patgeno. Si C4b no forma con rapidez este enlace, el enlace tioster se divide por reaccin con agua, y sta inactiva a C4b de modo irreversible (fig. 2-31). Esto ayuda a prevenir la difusin de C4b desde su sitio de activacin sobre la superficie microbiana y su acoplamiento a clulas sanas del hospedador.

Fig. 2-31. La divisin de C4 expone un enlace tioster activo que hace que el fragmento grande, C4b, se una de forma covalente a molculas cercanas sobre la superficie de las clulas bacterianas. La protena C4 intacta consta de una cadena , una y una con un enlace tioster protegido en la cadena . ste se expone cuando C1s divide la cadena para producir C4b. El enlace tioster (marcado por la flecha en el tercer panel) se hidroliza (es decir, se divide mediante agua) con rapidez, lo que inactiva a C4b a menos que reaccione con grupos hidroxilo o amino para formar un enlace covalente con molculas sobre la superficie del patgeno. La protena homloga C3 tiene un enlace tioster reactivo idntico que tambin se expone en el fragmento C3b cuando C3 es dividida por C2a. La fijacin covalente de C3b y C4b a la superficie del patgeno permite que estas molculas acten como opsoninas, y tiene importancia en el confinamiento de la activacin del complemento a las superficies de los patgenos.

C4

Divisin por C1s


C1s C4a C4b

El grupo tioster reactivo de C4b

Gli

Glu

Cis

Gln

+ H2O C4b inactivo


+ R-OH (protena, carbohidrato)

C4b unido a la supercie celular


R supercie celular

El sistema de complemento y la inmunidad innata

69

C2 se hace susceptible a divisin por C1s slo cuando es unido por C4b, y, as, la proteasa de serina C2a tambin est confinada a la superficie del patgeno, donde permanece relacionada con C4b, lo que forma la convertasa C3 C4b2a. As, las molculas de C3 tambin se activan en la superficie del patgeno. Adems, el producto de divisin C3b se inactiva con rapidez a menos que se una de modo covalente por el mismo mecanismo que C4b y, por tanto, slo opsoniza la superficie sobre la cual ha tenido lugar la activacin del complemento. La opsonizacin de patgenos por C3b es ms eficiente cuando hay anticuerpos unidos a la superficie del patgeno, puesto que los fagocitos tienen receptores tanto para complemento como para anticuerpos; stos se describen en el captulo 9. Dado que las formas reactivas de C3b y C4b tienen la capacidad para formar un enlace covalente con cualquier protena o carbohidrato adyacente, cuando el complemento se activa por anticuerpo unido una proporcin del C3b o C4b reactivo queda enlazada a las molculas de anticuerpo. Es probable que esta combinacin de anticuerpo con enlace qumico covalente con complemento sea el desencadenante ms eficiente para fagocitosis.

2-16

La hidrlisis de C3 inicia la va alternativa del complemento

El nombre de esta va se debe a que se descubri como una segunda va, o una va alternativa para la activacin del complemento, despus de que se haba defini, do la va clsica. Esta va puede proceder en muchas superficies microbianas en ausencia de anticuerpo especfico, y da pie a la generacin de una convertasa C3 distinta designada C3bBb. Por el contrario, con las vas de activacin clsicas del complemento y de la lectina, el inicio de la va alternativa no depende de una protena de unin a patgeno; se inicia por medio de la hidrlisis espontnea de C3, como se muestra en los tres paneles superiores de la figura 2-32. Los componentes distintivos de la va se listan en la figura 2-33. Varios mecanismos aseguran que la va de activacin slo procede sobre la superficie de un patgeno o por encima de clulas hospedadoras daadas, y no sobre clulas y tejidos del hospedador normales. C3 abunda en el plasma, y C3b se produce a un ndice importante mediante escisin espontnea. Esto ocurre mediante la hidrlisis espontnea del enlace tioster en C3 para formar C3(H2O) que tiene una conformacin alterada, lo que permite unin de la protena plasmtica factor B. La unin de B por C3(H2O) permite entonces que una proteasa plasmtica llamada factor D divida el factor B hacia Ba y Bb; este ltimo permanece relacionado con C3(H2O) para formar el complejo C3(H2O)Bb. Este complejo es una convertasa C3 de fase lquida, y si bien slo se forma en pequeas cantidades, puede causar escisin de muchas molculas C3 hacia C3a y C3b. Gran parte de este C3b se inactiva mediante hidrlisis, pero algo se fija de manera covalente, por medio de su grupo tioster reactivo, a las superficies de patgenos o de clulas hospedadoras. C3b unido de este modo tiene la capacidad para unirse a factor B, lo que permite su escisin por el factor D para dar el fragmento pequeo Ba y la proteasa activa Bb. Esto da por resultado la formacin de convertasa C3 de la va alternativa, C3bBb (fig. 2-34).

2-17

Las protenas de membrana y plasmticas que regulan la formacin y estabilidad de convertasas C3 determinan la extensin de la activacin del complemento en diferentes circunstancias

La extensin de la activacin del complemento depende de manera crucial de la estabilidad de la convertasa C3bBb. Su estabilidad es controlada por protenas reguladoras tanto positivas como negativas. Las clulas hospedadoras normales estn protegidas contra activacin del complemento mediante varias protenas reguladoras negativas, presentes en el plasma y en las membranas de clulas hospedadoras, que protegen a las clulas hospedadoras normales contra los efectos perjudiciales de la activacin inapropiada del complemento. Dichas protenas

70

Captulo 2: Inmunidad innata

Fig. 2-32. El complemento activado por la va alternativa ataca patgenos mientras preserva las clulas hospedadoras, que estn protegidas por protenas reguladoras del complemento. El componente del complemento C3 se divide de modo espontneo en el plasma para generar C3(H2O), que se une al factor B y permite que ste sea dividido por el factor D (panel superior). La convertasa de C3 soluble resultante divide a C3 para generar C3a y C3b, que pueden fijarse a las clulas hospedadoras o a la superficie de patgenos (segundo panel). C3b unido de manera covalente se une al factor B, que a su vez es dividido con rapidez por el factor B en Bb, que permanece unido a C3b para formar una convertasa de C3, y Ba, que se libera (tercer panel). Si se forma C3bBb sobre la superficie de clulas hospedadoras (paneles inferiores izquierdos), se desactiva con rapidez por protenas reguladoras del complemento expresadas por la clula hospedadora: receptor del complemento 1 (CR1), factor acelerador de la descomposicin (DAF) y cofactor de membrana de protelisis (MCP). Las superficies de las clulas hospedadoras tambin favorecen la unin del factor H del plasma. CR1, DAF y el factor H desplazan a Bb desde C3b, y el CR1, el MCP y el factor H catalizan la divisin de C3b unido por la proteasa plasmtica factor I para producir C3b inactivo (conocido como iC3b). Las superficies bacterianas (paneles derechos inferiores) no expresan protenas reguladoras del complemento, y favorecen la unin de properdina (factor P), que estabiliza la actividad de convertasa de C3bBb. Esta convertasa es el equivalente de C4b2a de la va clsica (fig. 2-28).

C3 sufre hidrlisis espontnea hacia C3(H2O), que se une al factor B, lo que permite su divisin por el factor D hacia Ba y Bb

C3

factor D

factor B

C3(H2O)

El complejo C3(H2O)Bb es una convertasa C3, que divide ms C3 hacia C3a y C3b. C3b se inactiva con rapidez a menos que se una a supercie celular
Bb C3a C3(H2O) C3

C3b

El factor B se une de manera no covalente a C3b sobre una supercie celular, y el factor D lo divide hacia Bb
factor B Ba

factor D Bb

Sobre las clulas hospedadoras, las protenas reguladoras del complemento, CR1, H, MCP y DAF se unen a C3b. CR1, H y DAF desplaza a Bb
Bb

Los patgenos carecen de protenas reguladoras del complemento. La unin de properdina (factor P) estabiliza el complejo C3bBb

DAF CR1 H C3b

C3b MCP

Bb C3b

factor P

C3bBb

C3b unido a H, CR1 y MCP es dividido por el factor 1 para dar C3b inactivo (iC3b)

El complejo C3bBb es una convertasa C3 y deposita muchas molculas de C3b sobre la supercie del patgeno

factor I I CR1 iC3b iC3b DAF I H MCP iC3b C3b I

Activacin nula de complemento sobre las supercies de clulas hospedadoras

Opsonizacin, activacin de componentes terminales del complemento

El sistema de complemento y la inmunidad innata

71

Protenas de la va alternativa de activacin del complemento


Componente natural C3 Fragmentos activos C3b Funcin Se une a la supercie del patgeno, se une a B para divisin por D, C3bBb es convertasa C3 y C3b2Bb es convertasa C5 Fragmento pequeo de B, funcin desconocida Bb es enzima activa de la convertasa C3 C3bBb y convertasa C5 C3b2Bb Proteasa de serina plasmtica, divide B cuando est unido a C3b hacia Ba y Bb Protena plasmtica que estabiliza la convertasa C3bBb sobre clulas bacterianas

Fig. 2-33. Protenas de la va alternativa de activacin del complemento.

Ba Factor B (B) Bb

Deciencia de factor I

Factor D (D)

Properdina (P)

interactan con C3b y evitan que la convertasa se forme o promueven su disociacin rpida. De este modo, una protena fija a membrana conocida como factor acelerador de descomposicin (DAF o CD55) compite con el factor B por unin a C3b sobre la superficie celular, y puede desplazar a Bb desde una convertasa ya formada. La formacin de esta enzima tambin puede prevenirse al causar escisin C3b hacia su derivado inactivo iC3b. Esto se logra mediante una proteasa plasmtica, el factor I, junto con las protenas de unin a C3b que pueden actuar como cofactores, como el cofactor de membrana de protelisis (MCP o CD46), otra protena de membrana de la clula hospedadora. El receptor de complemento de superficie celular tipo 1 (CR1) tiene actividades similares a las del DAF y el MCP en la inhibicin de la formacin de convertasa C3 y la promocin del catabolismo de C3b hacia productos inactivos, pero tiene distribucin ms limitada en el tejido. El factor H es an otra protena reguladora del complemento en el plasma que se une a C3b y, al igual que CR1, tiene la capacidad de competir con el factor B para desplazar a Bb desde la convertasa adems de actuar como un cofactor para el factor I. El factor H se une en forma preferente a C3b unido a clulas de vertebrados porque tiene afinidad por los residuos de cido silico presentes sobre la superficie celular. Por el contrario, cuando el complemento es activado sobre superficies extraas, como superficies bacterianas, o de hecho sobre clulas hospedadoras que se daaron o modificaron por isquemia, infeccin vrica, o unin a anticuerpo, las convertasas C3s se estabilizan, lo que permite que proceda la activacin del complemento. La protena plasmtica reguladora positiva, properdina o factor P, se une sobre estas clulas a la convertasa C3bBb e incrementa su estabilidad, lo que causa amplificacin de activacin del complemento.

Fig. 2-34. La va alternativa de activacin del complemento amplifica la va clsica o la va de la lectina al formar una convertasa de C3 alternativa y depositar ms molculas de C3b sobre el patgeno. C3b depositado mediante la va clsica o la va de la lectina puede unirse al factor B, lo cual lo hace susceptible a divisin por el factor D. El complejo C3bBb es la convertasa de C3 de la va alternativa de activacin del complemento y su accin, como la de C4b2a, da por resultado el depsito de muchas molculas de C3b sobre la superficie del patgeno.

C3b depositado mediante convertasa C3 de la va clsica o la va de la lectina

C3b se une al factor B

El factor B unido es dividido por la proteasa plasmtica factor D hacia Ba y Bb


factor D Ba Bb

El complejo C3bBb es una convertasa C3, que divide muchas molculas de C3 hacia C3a y C3b
C3 C3a

factor B

C3b

C3bBb

C3b

72

Captulo 2: Inmunidad innata

Fig. 2-35. Hay una estrecha relacin entre los factores de las vas de activacin del complemento alternativa, de la lectina, y clsica. La mayora de los factores son idnticos o los productos de genes que se han duplicado y luego mostrado divergencia de secuencia. Las protenas C4 y C3 son homlogas y contienen el enlace tioster inestable mediante el cual sus fragmentos grandes, C4b y C3b, se unen de modo covalente a membranas. Los genes que codifican protenas C2 y B son adyacentes en la regin de clase III del MHC y surgieron mediante duplicacin gnica. Las protenas reguladoras factor H, CR1 y C4BP comparten una secuencia de repeticin comn a muchas protenas reguladoras del complemento. La mayor divergencia entre las vas yace en su inicio: en la va clsica el complejo C1 se une a ciertos patgenos o a anticuerpos unidos, y en esta ltima circunstancia sirve para convertir la unin al anticuerpo en actividad de enzimas sobre una superficie especfica; en la va de la lectina, la lectina fijadora de manosa (MBL) se asocia a una proteasa de serina, proteasa de serina asociada a MBL (MASP) activadora, para desempear la misma funcin que C1r:C1s; en la va alternativa esta actividad enzimtica la proporciona el factor D.

Protena que proporciona funcin en la va Paso en la va


Alternativa Lectina Clsica

Relacin

Proteasa de serina iniciadora Unin covalente a la supercie celular C3/convertasa C5 Control de activacin Opsonizacin Inicio de va efectora Inamacin local Estabilizacin

D C3b Bb CR1 H

MASP C4b C2b CR1 C4BP


C3b C5b

C1s

Homloga (C1s y MASP) Homloga Homloga Homloga idntica Idntica Idntica Idntica nica

C5a, C3a
P

Ninguna

Una vez formada sobre una superficie que la hace estable, la convertasa C3bBb causa escisin con rapidez de C3 a C3b, que puede unirse al patgeno y actuar como una opsonina o reiniciar la va para formar otra molcula de convertasa C3bBb. De esta manera, la va alternativa se activa por medio de un lazo de amplificacin, que puede ocurrir sobre la superficie de un patgeno o sobre clulas hospedadoras daadas pero no sobre clulas o tejidos normales del hospedador. Dicho lazo permite que la va alternativa contribuya a la activacin del complemento inicialmente desencadenada por medio de las vas clsica o de la lectina (fig. 2-25). Las convertasas C3 que se producen por la activacin de las vas clsica y de la lectina (C4b2b) y por la va alternativa (C3bBb) al parecer son distintas. El entendimiento del sistema del complemento se simplifica un poco mediante reconocimiento de las estrechas relaciones evolutivas entre las diferentes protenas del complemento (fig. 2-35). De este modo, los zimgenos del complemento, factor B y C2, son protenas estrechamente relacionadas, codificadas por genes homlogos localizados en tndem dentro del complejo mayor de histocompatibilidad (MHC) en el cromosoma 6 del ser humano. Adems, sus asociados de unin respectivos, C3 y C4, contienen enlaces tioster que proporcionan el medio de fijar de manera covalente las convertasas C3 a la superficie de un patgeno. Slo un componente de la va alternativa parece por completo no relacionado con sus equivalentes funcionales en las vas clsica y de la lectina: la proteasa de serina iniciadora, factor D. El factor D tambin puede distinguirse como la nica proteasa activadora del sistema de complemento que circula como una enzima activa ms que como un zimgeno. Esto es necesario para el inicio de la va alternativa por medio de la divisin del factor B unido a C3 activado de modo espontneo, y seguro para el hospedador porque el factor D no tiene otro sustrato que el factor B unido a C3b. Esto significa que el factor D encuentra su sustrato slo a una concentracin muy baja en el plasma, y en superficies de patgeno donde se permite que proceda la va alternativa de activacin del complemento. La comparacin de las diferentes vas de activacin del complemento ilustra el principio general de que la mayor parte de los mecanismos efectores inmunitarios que pueden activarse de una manera no clonal como parte de la respuesta no adaptativa temprana contra infeccin se han aprovechado durante la evolucin para utilizarse como mecanismos efectores de la inmunidad adaptativa. Es casi seguro que la respuesta adaptativa evolucion al aadir reconocimiento especfi-

El sistema de complemento y la inmunidad innata

73

co al sistema no adaptativo original. Esto se ilustra con particular claridad en el sistema del complemento, porque aqu los componentes estn definidos y puede observarse que los homlogos funcionales estn relacionados desde el punto de vista evolutivo.

C3b se une a C4b2a y a C3bBb, lo que forma las convertasas C5 activas C4b2a3b y C3b2Bb

2-18

La convertasa C3 unida a supercie deposita grandes nmeros de fragmentos de C3b sobre las supercies de patgenos y genera actividad de convertasa C5

C4b2a3b

C3b2Bb

La formacin de convertasas C3 es el punto en el cual convergen las tres vas de la activacin del complemento, porque tanto la convertasa C4b2a de la va clsica y de la va de la lectina, como la convertasa C3bBb de la va alternativa tienen la misma actividad, e inician los mismos eventos subsiguientes. Ambas dividen C3 hacia C3b y C3a. C3b se une de modo covalente por medio de su enlace tioster a molculas adyacentes en la superficie del patgeno; de otra manera queda inactivado por hidrlisis. C3 es la protena del complemento ms abundante en el plasma; ocurre a una concentracin de 1.2 mg ml1, y hasta 1 000 molculas de C3b pueden unirse en un sitio ms cercano de una convertasa C3 activa nica (fig. 2-34). De este modo, el principal efecto de la activacin del complemento es depositar grandes cantidades de C3b sobre la superficie del patgeno infectante, donde forma una cubierta con enlace covalente que puede sealar la destruccin final del patgeno por fagocitos. El siguiente paso en la cascada es la generacin de las convertasas C5. En las vas clsica y de la lectina, se forma una convertasa C5 mediante la unin de C3b a C4b2a para dar C4b2a3b. De la misma manera, la convertasa C5 de la va alternativa se forma mediante la unin de C3b a la convertasa C3 para formar C3b2Bb. C5 es captada por estos complejos de convertasa C5 a travs de la unin a un sitio aceptor sobre C3b y, as, se hace susceptible la escisin por la actividad de proteasa de serina de C2a o Bb. Esta reaccin, que genera C5b y C5a, es mucho ms limitada que la divisin de C3, porque C5 slo puede dividirse cuando se une a C3b que, a su vez, est unido a C4b2a o C3bBb para formar el complejo de convertasa C5 activo. De este modo, el complemento activado mediante las tres vas lleva a la unin de grandes nmeros de molculas de C3b sobre la superficie del patgeno, la generacin de un nmero ms limitado de molculas de C5b, y la liberacin de C3a y C5a (fig. 2-36).

C5 se une al componente C3b de convertasa C5

C5

C5

C4b2a3b

C3b2Bb

C5 es dividido por C2a o Bb para formar C5b y C5a


C5a
C5a

C5b

C5b

C4b2a3b

C3b2Bb

2-19

La fagocitosis de patgenos marcados con complemento est mediada por receptores de protenas del complemento

La accin de mayor importancia del complemento es facilitar la captacin y destruccin de patgenos por clulas fagocticas. Esto ocurre mediante el reconocimiento especfico de componentes del complemento unidos por receptores de complemento (CR) sobre fagocitos. Tales receptores se unen a patgenos opsonizados con componentes del complemento: dicha opsonizacin es una funcin importante de C3b y sus derivados proteolticos. C4b tambin acta como una opsonina pero tiene una participacin relativamente menor, debida en su mayor parte a que se genera mucho ms C3b que C4b. En la figura 2-37 se listan los seis tipos conocidos de receptores para componentes del complemento unidos, con sus funciones y distribuciones. El mejor caracterizado es el receptor de C3b CR1 (CD35), expresado tanto en macrfagos como en neutrfilos. La unin de C3b a CR1 no estimula por s misma la fagocitosis, pero puede llevar a sta en presencia de otros mediadores inmunitarios que activan a los macrfagos. Por ejemplo, el fragmento de complemento pequeo C5a puede activar a macrfagos para que ingieran bacterias unidas a sus receptores de CR1 (fig. 2-38). C5a se une a otro receptor expresado por macrfagos, el receptor de C5a, que tiene siete dominios transmembrana. Los receptores de este tipo se acoplan con protenas de unin a nucletido guanina intracelulares

Fig. 2-36. El componente del complemento C5 se divide cuando es captado por una molcula de C3b que forma parte de un complejo de convertasa de C5. Las convertasas de C5 se forman cuando C3b se une a la convertasa de C3 de la va clsica o de la va de la lectina C4b2a para formar C4b2a3b, o a la convertasa de C3 de la va alternativa C3bBb para formar C3b2Bb (panel superior). C5 se une a C3b en estos complejos (panel central). C5 se divide mediante la enzima activa C2a o Bb para formar C5b y el mediador inflamatorio C5a (panel inferior). Al contrario de C3b y C4b, C5b no se une de manera covalente a la superficie celular. La produccin de C5b inicia el ensamblaje de los componentes terminales del complemento.

74

Captulo 2: Inmunidad innata

Fig. 2-37. Distribucin y funcin de los receptores de superficie celular para protenas del complemento. Hay varios receptores especficos para diferentes componentes del complemento unidos y sus fragmentos. CR1 y CR3 tienen especial importancia en la induccin de la fagocitosis de bacterias con componentes del complemento unidos a su superficie. CR2 se encuentra principalmente sobre clulas B, donde tambin forma parte del complejo correceptor de estas clulas y el receptor mediante el cual el virus de Epstein-Barr infecta de modo selectivo a las clulas B, lo que origina mononucleosis infecciosa. CR1 y CR2 comparten caractersticas estructurales con las protenas reguladoras del complemento que se unen a C3b y a C4b. CR3 y CR4 son integrinas; se sabe que CR3 es importante para la adhesin y para la migracin de leucocitos, mientras que respecto a CR4 slo se sabe que funciona en respuestas fagocticas. Los receptores C5a y C3a son receptores acoplados a protena con siete dominios transmembrana. Las FDC, clulas dendrticas foliculares, no participan en la inmunidad innata y se comentan en captulos posteriores.

Receptor

Especicidad

Funciones Promueve la descomposicin de C3b y C4b. Estimula la fagocitosis. Transporte de complejos inmunitarios por eritrocitos

Tipos de clulas Eritrocitos, macrfagos, monocitos, leucocitos polimorfonucleares, clulas B, FDC

CR1 (CD35)

C3b, C4bi C3b

CR2 (CD21) CR3 (Mac-1) (CD11b/ CD18) CR4 (gp150, 95) (CD11c/ CD18) Receptor de C5a

C3d, iC3b, C3dg Virus de Epstein-Barr

Parte de correceptor de clula B Receptor del virus de Epstein-Barr

Clulas B, FDC

iC3b

Estimula la fagocitosis

Macrfagos, monocitos, leucocitos polimorfonucleares, FDC Macrfagos, monocitos, leucocitos polimorfonucleares, clulas dendrticas Clulas endoteliales, clulas cebadas, fagocitos

iC3b

Estimula la fagocitosis

C5a

La unin de C5a activa a la protena G

Receptor de C3a

C3a

La unin de C3a activa a la protena G

Clulas endoteliales, clulas cebadas, fagocitos

llamadas protenas G, y el receptor C5a emite seales de esta manera. Las protenas relacionadas con la matriz extracelular, como la fibronectina, tambin pueden contribuir a la activacin de fagocitos; stas se encuentran cuando los fagocitos se reclutan hacia tejido conjuntivo y se activan ah. Otros tres receptores del complemento, CR2 (tambin conocido como CD21), CR3 (CD11b:CD18), y CR4 (CD11c:CD18), se unen a formas inactivadas de C3b que permanecen fijas a la superficie del patgeno. Al igual que varios otros componentes clave del complemento, C3b est sujeto a mecanismos reguladores y puede causar escisin hacia derivados que no pueden formar una convertasa activa. Uno de los derivados inactivos de C3b, conocido como iC3b (seccin 2-17) acta como una opsonina por sus propias caractersticas cuando es unido por el receptor del complemento CR3. Al contrario de la unin de iC3b a CR1, la unin de iC3b a CR3 es suficiente para estimular la fagocitosis. Un segundo producto de desintegracin de C3b, llamado C3dg, slo se une a CR2. Este ltimo se encuentra sobre clulas B como parte de un complejo de correceptor que puede aumentar la seal recibida por medio del receptor de inmunoglobulina especfico para antgeno. De este
Fig. 2-38. La anafilatoxina C5a puede aumentar la fagocitosis de microorganismos opsonizados. La activacin del complemento, sea mediante la va alternativa o la va de la lectina fijadora de manosa, conduce al depsito de C3b sobre la superficie del microorganismo (panel izquierdo). C3b puede unirse mediante el receptor del complemento CR1 sobre la superficie de fagocitos, pero esto por s mismo no basta para inducir la fagocitosis (panel central). Los fagocitos tambin expresan receptores para la anafilatoxina C5a, y la unin de C5a ahora activar a la clula para fagocitar microorganismos unidos por medio de CR1 (panel derecho).

La bacteria es cubierta con complemento mediante las vas alternativa y de la MBL

Cuando slo C3b se une a CR1, no hay fagocitosis de bacterias

C5a puede activar a los macrfagos para fagocitosis por medio de CR1

C5a

macrfago

El sistema de complemento y la inmunidad innata

75

modo, una clula B cuyo receptor de antgeno es especfico para cierto patgeno, recibir una seal fuertemente incrementada al momento de la unin a su patgeno si tambin est cubierto con C3dg. Por ende, la activacin del complemento puede contribuir a producir una fuerte respuesta de anticuerpos (caps. 6 y 9). Este ejemplo de cmo una respuesta inmunitaria humoral innata puede contribuir a activar inmunidad humoral adaptativa corre paralela con la contribucin hecha por la respuesta celular innata de macrfagos y clulas dendrticas al inicio de una respuesta de clulas T, y que se comenta ms adelante en este captulo. La participacin central de la opsonizacin por C3b y sus fragmentos inactivos en la destruccin de patgenos extracelulares puede observarse en los defectos de diversas enfermedades por deficiencia de complemento. Los individuos con deficiencia de cualquiera de los componentes tardos del complemento se afectan relativamente poco, y slo muestran aumento de la susceptibilidad a infecciones por Neisseria, pero las personas con deficiencia de C3 o de molculas que catalizan el depsito de C3b muestran incremento de la susceptibilidad a infeccin por una amplia gama de bacterias extracelulares (cap. 12).

2-20

Fragmentos pequeos de algunas protenas del complemento pueden iniciar una respuesta inamatoria local

Los fragmentos pequeos del complemento C3a, C4a y C5a actan sobre receptores especficos (fig. 2-37) para producir respuestas inflamatorias locales. Cuando se producen en grandes cantidades o se inyectan por va sistmica, inducen un colapso circulatorio generalizado, lo que produce un sndrome parecido a choque, similar al que se observa en una reaccin alrgica sistmica que comprende anticuerpos IgE (cap. 13). Tal reaccin se denomina choque anafilctico y, por consiguiente, estos fragmentos pequeos del complemento a menudo se denominan anafilatoxinas. De los tres, C5a tiene la actividad biolgica especfica ms alta. Los tres inducen contraccin del msculo liso y aumentan la permeabilidad vascular, pero C5a y C3a tambin actan sobre las clulas endoteliales que revisten los vasos sanguneos para inducir molculas de adhesin. Adems, C3a y C5a pueden activar las clulas cebadas que se encuentran en tejidos submucosos para que liberen mediadores como histamina y TNF- que causan efectos similares. Los cambios inducidos por C5a y C3a reclutan anticuerpos, complemento y clulas fagocticas hacia el sitio de una infeccin (fig. 2-39), y el incremento de lquido en los tejidos acelera el movimiento de clulas presentadoras de antgeno que portan patgenos hacia los ganglios linfticos locales, lo que contribuye al inicio expedito de la respuesta inmunitaria adaptativa. C5a tambin acta de manera directa sobre neutrfilos y monocitos para aumentar su adherencia a las paredes de los vasos, su migracin hacia sitios de depsito de antgeno, y su capacidad para ingerir partculas. C5a tambin incrementa la expresin de CR1 y CR3 sobre la superficie de estas clulas. De este modo, C5a, y en menor grado C3a y C4a, actan en forma conjunta con otros componentes del complemento para acelerar la destruccin de patgenos por fagocitos. C5a y C3a emiten seales por medio de receptores transmembrana que activan protenas G; de esta manera, la accin de C5a en la atraccin de neutrfilos y monocitos es anloga a la de las quimiocinas, que tambin actan por medio de protenas G para controlar la migracin celular.

2-21

Las protenas terminales del complemento se polimerizan para formar poros en membranas que pueden destruir a ciertos patgenos

Uno de los efectos importantes de la activacin de complemento es el montaje de los componentes terminales de este ltimo (fig. 2-40) para formar un complejo de ataque de membrana. Las reacciones que llevan a la formacin de este complejo se muestran de modo esquemtico y en imgenes de microscopia en la figura 2-41. El resultado final es un poro en la membrana de bicapa lipdica, que

76

Captulo 2: Inmunidad innata

Fig. 2-39. Los fragmentos pequeos del complemento, en especial C5a, pueden inducir respuestas inflamatorias locales. Los fragmentos pequeos del complemento tienen actividad diferencial: C5a es ms activo que C3a, que es ms activo que C4a. Causan respuestas inflamatorias regionales al actuar de manera directa sobre vasos sanguneos locales, lo que estimula un incremento del flujo sanguneo, de la permeabilidad vascular y de la unin de fagocitos a clulas endoteliales. C5a tambin activa a las clulas cebadas (que no se muestran) para que liberen mediadores, como histamina y TNF-, que contribuyen con la respuesta inflamatoria. El aumento del dimetro y de la permeabilidad del vaso causa la acumulacin de protenas y de lquido. Esta ltima incrementa el drenaje linftico y lleva a patgenos y sus componentes antignicos hacia ganglios linfticos cercanos. Los anticuerpos, el complemento y las clulas reclutados de este modo participan en la eliminacin de patgenos al aumentar la fagocitosis. Los fragmentos pequeos del complemento tambin pueden incrementar de manera directa la actividad de los fagocitos.

Productos de divisin del complemento pequeos actan sobre vasos sanguneos para incrementar la permeabilidad vascular y molculas de adhesin celular C3a C5a C4a

La permeabilidad aumentada permite incremento del escape de lquido a partir de vasos sanguneos y extravasacin de molculas de inmunoglobulina y del complemento

Hay aumento de la migracin de macrfagos, leucocitos polimorfonucleares (PMN) y linfocitos. Tambin se incrementa la actividad microbicida de macrfagos y PMN

IgG

IgM componentes del complemento

Fig. 2-40. Los componentes terminales del complemento se ensamblan para formar el complejo de ataque de membrana.

Los componentes terminales del complemento que forman el complejo de ataque de membrana
Protena natural Componente activo Funcin Mediador peptdico pequeo de inamacin (actividad alta) Inicia el montaje del sistema de ataque de membrana Se une a C5b; forma el aceptor para C7 Se une a C5b6; el complejo anflico se inserta en la bicapa lipdica Se une a C5b67; inicia la polimerizacin de C9 Polimeriza a C5b678 para formar un canal que abarca la membrana, lo que lisa la clula

C5a C5 C5b C6 C7 C8 C6 C7 C8

C9

C9n

El sistema de complemento y la inmunidad innata

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destruye la integridad de la membrana. Se cree que esto mata al patgeno al destruir el gradiente de protn a travs de la membrana celular del agente. El primer paso en la formacin del complejo de ataque de membrana es la divisin de C5a por una convertasa C5 para liberar C5b (fig. 2-36). Durante las etapas siguientes (fig. 2-41), C5b inicia el montaje de los componentes ms tardos del complemento, y su insercin en la membrana celular. En primer lugar, una molcula de C5b se une a una de C6, y el complejo de C5b6 se une despus a una molcula de C7. Esta reaccin conduce a un cambio conformacional en las molculas constituyentes, con la exposicin de un sitio hidrfobo en C7, que se inserta en la bicapa lipdica. Se exponen sitios hidrfobos similares en los componentes ms tardos C8 y C9 cuando se unen al complejo, lo que permite que estas protenas tambin se inserten en la bicapa lipdica. C8 es un complejo de dos protenas, C8 y C8-. La protena C8 tambin se une a C5b, y la unin de C8 al complejo de C5b67 relacionado con membrana permite que el dominio hidrfobo de C8- se inserte en la bicapa lipdica. Por ltimo, C8- induce la polimerizacin de 10 a 16 molculas de C9 hacia una estructura formadora de poro llamada el complejo de ataque de membrana. Dicho complejo, que se muestra de manera esquemtica y mediante microscopia electrnica en la figura 2-41, tiene una cara externa hidrfoba, que le permite relacionarse no slo con la bicapa lipdica, sino con un canal interno hidroflico. El dimetro de este canal es de alrededor de 100 , lo que permite el paso libre de solutos y agua a travs de la bicapa lipdica. La alteracin de esta ltima causa prdida de la homeostasia celular, alteracin del gradiente de protn a travs de la membrana, penetracin de enzimas como lisozima hacia las clulas, y destruccin final del patgeno. Si bien el efecto del complejo de ataque de membrana es muy notorio, en particular en demostraciones experimentales en las cuales se usan anticuerpos contra membranas celulares de eritrocitos para desencadenar la cascada del complemento, la importancia de estos componentes en la defensa del hospeda-

Fig. 2-41. El montaje del complejo de ataque de membrana genera un poro en la bicapa lipdica de membrana. La secuencia de pasos y su aspecto aproximado se muestran en esta figura de un modo esquemtico. C5b desencadena el ensamblaje de un complejo de una molcula de C6, una de C7 y una de C8, en dicho orden. C7 y C8 sufren cambios conformacionales, lo que expone dominios hidrfobos que se insertan en la membrana. Este complejo causa dao moderado de membrana por s solo, y sirve tambin para inducir la polimerizacin de C9, de nuevo con la exposicin de un sitio hidrfobo. A continuacin se aaden hasta 16 molculas de C9 al ensamble para generar un conducto de 100 de dimetro en la membrana. Dicho conducto altera la membrana de la clula bacteriana y destruye la bacteria. Las micrografas electrnicas muestran membranas de eritrocitos con complejos de ataque de membrana en dos orientaciones, transversal y lateral. Fotografas cortesa de S. Bhakdi y J. Tranum-Jensen.

C5b se une a C6 y C7

Complejos de C5b67 se unen a la membrana por medio de C7

C8 se une al complejo y se inserta en la membrana celular

Molculas de C9 se unen al complejo y se polimerizan

10 a 16 molculas de C9 se unen para formar un poro en la membrana

C8 C6 C5b C7 complejo de C5b67

C9

bicapa lipdica

Patgeno

Lesiones de membranaterminal (anillos)

Lesiones de membranalateral (tubos)

Representacin esquemtica del poro del complejo de ataque de membrana

15 nm 3 nm

10 nm

78

Captulo 2: Inmunidad innata

Deciencia del componente C8 del complemento

dor parece ser bastante limitada. Hasta ahora, las deficiencias de componentes del complemento C5-C9 se han relacionado con susceptibilidad slo a especies de Neisseria, la bacteria que causa la enfermedad de transmisin sexual gonorrea, y una forma frecuente de meningitis bacteriana. As, est claro que las acciones opsonizantes e inflamatorias de los componentes ms tempranos de la cascada del complemento tienen ms importancia para la defensa del hospedador contra infeccin. La formacin del complejo de ataque de membrana parece tener importancia slo para la destruccin de algunos patgenos, aunque bien pudiera tener una participacin importante en la inmunopatologa (cap. 14).

2-22

Las protenas de control del complemento regulan las tres vas de la activacin del complemento y protegen al hospedador contra sus efectos destructivos

Dados los efectos destructivos del complemento, y la manera en la cual su activacin se amplifica con rapidez por medio de una cascada de enzima desencadenada, no es de sorprender que haya varios mecanismos para prevenir su activacin descontrolada. Como se ha observado, las molculas efectoras del complemento se generan por medio de la activacin secuencial de zimgenos, que estn presentes en el plasma en forma inactiva. La activacin de estos zimgenos por lo general ocurre sobre la superficie de un patgeno, y los fragmentos de complemento activados producidos en la cascada de reacciones consiguiente por lo general se unen cerca o se desactivan con rapidez mediante hidrlisis. Estas dos caractersticas de la activacin del complemento actan como salvaguardas contra activacin descontrolada. Aun as, todos los componentes del complemento se activan de modo espontneo a un ndice bajo en el plasma, y los componentes del complemento activados a veces se unen a protenas sobre las clulas hospedadoras. Las consecuencias en potencia dainas se previenen mediante una serie de protenas de control del complemento, que se resumen en la figura 2-42; stas regulan la cascada del complemento en diferentes puntos. Como se observ en la exposicin sobre la va alternativa de activacin del complemento (seccin 2-16), muchas de estas protenas de control protegen de manera especfica a las

Fig. 2-42. Protenas que regulan la actividad del complemento.

Protenas reguladoras de las vas clsica y alternativa


Nombre (smbolo) Participacin en la regulacin de la activacin del complemento

Inhibidor de C1 (C1INH)

Se une a C1r y C1s activados, y los quita de C1q, y a MASP-2 activada, y la quita de MBL

Protena de unin a CD4 (C4BP) Receptor del complemento 1 (CR1) Factor H (H)
Factor I (I)

Se une a C4b, desplazando a C2a; cofactor para divisin de C4b por I Se une a C4b, desplazando a C2a, o C3b desplazando a Bb; cofactor para I Se une a C3b, desplazando a Bb; cofactor para I
Proteasa de serina que divide a C3b y C4b; auxiliada por H, MCP, C4BP, o CR1 Protena de membrana que desplaza a Bb desde C3b y a C2a desde C4b Protena de membrana que promueve la inactivacin de C3b y C4b por I

Factor acelerador de la descomposicin (DAF) Protena cofactor de membrana (MCP) CD59 (protectina)

Evita la formacin del complejo de ataque de membrana sobre clulas autlogas o alognicas. Ampliamente expresado sobre membranas

El sistema de complemento y la inmunidad innata

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clulas hospedadoras normales, mientras que permiten que la activacin del complemento proceda sobre superficies de patgenos. Por ende, las protenas del control del complemento permiten que este ltimo distinga entre lo propio y lo extrao. En la figura 2-43 se muestran las reacciones que regulan la cascada del complemento. En los dos paneles superiores se muestra de qu modo la activacin de C1 se controla mediante un inhibidor de proteasa de serina plasmtica o serpina, el inhibidor de C1 (C1INH). El C1INH se une a las enzimas activas C1r:C1s, y hace que se disocien de C1q, que permanece unido al patgeno. De esta manera, C1INH limita el tiempo durante el cual C1s activo puede dividir C4 y C2. Mediante los mismos medios, C1INH limita la activacin espontnea de C1 en el plasma. Su importancia se observa en la enfermedad por deficiencia de C1INH edema angioneurtico hereditario, en el cual la activacin espontnea crnica del complemento lleva a la produccin de fragmentos divididos excesivos de C4 y C2. El fragmento pequeo de C2, C2b, se divide ms hacia un pptido, la cinina C2, que causa hinchazn extensa; la ms peligrosa es el edema local en la trquea, puede llevar a sofocacin. La bradicinina, que tiene acciones similares a las de la cinina C2, tambin se produce de un modo descontrolado en esta enfermedad, como resultado de la falta de inhibicin de otra proteasa plasmtica, la calicrena, un componente del sistema de cinina comentado en la seccin 2-5, que se activa por dao de tejido y tambin se regula por C1INH. Esta enfermedad se corrige por completo mediante el reemplazo de C1INH. Los fragmentos activados grandes de C4 y C2, que en circunstancias normales se combinan para formar la convertasa C3, no daan las clulas hospedadoras en esos pacientes porque C4b se inactiva con rapidez en el plasma (fig. 2-31), y no se forma la convertasa. Adems, cualquier convertasa que se forme de manera incidental sobre una clula hospedadora se inactiva mediante los mecanismos descritos a continuacin. El enlace tioster de C3 y C4 activados es en extremo reactivo y no tiene un mecanismo para distinguir entre un grupo hidroxilo o amino aceptor sobre una clula hospedadora, y un grupo similar sobre la superficie de un patgeno. Diversos mecanismos protectores, mediados por otras protenas, han evolucionado para asegurar que la unin de un pequeo nmero de molculas de C3 o C4 a membranas de clula hospedadora de por resultado formacin mnima de convertasa C3 y poca amplificacin de activacin del complemento. Casi todos estos mecanismos se mencionaron en la descripcin de la va alternativa (fig. 2-32), pero se consideran de nuevo aqu porque tambin son importantes reguladores de la convertasa de la va clsica (fig. 2-43, segunda y tercera filas). Los mecanismos pueden dividirse en tres categoras. La primera cataliza la divisin de cualquier C3b o C4b que une a clulas hospedadoras hacia productos inactivos. La enzima reguladora del complemento responsable es la proteasa de serina plasmtica factor I; circula en forma activa pero slo puede dividir C3b y C4b cuando estn unidos a una protena cofactor de membrana. En tales circunstancias, el factor I divide C3b, primero hacia iC3b y luego ms hacia C3dg, lo que causa inactivacin de manera permanente. C4b se inactiva de modo similar mediante divisin hacia C4c y C4d. Hay dos protenas de membrana celular que se unen a C3b y C4b, y poseen actividad de cofactor para el factor I; estas son MCP y CR1 (seccin 2-17). Las paredes de clulas microbianas carecen de estas protenas protectoras y no pueden promover la desintegracin de C3b y C4b. En lugar de eso, tales protenas actan como sitios de unin para factor B y C2, y promueven la activacin del complemento. La importancia del factor I se observa en personas con deficiencia de factor I, determinada por mecanismos genticos. A causa de la activacin incontrolada de complemento, las protenas del mismo se agotan con rapidez, y esas personas sufren infecciones bacterianas repetidas, en especial por bacterias pigenas ubicuas. Tambin hay protenas plasmticas con actividad de cofactor para el factor I. C4b es unido por un cofactor conocido como protena de unin a C4b (C4BP), la cual acta de manera principal como un regulador de la va clsica en la fase lquida. C3b se une en membranas celulares por protenas cofactor como DAF y MCP. Estas molculas reguladoras compiten con eficacia con el factor B por unin a C3b unido a clulas. Si el factor B gana como tpicamente sucede sobre la ,

Edema angioneurtico hereditario

Deciencia de factor I

80

Captulo 2: Inmunidad innata

Fig. 2-43. La activacin del complemento es regulada por una serie de protenas que sirven para proteger a las clulas hospedadoras contra dao accidental. stas actan en diferentes etapas de la cascada del complemento y disocian complejos o catalizan la degradacin enzimtica de protenas del complemento unidas de manera covalente. Las etapas de la cascada del complemento se muestran esquemticamente en el lado izquierdo de la figura y las reacciones reguladoras en el derecho. La convertasa de C3 de la va alternativa es regulada de manera similar por DAF, CR1, MCP y factor H.

Etapas en las cuales la actividad del complemento est regulada La unin de C1q a complejos de antgeno: anticuerpo activa a C1r y C1s El inhibidor de C1 (C1INH) disocia C1r y C1s desde el complejo de C1 activo

C1q C1INH C1r C1s C1r

C1s

microbio

C4b2a es la convertasa C3 activa, que divide C3 hacia C3a y C3b

DAF, C4BP y CR1 desplazan a C2a desde el complejo de C4b2a. C4b unido por C4BP, MCP o CR1 es dividido mediante una proteasa I soluble para desactivar formas C4d y C4c

C3 C2a C3a I C4b C4b2a C3b C3b C4b C4BP DAF I CR1 I C4d MCP C4c

Las convertasas C5 dividen C5 hacia C5a y C5b

CR1 y H desplazan a C3b. CR1 y H actan como cofactores en la divisin de C3b por I

C5

C5a

C5b

I H

C4b2a3b

C3b2Bb

C4b2a

CR1

iC3b

iC3b

Los componentes terminales del complemento forman un poro en la membrana, el complejo de ataque de membrana

CD59 evita el ensamble nal del complejo de ataque de membrana en la etapa C8 a C9

C9 C5b C6 CD59

C8

C7

C9 C5b678

El sistema de complemento y la inmunidad innata

81

superficie de un patgeno, se forma ms C3bBb convertasa C3 y la activacin del complemento se amplifica. Si DAF y MCP ganan, como ocurre sobre las clulas del hospedador, el factor I cataboliza el C3b unido hacia iC3b y C3dg, y la activacin del complemento se inhibe. El equilibrio crtico entre la inhibicin y la activacin del complemento sobre las superficies celulares se observa en individuos heterocigotos para mutaciones en las protenas reguladoras MCP, factor I o factor H. En esos individuos la concentracin de protenas reguladoras funcionales est reducida, y la inclinacin de la balanza hacia la activacin del complemento conduce a predisposicin de sndrome hemoltico-urmico, una enfermedad que se caracteriza por dao de plaquetas y eritrocitos, e inflamacin de los riones, como resultado del control ineficaz de la activacin del complemento. La competencia entre DAF o MCP y factor B por unin a C3b unido a la superficie es un ejemplo del segundo mecanismo para inhibir la activacin del complemento sobre clulas hospedadoras. Varias protenas inhiben de manera competitiva la unin de C2 a C4b unido a clulas, y de factor B a C3b unido a clulas, lo que inhibe la formacin de convertasa. Tales protenas se unen a C3b y C4b sobre la superficie celular, y median tambin proteccin contra complemento a travs de un tercer mecanismo, que es aumentar la disociacin de C4b2a y convertasas C3bBb que ya se han formado. Las molculas de membrana de la clula hospedadora que regulan el complemento por medio de estos dos mecanismos comprenden DAF y CR1, que promueven la disociacin de convertasa adems de su actividad de cofactor. Todas las protenas que se unen a las molculas C4b y C3b homlogas comparten una o ms copias de un elemento estructural llamado la repeticin de consenso corto (SCR), repeticin de protena de control de complemento (CCP), o dominio sushi (en especial en Japn). Adems de los mecanismos para prevenir la formacin de convertasa C3 y el depsito de C4 y C3 sobre membranas celulares, tambin hay mecanismos inhibidores que evitan la insercin inapropiada de complejo de ataque de membrana hacia membranas. En la seccin 2-21 se mencion que el complejo de ataque de membrana se polimeriza sobre molculas de C5b creadas por la accin de la convertasa C5. Este complejo se inserta principalmente en membranas celulares adyacentes al sitio de la convertasa C5; o sea, cerca del sitio de activacin de complemento sobre un patgeno. De cualquier modo, algunos complejos de ataque de membrana recin formados se pueden difundir desde el sitio de activacin del complemento e insertarse en membranas de clulas hospedadoras adyacentes. Varias protenas plasmticas, entre las que destacan la vitronectina, tambin conocida como protena S, se unen al complejo C5b67 e inhiben su insercin al azar hacia membranas celulares. Las membranas de clulas hospedadoras tambin contienen una protena intrnseca, CD59 o protectina, que inhibe la unin de C9 al complejo C5b678 (fig. 2-43, fila inferior). CD59 y DAF estn enlazados a la superficie celular mediante una cola de glucosilfosfatidilinositol (GPI), como muchas otras protenas de membrana perifricas. Una de las enzimas comprendidas en la sntesis de colas de GPI se codifica en el cromosoma X. En personas con una mutacin somtica en este gen en una clona de clulas hematopoyticas, tanto CD59 como DAF no funcionan. Esto causa la enfermedad hemoglobinuria paroxstica nocturna, que se caracteriza por episodios de lisis intravascular de eritrocitos por complemento. Los eritrocitos que slo carecen de CD59 tambin son susceptibles a destruccin como resultado de activacin espontnea de la cascada del complemento.

Resumen
El sistema de complemento es uno de los principales mecanismos mediante los cuales el reconocimiento de patgenos se convierte en una defensa eficaz del hospedador contra la infeccin inicial. El complemento es un sistema de protenas plasmticas que pueden activarse de modo directo por patgenos, o indirecto por anticuerpos unidos a patgeno, lo que causa una cascada de reacciones que ocurre sobre la superficie de los patgenos y genera componentes activos con diversas funciones efectoras. Hay tres vas de activacin del complemento: la va

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Captulo 2: Inmunidad innata

clsica, que se desencadena en forma directa por patgenos o de manera indirecta por unin de anticuerpo a la superficie del patgeno; la va de la lectina, y la va alternativa, que tambin proporciona un lazo de amplificacin para las otras dos vas. Las tres vas pueden iniciarse en forma independiente de anticuerpos como parte de la inmunidad innata. Los fenmenos tempranos en todas las vas constan de una secuencia de reacciones de divisin en las cuales el producto de divisin de mayor tamao se une de manera covalente a la superficie del patgeno y contribuye a la activacin del siguiente componente. Las vas convergen con la formacin de una enzima convertasa C3, que divide a C3 para producir el componente activo del complemento C3b. La unin de grandes nmeros de molculas de C3b al patgeno es el evento fundamental en la activacin del complemento. Los componentes de complemento unidos, en especial C3b unido y sus fragmentos inactivos, son reconocidos por receptores de complemento especficos sobre clulas fagocticas, que fagocitan patgenos opsonizados por C3b y sus fragmentos inactivos. Los fragmentos de divisin pequeos de C3, C4 y en especial C5, reclutan fagocitos hacia sitios de infeccin y los activan al unirse a receptores acoplados a protena G trimricos especficos. Juntas, estas actividades promueven la captacin y destruccin de patgenos por fagocitos. Las molculas de C3b que se unen a la convertasa C3 inician los eventos tardos, al unirse a C5 para hacerlo susceptible a divisin por C2a o Bb. El fragmento C5b de mayor tamao desencadena el montaje de un complejo de ataque de membrana, que puede originar lisis de ciertos patgenos. La actividad de componentes del complemento est regulada por un sistema de protenas reguladoras que evitan dao de tejidos como resultado de unin inadvertida de componentes del complemento activados a clulas hospedadoras, o de activacin espontnea de componentes del complemento en el plasma.

Respuestas innatas inducidas a la infeccin


En la parte final de este captulo se describen las respuestas inducidas de la inmunidad innata. stas dependen de las citocinas y quimiocinas que se producen en respuesta al reconocimiento de patgeno, y son las primeras que se presentarn. Las quimiocinas son una familia grande de molculas quimioatrayentes con una funcin fundamental en la migracin de leucocitos. Asimismo, las molculas de adhesin tienen una funcin fundamental en este proceso, y se consideran tambin en forma breve. Despus se revisa con mayor detalle el modo en que las quimiocinas y las citocinas derivadas de macrfago promueven la respuesta fagoctica por medio del reclutamiento y produccin de fagocitos frescos, y la produccin de molculas opsonizantes adicionales por medio de las reacciones de fase aguda. Asimismo, se aborda la funcin de las citocinas conocidas como interferones, que se inducen por infeccin vrica, y una clase de clulas linfoides, conocidas como linfocitos citolticos (NK), que son activados por interferones para contribuir a la respuesta innata del hospedador contra virus y otros patgenos intracelulares. Tambin se comentan los linfocitos similares a los del sistema inmunitario innato (ILL), que contribuyen a respuestas rpidas a infeccin al actuar en etapas tempranas pero utilizan un grupo limitado de segmentos de gen que codifica para receptor de antgeno (seccin 1-11) para sintetizar inmunoglobulinas y receptores de clula T. Las respuestas innatas inducidas pueden eliminar con xito la infeccin o contenerla mientras se desarrolla una respuesta adaptativa. La inmunidad adaptativa aprovecha muchos de los mismos mecanismos efectores que utiliza el sistema inmunitario innato, pero la inmunidad adaptativa puede dirigirlos con mucha mayor precisin. De esta manera, las clulas T especficas para antgeno activan las propiedades microbicidas y secretoras de citocina de macrfagos que albergan a patgenos, los anticuerpos activan complemento, actan como opsoninas directas para fagocitos, y estimulan a los linfocitos citolticos para que destruyan clulas infectadas. Adems, la respuesta inmunitaria adaptativa utiliza citocinas y quimiocinas de forma similar a la de la

Respuestas innatas inducidas a la infeccin

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inmunidad innata para inducir respuestas inflamatorias que promueven el flujo de anticuerpos y linfocitos efectores hacia sitios de infeccin. Los mecanismos efectores descritos aqu son tiles para la comprensin de los captulos subsiguientes que se enfocan en la inmunidad adaptativa.

2-23

Los macrfagos activados secretan una gama de citocinas que tienen diversos efectos locales y a distancia

Las citocinas (Apndice III) son protenas pequeas (alrededor de 25 kDa) liberadas por diversas clulas en el cuerpo, por lo general en respuesta a un estmulo activador, e inducen respuestas mediante la unin a receptores especficos. Pueden actuar de manera autocrina, afectando la conducta de las clulas que libera la citocina; de forma paracrina, al afectar la conducta de clulas adyacentes, y algunas citocinas son suficientemente estables como para actuar de una manera endocrina, afectando la conducta de clulas distantes, aunque esto depende de su capacidad para entrar a la circulacin, y de su vida media en la sangre. Las citocinas secretadas por macrfagos en respuesta a patgenos son un grupo diverso de molculas desde el punto de vista estructural que incluye interleucina-1 (IL-1), IL-6, IL-12, TNF-, y la quimiocina CXCL8 (antes conocida como IL-8). El nombre interleucina (IL) seguido por un nmero (p. ej., IL-1, IL-2) se estableci en un intento por crear una nomenclatura estandarizada para molculas secretadas por leucocitos, y que actan sobre los mismos. Aun as, esto caus confusin cuando se descubri un nmero siempre creciente de citocinas con diversos orgenes, estructuras y efectos, y aunque todava se usa la designacin IL, se espera que finalmente se establezca una nomenclatura basada en la estructura de la citocina. En el Apndice III se listan las citocinas por orden alfabtico, junto con sus receptores. Hay dos familias estructurales importantes de citocinas: la familia de la hematopoyetina, que incluye hormonas de crecimiento y muchas interleucinas con funciones en la inmunidad tanto adaptativa como innata, y la familia del TNF, de la cual el prototipo es el TNF-, que funciona en las inmunidades innata y adaptativa e incluye muchos miembros unidos a membrana. De las interleucinas derivadas de macrfago, IL-6 pertenece a la familia grande de hematopoyetinas, el TNF- forma parte de la familia del TNF, y la IL-1 e IL-12 son distintas desde el punto de vista estructural. Todas tienen efectos locales y sistmicos importantes que contribuyen a ambas inmunidades y se resumen en la figura 2-44. El reconocimiento de diferentes clases de patgenos por fagocitos y clulas dendrticas puede comprender sealizacin por medio de diferentes receptores, como los diferentes TLR, y causar cierta variacin de las citocinas inducidas. De esta forma pueden activarse de manera selectiva las respuestas apropiadas conforme las citocinas liberadas organizan la siguiente fase de la defensa del hospedador. Se revisa tambin la forma en que el TNF-, que se desencadena por patgenos que portan LPS, tiene importancia particular en la contencin de infeccin por estos agentes, y cmo la liberacin de diferentes quimiocinas puede reclutar y activar diferentes tipos de clulas efectoras.

2-24

Las quimiocinas liberadas por fagocitos y clulas dendrticas reclutan clulas hacia sitios de infeccin

Entre las citocinas liberadas por tejidos durante las fases ms tempranas de infeccin se encuentran miembros de una familia de citocinas quimioatrayentes conocidas como quimiocinas (listadas por separado en el apndice IV). Tales protenas pequeas inducen quimiotaxis dirigida en clulas con capacidad de respuesta cercanas, y se descubrieron slo en fecha relativamente reciente. Dado que se detectaron por vez primera en valoraciones de citocina, inicialmente se denominaron interleucinas: la interleucina-8 (ahora conocida como CXCL8) fue la primera quimiocina que se clon y caracteriz, y an es tpica de esta familia. Todas

84

Captulo 2: Inmunidad innata

Los macrfagos activados secretan una gama de citocinas

IL-1

TNF-

IL-6 Efectos locales

CXCL8

IL-12

Activa el endotelio vascular Activa linfocitos Destruccin local de tejido Aumenta el acceso de clulas efectoras

Activa el endotelio vascular y aumenta la permeabilidad vascular, lo que lleva al aumento de la entrada de IgG, complemento, y clulas a tejidos, y a aumento del drenaje de lquido hacia ganglios linfticos Efectos sistmicos

Activacin de linfocito Aumento de la produccin de anticuerpos

El factor quimiotctico recluta neutrlos, baslos y clulas T hacia el sitio de infeccin

Activa linfocitos citolticos Induce la diferenciacin de clulas T CD4 hacia clulas TH1

Fiebre Produccin de IL-6

Fiebre Movilizacin de metabolitos Choque

Fiebre Induce produccin de protena de fase aguda

Fig. 2-44. Las citocinas importantes secretadas por macrfagos en respuesta a productos bacterianos son IL-1, IL-6, CXCL8, IL-12 y TNF-. El TNF- es un inductor de una respuesta inflamatoria local que ayuda a contener infecciones. Tambin tiene efectos sistmicos, muchos de los cuales son perjudiciales (seccin 2-27). La quimiocina CXCL8 tambin participa en la respuesta inflamatoria local; ayuda a atraer neutrfilos hacia el sitio de infeccin. La IL-1, la IL-6 y el TNF- tienen una funcin crucial en la induccin de la respuesta de fase aguda en el hgado (seccin 2-28) e inducen fiebre, que favorece la defensa eficaz del hospedador de diversos modos. La IL-12 activa a los linfocitos citolticos (NK) y favorece la diferenciacin de clulas T CD4 en el subgrupo TH1 en la inmunidad adaptativa.

Sndromes hereditarios de ebre peridica

las quimiocinas se relacionan en la secuencia de aminocidos, y sus receptores son protenas con siete dominios transmembrana que emiten seales por medio de protenas G acopladas. Todava no se ha determinado la estructura atmica de un receptor de quimiocina, pero es similar a otros receptores acoplados a protena con siete dominios transmembrana, como rodopsina (fig. 2-45) y el receptor de acetilcolina muscarnico. Las quimiocinas funcionan principalmente como quimioatrayentes para leucocitos; reclutan monocitos, neutrfilos y otras clulas efectoras a partir de la sangre hacia sitios de infeccin. Pueden ser liberadas por muchos tipos diferentes de clulas, y sirven para guiar clulas comprendidas en la inmunidad innata hacia sitios de infeccin. Tambin guan a los linfocitos en la inmunidad adaptativa (caps. 8 a 10). Algunas quimiocinas tambin funcionan en el desarrollo y la migracin de linfocitos, y en la angiognesis (crecimiento de vasos sanguneos nuevos). Las propiedades de diversas quimiocinas se listan en la figura 2-46 (vase tambin el Apndice IV). Es notorio que haya tantas quimiocinas; esto tal vez refleje su importancia para llevar clulas a su localizacin correcta, como parece ser el caso para los linfocitos. Los miembros de la familia de las quimiocinas caen en su mayor parte en dos grupos amplios: quimiocinas CC con dos cistenas adyacentes cerca del amino terminal, y quimiocinas CXC, en las cuales los dos residuos de cistena equivalentes estn separados por un aminocido nico. Los dos grupos de quimiocinas actan sobre grupos diferentes de receptores. Las quimiocinas CC se unen a receptores de quimiocina CC, de los cuales hay nueve, designados CCR1-9. Las quimiocinas CXC se unen a receptores de CXC; hay seis de stos, CXCR1-6. Tales receptores se expresan sobre diferentes tipos de clula, que en consecuencia son atradas por diferentes quimiocinas. En general, las quimiocinas CXC con un motivo tripptido Glu-Leu-Arg inmediatamente antes de la primera cistena promueven la migracin de neutrfilos. CXCL8 es un ejemplo de este tipo de quimiocina. Otras quimiocinas CXC que carecen de este motivo, como la quimiocina de

Respuestas innatas inducidas a la infeccin

85

linfocitos B (CXCL13), guan linfocitos hacia su destino apropiado en las reas de clulas B del bazo, ganglios linfticos e intestino. Las quimiocinas CC promueven la migracin de monocitos, linfocitos, u otros tipos de clulas. Un ejemplo es la protena quimioatrayente de macrfago-1 (CCL2). CXCL8 y CCL2 tienen funciones similares, aunque complementarias: CXCL8, induce a los neutrfilos para que abandonen el torrente sanguneo y migren hacia los tejidos circundantes; en cambio, CCL2 acta sobre monocitos, e induce su migracin desde el torrente sanguneo para que se conviertan en macrfagos hsticos. Otras quimiocinas CC, como CCL5 pueden promover la infiltracin hacia tejidos de una gama de leucocitos, incluso clulas T efectoras (seccin 10-6); quimiocinas individuales actan sobre diferentes subgrupos de clulas. La nica quimiocina conocida con slo una cistena (XCL1) originalmente se denomin linfotactina; se cree que atrae precursores de clulas T hacia el timo al unirse a XCR1. La quimiocina fractalquina es poco comn en varios aspectos: tiene tres residuos de aminocido entre las dos cistenas, lo que hace de ella una quimiocina CX3CL. Es ms extraordinario que existe en dos formas, una fija a la membrana de las clulas endoteliales y epiteliales que la expresan, donde sirve como una protena de adhesin, y una forma soluble liberada a partir de la superficie celular, que acta, como otras quimiocinas, como un quimioatrayente. Las quimiocinas como CXCL8 y CCL2 tienen dos funciones en el reclutamiento de clulas. En primer lugar, actan sobre el leucocito a medida que rueda a lo largo de clulas endoteliales en sitios de inflamacin, y convierten este rodamiento en unin estable al desencadenar un cambio de conformacin de las molculas de adhesin conocidas como integrinas de leucocitos. Esto permite que el leucocito cruce la pared del vaso sanguneo al deslizarse entre las clulas endoteliales, como se muestra en la descripcin del proceso de extravasacin. En segundo lugar, la quimiocina dirige la migracin del leucocito a lo largo de un gradiente de molculas de quimiocina unidas a la matriz extracelular y las superficies de clulas endoteliales. Este gradiente incrementa en concentracin hacia el sitio de infeccin. Las quimiocinas pueden producirse mediante una amplia variedad de tipos celulares en respuesta a productos bacterianos, virus y agentes que causan dao fsico, como slice, alumbre, y los cristales de urato que ocurren en la gota. De esta manera, la infeccin o el dao fsico de tejidos pone en marcha la produccin de gradientes de quimiocina que pueden dirigir a los fagocitos hacia los sitios donde se necesitan. Adems, las bacterias sintetizan pptidos que actan como quimioatrayentes para neutrfilos. El pptido fMLP producido por bacterias es un factor potente quimiotctico para clulas inflamatorias, en especial neutrfilos (seccin 2-6). El receptor fMLP tambin es un receptor acoplado a protena G, como los receptores para quimiocinas y para los fragmentos del complemento C5a, C3a y C4a. De este modo, hay un mecanismo comn para atraer neutrfilos, sea por fragmentos del complemento, quimiocinas o pptidos bacterianos. Los neutrfilos son las primeras clulas que llegan en grandes nmeros a un sitio de infeccin; los monocitos y las clulas dendrticas inmaduras se reclutan ms tarde. El pptido del complemento C5a y las quimiocinas CXCL8 y CCL2 tambin activan sus clulas blanco respectivas, de manera que no slo se llevan neutrfilos y macrfagos hacia sitios potenciales de infeccin sino que, en el proceso, son armados para que afronten cualquier patgeno que puedan encontrar ah. En particular, los neutrfilos expuestos a CXCL8 y la citocina TNF- son activados para producir la explosin respiratoria que genera radicales de oxgeno y xido ntrico, y para liberar su contenido lisosmico almacenado, lo que contribuye tanto a la defensa del hospedador como a la destruccin de tejido y la formacin de pus que se observan en sitios locales, en especial los infectados por bacterias pigenas. Las quimiocinas no actan solas en el reclutamiento de clulas. Tambin requieren la accin de mediadores vasoactivos para acercar a los leucocitos al endotelio del vaso sanguneo (seccin 2-5), y citocinas como el TNF- para inducir a las molculas de adhesin necesarias sobre las clulas endoteliales. En otros captulos se revisan nuevamente las quimiocinas, cuando se comentan en el con-

Fig. 2-45. Las quimiocinas son una familia de protenas de estructuras similares que se unen a receptores de quimiocina y que forman parte de una extensa familia de receptores acoplados a protena G. Las quimiocinas estn representadas aqu por CXCL8 (estructura superior). Los receptores de stas son miembros de la familia de receptores de siete dominios transmembrana, que tambin incluyen a la protena fotorreceptora rodopsina y muchos otros receptores. Tienen siete hlices transmembrana, y toda la familia interacta con protenas G. La primera estructura resuelta de una protena de siete dominios transmembrana fue la protena bacteriana bacteriorrodopsina; se describe aqu (estructura inferior), mostrando la orientacin de las siete hlices transmembrana (de color azul) con el ligando unido (en este caso retinal) en color rojo. En esencia todas estas estructuras estn embebidas dentro de la membrana celular. Los cilindros representan hlices y las flechas cadenas .

86

Captulo 2: Inmunidad innata

texto de la respuesta inmunitaria adaptativa. A continuacin se revisan las molculas que median la adhesin de leucocitos al endotelio, y despus se describe el proceso de extravasacin de leucocitos paso por paso, como se ha mostrado tanto para neutrfilos como para monocitos.

Fig. 2-46. Propiedades de quimiocinas seleccionadas. Las quimiocinas se clasifican principalmente en dos grupos relacionados pero distintos. Las quimiocinas CXC, cuyos genes se encuentran principalmente en una agrupacin en el cromosoma 17 en los seres humanos, tienen un residuo aminocido (X) entre dos cistenas invariables (C) en la regin amino terminal. Las quimiocinas CC, que en los seres humanos se codifican en su mayor parte en una regin del cromosoma 4, tienen estas dos cistenas invariables adyacentes. Dichas clases pueden subdividirse por la presencia o por la ausencia de un triplete de aminocidos (ELR: cido glutmicoleucina-arginina) que precede a la primera de estas cistenas invariables. Todas las quimiocinas que atraen neutrfilos tienen este motivo, mientras que casi todas las otras quimiocinas CXC, incluso las que interactan con receptores CXCR3, 4 y 5 carecen de l. Una quimiocina C con slo una cistena en esta localizacin, y la fractalquina (una quimiocina CX3C), se codifican en otro lugar del genoma. Cada quimiocina interacta con uno o ms receptores y afecta uno o ms tipos de clulas. En el Apndice IV se presenta una lista completa de las quimiocinas y sus receptores.

Clase

Quimiocina

Producidos por Receptores Clulas atradas


Monocitos Macrfagos Fibroblastos Queratinocitos Clulas endoteliales Plaquetas

Efectos principales
Moviliza, activa y desgranula neutrlos Angiognesis

CXCL8 (IL-8)

CXCR1 CXCR2

Neutrlos Clulas T indiferenciadas

CXCL7 (PBP, -TG NAP-2) CXCL1 (GRO) CXCL2 (GRO) CXCL3 (GRO)

CXCR2

Neutrlos

Activa neutrlos Resorcin de cogulo Angiognesis Activa neutrlos Fibroplasia Angiognesis

CXC

Monocitos Fibroblastos Endotelio Queratinocitos Monocitos Clulas T Fibroblastos Endotelio

CXCR2

Neutrlos Clulas T indiferenciadas Fibroblastos Clulas T en reposo Linfocitos citolticos Monocitos


Clulas T indiferenciadas Progenitor Clulas B progenitoras (CD34+)

CXCL10 (IP-10)

CXCR3

Inmunoestimulante Antiangiognico Promueve inmunidad TH1 Desarrollo de clulas B Seal de direccin de linfocito Compite con el VIH-1 Seal de direccin de linfocito Compite con el VIH-1 Defensa antivrica Promueve la inmunidad TH1

CXCL12 (SDF-1)

Clulas del estroma Clulas del estroma Monocitos Clulas T Clulas cebadas Fibroblastos Monocitos Macrfagos Neutrlos Endotelio Monocitos Macrfagos Fibroblastos Queratinocitos

CXCR4

CXCL13 (BLC)

CXCR5

Clulas B Monocitos Linfocitos citolticos y clulas T Baslos Clulas dendrticas Monocitos Linfocitos citolticos y clulas T Clulas dendrticas Monocitos Linfocitos citolticos y clulas T Baslos Clulas dendrticas Monocitos Linfocitos citolticos y clulas T Baslos Eosinlos Clulas dendrticas Eosinlos Monocitos Clulas T

CCL3 (MIP-1)

CCR1, 3, 5

CCL4 (MIP-1)

CCR1, 3, 5

Compite con el VIH-1

CC

CCL2 (MCP-1)

CCR2B

Activa macrfagos Liberacin de histamina de baslo Promueve la inmunidad TH2 Desgranula baslos Activa clulas T Inamacin crnica

CCL5 (RANTES)

Clulas T Endotelio Plaquetas

CCR1, 3, 5

CCL11 (eotaxina)

Endotelio Monocitos Epitelio Clulas T Clulas dendrticas CD8 > CD4 Clulas T Monocitos Endotelio Clulas de la microglia

CCR3

Participacin en la alergia Participacin en la activacin de clulas T indiferenciadas Trco y desarrollo de linfocitos Adhesin entre leucocito y endotelio Inamacin del cerebro

CCL18 (DC-CK)

Clulas T indiferenciadas Timocitos Clulas dendrticas Linfocitos citolticos Monocitos Clulas T

XCL1 (linfotactina)

CXCR1

CXXXC (CX3C)

CX3CL1 (fractalquina)

CX3CR1

Respuestas innatas inducidas a la infeccin

87

2-25

Las molculas de adhesin celular controlan interacciones entre leucocitos y clulas endoteliales durante una respuesta inamatoria

El reclutamiento de fagocitos activados hacia sitios de infeccin es una de las funciones de mayor importancia de la inmunidad innata. El reclutamiento ocurre como parte de la respuesta inflamatoria, y est mediado por molculas de adhesin celular que son inducidas sobre la superficie del endotelio del vaso sanguneo local. Antes de considerar el proceso de reclutamiento de clulas inflamatorias, se describen algunas de las molculas de adhesin celular comprendidas. Al igual que con los componentes del complemento, una barrera importante para comprender las molculas de adhesin celular es su nomenclatura. Casi todas estas molculas, en especial las que estn sobre leucocitos, que son relativamente fciles de analizar desde el punto de vista funcional, se nombraron por los efectos de anticuerpos monoclonales especficos dirigidos contra ellas; slo ms tarde stas se caracterizaron mediante clonacin de gen. Por ende, su nombre no guarda relacin con su estructura. Por ejemplo, los antgenos leucocticos funcionales LFA-1, LFA-2 y LFA-3 en realidad son miembros de dos familias de protenas diferentes. En la figura 2-47, las molculas de adhesin se agrupan de acuerdo con su estructura molecular, que se muestra en forma esquemtica, al lado de sus diferentes nombres, sitios de expresin y ligandos. Para el reclutamiento de leucocito son importantes tres familias de molculas de adhesin. Las selectinas son glucoprotenas de membrana con un dominio parecido a lectina distal que se une a grupos de carbohidratos especficos. Los miembros de esta familia son inducidos sobre epitelio activado e inician interacciones entre el endotelio y los leucocitos mediante la unin a ligandos oligosacridos fucosilados sobre leucocitos que van pasando (fig. 2-47). El siguiente paso en el reclutamiento de leucocitos depende de adhesin ms estrecha, que se debe a la unin de molculas de adhesin intercelular (ICAM) sobre el endotelio a protenas heterodimricas de la familia de la integrina sobre leucocitos.
Nombre Distribucin en el tejido
Endotelio y plaquetas activados

Ligando

Selectinas
Se unen a carbohidratos. Inician la interaccin entre leucocito y endotelio

P-selectina

P-selectina (PADGEM, CD62P)

PSGL-1, sialil-LewisX

E-selectina (ELAM-1, CD62E)

Endotelio activado

Sialil-LewisX

Integrinas
LFA-1 Se unen a molculas de adhesin celular y matriz extracelular Adherencia fuerte

L:2 (LFA-1, CD11a:CD18)

Monocitos, clulas T, macrfagos, neutrlos, clulas dendrticas Neutrlos, monocitos, macrfagos Clulas dendrticas, macrfagos, neutrlos Monocitos, macrfagos Endotelio activado Endotelio en reposo, clulas dendrticas Endotelio activado Leucocitos activados, uniones de una clula endotelial a otra

ICAM

M:2 (CR3, Mac-1, CD11b:CD18) X:2 (CR4, p150.95, CD11c:CD18) 5:1 (VLA-5, CD49d:CD29)

ICAM-1, iC3b, bringeno iC3b Fibronectina

Superfamilia de inmunoglobulina
ICAM-1 Diversas funciones en la adherencia celular Ligando para integrinas

ICAM-1 (CD54)

LFA-1, Mac1 LFA-1

ICAM-2 (CD102) VCAM-1 (CD106)

VLA-4

PECAM (CD31)

CD31

Fig. 2-47. Molculas de adhesin involucradas en interacciones leucocitarias. Varias familias estructurales de molculas de adhesin tienen cierta funcin en la migracin, en la direccin y en las interacciones clula-clula linfocitarias: las selectinas, las integrinas y las protenas de la superfamilia de inmunoglobulinas. En la figura se muestran representaciones esquemticas de un ejemplo de cada familia, una lista de otros miembros de la misma que participan en interacciones con leucocitos, su distribucin celular y su ligando en interacciones adhesivas. Los miembros de la familia mostrados aqu se limitan a los que participan en los procesos inflamatorios y en otros mecanismos inmunitarios innatos. Las mismas molculas y otras participan en la inmunidad adaptativa y se revisan en los captulos 8 y 10. La nomenclatura de las diferentes molculas pertenecientes a estas familias es desorientadora porque a menudo refleja la manera en la cual las molculas se identificaron por vez primera, ms que sus caractersticas estructurales relacionadas. Los nombres alternativos de cada una de las molculas de adhesin estn entre parntesis. El azcar sialil-LewisX sulfatado, que es reconocido por la P-selectina y por la E-selectina, es un oligosacrido presente en las glucoprotenas de superficie celular de leucocitos circulantes. La sulfatacin puede ocurrir en el sexto tomo de carbono de la galactosa o en la N-acetilglucosamina, mas no en ambos.

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Captulo 2: Inmunidad innata

CR3 (M:2)

Neutrlo
LFA-1 (L:2)

ICAM-1

Endotelio

ICAM-2

Fig. 2-48. La adhesin de fagocitos al endotelio vascular est mediada por integrinas. Cuando el endotelio vascular se activa por mediadores inflamatorios expresa dos molculas de adhesin, a saber ICAM-1 e ICAM-2. Estos son ligandos para integrinas expresadas por fagocitos, M:2 (tambin llamada CR3, Mac-1 o CD11b:CD18) y L2 (tambin llamada LFA-1 o CD11a:CD18).

Deciencia de adhesin de leucocitos

Las integrinas de leucocitos importantes para la extravasacin son el LFA-1 (L :2, tambin conocido como CD11a:CD18) y CR3 (M:2, receptor del complemento tipo 3, tambin conocido como CD11b:CD18 o Mac-1; CR3 se mencion en la seccin 2-19 como un receptor para iC3b, pero ese es slo uno de los ligandos para esta integrina) y ambos se unen a ICAM-1 y a ICAM-2 (fig. 2-48). La induccin de ICAM-1 sobre el endotelio inflamado y la activacin de un cambio conformacional en LFA-1 y CR3 que ocurre en respuesta a la unin a quimiocinas por el leucocito, promueven una fuerte adhesin entre leucocitos y clulas endoteliales. La importancia de las integrinas del leucocito en el reclutamiento de clulas inflamatorias se ilustra por la enfermedad deficiencia de adhesin de leucocitos, que se deriva de un defecto en la cadena 2 comn a LFA-1 y a CR3. Quienes padecen esta enfermedad sufren infecciones bacterianas recurrentes y alteracin de la cicatrizacin de heridas. La activacin del endotelio es impulsada por interacciones con citocinas de macrfago, en particular el TNF-, que induce la externalizacin rpida de grnulos llamados cuerpos de Weibel-Palade en las clulas endoteliales. Estos grnulos contienen P-selectina preformada que, as, se expresa en cuestin de minutos sobre la superficie de clulas endoteliales locales despus de la produccin de TNF- por macrfagos. Poco despus de la aparicin de P-selectina sobre la superficie celular, se sintetiza E-selectina que codifica para mRNA, y en el transcurso de 2 h las clulas endoteliales expresan principalmente E-selectina. Estas dos protenas interactan con el sialil-LewisX sulfatado que est presente sobre la superficie de neutrfilos. El endotelio en reposo porta concentraciones bajas de ICAM-2, al parecer en todos los lechos vasculares. Esto puede ser usado por los monocitos circulantes para navegar fuera de los vasos y hacia sus sitios en los tejidos. Dicha migracin de monocitos ocurre en forma continua y en esencia de manera ubicua. Con todo, al momento de la exposicin a TNF-, la expresin local de ICAM-1 est fuertemente inducida sobre el endotelio de vasos de pequeo calibre cerca del foco infeccioso o dentro del mismo. ICAM-1 a su vez se une a LFA-1 o CR3 sobre monocitos y leucocitos polimorfonucleares circulantes, en particular neutrfilos (fig. 2-48). Las molculas de adhesin celular tienen muchas otras funciones en el cuerpo, al dirigir muchos aspectos del desarrollo de tejidos y rganos. En esta breve descripcin slo se han considerado las que participan en el reclutamiento de clulas inflamatorias durante horas a das despus del establecimiento de una infeccin.

2-26

Los neutrlos constituyen la primera ola de clulas que cruzan la pared del vaso sanguneo para entrar a sitios inamatorios

Los cambios fsicos que surgen al inicio de la respuesta inflamatoria se describen en la seccin 2-5; aqu se describe paso a paso la forma en que las clulas efectoras necesarias se reclutan hacia sitios de infeccin. En circunstancias normales, los leucocitos fluyen en el centro de vasos sanguneos de pequeo calibre, donde el flujo de sangre es ms rpido. En sitios inflamatorios, los vasos se dilatan y el flujo sanguneo ms lento permite que los leucocitos salgan del centro del vaso e interacten con el endotelio vascular. Incluso en ausencia de infeccin, los monocitos migran de manera continua hacia los tejidos, donde se diferencian hacia macrfagos. Durante una respuesta inflamatoria, la induccin de molculas de adhesin sobre las clulas endoteliales por el foco de infeccin, as como cambios inducidos en las molculas de adhesin expresadas sobre leucocitos, reclutan grandes nmeros de leucocitos circulantes, al principio neutrfilos y ms tarde monocitos, hacia el sitio de una infeccin. Se cree que la migracin de leucocitos hacia afuera de vasos, un proceso conocido como extravasacin, ocurre en cuatro pasos. A continuacin se describe este proceso como ocurre para monocitos y neutrfilos (fig. 2-49). El primer paso comprende selectinas. La P-selectina aparece sobre superficies de clulas endoteliales en el transcurso de algunos minutos luego de la exposicin a leucotrieno B4, el fragmento C5a del complemento, o histamina, que se libera a partir de clulas cebadas en respuesta a C5a. La aparicin de P-selectina

Respuestas innatas inducidas a la infeccin

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La adhesin mediada por selectina a sialil-Lewisx de leucocitos es dbil, y permite que los leucocitos rueden a lo largo de la supercie endotelial vascular
Flujo sanguneo s-Lex

E-selectina

membrana basal

Adhesin por rodamiento

Unin estrecha

Diapdesis

Migracin

s-Lex E-selectina

CXCL8R (receptor de IL-8)

LFA-1(L:2) ICAM-1

CD31 quimiocina CXCL8 (IL-8)

tambin puede inducirse por la exposicin a TNF- o LPS, y estos dos tienen el efecto adicional de inducir la sntesis de una segunda selectina, la E-selectina, que aparece sobre la superficie de clulas endoteliales algunas horas ms tarde. Tales selectinas reconocen la porcin sialil-LewisX sulfatada de ciertas glucoprotenas de leucocitos que estn expuestas en los extremos de microvellosidades de leucocitos. La interaccin de la P-selectina y la E-selectina con estas glucoprotenas permite a los monocitos y neutrfilos adherirse de modo reversible a la pared del vaso, de manera que puede observarse que los leucocitos circulantes ruedan a lo largo del endotelio que se ha tratado con citocinas inflamatorias (fig. 2-49, panel superior). La interaccin de adhesin permite las interacciones ms fuertes del siguiente paso en la migracin del leucocito. El segundo paso depende de interacciones entre las integrinas de leucocitos, LFA-1 y CR3 con molculas sobre el endotelio, como ICAM-1, que tambin puede inducirse sobre clulas endoteliales por el TNF-, e ICAM-2 (fig. 2-49, panel inferior). El LFA-1 y CR3 en circunstancias normales slo se adhieren en forma dbil, pero CXCL8 u otras quimiocinas, unidas a proteoglucanos sobre la superficie de clulas endoteliales, se unen a receptores de quimiocina especficos sobre el leucocito, y emiten seales a la clula para desencadenar un cambio conformacional en LFA-1 y CR3 sobre los leucocitos que estn rodando, lo que aumenta mucho las propiedades de adhesin del neutrfilo. Como resultado de este gran incremento en la adhesin, el leucocito se fija con firmeza al endotelio, y cesa su rodamiento.

Fig. 2-49. Los neutrfilos abandonan la sangre y migran hacia sitios de infeccin en un proceso de mltiples pasos que involucra interacciones adhesivas reguladas por citocinas y quimiocinas derivadas de macrfagos. El primer paso (panel superior) implica la unin reversible de un neutrfilo al endotelio vascular por medio de interacciones entre selectinas inducidas sobre el endotelio y sus ligandos de carbohidrato sobre el neutrfilo, que se muestran aqu en el caso de la E-selectina y su ligando la porcin sialil-LewisX (s-Lex). Esta interaccin no puede fijar las clulas contra la fuerza de cizallamiento del flujo de sangre, y ruedan a lo largo del endotelio en forma continua haciendo contacto en forma intermitente. Sin embargo, la unin permite interacciones ms fuertes, que slo se producen cuando la unin de una quimiocina como CXCL8 a su receptor especfico sobre el neutrfilo desencadena la activacin de las integrinas LFA-1 y CR3 (Mac-1) (que no se muestran). Las citocinas inflamatorias como el TNF- tambin se necesitan para inducir la expresin de molculas de adhesin como ICAM-1 e ICAM-2, los ligandos para estas integrinas, sobre el endotelio vascular. La unin estrecha entre ICAM-1 y las integrinas suspende el rodamiento y permite que el neutrfilo se deslice entre las clulas endoteliales que forman la pared del vaso sanguneo (es decir, que sufra extravasacin). Las integrinas de leucocito LFA-1 y CR3 son necesarias para la extravasacin y para la migracin hacia quimioatrayentes. Asimismo, se cree que la adhesin entre molculas de CD31, expresadas tanto en el endotelio como en la unin de las clulas endoteliales, contribuye con la extravasacin. El neutrfilo tambin necesita atravesar la membrana basal; penetra en sta con la ayuda de una enzima metaloproteinasa de matriz que se expresa en la superficie celular. Finalmente, el neutrfilo migra con un gradiente de concentracin de quimiocinas (que se muestran aqu como CXCL8) secretadas por clulas ubicadas en el sitio de infeccin. La micrografa electrnica muestra un neutrfilo que se extravasa entre clulas endoteliales. La flecha de color azul indica el seudpodo que el neutrfilo inserta entre las clulas endoteliales. Fotografa ( 5 500) cortesa de I. Bird y J. Spragg.

90

Captulo 2: Inmunidad innata

En el tercer paso el leucocito muestra extravasacin, o cruza la pared endotelial. Este paso tambin comprende LFA-1 y CR3, as como una interaccin de adhesin adicional que comprende una molcula relacionada con inmunoglobulina llamada PECAM o CD31, que se expresa tanto sobre el leucocito como en las uniones intercelulares de clulas endoteliales. Estas interacciones permiten al fagocito deslizarse entre las clulas endoteliales. Despus penetra en la membrana basal con la ayuda de enzimas que desintegran las protenas de la matriz extracelular de dicha membrana. El movimiento a travs de la membrana basal se conoce como diapdesis, y permite a los fagocitos entrar a los tejidos subendoteliales. El cuarto y ltimo paso de la extravasacin es la migracin de leucocitos a travs de los tejidos bajo la influencia de quimiocinas. Las quimiocinas como CXCL8 y CCL2 (seccin 2-24) se producen en el sitio de infeccin y se unen a proteoglucanos en la matriz extracelular y sobre molculas similares en superficies de clulas endoteliales. Esto forma un gradiente de concentracin de quimiocina relacionado con la matriz sobre una superficie slida a lo largo de la cual el leucocito puede migrar hacia un foco de infeccin (fig. 2-49). CXCL8 es liberado por los macrfagos que encuentran primero a los patgenos y recluta neutrfilos, que entran al tejido infectado en grandes nmeros durante la primera parte de la respuesta inducida. Su flujo hacia adentro por lo general alcanza un mximo en el transcurso de las primeras 6 h de una respuesta inflamatoria, mientras que los monocitos pueden reclutarse ms tarde, por medio de la accin de quimiocinas como CCL2. Una vez en un sitio inflamatorio, los neutrfilos pueden eliminar muchos patgenos mediante fagocitosis. Actan como efectores fagocticos en una respuesta inmunitaria innata por medio de receptores que opsonizan o captan agentes infecciosos y sus componentes derivados por medio de reconocimiento inmunitario innato, as como al reconocer patgenos en forma directa. Adems, actan como efectores fagocticos en la inmunidad adaptativa humoral (cap. 9). La importancia de los neutrfilos se ilustra de manera notoria por enfermedades o tratamientos que reducen en forma importante las concentraciones de stos. Se dice que esos pacientes tienen neutropenia, y son muy susceptibles a infeccin letal, por una amplia gama de microorganismos patgenos y comensales. Restituir las concentraciones de neutrfilos en esos pacientes mediante transfusin de fracciones de sangre con alto contenido de neutrfilos, o al estimular su produccin con factores de crecimiento especficos, corrige en gran parte dicho trastorno.

2-27

TNF- es una citocina importante que evita la diseminacin local de infeccin pero su liberacin sistmica induce choque

Los mediadores inflamatorios tambin estimulan a las clulas endoteliales para que expresen protenas que desencadenan coagulacin de la sangre en vasos de pequeo calibre locales, lo cual los ocluye y, as, suspende el flujo de sangre. Esto puede tener importancia para evitar que el patgeno entre al torrente sanguneo y se disemine por medio de la sangre hacia rganos en todo el cuerpo. En lugar de esto, el lquido que se fug hacia el tejido durante las fases tempranas de una infeccin porta al patgeno (por lo general encerrado en clulas dendrticas) por medio de la linfa hacia los ganglios linfticos regionales, donde puede iniciarse una respuesta inmunitaria adaptativa. La importancia del TNF- en la contencin de infeccin local se muestra por experimentos en los cuales se infect en forma local a conejos con una bacteria. En circunstancias normales, la infeccin se habra contenido en el sitio de inoculacin, pero si tambin se administr una inyeccin de anticuerpos anti-TNF- para bloquear la accin del TNF-, la infeccin se disemina por medio de la sangre hacia otros rganos. Sin embargo, una vez que una infeccin se disemina hacia el torrente sanguneo, los mismos mecanismos mediante los cuales el TNF- contiene con tanta eficacia la infeccin local, se tornan desastrosos (fig. 2-50). La presencia de infeccin en el torrente sanguneo, o septicemia, se acompaa de liberacin de TNF- por macrfagos en hgado, bazo y otros sitios sistmicos. La liberacin de TNF- causa vasodi-

Respuestas innatas inducidas a la infeccin

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latacin, que lleva a disminucin de la presin arterial y aumento de la permeabilidad vascular, que conduce a reduccin del volumen plasmtico y finalmente choque. En el choque sptico, el TNF- tambin desencadena coagulacin intravascular diseminada (coagulacin de la sangre), que causa la generacin de cogulos en muchos vasos sanguneos y como consecuencia el consumo masivo de protenas de la coagulacin, lo que origina prdida de la capacidad del paciente para coagular sangre de modo apropiado. Dicho estado lleva a insuficiencia de rganos vitales, como riones, hgado, corazn y pulmones, que quedan alterados con rapidez por la falla del riego normal; as, el choque sptico genera mortalidad muy alta.

Infeccin local por bacterias gramnegativas Macrfagos activados para secretar TNF- en el tejido

Infeccin sistmica por bacterias gramnegativas (septicemias) Macrfagos activados en el hgado y el bazo secretan TNF- hacia el torrente sanguneo

Incremento de la liberacin de protenas plasmticas hacia el tejido. Migracin aumentada de fagocitos y linfocitos hacia el tejido. Incremento de la adhesin plaquetaria a la pared de vasos sanguneos

Edema sistmico que causa decremento del volumen sanguneo, hipoproteinemia y neutropenia, seguida por neutrolia. El decremento del volumen sanguneo causa colapso de vasos

Fagocitosis de bacterias. Oclusin de vaso local. Drenaje de plasma y clulas hacia ganglios linfticos locales

Coagulacin intravascular diseminada que lleva consumo e insuciencia de mltiples rganos

Fig. 2-50. La liberacin de TNF- por macrfagos induce efectos protectores locales, pero la liberacin sistmica de dicho factor puede ser perjudicial. Los paneles de la izquierda muestran las causas y las consecuencias de la liberacin local del TNF-, mientras que los paneles de la derecha exhiben las causas y los efectos de la liberacin sistmica. En ambos casos, el TNF- acta sobre los vasos sanguneos, en especial vnulas, para aumentar el flujo sanguneo y la permeabilidad vascular a lquido, protenas y clulas, y para incrementar la adhesividad endotelial de leucocitos y de plaquetas (paneles centrales). De este modo, la liberacin local permite el flujo de lquidos, de clulas y de protenas hacia el tejido infectado, donde participan en la defensa del hospedador. Ms tarde, se forman cogulos de sangre en los vasos de pequeo calibre (panel inferior izquierdo), lo que evita la diseminacin de la infeccin a travs de la sangre, y el lquido y las clulas acumulados drenan hacia ganglios linfticos regionales, donde se inicia una respuesta inmunitaria adaptativa. Cuando hay una infeccin sistmica, o septicemia, provocada por bacterias que desencadenan la produccin de TNF-, ste es liberado en la sangre por macrfagos localizados en el hgado y en el bazo, y acta de una manera similar sobre todos los vasos sanguneos de pequeo calibre (panel inferior derecho). El resultado es choque, coagulacin intravascular diseminada con agotamiento de factores de la coagulacin y sangrado consecuente, insuficiencia de mltiples rganos y a menudo la muerte.

Eliminacin de la infeccin Inmunidad adaptativa

Muerte

92

Captulo 2: Inmunidad innata

Fig. 2-51. Las citocinas TNF-, IL-1 e IL-6 tienen un amplio espectro de actividades biolgicas que ayudan a coordinar las respuestas del cuerpo a procesos infecciosos. La IL-1, la IL-6 y el TNF- activan a los hepatocitos para que sinteticen protenas de fase aguda y al endotelio de la mdula sea para que libere neutrfilos. Las protenas de fase aguda actan como opsoninas, mientras que la eliminacin de patgenos opsonizados aumenta por el reclutamiento incrementado de neutrfilos desde la mdula sea. La IL1, la IL-6 y el TNF- tambin son pirgenos endgenos que aumentan la temperatura corporal, que se cree ayuda a eliminar infecciones. Un efecto importante de tales citocinas es actuar sobre el hipotlamo, lo que altera la regulacin de la temperatura corporal, y sobre las clulas musculares y adiposas, que altera la movilizacin de energa para provocar hipertermia. A temperaturas ms altas, la replicacin bacteriana y la vrica son menos eficientes, mientras que la respuesta inmunitaria adaptativa opera con mayor eficiencia.

IL-1/IL-6/TNF-

Hgado Protenas de fase aguda (protena C reactiva, lectina de unin a manosa) Activacin del complemento Opsonizacin

Endotelio de la mdula sea Movilizacin de neutrlos

Hipotlamo Temperatura corporal aumentada

Grasa, msculo Movilizacin de protena y energa para permitir incremento de la temperatura corporal

Clulas dendrticas El TNF- estimula la migracin hacia ganglios linfticos y maduracin

Fagocitosis

Decremento de la replicacin de virus y bacterias Incremento del procesamiento de antgeno Aumento de la respuesta inmunitaria especca

Inicio de respuesta inmunitaria adaptativa

Los ratones con un gen mutante que codifica para receptor de TNF- son resistentes al choque sptico; no obstante, tambin son incapaces de controlar la infeccin local. Las caractersticas del TNF- que lo hacen tan valioso para contener esta infeccin son precisamente las que le dan una funcin fundamental en la patogenia del choque sptico. A partir de la conservacin evolutiva de TNF- est claro que sus beneficios en el rea anterior superan con mucho las consecuencias devastadoras de su liberacin sistmica.

2-28

Las citocinas liberadas por fagocitos activan la respuesta de fase aguda

Sndromes hereditarios de ebre peridica

Adems de sus importantes efectos locales, las citocinas producidas por macrfagos tienen efectos de gran alcance que contribuyen a la defensa del hospedador. Uno de stos es el incremento de la temperatura corporal, que se origina principalmente por TNF-, IL-1 e IL-6. stos se denominan pirgenos endgenos porque causan fiebre y se derivan de una fuente endgena ms que de componentes bacterianos, como el LPS, que es un pirgeno exgeno. Los pirgenos endgenos causan fiebre al inducir la sntesis de prostaglandina E2 por la enzima ciclooxigenasa-2, cuya expresin es inducida por dichas citocinas. Entonces, las prostaglandinas E2 actan sobre el hipotlamo, resultando en aumento de la produccin de calor por la grasa parda, e incremento de la vasoconstriccin, lo que disminuye la prdida de calor excesivo mediante la piel. Los pirgenos exgenos tienen la capacidad de causar fiebre al inducir la produccin de los pirgenos endgenos, y tambin por la induccin directa de ciclooxigenasa-2 como una consecuencia de sealizacin por medio de TLR-4, lo que lleva a la produccin de prostaglandinas E2. La fiebre por lo comn es beneficiosa para la defensa del hospedador; casi todos los patgenos crecen mejor a temperaturas ms bajas, y las respuestas inmunitarias adaptativas son ms intensas a temperaturas altas. Con estas ltimas, las clulas hospedadoras tambin estn protegidas contra los efectos nocivos del TNF-. Los efectos del TNF-, IL-1 e IL-6 se resumen en la figura 2-51; entre los ms importantes se encuentra el inicio de una respuesta conocida como respuesta de fase aguda (fig. 2-52). sta comprende un cambio de las protenas sintetizadas y secretadas por el hgado hacia el plasma, y se origina por la accin de IL-1, IL-6 y TNF- sobre hepatocitos. En la respuesta de fase aguda, las concentraciones de algunas protenas plasmticas disminuyen, mientras que las de otras muestran incremento notorio. Las protenas cuya sntesis es inducida por TNF-, IL-1 e IL-6 se llaman protenas de fase aguda. Varias de ellas despiertan inters particular porque simulan la accin de anticuerpos, pero a diferencia de stos, dichas protenas tienen especificidad amplia para PAMP, y su produccin slo depende de la presencia de citocinas.

Respuestas innatas inducidas a la infeccin

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Las bacterias inducen a los macrfagos para que produzcan IL-6, que acta sobre los hepatocitos para inducir la sntesis de protenas de fase aguda
IL-6 SP-A SP-D hgado lectina de unin a manosa bringeno protena amiloide srica protena C reactiva

La protena C reactiva se une a fosfocolina sobre supercies bacterianas, y acta como una opsonina; tambin activa el complemento

La lectina de unin a manosa se une a residuos de manosa sobre supercies bacterianas, y acta como una opsonina; tambin activa el complemento

Protena amiloide srica

Una de estas protenas, la protena C reactiva, es un miembro de la familia de protenas pentraxina, as llamadas porque se forman a partir de cinco subunidades idnticas. La protena C reactiva es otro ejemplo de una molcula de reconocimiento de patgeno con mltiples puntas, y se une a la porcin fosfocolina de ciertos lipopolisacridos de pared celular bacteriana y mictica. La fosfocolina tambin se encuentra en fosfolpidos de membrana celular de mamferos, pero la protena C reactiva no puede unirse a ella. Cuando sta se une a una bacteria, puede opsonizarla y tambin activar la cascada de complemento al unirse a C1q, el primer componente de la va clsica de la activacin del complemento (seccin 2-13). La interaccin con C1q comprende las partes de C1q parecidas a colgeno ms que las cabezas globulares con las cuales la superficie de los patgenos hace contacto, pero se inicia la misma cascada de reacciones. La segunda protena de fase aguda que despierta inters es la MBL, que ya se coment como una molcula de unin a patgeno (fig. 2-15), y como un desencadenante para la cascada del complemento (seccin 2-14). La MBL se encuentra en el suero normal a concentraciones bajas, pero se produce en cantidades aumentadas durante la respuesta de fase aguda. Acta como opsonina para monocitos, que a diferencia de los macrfagos hsticos, no expresan el receptor manosa de macrfago. Otras dos protenas con propiedades opsonizantes que se producen en el hgado en cantidades incrementadas durante la respuesta de fase aguda son las protenas surfactantes pulmonares SP-A y SP-D (seccin 2-6). Se encuentran junto con macrfagos en el lquido alveolar de los pulmones, y tienen importancia para promover la fagocitosis de patgenos de las vas respiratorias, como Pneumocystis jiroveci (antes P. carinii), una de las principales causas de neumona en pacientes con sida. De este modo, en el transcurso de uno o dos das, la respuesta de fase aguda proporciona al hospedador varias protenas con las propiedades funcionales de anticuerpos, pero con la capacidad para unirse a una amplia gama de patgenos. Sin embargo, a diferencia de los anticuerpos (caps. 3 y 9), carecen de diversidad estructural y se producen en respuesta a cualquier estmulo que desencadene la

Fig. 2-52. La respuesta de fase aguda produce molculas que se unen a patgenos, pero no a clulas hospedadoras. Las protenas de fase aguda se producen por clulas hepticas en respuesta a citocinas liberadas por macrfagos en presencia de bacterias. Incluyen la protena amiloide srica (SAP) (en ratones, mas no en seres humanos), la protena C reactiva (CRP), el fibringeno y la lectina fijadora de manosa (MBL). La SAP y la CRP son homlogas en cuanto a su estructura; ambas son pentraxinas y forman discos de cinco miembros, como se muestra en el caso de la SAP (fotografa a la derecha). La CRP se une a fosfocolina sobre ciertas superficies bacterianas y micticas, pero no la reconoce en la forma en que se encuentra en las membranas de clulas hospedadoras. Acta como opsonina por sus caractersticas particulares y activa la va clsica del complemento al unirse a C1q para aumentar la opsonizacin. La MBL es un miembro de la familia de las colectinas, que incluye las protenas surfactantes pulmonares SP-A y SP-D. Su estructura tambin es similar a la de C1q. Del mismo modo que la CRP, la MBL puede actuar como una opsonina por sus caractersticas particulares, al igual que la SP-A y la SP-D. Modelo cortesa de J. Emsley.

94

Captulo 2: Inmunidad innata

Los RNA vricos bicatenarios pueden ser reconocidos por TLR en endosomas y por RIG-1 o MDA-5 en el citosol para inducir la expresin de interferones
TLR-3 MDA-5 RIG-I

CARDIF

TRIF

liberacin de TNF-, IL-1 e IL-6. De esta forma, su sntesis no se induce ni se dirige de manera especfica. Un efecto distante final de las citocinas producidas por macrfagos es inducir leucocitosis, un aumento de los neutrfilos circulantes. Los neutrfilos provienen de dos fuentes: la mdula sea, a partir de la cual se libera gran nmero de leucocitos maduros, y sitios en vasos sanguneos, donde estn fijos en forma laxa a clulas endoteliales. De este modo, los efectos de dichas citocinas contribuyen al control de la infeccin mientras se est desarrollando la respuesta inmunitaria adaptativa. El TNF- tambin tiene una funcin en el estmulo de la migracin de clulas dendrticas desde sus sitios en tejidos perifricos hacia el ganglio linftico, y en su maduracin hacia clulas presentadoras de antgeno no fagocticas pero muy coestimuladoras (fig. 2-51).

IRF3

IRF7

IRF3

IRF7

2-29

Los interferones inducidos por infeccin vrica hacen varias contribuciones a la defensa del hospedador

gen que codica para interfern

gen que codica para interfern

Fig. 2-53. Los RNA bicatenarios inducen la expresin de interferones al activar los factores reguladores de interfern IRF3 e IRF7. Los RNA bicatenarios largos pueden ser reconocidos por el receptor de tipo Toll TLR-3, que est presente en los endosomas (panel izquierdo). El TLR-3 emite seales por medio de una molcula adaptadora, TRIF, para activar los factores de transcripcin IRF3 e IRF7. De manera similar, los receptores intracelulares RIG-I y MDA-5 tambin se unen a RNA bicatenarios largos (panel derecho) y activan a IRF3 e IRF7, pero en este caso por medio de la protena adaptadora CARDIF (adaptador CARD inductor de IFN). El IRF3 e IRF7 activados pueden formar homodmeros (que no se muestran) y heterodmeros IRF3:IRF7 que entran al ncleo y activan la transcripcin de varios genes, principalmente los de IFN- y de IFN-.

La infeccin de clulas por virus induce la produccin de protenas que se conocen como interferones, porque se encontr que interfieren con la replicacin vrica en clulas en cultivo de tejidos previamente no infectadas. Se cree que tienen una participacin similar in vivo, al bloquear la diseminacin de virus hacia clulas no infectadas. Estas molculas efectoras antivricas, llamadas IFN- e IFN-, difieren bastante del IFN-. Esta citocina no es inducida de manera directa por infeccin vrica, sino que se produce ms tarde y tiene una funcin importante en la respuesta inmunitaria adaptativa a patgenos intracelulares, como se describe en captulos posteriores. El IFN-, en realidad una familia de varias protenas estrechamente relacionadas, y el IFN-, el producto de un gen nico, se sintetizan en muchos tipos de clulas despus de su infeccin por diversos virus. Se cree que el interfern se sintetiza en respuesta a la presencia de RNA bicatenario, porque el RNA bicatenario sinttico es un potente inductor de IFN- e IFN-. El RNA bicatenario forma el genoma de algunos virus y podra sintetizarse como parte del ciclo infeccioso de todos los virus. Aunque se encuentran molculas de RNA bicatenario en clulas de mamfero, slo estn presentes como molculas relativamente cortas, por lo general de menos de 100 nucletidos de largo, mientras que los genomas de RNA bicatenario tienen miles de nucletidos de longitud. Por ende, las molculas de RNA bicatenario largas podran ser el elemento comn en la induccin de interfern; estas molculas se reconocen como un modelo molecular distinto por el receptor tipo Toll TLR-3 (fig. 2-53), que induce la sntesis de IFN- e IFN-. El RNA vrico bicatenario largo tambin puede inducir la expresin de interferones al activar las protenas citoplsmicas RIG-I y MDA-5 (fig. 2-53). Estas protenas contienen dominios parecidos a RNA helicasa que se unen a RNA bicatenarios, y 2 dominios CARD (seccin 2-9) que permiten que interacten con protenas adaptadoras dentro de las clulas para emitir una seal de que hay RNA vricos. Tanto para RIG-I como para MDA-5, los adaptadores enlazan la unin de RNA bicatenarios a la activacin de los factores reguladores de interferones IRF3 e IRF7, factores de transcripcin que inducen la produccin de IFN- e IFN-. Los interferones hacen varias contribuciones a la defensa contra infeccin vrica (fig. 2-54). Un efecto obvio e importante es la induccin de un estado de resistencia a la replicacin vrica en todas las clulas. El IFN- y el IFN- secretados por las clulas infectadas se unen a un receptor de superficie celular comn, conocido como el receptor de interfern, tanto en la clula infectada como en las clulas no infectadas cercanas. El receptor de interfern, al igual que muchos otros receptores de citocina, est acoplado a una tirosina cinasa de la familia Janus, por medio de la cual emite seales. Esta va de sealizacin, que se describe en detalle en el captulo 6, induce con rapidez nueva transcripcin de gen puesto que las cinasas de la familia Janus fosforilan de modo directo activadores de transcripcin transductores de seal conocidos como protenas STAT. Las protenas STAT fosforiladas entran al ncleo, donde activan la transcripcin de varios genes, incluso los que codifican para protenas que ayudan a inhibir la replicacin vrica.

Respuestas innatas inducidas a la infeccin

95

Una protena de ese tipo es la oligoadenilato sintetasa, que polimeriza ATP hacia oligmeros 2-5-enlazados (los nucletidos en cidos nucleicos normalmente son 3-5-enlazados). stos activan una endorribonucleasa que luego degrada el RNA vrico. Una segunda protena activada por IFN- e IFN- es una serina-treonina cinasa llamada PKR cinasa. sta fosforila el factor de inicio de sntesis de protena eucaritica eIF-2, lo que inhibe la traduccin y, as, contribuye ms a la inhibicin de la replicacin vrica. Se sabe que es necesaria otra protena inducible por interfern, llamada Mx, para la resistencia celular a la replicacin del virus de la gripe. Los ratones que carecen del gen que codifica para Mx son muy susceptibles a infeccin por el virus de la gripe, no as los que sintetizan Mx. Otra manera en la cual los interferones actan en la inmunidad innata es con la activacin de linfocitos citolticos, que pueden destruir a clulas infectadas por virus, como se describe con mayor detalle en la seccin siguiente. Por ltimo, los interferones tienen una funcin ms general en el proceso mediante el cual el reconocimiento de patgenos por el sistema inmunitario innato fundamenta y aumenta la activacin de la respuesta inmunitaria adaptativa. Ya se ha comentado de qu modo el reconocimiento de RNA bicatenario por TLR-3 puede llevar a la induccin de IFN- e IFN-. Otros TLR, entre los que destacan TLR-4, tambin pueden inducir estos interferones en respuesta al reconocimiento de componentes de pared celular bacteriana. Los interferones, a su vez, inducen la expresin de molculas coestimuladoras sobre macrfagos y clulas dendrticas, lo que les permite actuar como clulas presentadoras de antgeno que pueden activar por completo clulas T (seccin 1-7). De esta manera, un macrfago o una clula dendrtica que se activa cuando sus receptores tipo Toll se unen a patgenos, tiene a su vez la capacidad para emitir seales hacia otros macrfagos y clulas dendrticas, y reclutarlos para iniciar una respuesta inmunitaria adaptativa. IFN- e IFN- tambin estimulan el incremento de la expresin de molculas del MHC de clase I sobre todos los tipos de clulas. Los linfocitos T citotxicos del sistema inmunitario adaptativo reconocen clulas infectadas por virus mediante los complejos de antgenos vricos y molculas del MHC de clase I que despliegan sobre su superficie (fig. 1-30) y, de este modo, de manera indirecta, los interferones ayudan a promover la muerte de clulas infectadas por virus mediante clulas T citotxicas CD8. Casi todos los tipos de clulas pueden producir IFN- e IFN- si es necesario, pero algunas clulas parecen estar especializadas para la tarea. Las clulas dendrticas plasmocitoides (tambin conocidas como clulas productoras de interfern o productoras de interfern naturales) son clulas dendrticas circulantes que se acumulan en tejidos linfoides perifricos durante una infeccin, y pueden secretar hasta 1000 veces ms interfern que otros tipos de clulas. En el captulo 8 se describen con mayor detalle.

Clulas hospedadoras infectadas por virus

virus

IFN-, IFN- Inducen resistencia a la replicacin vrica en todas las clulas Aumentan la expresin de MHC de clase I y presentacin de antgeno en todas las clulas Activan clulas dendrticas y macrfagos Activan linfocitos citolticos para que destruyan clulas infectadas por virus Fig. 2-54. Los interferones son protenas antivricas producidas por clulas en respuesta a infecciones por virus. Los IFN- e IFN- tienen tres funciones principales. En primer lugar, inducen resistencia a la replicacin vrica en clulas no infectadas al activar genes que causan la destruccin de mRNA e inhiben la traduccin de protenas vricas y de algunas protenas del hospedador. En segundo lugar, pueden inducir la expresin del MHC de clase I en casi todos los tipos de clulas del cuerpo, lo que incrementa su resistencia a los linfocitos NK; tambin pueden estimular el incremento de la sntesis de molculas del MHC de clase I en clulas recin infectadas por virus, lo que las hace ms susceptibles a muerte por clulas T citotxicas CD8 (cap. 8). En tercer lugar, activan linfocitos citolticos, que despus destruyen de modo selectivo clulas infectadas por virus.

2-30

Los linfocitos citolticos se activan por interferones y citocinas derivadas de macrfagos para que funcionen como defensa temprana contra ciertas infecciones intracelulares

Los linfocitos citolticos (linfocitos NK) se desarrollan en la mdula sea a partir de la clula progenitora linfoide comn, y circulan en la sangre. Son de mayor tamao que los linfocitos T y B, tienen grnulos citoplsmicos distintivos, y se identifican desde el punto de vista funcional por su capacidad para destruir ciertas lneas celulares de tumor linfoide in vitro sin la necesidad de inmunizacin o activacin previa. El mecanismo de muerte por linfocitos citolticos es el mismo que el que usan las clulas T citotxicas generadas en una respuesta inmunitaria adaptativa; se liberan grnulos citotxicos hacia la superficie de la clula blanco unida, y las protenas efectoras que contienen penetran en la membrana celular e inducen muerte celular programada. De cualquier modo, la muerte por linfocitos citolticos se desencadena por receptores invariables que reconocen componentes de superficies de clulas infectadas, y su funcin conocida en la defensa del hospedador yace en las fases tempranas de infeccin por varios patgenos intracelulares, en particular virus del

96

Captulo 2: Inmunidad innata

Produccin de IFN-, IFN-, TNF-, e IL-12

Muerte de clulas infectadas mediada por linfocitos citolticos

Muerte de clulas infectadas mediada por clulas T

Ttulo de virus
1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 Tiempo despus de la infeccin vrica (das)

Fig. 2-55. Los linfocitos citolticos naturales (clulas NK) son un componente temprano de la respuesta del hospedador a infecciones por virus. Experimentos en ratones han demostrado que el IFN-, el IFN- y las citocinas TNF- e IL-12 aparecen primero, seguidos por una onda de linfocitos NK, que juntos controlan el virus pero no lo eliminan. La erradicacin del virus se logra cuando se producen clulas T CD8 especficas para dicho virus. Sin linfocitos citolticos, las concentraciones de algunos virus son mucho ms altas durante los primeros das de la infeccin y pueden ser letales a menos que se d tratamiento vigoroso con frmacos antivricos.

herpes y el parsito protozoario Leishmania. Los linfocitos citolticos se clasifican como parte del sistema inmunitario innato por sus receptores invariables. Los linfocitos citolticos se activan en respuesta a interferones o citocinas derivadas de macrfago. Aun cuando a partir de individuos no infectados es posible aislar estos linfocitos que pueden destruir blancos sensibles, esta actividad aumenta 20 a 100 veces cuando dichas clulas quedan expuestas a IFN- e IFN- o al factor activador de linfocitos NK IL-12, que es una de las citocinas que se producen en etapas tempranas en muchas infecciones. Los linfocitos citolticos activados sirven para contener infecciones vricas mientras la respuesta inmunitaria adaptativa est generando clulas T citotxicas especficas para antgeno que pueden eliminar la infeccin (fig. 2-55). En la actualidad el nico indicio respecto de la funcin fisiolgica de los linfocitos citolticos en seres humanos proviene de pacientes que tienen deficiencia de las mismas (que es poco comn). Esos individuos resultan ser muy susceptibles a las fases tempranas de la infeccin por virus del herpes. En fecha reciente se encontr un dato similar en ratones infectados por citomegalovirus murino, un herpesvirus. La IL-12, al actuar en sinergia con el TNF-, tambin puede estimular a los linfocitos citolticos a secretar grandes cantidades de citocina IFN-, lo cual es crucial para controlar algunas infecciones antes de que quede disponible el IFN- producido por clulas T citotxicas CD8 activadas. Esta produccin temprana de IFN- por linfocitos NK tambin influye sobre la respuesta de clulas T CD4 a agentes infecciosos, al inducir clulas T CD4 activadas para que se diferencien hacia clulas TH1 inflamatorias capaces de activar macrfagos (seccin 8-19).

2-31

Los linfocitos citolticos poseen receptores para molculas propias que evitan su activacin por clulas no infectadas

Para que los linfocitos citolticos defiendan al cuerpo contra infecciones por virus y otros microorganismos patgenos, deben tener algn mecanismo para distinguir entre clulas infectadas y no infectadas. An no se conoce la forma exacta en que esto sucede en cada caso, pero se cree que una clula NK se activa por una combinacin de reconocimiento directo de cambios en glucoprotenas de superficie celular inducidos por agresin metablica, como transformacin maligna o infeccin vrica o bacteriana, junto con un reconocimiento de lo propio alterado que comprende cambios de la expresin de molculas del MHC. La expresin , alterada de molculas del MHC de clase I puede ser una caracterstica comn de clulas infectadas por patgenos intracelulares, porque muchos de estos patgenos han creado estrategias para interferir con la capacidad de dichas molculas para captar y desplegar pptidos a clulas T. As, un mecanismo mediante el cual los linfocitos citolticos distinguen entre clulas infectadas y no infectadas es al reconocer alteraciones de la expresin del MHC de clase I (fig. 2-56). Los linfocitos citolticos tienen la capacidad para detectar cambios de la expresin de molculas del MHC de clase I al integrar las seales provenientes de dos tipos de receptores de superficie, que juntos controlan su actividad citotxica. Un tipo es un receptor activador que desencadena la muerte por la clula NK. Varias clases de receptores proporcionan esta seal de activacin, lo que incluye miembros de las familias de protenas parecidas a inmunoglobulina y lectina tipo C. La estimulacin de tales receptores activa a los linfocitos citolticos, lo que origina la liberacin de citocinas como IFN- y la muerte dirigida de la clula estimuladora por medio de liberacin de grnulos citotxicos que contienen granzimas y perforina. Este mecanismo de muerte es el mismo que utilizan las clulas T citotxicas, y se describe en detalle cuando se comentan las funciones de esa poblacin de clulas T efectoras (cap. 8). Los linfocitos citolticos tambin portan receptores para inmunoglobulina, y la unin de stos a anticuerpos activa a linfocitos NK para liberar sus grnulos citotxicos; esto se conoce como citotoxicidad celular dependiente de anticuerpos, o ADCC (cap. 9). Un segundo grupo de receptores inhibe la activacin y evita que los linfocitos citolticos maten clulas hospedadoras normales. Tales receptores inhibidores son especficos para varias molculas del MHC de clase I, lo que ayuda a explicar por qu los linfocitos cito-

Respuestas innatas inducidas a la infeccin

97

El MHC de clase I sobre clulas normales es reconocido por receptores inhibidores tambin de seales provenientes de receptores activadores

Los linfocitos citolticos no destruyen a la clula normal

Linfocito citoltico ligando activador de linfocitos citolticos

receptor inhibidor MHC de clase I

receptor activador

El MHC de clase I alterado o faltante no puede estimular una seal negativa. Los linfocitos citolticos se desencadenan por seales provenientes de receptores activadores

Los linfocitos citolticos activados liberan el contenido de grnulos, lo que induce apoptosis en la clula blanco

Fig. 2-56. La eliminacin mediada por linfocitos citolticos depende del balance entre seales activadoras y seales inhibidoras. Los linfocitos citolticos tienen varios receptores activadores que reconocen ligandos de carbohidrato comunes sobre la superficie de las clulas del cuerpo y emiten seales a los linfocitos citolticos para que destruyan a la clula unida. Sin embargo, se evita un ataque masivo de dichos linfocitos por otro grupo de receptores que reconocen molculas del MHC de clase I (que estn presentes en casi todos los tipos de clulas) e inhiben la muerte al anular las acciones de los receptores activadores. Esta seal inhibidora se pierde cuando las clulas diana no expresan MHC de clase I y quiz tambin en clulas infectadas por virus, muchos de los cuales cancelan de manera especfica la expresin del MHC de clase I o alteran su conformacin de modo que evitan el reconocimiento por clulas T CD8. Otra posibilidad es que las clulas no infectadas normales respondan al IFN- y al IFN- al incrementar la expresin de molculas del MHC de clase I, lo que las hace resistentes a la eliminacin por parte de los linfocitos citolticos activados. En cambio, las clulas infectadas pueden no aumentar la expresin de MHC de clase I, lo que las hace dianas para linfocitos citolticos activados.

lticos matan de manera selectiva clulas que portan cifras bajas de dichas molculas pero se evita que destruyan clulas que tienen nmeros normales. Mientras ms alto sea el nivel de expresin del MHC de clase I sobre la superficie de una clula, mejor protegida est contra la destruccin por linfocitos NK. sta es la razn por la cual los interferones, que inducen la expresin de molculas del MHC de clase I, pueden proteger a clulas hospedadoras no infectadas contra linfocitos NK. Al mismo tiempo el interfern activa a la clula NK para que destruya clulas infectadas por virus. Los receptores que regulan la actividad de linfocitos NK caen dentro de dos familias grandes (fig. 2-57) que contienen varios otros receptores de superficie celular adems de los receptores NK. Una est compuesta de receptores homlogos a las lectinas tipo C que se llaman receptores parecidos a lectina asesinos (KLR). Los genes que codifican para KLR se encuentran dentro de una agrupacin de gen llamada el complejo de receptor NK, o NKC. La otra familia de receptores est compuesta por receptores con dominios parecidos a inmunoglobulina, de ah su nombre receptores parecidos a inmunoglobulina de linfocitos citolticos (KIR). Los genes KIR forman parte de una agrupacin de mayor tamao de receptores parecidos a inmunoglobulina conocidos como el complejo de receptor de leucocito, o LRC. Las agrupaciones tanto NKC como LRC estn presentes en ratones y en seres humanos, pero los ratones carecen de los genes KIR y, por tanto, dependen de los receptores parecidos a lectina tipo C del NKC para controlar su actividad de clula NK. Una complicacin del entendimiento de la regulacin de la actividad de linfocitos NK es que las mismas familias estructurales de receptores NK contienen receptores tanto activadores como inhibidores. En seres humanos y ratones, los

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Captulo 2: Inmunidad innata

Fig. 2-57. Los genes que codifican para receptores de linfocitos citolticos se clasifican dentro de dos grandes familias. La primera, el complejo receptor de leucocito (LRC), comprende una gran agrupacin de genes que codifican una familia de protenas compuestas de dominios de tipo inmunoglobulina. stas incluyen los receptores de tipo inmunoglobulina de linfocitos citolticos (KIR) expresados por linfocitos NK, la clase ILT (transcritos de tipo inmunoglobulina), y las familias de genes de receptores de tipo inmunoglobulina asociados con leucocitos (LAIR). Las lectinas de sealizacin (SIGLEC) y miembros de la familia CD66 se localizan cerca. En los seres humanos, este complejo se encuentra en el cromosoma 19. La segunda agrupacin de genes se llama complejo de receptor NK (NKC), y codifica receptores de tipo lectina citolticos, una familia de receptores que incluye las protenas NKG2 y la molcula CD94, con la cual una molcula de NKG2 se aparea para crear un receptor funcional. Este complejo se localiza en el cromosoma 12 de los seres humanos. Algunos genes que codifican receptores NK se encuentran fuera de estas dos agrupaciones de genes importantes; por ejemplo, los genes de receptores de citotoxicidad natural NKp30 y NKp44 se encuentran dentro del complejo principal de histocompatibilidad en el cromosoma 6. Figura basada en datos proporcionados por cortesa de J. Trowsdale, University of Cambridge.

LRC extendidos
DAP12 DAP10 CD66 SIGLEC FcGRT ILT LAIR ILT

LRC
KIR NKp46 GPVI PRB3 FcR LY49L

19
NKR-P1A

MAFA-L

CD94 NKG2D

12 NKC

Receptores activadores e inhibidores de clulas pueden pertenecer a la misma familia estructural Receptores activadores KLR

linfocitos citolticos expresan un heterodmero de dos lectinas tipo C, llamado CD94 y NKG2, que interacta con molculas parecidas a MHC de clase I no polimrficas, incluso HLA-E en seres humanos y Qa-1 en ratones, que se unen a fragmentos del pptido principal provenientes de otras molculas del MHC de clase I. De este modo, CD94:NKG2 podra ser sensible a la presencia de diversas variantes del MHC de clase I. En seres humanos, la familia NKG2 tiene seis miembros, NKG2A, B, C, D, E y F. De stos, por ejemplo, NKG2A y B son inhibidores, mientras que NKG2C es activador (fig. 2-58). NKG2D tambin es activador pero difiere de los otros miembros de la familia NKG2, y se comenta por separado en la seccin siguiente. En ratones, Ly49H, un miembro de la familia de lectina tipo C Ly49, parece ser distinto, porque la unin de esta molcula es un evento activador que desencadena una respuesta citotxica, mientras que la unin de los otros miembros de Ly49 es inhibidora. Asimismo, en la familia de receptor KIR, algunos miembros son activadores mientras que otros son inhibidores. Diferentes genes KIR tambin codifican para protenas con nmeros de dominios de inmunoglobulina que difieren; algunas, llamadas KIR-2D, tienen dos dominios de inmunoglobulina, y otras, llamadas KIR-3D, tienen tres. El hecho de si una protena KIR es activadora o inhibidora depende de la presencia o ausencia de motivos emisores de seales especficos en su dominio citoplsmico. Los motivos de secuencia que son reconocidos por protenas adaptadoras inhibidoras intracelulares se encuentran en protenas KIR que tienen colas citoplsmicas largas; tales protenas se designan KIR-2DL y KIR3DL. Las protenas KIR con colas citoplsmicas cortas carecen de estos motivos inhibidores, y en lugar de eso se relacionan con la protena adaptadora activadora DAP12 (tambin conocida como KARAP). Por ende, los receptores KIR activadores se designan como KIR-2DS y KIR-3DS (fig. 2-58). Otros receptores NK inhibidores especficos para los productos de los loci del MHC de clase I se estn definiendo con rapidez, y todos son miembros de la familia KIR parecida a inmuFig. 2-58. Las familias estructurales de receptores NK codifican receptores activadores y receptores inhibidores. Las familias de receptores de tipo inmunoglobulina de linfocitos citolticos (KIR) y de receptores de tipo lectina de linfocitos citolticos (KLR) tienen miembros que envan seales activadoras a los linfocitos citolticos (panel superior) y elementos que envan seales inhibidoras (panel inferior). Los miembros de la familia KIR se designan de acuerdo al nmero de dominios de tipo inmunoglobulina que poseen y a la longitud de sus colas citoplsmicas. Los receptores KIR activadores tienen colas citoplsmicas cortas y se les designa con la letra S. stos se asocian con una protena adaptadora de sealizacin, la DAP12. El receptor KLR activador es un heterodmero formado por NKG2C y otro miembro de la familia de lectina tipo C, CD94. Los receptores KIR inhibidores tienen colas citoplsmicas ms largas y se les designa con la letra L; ellos no se relacionan de manera constitutiva con protenas adaptadoras, sino que contienen motivos de sealizacin que cuando se fosforilan son reconocidos por fosfatasas inhibidoras. Al igual que el KLR activador, los KLR inhibidores (NKG2A y NKG2B) forman heterodmeros con CD94.

KIR-2DS

KIR-3DS

NKG2C CD94

Receptores inhibidores

KIR-2DL

KIR-3DL

NKG2A,B CD94

NKG2C NKG2A

NKG2F NKG2E

LLt1 CD69 KLRF1 AICL Clec-2 Lox-1

A2M

Respuestas innatas inducidas a la infeccin

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noglobulina, o las lectinas tipo C parecidas a Ly49. Est claro que la regulacin de la actividad de linfocitos NK es compleja, y el hecho de si alguna clula NK individual es activada por otra clula depende del balance general de receptores activadores e inhibidores que la clula NK est expresando. La respuesta general de los linfocitos citolticos para las diferencias en la expresin de MHC se complica ms por el polimorfismo de los genes KIR; por ejemplo, para uno de los genes KIR hay 2 alelos, uno es activador y el otro inhibidor. Ms an, la agrupacin de gen KIR parece ser una parte muy dinmica del genoma humano, porque en diferentes personas se encuentran diferentes nmeros de genes KIR activadores e inhibidores. No est clara la ventaja que tal diversidad podra tener. Como se mencion, el locus KIR no se encuentra en ratones, los cuales usan las molculas KLR para regular la actividad de linfocitos NK. De esta manera, cualquiera que sea la fuerza impulsora para la evolucin del locus KIR y su diversidad, quizs haya surgido en una poca relativamente reciente en trminos evolutivos. La sealizacin por los receptores NK inhibidores suprime la actividad asesina de linfocitos NK. Esto significa que stas no destruyen clulas sanas, idnticas desde el punto de vista gentico, con expresin normal de molculas del MHC de clase I, como las otras clulas del cuerpo. Aun as, las clulas infectadas por virus pueden hacerse susceptibles a destruccin por linfocitos NK mediante diversos mecanismos. En primer lugar, algunos virus inhiben toda la sntesis de protena en sus clulas hospedadoras, de modo que la sntesis de protenas del MHC de clase I estara bloqueada en clulas infectadas, aun cuando su produccin en clulas no infectadas es estimulada por las acciones del interfern. La reduccin de la expresin del MHC de clase I en clulas infectadas las hara menos capaces, en forma correspondiente, de inhibir linfocitos NK por medio de sus receptores especficos para MHC y, por consiguiente, seran ms susceptibles a ser destruidas. En segundo lugar, algunos virus pueden evitar de manera selectiva la exportacin de molculas del MHC de clase I hacia la superficie celular. Esto podra permitir que la clula infectada evada el reconocimiento por clulas T citotxicas, pero las hara susceptibles a ser destruidas por linfocitos NK. La infeccin vrica tambin altera la glucosilacin de protenas celulares, lo que tal vez permita que domine el reconocimiento por receptores activadores de clula NK, o elimina el ligando normal para los receptores inhibidores. Esto podra permitir que las clulas infectadas fueran detectadas aun cuando la magnitud de expresin del MHC de clase I no haya cambiado. Est claro que queda mucho por aprender acerca de este mecanismo innato de ataque citotxico y su importancia fisiolgica. La participacin de molculas del MHC de clase I en permitir que los linfocitos citolticos detecten infecciones intracelulares despierta particular inters porque estas mismas protenas rigen la respuesta de clulas T a patgenos intracelulares. Es posible que los linfocitos citolticos, que usan un grupo diverso de receptores no clonales para detectar MHC alterado, representen los remanentes modernos de los antepasados evolutivos de las clulas T, los cuales evolucionaron reordenando genes que codifican para un vasto repertorio de receptores de clulas T especficos para antgeno dirigidos a reconocer molculas del MHC alteradas por antgenos peptdicos unidos.

Los principales receptores activadores de linfocitos citolticos

NKp30

NKp40

NKp46

NKG2D

2-32

Los linfocitos citolticos portan receptores que activan su funcin destructora en respuesta a ligandos expresados sobre clulas infectadas o clulas tumorales

Adems de los receptores KIR y KLR, que participan en la deteccin de la magnitud de expresin del MHC de clase I sobre otras clulas, los linfocitos citolticos tambin expresan receptores que detectan de modo ms directo la presencia de infeccin u otras perturbaciones en una clula. Los receptores activadores de mayor importancia para el reconocimiento de clulas infectadas son los receptores de citotoxicidad natural (NCR) NKp30, NKp44 y NKp46, que son receptores parecidos a inmunoglobulina, y el miembro de la familia de la lectina tipo C NKG2D (fig. 2-59). Los ligandos reconocidos por los receptores de citotoxicidad natural no se encuentran bien definidos, aunque se sabe que NKp46 reconoce proteoglucanos de heparn sulfato, as como algunas protenas vricas.

Fig. 2-59. Los principales receptores activadores de linfocitos citolticos son los receptores de citotoxicidad natural y NKG2D. Los receptores de citotoxicidad natural son protenas de tipo inmunoglobulina. NKp30 y NKp40 tienen un dominio extracelular que se asemeja a un dominio variable nico de una molcula de inmunoglobulina. Activan a los linfocitos citolticos por medio de su asociacin con homodmeros de la cadena CD3 o de la cadena de receptor Fc (estas son protenas de sealizacin que tambin se asocian con otros tipos de receptores y se describen con mayor detalle en el captulo 6). NKp46 se asemeja a las molculas KIR2D debido a que tiene dos dominios parecidos a los dominios constantes de una molcula de inmunoglobulina. NKG2D es un miembro de la familia de lectina de tipo C y forma un homodmero.

100

Captulo 2: Inmunidad innata

Los ligandos para NKG2D son molculas parecidas a MHC, miembros de la familia MIC-A, MIC-B o RAET1, cuya expresin es inducida por estrs celular

MIC-A o MIC-B

Familia RAET1 (incluye ULBP)

Fig. 2-60. Los ligandos para el receptor NK activador NKG2D son protenas que se expresan en condiciones de estrs celular. Las protenas MIC, MIC-A y MICB, son molculas parecidas a las del MHC inducidas sobre clulas epiteliales, entre otras, por situaciones de estrs, como choque trmico, estrs metablico o procesos infecciosos. Los miembros de la familia RAET1, incluso el subgrupo designado como protenas de unin a UL16 (ULBP), tambin se parecen a una porcin de una molcula del MHC de clase I, los dominios 1 y 2, y se fijan a la clula por medio de un enlace de glucosilfosfatidilinositol.

NKG2D parece tener una funcin especializada en la activacin de linfocitos NK. Otros miembros de la familia NKG2 (NKG2A, C y E) forman heterodmeros con CD94 y se unen a la molcula del MHC de clase I, HLA-E. Los ligandos para el receptor NKG2D son familias de protenas que son parientes lejanas de las molculas del MHC de clase I pero tienen una funcin por completo diferente, al producirse en respuesta a la agresin metablica. Los ligandos en seres humanos para NKG2D (fig. 2-60) son las molculas MIC parecidas al MHC de clase I, MIC-A y MIC-B, y la familia de protena RAET1, que son homlogas a los dominios 1 y 2 de las molculas del MHC de clase I (que se describen cuando se comenta la estructura de la molcula del MHC en el captulo 3). La familia RAET1 tiene 10 miembros, tres de los cuales inicialmente se caracterizaron como ligandos para la protena UL16 del citomegalovirus y, en consecuencia, tambin se llaman protenas de unin a UL16, o ULBP. Los ratones no expresan un equivalente de las molculas MIC, y los ligandos para NKG2D murino tienen una estructura muy similar a la de las protenas RAET1, y probablemente son homlogos de ellas. De hecho, estos ligandos se identificaron por vez primera en ratones como la familia de protenas inducibles en etapa temprana por el cido retinoico 1 (Rae1). Los ligandos para NKG2D se expresan en respuesta a agresin celular o metablica y, as, se regulan en direccin ascendente sobre clulas infectadas por bacterias intracelulares o por algunos virus, como citomegalovirus, as como sobre clulas tumorales incipientes que han presentado transformacin maligna. De esta manera, el reconocimiento por NKG2D acta como una seal de peligro generalizada para el sistema inmunitario. NKG2D tambin se expresa sobre macrfagos activados y sobre clulas T citotxicas CD8 activadas, y el reconocimiento de ligandos de NKG2D por estas clulas proporciona una potente seal coestimuladora que incrementa sus funciones efectoras.

2-33

El receptor NKG2D activa una va de sealizacin diferente de la de los otros receptores NK activadores

Adems de los ligandos que reconoce, NKG2D tambin difiere de otros receptores activadores de linfocitos NK en la va de sealizacin que utiliza dentro de la clula. Los otros receptores activadores, tanto los receptores de citotoxicidad natural como los KIR activadores, se unen a molculas adaptadoras como la cadena CD3, la del receptor Fc, y DAP12, todos los cuales contienen motivos de sealizacin especficos llamados motivos de activacin de inmunorreceptores basados en tirosina (ITAM). Cuando el receptor NK se une a su ligando, los ITAM se fosforilan, lo que conduce a la unin y activacin de la tirosina cinasa intracelular Syk, y eventos de sealizacin adicionales en la clula (seccin 6-17). En cambio, NKG2D se une a una protena adaptadora diferente, DAP10, que no contiene una secuencia de ITAM y en su lugar activa a la cinasa de lpido intracelular fosfatidilinositol-3-cinasa (PI 3-cinasa), lo que inicia una serie diferente de eventos de sealizacin intracelulares. Con todo, ambas vas de sealizacin dan por resultado la activacin de la clula NK. En ratones, el funcionamiento de NKG2D es an ms complicado, porque el NKG2D de ratn se produce en dos formas empalmadas de modo alternativo, una de las cuales se une a DAP12 mientras que la otra se une a DAP10. De esta manera, el NKG2D de ratn puede activar ambas vas de sealizacin, mientras que el NKG2D en seres humanos slo emite seales por medio de DAP10 para activar la va de la PI 3-cinasa.

2-34

Varias subpoblaciones de linfocitos se comportan como linfocitos similares a los del sistema inmunitario innato

Los reordenamientos de gen que codifican para receptor son una caracterstica definitoria de los linfocitos del sistema inmunitario adaptativo, y permiten la generacin de una variedad infinita de receptores de antgeno, cada uno expresado en una clula T o clula B individual diferente (seccin 1-11). Sin embargo, hay varios subgrupos de linfocitos menores que producen receptores de antgeno de este tipo pero slo con diversidad muy limitada, codificados por algunos reordenamientos de gen comunes. Dado que estos receptores son relativamente invariables, y pues-

Respuestas innatas inducidas a la infeccin

101

Linfocitos similares a los del sistema inmunitario innato Clulas B-1 Sintetizan anticuerpo natural, protegen contra infeccin por Streptococcus pneumoniae Ligandos no relacionados con MHC No pueden reforzarse Clulas : epiteliales Clulas T NK

Fig. 2-61. Las tres clases principales de linfocitos similares a los del sistema inmunitario innato y sus propiedades.

Producen citocinas con rapidez

Producen citocinas con rapidez

Los ligandos se relacionan con MHC de clase IB No pueden reforzarse

Los ligandos son lpidos unidos a CD1d No pueden reforzarse

to que slo ocurren en ubicaciones especficas dentro del cuerpo, tales linfocitos no necesitan pasar por expansin clonal antes de mostrar una respuesta eficaz a los antgenos que reconocen; por ende, se conocen como linfocitos similares a los del sistema inmunitario innato (ILL) (fig. 2-61). Para producir receptores de antgeno en estas clulas se requieren las recombinasas RAG-1 y RAG-2; estas protenas, y su participacin en el reordenamiento de gen en linfocitos, se describen en el captulo 4. Dado que expresan RAG-1 y RAG-2 y pasan por el proceso de reordenamiento de gen que codifica para receptor de antgeno, los ILL son, por definicin, clulas del sistema inmunitario adaptativo. Sin embargo, se comportan ms como una parte del sistema inmunitario innato y, as, se comentan aqu. Un tipo de ILL es el subgrupo de clulas T : que reside dentro de epitelios, como la piel. Las clulas T : son por s mismas un subgrupo menor de las clulas T, que se presentaron en el captulo 1. Sus receptores de antgeno estn compuestos de una cadena y una cadena , en lugar de las cadenas y que constituyen los receptores de antgeno en el subgrupo mayoritario de clulas T comprendido en la inmunidad adaptativa. Las clulas T : se descubrieron puramente como consecuencia de que tienen receptores relacionados con inmunoglobulina codificados mediante genes reordenados, y an se est esclareciendo su funcin. Una de las caractersticas ms notorias de dichas clulas es su divisin hacia dos subgrupos muy distintos. Uno se encuentra en los tejidos linfoides de todos los vertebrados y, al igual que las clulas B y las clulas T :, tiene receptores de clula T muy diversificados. En cambio, las clulas T : intraepiteliales ocurren de modo variable en diferentes vertebrados, y por lo general despliegan receptores de diversidad muy limitada, en particular en la piel y en las vas reproductoras femeninas de ratones, donde las clulas T : son en esencia homogneas en cualquier sitio. Con base en su diversidad limitada y ausencia de recirculacin, se ha propuesto que las clulas T : intraepiteliales pueden reconocer ligandos que se derivan del epitelio en el cual residen, pero que slo se expresan cuando una clula ha quedado infectada. Los ligandos candidato son protenas de choque trmico, molculas del MHC de clase Ib (cap. 5), y nucletidos y fosfolpidos no ortodoxos; hay evidencia de reconocimiento de todos estos ligandos por clulas T :. A diferencia de las clulas T :, las clulas T : en general no reconocen a antgenos como pptidos presentados por molculas del MHC; en lugar de eso, parecen reconocer sus antgenos blanco de manera directa y, as, podran reconocer, y responder con rapidez a molculas expresadas por muchos tipos de clulas. El reconocimiento de molculas expresadas como consecuencia de infeccin, ms que el reconocimiento de antgenos especficos para patgenos en s, distinguira entre las clulas T : intraepiteliales y otros linfocitos, y las colocara en la clase similar a innata. Otro subgrupo de linfocitos con receptores de antgeno de diversidad limitada es el subgrupo B-1 de clulas B. Las clulas B-1 se distinguen de otras clulas B por la protena de superficie celular CD5, y tienen propiedades que difieren mucho de las de las clulas B convencionales que median la inmunidad humoral adaptativa. Las clulas B-1 son en muchos aspectos anlogas a las clulas T : intraepiteliales: surgen en etapas tempranas del desarrollo embrionario, usan un grupo

102

Captulo 2: Inmunidad innata

La clula B-1 se une a polisacrido capsular bacteriano de componentes de la pared celular y recibe una seal (IL-5) proveniente de clulas accesorias IL-5

clula B-1

Las clula B-1 secretan anticuerpos IgM antipolisacrido

lgM

La IgM se une a la cpsula de polisacrido

Activacin del complemento y eliminacin de bacterias

Fig. 2-62. Las clulas B-1 podran tener importancia en la respuesta a antgenos de carbohidrato, como los polisacridos bacterianos. Estas respuestas ocurren con rapidez; aparecen anticuerpos en el transcurso de 48 h despus de la infeccin, probablemente porque hay una frecuencia alta de precursores de los linfocitos que muestran respuesta, de modo que se requiere poca expansin clonal. Al contrario de las respuestas a muchos otros antgenos, sta no necesita la ayuda de clulas T. En ausencia de dicha ayuda, slo se sintetiza IgM (por razones que se explican en el captulo 9) y, en los ratones, dichas respuestas eliminan, por lo tanto, bacterias principalmente mediante la activacin del complemento, cuya eficiencia es ptima cuando el anticuerpo es del isotipo IgM.

distintivo y limitado de reordenamientos de gen para sintetizar a sus receptores, se autorrenuevan en tejidos fuera de los rganos linfoides centrales, y son el linfocito que predomina en un microambiente particular, las cavidades peritoneal y pleural. Las clulas B-1 parecen formar respuestas de anticuerpo principalmente a antgenos polisacridos, y pueden producir anticuerpos de la clase IgM sin necesitar la ayuda de clulas T (fig. 2-62). Si bien estas respuestas pueden aumentarse por clulas T, aparecen por vez primera en el transcurso de 48 h despus de la exposicin a antgeno y, as, las clulas T no pueden participar. De este modo, las clulas B-1 no son activas en una respuesta inmunitaria adaptativa especfica para antgeno. La falta de una interaccin especfica para antgeno con clulas T auxiliares podra explicar por qu no se genera memoria inmunitaria como resultado de respuestas de clulas B-1: las exposiciones repetidas al mismo antgeno desencadenan respuestas similares, o disminuidas, con cada exposicin. Por ende, estas respuestas, aunque generadas por linfocitos con receptores que se reordenan, semejan respuestas inmunitarias innatas ms que adaptativas. Al igual que con las clulas T :, la funcin precisa de las clulas B-1 en la respuesta del hospedador es incierta. Los ratones con deficiencia de clulas B-1 son ms susceptibles a infeccin por Streptococcus pneumoniae porque no producen un anticuerpo antifosfocolina que proporciona proteccin contra esta bacteria. Una fraccin importante de las clulas B-1 puede producir anticuerpos de esta especificidad, y dado que no es necesaria la ayuda de clulas T especficas para antgeno, puede producirse una respuesta potente en etapas tempranas de la infeccin por dicho patgeno. Hay dudas respecto a si las clulas B-1 de seres humanos tienen la misma funcin. Las clulas T NK son un tercer subgrupo de ILL; se encuentran en el timo y en rganos linfoides perifricos. Dichas clulas expresan una cadena de receptor de clulas T invariable, pareada con una de tres cadenas diferentes, y tienen la capacidad de reconocer antgenos glucolpidos. La principal respuesta de las clulas T NK parece ser la secrecin rpida de citocinas, entre ellas IL-4, IL-10 e IFN-, y se cree que tales clulas pueden tener una funcin principalmente reguladora. En el captulo 10 se mencionan nuevamente dichas clulas. Desde una perspectiva evolutiva, es interesante notar que las clulas T : parecen defender las superficies del cuerpo, mientras que las clulas B-1 defienden las cavidades del mismo. Ambos tipos tienen limitacin relativa de su rango de especificidades y de la eficiencia de sus respuestas; es posible que representen una fase transicional en la evolucin de la respuesta inmunitaria adaptativa, al defender los dos compartimientos principales de los organismos primitivos: las superficies epiteliales y las cavidades del cuerpo. No est claro si an son trascendentales para la defensa del hospedador o si representan una reliquia evolutiva. Como quiera que sea, dado que cada tipo de clula es prominente en ciertos sitios del cuerpo, y contribuye a respuestas contra ciertos patgenos, deben incorporarse en el pensamiento acerca de defensa del hospedador. Un componente final de las defensas inmunitarias innatas del cuerpo son los anticuerpos IgM que se conocen como anticuerpos naturales. Esta IgM natural se codifica por genes reordenados que codifican para anticuerpos que no han sufrido ms diversificacin por el proceso conocido como hipermutacin somtica (cap. 4). En seres humanos, constituye una cantidad considerable de la IgM circulante, y no parece ser la consecuencia de una respuesta inmunitaria adaptativa especfica para antgenos a la infeccin. Tiene baja afinidad para muchos patgenos, y mucha reactividad cruzada; incluso se une a algunas molculas propias. Adems, se desconoce si se produce en respuesta a la flora normal de las superficies epiteliales del cuerpo o en respuesta a lo propio. No obstante, puede tener una participacin en la defensa del hospedador contra Streptococcus pneumoniae al unirse a la fosfocolina en la envoltura de la clula bacteriana, lo que da pie a eliminacin de las bacterias antes de que se hagan peligrosas.

Resumen
En la inmunidad innata se usan diversos mecanismos efectores para eliminar una infeccin o, cuando esto fracasa, para mantenerla a raya en tanto el sistema inmu-

Resumen del captulo 2

103

nitario adaptativo puede reconocer el patgeno. Tales mecanismos efectores se regulan por sistemas de receptores codificados por lnea germinal que tienen la capacidad para distinguir entre molculas propias normales sobre clulas no infectadas, y ligandos extraos infecciosos. De tal manera, la capacidad de los fagocitos para distinguir entre lo propio y patgenos controla su liberacin de quimiocinas y citocinas proinflamatorias que actan juntas para reclutar ms clulas fagocticas hacia el sitio de infeccin. En especial es notorio el reclutamiento temprano de neutrfilos que pueden reconocer patgenos de modo directo. Ms an, las citocinas liberadas por clulas fagocticas hsticas inducen fiebre, la produccin de protenas de respuesta de fase aguda, incluso la lectina de unin a manosa y la protena C reactiva de unin a patgeno, y la movilizacin de clulas presentadoras de antgeno que inducen la respuesta inmunitaria adaptativa. Los virus patgenos son reconocidos por clulas en las cuales se replican, lo que lleva a la produccin de interferones que sirven para inhibir la replicacin vrica y para activar linfocitos NK, que a su vez pueden distinguir entre clulas infectadas y no infectadas. Como se menciona ms adelante en este libro, las citocinas, quimiocinas, clulas fagocticas y linfocitos NK son mecanismos efectores que tambin se emplean en la respuesta inmunitaria adaptativa, que usa receptores variables para dirigirse a antgenos de patgenos especficos.

Resumen del captulo 2


El sistema innato de defensa del hospedador contra infeccin consta de varios componentes. El primero de stos son las funciones de barrera de los epitelios del cuerpo, que pueden simplemente evitar el establecimiento de una infeccin. A continuacin, hay clulas y molculas disponibles para controlar o destruir el patgeno una vez que ha violado las defensas epiteliales. Las ms importantes son los macrfagos hsticos, que median la defensa celular de las fronteras. El entendimiento de la forma en que el sistema inmunitario innato reconoce patgenos est creciendo con rapidez, y estudios estructurales, como los de la lectina de unin a manosa, han empezado a revelar en detalle de qu modo los receptores de la inmunidad innata pueden distinguir entre superficies de patgeno y las de clulas hospedadoras. Adems, la identificacin del receptor para LPS bacteriano y su enlace con el TLR-4 humano ha abierto una ventana hacia el reconocimiento inmunitario innato de patrones moleculares relacionados con microbios. El reconocimiento por el sistema inmunitario innato conduce a la eliminacin de patgenos invasores por medio de diversos mecanismos efectores. Casi todos stos se han conocido durante un periodo prolongado; de hecho, la eliminacin de microorganismos mediante fagocitosis fue la primera respuesta inmunitaria que se observ. De cualquier modo, todo el tiempo se aprenden ms cosas; por ejemplo, slo durante 15 aos se ha sabido acerca de las quimiocinas, y ahora se han descubierto ms de 50 protenas quimiocina. El sistema de protenas del complemento media la inmunidad innata humoral de los espacios de tejido y la sangre. Est claro que la induccin de mecanismos efectores potentes con base en el reconocimiento inmunitario innato por medio de receptores codificados por lnea germinal tiene ciertos peligros. De hecho, la espada de dos filos comprendida por los efectos de la citocina TNF- (beneficiosa cuando se libera localmente pero desastrosa con su liberacin sistmica) ilustra el filo del cuchillo a lo largo del cual viajan todos los mecanismos innatos de defensa del hospedador. El sistema inmunitario innato se considera un sistema de defensa que evita principalmente el establecimiento de un foco de infeccin; con todo, aun cuando es inadecuado para esta funcin, prepara el terreno para la respuesta inmunitaria adaptativa, que forma una parte esencial de la defensa del hospedador en seres humanos. De esta manera, una vez introducido el estudio de la inmunologa con una consideracin de la funcin inmunitaria innata, ahora se dirigir la atencin hacia la respuesta inmunitaria adaptativa. sta ha sido el enfoque de casi todos los estudios en inmunologa, porque es mucho ms fcil de seguir, y de hacer experimentos al respecto al usar reactivos y respuestas especficos para antgenos definidos.

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Captulo 2: Inmunidad innata

Preguntas
2-1 En el sistema inmunitario innato se utilizan dos estrategias para identicar patgenos: el reconocimiento de lo extrao, y el reconocimiento de lo propio. a) D ejemplos de cada una, y comente de qu modo cada ejemplo contribuye a la capacidad del organismo para protegerse a s mismo contra infeccin. b) Cules son las desventajas de estas diferentes estrategias? 2-2 El sistema de complemento da lugar a seales inamatorias, opsoninas y molculas que lisan bacterias de manera directa. a) Describa las propiedades generales de cada clase, y comente su utilidad en la defensa del hospedador. b) Diga cul cree que es ms importante en la defensa del hospedador, y por qu. 2-3 Los receptores Toll representan las vas ms antiguas de defensa del hospedador. Esta declaracin est justicada? Explique su respuesta. 2-4 Elie Metchniko descubri la funcin protectora de los macrfagos al observar qu sucedi en una estrella de mar lesionada con una espina de erizo de mar. Describa la secuencia de eventos que seguiran si usted sufriera un pinchazo por una espina de erizo de mar. 2-5 El sistema del complemento es una cascada de enzimas que tiene la capacidad de producir efectos nocivos potentes. a) De qu modo se aprovecha el complemento para proteger al ser humano en lugar de crear dao? b) Qu sucede cuando las cosas salen mal? 2-6 Durante su desarrollo y para realizar sus diversas funciones con ecacia, las clulas del sistema inmunitario deben encontrar su camino hacia la parte correcta del cuerpo. Cmo se las arreglan para hacer esto?

Referencias generales
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Salyers, A.A., and Whitt, D.D.: Bacterial Pathogenesis: A Molecular Approach. Washington, DC, ASM Press, 1994. 2-2 Los agentes infecciosos deben vencer defensas innatas del hospedador para establecer un foco de infeccin

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Referencias de seccin
2-1 Las enfermedades infecciosas son causadas por diversos agentes vivos que se replican en sus hospedadores

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Despus de penetrar en los tejidos, muchos patgenos son reconocidos, ingeridos y destruidos por fagocitos

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Los efectos del lipopolisacrido bacteriano sobre macrfagos estn mediados por unin de CD14 a TLR-4

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Las protenas NOD actan como detectores intracelulares de infeccin bacteriana

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Receptores con especicidad para molculas de patgeno reconocen modelos de motivos estructurales repetitivos

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2-11 El complemento es un sistema de protenas plasmticas que se activa por la presencia de patgenos Tomlinson, S.: Complement defense mechanisms. Curr. Opin. Immunol. 1993, 5:8389.

2-17 Las protenas de membrana y plasmticas que regulan la formacin y estabilidad de convertasas C3 determinan la extensin de la activacin del complemento en diferentes circunstancias Fishelson, Z., Donin, N., Zell, S., Schultz, S., and Kirschnk, M.: Obstacles to cancer immunotherapy: expression of membrane complement regulatory proteins (mCRPs) in tumors. Mol. Immunol. 2003, 40:109123. Golay, J., Zaffaroni, L., Vaccari, T., Lazzari, M., Borleri, G.M., Bernasconi, S., Tedesco, F., Rambaldi, A., Introna, M.: Biologic response of B lymphoma cells to anti-CD20 monoclonal antibody rituximab in vitro: CD55 and CD59 regulate complement-mediated cell lysis. Blood 2000, 95:39003908. Spiller, O.B., Criado-Garcia, O., Rodriguez De Cordoba, S., and Morgan, B.P.: Cytokine-mediated up-regulation of CD55 and CD59 protects human hepatoma cells from complement attack. Clin. Exp Immunol. 2000, 121:234241. Varsano, S., Frolkis, I., Rashkovsky, L., Ophir, D., and Fishelson, Z.: Protection of human nasal respiratory epithelium from complement-mediated lysis by cellmembrane regulators of complement activation. Am. J. Respir. Cell Mol. Biol. 1996, 15:731737.

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2-13 La va clsica se inicia mediante activacin del complejo C1 Arlaud, G.J., Gaboriaud, C., Thielens, N.M., Budayova-Spano, M., Rossi, V., and Fontecilla-Camps, J.C.: Structural biology of the C1 complex of complement unveils the mechanisms of its activation and proteolytic activity. Mol. Immunol. 2002, 39:383394. Cooper, N.R.: The classical complement pathway. Activation and regulation of the rst complement component. Adv. Immunol. 1985, 37:151216. 2-14 La va de la lectina es homloga a la va clsica Dodds, A.W.: Which came rst, the lectin/classical pathway or the alternative pathway of complement? Immunobiology 2002, 205:340354. Gal, P., and Ambrus, G.: Structure and function of complement activating enzyme complexes: C1 and MBL-MASPs. Curr. Protein Pept. Sci. 2001, 2:43 59. Jack, D.L., Klein, N.J., and Turner, M.W.: Mannose-binding lectin: targeting the microbial world for complement attack and opsonophagocytosis. Immunol. Rev. 2001, 180:8699. Lu, J., Teh, C., Kishore, U., and Reid, K.B.: Collectins and colins: sugar pattern recognition molecules of the mammalian innate immune system. Biochim. Biophys. Acta 2002, 1572:387400. Rabinovich, G.A., Rubinstein, N., and Toscano, M.A.: Role of galectins in inammatory and immunomodulatory processes. Biochim. Biophys. Acta 2002, 1572:274284. Schwaeble, W., Dahl, M.R., Thiel, S., Stover, C., and Jensenius, J.C.: The mannan-binding lectin-associated serine proteases (MASPs) and MAp19: four components of the lectin pathway activation complex encoded by two genes. Immunobiology 2002, 205:455466. 2-15 La activacin de complemento est connada en su mayor parte a la supercie sobre la cual se inicia Cicardi, M., Bergamaschini, L., Cugno, M., Beretta, A., Zingale, L.C., Colombo, M., and Agostoni, A.: Pathogenetic and clinical aspects of C1 inhibitor deciency. Immunobiology 1998, 199:366376. 2-16 La hidrlisis de C3 inicia la va alternativa del complemento Fijen, C.A., van den Bogaard, R., Schipper, M., Mannens, M., Schlesinger, M., Nordin, F.G., Dankert, J., Daha, M.R., Sjoholm, A.G., Truedsson, L., and Kuijper, E.J.: Properdin deciency: molecular basis and disease association. Mol. Immunol. 1999, 36:863867.

2-18 La convertasa C3 unida a supercie deposita grandes nmeros de fragmentos de C3b sobre las supercies de patgenos, y genera actividad de convertasa C5 Rawal, N., and Pangburn, M.K.: Structure/function of C5 convertases of complement. Int. Immunopharmacol. 2001, 1:415422.

2-19 La fagocitosis de patgenos marcados con complemento est mediada por receptores de protenas del complemento Ehlers, M.R.: CR3: a general purpose adhesion-recognition receptor essential for innate immunity. Microbes Infect. 2000, 2:289294. Fijen, C.A., Bredius, R.G., Kuijper, E.J., Out, T.A., De Haas, M., De Wit, A.P., Daha, M.R., and De Winkel, J.G.: The role of Fcg receptor polymorphisms and C3 in the immune defence against Neisseria meningitidis in complement-decient individuals. Clin. Exp. Immunol. 2000, 120:338345. Linehan, S.A., Martinez-Pomares, L., and Gordon, S.: Macrophage lectins in host defence. Microbes Infect. 2000, 2:279288. Ravetch, J.V.: A full complement of receptors in immune complex diseases. J. Clin. Invest. 2002, 110:17591761. Ross, G.D.: Regulation of the adhesion versus cytotoxic functions of the Mac-1/CR3aMb2-integrin glycoprotein. Crit. Rev. Immunol. 2000, 20:197222. 2-20 Fragmentos pequeos de algunas protenas del complemento pueden iniciar una respuesta inamatoria local Kildsgaard, J., Hollmann, T.J., Matthews, K.W., Bian, K., Murad, F., and Wetsel, R.A.: Cutting edge: targeted disruption of the C3a receptor gene demonstrates a novel protective anti-inammatory role for C3a in endotoxin-shock. J. Immunol. 2000, 165:54065409. Kohl, J.: Anaphylatoxins and infectious and noninfectious inammatory diseases. Mol. Immunol. 2001, 38:175187. Monsinjon, T., Gasque, P., Ischenko, A., and Fontaine, M.: C3A binds to the seven transmembrane anaphylatoxin receptor expressed by epithelial cells and triggers the production of IL-8. FEBS Lett. 2001, 487:339346. Schraufstatter, I.U., Trieu, K., Sikora, L., Sriramarao, P., and DiScipio, R.: Complement c3a and c5a induce different signal transduction cascades in endothelial cells. J. Immunol. 2002, 169:21022110.

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Captulo 2: Inmunidad innata

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PARTE II

El reconocimiento de antgenos
Captulo 3 Reconocimiento de antgenos por receptores de clulas B y clulas T
Estructura de una molcula de anticuerpo tpica Interaccin de la molcula de anticuerpo con antgenos especficos Reconocimiento de antgenos por clulas T

Captulo 4

Generacin de receptores de antgenos de los linfocitos


Reordenamiento primario de genes codificadores de inmunoglobulinas Reordenamiento de los genes de receptores de las clulas T Variacin estructural de las regiones constantes de las inmunoglobulinas Diversificacin secundaria del repertorio de anticuerpos

Captulo 5

Presentacin del antgeno a los linfocitos T


Generacin de ligandos de receptor de clula T El complejo principal de histocompatibilidad y sus funciones

111

Reconocimiento de antgenos por receptores de clulas B y clulas T


Las respuestas inmunitarias innatas al inicio defienden al cuerpo contra la infeccin, pero stas slo funcionan para controlar agentes patgenos que tienen ciertos modelos moleculares o que inducen interferones y otras defensas secretadas no especficas (cap. 2). Para combatir con eficacia la amplia gama de agentes patgenos con la que un individuo se encuentra, los linfocitos del sistema inmunitario adaptativo han evolucionado para reconocer una gran variedad de antgenos provenientes de bacterias, virus y otros organismos que causan enfermedad. Las molculas de reconocimiento de antgeno de las clulas B son las inmunoglobulinas (Ig). Estas protenas se producen por las clulas B en una vasta gama de especificidades de antgeno; cada clula B produce inmunoglobulina de especificidad nica (secciones 1-11 y 1-12). La inmunoglobulina unida a membrana sobre la superficie de clulas B sirve como el receptor de la clula para antgeno, y se conoce como receptor de clulas B (BCR). La inmunoglobulina de la misma especificidad de antgeno se secreta como anticuerpo por clulas B terminales diferenciadas, las clulas plasmticas. La secrecin de anticuerpos, que se unen a agentes patgenos o sus productos txicos en los espacios extracelulares del cuerpo, es la principal funcin efectora de las clulas B en la inmunidad adaptativa. Los anticuerpos fueron las primeras molculas involucradas en el reconocimiento inmunitario especfico que se caracterizaron, y an son las que se entienden mejor. La molcula de anticuerpo tiene dos funciones: una es unirse de manera especfica a molculas del agente patgeno que desencadenaron la respuesta inmunitaria; la otra es reclutar otras clulas y molculas para destruir dicho agente una vez que el anticuerpo est unido a l. Por ejemplo, la unin por anticuerpo neutraliza virus y marca agentes patgenos para destruccin por fagocitos y complemento (seccin 1-18). Las funciones de reconocimiento y efectoras estn separadas de forma estructural en la molcula de anticuerpo, una parte del cual se une de modo especfico al antgeno mientras que la otra emprende los diversos mecanismos de eliminacin. La regin de unin a antgeno vara mucho entre molculas de anticuerpo y, as, se conoce como la regin variable o regin V. La variabilidad de las molculas de anticuerpo permite que cada anticuerpo se una a un antgeno especfico diferente, y el repertorio total de anticuerpos sintetizados por un individuo es suficientemente grande para asegurar que pueda reconocerse casi cualquier estructura. La regin de la molcula de anticuerpo que emprende las funciones efectoras del sistema inmunitario no vara de la misma manera por lo que se conoce como regin constante o regin C. Tiene cinco formas principales, cada una de las cuales se especializa para activar diferentes mecanismos efectores. El receptor de clulas B unido a membrana carece de estas funciones efectoras, porque la regin C permanece insertada en la membrana de la clula B. Su funcin es reconocer antgenos y unirse a ellos por medio de las regiones V expuestas sobre la superficie de la clula, lo que transmite una seal que causa activacin de clula B y lleva a expansin clonal y produccin de anticuerpos especficos. Las molculas de reconocimiento de antgenos de clulas T estn hechas nicamente como protenas de unin a membrana y slo funcionan para emitir seales hacia clulas T para activacin. Estos receptores de clulas T (TCR) se

112

Captulo 3: Reconocimiento de antgenos por receptores de clulas B y clulas T

a
sitios de unin a antgenos
CL VH CH1

VL

bisagra
CH2 CH3

enlaces disulfuro carbohidrato

b
Extremo amino

Regin variable

enlaces disulfuro

Regin constante

relacionan con inmunoglobulinas en su estructura de protena (tienen regiones V y C) y en el mecanismo gentico que produce su gran variabilidad (cap. 4). Sin embargo, los receptores de clulas T difieren de los de clulas B de modo importante: no reconocen ni se unen a antgenos de manera directa, sino que reconocen fragmentos peptdicos cortos de antgenos protenicos, que estn unidos a protenas conocidas como molculas del MHC sobre la superficie de clulas. Las molculas del MHC son glucoprotenas codificadas en la agrupacin grande de genes conocida como el complejo principal de histocompatibilidad (MHC). Su caracterstica estructural ms notoria es una hendidura que corre a travs de su superficie exterior, en la cual pueden unirse diversos pptidos. Las molculas del MHC son muy polimrficas: es decir, cada tipo de molcula del MHC ocurre en muchas versiones diferentes dentro de la poblacin. Por ende, la mayora de las personas es heterocigota para las molculas del MHC: expresan dos formas diferentes de cada tipo de esta molcula, lo que aumenta el rango de pptidos derivados de agente patgeno a los que pueden unirse. Los receptores de clulas T reconocen caractersticas en los antgenos peptdicos y en la molcula del MHC al cual se encuentran unidos. Esto introduce una dimensin adicional al reconocimiento de antgenos por clulas T, conocida como restriccin por MHC, porque cualquier receptor de clulas T dado es especfico para antgenos peptdicos extraos y para una combinacin singular de un pptido y una molcula del MHC particular. El polimorfismo de MHC y sus consecuencias para el reconocimiento de antgenos por clulas T y el desarrollo de stas se revisan en los captulos 5 y 7, respectivamente. El presente captulo se enfoca en la estructura y propiedades de unin a antgenos de inmunoglobulinas y receptores de clulas T. Ambos receptores tambin se relacionan con complejos de emisin de seales intracelulares, que transmiten la seal de unin a antgenos hacia adelante a las clulas (cap. 6). Aun cuando las clulas B y T reconocen molculas extraas de distintos modos, las molculas receptoras que realizan esta tarea tienen estructura muy similar. Se revisa la forma en que esta estructura bsica puede acomodar gran variabilidad de especificidad de antgenos, y cmo permite que las inmunoglobulinas y los receptores de clulas T desempeen sus funciones como las molculas de reconocimiento de antgenos de la respuesta inmunitaria adaptativa.

Extremo carboxilo

Estructura de una molcula de anticuerpo tpica


Los anticuerpos son la forma secretada de los receptores de clulas B. Dado que son solubles y se secretan en grandes cantidades, se obtienen y estudian con facilidad. Por tal razn, la mayor parte de lo que se conoce acerca del receptor de clulas B proviene del estudio de anticuerpos. Las molculas de anticuerpo tienen grandes rasgos en forma de Y, y constan de tres porciones de igual tamao, conectadas por una cuerda flexible. En la figura 3-1 se muestran tres representaciones esquemticas de la estructura de anticuerpo, que se han determinado mediante cristalografa con rayos X. El objetivo de esta parte del captulo es explicar de qu modo se forma dicha estructura y cmo permite que las molculas de anticuerpo desempeen su doble funcin (unirse a una amplia variedad de antgenos y unirse a un nmero limitado de molculas y clulas efectoras). Como se revisa, cada una de estas tareas se realiza por partes separadas de la molcula. Los dos extremos de la Y terminan en regiones que varan entre diferentes molculas de anticuerpo, las regiones V. stas participan en la unin a antgenos, mientras que el tallo de la Y, o la regin C, es mucho menos variable, y es la parte que interacta con clulas y molculas efectoras. Todos los anticuerpos estn construidos de la misma manera a partir de cadenas de polipptidos pesadas y ligeras pareadas, y para todas esas protenas se utiliza el trmino genrico inmunoglobulina. En esta categora general pueden distinguirse cinco clases de inmunoglobulinas, IgM, IgD, IgG, IgA e IgE, por su regin C. Diferencias ms sutiles confinadas a la regin V explican la especificidad

Fig. 3-1. Estructura de una molcula de anticuerpo. El panel a ilustra un diagrama de listones basado en la estructura de un anticuerpo IgG en la cristalografa de rayos X; muestra la trayectoria de los esqueletos de las cadenas polipeptdicas. Tres regiones globulares forman una estructura en forma de Y. Los dos sitios de unin a antgenos estn en los extremos de los brazos, que se encuentran fijos al tronco de la Y por una regin bisagra flexible. En el panel b se muestra una representacin esquemtica de la estructura del panel a; ilustra la composicin de cuatro cadenas y los dominios separados que forman cada una. En el panel c se muestra una representacin esquemtica simplificada de una molcula de anticuerpo que se utiliza en todo este libro. Extremo C, extremo carboxilo; Extremo N, extremo amino. Panel a, cortesa de A. McPherson y L. Harris.

Estructura de una molcula de anticuerpo tpica

113

de la unin a antgenos. Se utiliza la molcula de anticuerpo IgG como un ejemplo para describir las caractersticas estructurales generales de las inmunoglobulinas.

3-1

Los anticuerpos IgG constan de cuatro cadenas de polipptidos

cadena ligera
enlaces disulfuro

Los anticuerpos IgG son molculas grandes con un peso molecular de alrededor de 150 kDa, y estn compuestos de dos clases de cadenas de polipptidos. Una, de casi 50 kDa, se denomina cadena pesada o H, y la otra, de 25 kDa se llama cadena ligera o L (fig. 3-2). Cada molcula de IgG consta de dos cadenas pesadas y dos ligeras. Las dos primeras se unen entre s por enlaces disulfuro, y cada cadena pesada se enlaza a una ligera por medio de un enlace disulfuro. En cualquier molcula de inmunoglobulina, son idnticas las dos cadenas pesadas y las dos cadenas ligeras, lo que da a una molcula de anticuerpo dos sitios de unin a antgenos idnticos (fig. 3-1) y, as, la capacidad para unirse al mismo tiempo a dos estructuras idnticas. En los anticuerpos se encuentran dos tipos de cadena ligera, llamados lambda () y kappa (). Las inmunoglobulinas tienen cadenas o , nunca una de cada una. No se ha encontrado diferencia funcional entre anticuerpos que tienen cadenas ligeras o , y uno u otro tipo de cadena ligera puede encontrarse en anticuerpos de cualquiera de las cinco clases principales. La proporcin de los dos tipos de cadenas ligeras vara de una especie a otra. En ratones, la proporcin promedio entre y es de 20:1, mientras que en seres humanos es de 2:1, y en ganado vacuno es de 1:20. Se desconoce a qu se debe esta variacin. Las deformaciones de esta proporcin a veces pueden utilizarse para detectar la proliferacin anormal de una clona de clulas B. Todas estas expresaran la cadena ligera idntica y, as, un exceso de cadenas ligeras en una persona podra indicar la presencia de un tumor de clulas B que est produciendo cadenas . La clase, y por tanto la funcin efectora de un anticuerpo, se define por la estructura de su cadena pesada. Hay cinco clases principales de cadena pesada o isotipos, algunas de las cuales tienen varios subtipos, y stos determinan la actividad funcional de una molcula de anticuerpo. Las cinco clases principales de inmunoglobulina son inmunoglobulina M (IgM), inmunoglobulina D (IgD), inmunoglobulina G (IgG), inmunoglobulina A (IgA) e inmunoglobulina E (IgE). Sus cadenas pesadas se denotan por la letra griega minscula correspondiente (, , , y , respectivamente). IgG es con mucho la inmunoglobulina ms abundante y tiene varias subclases (IgG1, 2, 3 y 4 en seres humanos). Sus propiedades funcionales distintivas son conferidas por la parte carboxilo terminal de la cadena pesada, donde no se relaciona con la cadena ligera. En el captulo 4 se describen la estructura y funciones de los diferentes isotipos de cadena pesada. Las caractersticas estructurales generales de todos los isotipos son similares, y se considera a la IgG el isotipo ms abundante en el plasma, una molcula de anticuerpo tpica. La estructura de receptor de clulas B es idntica a la de su anticuerpo correspondiente salvo por una pequea porcin del grupo carboxilo terminal de la regin C de la cadena pesada. En el receptor de clulas B el carboxilo terminal es una secuencia hidrfoba que fija la molcula en la membrana, y en el anticuerpo es una secuencia hidrfoba que permite secrecin.

cadena pesada

Fig. 3-2. Las molculas de inmunoglobulina estn formadas por dos tipos de cadenas protenicas: cadenas pesadas y cadenas ligeras. Cada molcula de inmunoglobulina consta de dos cadenas pesadas (verde) y dos cadenas ligeras (amarillo) unidas por enlaces disulfuro, de manera que cada cadena pesada est enlazada a una cadena ligera y las dos cadenas pesadas estn enlazadas entre s.

3-2

Las cadenas pesadas y ligeras de inmunoglobulina se componen de regiones constante y variable

Se han determinado las secuencias de aminocidos de muchas cadenas pesadas y ligeras de inmunoglobulina, y revelan dos caractersticas importantes de las molculas de anticuerpo. En primer lugar, cada cadena consta de una serie de secuencias similares, aunque no idnticas, cada una de alrededor de 110 aminocidos de largo. Cada una de estas repeticiones corresponde a una regin distinta, plegada de modo compacto, de estructura protenica conocida como un dominio de pro-

114

Captulo 3: Reconocimiento de antgenos por receptores de clulas B y clulas T

tena. La cadena ligera est formada de dos de esos dominios de inmunoglobulina, mientras que la cadena pesada del anticuerpo IgG contiene cuatro (fig. 3-1a). Esto sugiere que las cadenas de inmunoglobulina han evolucionado mediante duplicacin repetida de un gen ancestral que corresponde a un dominio nico. La segunda caracterstica importante revelada por comparaciones de secuencias de aminocidos es que las secuencias amino terminal de las cadenas pesadas y ligeras varan mucho entre diferentes anticuerpos. La variabilidad de la secuencia se limita a casi los primeros 110 aminocidos, lo que corresponde al primer dominio, mientras que los dominios restantes son constantes entre cadenas de inmunoglobulina del mismo isotipo. Los dominios variables del grupo amino terminal (dominios V) de las cadenas pesadas y ligeras (VH y VL, respectivamente) juntos conforman la regin V del anticuerpo y le confieren la capacidad para unirse a antgenos especficos, mientras que los dominios constantes (dominios C) de las cadenas pesadas y ligeras (CH y CL, respectivamente) constituyen la regin C (fig. 3-1b y c). Los mltiples dominios C de cadenas pesadas se enumeran desde el extremo amino terminal hasta el grupo carboxilo terminal, por ejemplo, CH1, CH2, y as de manera sucesiva.

3-3

La molcula de anticuerpo se puede dividir con facilidad hacia fragmentos distintos desde el punto de vista funcional

Los dominios de protenas antes descritos se asocian para formar dominios globulares de mayor tamao. De esta manera, cuando est por completo plegada y montada, una molcula de anticuerpo comprende tres porciones globulares de igual tamao unidas por un tramo flexible de cadena de polipptido conocido como regin bisagra (fig. 3-1b). Cada extremo de esta estructura en Y est formado por la asociacin de una cadena ligera con la mitad amino terminal de una cadena pesada, mientras que el tronco de la Y se forma por el pareado de las mitades grupo carboxilo terminal de las dos cadenas pesadas. La asociacin de las cadenas pesadas y ligeras es tal que los dominios VH y VL estn pareados, al igual que los dominios CH1 y CL. Los dominios CH3 forman pares entre s, pero los dominios CH2 no interactan; las cadenas laterales de carbohidratos fijas a los dominios CH2 yacen entre las dos cadenas pesadas. Los dos sitios de unin a antgenos estn formados por los dominios VH y VL pareados en los extremos de los dos brazos de la Y (fig. 3-1b). Las enzimas proteolticas (proteasas) que causan escisin de secuencias de polipptido se han utilizado para disecar la estructura de molculas de anticuerpo y determinar las partes de la molcula de las que dependen sus diversas funciones. La digestin limitada con la proteasa papana ocasiona escisin de molculas de anticuerpo en tres fragmentos (fig. 3-3). Dos fragmentos son idnticos y contienen la actividad de unin a antgenos. stos se denominan fragmentos Fab, sigla que significa fragmento de unin a antgenos (fragment antigen binding). Dichos fragmentos corresponden a los dos brazos idnticos de la molcula de anticuerpo, cada uno de los cuales consta de una cadena ligera completa pareada con los dominios VH y CH1 de una cadena pesada. El otro fragmento no contiene actividad de unin a antgenos, pero al inicio se observ que se cristaliza con facilidad, y por tal razn se le nombr fragmento Fc, que significa Fragmento cristalizable. Este fragmento corresponde a los dominios CH2 y CH3 pareados, y es la parte de la molcula de anticuerpo que interacta con molculas y clulas efectoras. Las diferencias funcionales entre isotipos de cadena pesada yacen principalmente en el fragmento Fc. Los fragmentos de protena obtenidos despus de protelisis estn determinados por el sitio en el cual la proteasa corta la molcula de anticuerpo en relacin con los enlaces disulfuro que enlazan las dos cadenas pesadas. stos yacen en la regin bisagra entre los dominios CH1 y CH2, y la papana divide a la molcula de anticuerpo en el lado amino terminal de los enlaces disulfuro (fig. 3-3). Esto libera los dos brazos del anticuerpo como fragmentos Fab separados, mientras que en el fragmento Fc las mitades del grupo carboxilo terminal de las cadenas pesadas permanecen enlazadas.

Estructura de una molcula de anticuerpo tpica

115

Divisin proteoltica por medio de papana

Fab

Fab

Fc

Fig. 3-3. La molcula de inmunoglobulina en forma de Y puede disecarse mediante digestin parcial con proteasas. Paneles superiores: la papana divide a la molcula de inmunoglobulina en tres piezas, dos fragmentos Fab y un fragmento Fc. El primero contiene las regiones V y se une a antgenos. El fragmento Fc es cristalizable y contiene regiones C. Paneles inferiores: la pepsina divide la inmunoglobulina para generar un fragmento F(ab)2 y numerosas piezas pequeas del fragmento Fc, la ms grande de las cuales se denomina fragmento pFc. F(ab)2 se escribe con un smbolo prima porque contiene algunos aminocidos ms que Fab, incluyendo las cistenas que forman los enlaces disulfuro.

Divisin proteoltica por medio de pepsina

F(ab ) 2

pFc

Otra proteasa, la pepsina, corta en la misma regin general de la molcula de anticuerpo que la papana, pero en el lado carboxilo terminal de los enlaces disulfuro (fig. 3-3). Esto produce un fragmento, el fragmento F(ab)2, en el cual los dos brazos de unin a antgenos de la molcula de anticuerpo permanecen enlazados. En este caso la parte restante de la cadena pesada se corta en varios fragmentos pequeos. El fragmento F(ab)2 tiene exactamente las mismas caractersticas de unin a antgenos que el anticuerpo original, pero es incapaz de interactuar con cualquier molcula efectora. De este modo, tiene valor potencial en las aplicaciones teraputicas de anticuerpos, as como en la investigacin acerca de la funcin de la porcin Fc. Las tcnicas de ingeniera gentica ahora tambin permiten la construccin de muchas molculas relacionadas con anticuerpo diferentes. Un tipo importante es un Fab truncado que comprende el dominio V de una cadena pesada enlazado por medio de un tramo de pptido sinttico a un dominio V de una cadena ligera. Esto se llama Fv de cadena nica, que significa Fragmento variable. Las molculas Fv pueden convertirse en agentes teraputicos valiosos por su pequeez, que les permite penetrar con facilidad en tejidos. Por ejemplo, molculas Fv especficas para antgenos tumorales y acopladas a toxinas protenicas tienen aplicaciones potenciales en el tratamiento de tumores (cap. 15).

3-4

La molcula de inmunoglobulina es exible, en especial en la regin bisagra

La regin que enlaza las porciones Fc y Fab de la molcula de anticuerpo en realidad no es una bisagra rgida sino una cuerda flexible, lo que permite movimiento independiente de los dos brazos Fab. Dicha flexibilidad es revelada por estudios

116

Captulo 3: Reconocimiento de antgenos por receptores de clulas B y clulas T

Fig. 3-4. Los brazos del anticuerpo estn unidos por una bisagra flexible. Se utilizan antgenos que constan de dos molculas de hapteno (esferas de color rojo en los diagramas) que puede formar enlaces cruzados entre dos sitios de unin a antgenos, para crear complejos antgeno:anticuerpo, que pueden observarse en la micrografa electrnica. Se observan formas lineales, triangulares y cuadradas, con proyecciones o puntas cortas. La digestin limitada con pepsina elimina estas puntas (que no se muestra en la figura), que, en consecuencia, corresponden a la porcin Fc del anticuerpo; las piezas F(ab)2 permanecen enlazadas por medio de antgenos. La interpretacin de los complejos se muestra en los diagramas. El ngulo entre los brazos de las molculas de anticuerpo vara, desde 0 en los dmeros de anticuerpo, pasando por 60 en las formas triangulares, hasta 90 en las formas cuadradas, lo que muestra que las conexiones entre los brazos son flexibles. Fotografa ( 300 000) cortesa de N.M. Green.

El ngulo entre los brazos es de 0

El ngulo entre los brazos es de 60

El ngulo entre los brazos es de 90

de anticuerpos unidos a antgenos pequeos conocidos como haptenos, que son molculas de diversos tipos que por lo comn tienen el tamao de una cadena lateral de tirosina. Si bien los haptenos son reconocidos de manera especfica por anticuerpos, slo pueden estimular la produccin de anticuerpos antihapteno cuando se encuentran enlazados a una protena (Apndice I, seccin A-1). Dos molculas de hapteno idnticas unidas por una regin flexible corta pueden enlazar dos o ms anticuerpos antihapteno, lo que forma dmeros, trmeros, tetrmeros, y as en forma sucesiva; stos pueden observarse mediante microscopia electrnica (fig. 3-4). Las formas adoptadas por estos complejos muestran que las molculas de anticuerpo son flexibles en la regin bisagra. Tambin se encuentra cierta flexibilidad en la unin entre los dominios V y C, lo que permite flexin y rotacin del dominio V respecto al C. Por ejemplo, en la molcula de anticuerpo que se muestra en la figura 3-1a, hay dos regiones bisagra claramente flexionadas de modo distinto, que tienen el ngulo diferente entre los dominios V y C en cada uno de los dos brazos Fab. Este rango de movimiento ha llevado a que la unin entre los fragmentos V y C se denomine articulacin esfrica molecular La flexi. bilidad tanto en la bisagra como en la unin V-C permite que los dos brazos de una molcula de anticuerpo se unan a sitios que tienen cierta separacin, como los sitios repetitivos sobre polisacridos de la pared celular bacteriana. La flexibilidad en la bisagra tambin permite que los anticuerpos interacten con las protenas de unin a anticuerpo que median los mecanismos efectores inmunitarios.

3-5

Los dominios de una molcula de inmunoglobulina tienen estructura similar

Las cadenas pesadas y ligeras de inmunoglobulina estn compuestas de una serie de dominios protenicos separados, los cuales tienen una estructura plegada similar (seccin 3-2). Dentro de esta estructura tridimensional bsica hay diferen-

Estructura de una molcula de anticuerpo tpica

117

Dominio C de cadena ligera

Dominio V de cadena ligera Extremo amino

Extremo carboxilo

cadenas enlace disulfuro

cadenas

Disposicin de cadenas

enlace disulfuro
D E B A G F C

enlace disulfuro
D E B A G F C C C

Fig. 3-5. Estructura de los dominios constantes y de los dominios variables de inmunoglobulina. Los paneles superiores muestran de modo esquemtico el modelo plegado de los dominios constante (C) y variable (V) de una cadena ligera de inmunoglobulina. Cada dominio es una estructura en forma de barril en la cual segmentos de cadena polipeptdica (cadenas ) que corren en direcciones opuestas (antiparalelos) se empacan en conjunto para formar dos lminas (que se muestran en amarillo y verde para el dominio C, y en rojo y azul para el dominio V), que se mantienen unidas mediante un enlace disulfuro. La manera en que la cadena polipeptdica se pliega para formar la estructura final puede observarse con mayor claridad cuando las lminas estn abiertas (paneles inferiores). Se asigna una letra de modo secuencial a las cadenas , de acuerdo al orden en que se presentan en las secuencias de aminocidos de los dominios; el orden en cada lmina es caracterstico de los dominios de inmunoglobulina. Las cadenas C y C que se encuentran en los dominios V, pero no en los dominios C, se indican por medio de un fondo sombreado de color azul. Las disposiciones caractersticas de cuatro filamentos ms tres filamentos (dominio de tipo regin C) o de cuatro filamentos ms cinco filamentos (dominio de tipo regin V) son las estructuras fundamentales tpicas del dominio de la superfamilia de inmunoglobulina, que se encuentran en una amplia gama de otras protenas, as como tambin en anticuerpos y en receptores de clulas T.

cias claras entre los dominios V y C. Las similitudes y diferencias estructurales se observan en el diagrama de una cadena ligera que se muestra en la figura 3-5. Cada dominio est formado por dos lminas , que son elementos de la estructura de protena formados por segmentos del polipptido (cadenas ) empaquetadas en conjunto; las hojas se encuentran enlazadas por medio de un puente disulfuro y juntas forman una estructura que a grandes rasgos tiene forma de barril, conocida como barril . La estructura plegada distintiva del dominio de protena de inmunoglobulina se conoce como el pliegue de inmunoglobulina. Tanto la similitud esencial de dominios V y C como la diferencia crucial entre ellos se observan con mayor claridad en los paneles inferiores de la figura 3-5, donde los dominios cilndricos estn abiertos para revelar de qu manera la cadena de polipptido se pliega para crear cada una de las hojas , y cmo forma lazos flexibles mientras cambia de direccin. La diferencia principal entre los dominios V y C yace en que el dominio V es de mayor tamao, y tiene un lazo extra. Los lazos flexibles de los dominios V forman el sitio de unin a antgenos de la molcula de inmunoglobulina. Muchos de los aminocidos que son comunes a los dominios C y V de las cadenas de inmunoglobulina yacen en el centro del pliegue de inmunoglobulinas y son esenciales para su estabilidad. Por tal razn, se cree que otras protenas con secuencias similares a las de las inmunoglobulinas forman dominios de estructura similar, y en muchos casos esto se ha demostrado mediante cristalografa. Tales dominios parecidos a inmunoglobulina estn presentes en muchas otras pro-

118

Captulo 3: Reconocimiento de antgenos por receptores de clulas B y clulas T

tenas del sistema inmunitario, y en aquellas comprendidas en el reconocimiento y adherencia de clula a clula en el sistema nervioso y otros tejidos. Junto con las inmunoglobulinas y los receptores de clulas T, constituyen la extensa superfamilia de inmunoglobulinas.

Resumen
La molcula de anticuerpo IgG est formada por cuatro cadenas de polipptido, que comprenden dos cadenas ligeras idnticas y dos pesadas idnticas, y puede considerarse que forman una estructura en forma de Y flexible. Cada una de las cuatro cadenas tiene una regin variable (V) en su amino terminal, que contribuye al sitio de unin a antgenos, y una regin constante (C), que determina el isotipo. El isotipo de la cadena pesada establece las propiedades funcionales del anticuerpo. Las cadenas ligeras estn unidas a las cadenas pesadas por varias interacciones no covalentes y mediante enlaces disulfuro; las regiones V de las cadenas pesadas y ligeras forman pares en cada brazo de la Y para generar dos sitios de unin a antgenos idnticos, que yacen en las puntas de los brazos de la Y. La posesin de dos sitios de unin a antgenos permite que las molculas de anticuerpo se enlacen a antgenos y se unan a ellos de modo mucho ms estable. El tronco de la Y, llamado el fragmento Fc, est compuesto de los dominios del grupo carboxilo terminal de las cadenas pesadas. Las regiones bisagra flexibles unen los brazos de la Y al tronco. Las regiones del fragmento Fc y de la bisagra difieren en anticuerpos de isotipos diferentes, lo que determina sus propiedades funcionales. Con todo, la organizacin general de los dominios es similar en todos los isotipos.

Interaccin de la molcula de anticuerpo con antgenos especcos


Ya se describi la estructura de la molcula de anticuerpo y cmo las regiones V de las cadenas pesadas y ligeras se pliegan y forman pares para formar el sitio de unin a antgenos. En esta parte se describe con mayor detalle el sitio de unin a antgenos. Se comentan las diferentes maneras en las cuales los antgenos pueden unirse a anticuerpo, y se aborda la cuestin de cmo la variacin de las secuencias de los dominios V de anticuerpos determina la especificidad para antgenos.

3-6

Regiones localizadas de secuencia hipervariable forman el sitio de unin a antgenos

Las regiones V de cualquier molcula de anticuerpo son diferentes a las de cualquier otro. La variabilidad de secuencia no est distribuida de modo uniforme en toda la regin V, sino que se concentra en ciertos segmentos, como se muestra con claridad en lo que se denomina un grfico de variabilidad (fig. 3-6), en el cual se comparan las secuencias de aminocidos de muchas regiones V de diferentes anticuerpos. En los dominios VH y VL se pueden identificar tres segmentos en particular variables. Se designan regiones hipervariables, y se denotan como HV1, HV2 y HV3. En las cadenas pesadas corren a grandes rasgos desde los residuos 30 a 36, 49 a 65 y 95 a 103, respectivamente, mientras que en las cadenas ligeras estn localizadas a grandes rasgos en los residuos 28 a 35, 49 a 59, y 92 a 103, respectivamente. La parte ms variable del dominio se encuentra en la regin HV3. Las zonas entre las regiones hipervariables, que comprenden el resto del dominio V, muestran menos variabilidad y se denominan las regiones estructurales. Hay cuatro de esas regiones en cada dominio V, designadas FR1, FR2, FR3 y FR4. Las regiones estructurales forman las hojas que proporcionan el armazn estructural del dominio, mientras que las secuencias hipervariables corresponden a tres lazos en el borde externo del barril , que estn yuxtapuestas en el dominio

Interaccin de la molcula de anticuerpo con antgenos especcos

119

Regin V de cadena pesada

Regin V de cadena ligera

50 40 30 20 10 0

100 80 60 40 20 0 0 20 40 60 80 100 120

20

40

60

80

100

120

Fig. 3-6. Hay regiones de hipervariabilidad separadas en los dominios V. Se muestra un grfico de variabilidad derivado de la comparacin de las secuencias de aminocidos de varias docenas de dominios V de cadena pesada y de cadena ligera. En cada posicin de aminocido, el grado de variabilidad es la proporcin del nmero de diferentes aminocidos observado en todas las secuencias juntas y la frecuencia del aminocido ms comn. En color rojo se indican tres regiones hipervariables (HV1, HV2 y HV3), que se conocen tambin como las regiones determinantes de complementariedad, CDR1, CDR2 y CDR3. Estn flanqueadas por regiones estructurales menos variables (FR1, FR2, FR3 y FR4, que se muestran en color azul o amarillo).

Variabilidad

Residuo
FR1 HV1 FR2 HV2 FR3 HV3 FR4
FR1 HV1 FR2 HV2 FR3

Variabilidad

Residuo
HV3 FR4

plegado (fig. 3-7). De esta manera, la diversidad no slo se concentra en partes particulares de la secuencia del dominio V, sino que se localiza a una regin particular en la superficie de la molcula. Cuando los dominios VH y VL estn pareados en la molcula de anticuerpo, los lazos hipervariables de cada dominio se unen y crean un sitio hipervariable nico en la punta de cada brazo de la molcula. ste es el sitio de unin para antgenos, el sitio de unin a antgenos o el sitio de combinacin del anticuerpo. Los seis lazos hipervariables determinan la especificidad de antgenos al formar una superficie complementaria al antgeno, y se denominan con mayor frecuencia las regiones determinantes de complementariedad, o CDR (hay tres CDR a partir de cada una de las cadenas pesadas y ligeras: CDR1, CDR2 y CDR3). Como las CDR de los dominios VH y VL contribuyen al sitio de unin a antgenos, es la combinacin de las cadenas pesadas y ligeras, y no slo una, lo que determina la especificidad final de antgenos. As, un modo en el cual el sistema inmunitario puede generar anticuerpos de diferentes especificidades es con la generacin de diferentes combinaciones de regiones V de cadenas pesadas y ligeras. Este medio de producir variabilidad se conoce como diversidad combinacional; en el captulo 4 se describe una segunda forma de diversidad combinacional cuando se considera la manera en que los genes que codifican para las regiones V de las cadenas pesadas y ligeras se crean a partir de segmentos de menor tamao de DNA.

3-7

Los anticuerpos se unen a antgenos por medio de contactos con aminocidos en CDR, pero los detalles de la unin dependen del tamao y forma del antgeno

En investigaciones tempranas de unin de antgenos a anticuerpos, las nicas fuentes disponibles de grandes cantidades de un tipo nico de molcula de anticuerpo eran tumores de clulas secretoras de anticuerpo; no se conocan las especificidades de antgenos de estos anticuerpos, de modo que se investigaron muchos compuestos para identificar ligandos que pudieran utilizarse para estudiar la unin a antgenos. En general, se encontr que los haptenos son las sustancias que se unen a estos anticuerpos (seccin 3-4) como fosfocolina o vitamina K1. El anlisis estructural de complejos anticuerpos con sus ligandos hapteno proporcion la primera evidencia directa de que las regiones hipervariables forman el sitio de unin a antgenos, y demostr la base estructural de especificidad para el hapteno. Despus, con el descubrimiento de mtodos para generar anticuerpos monoclonales (apndice I, seccin A-12), fue posible hacer grandes cantidades

120

Captulo 3: Reconocimiento de antgenos por receptores de clulas B y clulas T

Regin V de cadena ligera


Variabilidad 50

40 30 20 10 0 0 20 40 60 80 100 Residuo HV3 FR4

Fig. 3-7. Las regiones hipervariables yacen en lazos separados de la estructura plegada. Cuando las regiones hipervariables (CDR) estn colocadas en la estructura de un dominio V, puede observarse que yacen en lazos que se aproximan en la estructura plegada. En el

anticuerpo, el apareamiento de una cadena pesada y una ligera acerca los lazos hipervariables de cada cadena para crear una superficie hipervariable nica, que forma el sitio de unin a antgenos en la punta de cada brazo. C, extremo carboxilo; N, extremo amino.

FR1

HV1 FR2 HV2

FR3

de anticuerpo puro especfico para un antgeno. Esto proporcion una imagen ms general de cmo los anticuerpos interactan con sus antgenos, y confirm y extendi el panorama de interacciones anticuerpo-antgenos derivado del estudio de haptenos. La superficie de la molcula de anticuerpo formada por la yuxtaposicin de las CDR de las cadenas pesadas y ligeras es el sitio al cual se unen los antgenos. Est claro que, puesto que las secuencias de aminocidos de las CDR son diferentes en distintos anticuerpos, tambin lo son las formas de las superficies creadas por estas CDR. Como principio general, los anticuerpos se unen a ligandos cuyas superficies son complementarias a las del sitio de unin a antgenos. Un antgeno pequeo, como un hapteno o un pptido corto, por lo general se une en una hendidura o surco que yace entre los dominios V de cadenas pesadas y ligeras (fig. 3-8a y b). Algunos antgenos, como las protenas, pueden tener el mismo tamao que el anticuerpo, o ser ms grandes. En estos casos, la interfaz entre los antgenos y los anticuerpos a menudo es una superficie extendida que comprende todas las CDR y, en algunos casos, parte de la regin estructural (fig. 3-8c). Esta superficie no necesita ser cncava, puede ser plana, ondulada o incluso convexa. En algunos casos, molculas de anticuerpo con lazos de CDR3 alargadas pueden tener un dedo que sobresale hacia huecos en la superficie del antgeno, como se muestra en la figura 3-8d, donde un anticuerpo que se une al antgenos gp120 del VIH proyecta un lazo grande contra su blanco.

N
HV3 (CDR3)

3-8

Los anticuerpos se unen a formas conformacionales sobre la supercie de antgenos

HV1 (CDR1)

HV2 (CDR2)

sitio de unin a antgenos

La funcin biolgica de los anticuerpos es unirse a patgenos y a sus productos, y facilitar su eliminacin del cuerpo. Los anticuerpos por lo general slo reconocen una pequea regin sobre la superficie de una molcula grande, como un polisacrido o una protena. La estructura reconocida por un anticuerpo se llama determinante antignico o eptopo. Algunos de los patgenos ms importantes tienen cubiertas de polisacrido, y los anticuerpos que reconocen eptopos formados por las subunidades de azcar de dichas molculas son esenciales para proporcionar proteccin inmunitaria contra esos patgenos. En muchos casos los antgenos que desencadenan una respuesta inmunitaria son las protenas. Por ejemplo, los anticuerpos protectores contra virus reconocen protenas de la cubierta vrica. En tales casos, las estructuras reconocidas por el anticuerpo se encuentran sobre la superficie de la protena. Esos sitios probablemente estn compuestos de aminocidos de diferentes partes de la cadena polipeptdica que se han juntado mediante el pliegue de la protena. Los determinantes antignicos de esta clase se conocen como eptopos conformacionales o discontinuos porque la estructura reconocida est compuesta de segmentos de la protena que son discontinuos en la secuencia de aminocidos de los antgenos, pero que se juntan en la estructura tridimensional. Por el contrario, un eptopo compuesto de un segmento nico de cadena polipeptdica se denomina un eptopo continuo o lineal. Aunque casi todos los anticuerpos sintetizados contra protenas intactas, por completo plegadas, reconocen eptopos discontinuos, algunos se unen a fragmentos peptdicos de la protena. Por el contrario, en ocasiones se encuentra que los anticuerpos producidos contra pptidos de una protena o contra pptidos sintticos que corresponden a parte de su secuencia, se unen a la protena plegada natural. Esto hace posible, en algunos casos, utilizar pptidos sintticos en vacunas que se dirigen a desencadenar la produccin de anticuerpos contra una protena de agente patgeno.

Interaccin de la molcula de anticuerpo con antgenos especcos

121

VH

VL

3-9

Las interacciones antgenos-anticuerpos comprenden diversas fuerzas

La interaccin entre los anticuerpos y sus antgenos puede alterarse por concentraciones altas de sal, por extremos de pH, detergentes, y a veces por competencia con concentraciones altas del eptopo puro. La unin es entonces, una interaccin no covalente reversible. En la figura 3-9 se muestran las fuerzas, o los enlaces, comprendidos en estas interacciones no covalentes. Ocurren interacciones electrostticas entre cadenas laterales de aminocido cargadas, como en puentes de sal. Tambin ocurren interacciones entre dipolos elctricos, como en enlaces de hidrgeno, o pueden comprender fuerzas de van der Waals de corto alcance. Las concentraciones altas de sal y los extremos de pH alteran la unin antgeno-anticuerpo al debilitar interacciones electrostticas, o enla-

Fuerzas no covalentes
Fuerzas electrostticas

Origen
Atraccin entre cargas opuestas Hidrgeno compartido entre tomos electronegativos (N, O) Las uctuaciones de nubes de electrones alrededor de molculas polarizan de modo opuesto tomos vecinos Los grupos hidrfobos interactan de manera desfavorable con el agua y tienden a aglomerarse para excluir molculas de agua. La atraccin tambin comprende fuerzas de van der Waals

Fig. 3-8. Los antgenos pueden unirse en hendiduras, o surcos, o sobre superficies extendidas en los sitios de unin de anticuerpos. Los paneles en la fila superior muestran representaciones esquemticas de los diferentes tipos de sitios de unin en un fragmento Fab de un anticuerpo; primer panel, hendidura; segundo panel, surco; tercer panel, superficie extendida, y cuarto panel, superficie protuberante. Abajo se presentan ejemplos de cada tipo. Panel a: la imagen superior muestra la superficie molecular de la interaccin de un hapteno pequeo con las regiones determinantes de complementariedad (CDR) de un fragmento Fab como se observa dentro del sitio de unin a antgenos. El hapteno ferroceno, que se muestra en color verde, est unido en la hendidura de unin a antgenos (amarillo). En la imagen inferior (y en los paneles b, c y d) la molcula se ha girado casi 90 para dar una vista lateral del sitio de unin. Panel b: en un complejo formado por un anticuerpo y un pptido del virus de la inmunodeficiencia humana (VIH), el pptido (de color verde) se une a lo largo de un surco (amarillo) formado entre los dominios V de la cadena pesada y de la cadena ligera. Panel c: complejo entre lisozima de clara de huevo de gallina y el fragmento Fab de su anticuerpo correspondiente (HyHel5). La superficie sobre el anticuerpo que entra en contacto con la lisozima es de color amarillo. Los seis CDR del sitio de unin a antgenos estn involucrados en la unin. Panel d: el anticuerpo contra el antgenos gp120 del VIH tiene lazos CDR3 alargados que sobresalen hacia un hueco en la superficie del antgeno. La estructura del complejo entre este anticuerpo y gp120 no se ha resuelto; de tal manera, el rea de color amarillo en las imgenes de los paneles inferiores representa la extensin de las regiones CDR ms que la regin real de contacto entre anticuerpo y antgenos. Fotografas cortesa de I.A. Wilson y R.L. Stanfield.

NH 3 N H +

OOC O C

Enlaces de hidrgeno

Fuerzas de van der Waals

+ H H O + H O H H

+ H

O
H O H +

Fuerzas hidrfobas

Fig. 3-9. Fuerzas no covalentes que mantienen unido el complejo antgeno: anticuerpo. Las cargas parciales que se encuentran en dipolos elctricos se muestran como + o . Las fuerzas electrostticas disminuyen como el cuadrado inverso de la distancia que separa las cargas, en tanto que las fuerzas de van der Waals, que son ms numerosas en casi todos los contactos antgeno: anticuerpo, disminuyen la sexta potencia de la separacin y, por lo tanto, slo operan en rangos muy cortos. Nunca se forman enlaces covalentes entre antgenos y anticuerpos producidos de modo natural.

122

Captulo 3: Reconocimiento de antgenos por receptores de clulas B y clulas T

Fig. 3-10. Complejo de lisozima con el anticuerpo D1.3. Se muestra la interaccin del fragmento Fab de D1.3 con la lisozima de clara de huevo de gallina; la lisozima se muestra en color azul, la cadena pesada en color prpura y la cadena ligera en color amarillo. Un residuo glutamina de la lisozima, que se muestra en color rojo, sobresale entre los dos dominios V del sitio de unin a antgenos y forma enlaces de hidrgeno que son importantes en la unin antgeno:anticuerpo. Cortesa de R.J. Poljak.

ces de hidrgeno, o ambos. Este principio se emplea en la purificacin de antgenos al utilizar columnas de afinidad de anticuerpos inmovilizados, y viceversa para la purificacin de anticuerpos (Apndice I, seccin A-5). Ocurren interacciones hidrfobas cuando dos superficies hidrfobas se unen para excluir agua. La fuerza de dicha interaccin es proporcional al rea de superficie que est oculta del agua. Para algunos antgenos, estas interacciones probablemente expliquen la mayor parte de la energa de unin. En algunos casos, las molculas de agua quedan atrapadas en hendiduras en la interfaz entre el antgeno y el anticuerpo. Estas molculas de agua atrapadas, en especial las que estn entre residuos aminocidos polares, tambin pueden contribuir a la unin y, por ende, a la especificidad del anticuerpo. La contribucin de cada una de estas fuerzas a la interaccin general depende de los anticuerpos y antgenos particulares comprendidos. Una diferencia notoria entre interacciones de anticuerpos con antgenos protenicos y casi todas las otras interacciones naturales entre una protena y otra es que los anticuerpos a menudo tienen muchos aminocidos aromticos en sus sitios de unin a antgenos. Estos aminocidos participan de manera importante en interacciones de van der Waals e hidrfobas, y a veces en enlaces de hidrgeno. Por ejemplo, la tirosina puede participar tanto en el enlace de hidrgeno como en interacciones hidrfobas; por tanto, es en particular idnea para proporcionar diversidad en el reconocimiento de antgenos, y est representada en exceso en sitios de unin a los mismos. En general, las fuerzas hidrfobas y de van der Waals operan en rangos muy cortos y sirven para juntar superficies que tienen forma complementaria: para que ocurra buena unin, las colinas en una superficie deben encajar en valles en la otra. Por el contrarrio, las interacciones electrostticas entre cadenas laterales cargadas, y los enlaces de hidrgeno que forman puentes de tomos de oxgeno, o de hidrgeno, o de ambos, se adaptan a caractersticas especficas o grupos reactivos mientras fortalecen la interaccin general. Los aminocidos que poseen cadenas laterales cargadas, como la arginina, tambin estn representados en exceso en sitios de unin a antgenos. Un ejemplo de una reaccin que comprende un aminocido especfico en el antgeno se observa en el complejo de lisozima de clara de huevo de gallina con el anticuerpo D1.3 (fig. 3-10), en el cual se forman fuertes enlaces de hidrgeno entre el anticuerpo y una glutamina particular en la molcula de lisozima que sobresale entre los dominios VH y VL. Las lisozimas de perdiz y pavo tienen otro aminocido en lugar de la glutamina, y no se unen a este anticuerpo. En el complejo de alta afinidad de lisozima de clara de huevo de gallina con otro anticuerpo, HyHel5 (fig. 3-8c), interactan dos puentes de sal entre dos argininas bsicas sobre la superficie de la lisozima con dos cidos glutmicos, cada uno de los lazos CDR1 y CDR2 del VH. Las lisozimas que carecen de uno de los dos residuos arginina muestran afinidad 1 000 veces menor por HyHel5. En general, la complementariedad de superficie debe tener una participacin importante en las interacciones entre antgenos y anticuerpos, pero en casi todos los anticuerpos que se han estudiado con este detalle slo algunos residuos hacen una contribucin importante a la energa de unin y, por consiguiente, a la especificidad final del anticuerpo. Aun cuando muchos anticuerpos se unen de manera natural con afinidad alta a sus ligandos, con procedimientos de ingeniera gentica por medio de mutagnesis dirigida hacia el sitio, es posible adaptar un anticuerpo para que se una con fuerza an mayor a su eptopo.

Resumen
El anlisis de complejos de antgeno:anticuerpo con cristalografa con rayos X ha mostrado que las lazos hipervariables (regiones determinantes de complementariedad, CDR) de las regiones V de la inmunoglobulina determinan la especificidad de unin de un anticuerpo. Con antgenos protenicos, una molcula de anticuerpo entra en contacto con los antgenos sobre un rea amplia de su superficie que es complementaria a la superficie reconocida sobre el antgeno. Las interacciones electrostticas, enlaces de hidrgeno, fuerzas de van der Waals, y las interacciones hidrfobas, pueden contribuir a la unin. Dependiendo del tamao

Reconocimiento de antgenos por clulas T

123

del antgeno, las cadenas laterales de aminocidos en la mayor parte de las CDR o en la totalidad de las mismas, hacen contacto con antgenos y determinan la especificidad y afinidad de la interaccin. Otras partes de la regin V participan poco en el contacto directo con los antgenos, pero proporcionan un armazn estructural estable para las CDR, y ayudan a determinar su posicin y conformacin. Los anticuerpos producidos contra protenas intactas por lo general se unen a la superficie de la protena y hacen contacto con residuos que son discontinuos en la estructura primaria de la molcula; de cualquier modo, en ocasiones pueden unirse a fragmentos peptdicos de la protena, y a veces pueden utilizarse anticuerpos producidos contra pptidos derivados de protena para detectar la molcula de protena natural. Los pptidos que se unen a anticuerpos por lo general se unen en la hendidura entre las regiones V de las cadenas pesadas y ligeras, donde hacen contacto especfico con algunas de las CDR, pero no necesariamente con todas. ste tambin es el modo habitual de unin para antgenos de carbohidrato y molculas pequeas como haptenos.

Reconocimiento de antgenos por clulas T


En cambio, con las inmunoglobulinas, que interactan con patgenos y sus productos txicos en los espacios extracelulares del cuerpo, las clulas T slo reconocen antgenos extraos desplegados sobre la superficie de las clulas propias del cuerpo. Estos antgenos pueden derivar de patgenos, como virus o bacterias intracelulares, que se replican dentro de clulas, o de patgenos o sus productos que las clulas han internalizado mediante endocitosis desde el lquido extracelular. Las clulas T detectan la presencia de un agente patgeno intracelular porque las clulas infectadas despliegan sobre su superficie fragmentos peptdicos de las protenas del patgeno. Tales pptidos extraos se llevan hacia la superficie celular por medio de glucoprotenas especializadas de las clulas hospedadoras, las molculas del MHC. stas se codifican en una agrupacin grande de genes que se identificaron primero por sus efectos potentes sobre la respuesta inmunitaria a tejidos trasplantados. Por tal razn, el complejo de gen se llam el complejo principal de histocompatibilidad (MHC), y las glucoprotenas de unin a pptido se conocen como molculas del MHC. El reconocimiento de antgenos como un fragmento peptdico pequeo unido a una molcula del MHC y desplegado en la superficie celular, es una de las caractersticas ms distintivas de las clulas T, y es el tema de esta parte del captulo. En el captulo 5 se describe la manera en que los fragmentos peptdicos de antgenos se generan y se relacionan con molculas del MHC. Aqu se describen la estructura y propiedades de los receptores de clulas T (TCR). Como es de esperar, con base en su funcin como estructuras de reconocimiento de antgenos muy variables, los genes que codifican para receptores de clulas T se encuentran estrechamente relacionados con los que codifican a las inmunoglobulinas. Sin embargo, hay diferencias importantes entre los receptores de clulas T y las inmunoglobulinas, que reflejan las caractersticas especiales del reconocimiento de antgenos por clulas T.
sitio de unin a antgenos VL Fab CL CH VH anticuerpo

Fc sitio de unin a antgenos

V C

V C

receptor de clulas T

Clula T

3-10

Los receptores de clulas T son muy similares a los fragmentos Fab de inmunoglobulina

Los receptores de clulas T se identificaron por vez primera al usar anticuerpos monoclonales que se unieron a una lnea de clulas T clonada nica: esos anticuerpos inhiben de modo especfico el reconocimiento de antgenos por la clona o la activan de manera especfica al simular al antgeno (Apndice I, seccin A-19). Estos anticuerpos clonotpicos se utilizaron ms tarde para mostrar que cada clula T porta casi 30 000 receptores de antgenos idnticos sobre su superficie; cada receptor consta de dos cadenas polipeptdicas denominadas cadenas de receptor de clulas T (TCR) y (TCR), enlazadas por un enlace disulfu-

Fig. 3-11. El receptor de clula T se asemeja a un fragmento Fab unido a membrana. El fragmento Fab de una molcula de anticuerpo es un heterodmero unido mediante un enlace disulfuro, cada cadena del cual contiene un dominio C y uno V de inmunoglobulina; la yuxtaposicin de los dominios V forma el sitio de unin a antgenos (seccin 3-6). Los receptores de clulas T tambin son heterodmeros ligados mediante enlaces disulfuro; cada cadena contiene un dominio parecido a C y uno parecido a V de inmunoglobulina. Al igual que en el fragmento Fab, la yuxtaposicin de los dominios V forma el sitio para el reconocimiento de antgenos.

124

Captulo 3: Reconocimiento de antgenos por receptores de clulas B y clulas T

cadena cadena

carbohidrato

regin variable (V)

regin constante (C) segmento del tallo


+ + +

regin transmembrana cola citoplsmica

enlace disulfuro

Fig. 3-12. Estructura de los receptores de clulas T. El heterodmero de receptor de clulas T est compuesto de dos cadenas de glucoprotenas transmembrana, y . La porcin extracelular de cada cadena consta de dos dominios, que se asemejan a los dominios V y C de inmunoglobulina, respectivamente. Ambas cadenas tienen cadenas laterales de carbohidrato fijas a cada dominio. Un segmento de tallo corto, anlogo a una regin bisagra de inmunoglobulina, conecta los dominios parecidos a inmunoglobulina a la membrana y contiene el residuo cistena que forma el enlace disulfuro intercatenario. Las hlices transmembrana de ambas cadenas son poco comunes debido a que contienen residuos con carga positiva (bsicos) dentro del segmento transmembrana hidrfobo. La cadena porta dos residuos de ese tipo; la cadena tiene uno.

ro. Los heterodmeros : tienen estructura muy similar al fragmento Fab de una molcula de inmunoglobulina (fig. 3-11), y explican el reconocimiento de antgenos por casi todas las clulas T. Una minora de estas clulas porta un receptor alternativo, pero similar desde el punto de vista estructural, formado de un par diferente de cadenas polipeptdicas designadas y . Los receptores de clulas T : parecen tener diferentes propiedades de reconocimiento de antgenos respecto a los receptores de clulas T :, y la funcin de las clulas T : en las respuestas inmunitarias no est por completo clara (seccin 2-34). En el resto de este captulo se utiliza el trmino receptor de clulas T para hacer referencia al receptor :, salvo cuando se especifique otra cosa. Ambos tipos de receptor de clulas T difieren de dos modos principales de la inmunoglobulina unida a membrana que funciona como el receptor de clulas B. Un receptor de clulas T slo tiene un sitio de unin a antgenos, mientras que un receptor de clulas B tiene dos, y los receptores de clulas T nunca se secretan, mientras que la inmunoglobulina puede secretarse como anticuerpo. El primer entendimiento de la estructura y funcin del receptor de clula : provino de estudios de cDNA clonado que codifica para las cadenas de receptor. Las secuencias de aminocidos predichas a partir del cDNA mostraron con claridad que ambas cadenas de los receptores de clulas T tienen una regin variable (V) amino terminal con homologa con un dominio V de inmunoglobulina, una regin constante (C) con homologa con un dominio C de inmunoglobulina, y un segmento de tallo corto que contiene un residuo cistena que forma el enlace disulfuro intercatenario (fig. 3-12). Cada cadena abarca la bicapa lipdica mediante un dominio transmembrana hidrfobo, y termina en una cola citoplsmica corta. Estas similitudes estrechas entre las cadenas de receptor de clulas T y las cadenas pesadas y ligeras de inmunoglobulina permitieron por vez primera pronsticar la semejanza estructural del heterodmero receptor de clulas T con un fragmento Fab de inmunoglobulina. Desde entonces, la estructura tridimensional de los receptores de clulas T se ha determinado por medio de cristalografa con rayos X, y la estructura de hecho es similar a la de un fragmento Fab. Las cadenas de receptores de clulas T se pliegan de la misma manera que las de un fragmento Fab (fig. 3-13a), aunque la estructura final parece un poco ms corta y ms ancha. No obstante, hay algunas diferencias estructurales claras entre receptores de clulas T y fragmentos Fab. La ms notoria yace en el dominio C, donde el pliegue es distinto a cualquier otro dominio parecido a inmunoglobulina. La mitad del dominio que est yuxtapuesta con el dominio C forma una lmina similar a la que se encuentra en otros dominios parecidos a inmunoglobulina, pero la otra mitad del dominio est formada de cadenas no muy empacadas, y un segmento corto de hlice (fig. 3-13b). En un dominio C el enlace disulfuro intramolecular, que en los dominios parecidos a inmunoglobulina normalmente une dos cadenas , une un segmento a este segmento de la hlice . Tambin hay diferencias en el modo que los dominios interactan. La interfaz entre los dominios V y C de ambas cadenas de receptor de clulas T es ms extensa que en anticuerpos. La interaccin entre los dominios C y C es distintiva por cuanto podra ayudarse mediante carbohidrato; un grupo azcar proveniente del dominio C hace varios enlaces de hidrgeno al dominio C (fig. 3-13b). Por ltimo, una comparacin de los sitios de unin variables muestra que, si bien los lazos de CDR se alinean de manera muy cercana con las de molculas de anticuerpo, hay un poco de desplazamiento relativo (fig. 3-13c). Esto es en particular notorio en el lazo de CDR2 de V, que est orientada a ngulos a grandes rasgos rectos respecto al lazo equivalente en dominios V de anticuerpo, como resultado de una desviacin de la cadena que fija un extremo del lazo desde una cara del dominio a la otra. El desplazamiento de la cadena tambin causa un cambio de la orientacin del lazo de CDR2 de V en algunos dominios V cuyas estructuras se conocen. Puesto que relativamente pocas estructuras cristalogrficas se han clarificado a esta magnitud de resolucin, queda por observar hasta qu grado todos los receptores de clulas T comparten tales caractersticas, y si hay ms diferencias por descubrir.

Reconocimiento de antgenos por clulas T

125

3 3

2 1

TCR IgL V
L2 H3

TCR IgH
H1

HV4

C C
a b

C
carbohidrato

HV4

L3 L1 H2

Fig. 3-13. La estructura cristalina de un receptor de clulas T : a una resolucin de 2.5 . En los paneles a y b, la cadena se muestra en color rosado y la cadena en azul. Los enlaces disulfuro aparecen en color verde. En el panel a, el receptor de clula T se ve como si estuviera sentado sobre una superficie celular, con los lazos de CDR que forman el sitio de unin a antgenos (marcados como 1, 2 y 3) dispuestos a lo largo de su parte superior relativamente plana. En el panel b se muestran los dominios C y C. El dominio C no se pliega como un dominio parecido a inmunoglobulina tpico; la porcin del dominio distal al dominio C est compuesta principalmente de cadenas de polipptido irregulares ms que de lmina . El enlace disulfuro intramolecular une una cadena a este segmento de hlice . La interaccin entre los dominios C y C es ayudada por un carbohidrato (color gris y etiquetado en la figura); un grupo de azcar del dominio C forma enlaces de hidrgeno con el dominio

C. En el panel c, el receptor de clula T se muestra alineado con los sitios de unin a antgenos de tres anticuerpos diferentes. En esta perspectiva se observa desde arriba el sitio de unin. El dominio V del receptor de clula T est alineado con los dominios VL de los sitios de unin a antgenos de los anticuerpos, y el dominio V est alineado con los dominios VH. Los CDR del receptor de clula T y las molculas de inmunoglobulina estn coloreados; los CDR 1, 2 y 3 del TCR se muestran en rojo, y el lazo HV4 en naranja. Para los dominios V de inmunoglobulina, los lazos CDR1 de la cadena pesada (H1) y de la cadena ligera (L1) se muestran en azul claro y azul oscuro, respectivamente, y los lazos CDR2 (H2, L2) en prpura claro y prpura oscuro, respectivamente. Los lazos CDR3 de cadena pesada (H3) estn en color amarillo; la cadena ligera CDR3s (L3) est en verde claro. Los lazos HV4 del TCR (anaranjado) no tienen homlogos hipervariables en las inmunoglobulinas. Modelos cortesa de I.A. Wilson.

3-11

Los receptores de clulas T reconocen antgenos en forma de un complejo de un pptido extrao unido a una molcula del MHC

El reconocimiento de antgenos por receptores de clulas T difiere con claridad del hecho por receptores de clula B y anticuerpos. El reconocimiento de antgenos por clulas B comprende la unin directa de inmunoglobulina a los antgenos intactos y los anticuerpos tpicamente se unen a la superficie de antgenos protenicos (seccin 3-8); hacen contacto con aminocidos que son discontinuos en la estructura primaria, pero que se juntan en la protena plegada. En cambio, las clulas T muestran respuesta a secuencias de aminocidos contiguas cortas en protenas. Estas secuencias a menudo estn sepultadas dentro de la estructura natural de la protena y, as, los receptores de clulas T no pueden reconocerlas de

Fig. 3-14. Diferencias en el reconocimiento de lisozima de clara de huevo de gallina por inmunoglobulinas y por receptores de clulas T. Mediante cristalografa de rayos X puede mostrarse que los anticuerpos se unen a eptopos sobre la superficie de protenas, como se muestra en el panel a, donde los eptopos para tres anticuerpos se muestran en diferentes colores sobre la superficie de lisozima de clara de huevo de gallina (fig. 3-10). Por el contrario, los eptopos reconocidos por receptores de clulas T no necesitan estar sobre la superficie de la

molcula, porque los receptores de clulas T no reconocen la protena antignica en s sino un fragmento peptdico de sta. En el panel b se muestran los pptidos que corresponden a dos eptopos de lisozima de clula T. Un eptopo, que se muestra en color azul, yace sobre la superficie de la protena, pero un segundo, mostrado en rojo, yace en su mayor parte dentro del ncleo y es inaccesible en la protena plegada. Para que este residuo sea accesible al receptor de clulas T, la protena se debe desdoblar y procesar. Panel a, cortesa de S. Sheriff.

126

Captulo 3: Reconocimiento de antgenos por receptores de clulas B y clulas T

modo directo a menos que la protena se desdoble y se procese hacia fragmentos peptdicos (fig. 3-14). En el captulo 5 se describe dicho proceso. La naturaleza del reconocimiento de antgenos por clulas T qued clara cuando se hizo evidente que los pptidos que estimulan dichas clulas slo se reconocen cuando estn unidos a una molcula del MHC. De esta manera, el ligando reconocido por la clula T es un complejo de pptido y molcula del MHC. La evidencia de participacin del MHC en el reconocimiento de antgenos por clulas T al principio fue indirecta, pero en fecha reciente se prob de modo concluyente al estimular clulas T con complejos de pptido:MHC purificados. Los receptores de clulas T interactan con este ligando al hacer contacto con la molcula del MHC y con el pptido antgeno.

3-12

Hay dos clases de molculas del MHC con distinta composicin de subunidad pero con estructuras tridimensionales similares

Fig. 3-15. Estructura de una molcula del MHC de clase I determinada por medio de cristalografa radiogrfica. En el panel a se muestra una representacin grfica computarizada de una molcula del MHC de clase I humano, HLA-A2, que se ha separado de la superficie celular mediante la enzima papana. Se muestra la superficie de la molcula, coloreada de acuerdo con los dominios mostrados en los paneles b-d, y se describe a continuacin. Los paneles b y c muestran un modelo de listones de dicha estructura. En el panel d se presenta la molcula del MHC de clase I en forma esquemtica, es un heterodmero formado por una cadena transmembrana (peso molecular de 43 kD) unida de modo no covalente a la microglobulina 2 (12 kD), que no atraviesa la membrana. La cadena se pliega para formar tres dominios: 1, 2 y 3. El dominio 3 y la microglobulina 2 muestran similitudes en la secuencia de aminocidos con los dominios C de inmunoglobulina y tienen estructuras plegadas similares, mientras que los dominios 1 y 2 se pliegan juntos en una estructura nica que consta de dos hlices separadas que yacen sobre una lmina de ocho segmentos antiparalelos. El pliegue de los dominios 1 y 2 crea un surco largo, que es el sitio en el cual los antgenos peptdicos se unen a las molculas del MHC. La regin transmembrana y el fragmento corto de pptido que conecta los dominios externos a la superficie celular no se observan en los paneles a y b porque la digestin con papana los elimin. Como puede observarse en el panel c, donde se observa la molcula desde arriba, los lados de la hendidura estn formados por las caras internas de las dos hlices ; la lmina plegada formada por el apareamiento de los dominios 1 y 2 crea el piso de la hendidura.

Hay dos clases de molculas del MHC: MHC de clase I y MHC de clase II; difieren tanto en su estructura como en el modelo de expresin en los tejidos del cuerpo. Ambas clases de molculas se encuentran relacionadas en forma estrecha en cuanto a estructura general, pero difieren en su composicin de subunidad (figs. 3-15 y 3-16). En ellas, los dos dominios protenicos pareados ms cercanos a la

hendidura de unin a pptido 1

microglobulina 2 3

hendidura de unin a pptido 2 1

hendidura de unin a pptido

lmina

microglobulina 2

hlice

Reconocimiento de antgenos por clulas T

127

membrana semejan dominios de inmunoglobulina, mientras que los dos dominios ms lejos de la membrana se pliegan y se unen entre s para crear una hendidura, o surco, larga que es el sitio en el cual se une un pptido. Los complejos de pptido:MHC de clase I y pptido:MHC de clase II purificados se caracterizan desde el punto de vista estructural, lo que permite describir en detalle a las molculas del MHC y la forma en la que se unen a pptidos. Las molculas del MHC de clase I (fig. 3-15) constan de dos cadenas polipeptdicas. Una de ellas, la cadena , se codifica en el MHC (en el cromosoma 6 en seres humanos), y se relaciona de modo no covalente con una cadena de menor tamao, la microglobulina 2, que es no polimrfica y est codificada en un cromosoma diferente, el cromosoma 15 en seres humanos. Slo la cadena clase I abarca la membrana. La molcula completa tiene cuatro dominios, tres formados a partir de la cadena codificada por MHC, y uno aportado por la microglobulina 2. El dominio 3 y la microglobulina 2 semejan en forma estrecha dominios parecidos a inmunoglobulina en su estructura plegada. Los dominios 1 y 2 plegados forman las paredes de una hendidura en la superficie de la molcula; es aqu donde el pptido se une, y se conoce como la hendidura de unin a pptido o el surco de unin a pptido. Las molculas del MHC son muy polimrficas, y las principales diferencias entre las distintas formas se localizan en la hendidura de unin a pptido, lo cual influye sobre qu pptidos se unirn y, de esta manera, sobre la especificidad del antgeno doble presentado a clulas T.

hendidura de unin a pptido 1

2
C

hendidura de unin a pptido 1 1

hendidura de unin a pptido

Fig. 3-16. Las molculas del MHC de clase II se asemejan a las molculas del MHC de clase I en cuanto a su estructura general. Las primeras estn compuestas de dos cadenas de glucoprotena transmembrana, (34 kD) y (29 kD), como se muestra en el panel d. Cada cadena tiene dos dominios y las dos cadenas juntas forman la estructura compacta de cuatro dominios, similar a la de la molcula del MHC de clase I (comprese con el panel d de la fig. 3-15). En el panel a se muestra una representacin grfica computarizada de la superficie de una molcula del MHC de clase II, en este caso la protena humana HLA-DR1, y en el panel b se muestra el modelo de listones equivalente. Los dominios 2 y 2, al igual que los dominios 3 y de microglobulina 2 de la molcula del MHC de clase I, tienen similitudes de secuencia de aminocidos y estructurales con los dominios C de inmunoglobulina; en la molcula del MHC de clase II los dos dominios que forman la hendidura de unin al pptido son una contribucin de diferentes cadenas y, por tanto, no estn unidos por un enlace covalente (paneles c y d). Otra diferencia importante, que no se observa en el diagrama, es que el surco de unin al pptido de la molcula del MHC de clase II est abierto en ambos extremos.

128

Captulo 3: Reconocimiento de antgenos por receptores de clulas B y clulas T

Fig. 3-17. Las molculas del MHC se unen a pptidos con fuerza dentro de la hendidura. Cuando las molculas del MHC se cristalizan con un antgeno peptdico sinttico individual, se revelan los detalles de la unin al pptido. En las molculas del MHC de clase I (paneles a y c) el pptido est unido en una conformacin alargada; ambos extremos se unen en forma estrecha a los bordes de la hendidura. En las molculas del MHC de clase II (paneles b y c) el pptido tambin se une en una conformacin alargada, pero los extremos del pptido no se adhieren de forma estrecha, y el pptido se extiende ms all de la hendidura. La superficie superior del complejo pptido:MHC es reconocida por clulas T y est compuesta de residuos de la molcula del MHC y el pptido. En las representaciones c y d se muestra el potencial electrosttico de la superficie de la molcula del MHC; las reas azules indican un potencial positivo y las rojas uno negativo.

Las molculas del MHC de clase II constan de un complejo no covalente de dos cadenas, y , de las cuales ambas abarcan la membrana (fig. 3-16). La cadena del MHC de clase II es una protena diferente de la cadena clase I. Las cadenas y del MHC de clase II estn codificadas dentro del MHC. La estructura cristalogrfica de la molcula del MHC de clase II muestra que est plegada en forma muy parecida a la de clase I, pero en la primera la hendidura de unin a pptido est formada por dos dominios que provienen de cadenas distintas, los dominios 1 y 1. Las principales diferencias yacen en los extremos de la hendidura de unin a pptido, que estn ms abiertos en las molculas del MHC de clase II que en las del MHC de clase I. En consecuencia, los extremos de un pptido unido a una molcula del MHC de clase I se encuentran enterrados en forma considerable dentro de la molcula, no as los de pptidos unidos a molculas del MHC de clase II. En ambas clases de molculas, los pptidos unidos estn emparedados entre los dos segmentos helicoidales de la molcula del MHC (fig. 3-17). Los receptores de clulas T interactan con este ligando compuesto, y hacen contactos con la molcula del MHC y con el antgenos peptdico. Los sitios de polimorfismo importante en molculas del MHC de clase II estn localizados, de nuevo, en la hendidura de unin a pptido.

3-13

Los pptidos se unen de manera estable a molculas del MHC, y tambin ayudan a estabilizar a la molcula del MHC sobre la supercie celular

Un individuo puede quedar infectado por una amplia variedad de patgenos, cuyas protenas por lo general no tendrn secuencias peptdicas en comn. Para alertar a las clulas T respecto a todas las infecciones posibles, las molculas del MHC sobre cada clula (clases I y II) deben tener la capacidad para unirse de modo estable a diversos pptidos. Esta conducta es bastante distinta a la de otros receptores de unin a pptido, como aquellos para hormonas peptdicas, que por lo general slo se unen a un tipo nico de pptido. Las estructuras cristalinas de los complejos de pptido:MHC han ayudado a mostrar de qu manera un sitio de unin nico puede unirse a pptidos con afinidad alta mientras que retiene la capacidad para unirse a una amplia variedad de pptidos diferentes. Una caracterstica importante de la unin de pptidos a molculas del MHC es que el primero est unido como una parte integral de la estructura de la molcula del MHC, y las molculas del MHC son inestables cuando los pptidos no estn unidos. Es importante la unin estable a pptidos, porque de otro modo, los

Reconocimiento de antgenos por clulas T

129

intercambios de pptidos en la superficie celular impiden que los complejos de pptido:MHC sean indicadores fiables de infeccin o de captacin de un antgeno especfico. Cuando se purifican molculas del MHC a partir de clulas, se unen de manera estable a pptidos copurificados con ellas, lo que permite analizar los pptidos unidos por molculas del MHC particulares. Los pptidos se liberan a partir de las molculas del MHC al desnaturalizar el complejo en cido; despus se pueden purificar y secuenciar. Los pptidos sintticos puros tambin pueden incorporarse en molculas del MHC previamente vacas, y determinar la estructura del complejo, lo que revela detalles de los contactos entre la molcula de MHC y el pptido. A partir de esos estudios se ha construido una imagen detallada de las interacciones de unin. Primero se comentan las propiedades de unin a pptido de las molculas del MHC de clase I.

3-14

Las molculas del MHC de clase I se unen a pptidos cortos de 8 a 10 aminocidos por ambos extremos

La unin de un pptido a una molcula del MHC de clase I se estabiliza en ambos extremos de la hendidura de unin a pptido por medio de contactos entre tomos en los grupos amino y carboxilo terminales libres del pptido, y sitios invariables que se encuentran en cada extremo de la hendidura en todas las molculas del MHC de clase I (fig. 3-18). Se cree que estos son los principales contactos estabilizadores para complejos de pptido:MHC de clase I, porque los anlogos peptdicos sintticos que carecen de grupos amino y carboxilo terminales no se unen en forma estable a molculas del MHC de clase I. Otros residuos en el pptido sirven como anclas adicionales. Los pptidos que se unen a molculas del MHC de clase I por lo general tienen 8 a 10 aminocidos de largo. Se cree que los pptidos ms largos son capaces de unirse, en particular si lo hacen en su carboxilo terminal, pero despus se dividen por medio de exopeptidasas presentes en el retculo endoplsmico, que es donde las molculas del MHC de clase I se unen a pptidos. El pptido yace en una conformacin alargada que se encuentra sobre la hendidura; las variaciones de la longitud del pptido parecen acomodarse, casi siempre, por medio de un acodamiento en el esqueleto peptdico. Sin embargo, dos ejemplos de molculas del MHC de clase I en las que el pptido puede extenderse fuera de la hendidura en el carboxilo terminal sugieren que una ligera variacin de longitud tambin puede acomodarse de esta manera.

Fig. 3-18. Los pptidos se unen a molculas del MHC de clase I por sus extremos. Las molculas del MHC de clase I interactan con el esqueleto de un pptido unido (que se muestra en amarillo) por medio de una serie de enlaces de hidrgeno y de interacciones inicas (que se muestran como lneas punteadas de color azul) en cada extremo del pptido. El extremo amino del pptido est a la izquierda y el carboxilo a la derecha. Los crculos de color negro representan tomos de carbono, los de color rojo oxgeno y los azules nitrgeno. Los residuos de aminocidos de la molcula del MHC que forman estos enlaces son comunes en todas las molculas del MHC de clase I y sus cadenas laterales se muestran completas (en gris) en un modelo de listones del surco del MHC de clase I. Una agrupacin de residuos de tirosina comn en todas las molculas del MHC de clase I forma enlaces de hidrgeno con el grupo amino terminal del pptido unido, mientras que una segunda agrupacin de residuos forma enlaces de hidrgeno e interacciones inicas con el esqueleto de pptido en el grupo extremo carboxilo y con el grupo carboxilo terminal en s.

130

Captulo 3: Reconocimiento de antgenos por receptores de clulas B y clulas T

H3N H3N H3N

G I P

Y
I

V
N N

Y
F Y

Q E P

Q K A

L
L L

COO COO COO

S
A

H3N H3N H3N H3N

Y Y

Q
F Q

R P

R I

A T

L H

V I

COO COO COO COO

S K S

E V S

Y Y

A P

T A

T
E

T
K

L I

Fig. 3-19. Los pptidos se unen a molculas del MHC mediante residuos de anclaje relacionados estructuralmente. En los paneles superior e inferior se muestran pptidos extrados por elucin a partir de dos molculas diferentes del MHC de clase I, respectivamente. Los residuos de anclaje (de color verde) difieren en los pptidos que se unen a diferentes alelos de molculas del MHC de clase I, pero son similares en todos los pptidos que se unen a la misma molcula del MHC. Los residuos de anclaje que se unen a una molcula del MHC particular no necesitan ser idnticos, pero siempre estn relacionados (p. ej., la fenilalanina [F] y la tirosina [Y] son aminocidos aromticos, mientras que la valina [V], la leucina [L] y la isoleucina [I] son aminocidos hidrfobos grandes). Los pptidos tambin se unen a molculas del MHC de clase I por medio de sus extremos amino (azul) y carboxilo (rojo).

Estas interacciones confieren a todas las molculas clase I del MHC su amplia especificidad de unin a pptido. Adems, las molculas del MHC son muy polimrficas. Hay cientos de versiones diferentes, o alelos, de los genes que codifican para el MHC de clase I en los seres humanos en conjunto, y cada individuo porta slo una pequea seleccin. Las principales diferencias entre las variantes allicas del MHC se encuentran en ciertos sitios en la hendidura de unin a pptido, que resulta en aminocidos distintos en sitios clave de interaccin con pptido en las diferentes variantes del MHC. La consecuencia de esto es que estas ltimas se unen de preferencia a pptidos distintos. Los pptidos que pueden unirse a una variante dada del MHC tienen los mismos residuos aminocidos, o residuos aminocidos muy similares en dos o tres posiciones particulares a lo largo de la secuencia del pptido. Las cadenas laterales de aminocido en estas posiciones se insertan en hendiduras en la molcula del MHC que estn revestidas por los aminocidos polimrficos. Dado que la unin de estas cadenas laterales fija el pptido a la molcula del MHC, los residuos peptdicos comprendidos se denominan residuos ancla. Tanto la posicin como la identidad de stos pueden variar, de acuerdo con la variante particular del MHC de clase I que se est uniendo al pptido. As, casi todos los pptidos que se unen a molculas del MHC de clase I tienen un residuo ancla hidrfobo (o a veces bsico) en el carboxilo terminal (fig. 3-19). Mientras que el cambio de un residuo ancla casi siempre evita que el pptido se una, no todo pptido sinttico de longitud idnea que contenga dichos residuos se une a la molcula apropiada del MHC de clase I y, as, la unin general tambin depende de la naturaleza de los aminocidos en otras posiciones en el pptido. En algunos casos, se prefieren aminocidos particulares en ciertas posiciones, mientras que en otras la presencia de aminocidos particulares evita la unin. Tales posiciones de aminocidos adicionales se llaman anclas secundarias Estas . caractersticas de unin a pptido permiten que una molcula individual del MHC de clase I se enlace a una amplia variedad de pptidos, pero permite que diferentes variantes allicas del MHC de clase I se unan a diferentes grupos de pptidos.

3-15

La longitud de los pptidos unidos por molculas del MHC de clase II no est constreida

La unin de pptido a molculas del MHC de clase II tambin se ha analizado mediante elucin de pptidos unidos y por medio de cristalografa con rayos X, y difiere en varios aspectos de la unin de pptido a molculas del MHC de clase I. Los pptidos que se unen a molculas del MHC de clase II tienen al menos 13 aminocidos largos y pueden ser mucho ms largos. Las agrupaciones de residuos conservados que se unen a los dos extremos de un pptido en molculas del MHC de clase I no se encuentran en las de clase II, y los extremos del pptido no estn unidos. En lugar de eso, el pptido yace en una conformacin extendida a lo largo de la hendidura de unin a pptido del MHC de clase II. Se sostiene ah por medio de cadenas laterales peptdicas que sobresalen hacia hendiduras superficiales y profundas revestidas por residuos polimrficos, y por interacciones entre el esqueleto del pptido y cadenas laterales de aminocidos conservados que revisten la hendidura de unin a pptidos en todas las molculas del MHC de clase II (fig. 3-20). Si bien hay menos estructuras cristal de pptidos unidos a MHC de clase II que de pptidos unidos a MHC de clase I, los datos disponibles muestran que las cadenas laterales de aminocidos en los residuos 1, 4, 6 y 9 de un pptido unido a MHC de clase II pueden mantenerse en estas hendiduras de unin. Las hendiduras o sitios de unin de molculas del MHC de clase II acomodan una mayor variedad de cadenas laterales que las de clase I, lo que hace ms difcil definir residuos de anclaje y predecir qu pptidos pueden unirse a una molcula del MHC de clase II particular (fig. 3-21). Aun as, al comparar las secuencias de pptidos de unin conocidos generalmente es posible detectar un modelo de aminocidos permisivos para cada uno de los diferentes alelos de las molculas del MHC de clase II, y modelar de qu forma los aminocidos de este motivo de secuencia peptdica interactan con los aminocidos que conforman la hendidura de

Reconocimiento de antgenos por clulas T

131

Fig. 3-20. Los pptidos se unen a molculas del MHC de clase II mediante interacciones a lo largo de la extensin del surco de unin. Un pptido (de color amarillo; mostrado slo como el esqueleto peptdico, con el grupo amino terminal a la izquierda y el grupo carboxilo terminal a la derecha) se une a una molcula del MHC de clase II por medio de una serie de enlaces de hidrgeno (lneas punteadas de color azul) que se distribuyen a lo largo del pptido. Los enlaces de hidrgeno hacia el extremo amino del pptido se forman con el esqueleto de la cadena polipeptdica del MHC de clase II, mientras que en toda la longitud del pptido los enlaces se forman con residuos muy conservados en molculas del MHC de clase II. Las cadenas laterales de estos residuos se muestran en color gris en el modelo de listones del surco del MHC de clase II.

G G

S S S

T T T

D D D

Y Y Y

G G G

I I I

L L L

Q Q Q

I I I

N N N

S S S

R R R

W W W W W C C N D G R

S V

N D R Q P L K L T

Q T A T D D A F T

L S S S S S S S S

T L V S I R R K N

L E V P M K P S S

D S S S S S S S S

S V P Y P E K G L

N S S S S S S S S

T N H N E Q S I Y

K L G M K I N K N

Y Y F I D M P Y A

F H M

H S Y

K E

L A

P K Y

K I I T L

V D I L D I R N L F T K T H V N N

P G

K F N V

Fig. 3-21. Los pptidos que se unen a molculas del MHC de clase II tienen longitudes variables y sus residuos de anclaje yacen a distancias variables desde los extremos del pptido. En el panel superior se muestran las secuencias de un grupo de pptidos que se unen al alelo Ak del MHC de clase II murina. Todas contienen la misma secuencia central (sombreada) pero su longitud es diferente. En el panel inferior se muestran diferentes pptidos que se unen al alelo HLA-DR3 del MHC de clase II humano. Los residuos de anclaje se muestran como crculos de color verde. La

longitud de estos pptidos puede variar y, as, por convencin el primer residuo de anclaje se denota como residuo 1. Ntese que todos los pptidos comparten un residuo hidrfobo en la posicin 1, un residuo con carga negativa (cido asprtico [D] o cido glutmico [E]) en la posicin 4, y una tendencia a portar un residuo bsico (lisina [K], arginina [L], histidina [H], glutamina [Q] o asparagina [N]) en la posicin 6 y un residuo hidrfobo (p. ej., tirosina [Y], leucina [L] o fenilalanina [F]) en la posicin 9.

132

Captulo 3: Reconocimiento de antgenos por receptores de clulas B y clulas T

unin a pptido. Dado que ste se encuentra unido por su esqueleto y se permite que surja desde ambos extremos del surco de unin, en principio no hay lmite de la longitud de pptidos que podran unirse a molculas del MHC de clase II. Parece ser que los pptidos ms largos unidos a molculas del MHC de clase II en la mayor parte de los casos son recortados por peptidasas hasta una longitud de 13 a 17 aminocidos. Al igual que las molculas del MHC de clase I, las de clase II que carecen de pptido unido son inestables, pero todava se desconocen las interacciones estabilizadoras cruciales que el pptido hace con la molcula del MHC de clase II.

3-16

Las estructuras cristalinas de varios complejos de pptido:MHC: receptores de clulas T muestran una orientacin de los mismos receptores similar sobre el complejo de pptido:MHC

P8 P1 2 1

2m 3

En la poca en que se public la primera estructura de un receptor de clulas T obtenida con cristalografa con rayos X, tambin se produjo una estructura del mismo receptor de clulas T unido a un ligando de pptido:MHC de clase I. Dicha estructura (fig. 3-22), que se haba pronosticado por la mutagnesis dirigida hacia el sitio de la molcula del MHC de clase I, mostr los receptores de clulas T alineados de manera diagonal sobre el pptido y la hendidura de unin a pptido, con la cadena de TCR sobre el dominio 2 y el extremo amino terminal del pptido unido, la cadena de TCR sobre el dominio 1 y el extremo carboxilo terminal del pptido, y los lazos CDR3 de las cadenas tanto TCR como TCR reunindose sobre los aminocidos centrales del pptido. Los receptores de clulas T estn a travs de un valle entre los dos puntos altos sobre las dos hlices circundantes que forman las paredes de la hendidura de unin a pptido. El anlisis de otros complejos de pptido:MHC de clase I:receptor de clulas T, y de complejos de pptido:MHC de clase II:receptor de clulas T (fig. 3-23) muestra que todos tienen una orientacin muy similar, en particular para el dominio V, aunque ocurre cierta variabilidad de la localizacin y orientacin del dominio V. En esta orientacin, el dominio V hace contacto principalmente con el amino terminal del pptido unido, mientras que el dominio V, hace contacto principalmente con el carboxilo terminal del pptido unido. Ambas cadenas tambin interactan con las hlices de la molcula del MHC de clase I (fig. 3-22). Los contactos de los receptores de clulas T no estn distribuidos de modo simtrico sobre la molcula del MHC, mientras que los lazos CDR1 y CDR2 de V estn en estrecho contacto con las hlices del complejo de pptido:MHC alrededor del amino terminal del pptido unido, los lazos CDR1 y CDR2 de la cadena , que interactan con el complejo en el carboxilo terminal del pptido unido, hacen contribuciones variables a la unin. La comparacin de la estructura tridimensional de un receptor de clulas T sin ligando y el mismo receptor de clulas T que forma complejos con su ligando de pptido:MHC muestra que la unin da por resultado cierto grado de cambio
Fig. 3-22. El receptor de clula T se une al complejo pptido:MHC. Panel a: el receptor de clula T se une a la parte superior del complejo pptido:MHC a horcajadas, en el caso de la molcula del MHC de clase I aqu mostrada, en las hlices del dominio tanto 1 como 2. Las CDR del receptor de clula T se muestran en colores: los lazos CDR1 y CDR2 de la cadena en azul claro y azul oscuro, respectivamente, y los lazos CDR1 y CDR2 de la cadena en prpura claro y prpura oscuro, en dicho orden. El lazo CDR3 de la cadena est en amarillo, y el lazo CDR3 de la cadena en verde. El lazo CDR3 de la cadena aparece en color rojo. La lnea de color amarillo gruesa, P1-P8 es el pptido unido. Panel b: el esbozo del sitio de unin al antgeno del receptor de clula T (lnea de color negro gruesa) est superpuesto sobre la superficie superior del complejo pptido:MHC (el pptido est sombreado de amarillo apagado). Los receptores de clulas T yacen en forma diagonal a travs del complejo pptido: MHC; los lazos CDR3 y del receptor de clula T (3, 3, en amarillo y verde, respectivamente) hacen contacto con el centro del pptido. Los lazos CDR1 y CDR2 de la cadena (1, 2, en prpura claro y prpura oscuro, respectivamente) hacen contacto con las hlices del MHC en el extremo amino del pptido unido, mientras que los lazos CDR1 y CDR2 de la cadena (1, 2, en azul claro y azul oscuro, respectivamente) hacen contacto con las hlices en el extremo carboxilo del pptido unido. Cortesa de I.A. Wilson.

V 2 1 V 2 3 3 1 HV4

Reconocimiento de antgenos por clulas T

133

conformacional, o ajuste inducido en particular dentro del lazo CDR3 de V. , Tambin se ha mostrado que pptidos sutilmente diferentes pueden tener efectos muy distintos sobre el reconocimiento de un ligando de pptido:MHC por lo dems idntico por la misma clula T. La flexibilidad en el lazo CDR3 demostrada por estas dos estructuras ayuda a explicar cmo los receptores de clulas T pueden adoptar conformaciones que reconocen ligandos relacionados, pero diferentes. A partir de un examen de las estructuras disponibles es difcil hacer una prediccin si los contactos de receptor de clulas T con el pptido unido, o con la molcula del MHC, contribuyen con la energa de unin principal. Las mediciones de la cintica de la unin de los receptores de clulas T a ligandos de pptido:MHC sugieren que al principio del contacto podran predominar las interacciones entre los receptores de clulas T y la molcula de MHC, lo que guiara al receptor hacia la posicin correcta, donde una segunda interaccin, ms detallada, con el pptido, as como con la molcula del MHC dicta el resultado final de la interaccin, la unin o la disociacin. Al igual que con las interacciones entre anticuerpo y antgenos, slo algunos aminocidos en la interfaz pueden proporcionar los contactos esenciales que determinan la especificidad y la fuerza de la unin. Se sabe que alteraciones tan simples como el cambio de una leucina hacia isoleucina en el pptido son suficientes para alterar la respuesta de clulas T desde destruccin intensa hasta respuesta absolutamente nula. Los estudios muestran que las mutaciones de residuos nicos en las molculas del MHC presentadoras pueden tener el mismo efecto. De esta manera, la especificidad del reconocimiento de clulas T comprende al pptido y su molcula del MHC presentadora. Tal especificidad doble fundamenta la restriccin por MHC de respuesta de clulas T, un fenmeno que se observ mucho tiempo antes de que se conocieran las propiedades de unin a pptido de las molculas del MHC. La historia de cmo se descubri la restriccin por MHC se revisa en el captulo 5 cuando se retoma el tema de cmo el polimorfismo del MHC afecta al reconocimiento de antgenos por clulas T. Otra consecuencia de esta especificidad doble es la necesidad de que los receptores de clulas T tengan la capacidad para interactuar de modo apropiado con la superficie presentadora de antgenos de molculas del MHC. Parece ser que algo de especificidad inherente para molculas del MHC est codificada en los genes que codifican para receptores de clulas T, y hay seleccin durante el desarrollo de stas para un repertorio de receptores capaces de interactuar de manera apropiada con las molculas del MHC particulares presentes en ese individuo. En el captulo 7 se comentan las evidencias para esto.

V V 1 N 1 C

3-17

Las protenas de supercie celular CD4 y CD8 de clulas T son necesarias para una respuesta ecaz a antgenos

Adems de unir un ligando de pptido:MHC con su receptor de antgenos, las clulas T hacen interacciones adicionales con la molcula del MHC que estabiliza la interaccin y son necesarias para la respuesta eficaz a antgenos. Las clulas T caen en dos clases principales que tienen funciones efectoras diferentes y se distinguen por la expresin de las protenas de superficie celular CD4 y CD8. CD8 es transportada por clulas T citotxicas, mientras que a CD4 la transportan clulas T cuya funcin es activar otras clulas (seccin 1-19). CD4 y CD8 se conocieron como marcadores para estos diferentes grupos funcionales de clulas T durante algn tiempo antes de que quedara claro que tal distincin se bas en su capacidad para reconocer las diferentes clases de molculas del MHC: CD8 reconoce molculas del MHC de clase I, y CD4 las de clase II. Durante el reconocimiento de antgenos, las molculas CD4 o CD8 (dependiendo del tipo de clula T) se relacionan en la superficie celular con los receptores de clulas T, y se unen a sitios invariables en la porcin del MHC del ligando de pptido:MHC compuesto, lejos del sitio de unin a pptido. Esta unin es necesaria para que las clulas T tengan una respuesta eficaz y, as, CD4 y CD8 se llaman correceptores. CD4 es una molcula de cadena nica compuesta de cuatro dominios parecidos a inmunoglobulina (fig. 3-24). Los primeros dos dominios (D1 y D2) de la molcula CD4 estn estrechamente empaquetadas para formar una varilla rgida de aproximadamente 60 de largo, que se encuentra unida mediante una bisagra

Fig. 3-23. Los receptores de clulas T interacta con molculas del MHC de clase I y del MHC de clase II de una manera similar. Se ha determinado la estructura de la unin de un receptor de clula T a una molcula del MHC de clase II, la cual muestra la unin del receptor de clula T a un sitio equivalente, y en una orientacin idntica, a la forma en la que los receptores de clulas T se unen a molculas del MHC de clase I (fig. 3-22). Slo se muestran los dominios V y V de dichos receptores, en color azul. El pptido es de color rojo, y los residuos de carbohidrato se indican en gris. El receptor de clula T se asienta en una silla superficial formada entre las regiones helicoidales de las cadenas (amarilloverdoso) y (naranja) del MHC de clase II, a grandes rasgos a 90 respecto al eje largo de la molcula del MHC de clase II y el pptido unido. Cortesa de E.L. Reinherz y J-H. Wang.

134

Captulo 3: Reconocimiento de antgenos por receptores de clulas B y clulas T

Fig. 3-24. Estructuras de las molculas correceptoras CD4 y CD8. La molcula CD4 contiene cuatro dominios de tipo inmunoglobulina, que se muestran de forma esquemtica en el panel a y como un modelo de listones de la estructura cristalina en el panel b. El dominio amino terminal, D1, tiene una estructura similar a la de un dominio V de inmunoglobulina. El segundo dominio, D2, aunque tiene clara relacin con un dominio de inmunoglobulina, difiere de los dominios tanto V como C y se ha denominado dominio C2. Los primeros dos dominios de CD4 forman una estructura parecida a una varilla rgida enlazada a los dos dominios del grupo carboxilo terminal mediante un enlace flexible. Se cree que el sitio de unin para molculas del MHC de clase II involucra principalmente el dominio D1. La molcula CD8 es un heterodmero de una cadena y una , ligado de manera covalente por medio de un enlace disulfuro; una forma alternativa de CD8 existe como un homodmero de cadenas . El heterodmero se describe en el panel a, mientras que el modelo de listones en el panel b es del homodmero. Las cadenas CD8 y CD8 tienen una estructura muy similar; cada una tiene un dominio nico que se asemeja a un dominio V de inmunoglobulina, y un tramo de cadena polipeptdica, que se cree est en una conformacin relativamente extendida, que fija el dominio parecido a V a la membrana celular.

CD4 CD4
D1

CD8
D2

CD8

D3

D4

flexible a una varilla similar formada por el tercer y cuarto dominios (D3 y D4). Hay algunas pruebas de que CD4 forma homodmeros sobre la superficie de las clulas T que son funcionales en el reconocimiento de MHC de clase II, aunque la base estructural de su formacin an es dudosa. CD4 se une a molculas del MHC de clase II por medio de una regin que se localiza principalmente sobre la cara lateral del primer dominio, D1. CD4 se une a una fisura hidrfoba formada en la unin de los dominios 2 y 2 de la molcula del MHC de clase II. Este sitio se encuentra bastante lejos del sitio de unin de los receptores de clulas T (fig. 3-25a); as, stos y la molcula de CD4 pueden unirse de modo simultneo al mismo complejo de pptido:MHC de clase II. La porcin intracelular de CD4 interacta fuertemente con una tirosincinasa citoplsmica llamada Lck, y la acerca a los componentes de sealizacin intracelulares relacionados con los receptores de clulas T, que da por resultado incremento de la seal que se genera cuando dichos receptores se unen a su ligando (cap. 6). Cuando CD4 y estos receptores se unen de manera simultnea al mismo complejo de MHC de clase II:pptido, las clulas T son casi 100 veces ms sensibles a los antgenos que si CD4 estuviera ausente. La estructura de CD8 es bastante distinta. Es un dmero con enlace disulfuro de dos cadenas diferentes, llamadas y , cada una de las cuales contiene un dominio parecido a inmunoglobulina nico enlazado a la membrana mediante un segmento de polipptido extendido (fig. 3-24). Este segmento se encuentra muy glucosilado, lo que se cree que lo mantiene en una conformacin extendida y lo protege contra divisin por proteasas. Las cadenas CD8 pueden formar homodmeros, aunque stas no se encuentran cuando las cadenas CD8 estn presentes. El homodmero CD8 quiz tenga una funcin especfica en el reconocimiento de un subgrupo especializado de molculas del MHC de clase I no clsicas (cap. 5). CD8 se une en forma dbil a un sitio invariable en el dominio 3 de una molcula del MHC de clase I (fig. 3-25b). Aunque slo se conoce en detalle la interaccin del homodmero CD8 con MHC de clase I, esto muestra que el sitio de unin a MHC de clase I del heterodmero CD8 : se forma por la interaccin de las cadenas CD8 y . Adems, CD8 (ms probablemente por medio de la cadena ) interacta con residuos en la base del dominio 2 de la molcula del MHC de clase I. La fuerza de unin de CD8 a esta ltima tiene influencia de la glucosilacin de la molcula CD8; nmeros aumentados de residuos de cido silico aadidos a las estructuras de carbohidrato de CD8, disminuyen la fuerza de la interaccin. El modelo de sialilacin de CD8 cambia durante la maduracin de

Reconocimiento de antgenos por clulas T

135

MHC de clase II

MHC de clase I

CD4
a b

CD8

D4

CD4

CD8

D3 MHC de clase II D2 MHC de clase I

D1

microglobulina 2

Fig. 3-25. Los sitios de unin para CD4 y CD8 en las molculas del MHC de clase II y del MHC de clase I yacen en los dominios de tipo inmunoglobulina. Los sitios de unin para CD4 y para CD8 en las molculas del MHC de clase II y del MHC de clase I, respectivamente, yacen en los dominios de tipo inmunoglobulina ms cercanos a la membrana y distantes de la hendidura de unin al pptido. La unin de CD4 a una molcula del MHC de clase II se muestra como una grfica estructural en el panel a y de modo esquemtico en el panel c. La cadena de la molcula del MHC de clase II se muestra en color rosado y la cadena en color blanco, mientras que CD4 aparece en color dorado. En el panel a slo se muestran los dominios D1 y D2 de CD4. El sitio de unin para CD4 yace en la base del dominio 2 de una molcula del MHC de clase II, en la fisura hidrfoba entre los dominios 2 y 2. En el panel b se muestra la unin de CD8 a una molcula del MHC de clase I y de manera esquemtica en el panel d. La cadena pesada y la microglobulina 2 de clase I se muestran en color blanco y rosado, respectivamente, y las dos cadenas del dmero CD8 en color prpura claro y prpura oscuro. La estructura es de la unin del homodmero CD8 pero se cree que el heterodmero CD8: se une del mismo modo. El sitio de unin para CD8 en la molcula del MHC de clase I yace en una posicin similar a la de CD4 en la molcula del MHC de clase II, pero la unin de CD8 tambin involucra la base de los dominios 1 y 2, y, as, la unin de CD8 al MHC de clase I no es por completo equivalente a la unin de CD4 al MHC de clase II.

clulas T y en el momento de la activacin tambin, y es probable que esto tenga una participacin en la modulacin del reconocimiento de antgenos. Al unirse a los dominios proximales de membrana de las molculas del MHC de clases I y II, los correceptores abandonan la superficie superior de la molcula del MHC expuesta y la dejan libre para interactuar con un receptor de clulas T, como se muestra para CD8 en la figura 3-26. Tanto CD4 como CD8 se unen a Lck, en el caso del heterodmero CD8: mediante la cola citoplsmica de la cadena , y la aproximan al receptor de clulas T. Al igual que con CD4, la presencia de CD8 incrementa casi en 100 veces la sensibilidad de clulas T a antgenos presentada por molculas del MHC de clase I. De este modo, CD4 y CD8 tienen funciones similares y se unen a la misma localizacin aproximada en las molculas del MHC de clases I y II, aun cuando las estructuras de las dos protenas correceptoras slo tienen relacin distante.

3-18

Las dos clases de molculas del MHC se expresan de manera diferente sobre clulas

Las molculas del MHC de clases I y II tienen distribuciones separadas entre clulas, que reflejan las diferentes funciones efectoras de las clulas T que las recono-

136

Captulo 3: Reconocimiento de antgenos por receptores de clulas B y clulas T

Fig. 3-26. CD8 se une a un sitio localizado sobre molculas del MHC de clase I distante de aquel al cual se une el receptor de clula T. Las posiciones relativas de los receptores de clulas T y de molculas CD8 unidas a la misma molcula clase I del MHC pueden observarse en esta reconstruccin hipottica de la interaccin de una molcula del MHC de clase I (la cadena se muestra en color verde; la microglobulina 2 [amarillo apagado]

puede observarse tenuemente en el fondo) con un receptor de clulas T y con CD8. Las cadenas y del receptor de clula T se muestran en color rosado y prpura, respectivamente. La estructura CD8 es la de un homodmero CD8, pero est coloreada para representar la orientacin probable de las subunidades en el heterodmero; la subunidad CD8 est en color rojo, y la subunidad CD8, en azul. Cortesa de G. Gao.

cen (fig. 3-27). Las molculas del MHC de clase I presentan pptidos de patgenos, por lo general virus, a las clulas T citotxicas CD8, que estn especializadas para destruir cualquier clula que reconocen de modo especfico. Dado que los virus pueden infectar cualquier clula nucleada, casi todas esas clulas expresan molculas del MHC de clase I, aunque el nivel de expresin constitutiva vara de un tipo de clula al siguiente. Por ejemplo, las clulas del sistema inmunitario expresan abundante MHC de clase I sobre su superficie, mientras que las del hgado (hepatocitos) expresan concentraciones relativamente bajas (fig. 3-27). Las clulas no nucleadas, como los eritrocitos de mamfero, expresan poco o ningn MHC de clase I, por lo que el interior de los eritrocitos es un sitio en el cual una infeccin puede pasar sin deteccin por clulas T citotxicas. Dado que los eritrocitos no pueden apoyar la replicacin de virus, esto no tiene grandes consecuencias para la infeccin vrica, pero podra ser la falta de MHC de clase I lo que permite que los parsitos Plasmodium que causan el paludismo vivan en este sitio privilegiado.
Fig. 3-27. La expresin de molculas del MHC difiere entre tejidos. Las molculas del MHC de clase I se expresan sobre todas las clulas nucleadas, aunque se expresan ms en clulas hematopoyticas. Las molculas del MHC de clase II normalmente slo se expresan en un subgrupo de clulas hematopoyticas y en clulas del estroma del timo, aunque pueden ser expresadas por otros tipos de clula con la exposicin a la citocina inflamatoria IFN-. *En los seres humanos, las clulas T activadas expresan molculas del MHC de clase II, mientras que en los ratones la expresin del MHC de clase II en todas las clulas T es negativa.
En

Tejido
Tejidos linfoides Clulas T Clulas B Macrfagos Clulas dendrticas Clulas epiteliales del timo Otras clulas nucleadas Neutrlos Hepatocitos Riones Cerebro Clulas no nucleadas Eritrocitos

MHC de clase I

MHC de clase II

+++ +++ +++ +++ +

+* +++ ++ +++ +++

el cerebro, casi todos los tipos de clulas son negativos para MHC de clase II, pero en la microglia, que se relaciona con macrfagos, las clulas son MHC de tipo II positivas.

+++ + + +

Reconocimiento de antgenos por clulas T

137

Por lo contrario, la principal funcin de las clulas T CD4 que reconocen molculas del MHC de clase II es activar otras clulas efectoras del sistema inmunitario. De esta manera, las molculas del MHC de clase II normalmente se encuentran sobre linfocitos B, clulas dendrticas y macrfagos (clulas que participan en respuestas inmunitarias) pero no sobre otras clulas hsticas (fig. 3-27). Cuando las clulas T CD4 reconocen pptidos unidos a molculas del MHC de clase II sobre clulas B, estimulan a estas ltimas para que produzcan anticuerpos. De modo similar, las clulas T CD4 que reconocen pptidos unidos a molculas del MHC de clase II sobre macrfagos activan a estas clulas para que destruyan los patgenos en sus vesculas. Las molculas del MHC de clase II tambin se expresan sobre clulas presentadoras de antgenos especializadas, las clulas dendrticas, en tejidos linfoides donde las clulas T indiferenciadas encuentran antgenos y se activan por vez primera (cap. 8). La expresin de molculas del MHC de clases I y II est regulada por citocinas, en particular interferones, que se liberan en el transcurso de respuestas inmunitarias. Por ejemplo, el interfern- (IFN-) aumenta la expresin de molculas del MHC de clases I y II, y puede inducir la expresin de las de clase II sobre ciertos tipos de clulas que normalmente no las expresan. Los interferones tambin incrementan la funcin presentadora de antgenos de molculas del MHC de clase I al inducir la expresin de componentes clave de la ingeniera intracelular que permite a los pptidos transportarse en las molculas del MHC.

Receptor de clulas T :
V

1. 2.
a

Receptor de clulas T :
V

3-19

Un subgrupo diferente de clulas T porta un receptor alternativo formado de cadenas y


C

Durante la bsqueda del gen que codifica para la cadena TCR, se descubri en forma accidental otro gen parecido al receptor de clulas T. Este gen se llam TCR, y su descubrimiento llev a una bsqueda de ms genes que codifican para receptores de clulas T. Se identific otra cadena de receptor al usar anticuerpos contra la secuencia predicha de la cadena , y se llam cadena . Pronto se descubri que una poblacin minoritaria de clulas T porta un tipo distinto de receptor de clulas T formado de heterodmeros : ms que de heterodmeros :. El desarrollo de estas clulas se describe en las secciones 7-11 y 7-12. La estructura cristalogrfica de un receptor de clulas T : revela que, como se esperaba, tiene forma similar a los receptores de clulas T : (fig. 3-28). Los receptores de clulas T : pueden estar especializados en la unin a ciertas clases de ligandos, incluso protenas de choque por calor y ligandos no peptdicos como ligandos fosforilados o antgenos lpidos micobacterianos. Es probable que los receptores de clulas T : no estn restringidos por las molculas del MHC de clases I y II clsicas Pueden unirse al antgeno libre, de un modo muy parecido a como lo hacen . las inmunoglobulinas, o unirse a pptidos u otros antgenos presentados por molculas parecidas a MHC no clsicas, o efectuar ambas acciones. stas son protenas que semejan molculas del MHC de clase I pero que son relativamente no polimrficas (cap. 5). An se sabe poco acerca de cmo los receptores de clulas T : se unen a antgenos y, as, cmo funcionan estas clulas, y cul es su participacin en respuestas inmunitarias. La estructura y el reordenamiento de los genes que codifican para receptores de clulas T : se revisan en las secciones 4-11 y 7-12.

Fig. 3-28. Estructuras de receptores de clulas T : y :. Las estructuras de los receptores de clulas T : y : se han determinado mediante cristalografa de rayos X. Los receptores de clulas T : se muestran en el panel a; la cadena est coloreada de rojo y la cadena , de azul. En el panel b se muestra el receptor :; la cadena est coloreada de prpura, y la cadena , de rosado. Ambos receptores tienen estructuras muy similares, que se asemejan en cierta medida a la de un fragmento Fab de una molcula de inmunoglobulina. El dominio C es ms como un dominio de inmunoglobulina que el dominio C correspondiente de los receptores de clulas T :.

Resumen
Los receptores para antgenos en casi todas las clulas T, los receptores de clulas T :, estn compuestos de dos cadenas de protena, TCR y TCR, y semejan en muchos aspectos un fragmento Fab nico de inmunoglobulina. Los receptores de clulas T siempre estn unidos a membrana. Los receptores de clulas T : no reconocen antgenos en su estado natural como lo hacen los receptores inmunoglobulina de clulas B, sino que reconocen un ligando compuesto de un antgeno peptdico, unido a una molcula del MHC. Las molculas del MHC son glucoprotenas muy polimrficas codificadas por genes en el complejo principal de histo-

138

Captulo 3: Reconocimiento de antgenos por receptores de clulas B y clulas T

compatibilidad (MHC). Cada molcula del MHC se une a una amplia variedad de pptidos distintos, pero las variantes de cada uno reconoce en forma preferente grupos de pptidos con secuencia y caractersticas fsicas particulares. El antgeno peptdico se genera dentro de la clula, y se une de manera estable en una hendidura de unin a pptido sobre la superficie de la molcula del MHC. Hay dos clases de estas molculas, y se encuentran unidas en sus dominios no polimrficos por molculas CD8 y CD4 que distinguen dos clases funcionales diferentes de clulas T :. CD8 se une a molculas del MHC de clase I, y puede unirse de modo simultneo al mismo complejo de pptido:MHC de clase 1 que est siendo reconocido por un receptor de clulas T; as, acta como un correceptor y aumenta la respuesta de clulas T; CD4 se une a molculas del MHC de clase II y acta como un correceptor para receptores de clulas T que reconocen ligandos de pptido:MHC de clase II. Un receptor de clulas T interacta de manera directa tanto con el pptido antignico como con caractersticas polimrficas de la molcula del MHC que lo despliega, y esta doble especificidad fundamenta la restriccin por MHC de las respuestas de clulas T. Un segundo tipo de receptor de stas, compuesto de una cadena y una , es similar desde el punto de vista estructural al receptor de clulas T :, pero parece unirse a diferentes ligandos, incluso no peptdicos. Se cree que no est restringido por MHC. Se encuentra en una minora de la poblacin de clulas T, las clulas T :.

Resumen del captulo 3


Las clulas B y T utilizan molculas diferentes, pero similares desde el punto de vista estructural, para reconocer antgenos. Las molculas de reconocimiento de antgenos de clulas B son inmunoglobulinas, y estn hechas de un receptor unido a membrana para antgenos (receptor de clulas B) y de anticuerpos secretados que se unen a antgenos y desencadenan funciones efectoras humorales. En cambio, las molculas de reconocimiento de antgenos de clulas T slo estn hechas como receptores de superficie celular. Las inmunoglobulinas y los receptores de clulas T son molculas muy variables; la variabilidad est concentrada en la parte de la molcula, la regin variable (V) que se une a antgenos. Las inmunoglobulinas se unen a una variedad de antgenos diferentes desde el punto de vista qumico, mientras que el tipo : principal de receptor de clulas T reconoce de modo predominante fragmentos peptdicos de protenas extraas unidas a las molculas del MHC, que son ubicuas sobre todas las superficies celulares. La unin de antgenos por inmunoglobulinas se estudi principalmente con anticuerpos. La unin de anticuerpos a sus antgenos correspondientes es muy especfica, y tal especificidad est determinada por la forma y propiedades fisicoqumicas del sitio de unin a antgenos. La parte del anticuerpo que desencadena funciones efectoras, una vez que la parte variable se une a un antgeno, est localizada en el otro extremo de la molcula desde los sitios de unin a antgenos, y se denomina regin constante. Hay cinco clases funcionales principales de anticuerpos, cada una codificada por un tipo diferente de regin constante. stas interactan con distintos componentes del sistema inmunitario para incitar una respuesta inflamatoria y eliminar el antgeno (cap. 9). Los receptores de clulas difieren en varios aspectos de las inmunoglobulinas de clulas B. Uno es la ausencia de una forma secretada del receptor. Esto refleja las diferencias funcionales entre clulas T y B. Las ltimas enfrentan a los patgenos y sus productos protenicos que circulan dentro del cuerpo; la secrecin de una molcula de reconocimiento de antgenos soluble por la clula B activada luego de que ha encontrado antgenos le permite, con eficacia, acabar con antgenos en todos los espacios extracelulares del cuerpo. En cambio, las clulas T estn especializadas para interacciones entre una clula y otra. Destruyen clulas infectadas por patgenos intracelulares y que portan pptidos antignicos extraos sobre su superficie, o interactan con clulas del sistema inmunitario que han captado antgenos extraos y los despliegan sobre la superficie celular. De esta manera, no necesitan un receptor secretado soluble.

Preguntas

139

La segunda caracterstica de los receptores de clulas T es que reconocen un ligando compuesto, constituido del pptido extrao unido a una molcula del MHC propia. Esto significa que las clulas T pueden interactuar slo con una clula del cuerpo que despliega antgenos, no con el agente patgeno o la protena intacta. Cada receptor de clulas T es especfico para una combinacin particular de pptido y una molcula del MHC propia. Las molculas del MHC estn codificadas por una familia de genes muy polimrficos; si bien cada individuo expresa varios de dichos genes, esto slo representa una pequea seleccin de todas las variantes posibles. Durante el desarrollo de clulas T, el repertorio de receptores de clulas T se selecciona de modo que las clulas T de cada individuo reconocen antgenos slo en conjunto con sus propias molculas del MHC. La expresin de mltiples molculas del MHC variantes, cada una con un diferente repertorio de unin a pptido, ayudan a asegurar que dichas clulas en un individuo podrn reconocer al menos algunos pptidos generados a partir de casi cualquier agente patgeno.

Preguntas
3-1 La superfamilia de inmunoglobulina es una de las ms abundantes familias de estructuras de dominio de protena. a) Cules son las caractersticas de un dominio de inmunoglobulina, y de qu manera dieren los diversos subtipos de estos dominios? b) Qu regiones del dominio de inmunoglobulina tipo V contribuyen a sus regiones determinantes de complementariedad (CDR), y de qu modo los dominios de inmunoglobulina tipo V y tipo C dieren en esas regiones? 3-2 De qu manera los anticuerpos, que tienen la misma forma bsica, reconocen antgenos de una amplia variedad de formas diferentes? 3-3 Las clulas T deben suministrar funciones efectoras apropiadas para la localizacin celular de patgenos, mientras que las clulas B no estn tan constreidas. a) De qu modo explica esto las diferentes propiedades de reconocimiento de receptores de antgenos de clulas B y T? b) Describa las similitudes y diferencias entre receptores de antgenos de clulas B y clulas T. c) Dadas tales diferencias, cul es la diferencia esencial de la funcin de las clulas B y las clulas T? 3-4 Hay dos clases de molculas del MHC: I y II. a) Qu funcin tienen las molculas del MHC en la activacin de clulas T especcas para antgenos? b) Explique de qu manera la regin de unin a pptido de molculas del MHC de clases I y II pueden ser tan similares, aun cuando una est codicada por un gen nico y la otra est codicada por dos genes diferentes. c) Si las regiones de unin a pptido del MHC de clases I y II son tan similares, de qu modo las clulas T pueden distinguir desde el punto de vista funcional entre antgenos presentados por molculas del MHC de clases I y II?

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Captulo 3: Reconocimiento de antgenos por receptores de clulas B y clulas T

Referencias generales
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3-5

Los dominios de una molcula de inmunoglobulina tienen estructura similar

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3-2

Las cadenas pesadas y ligeras de inmunoglobulina se componen de regiones constante y variable

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y 3-3 La molcula de anticuerpo se puede dividir con facilidad hacia fragmentos distintos desde el punto de vista funcional 3-8 Los anticuerpos se unen a formas conformacionales sobre la supercie de antgenos

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3-4

La molcula de inmunoglobulina es exible, en especial en la regin bisagra

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142

Captulo 3: Reconocimiento de antgenos por receptores de clulas B y clulas T

3-16 Las estructuras cristalinas de varios complejos de pptido:MHC: receptores de clulas T muestran una orientacin de los mismos receptores similar sobre el complejo de pptido:MHC Buslepp, J., Wang, H., Biddison, W.E., Appella, E., and Collins, E.J.: A correlation between TCR V docking on MHC and CD8 dependence: implications for T cell selection. Immunity 2003, 19:595606. Ding, Y.H., Smith, K.J., Garboczi, D.N., Utz, U., Biddison, W.E., and Wiley, D.C.: Two human T cell receptors bind in a similar diagonal mode to the HLA-A2/ Tax peptide complex using different TCR amino acids. Immunity 1998, 8:403 411. Kjer-Nielsen, L., Clements, C.S., Purcell, A.W., Brooks, A.G., Whisstock, J.C., Burrows, S.R., McCluskey, J., and Rossjohn, J.: A structural basis for the selection of dominant ab T cell receptors in antiviral immunity. Immunity 2003, 18:5364. Garcia, K.C., Degano, M., Pease, L.R., Huang, M., Peterson, P.A., Leyton, L., and Wilson, I.A.: Structural basis of plasticity in T cell receptor recognition of a self peptide-MHC antigen. Science 1998, 279:11661172. SantAngelo, D.B., Waterbury, G., Preston-Hurlburt, P., Yoon, S.T., Medzhitov, R., Hong, S.C., and Janeway, C.A., Jr.: The specicity and orientation of a TCR to its peptide-MHC class II ligands. Immunity 1996, 4:367376. Reiser, J.B., Darnault, C., Gregoire, C., Mosser, T., Mazza, G., Kearney, A., van der Merwe, P.A., Fontecilla-Camps, J.C., Housset, D., and Malissen, B.: CDR3 loop exibility contributes to the degeneracy of TCR recognition. Nat. Immunol. 2003, 4:241247. Teng, M.K., Smolyar, A., Tse, A.G.D., Liu, J.H., Liu, J., Hussey, R.E., Nathenson, S.G., Chang, H.C., Reinherz, E.L., and Wang, J.H.: Identication of a common docking topology with substantial variation among different TCRMHCpeptide complexes. Curr. Biol. 1998, 8:409412. 3-17 Las protenas de supercie celular CD4 y CD8 de clulas T son necesarias para hacer una respuesta ecaz a antgenos Gao, G.F., Tormo, J., Gerth, U.C., Wyer, J.R., McMichael, A.J., Stuart, D.I., Bell, J.I., Jones, E.Y., and Jakobsen, B.Y.: Crystal structure of the complex between human CD8 and HLA-A2. Nature 1997, 387:630634. Gaspar, R., Jr., Bagossi, P., Bene, L., Matko, J., Szollosi, J., Tozser, J., Fesus, L., Waldmann, T.A., and Damjanovich, S.: Clustering of class I HLA oligomers with

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143

Generacin de receptores de antgenos de los linfocitos


Los receptores de antgenos de los linfocitos, en forma de inmunoglobulinas sobre las clulas B y de receptores de clulas T en las clulas del mismo nombre, son el medio por el cual los linfocitos detectan la presencia de antgenos en su ambiente. Cada linfocito porta muchas copias de un solo receptor con un sitio de unin a un antgeno nico, que determina los antgenos a los cuales el linfocito puede unirse. Dado que cada persona posee miles de millones de linfocitos, estas clulas en conjunto permiten que haya respuesta a una gran variedad de antgenos. La amplia gama de especificidades antignicas en el repertorio de receptores de antgenos se debe a la variacin de la secuencia de aminocidos del sitio de unin al antgeno, que est formado por las regiones variables (V) de las cadenas de protena del receptor. En cada cadena, la regin V est enlazada a una regin constante (C) invariable que proporciona funciones efectoras o de emisin de seales. Dada la importancia de un repertorio diverso de receptores de linfocitos en la defensa contra las infecciones, no es sorprendente que un mecanismo gentico complejo y equilibrado haya evolucionado para generar estas protenas tan variables. Cada variante de cadena de receptor no se puede codificar por completo en el genoma, dado que esto requerira un nmero de genes que codificaran receptores de antgenos mayor que el nmero de genes que hay en todo el genoma. En cambio, se observa que las regiones V de las cadenas de receptor estn codificadas en varias piezas, los llamados segmentos gnicos. stos se ensamblan en el linfocito en desarrollo mediante recombinacin de DNA somtico para formar una secuencia de regin V completa, un mecanismo conocido en general como reordenamiento gnico. Una secuencia de regin V ensamblada por completo est formada por dos o tres tipos de segmento gnico, cada uno de los cuales est presente en mltiples copias en el genoma de la lnea germinal. La seleccin de un segmento gnico de cada tipo durante el reordenamiento ocurre de manera aleatoria y el gran nmero de posibles combinaciones explica gran parte de la diversidad del repertorio de receptores. En la primera parte de este captulo se describen los reordenamientos de los genes intracromosmicos que generan el repertorio primario de regiones V de genes que codifican inmunoglobulinas y receptores de clulas T. El mecanismo de reordenamiento gnico es igual en las clulas B y en las T, y es probable que su evolucin haya sido crucial para la evolucin del sistema inmunitario adaptativo de los vertebrados. Los receptores de antgenos expresados despus de estos reordenamientos primarios proporcionan el repertorio de diversas especificidades antignicas de clulas B y T indiferenciadas. Las inmunoglobulinas pueden sintetizarse como receptores transmembrana o como anticuerpos secretados, al contrario de los receptores de las clulas T, que slo existen como receptores transmembrana. En la segunda parte del captulo se ver cmo se logra la transicin desde la produccin de inmunoglobulinas transmembrana por clulas B activadas hasta la produccin de anticuerpos secretados por clulas plasmticas. Las regiones C de los anticuerpos tienen importantes funciones efectoras en una respuesta inmunitaria, y aqu tambin se consideran con brevedad los distintos tipos de regiones C de los anticuerpos y sus propiedades, tema que se retoma con mayor detalle en el captulo 9.

144

Captulo 4: Generacin de receptores de antgenos de los linfocitos

En la ltima parte del captulo se consideran tres clases de modificaciones secundarias que pueden tener lugar en genes reordenados que codifican inmunoglobulinas en las clulas B, pero que no ocurren en las T. Todas stas proporcionan una mayor diversidad en el repertorio de anticuerpos que ayuda a hacer su respuesta ms eficaz con el tiempo. Una es un proceso conocido como hipermutacin somtica, que introduce mutaciones puntuales en las regiones V de genes codificadores de inmunoglobulinas reordenados en clulas B activadas, lo que produce algunas variantes que se unen con mayor fuerza al antgeno. La segunda es una modificacin llamada conversin de genes, que en algunas especies tiene una funcin ms importante que la diversidad combinacional en la variacin de regiones V reordenadas durante el desarrollo de clulas B inmaduras. La tercera modificacin es la expresin secuencial, limitada pero importante desde el punto de vista funcional, de diferentes regiones C de inmunoglobulina en clulas B activadas por medio de un proceso llamado cambio de clase, que permite la produccin de anticuerpos que tienen la misma especificidad de antgeno pero diferentes propiedades funcionales.

Reordenamiento primario de genes codicadores de inmunoglobulinas


Casi cualquier sustancia puede ser la diana de una respuesta de anticuerpos y la respuesta a incluso un solo eptopo comprende muchos anticuerpos diferentes, cada uno con una especificidad sutilmente desigual para el eptopo y una afinidad, o fuerza de unin, nica. El nmero total de especificidades de anticuerpo disponibles para un individuo se conoce como el repertorio de anticuerpos o repertorio de inmunoglobulinas, que en los seres humanos es de al menos 1011. Sin embargo, el nmero de especificidades de anticuerpo presentes en un momento dado lo limitan el nmero total de clulas B de un individuo y los encuentros previos de cada individuo con antgenos. Antes de que fuera posible examinar de manera directa los genes que codifican inmunoglobulinas, haba dos hiptesis principales para el origen de esta diversidad. La teora de la lnea germinal sostena que hay un gen separado para cada cadena de inmunoglobulina diferente y que el repertorio de anticuerpos es en su mayor parte hereditario. Por otra parte, las teoras de la diversificacin somtica propusieron que el repertorio observado se genera a partir de un nmero limitado de secuencias de regin V heredadas que experimentan alteraciones dentro de las clulas B durante el lapso de vida de un individuo. La clonacin de los genes que codifican inmunoglobulinas revel que elementos de ambas teoras eran correctos y que la secuencia de DNA que codifica cada regin se genera por reordenamientos de un grupo relativamente pequeo de segmentos gnicos heredados. La diversidad aumenta ms mediante el proceso de hipermutacin somtica en clulas B activadas maduras. De este modo, la teora de la diversificacin somtica era en esencia correcta, aunque el concepto de mltiples lneas germinales comprendido en la teora de la lnea germinal tambin result ser cierto.

4-1

Los genes que codican inmunoglobulinas se reordenan en las clulas productoras de anticuerpos

En clulas no linfoides, los segmentos gnicos que codifican la mayor parte de la regin V de una cadena de inmunoglobulina estn a una distancia considerable de la secuencia que codifica la regin C. Empero, en los linfocitos B maduros, la secuencia de la regin V ensamblada yace mucho ms cerca de la regin C, como consecuencia de reordenamiento de genes. La reorganizacin dentro de los genes que codifican inmunoglobulinas se descubri originalmente hace unos 30 aos, cuando las tcnicas de anlisis mediante enzimas de restriccin hicieron posible por vez primera estudiar la organizacin de dichos genes tanto en clulas B como en clulas no linfoides. En estos procedimientos, el DNA cromosmico se corta primero con una enzima de restriccin y los fragmentos que contienen secuencias particulares

Reordenamiento primario de genes codicadores de inmunoglobulinas

145

Fig. 4-1. Los genes de inmunoglobulina se reordenan en las clulas B. En los experimentos originales efectuados por Hozumi y Tonegawa, el tamao de los fragmentos de DNA se determin al medir la hibridacin de sondas radiomarcadas con fragmentos de restriccin aislados a partir de cortes de gel despus de la electroforesis. Ms tarde, la hibridacin de Southern (en la cual los fragmentos sometidos a electroforesis se transfieren a una membrana de nitrocelulosa) se convirti en la mejor tcnica. Las dos fotografas de la izquierda (DNA de lnea germinal) muestran una hibridacin de Southern de una molcula de DNA de clulas no linfoides de una persona normal, digerida con enzimas de restriccin. Las localizaciones de las secuencias de DNA de inmunoglobulina se identifican por medio de hibridacin con sondas de las regiones V y C. stas se encuentran en fragmentos de DNA separados en el DNA no linfoide. Las dos

fotografas de la derecha (DNA de clula B) son del mismo DNA digerido con enzimas de restriccin de linfocitos de sangre perifrica de un paciente con leucemia linfoctica crnica (cap. 7), en el cual una sola clona de clulas B est muy expandida. Las clulas B malignas expresan la regin V a partir de la cual se obtuvo la sonda de la misma regin y, debido a su predominio en la poblacin de clulas, puede detectarse este reordenamiento nico. En este DNA, las regiones V y C se encuentran en el mismo fragmento, que tiene un tamao diferente al de los fragmentos de lnea germinal de la regin C o de la V. Aun cuando no se muestra en esta figura, una poblacin de linfocitos B normales tiene muchos genes reordenados diferentes, de manera que se obtendra un arrastre de bandas de fragmentos de DNA de diferentes tamaos, que no son visibles como una banda ntida. Fotografas cortesa de S. Wagner y L. Luzzatto.

DNA de lnea germinal


Fragmento Fragmento de regin C de regin V

DNA de clula B
Fragmento de regin C Fragmento de regin V

de las regiones V y C se identifican por medio de hibridacin con sondas de DNA radiomarcadas especficas para las secuencias de DNA relevantes. En el DNA de la lnea germinal de clulas no linfoides, las secuencias de las regiones V y C estn en fragmentos de DNA separados, pero en el DNA proveniente de una clula B productora de anticuerpos estn en el mismo segmento, lo que muestra que ha ocurrido un reordenamiento del DNA. En la figura 4-1 se muestra un experimento tpico. Este experimento simple mostr que los segmentos de DNA genmico ubicados dentro de los genes que codifican inmunoglobulinas estn reordenados en clulas del linaje de linfocitos B, pero no en otras clulas. Este proceso de reordenamiento se conoce como recombinacin somtica, para distinguirlo de la recombinacin meitica que tiene lugar durante la produccin de gametos.

4-2

Los genes completos que codican una regin variable se generan mediante la recombinacin somtica de segmentos gnicos separados

La regin V, o dominio V, de una cadena pesada, o de una ligera, de inmunoglobulina es codificada por ms de un segmento gnico. En el caso de la cadena ligera, el dominio V es codificado por dos segmentos de DNA separados. El primero codifica los primeros 95 a 101 aminocidos, la mayor parte del dominio, y se llama segmento gnico V o variable. El segundo codifica el resto del dominio (hasta 13 aminocidos) y se llama segmento gnico J o de unin. Los reordenamientos que producen un gen de cadena ligera de inmunoglobulina completo se muestran en la figura 4-2 (panel central). La unin de un segmento gnico V con uno J crea un exn que codifica la regin V de la cadena ligera completa. En el DNA no reordenado, los segmentos gnicos V estn localizados relativamente lejos de la regin C. Sin embargo, los segmentos gnicos J estn localizados cerca de la regin C y la unin de un segmento gnico V a uno J tambin acerca al primero a una secuencia de la regin C. El segmento gnico J de la regin V reordenada est separado de una secuencia de la regin C slo por un intrn corto. En el experimento que se muestra en la figura 4-1, el fragmento de DNA de lnea germinal identificado por medio de la sonda de la regin V contiene el segmento gnico V, y el identificado por la sonda de la regin C en realidad contiene el segmento gnico J y la secuencia de la regin C. Para hacer un RNA mensajero de cadena ligera de inmunoglobulina completo, el exn de la regin V se une a la secuencia de la regin C mediante corte y empalme de RNA despus de la transcripcin (fig. 4-2). Una regin V de cadena pesada se codifica en tres segmentos gnicos. Adems de los segmentos gnicos V y J (denotados VH y JH para distinguirlos de las

146

Captulo 4: Generacin de receptores de antgenos de los linfocitos

Cadena ligera
L V J C

Cadena pesada L V D J C

DNA de lnea germinal Recombinacin somtica D-J reordenado DNA unido Recombinacin somtica V-J o V-DJ unido DNA reordenado Transcripcin Transcrito de RNA primario

DJ

DNA

DJ

C AAA

DJ

C AAA

RNA

Corte y empalme mRNA Traduccin


L V J C AAA VL CL

V DJ

C AAA C H3 C H2

Protena

Cadena polipeptdica

VH

C H1

Fig. 4-2. Los genes de la regin V se construyen a partir de segmentos gnicos. Los genes de la regin V de la cadena ligera se construyen a partir de dos segmentos (panel central). Un segmento gnico variable (V) y uno de unin (J) en el DNA genmico se unen para formar un exn de regin V de cadena ligera completo. Las cadenas de inmunoglobulina son protenas extracelulares, y el segmento gnico V es precedido por un exn que codifica un pptido lder (L), que dirige la protena hacia las vas secretoras de la clula y despus se divide. La regin C de la cadena ligera est codificada en un exn separado y se une al exn de la regin V mediante el corte y empalme del RNA de la cadena ligera para eliminar los intrones L a V y J a C. Las regiones V de la

cadena pesada estn construidas a partir de tres segmentos gnicos (panel derecho). En primer lugar, los segmentos gnicos de diversidad (D) y J se unen, despus el segmento gnico V se une a la secuencia DJ combinada, lo que forma un exn VH completo. Un gen de la regin C de la cadena pesada es codificado por varios exones. Los exones de la regin C, junto con la secuencia lder, se empalman a la secuencia del dominio V durante el procesamiento del transcrito de RNA de la cadena pesada. La secuencia lder se elimina despus de la traduccin y se forman los enlaces disulfuro que enlazan las cadenas polipeptdicas. La regin bisagra se muestra en color prpura.

cadenas ligeras VL y JL) hay un tercero llamado el segmento gnico DH o de diversidad, que yace entre los segmentos gnicos VH y JH. El proceso de recombinacin que genera una regin V de cadena pesada completa se muestra en la figura 4-2 (panel derecho), y ocurre en dos etapas separadas. En la primera, un segmento gnico DH se une a uno JH; despus un segmento gnico VH se reordena hacia DJH para formar un exn de la regin VH completo. Al igual que con los genes que codifican la cadena ligera, el corte y empalme del RNA une la secuencia de la regin V ensamblada al gen que codifica la regin C adyacente.

4-3

En cada locus de inmunoglobulina hay mltiples segmentos gnicos V contiguos

En aras de la sencillez se ha comentado la formacin de una secuencia de regin V completa como si hubiera slo una copia nica de cada segmento gnico. De hecho, en el DNA de la lnea germinal hay mltiples copias de todos los segmen-

Reordenamiento primario de genes codicadores de inmunoglobulinas

147

tos gnicos. Es la seleccin aleatoria de slo un segmento gnico de cada tipo lo que hace posible la gran diversidad de regiones V entre inmunoglobulinas. En la figura 4-3 se muestran los nmeros de segmentos gnicos funcionales de cada tipo en el genoma humano, determinados por clonacin y secuenciacin de genes. No todos los segmentos gnicos descubiertos son funcionales, puesto que una proporcin ha acumulado mutaciones que evitan que codifiquen protenas funcionales. stos se denominan seudogenes Dado que en el DNA de la lnea . germinal hay muchos segmentos gnicos V, D y J, ninguno es esencial. Esto reduce la presin evolutiva sobre cada segmento gnico para permanecer intacto y ha originado un nmero relativamente grande de seudogenes. Dado que algunos de stos pueden experimentar reordenamiento de la misma manera que un segmento gnico normal, una proporcin importante de reorganizaciones incorpora un seudogn y por lo tanto ser no funcional. En la seccin 3-1 se mencion que hay tres grupos de cadenas de inmunoglobulina, las cadenas pesadas y dos tipos equivalentes de cadena ligera, las cadenas y las . Los segmentos de genes de inmunoglobulinas que forman cada una de estas cadenas estn organizados en tres grupos o loci genticos (los loci de cadena pesada, y ) cada uno de los cuales puede ensamblar una secuencia de regin V completa. Cada locus est en un cromosoma diferente y est organizado de modo un poco distinto, como se muestra en los loci humanos que aparecen en la figura 4-4. En el locus de la cadena ligera , localizado en el cromosoma 22, un grupo de segmentos gnicos V va seguido por cuatro conjuntos de segmentos gnicos J, cada uno enlazado a un gen C nico. En el locus de la cadena ligera , ubicado en el cromosoma 2, el grupo de segmentos gnicos V va seguido por un conjunto de segmentos gnicos J, y luego por un solo gen C. La organizacin del locus de la cadena pesada, que se encuentra en el cromosoma 14, se asemeja a la del locus , con grupos separados de segmentos gnicos VH, DH y JH y de genes CH. El locus de la cadena pesada difiere en un aspecto importante: en lugar de una regin C nica, contiene una serie de regiones C dispuestas una despus de la otra, cada una de las cuales corresponde a un isotipo diferente. Las clulas B inicialmente expresan los isotipos de cadena pesada y (seccin 3-1), lo cual se logra por medio del corte y empalme alternativo del mRNA y lleva a la expresin de las inmunoglobulinas IgM e IgD (seccin 4-14). La expresin de otros isotipos, como (que produce IgG), ocurre en una etapa posterior mediante reordenamientos de DNA denominados cambios de clase (seccin 4-20).
Locus de cadena ligera
L1 V 1 L2 V 2 L V~30 J 1 C 1 J 2

Nmero de segmentos gnicos funcionales en loci de inmunoglobulina de ser humano Cadenas ligeras
30 0 4

Segmento

Cadena pesada
H 40 25 6

Variable (V) Diversidad (D) Unin (J)

40 0 5

Fig. 4-3. Nmero de segmentos gnicos funcionales para las regiones V de las cadenas pesada y ligera humanas. Estos nmeros derivan de la clonacin y secuenciacin exhaustivas del DNA de un individuo y excluyen todos los seudogenes (versiones mutadas y no funcionales de una secuencia gnica). Como resultado del polimorfismo gentico, los nmeros no sern los mismos para todas las personas.

C 2

J 4

C4

Locus de cadena ligera


L1 V 1 L 2 V 2 L3 V 3 L V ~40 J 15 C

Locus de cadena pesada


L1 V H 1 L2 VH 2 L3 V H 3 LH VH ~40 D H 125 J H 16 C

Fig. 4-4. Organizacin de lnea germinal de los loci de las cadenas pesada y ligera de inmunoglobulina en el genoma humano. El locus gentico de la cadena ligera (cromosoma 22) tiene aproximadamente 30 segmentos gnicos V funcionales y cuatro pares de segmentos gnicos J, y genes C funcionales. El locus (cromosoma 2) est organizado de un modo similar, con alrededor de 40 segmentos gnicos V funcionales acompaados por una agrupacin de cinco segmentos gnicos J pero con un solo gen C. En ~50% de los individuos, toda la agrupacin de segmentos gnicos V ha experimentado un aumento por duplicacin (que no se muestra en aras de la sencillez). El locus de la cadena pesada (cromosoma 14) tiene alrededor de 40 segmentos gnicos VH

funcionales, y una agrupacin de aproximadamente 25 segmentos DH que yacen entre estos segmentos gnicos VH y seis segmentos gnicos JH. El locus de la cadena pesada tambin contiene una agrupacin grande de genes CH que se muestran en la figura 4-17. Por simplicidad, en este diagrama slo se muestra un gen CH individual sin ilustrar sus exones separados, se han omitido los seudogenes y todos los segmentos gnicos V aparecen en la misma orientacin. L, secuencia lder. Este diagrama no est a escala: la longitud total del locus de la cadena pesada tiene ms de dos megabases (2 millones de bases), mientras que algunos de los segmentos gnicos D slo tienen seis bases de largo.

148

Captulo 4: Generacin de receptores de antgenos de los linfocitos

Los segmentos gnicos V humanos pueden agruparse en familias en las cuales cada miembro comparte al menos el 80% de identidad de secuencia de DNA con los otros integrantes de la familia. Los segmentos gnicos V tanto de la cadena pesada como de la cadena pueden subdividirse en siete familias, y hay ocho familias de segmentos gnicos V. Las familias pueden agruparse en clanes, formados por aquellas que se parecen ms entre s que a las de otros clanes. Los segmentos gnicos VH humanos se agrupan en tres clanes. Todos los segmentos gnicos VH identificados a partir de anfibios, reptiles y mamferos tambin se clasifican dentro de los mismos tres clanes, lo cual sugiere que estos clanes existieron en un ancestro comn de estos grupos de animales modernos. As, los segmentos gnicos V que se observan en la actualidad han surgido por una serie de duplicaciones y diversificacin de genes durante el tiempo evolutivo.

4-4

El reordenamiento de los segmentos gnicos V, D y J es guiado por secuencias de DNA anqueadoras

Fig. 4-5. Las secuencias de seal de recombinacin son secuencias heptamricas y nonamricas conservadas que flanquean los segmentos gnicos que codifican las regiones V, D, y J de las inmunoglobulinas. Las secuencias de seal de recombinacin (RSS) estn formadas por secuencias heptamricas (CACAGTG) y nonamricas (ACAAAAACC) separadas por nucletidos de 12 bp o de ~23 bp. El motivo heptmero-espaciador de 12 bp-nonmero se describe aqu como una punta de flecha de color anaranjado; el motivo que incluye el espaciador de 23 bp est representado con una punta de flecha de color prpura. La unin de segmentos gnicos casi siempre involucra una RSS de 12 bp y una de 23 bp, la regla 12/23. Aqu se muestra el ordenamiento de las RSS en los segmentos gnicos V (rojo), D (verde) y J (amarillo) de las cadenas pesada (H) y ligera ( y ) de inmunoglobulina. Ntese que de acuerdo con la regla 12/23, el ordenamiento de las RSS en los segmentos gnicos de la cadena pesada de inmunoglobulina impide la unin directa de V con J.

Para que una inmunoglobulina o una cadena de receptor de clula T completa se exprese, los reordenamientos del DNA deben ocurrir en las ubicaciones correctas respecto a las regiones codificadoras del segmento gnico V, D o J. Adems, las uniones deben estar reguladas de tal manera que un segmento gnico V se una a uno D o a uno J y no a otro V. Los reordenamientos de DNA son guiados por secuencias de DNA no codificadoras conservadas que se encuentran junto a los puntos en los que tiene lugar la recombinacin llamada secuencias de seal de recombinacin (RSS), que constan de un bloque conservado de siete nucletidos (el heptmero 5CACAGTG3) que siempre est junto a la secuencia codificadora, seguido por la regin no conservada conocida como espaciador, que tiene 12 o 23 pares de bases (bp) de largo, al que le sigue un segundo bloque conservado de nueve nucletidos (el nonmero 5ACAAAAACC3) (fig. 4-5). Los espaciadores varan en secuencia, pero sus longitudes conservadas corresponden a una (12 bp) o a dos vueltas (23 bp) de la doble hlice de DNA. Esto lleva las secuencias de heptmero y nonmero al mismo lado de la hlice de DNA, donde se pueden unir al complejo de protenas que cataliza la recombinacin. El motivo de secuencia de heptmeroespaciador-nonmero (la RSS) siempre se encuentra justo al lado de la secuencia codificadora de los segmentos gnicos V, D o J. En circunstancias normales, la recombinacin ocurre entre segmentos gnicos localizados en el mismo cromosoma. Un segmento de gen flanqueado por una RSS con un espaciador de 12 bp por lo general slo puede unirse a uno flanqueado por una RSS con un espaciador de 23 bp. Esto se conoce como la regla 12/23. De este modo, para la cadena pesada, un segmento gnico DH puede unirse a uno JH, y uno VH a uno DH, pero los segmentos gnicos VH no pueden unirse de manera directa a los JH, puesto que los segmentos gnicos VH y los JH estn flanqueados por espaciadores de 23 bp, y los segmentos gnicos DH tienen espaciadores de 12 bp a ambos lados (fig. 4-5).
Secuencia de seal de recombinacin (RSS) con espaciador de 23 pares de bases CACAGTG heptmero GTGTCAC Cadena ACAAAAACC nonmero TGTTTTTGG Secuencia de recombinacin de seal (RSS) con espaciador de 12 pares de bases GGTTTTTGT nonmero CCAAAAACA CACTGTG heptmero GTGACAC

23

12

23

12

Cadena

RSS
V
12

RSS
23

Cadena H

VH

23

12

DH

12

23

JH

Reordenamiento primario de genes codicadores de inmunoglobulinas

149

Vn
23 23 23

Ln
12

L1 V1

L2 V2

L1 V1

L2 V2 L2 Vn Ln V2

V1 L1

Vn Ln

eliminado

L1 V1

L2 V2 L2 Vn Ln unin de seal direccin de la transcripcin direccin de la transcripcin V2

Fig. 4-6. Los segmentos gnicos de la regin V se unen por medio de recombinacin. En cada evento de recombinacin de la regin V, las secuencias de seal de recombinacin (RSS) que flanquean los segmentos gnicos se juntan para permitir que ocurra la recombinacin. Las RSS con espaciador de 12 bp se muestran en color anaranjado, y las RSS con espaciador de 23 bp, en prpura. Para simplificar se ilustra la recombinacin de un gen de cadena ligera; para un gen de cadena pesada, se requieren dos eventos de recombinacin separados para generar una regin V funcional. Casi siempre, los dos segmentos que experimentan reordenamiento (en este ejemplo los segmentos gnicos V y J) estn organizados en la misma orientacin transcripcional en el cromosoma (paneles izquierdos) y la yuxtaposicin de las RSS hace que el DNA interpuesto forme un lazo. La recombinacin ocurre en los extremos de las secuencias heptamricas de las RSS, lo que crea la llamada unin de seal y libera el DNA interpuesto en forma de un crculo cerrado. Despus, la unin de los segmentos gnicos V y J crea la unin codificadora en el DNA cromosmico. En otros casos, que se ilustran en los paneles de la derecha, los segmentos gnicos V y J inicialmente estn orientados en direcciones de transcripcin opuestas. Unir las RSS en este caso requiere que el DNA forme un lazo ms complejo. Unir los extremos de las dos secuencias heptamricas resulta en la inversin e integracin del DNA interpuesto en una nueva posicin en el cromosoma. Una vez ms, la unin de los segmentos V y J crea un exn de regin V funcional.

L1

V1 J unin codicadora

Invertida

Ln

Vn

Recurdese que la regin de unin a antgeno de una inmunoglobulina est formada por tres regiones hipervariables (seccin 3-6). Las primeras dos, CDR1 y CDR2, estn codificadas en el segmento gnico V mismo. La tercera, CDR3, es codificada por la secuencia de DNA adicional que se crea por la unin de los segmentos gnicos V y J para la cadena ligera y de los segmentos gnicos V, D y J para la cadena pesada. La diversidad adicional en el repertorio de anticuerpos puede resultar de la generacin de regiones CDR3 que parecen producirse por la unin de un segmento gnico D a otro igual. Aunque es poco frecuente, dicha unin DD parecera violar la regla 12/23, y no est claro de qu modo se generan estos reordenamientos raros. En los seres humanos, la unin D-D se encuentra en ~5% de los anticuerpos y es el principal mecanismo que explica los lazos de CDR3 inusualmente largos que se encuentran en algunas cadenas pesadas. El mecanismo de reordenamiento de DNA es similar para los loci de cadena pesada y para los de cadena ligera, aunque slo se necesita un evento de unin para generar un gen de cadena ligera, pero dos para un gen de cadena pesada. Cuando dos segmentos gnicos estn en la misma orientacin en el DNA, el reordenamiento comprende la formacin de lazos y la delecin del DNA entre ellos (fig. 4-6, paneles izquierdos). Pero si los segmentos gnicos tienen orientaciones transcripcionales opuestas, el DNA interpuesto se retiene en el cromosoma en

150

Captulo 4: Generacin de receptores de antgenos de los linfocitos

una orientacin invertida (fig. 4-6, paneles derechos). Esta manera de recombinacin es menos frecuente, pero explica cerca de la mitad de las uniones de V a J en seres humanos porque la orientacin de la mitad de los segmentos gnicos V es opuesta a la de los J.

4-5

La reaccin que recombina segmentos gnicos V, D y J involucra enzimas modicadoras de DNA tanto especcas para linfocitos como ubicuas

El mecanismo molecular de reordenamiento de la regin V, o recombinacin V(D)J, se ilustra en la figura 4-7. Las dos RSS se juntan por interacciones entre protenas que reconocen de modo especfico la longitud del espaciador y que por lo tanto cumplen con la regla 12/23 de la recombinacin. A continuacin, la molcula de DNA se rompe en dos lugares y se vuelve a unir en una configuracin diferente. Los extremos de las secuencias heptamricas se unen con precisin en una disposicin cabeza a cabeza para formar una unin de seal; cuando los segmentos de unin estn en orientacin directa, la articulacin de seal es una pieza circular de DNA extracromosmico (fig. 4-6, paneles izquierdos), que se pierde del genoma cuando la clula se divide. Los segmentos gnicos V y J, que permanecen en el cromosoma, se unen para formar la unin codificadora. En el caso de reordenamiento por inversin (fig. 4-6, paneles derechos), la articulacin de seal tambin se retiene dentro del cromosoma y la regin de DNA ubicada entre el segmento gnico V y la RSS del segmento gnico J se invierte para formar la unin codificadora. El empalme de la unin codificadora es impreciso y en consecuencia genera mucha variabilidad adicional en la secuencia de la regin V (vase ms adelante). El complejo de enzimas que actan en conjunto para llevar a cabo la recombinacin somtica V(D)J se denomina recombinasa V(D)J. Los componentes especficos de linfocitos de la recombinasa se llaman RAG-1 y RAG-2, y son codificados por dos genes activadores de recombinacin, RAG-1 y RAG-2. Este par de genes se expresa en linfocitos en desarrollo slo mientras estn ensamblando sus receptores de antgenos (cap. 7), y son esenciales para la recombinacin V(D)J. De hecho, cuando los genes RAG se expresan juntos pueden conferir a clulas no linfoides, como los fibroblastos, la capacidad para reordenar segmentos exgenos de DNA que contienen las RSS apropiadas; es as como se descubrieron inicialmente RAG-1 y RAG-2. Las otras protenas en el complejo de recombinasa son principalmente protenas modificadoras de DNA ubicuas que participan en la reparacin de roturas de la doble cadena de DNA y en la modificacin de los extremos de cadenas de DNA rotas. Una es Ku, un heterodmero (Ku70:Ku80); sta forma un anillo alrededor del DNA y se une con fuerza a una subunidad cataltica de proteincinasa, DNA-PKcs, para formar la proteincinasa dependiente de DNA (DNA-PK). Otra es la protena Artemis, que tiene actividad nucleasa. Al final los extremos de DNA se unen por medio de la enzima ligasa de DNA IV, que forma un complejo con la protena de reparacin de DNA XRCC4. La recombinacin V(D)J es un proceso enzimtico de mltiples pasos en el cual la primera reaccin es una divisin (escisin) endonucleoltica que exige la actividad coordinada de ambas protenas RAG. Al principio, dos complejos de protenas RAG, cada uno de los cuales contiene RAG-1, RAG-2 y protenas de cromatina del grupo de alta movilidad, reconocen y alinean las dos RSS que dirigen la reaccin de divisin (fig. 4-7). Se cree que RAG-1 reconoce de manera especfica el nonmero de la RSS. En esta etapa, la regla 12/23 se establece mediante mecanismos que an no se comprenden con claridad. La actividad endonucleasa de los complejos de protenas RAG, que se cree que reside en la protena RAG-1, despus hace dos cortes en una de las cadenas de DNA en los extremos 5 de cada RSS unida, lo que deja un grupo 3-OH libre en el extremo de cada segmento codificador. El grupo 3-OH despus ataca el enlace fosfodister en la otra cadena, lo que crea una horquilla de DNA en el extremo de la regin codificadora del segmento gni-

Reordenamiento primario de genes codicadores de inmunoglobulinas

151

Conguracin de lnea germinal

23

12

RAG 1:2 se une a la RSS

Sinapsis de complejos de RAG

Divisin de RSS

RAG1/2 Extremos de la horquilla de DNA cerrados de manera covalente

Uniones codicadoras Ku70:Ku80 se une a los extremos de DNA

Uniones de seal Ku70:Ku80 se une a los extremos de DNA

Ku70:80 Ku70:80 extremos romos 5-fosforilados

DNA-PK:Artemis abre la horquilla Artemis DNA-PK

La TdT procesa los extremos de DNA Desoxinucleotidiltransferasa terminal (TdT)

La ligasa de DNA IV:XRCC4 liga los extremos de DNA

Fig. 4-7. Pasos enzimticos en el reordenamiento V(D)J dependiente de RAG. Los segmentos de gen que contienen secuencias de seal de recombinacin (RSS) (tringulos) experimentan un reordenamiento que empieza con la unin de RAG-1, de RAG-2 (azul y prpura) y de protenas del grupo de alta movilidad (HMG) (no se muestran) a una RSS que flanquea las secuencias de codificacin que van a unirse (segunda fila). Despus de unir dos complejos RAG a dos RSS, ocurre una sinapsis probable en la cual los dos complejos se juntan. En el paso de divisin, la actividad de endonucleasa del complejo RAG inicialmente corta un enlace fosfodister del esqueleto de DNA para crear un grupo 3-hidroxilo precisamente entre el segmento codificador y su RSS. Este 3-OH recin creado a continuacin reacciona con un enlace fosfodister de la cadena de DNA opuesta para generar un extremo fosforilado 5 de DNA romo en la secuencia heptamrica de la RSS y una horquilla en el extremo codificador. Despus, estos dos extremos de DNA se resuelven de maneras un poco diferentes. En los extremos codificadores (paneles izquierdos), protenas esenciales como Ku70:Ku80 (verde) se unen a la horquilla. A continuacin el complejo de DNA-PK: Artemis (prpura) se une al complejo y su actividad de endonucleasa abre la horquilla de DNA en un sitio aleatorio para generar un extremo raso o un extremo de DNA monocatenario extendido (dependiendo del sitio exacto de divisin de la horquilla). Este extremo de DNA despus se modifica por las actividades de TdT (de color rosado) y de exonucleasa, que crean extremos aleatorios diversos e imprecisos (este proceso se muestra con mayor detalle en la fig. 4-8). Al final los extremos se ligan por medio de la ligasa de DNA IV (turquesa) en asociacin con la protena XRCC4 (verde). En los extremos de seal (paneles derechos), los dos extremos romos fosforilados 5 de las secuencias heptamricas son unidos por Ku70:Ku80, pero no se modifican ms. En cambio, un complejo de ligasa de DNA IV:XRCC4 une con precisin los dos extremos de seal para formar la unin de seal.

ligasa de DNA:XRCC4

La ligasa de DNA IV:XRCC4 liga los extremos de DNA

Unin de seal precisa

ligasa de DNA:XRCC4

152

Captulo 4: Generacin de receptores de antgenos de los linfocitos

Sndrome de Omenn

co y un corte de doble cadena en los extremos de las dos secuencias heptamricas. Sin embargo, los extremos de DNA no quedan sueltos, sino unidos con fuerza al complejo hasta que se completa la unin. Los extremos 5 del DNA se mantienen juntos por medio del heterodmero Ku y se unen con precisin mediante un complejo formado por ligasa de DNA IV y XRCC4 para formar la seal de unin. La formacin de la unin codificadora es ms compleja, pero parece ocurrir con mayor rapidez que la de la unin de seal. Los extremos de DNA con las horquillas se mantienen juntos por medio de Ku, que recluta la subunidad DNA-PKcs. La protena Artemis reclutada en el complejo se activa mediante fosforilacin por DNA-PK y luego abre las horquillas de DNA al hacer una mella en una sola cadena del DNA. Este mellado puede ocurrir en varios puntos a lo largo de la horquilla, lo que provoca la variabilidad de secuencia en la unin final. Las enzimas de reparacin de DNA del complejo modifican las horquillas abiertas al eliminar nucletidos, mientras que al mismo tiempo la enzima especfica de linfocitos desoxinucleotidiltransferasa terminal (TdT), que tambin forma parte del complejo recombinasa, aade nucletidos al azar a los extremos de la cadena individual. La adicin y la delecin de nucletidos puede ocurrir en cualquier orden y no necesariamente precede a la otra. Por ltimo, la ligasa de DNA IV une los extremos procesados, lo que reconstituye un cromosoma que incluye el gen reordenado. Este proceso de reparacin crea diversidad en la unin entre los segmentos gnicos, mientras garantiza que los extremos de la RSS se unan sin modificaciones y que no haya un dao gentico no intencional, como la rotura de un cromosoma. El mecanismo de recombinacin controlado por las protenas RAG comparte muchas caractersticas interesantes con el mecanismo por medio del cual las integrasas de retrovirus catalizan la insercin de DNA retroviral en el genoma y con el mecanismo de transposicin usado por los transposones (elementos genticos mviles que codifican su propia transposasa, lo que les permite escindirse de un sitio del genoma y reinsertarse por s mismos en otro lugar). Incluso la estructura de los genes RAG mismos, que yacen juntos en el cromosoma y carecen de los intrones habituales de los genes mamferos, es semejante a la de un transposn. De hecho, recientemente se demostr que el complejo RAG puede actuar como una transposasa in vitro. Estas caractersticas han provocado especulaciones sobre el origen del complejo RAG, que contemplan la posibilidad de que pudo haber sido una transposasa cuya funcin se adapt mediante evolucin en los vertebrados para permitir la recombinacin del segmento gnico V, lo que da pie al advenimiento del sistema inmunitario adaptativo de los vertebrados (cap. 16). De acuerdo con esta idea, en los organismos no vertebrados no se han encontrado genes homlogos a los genes RAG. Las funciones in vivo de las enzimas comprendidas en la recombinacin V(D)J se han establecido mediante mutaciones naturales o inducidas. Los ratones que carecen de TdT no aaden nucletidos adicionales a las uniones entre segmentos gnicos. Los ratones en los que se bloquea uno de los genes RAG, o que carecen de DNA-PKcs, de Ku, o de Artemis, sufren un bloqueo completo del desarrollo de linfocitos en la etapa de reordenamiento gnico, o slo producen cantidades insignificantes de clulas B y T. Se dice que sufren inmunodeficiencia combinada grave (SCID). La mutacin scid original se descubri algn tiempo antes del descubrimiento de los componentes de la va de recombinacin y despus se identific como una mutacin de DNA-PKcs. De acuerdo con su funcin propuesta, los ratones que carecen de la actividad de la DNA-PK presentan defectos en la unin codificadora, pero no en la formacin de la unin de seal. Los ratones con deficiencia de DNA-PKcs, de Ku o de Artemis por lo general exhiben defectos en la reparacin de roturas de doble cadena y son hipersensibles a radiacin ionizante (que produce roturas de doble cadena). En los seres humanos, las mutaciones en RAG1 o en RAG2 que dan por resultado una actividad parcial de recombinasa de V(D)J son las causales de un trastorno hereditario llamado sndrome de Omenn, que se caracteriza por falta de clulas B circulantes y por infiltracin de la piel por linfocitos T oligoclonales activados. Los defectos de Artemis en los seres humanos producen una inmunodeficiencia combinada de clulas B y de clulas T asociada a incremento de la radiosensibilidad, denominada RS-SCID.

Reordenamiento primario de genes codicadores de inmunoglobulinas

153

4-6

La diversidad del repertorio de inmunoglobulinas se genera por medio de cuatro procesos principales

El reordenamiento gnico que combina segmentos de genes para formar un exn de regin V completo genera diversidad de dos modos. En primer lugar, hay mltiples copias diferentes de cada tipo de segmento gnico y diferentes combinaciones de segmentos gnicos pueden usarse en eventos de reordenamiento diversos. Esta diversidad combinacional es causal de una parte considerable de la diversidad de las regiones V. En segundo lugar, la diversidad de unin se introduce en las uniones entre los diferentes segmentos gnicos como resultado de la adicin y de la escisin de nucletidos mediante el proceso de recombinacin. Una tercera fuente de diversidad tambin es combinacional; surge a partir de muchas combinaciones diferentes posibles de regiones V de cadena pesada y de cadena ligera que se aparean para formar el sitio de unin a antgeno en la molcula de inmunoglobulina. Los dos medios para generar diversidad combinacional por s mismos podran dar lugar, en teora, a cerca de 1.9 106 diferentes molculas de anticuerpos (seccin 4-7). Junto con la diversidad de unin, se estima que hasta 1011 receptores diferentes podran conformar el repertorio de receptores expresado por clulas B indiferenciadas. Por ltimo, la hipermutacin somtica, que se comenta ms adelante en este captulo, introduce mutaciones puntuales en los genes de la regin V reordenados de clulas B activadas, lo que crea mayor diversidad que puede seleccionarse para aumentar la unin al antgeno.

4-7

Los mltiples segmentos gnicos heredados se usan en diferentes combinaciones

Hay mltiples copias de los segmentos gnicos V, D y J, cada una de las cuales puede contribuir a una regin V de inmunoglobulina. Por tanto, al seleccionar diversas combinaciones de estos segmentos pueden hacerse muchas regiones V diferentes. Para las cadenas ligeras humanas, hay alrededor de 40 segmentos gnicos V funcionales y cinco J, y por lo tanto 200 posibles regiones V diferentes. Para las cadenas ligeras hay cerca de 30 segmentos gnicos V funcionales y cuatro J, lo que da 120 posibles regiones V. De esta manera, en total, pueden producirse 320 cadenas ligeras diferentes como resultado de la combinacin de diferentes segmentos gnicos de cadena ligera. Para las cadenas pesadas de los seres humanos, hay 40 segmentos gnicos VH funcionales, alrededor de 25 segmentos gnicos DH, y seis segmentos gnicos JH y, en consecuencia, cerca de 6 000 diferentes regiones VH posibles (40 25 6 = 6 000). Durante el desarrollo de las clulas B, el reordenamiento en el locus del gen que codifica la cadena pesada para su produccin va seguido por varias rondas de divisin celular antes de que ocurra el reordenamiento del gen de la cadena ligera, lo que provoca que la misma cadena pesada forme apareamientos con diferentes cadenas ligeras en distintas clulas. Dado que las regiones V tanto de la cadena pesada como de la cadena ligera contribuyen con la especificidad del anticuerpo, cada una de las 320 cadenas ligeras diferentes podra combinarse con cada una de las ~6 000 cadenas pesadas para dar cerca de 1.9 106 especificidades de anticuerpos diferentes. Este clculo terico de diversidad combinacional se basa en el nmero de segmentos gnicos V de lnea germinal que contribuyen a los anticuerpos funcionales (fig. 4-3); el nmero total de segmentos gnicos V es mayor, pero los segmentos adicionales son seudogenes y no aparecen en molculas de inmunoglobulina expresadas. En la prctica, es probable que la diversidad combinacional sea menor que lo que podra esperarse a partir de los clculos anteriores. Una razn es que no todos los segmentos gnicos V se usan con la misma frecuencia; algunos son comunes en los anticuerpos, mientras que otros se encuentran en pocas ocasiones. Asimismo, no todas las cadenas pesadas pueden aparearse con todas las cadenas ligeras: ciertas combinaciones de regiones VH y VL no forman una molcula estable. Las clulas en las cuales las cadenas pesadas y las ligeras no se aparean pueden experimentar ms reordenamiento gnico de cadena ligera hasta que se produzca una cadena idnea, o se eliminarn. Sin embargo, se cree que casi todas

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Captulo 4: Generacin de receptores de antgenos de los linfocitos

las cadenas pesadas y las ligeras pueden aparearse entre s y que este tipo de diversidad combinacional tiene una funcin importante en la formacin de un repertorio de inmunoglobulinas con un amplio rango de especificidades.

4-8

La adicin y la sustraccin variables de nucletidos en las uniones entre los segmentos gnicos contribuyen con la diversidad de la tercera regin hipervariable

Aproximacin de las RSS


T C A G C A C A G T G G T G T C A C C A C T G T G G T G A C A C T A A T

El complejo RAG genera la horquilla de DNA en los extremos codicadores


T C A G T A A T

El complejo Artemis:DNA-PK abre las horquillas de DNA, lo que genera nucletidos P palindrmicos
T C G A

A T A T

Adiciones de nucletido N por la TdT

Como se mencion, de los tres lazos hipervariables de una cadena de inmunoglobulina, CDR1 y CDR2 estn codificados dentro del segmento gnico V. Por otra parte, CDR3 yace en la unin entre los segmentos gnicos V y J, y en la cadena pesada es codificado en parte por el segmento gnico D. En cadenas tanto pesadas como ligeras, la diversidad del lazo CDR3 incrementa mucho por la adicin y por la delecin de nucletidos en dos pasos en la formacin de las uniones entre los segmentos gnicos. Los nucletidos agregados se conocen como nucletidos P y nucletidos N, y su adicin se ilustra en la figura 4-8. Los nucletidos P reciben este nombre porque conforman secuencias palindrmicas agregadas a los extremos de los segmentos gnicos. Como se describi en la seccin 4-5, las protenas RAG generan horquillas de DNA en los extremos codificadores de los segmentos V, D o J, luego de lo cual la protena Artemis cataliza una divisin de una sola cadena en un punto aleatorio localizado dentro de la secuencia codificadora pero cerca del punto original en el cual se form por vez primera la horquilla. Cuando esta divisin ocurre en un punto diferente al de la rotura inicial inducida por el complejo RAG1/2, se forma una cola de una sola cadena a partir de unos cuantos nucletidos de las secuencias codificadoras ms los nucletidos complementarios provenientes de la otra cadena de DNA (fig. 4-8). En casi todos los reordenamientos de los genes de la cadena ligera, las enzimas de reparacin de DNA despus rellenan con nucletidos complementarios las colas de una sola cadena, lo que dejara secuencias palindrmicas cortas (los nucletidos P) en la unin si los extremos volvieran a unirse sin actividad adicional de exonucleasa. Sin embargo, en los reordenamientos de los genes de la cadena pesada y en una proporcin de los de la cadena ligera humanos, se aaden nucletidos N por medio de un mecanismo bastante diferente antes de que los extremos se vuelvan a unir. Los nucletidos N se llaman as porque no son codificados por un molde. Son aadidos por la enzima TdT a los extremos de una sola cadena del DNA codificador despus de la divisin de la horquilla. Despus de la adicin de hasta 20
Fig. 4-8. La introduccin de nucletidos P y nucletidos N diversifica las uniones entre los segmentos gnicos durante el reordenamiento de los genes de inmunoglobulina. El proceso que se ilustra es de un reordenamiento DH a JH (primer panel); sin embargo, ocurren los mismos pasos en los reordenamientos VH a DH y VL a JL. Luego de la formacin de las horquillas de DNA (segundo panel), las dos secuencias heptamricas se ligan para formar la unin de seal (que no se muestra aqu), mientras que Artemis:DNA-PK divide la horquilla de DNA en un sitio aleatorio (indicado por las flechas) para originar un extremo de DNA monocatenario (tercer panel). Dependiendo del sitio de la divisin, este DNA monocatenario puede contener nucletidos que originalmente fueron complementarios en el DNA de doble cadena y el cual, por tanto, forma palndromos de DNA cortos, como TCGA y ATAT, como lo indica el cuadro sombreado de color azul. Esos tramos de nucletidos que se originan a partir de la cadena complementaria se conocen como nucletidos P. Por ejemplo, la secuencia GA ubicada en el extremo del segmento D que se muestra es complementaria a la secuencia TC precedente. Cuando la enzima desoxinucleotidiltransferasa terminal (TdT) est presente, se aaden nucletidos al azar a los extremos de los segmentos de una sola cadena (cuarto panel), indicados por el cuadro sombreado que rodea a estos nucletidos no codificados por un molde, o N. Los dos extremos monocatenarios despus se aparean (quinto panel). El recorte con exonucleasas de nucletidos no apareados (sexto panel) y la reparacin de la unin codificadora mediante sntesis y ligadura de DNA (panel inferior) deja a los nucletidos P y a los N presentes en la unin codificadora final (indicada por el sombreado de color azul claro). La aleatoriedad de la insercin de los nucletidos P y de los N hace que una regin P-N individual sea casi nica, y un marcador valioso para seguir una clona de clulas B individual conforme se desarrolla, por ejemplo, en estudios de hipermutacin somtica (fig. 4-25).

T C G A C T C A

T A G C G A T A T

Apareamiento de cadenas
T C G A C T C
A

A G C G A T A T

Una exonucleasa elimina los nucletidos no apareados


D
T C G A C T C A G C G A T A T

Los espacios vacios se llenan por medio de sntesis y ligadura de DNA para formar la unin codicadora
T C G A C T C G C T A T A A G C T G A G C G A T A T

Reordenamiento de los genes de receptores de las clulas T

155

nucletidos, los dos tramos de cadena individual forman pares de bases complementarios. A continuacin enzimas de reparacin recortan los nucletidos que no coinciden, sintetizan DNA complementario para rellenar los espacios de cadena individual restantes y ligan el nuevo DNA a la regin palindrmica (fig. 4-8). La TdT se expresa al mximo durante el periodo en el desarrollo de las clulas B cuando se est ensamblando el gen que codifica la cadena pesada; de este modo, los nucletidos N son comunes en sus uniones V-D y D-J. Los nucletidos N son menos comunes en los genes que codifican la cadena ligera, que son reordenados despus de los genes que codifican la cadena pesada (cap. 7). Tambin pueden eliminarse nucletidos en las uniones de segmentos gnicos. Esto se logra mediante exonucleasas todava no identificadas. De esta manera, una regin CDR3 de cadena pesada puede ser ms corta que incluso el segmento D de menor tamao. En algunas circunstancias es difcil, si no es que imposible, reconocer el segmento D que contribuy con la formacin de la regin CDR3 debido a la escisin de la mayor parte de sus nucletidos. Las deleciones tambin pueden borrar los rastros de palndromos de nucletidos P introducidos en el momento de la abertura de la horquilla. Por esta razn, muchas uniones V(D)J completadas no muestran evidencias obvias de nucletidos P. Dado que el nmero total de nucletidos agregados por estos procesos es aleatorio, los nucletidos agregados a menudo alteran el marco de lectura de la secuencia codificadora ms all de la unin. Esos desplazamientos del marco de lectura provocan que se produzca una protena no funcional, y los reordenamientos de DNA que llevan a esas alteraciones se conocen como reordenamientos no productivos. Dado que a grandes rasgos dos de cada tres reordenamientos sern no productivos, muchos progenitores de clulas B nunca logran producir inmunoglobulinas funcionales y, por consiguiente, nunca se convierten en clulas B maduras. De este modo, la diversidad de unin slo se logra a expensas de un derroche celular considerable (cap. 7).

Resumen
La extraordinaria diversidad del repertorio de inmunoglobulinas se logra de varias maneras. Quizs el factor de mayor importancia que permite esta diversidad es que las regiones V son codificadas por segmentos gnicos separados (segmentos gnicos V, D y J), que se juntan por medio de un proceso de recombinacin somtica (recombinacin V[D]J) para producir un exn de regin V completo. Hay muchos segmentos gnicos diferentes en el genoma de un individuo, lo que proporciona una fuente de diversidad heredable que este mecanismo combinacional puede usar. Las recombinasas especficas de linfocitos nicas, las protenas RAG, se requieren de modo absoluto para catalizar este reordenamiento y la evolucin de las protenas RAG coincidi con la aparicin del moderno sistema inmunitario adaptativo de los vertebrados. Otra fraccin considerable de la diversidad de unin de las inmunoglobulinas proviene del proceso de unin mismo. La variabilidad en las uniones entre los segmentos gnicos se genera por la insercin de cantidades aleatorias de nucletidos P y de nucletidos N, y por la delecin variable de nucletidos en los extremos de algunos segmentos. La asociacin de diferentes regiones V de cadena ligera y de cadena pesada para formar el sitio de unin a antgenos de una molcula de inmunoglobulina contribuye ms con la diversidad. La combinacin de todas estas fuentes de diversidad genera un vasto repertorio primario para especificidades de anticuerpos. Cambios adicionales en las regiones V reordenadas, introducidos por hipermutacin somtica (que se comentan ms adelante en el captulo), aaden diversidad an mayor a este repertorio primario.

Reordenamiento de los genes de receptores de las clulas T


El mecanismo mediante el cual se generan los receptores de antgenos de las clulas B es un medio tan potente de crear diversidad que no es sorprendente que los

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Captulo 4: Generacin de receptores de antgenos de los linfocitos

Fig. 4-9. Organizacin de los loci y del receptor de clula T humano en la lnea germinal. El ordenamiento de los segmentos gnicos es semejante al de los loci de inmunoglobulina, con segmentos gnicos variables (V), de diversidad (D) y de unin (J) separados, y genes constantes (C). El locus TCR (cromosoma 14) consta de 70 a 80 segmentos gnicos V, cada uno precedido por un exn que codifica la secuencia lder (L). Se desconoce con exactitud cuntos de estos segmentos gnicos V son funcionales. Una agrupacin de 61 segmentos gnicos J se localiza a una distancia considerable de los segmentos gnicos V. Los segmentos J van seguidos por un gen C nico, que contiene exones separados para los dominios constante y de bisagra, y un solo exn que codifica las regiones transmembrana y citoplsmica (que no se muestran). El locus TCR (cromosoma 7) tiene una organizacin diferente, con una agrupacin de 52 segmentos gnicos V funcionales que se ubican lejos de dos agrupaciones separadas, cada una de las cuales contiene un segmento gnico D nico junto con seis o siete segmentos gnicos J y un gen C individual. Cada gen TCR C tiene exones separados que codifican el dominio constante, la bisagra, la regin transmembrana y la regin citoplsmica (que no se muestra). El locus TCR est interrumpido entre los segmentos gnicos J y V por otro locus receptor de clula T, el locus TCR (que no se muestra aqu; vase la fig. 4-14).

Locus de la cadena LV x 70 80 J x 61 C

Locus de la cadena L V x 52 D1 J1 x 6 C1 D2 J2 x 7 C 2

receptores de antgenos de las clulas T porten estructuras semejantes a las de las inmunoglobulinas y se generen por medio del mismo mecanismo. En esta parte del captulo se describe la organizacin de los loci de receptores de clulas T, y la creacin de los genes que codifican las cadenas receptoras de clula T individuales.

4-9

Los segmentos gnicos de los receptores de clula T estn ordenados en un patrn similar al de los segmentos gnicos de las inmunoglobulinas y son reordenados por las mismas enzimas

Al igual que las cadenas ligera y pesada de la inmunoglobulina, cada una de las cadenas y del receptor de clula T consta de una regin amino terminal variable (V) y de una regin constante (C) (seccin 3-10). La organizacin de los loci TCR y TCR se muestra en la figura 4-9. La organizacin de los segmentos gnicos es a grandes rasgos homloga a la de los segmentos gnicos de las inmunoglobulinas (secciones 4-2 y 4-3). El locus TCR, igual que los de las cadenas ligeras de inmunoglobulina, contiene segmentos gnicos V y J (V y J). El locus TCR, como los de las cadenas pesadas de inmunoglobulina, contiene segmentos gnicos D adems de segmentos V y J. Los segmentos gnicos del receptor T se reordenan durante el desarrollo de las clulas T para formar exones de dominio V completos (fig. 4-10). El reordenamiento de los genes del receptor de clula T ocurre en el timo; el orden y la regulacin de los reordenamientos se describen de forma detallada en el captulo 7. Sin embargo, en esencia, los mecanismos de reordenamiento de genes son similares para las clulas B y para las T. Los segmentos gnicos del receptor de clula T estn flanqueados por secuencias de seal de recombinacin (RSS) espaciadoras de 12 bp y de 23 bp que son homlogas a las que flanquean los segmentos gnicos de las inmunoglobulinas (fig. 4-11 y seccin 4-4) y son reconocidos por las mismas enzimas. Los crculos de DNA que se producen por reordenamiento gnico (fig. 4-6) se conocen como crculos de escisin de receptores de clula T (TREC), y se usan como marcadores para clulas T que recientemente han emigrado desde el timo. Todos los defectos conocidos de los genes que controlan la recombinacin V(D)J afectan a las clulas T y a las B por igual, y los animales que tienen estos defectos genticos carecen de linfocitos funcionales (seccin 4-5). Otra caracterstica compartida del reordenamiento de genes de las inmunoglobulinas y de los receptores de clula T es la presencia de nucletidos P y de nucletidos N en las uniones entre los segmentos gnicos V, D y J del gen TCR reordenado. En las clulas T, tambin se aaden nucletidos P y nucletidos N entre los segmentos gnicos V y J de todos los genes TCR reordenados, mientras que slo alrededor de la mitad de las uniones V-J en los genes de la cadena ligera de las inmunoglobulinas es modificada mediante la adicin de nucletidos N, y stas a menudo se quedan sin nucletidos P (fig. 4-12 y seccin 4-8). Las principales diferencias entre los genes que codifican inmunoglobulinas y los que codifican receptores de clula T reflejan el hecho de que todas las funciones efectoras de las clulas B dependen de anticuerpos secretados cuyos diferentes isotipos de la regin C de la cadena pesada desencadenan distintos mecanismos

Reordenamiento de los genes de receptores de las clulas T

157

DNA de lnea germinal


recombinacin

V n

V 2

V1

V 1 J

DNA reordenado
transcripcin corte y empalme traduccin

protena (receptor de clula T)


traduccin corte y empalme transcripcin

V 1 D 1 J

C 1

DNA reordenado
recombinacin V n

V 1

D 1

C 1

D2

C 2

DNA de lnea germinal

efectores. En cambio, las funciones efectoras de las clulas T dependen del contacto entre una clula y otra y no estn mediadas de manera directa por el receptor de clula T, que slo sirve para el reconocimiento de los antgenos. De este modo, las regiones C de los loci TCR y TCR son mucho ms simples que las del locus de la cadena pesada de las inmunoglobulinas. Slo hay un gen C y, aunque hay dos genes C, son muy homlogos y no hay una distincin funcional conocida entre sus productos. Los genes de la regin C del receptor de clula T slo codifican polipptidos transmembrana.

Fig. 4-10. Reordenamiento y expresin gnica de las cadenas y del receptor de clula T. Los genes de las cadenas TCR y TCR estn formados por segmentos distintos que se unen por medio de recombinacin somtica durante el desarrollo de las clulas T. Los genes que codifican cadenas y funcionales se generan del mismo modo en que se crean los genes completos de inmunoglobulina. Para la cadena (parte superior de la figura), un segmento gnico V se reordena hacia uno J para crear un exn de regin V funcional. La transcripcin y el empalme del exn VJ a C genera el mRNA que se traduce para generar la protena de la cadena del receptor de clula T. Para la cadena (parte inferior de la figura), al igual que para la cadena pesada de inmunoglobulina, el dominio variable se codifica en tres segmentos gnicos, V, D y J. El reordenamiento de estos segmentos genera un exn de regin V VDJ funcional que se transcribe y se empalma para unirse a C; el mRNA resultante se traduce para generar la cadena del receptor de clula T. Las cadenas y se aparean poco despus de su sntesis para producir el heterodmero de receptor de clula T :. No todos los segmentos gnicos J se muestran, y por simplicidad se omiten las secuencias lder que preceden a cada segmento gnico V.

4-10

La diversidad de los receptores de clula T se concentra en la tercera regin hipervariable

La estructura tridimensional del sitio de reconocimiento de antgeno de un receptor de clula T se parece mucho a la de una molcula de anticuerpo (secciones 3-11 y 3-7, respectivamente). En un anticuerpo, el centro del sitio de unin a antgeno est formado por las CDR3 de las cadenas pesada y ligera. Los terceros lazos hipervariables (CDR3) equivalentes desde el punto de vista estructural de las cadenas y del receptor de clula T, con las cuales contribuyen los segmentos gnicos D y J, tambin forman el centro del sitio de unin a antgeno de un recep-

23

12

23

12

Clulas T :
V
23

RSS
12

23

12

23

12

Clulas T :
V
23 12

Fig. 4-11. Secuencias de seal de recombinacin flanquean segmentos gnicos del receptor de clula T. Al igual que en los loci de inmunoglobulina (fig. 4-5), los segmentos gnicos individuales en los loci TCR y TCR estn flanqueados por secuencias de seal de recombinacin (RSS) heptmero-espaciador-nonmero. Los motivos RSS que contienen espaciadores de 12 bp se muestran en esta figura como puntas de flecha de color anaranjado y los que contienen espaciadores de 23 bp aparecen en color prpura. La unin de segmentos gnicos casi siempre sigue la regla 12/23. Debido a la disposicin de las RSS heptamricas y nonamricas en los loci TCR y TCR, la regla 12/23 en principio permite la unin directa de V a J (al contrario de lo que sucede en el gen de cadena pesada de inmunoglobulina), aunque esto ocurre con muy poca frecuencia debido a los otros tipos de regulacin que suceden.

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Captulo 4: Generacin de receptores de antgenos de los linfocitos

Fig. 4-12. Nmero de segmentos gnicos humanos y las fuentes de diversidad de los receptores de las clulas T en comparacin con los de las inmunoglobulinas. Ntese que slo aproximadamente la mitad de las cadenas humanas contiene nucletidos N. En esta figura no se incluye la hipermutacin somtica como fuente de diversidad de las inmunoglobulinas, porque no ocurre en las clulas T.

Inmunoglobulina Elemento
H Segmentos variables (V) Segmentos de diversidad (D) Segmentos D ledos en tres marcos de lectura Segmentos de unin (J) Uniones con nucletidos N y nucletidos P Nmero de pares gnicos V Diversidad de unin Diversidad total 40 25 rara vez 6 2 + 70 0

Receptores de clula T :
52 2 a menudo 13 2 5.8 106 ~2 10 11 ~1018 ~70 0

5() 4() 50% de uniones 1.9 106 ~3 107 ~5 1013

61 1

CDR3

CDR2

CDR1

CDR1 CDR3 CDR2

Fig. 4-13. Las partes ms variables del receptor de clula T interactan con el pptido unido a una molcula del MHC. Las posiciones de los lazos CDR de un receptor de clula T se muestran como tubos coloreados, que en esta figura estn superpuestos sobre el complejo pptido: MHC (MHC, gris; pptido, amarillo verdoso, con tomos de O en rojo y tomos de N en azul). Los lazos CDR de la cadena aparecen en verde, mientras que los de la cadena se muestran en color magenta. Los lazos CDR3 yacen en el centro de la interfaz entre el TCR y el complejo pptido: MHC y hacen contactos directos con el pptido antignico.

tor de clula T; la periferia del sitio consta de los lazos CDR1 y CDR2, que estn codificados dentro de los segmentos gnicos V de la lnea germinal para las cadenas y . La extensin y el modelo de variabilidad en receptores de clula T e inmunoglobulinas reflejan la naturaleza distinta de sus ligandos. Mientras que los sitios de unin a antgeno de las inmunoglobulinas deben conformarse a las superficies de una variedad casi infinita de diferentes antgenos, y por lo tanto vienen en una amplia variedad de formas y propiedades qumicas, el ligando para la principal clase de receptor de clula T de los seres humanos (:) siempre es un pptido unido a una molcula del MHC. En consecuencia, se podra predecir que los sitios de reconocimiento de antgeno de los receptores de clula T, como grupo, tuvieran una forma menos variable; casi toda la variabilidad se enfoca en el pptido antignico unido que ocupa el centro de la superficie en contacto con el receptor. De hecho, los lazos CDR1 y CDR2 menos variables de un receptor de clula T tendrn contacto en primera instancia con el relativamente menos variable componente MHC del ligando, mientras que las regiones CDR3 muy variables tendrn contacto principalmente con el componente peptdico nico (fig. 4-13). La diversidad estructural de los receptores de clula T es atribuible principalmente a la diversidad combinacional y de unin generada durante el proceso de reordenamiento gnico. En la figura 4-12 puede observarse que la mayor parte de la variabilidad de las cadenas de receptor de clula T yace en las regiones de unin, que son codificadas por segmentos gnicos V, D y J, y modificadas por nucletidos P y nucletidos N. El locus TCR contiene muchos ms segmentos gnicos J que cualquiera de los loci de cadena ligera de inmunoglobulina: en los seres humanos, 61 segmentos gnicos J estn distribuidos en cerca de 80 kb de DNA, mientras que los loci de cadena ligera de inmunoglobulina slo tienen cinco segmentos gnicos J cuando ms (fig. 4-12). Dado que el locus TCR tiene tantos segmentos gnicos J, la variabilidad generada en esta regin es an mayor para receptores de clula T que para inmunoglobulinas. As, la mayor parte de la diversidad est en los lazos CDR3 que contienen la regin de unin y forman el centro del sitio de unin a antgeno.

4-11

Los receptores de clula T : tambin se generan por medio de reordenamiento gnico

Una minora de las clulas T porta receptores de clula T compuestos de cadenas y (seccin 3-19). La organizacin de los loci TCR y TCR (fig. 4-14) se aseme-

Reordenamiento de los genes de receptores de las clulas T

159

Locus de la cadena LV x 70 80 D x 3 J x 4 C J x 61 C

V y V entremezclados

Locus de la cadena L V x 12 J x 3 C 1 J x 2 C 2

ja a la de los loci TCR y TCR, aunque hay diferencias importantes. La agrupacin de segmentos gnicos que codifica la cadena se encuentra por completo dentro del locus TCR, entre los segmentos gnicos V y J. Los genes V estn entremezclados con los genes V, pero estn localizados principalmente en la regin 3 del locus. Dado que todos los segmentos del gen V estn orientados de tal modo que el reordenamiento elimine el DNA interpuesto, cualquier reordenamiento en el locus resultar en la prdida del locus (fig. 4-15). Hay muchos menos segmentos gnicos V en los loci TCR y TCR que en los loci TCR o TCR o que en cualquiera de los loci de inmunoglobulina. La variabilidad de unin aumentada en las cadenas puede compensar el pequeo nmero de segmentos gnicos V y tiene el efecto de enfocar casi toda la variabilidad en el receptor : en la regin de unin. Como se ha observado para los receptores de clula T :, los aminocidos codificados por las regiones de unin yacen en el centro del sitio de unin de receptor de clula T. Las clulas T que portan receptores : son una lnea distinta de clulas T cuyas funciones no estn claras. Los ligandos para estos receptores tambin se desconocen en su mayor parte. Algunos receptores de clula T : parecen tener la capacidad para reconocer antgenos de manera directa, en gran parte como lo hacen los anticuerpos, sin presentacin por una molcula del MHC o procesamiento de antgeno. El anlisis detallado de las regiones V reordenadas de receptores de clula T : muestra que se asemejan a las regiones V de molculas de anticuerpo ms que a las de receptores de clula T :.

Fig. 4-14. Organizacin de los loci de las cadenas y del receptor de clulas T humano. Los loci TCR y TCR, al igual que los loci TCR y TCR, tienen segmentos gnicos V, D y J distintos, y genes C. De manera singular, el locus que codifica la cadena est localizado por completo dentro del locus de la cadena . Los tres segmentos gnicos D, cuatro segmentos gnicos J y el gen C nico yacen entre la agrupacin de segmentos gnicos V y la agrupacin de segmentos gnicos J. Hay dos segmentos gnicos V localizados cerca del gen C , uno justo en flujo ascendente de las regiones D y uno en orientacin invertida justo en flujo descendente del gen C (que no se muestra). Adems, hay seis segmentos gnicos V entremezclados entre los segmentos gnicos V. Cinco se comparten con V y pueden ser usados por uno u otro locus, y uno es singular para el locus . El locus TCR humano se asemeja al locus TCR debido a que tiene dos genes C, cada uno con su propio grupo de segmentos gnicos J. El locus de ratn (que no se muestra) tiene una organizacin ms compleja y hay tres agrupaciones funcionales de segmentos gnicos , cada una de las cuales contiene segmentos gnicos V y J y un gen C. El reordenamiento en los loci y procede igual que en los otros loci de receptor de clula T, con la excepcin de que durante el reordenamiento de TCR pueden usarse dos segmentos D en el mismo gen. El uso de dos segmentos D incrementa mucho la variabilidad de la cadena , principalmente porque pueden aadirse nucletidos de la regin N adicionales en la unin entre los dos segmentos gnicos D y en las uniones V-D y D-J.

Resumen
Los receptores de clula T son similares desde el punto de vista estructural a las inmunoglobulinas y son codificados por genes homlogos. Los genes que codifican receptores de clula T se ensamblan mediante recombinacin somtica a partir de grupos de segmentos gnicos, de la misma manera que los genes que codifican inmunoglobulinas. Sin embargo, la diversidad est distribuida de modo diferente en las inmunoglobulinas y en los receptores de clula T: los loci de receptores de clula T tienen a grandes rasgos el mismo nmero de segmentos gnicos V pero ms segmentos gnicos J, y hay mayor diversificacin de las uniones entre los segmentos gnicos durante el reordenamiento de los genes. Ms an, no se sabe que los receptores de clula T funcionales diversifiquen sus genes V luego del reordenaFig. 4-15. La delecin del locus TCR es inducida por el reordenamiento de un segmento gnico V a J. El locus TCR est contenido por completo dentro de la regin cromosmica que contiene el locus TCR. Cuando cualquier regin V en la regin V/V se reordena hacia cualquiera de los segmentos J, se eliminan la regin interpuesta y todo el locus V. De este modo, el reordenamiento de V evita cualquier expresin continua de un gen V, e impide el desarrollo de linaje por la va :.

D x 3

J x 4

eliminado Vn J

160

Captulo 4: Generacin de receptores de antgenos de los linfocitos

miento por medio de hipermutacin somtica. Esto lleva a un receptor de clula T en el cual la mayor diversidad yace en la parte central del receptor, que en el caso de los receptores de clula T : hace contacto con el fragmento peptdico unido del ligando. La mayor parte de la diversidad entre los receptores de clula T : tambin est en el lazo CDR3, pero est menos claro de qu manera esto afecta la unin a ligando porque las clulas T : reconocen de modo directo ligandos poco caracterizados que en algunos casos son independientes de molculas del MHC.

Variacin estructural de las regiones constantes de las inmunoglobulinas


Hasta ahora este captulo se ha enfocado en la variacin estructural de receptores de antgenos que se produce por el ensamblaje de las regiones V. Ahora se abordarn las regiones C. Las regiones C de los receptores de clula T no tienen un propsito funcional ms all de apoyar a las regiones V y fijar la molcula en la membrana, y no se comentarn ms en el texto. Por otra parte, las inmunoglobulinas pueden producirse como receptores transmembrana y como anticuerpos secretados, y los dominios C de los anticuerpos son cruciales para sus diversas funciones efectoras. Las inmunoglobulinas se hacen en varias clases diferentes, que se distinguen por sus cadenas pesadas. Diferentes cadenas pesadas se producen en una clona determinada de clulas B al enlazar diferentes regiones C de cadena pesada (CH) al gen VH reordenado. De esta manera, todas las clases de inmunoglobulina producidas por una clona de clulas B tienen la misma regin V. En el locus de cadena pesada, las diferentes regiones C estn codificadas en genes separados que se localizan en flujo descendente de los segmentos de la regin V. Al principio, las clulas B indiferenciadas slo usan los dos primeros de stos, los genes C y C, que se expresan junto con la secuencia de la regin V ensamblada relacionada para producir IgM e IgD transmembrana sobre la superficie de la clula B indiferenciada. Durante una respuesta a un anticuerpo, las clulas B activadas pueden cambiar hacia la expresin de genes CH que no son C ni C mediante un tipo de recombinacin somtica conocida como cambio de clase. Junto con otros mecanismos que diversifican ms las inmunoglobulinas, el cambio de clase se comentar en la ltima parte de este captulo. A diferencia de las regiones C de cadena pesada, las regiones C de cadena ligera (CL) no tienen una funcin efectora especfica salvo fijacin estructural para regiones V, no experimentan cambio de clase, y no parecen haber diferencias funcionales entre las cadenas ligeras y . En esta parte del captulo se consideran las caractersticas estructurales que distinguen las regiones CH de anticuerpos de las cinco clases principales y se comentan algunas de sus propiedades especiales. Las funciones de las diferentes clases de anticuerpos se consideran con mayor detalle en el captulo 9. Asimismo, se explica de qu modo el mismo gen de anticuerpo puede generar tanto inmunoglobulina unida a membrana como inmunoglobulina secretada por medio de corte y empalme alternativo de mRNA.

4-12

Las diferentes clases de inmunoglobulinas se distinguen por la estructura de sus regiones constantes de la cadena pesada

Las cinco clases principales de inmunoglobulina son IgM, IgD, IgG, IgE e IgA, todas las cuales pueden presentarse como receptores de antgenos transmembrana o como anticuerpos secretados. En los seres humanos, la IgG puede subdividirse en cuatro subclases (IgG1, IgG2, IgG3 e IgG4) y los anticuerpos IgA se dividen en dos subclases (IgA1 e IgA2). Las subclases de IgG en los seres humanos se nombran por orden de abundancia de los anticuerpos en el suero; la IgG1 es la ms abundante. Las diferentes cadenas pesadas que definen estas clases se conocen como

Variacin estructural de las regiones constantes de las inmunoglobulinas

161

isotipos y se designan mediante las letras griegas minsculas , , , y , como se muestra en la figura 4-16, en la cual se enlistan las principales propiedades fsicas y funcionales de las diferentes clases de anticuerpos de los seres humanos. La IgM forma pentmeros en el suero, lo que explica su peso molecular alto. La IgA secretada puede presentarse como un monmero o como un dmero. Las diferencias secuenciales entre las cadenas pesadas de inmunoglobulina hacen que los diversos isotipos difieran en varios aspectos caractersticos. Estos incluyen el nmero y la localizacin de enlaces disulfuro intercatenarios, el nmero de porciones de oligosacrido adheridas, el nmero de dominios C y la longitud de la regin bisagra (fig. 4-17). Las cadenas pesadas de IgM e IgE contienen un dominio C extra que reemplaza a la regin bisagra que est en las cadenas , y . La ausencia de la regin bisagra no implica que las molculas de IgM y de IgE carezcan de flexibilidad; micrografas electrnicas de molculas de IgM unidas a ligandos muestran que los brazos Fab pueden flexionarse respecto a la porcin Fc. No obstante, tal diferencia de estructura quiz tenga consecuencias funcionales que todava no se caracterizan. Diferentes isotipos y subtipos tambin difieren en cuanto a su capacidad para desempear diversas funciones efectoras (vase ms adelante). Las propiedades distintas de las diferentes regiones C son codificadas por diferentes genes CH de inmunoglobulina que estn presentes en una agrupacin ubicada a 3 de los segmentos JH. En la seccin 4-20 se describe el proceso de reordenamiento por medio del cual la regin V se relaciona con un gen CH diferente.

4-13

La regin constante conere especializacin funcional al anticuerpo

Los anticuerpos pueden proteger al organismo de diversas maneras. En algunos casos es suficiente que el anticuerpo slo se una a un antgeno. Por ejemplo, al unirse de modo estrecho a una toxina o a un virus, un anticuerpo puede evitar que reconozca su receptor sobre una clula hospedadora (fig. 1-24). Las regiones V del
Inmunoglobulina
IgG1 IgG2 2
146 3

IgG3 3
165

IgG4 4
146 0.5 21

IgM
970 1.5 10

IgA1 1
160 3.0

IgA2 2
160 0.5 6

IgD
184 0.03 3

IgE
188 5105

Cadena pesada Peso molecular (kDa) Concentracin srica (mg/ml1, media en adultos) Vida media en el suero (das)

1
146

9 21

1 7

20

Fig. 4-16. Propiedades fsicas de los isotipos de inmunoglobulina humana. La IgM se llama as debido a su tamao: aunque la IgM monomrica slo tiene 190 kDa, normalmente forma pentmeros conocidos como macroglobulina (de ah la M), de muy alto peso molecular (fig. 4-20). La IgA se dimeriza y crea una molcula con un peso molecular de ~390 kDa en las secreciones. El anticuerpo IgE se relaciona con hipersensibilidad de tipo inmediato. Cuando se fija a clulas cebadas de tejidos, la IgE tiene una vida media mucho ms prolongada que en el plasma, como se muestra en el cuadro.

Va clsica de activacin del complemento Va alternativa de activacin del complemento Transferencia placentaria Unin a receptores Fc de macrfagos y de fagocito Unin de alta anidad a clulas cebadas y baslos Reactividad con protena A estaloccica

162

Captulo 4: Generacin de receptores de antgenos de los linfocitos

IgM

IgD

IgG

IgE

IgA

C C JH C C

C C C3 C1 C2b C2a C C

Ratn

JH

C3

C1

C1

C2

C4

C2

Ser humano

Fig. 4-17. Los isotipos de inmunoglobulina son codificados por una agrupacin de genes de la regin C de la cadena pesada de inmunoglobulina. Se indica la estructura general de los principales isotipos de inmunoglobulina (panel superior); el dominio de inmunoglobulina se seala como un rectngulo. Estos son codificados por genes de la regin C de la cadena pesada separados, dispuestos en una agrupacin, tanto en ratones como en seres humanos (panel inferior). La regin constante de la cadena pesada de cada isotipo se indica con el mismo color que el segmento del gen de la regin C que la codifica. La IgM y la IgE carecen de una regin bisagra, pero cada una contiene un dominio de cadena pesada adicional. Ntense las diferencias de los nmeros y de las localizaciones de los enlaces disulfuro (lneas de color negro) que enlazan las cadenas. Los isotipos tambin difieren en la distribucin de grupos de carbohidrato ligados a N, que se muestran como hexgonos. En los seres humanos, la agrupacin muestra evidencia de duplicacin evolutiva de una unidad que consta de dos genes , un gen y un gen . Uno de los genes es un seudogn (); por eso, slo se expresa un subtipo de IgE. Por simplicidad no se ilustran otros seudogenes, ni los detalles del exn dentro de cada gen C. Las clases de inmunoglobulinas que se encuentran en ratones se llaman IgM, IgD, IgG1, IgG2a, IgG2b, IgG3, IgA e IgE.

anticuerpo son suficientes para esta actividad. No obstante, la regin C es esencial para reclutar la ayuda de otras clulas y molculas para destruir y eliminar agentes patgenos a los cuales se ha unido el anticuerpo. Las regiones C (porciones Fc) de los anticuerpos tienen tres funciones efectoras principales. En primer lugar, las porciones Fc de ciertos isotipos son reconocidas por receptores Fc especializados que expresan las clulas efectoras inmunitarias. Los receptores Fc presentes sobre la superficie de clulas fagocticas como macrfagos y neutrfilos se unen a las porciones Fc de los anticuerpos IgG1 e IgG3, lo que facilita la fagocitosis de agentes patgenos cubiertos con estos anticuerpos. La porcin Fc de la IgE se une a un receptor Fc de alta afinidad sobre clulas cebadas, basfilos y eosinfilos activados, lo que permite a estas clulas mostrar respuesta a la unin de un antgeno especfico al liberar mediadores inflamatorios. En segundo lugar, las porciones Fc de complejos antgeno:anticuerpo pueden unirse al complemento (fig. 1-24) e iniciar la cascada del complemento, lo que ayuda a reclutar y activar fagocitos, a la fagocitosis de microbios por fagocitos y puede destruir tambin de manera directa agentes patgenos. En tercer lugar, la porcin Fc puede llevar anticuerpos hacia lugares a los cuales no llegaran sin transporte activo. Estos incluyen secreciones mucosas, lgrimas, leche (IgA) y la circulacin sangunea fetal mediante transferencia desde la madre (IgG). En ambos casos, la porcin Fc se une a un receptor especfico que transporta de modo activo la inmunoglobulina por medio de clulas para llegar a diferentes compartimientos del cuerpo. La participacin de la porcin Fc en estas funciones efectoras se ha demostrado al estudiar inmunoglobulinas en las cuales se ha eliminado por medios enzimticos uno u otro dominio Fc (seccin 3-3) o, ms recientemente, mediante ingeniera gentica, que permite el mapeo detallado de los residuos de aminocidos dentro del Fc necesarios para funciones particulares. Muchos microorganismos han respondido al potencial destructivo de la porcin Fc al adquirir por evolucin protenas que se unen a dicha porcin o la dividen y, as, evitar que funcione; los ejemplos son la protena A y la protena G de Staphylococcus y la protena D de Haemophilus. Los investigadores han explotado estas protenas para ayudar a mapear el Fc y como reactivos inmunitarios (Apndice I, seccin A-10). No todas las clases de inmunoglobulina tienen la misma capacidad para desempear cada una de las funciones efectoras. En la figura 4-16 se resumen las diferentes propiedades funcionales de cada isotipo de cadena pesada. Por ejemplo, IgG1 e IgG3 tienen mayor afinidad que IgG2 por el tipo ms frecuente de receptor Fc.

Variacin estructural de las regiones constantes de las inmunoglobulinas

163

4-14

Las clulas B indiferenciadas maduras expresan tanto IgM como IgD en su supercie

Los genes CH de inmunoglobulina forman una agrupacin grande que abarca alrededor de 200 kb hasta el lado 3 de los segmentos gnicos JH (fig. 4-17). Cada gen CH se divide en varios exones (que no se muestran en la figura), cada uno de los cuales corresponde a un dominio de inmunoglobulina individual en la regin C plegada. El gen que codifica la regin C yace ms cerca de los segmentos gnicos JH y por lo tanto ms cerca del exn de la regin VH ensamblada (exn VDJ) despus de reordenamiento de DNA. Una vez que se completa el reordenamiento, se produce un transcrito de cadena pesada completo. Cualquier segmento gnico JH que quede entre el gen V ensamblado y el gen C, se elimina durante el procesamiento de RNA para generar el mRNA maduro. Por tanto, las cadenas pesadas son las primeras en expresarse y la IgM es la primera inmunoglobulina que se produce durante el desarrollo de las clulas B. En posicin inmediatamente 3 al gen yace el gen , que codifica la regin C de la cadena pesada de IgD (fig. 4-17). La IgD se coexpresa con IgM sobre la superficie de casi todas las clulas B maduras, aunque este isotipo slo se secreta en cantidades pequeas por clulas plasmticas y se desconoce su funcin. De hecho, los ratones que carecen de los exones C parecen tener un sistema inmunitario en esencia normal. Las clulas B que expresan IgM e IgD no han pasado por cambio de clase que, como se describir, comprende un cambio irreversible en el DNA. En cambio, estas clulas producen un largo transcrito de mRNA primario que se divide y se empalma de manera diferencial para generar una de dos molculas de mRNA distintas. En una, el exn VDJ est enlazado a los exones C para codificar una cadena pesada , y en la otra a los exones C para codificar una cadena pesada (fig. 4-18). El procesamiento del transcrito de mRNA largo es regulado por el desarrollo; las clulas B inmaduras generan la mayor parte del transcrito y las maduras principalmente junto con una parte de . Cuando una clula B se activa, deja de coexpresar IgD e IgM, sea porque las secuencias y se han eliminado como consecuencia de un cambio de clase o, en clulas plasmticas que secretan IgM, porque la transcripcin desde el promotor VH ya no se extiende por los exones C.

4-15

Las formas transmembrana y secretada de las inmunoglobulinas se generan a partir de transcritos alternativos de la cadena pesada

Las inmunoglobulinas de todas las clases pueden producirse como un receptor unido a la membrana o como anticuerpos secretados. Todas las clulas B inicial-

Fig. 4-18. La coexpresin de IgD e IgM se regula por medio de procesamiento de RNA. En clulas B maduras, la transcripcin iniciada en el promotor VH se extiende a travs de los exones tanto C como C. Esta transcripcin primaria larga despus se procesa mediante divisin y poliadenilacin (AAA), y por medio de corte y empalme. La divisin y poliadenilacin en el sitio (pA1) y el corte y empalme entre exones C genera un mRNA que codifica la cadena pesada (panel izquierdo). La divisin y poliadenilacin en el sitio (pA2) y un patrn diferente de corte y empalme que elimina los exones C produce un mRNA que codifica la cadena pesada (panel derecho). Por simplicidad no se muestran todos los exones de la regin C individuales.

Expresin de IgM
VDJ DNA RNA AAA mRNA AAA mRNA C pA1 C pA 2 DNA RNA VDJ

Expresin de IgD
C pA1 C pA 2

AAA AAA

Protena

IgM

Protena

IgD

164

Captulo 4: Generacin de receptores de antgenos de los linfocitos

mente expresan la forma transmembrana de la IgM; despus de la estimulacin por un antgeno, parte de su progenie se diferencia en clulas plasmticas que producen anticuerpos IgM, mientras que otras sufren un cambio de clase para expresar inmunoglobulinas transmembrana de una clase diferente, lo cual va seguido por la produccin de anticuerpos secretados de la nueva clase. Las formas de membrana de todas las clases de inmunoglobulina son monmeros que comprenden dos cadenas pesadas y dos ligeras: IgM e IgA slo se polimerizan cuando se han secretado. En su forma unida a la membrana, la cadena pesada de la inmunoglobulina tiene un dominio transmembrana hidrfobo de alrededor de 25 residuos de aminocidos en el extremo carboxilo, que la fija a la superficie del linfocito B. Este dominio no aparece en la forma secretada, cuyo extremo carboxilo es una cola hidrfila secretora. Los extremos carboxilo de las formas transmembrana y secretada de las cadenas pesadas de las inmunoglobulinas estn codificados en dos exones, y la produccin de las dos formas se logra por medio del procesamiento alternativo del RNA (fig. 4-19). Los ltimos dos exones de cada gen CH contienen las secuencias que codifican las regiones secretada y transmembrana, respectivamente; si el transcrito primario se divide y se poliadenila en un sitio ubicado en flujo descendente de estos exones, la secuencia que codifica el extremo carboxilo de la forma secretada se elimina mediante corte y empalme y se produce la inmunoglobulina de superficie celular. Por otra parte, si el transcrito primario se divide en el sitio de poliadenilacin localizado antes de los ltimos dos exones, slo puede producirse la molcula secretada. El procesamiento diferencial del RNA del exn C se ilustra en la figura 4-19, y ocurre de la misma manera en todos los isotipos. En las clulas B activadas que se diferencian para convertirse en clulas plasmticas secretoras de anticuerpos, casi todos los transcritos son cortados y empalmados para generar la forma secretada en vez de la forma transmembrana de cualquier isotipo de cadena pesada que la clula B est expresando.

4-16

La IgM y la IgA pueden formar polmeros

Si bien todas las molculas de inmunoglobulina estn construidas a partir de una unidad bsica de dos cadenas pesadas y dos cadenas ligeras, tanto la IgM como la IgA pueden formar multmeros de estas estructuras fundamentales (fig. 4-20). Las regiones C de la IgM y de la IgA incluyen una cola (apndice) de 18 aminocidos que contiene un residuo de cistena esencial para la polimerizacin. Una cadena polipeptdica de 15 kDa separada, llamada la cadena J, promueve la polimerizacin al unirse a las cistenas de esta cola, que slo se encuentra en las formas secretadas de las cadenas y . (Esta cadena J no debe confundirse con la regin J de la inmunoglobulina codificada por un segmento gnico J; vase la seccin 4-2.) En el caso de la IgA, se requiere polimerizacin para el transporte a travs de los epitelios (cap. 9). Las molculas de IgM se encuentran como pentmeros, y en ocasiones como hexmeros (sin cadena J), en el plasma, mientras que la mayora de la IgA se encuentra como un dmero en secreciones mucosas, pero como un monmero en el plasma. Tambin se cree que la polimerizacin de las inmunoglobulinas es importante en la unin de anticuerpos a eptopos repetitivos. Una molcula de anticuerpo tiene al menos dos sitios de unin a antgeno idnticos, cada uno de los cuales posee una afinidad, o fuerza de unin, determinada por el antgeno (Apndice I, seccin A-9). Si el anticuerpo se fija a mltiples eptopos idnticos sobre un antgeno diana, slo se disociar cuando todos los sitios de unin se hayan separado. Por consiguiente, la velocidad de disociacin de todo el anticuerpo ser mucho ms baja que la velocidad de disociacin de un sitio de unin individual; de este modo, mltiples sitios de unin dan al anticuerpo una mayor fuerza de unin total, o avidez. Esta consideracin tiene particular importancia para la IgM pentamrica, que tiene 10 sitios de unin a antgeno. Los anticuerpos IgM suelen reconocer eptopos repetitivos como los que estn en los polisacridos de la pared celular bacteriana, pero sitios de unin individuales a menudo tienen baja afinidad por-

Variacin estructural de las regiones constantes de las inmunoglobulinas

165

IgM transmembrana
L VDJ C 1 C 2 C 3 C 4 SC pA s MC pA m

DNA reordenado Transcripcin


Transcrito de RNA primario

AAA

Divisin en el segundo sitio de adicin de poli(A) (pAm) y corte y empalme mRNA


Traduccin, procesamiento protenico
AAA

Protena

Extremo C de IgM transmembrana

IgM secretada
L VDJ C 1 C 2 C 3 C 4 SC pA s MC pA m

Fig. 4-19. Las formas de inmunoglobulinas transmembrana y secretada derivan de la misma secuencia de cadena pesada mediante el procesamiento alternativo del RNA. Cada gen de la cadena pesada C tiene dos exones (codificadores de membrana [MC], en color amarillo) que codifican la regin transmembrana y la cola citoplsmica de la forma transmembrana, y una secuencia codificadora de secrecin (SC) (en anaranjado) que codifica el extremo carboxilo de la forma secretada. En el caso de la IgD, la secuencia SC est presente en un exn separado, pero para los otros isotipos, incluso para IgM como se muestra aqu, la secuencia SC es contigua con el ltimo exn del dominio C. Los eventos que dictan si un RNA de cadena pesada produce una inmunoglobulina secretada o transmembrana ocurren durante el procesamiento del transcrito inicial. Cada gen de la cadena pesada C tiene dos sitios de poliadenilacin potenciales (que se muestran como pAs y pAm). En el panel superior, el transcrito se divide y se poliadenila (AAA) en el segundo sitio (pAm). El empalme entre un sitio localizado entre el exn C4 y la secuencia SC, y un segundo sitio ubicado en el extremo 5 de los exones MC, da por resultado la eliminacin de la secuencia SC y la unin de los exones MC al exn C4. Esto genera la forma transmembrana de la cadena pesada.

DNA reordenado Transcripcin Transcrito de RNA primario Divisin en el primer sitio de adicin de poli(A) (pAs) y corte y empalme mRNA Traduccin, procesamiento protenico Protena Extremo C de IgM secretada
AAA

AAA

que la IgM se produce en etapas tempranas de las respuestas inmunitarias, antes de la hipermutacin somtica y de la maduracin de la afinidad. La unin en mltiples sitios compensa esto; mejora de manera notoria la fuerza de unin funcional general.

166

Captulo 4: Generacin de receptores de antgenos de los linfocitos

Fig. 4-20. Las molculas de IgM y las de IgA pueden formar multmeros. La IgM y la IgA por lo general se sintetizan como multmeros asociados a una cadena polipeptdica adicional, la cadena J. En la IgM pentamrica, los monmeros se unen entre s y a la cadena J por medio de enlaces disulfuro. En el panel superior izquierdo se muestra una micrografa electrnica de un pentmero de IgM, que muestra la disposicin de los monmeros en un disco plano. La IgM tambin puede formar hexmeros que carecen de una cadena J. En la IgA dimrica, los monmeros tienen enlaces disulfuro hacia la cadena J y entre s. En el panel inferior izquierdo se muestra una micrografa electrnica de una IgA dimrica. Fotografas ( 900 000) cortesa de K.H. Roux y J.M. Schiff.

IgM pentamrica

Cadena J

IgA dimrica

Cadena J

Resumen
Las clases de inmunoglobulinas se definen por sus regiones C de la cadena pesada; diversos genes de la regin C codifican diferentes isotipos de la cadena pesada. Los genes de la regin C de la cadena pesada yacen en una agrupacin en posicin 3 de los segmentos gnicos V y J. Un exn de la regin V reordenado de manera productiva se expresa inicialmente en asociacin con los genes CH y , que se coexpresan en clulas B indiferenciadas mediante corte y empalme alternativo de un transcrito de mRNA que contiene los exones CH tanto como . Adems, las clulas B pueden expresar cualquier clase de inmunoglobulina como un receptor de antgeno unido a la membrana o como un anticuerpo secretado. Esto se logra por medio del corte y empalme diferencial del mRNA para incluir exones que codifican un ancla de membrana hidrfoba o una cola secretable. De esta manera, el anticuerpo que una clula secreta en el momento de la activacin reconoce el antgeno que inicialmente activ a la clula B a travs de su receptor de antgeno. El

Diversicacin secundaria del repertorio de anticuerpos

167

mismo exn de la regin V despus puede relacionarse con cualquiera de los otros isotipos para dirigir la produccin de anticuerpos de diferentes clases. Este proceso de cambio de clase se comenta en la siguiente parte del captulo.

Diversicacin secundaria del repertorio de anticuerpos


La recombinacin V(D)J mediada por RAG descrita en la primera parte del captulo se encarga del repertorio de anticuerpos inicial de las clulas B que se desarrollan en la mdula sea. Estas mutaciones somticas (en forma de reordenamientos gnicos) ensamblan los genes que producen el repertorio primario de inmunoglobulinas, lo cual ocurre sin interaccin de clulas B con antgenos. Aunque este repertorio primario es amplio, puede ocurrir mayor diversificacin que incrementa tanto la capacidad de las inmunoglobulinas para reconocer antgenos extraos y unirse a ellos, como las capacidades efectoras de los anticuerpos expresados. Esta fase secundaria de diversificacin ocurre en las clulas B activadas y es impulsada en su mayor parte por los antgenos. La diversificacin se logra por medio de tres mecanismos, hipermutacin somtica, conversin gnica, y cambio de clase o recombinacin de cambio de clase, que alteran de distintos modos la secuencia de la inmunoglobulina secretada (fig. 4-21). La recombinacin de cambio de clase slo involucra a la regin C: reemplaza la regin C de la cadena pesada C original por una regin C alternativa, lo que aumenta la diversidad funcional del repertorio de inmunoglobulinas. La hipermutacin somtica y la conversin gnica afectan la regin V. La hipermutacin somtica diversifica el repertorio de anticuerpos al introducir mutaciones puntuales en las regiones V

Conversin gnica Fig. 4-21. El repertorio de anticuerpos primario se diversifica mediante tres procesos que modifican el gen de inmunoglobulina reordenado. El repertorio de anticuerpos primario inicialmente est compuesto de IgM que contiene regiones variables producidas por medio de recombinacin V(D)J. Esta amplia gama de reactividad puede modificarse ms mediante hipermutacin somtica, conversin gnica y recombinacin de cambio de clase en los loci de inmunoglobulina. La hipermutacin somtica origina la introduccin de mutaciones (que se muestran como lneas de color azul) en las regiones V de las cadenas pesada y ligera (rojo), que alteran la afinidad del anticuerpo por su antgeno. En la conversin gnica, la regin V reordenada se modifica por medio de la introduccin de secuencias derivadas de seudogenes del segmento gnico V, lo que crea especificidades de anticuerpo adicionales. En la recombinacin de cambio de clase, las regiones C de la cadena pesada originales (azul) son reemplazadas por regiones de cadena pesada de otro isotipo (mostradas en amarillo), que modifican la actividad efectora del anticuerpo, no as su especificidad por antgeno.

V C C Hipermutacin somtica

V C Cambio de clase

C C

Hipermutacin somtica

Conversin gnica

Cambio de clase

168

Captulo 4: Generacin de receptores de antgenos de los linfocitos

DNA monocatenario atacado por la AID

AID

Zn

OH OH O N

NH2

de ambas cadenas, lo que altera la afinidad del anticuerpo por el antgeno. La conversin gnica diversifica el repertorio de anticuerpos primario en algunos animales; reemplaza bloques de secuencias de las regiones V por secuencias derivadas de las regiones V de seudogenes. Al igual que la recombinacin V(D)J mediada por RAG, estos procesos involucran eventos de mutacin somtica de los genes que codifican inmunoglobulinas, pero al contrario de la recombinacin V(D)J, todos inician mediante una enzima llamada desaminasa de citidina inducida por activacin (AID), que se expresa de manera especfica en las clulas B; no ocurren en genes de receptores de clula T. El mecanismo de inicio que fundamenta todos estos procesos es similar y por consiguiente se empezar por una descripcin general de las enzimas implicadas.

Citidina N DNA

4-17

La desaminasa de citidina inducida por activacin introduce mutaciones en genes transcritos en clulas B

Estado de transicin de la AID

AID

Zn

O OH HN O

NH2

Regeneracin de la AID y produccin de uridina

AID

O Zn OH OH HN Uridina O N

Fig. 4-22. La desaminasa de citidina inducida por activacin (AID) es la iniciadora de mutaciones en la hipermutacin somtica, en la conversin gnica y en el cambio de clase. La actividad de la AID, que slo se expresa en las clulas B, requiere acceso a la cadena lateral de citidina de una molcula de DNA monocatenario (primer panel), que por lo general se evita por los enlaces de hidrgeno del DNA bicatenario. La AID inicia el ataque nuclefilo sobre el anillo de citosina (segundo panel), que se resuelve mediante la desaminacin de la citidina para formar uridina (tercer panel).

La enzima AID inicialmente se identific como un gen que se expresa de modo especfico en el momento de la activacin de las clulas B. Su importancia en la diversificacin de los anticuerpos se revel por medio de anlisis de ratones con bloqueo de la expresin de la AID, lo que demostr falta de hipermutacin somtica y de recombinacin de cambio de clase. Tambin se han identificado seres humanos con mutaciones en la AID que carecen de cambio de clase y de hipermutacin somtica. La secuencia de la AID se relaciona con la de una protena conocida por las siglas APOBEC1 (enzima editora de mRNA de apolipoprotena B, polipptido cataltico 1), que convierte a la citosina del mRNA de apolipoprotena B en uracilo mediante desaminacin; as, al principio se crey que la AID actuaba como una desaminasa de citidina de mRNA. Aunque esto an es una posibilidad, pruebas actuales sugieren que la AID tambin puede actuar como una desaminasa de citidina de DNA, que desamina de manera directa los residuos de citidina de los genes de inmunoglobulina y los transforma en uridina. La AID puede unirse al DNA monocatenario y desaminarlo, pero no al DNA de doble cadena. De este modo, para que la AID acte, la doble hlice de DNA se debe desenrollar localmente de forma transitoria, y esto parece suceder como resultado de la transcripcin de secuencias cercanas. Por analoga con otras desaminasas de citidina, se cree que la AID inicia un ataque nuclefilo sobre el anillo de pirimidina de la citidina expuesta (fig. 4-22). Otras enzimas de reparacin de DNA ubicuas cooperan con la AID para alterar ms la secuencia del DNA monocatenario (fig. 4-23). El residuo uracilo producido por la AID puede ser el sustrato para la enzima de reparacin por escisin de bases de uracilo-DNA-glucosilasa (UNG), que elimina la base pirimidina para formar un sitio absico en el DNA. La endonucleasa aprica/apirimdica 1 (APE1) puede escindir el resto del residuo, lo que produce una mella en una sola cadena del DNA en el sitio de la citosina original. La UNG y la APE1 actan en todas las clulas para reparar con eficiencia las conversiones frecuentes de citosina en uracilo y los sitios carentes de base que ocurren como resultado de dao espontneo del DNA. La AID slo es funcional en las clulas B activadas y al incrementar en forma considerable el dao del DNA presente en los genes de inmunoglobulinas, aumenta en gran medida la probabilidad de que este dao sea reparado de modo incorrecto y provoque una mutacin. Los tres tipos de alteraciones pueden provocar tipos de mutacin bastante distintos en el gen de inmunoglobulina; la extensin del cambio inicial en el DNA corresponde, a grandes rasgos, a la naturaleza de la mutacin final (fig. 4-24). Estas mutaciones se describen con mayor detalle en las tres secciones siguientes. Si slo la AID acta sobre el DNA, nicamente ocurrir hipermutacin somtica. Los sitios absicos generados por la UNG tambin pueden dar lugar a hipermutacin somtica por sustitucin de nucletidos en el momento de la replicacin. Se cree que las mellas de cadena individual generadas por la APE1 son una seal requerida para iniciar el proceso de replicacin con molde usando secuencias homlogas que ocurre en la conversin gnica. Por ltimo, se cree que una alta densidad de mellas de cadena individual en regiones especficas que flanquean genes de la regin C, genera las roturas de doble cadena escalonadas que se requieren para el cambio de clase.

Diversicacin secundaria del repertorio de anticuerpos

169

Fig. 4-23. Generacin de mellas en una sola cadena del DNA por medio de la accin secuencial de la AID, de la uracilo-DNA-glucosilasa (UNG) y de la endonucleasa aprica/apirimdica 1 (APE1). El DNA bicatenario (primer panel) se hace accesible a la AID mediante transcripcin localizada que desenrolla la hlice de DNA (segundo panel). La AID, que se expresa de manera especfica en las clulas B activadas, acta para convertir los

residuos de citidina en residuos de uridina (tercer panel). A continuacin las enzimas de reparacin de DNA ubicuas UNG y APE1 actan sobre la uridina primero para eliminar el anillo de uracilo que forma un sitio absico (cuarto panel) y despus para eliminar el residuo ribosa absico de la cadena de DNA (quinto panel), lo que da pie a la formacin de una mella en una sola cadena del DNA (sexto panel).

DNA en regin variable o en regin de cambio

La transcripcin produce DNA monocatenario local

4-18

Los genes de la regin V reordenados se diversican ms por medio de hipermutacin somtica


En las clulas B la AID ataca a la citidina del DNA monocatenario para producir uridina AID
U

La hipermutacin somtica opera sobre las clulas B en rganos linfoides perifricos despus de que se han ensamblado los genes funcionales de inmunoglobulina. Eso introduce mutaciones puntuales en todo el exn de la regin V reordenado a una tasa muy alta, lo que genera receptores de clula B mutantes sobre la superficie de dichas clulas (fig. 4-25). En ratones y en seres humanos, la hipermutacin somtica ocurre en centros germinales slo despus de que las clulas B maduras han sido activadas por su antgeno correspondiente y asimismo requiere seales provenientes de las clulas T activadas. La hipermutacin somtica se dirige de preferencia hacia regiones V reordenadas, que se transcriben de manera activa en las clulas B y no ocurre en loci inactivos, porque la AID requiere un sustrato de DNA monocatenario. Otros genes transcritos que se
Fig. 4-24. La AID inicia procesos que provocan hipermutacin somtica, conversin gnica y recombinacin de cambio de clase. La hipermutacin somtica ocurre mediante mutaciones por transicin (C a T, o G a A) cuando el uracilo producido a travs de la accin de la AID es reconocido como una T por las polimerasas de DNA. Si la UNG ha generado un sitio absico, la replicacin sin molde a travs del sitio puede generar mutaciones por transicin o por transversin. La conversin gnica parece iniciar por la presencia de mellas de cadena nica, seguida por la replicacin de DNA que usa seudogenes homlogos como molde para la reparacin. Si las mellas de cadena individual simultneamente se convierten en roturas de doble cadena escalonadas en dos regiones diferentes que flanqueen genes de la regin C (regiones de cambio), la maquinaria de reparacin de roturas de doble cadena de la clula puede provocar que las roturas vuelvan a unirse de tal manera que induce un cambio de clase.

La uracilo-DNA-glucosilasa (UNG) elimina el uracilo para formar un residuo apirimdico UNG

La endonucleasa aprica/apirimdica (APE1) escinde la ribosa absica para formar una mella de cadena individual en el DNA

APE1 AID expresada en clulas B de centro germinal activadas AID Mella de cadena individual en el DNA Citosina a uridina Mutaciones por transicin Hipermutacin somtica Mutaciones por transversin

UNG

Uridina a absico

APE1 Replicacin con molde Mellas de cadena individual Conversin gnica

Roturas de doble cadena escalonadas

Recombinacin de cambio de clase

170

Captulo 4: Generacin de receptores de antgenos de los linfocitos

Fig. 4-25. La hipermutacin somtica introduce mutaciones en la regin variable reordenada de inmunoglobulina que mejoran la unin al antgeno. En algunas circunstancias es posible rastrear en el proceso de hipermutacin somtica por medio de la secuenciacin de regiones variables de inmunoglobulina de hibridomas establecidos en diferentes momentos despus de una inmunizacin. Aqu se describe el resultado de un experimento de este tipo. Cada regin variable se representa mediante una lnea horizontal, en la cual las posiciones de las regiones que determinan complementariedad, CDR1, CDR2 y CDR3 se muestran como regiones sombreadas. Las mutaciones se representan por medio de barras coloreadas. En el transcurso de algunos das despus de la inmunizacin, las regiones V dentro de una clona particular de clulas B reactivas empiezan a adquirir mutaciones, las cuales se acumulan en el transcurso de las siguientes semanas (paneles superiores). Las clulas B cuyas regiones variables han acumulado mutaciones perjudiciales y ya no pueden unirse al antgeno, mueren. Las clulas B cuyas regiones variables han adquirido mutaciones que mejoran la unin al antgeno son capaces de competir con mayor eficacia por l y reciben seales que impulsan su proliferacin y su expansin. Este proceso de mutacin y seleccin puede continuar en el centro germinal del ganglio linftico a travs de mltiples ciclos en las respuestas inmunitarias secundaria y terciaria (paneles centrales e inferiores). De esta manera, con el tiempo, mejora la eficiencia de unin al antgeno de la respuesta del anticuerpo.

Regin de cadena pesada


CDR1 CDR2 CDR3

Regin de cadena ligera


CDR1 CDR2 CDR3

Da 7 Respuesta primaria

Da 14 Respuesta secundaria

Da 21 Respuesta terciaria

Anidad creciente

Deciencia de desaminasa de citidina inducida por activacin (AID)

expresan en las clulas B, como las regiones C, no se afectan tanto, mientras que los genes VH y VL reordenados mutan incluso si son reordenamientos no productivos y se transcriben pero no se expresan como una protena. La hipermutacin somtica en genes funcionales de la regin V tiene consecuencias diversas. Las mutaciones que alteran las secuencias de aminocidos en las regiones estructurales conservadas tienden a alterar la estructura bsica de los anticuerpos y se seleccionan en forma negativa porque el proceso ocurre en el centro germinal, donde clonas de clulas B compiten entre s por la interaccin con el antgeno. Se favorece la supervivencia de las clonas que tienen la mayor afinidad por el antgeno. Algunas de las molculas de inmunoglobulina mutantes se unen a los antgenos mejor que los receptores de clula B originales y las clulas B que las expresan son preferentemente seleccionadas para madurar y convertirse en clulas secretoras de anticuerpos. Esto origina un fenmeno llamado maduracin por afinidad de la poblacin de anticuerpos, la cual se discutir con mayor detalle en los captulos 9 y 10. El resultado de la seleccin de la unin a antgenos potenciada es que los cambios de base que alteran secuencias de aminocidos, y por lo tanto la estructura de las protenas, tienden a estar agrupados en las CDR, mientras que las mutaciones silenciosas que preservan la secuencia de aminocidos y no alteran la estructura de las protenas estn dispersas en toda la regin V. Por otro lado, el patrn de cambios de bases en los genes de la regin V no productivos ilustra el resultado de la hipermutacin somtica sin seleccin de la unin a antgenos potenciada y puede revelar mejor el proceso subyacente. Los cambios de bases estn distribuidos en toda la regin V, pero no por completo de manera aleatoria: hay ciertos puntos calientes en los que se concentran las mutaciones, que indican una preferencia por motivos cortos caractersticos de cuatro o cinco nucletidos, y quiz tambin por ciertas caractersticas estructurales secundarias poco definidas. Como se expuso en la seccin 4-17, se cree que la desaminacin de la citidina por medio de la enzima AID es el principal mecanismo que subyace a la hipermutacin somtica. La desaminacin de citidina para formar uracilo explica algunos de los sesgos conocidos de la hipermutacin somtica, como mutaciones de tipo transicin de C a T o de G a A. Es ms difcil explicar cmo la desaminacin de residuos de C podra originar mutaciones en pares de bases A-T, que tambin son frecuentes en la hipermutacin somtica. Es posible que cuando los mecanismos de reparacin se desencadenan por un apareamiento errneo U-G, se generen mellas en el DNA y haya una reparacin ms extensa y propensa a errores mediante la replicacin de DNA, lo que provoca mutaciones en pares de bases A-T adyacentes. Cuando se crea una mella en una sola cadena por medio de la APE1, una replicacin similarmente relajada tambin podra producir mutaciones por transversin sin participacin de molde. Se desconoce la relacin

Diversicacin secundaria del repertorio de anticuerpos

171

entre estos mecanismos de mutacin y la reparacin de roturas de doble cadena de DNA, que tambin se relacionan con la mutacin de regiones V. A diferencia de las clulas B, toda la diversidad de los receptores de las clulas T se genera durante el reordenamiento de genes y no ocurre hipermutacin somtica en las regiones V reordenadas en dichas clulas. Esto significa que la variabilidad de las regiones CDR1 y CDR2 se limita a la de los segmentos gnicos V de la lnea germinal y que la mayor parte de la diversidad se enfoca en las regiones CDR3. El argumento ms fuerte respecto a la causa de que las clulas T no experimenten hipermutacin somtica ratifica que la hipermutacin es slo una especializacin adaptativa para que las clulas B sinteticen anticuerpos secretados de afinidad muy alta que desempearn con eficiencia sus funciones efectoras. Dado que las clulas T no necesitan esta capacidad, y puesto que los cambios perjudiciales de las especificidades de unin a receptores en las clulas T maduras son en potencia ms perjudiciales para la respuesta inmunitaria que los que ocurren en las clulas B, en las clulas T nunca ha evolucionado la hipermutacin somtica. Ciertas interrogantes que rodean a la hipermutacin somtica an no se han resuelto. Por ejemplo, no es claro por qu las mutaciones parecen dirigirse de manera selectiva a los genes codificadores de inmunoglobulinas, aunque se sospecha que participan los potenciadores y los promotores de dichas molculas. Sin embargo, an quedan secuencias especficas por definir dentro de estas regiones que establecen a un gen como diana para experimentar mutaciones. Adems, los promotores de inmunoglobulinas pueden reclutar polimerasas de reparacin muy propensas a errores que pueden replicar a travs de regiones de DNA daadas.

4-19

En algunas especies casi toda la diversicacin de los genes de inmunoglobulina ocurre despus del reordenamiento gnico

En aves, conejos, ganado vacuno, cerdos, ovejas y caballos hay poca o ninguna diversidad de lnea germinal en los segmentos gnicos V, D y J que se reordenan para formar los genes de los receptores de clula B originales y las secuencias de la regin V reordenadas son idnticas o similares en casi todas las clulas B inmaduras. Estas ltimas despus migran hacia microambientes especializados, el mejor conocido de los cuales es la bolsa de Fabricio en los pollos. Ah, las clulas B proliferan con rapidez y sus genes de inmunoglobulina reordenados se diversifican ms. En aves y conejos esto ocurre principalmente mediante la conversin gnica, un proceso por medio del cual secuencias cortas del gen de la regin V reordenado que se expresa son reemplazadas por secuencias provenientes de un seudogn del segmento gnico V ubicado en flujo ascendente (fig. 4-26). Parece ser que la conversin gnica se relaciona con la hipermutacin somtica por su mecanismo, puesto que se ha mostrado que la conversin gnica en una lnea de clulas B de pollo requiere la AID. Se cree que las mellas de cadena individual generadas por la APE1 despus de la desaminacin de los residuos de citosina son la seal que inicia un proceso de reparacin dirigido por homologa en el cual un segmento gnico V homlogo se usa como molde para la replicacin de DNA que repara al gen de la regin V. En el ganado ovino y en el vacuno, la diversificacin de las inmunoglobulinas es el resultado de la hipermutacin somtica, que ocurre en un rgano conocido como la placa de Peyer del leon. La hipermutacin somtica, independiente de clulas T y de un antgeno impulsor particular, tambin contribuye con la diversificacin de las inmunoglobulinas en las aves, en las ovejas y en los conejos.

4-20

El cambio de clase permite que el mismo exn VH ensamblado se asocie con diferentes genes CH en el transcurso de una respuesta inmunitaria

Los exones de la regin VH expresados por cualquier clula B dada se determinan durante su diferenciacin temprana en la mdula sea y, aunque despus pueden modificarse por hipermutacin somtica, no ocurre ms recombinacin V(D)J.

172

Captulo 4: Generacin de receptores de antgenos de los linfocitos

Fig. 4-26. La diversificacin de las inmunoglobulinas de pollo ocurre mediante conversin gnica. En los pollos, la diversidad de las inmunoglobulinas que puede crearse por medio de recombinacin V(D)J es en extremo limitada. Al principio slo hay un segmento gnico activo V y uno J y 15 segmentos gnicos D para el gen de la cadena pesada de pollo, y un segmento gnico V y J activo en el locus de la cadena ligera individual (panel superior izquierdo). De este modo, el reordenamiento gnico primario slo puede producir un nmero muy limitado de especificidades de receptor (segundos paneles). Las clulas B inmaduras que expresan este receptor migran hacia la bolsa de Fabricio, donde el entrecruzamiento de inmunoglobulinas de superficie (sIg) induce la proliferacin celular (segundos paneles). Los eventos de conversin gnica introducen secuencias de seudogenes de segmento gnico V adyacentes en el gen expresado, lo que crea diversidad en los receptores (tercer panel). Algunas de estas conversiones de gen desactivarn el gen previamente expresado (que no se muestra). Si una clula B ya no expresa sIg despus de dicha conversin, es eliminada. Eventos repetidos de conversin gnica pueden continuar diversificando el repertorio (paneles inferiores).

Genes de inmunoglobulina de pollo de la lnea germinal


seudogenes VH

Progenitor de clula B de pollo

VH

D J

C
RAG-1 RAG-2

seudogenes V

Clulas B de pollo inmaduras. Todas han reordenado los mismos genes VH y V

Todas las clulas B inmaduras en la bolsa expresan el mismo receptor. La expresin de sIg induce proliferacin

V D J

V J

Se introducen secuencias de seudogenes V en genes V reordenados mediante conversin gnica

La conversin gnica crea especicidades de receptor variables. Las clulas B que ya no expresan sIg mueren

V D J

V J

Mltiples rondas de conversin gnica pueden alterar las anidades de los anticuerpo por los antgenos

Repertorio diverso de especicidades de antgeno de clulas B

V D J

V J

En consecuencia, toda la progenie de esa clula B expresar el mismo gen VH. En contraste, varios isotipos diferentes de la regin C pueden expresarse en la progenie de clulas B conforme stas maduran y proliferan en el transcurso de una respuesta inmunitaria. Los primeros receptores de antgeno expresados por las clulas B son IgM e IgD, y el primer anticuerpo que se produce en una respuesta inmunitaria siempre es IgM. Ms tarde durante la respuesta inmunitaria, la misma regin V ensamblada puede expresarse en anticuerpos IgG, IgA o IgE. Esta variacin se conoce como cambio de clase (o cambio de isotipo) y, al contrario de la expresin de IgD, involucra la recombinacin irreversible del DNA. Es estimulado en el transcurso de una respuesta inmunitaria por seales externas como citocinas liberadas por clulas T o seales mitgenas suministradas por los agentes patgenos (cap. 9). Aqu se describe la base molecular del cambio de clase. El cambio de IgM a las otras clases de inmunoglobulina slo ocurre despus de que las clulas B han sido estimuladas por antgeno. Eso se logra mediante recombinacin de cambio de clase, que es un tipo de recombinacin de DNA no

Diversicacin secundaria del repertorio de anticuerpos

173

homlogo, que es guiada por medio de fragmentos de DNA repetitivo conocidos como regiones de cambio. Estas ltimas yacen en el intrn que se encuentra entre los segmentos gnicos JH y el gen C, y en sitios equivalentes ubicados en flujo ascendente de los genes que codifican cada uno de los otros isotipos de cadena pesada, con la excepcin del gen , cuya expresin no depende del reordenamiento del DNA (fig. 4-27, primer panel). Cuando una clula B cambia de la coexpresin de IgM y de IgD a la expresin de otro subtipo, ocurre recombinacin de DNA entre la regin S y la regin S ubicada justo en flujo ascendente del gen
Fig. 4-27. El cambio de clase implica recombinacin entre seales de cambio especficas. En esta figura se ilustra el cambio entre isotipos y en el locus de cadena pesada de ratn. Secuencias de DNA repetitivas, regiones de cambio (S), que guan el cambio de clase se encuentran en flujo ascendente de cada uno de los genes de la regin C de inmunoglobulina, con la excepcin del gen . El cambio se produce mediante el inicio de la transcripcin a travs de estas regiones de promotores (flechas) localizados en flujo ascendente de cada S. Debido a la naturaleza de las secuencias repetitivas, la transcripcin por medio de regiones S genera lazos R (regiones extendidas de DNA monocatenario formadas por la cadena que no funciona como molde), que sirven como sustratos para la AID, y despus para la UNG y para la APE1. Estas actividades introducen una alta densidad de mellas de cadena individual en la cadena de DNA que no funciona como molde y probablemente tambin un nmero menor de mellas en la cadena molde. Las muescas escalonadas se convierten en roturas de doble cadena mediante un mecanismo que an no se comprende. Estas roturas son reconocidas de forma putativa por la maquinaria de reparacin de roturas de doble cadena de la clula, en un proceso que involucra la participacin de la DNA-PKcs y de otras protenas de reparacin. Las dos regiones de cambio, en este caso S y S, se juntan por medio de esta maquinaria y el cambio de clase se completa mediante escisin de la regin de DNA interpuesta (incluyendo a C y a C) y la ligadura de las regiones S y S.

VDJ

C S

C 3 S3

C1 S1

C2b S2b

C2a S2a S

C S

La transcripcin a travs de la regin de cambio inicia por la activacin del promotor ubicado en ujo ascendente S C C S C

AID, UNG y APE1 introducen mellas agrupadas en ambas cadenas de DNA


APE1 UNG
C C C C

AID
C C C C C C C C

mRNA

mRNA

La DNA-PK y otras protenas de reparacin actan para iniciar la reparacin de rotura de doble cadena (DSBR)
Protenas de reparacin DNA-PK

La maquinaria de DSBR une las dos regiones de cambio y escinde secuencias interpuestas C 3 S3 C C Maquinaria de DSBR S VDJ S S C S C

La regin constante seleccionada ahora se localiza junto a la regin VDJ VDJ S/S C S C

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Captulo 4: Generacin de receptores de antgenos de los linfocitos

Deciencia de desaminasa de citidina inducida por activacin (AID)

que codifica dicho isotipo. En tal evento de recombinacin se eliminan las regiones que codifican C, y todo el DNA interpuesto entre las ltimas y la regin S que experimenta por reordenamiento. En la figura 4-27 se ilustra el cambio de C a C en el ratn. Todos los eventos de recombinacin de cambio producen genes que pueden codificar una protena funcional porque las secuencias de cambio yacen en intrones y por consiguiente no pueden provocar mutaciones por desplazamiento del marco de lectura. La AID slo puede actuar sobre el DNA monocatenario, como se observ en la seccin 4-17. Se sabe que para que haya un cambio de clase eficiente se requiere de transcripcin a travs de las regiones de cambio, la cual probablemente sea necesaria para abrir el DNA y permitir el acceso de la AID a los residuos de citidina ubicados en las regiones de cambio. Las secuencias de las regiones de cambio tienen caractersticas que pueden promover la accesibilidad del DNA desenrollado a la AID cuando se transcriben. En primer lugar, la cadena que no funciona como molde tiene un alto contenido de G. S consta de alrededor de 150 repeticiones de las secuencias (GAGCT)n(GGGGGT), donde n por lo general es 3, pero puede ser hasta 7. Las secuencias de las otras regiones de cambio (S, S y S) difieren en detalle, pero todas contienen repeticiones de las secuencias GAGCT y GGGGGT. Se cree que la transcripcin produce estructuras parecidas a una burbuja, llamadas lazos R, que se forman cuando el RNA transcrito desplaza la cadena que no funciona como molde del DNA duplohelicoidal (fig. 4-27). Se ha sugerido que el hbrido RNA-DNA que se forma cuando se transcriben regiones de cambio favorece en particular la formacin de lazos R, aunque hay otras estructuras tericas que la cadena molde podra adoptar para promover el cambio. Cualquiera que sea el caso, parece ser que la cadena no molde se desplaza y adopta una configuracin que hace que la regin sea un buen sustrato para la AID, que inicia la formacin de mellas en una sola cadena en los sitios de los residuos C. Adems, secuencias particulares, como AGCT, pueden ser sustratos en particular buenos para la AID, y dado que son palindrmicas pueden permitir que sta acte sobre los residuos de citidina de ambas cadenas a la vez, lo que introduce mltiples mellas monocatenarias en estas cadenas, que finalmente provocan la rotura de la doble cadena. Cualquiera que sea el mecanismo preciso, la transcripcin a travs de las regiones de cambio parece inducir la generacin de roturas de doble cadena en estas regiones. Los mecanismos celulares para reparar dichas roturas despus podran provocar recombinacin no homloga entre regiones de cambio, lo que da por resultado cambio de clase; los extremos por unir se aproximan mediante la alineacin de secuencias repetitivas comunes con las diferentes regiones de cambio. Despus la reunin de los extremos del DNA provoca la escisin de todo el DNA localizado entre las dos regiones de cambio y la formacin de una regin quimrica en la unin. La falta de AID bloquea por completo el cambio de clase. La deficiencia de esta enzima en los seres humanos se relaciona con una forma de inmunodeficiencia conocida como sndrome de hiper IgM de tipo 2, que se caracteriza por falta de inmunoglobulinas que no son IgM (cap. 12). La deficiencia de UNG tanto en ratones como en seres humanos tambin altera en gran medida el cambio de clase, que es una prueba adicional de las acciones secuenciales de la AID y de la UNG (seccin 4-17). La participacin de la reparacin de rotura de doble cadena se muestra por el hecho de que el cambio disminuye de manera notable en ratones que carecen de protenas Ku. Dado que stas tambin son esenciales para que el DNA vuelva a unirse durante la recombinacin V(D)J (seccin 4-5), el experimento para mostrar su participacin en el cambio de clase se llev a cabo en ratones con transgenes de cadena pesada y de cadena ligera reordenados previamente. Las deficiencias de otras protenas de reparacin de DNA como la DNA-PKcs tambin perjudican el cambio de clase, ms probablemente porque se requieren para la formacin de pares de DNA y para procesos de unin de extremos. Aunque ambas implican reordenamiento del DNA y parte de la misma maquinaria enzimtica, la recombinacin de cambio de clase difiere en varios aspectos de la recombinacin V(D)J. En primer lugar, todas las recombinaciones de cambio de clase son productivas; en segundo lugar usan diferentes secuencias de seal de recombinacin y no requieren las enzimas RAG; en tercer lugar, suceden des-

Diversicacin secundaria del repertorio de anticuerpos

175

pus de la estimulacin por antgeno y no durante el desarrollo de las clulas B en la mdula sea y en cuarto lugar, el proceso de cambio no es aleatorio sino dirigido por seales externas como las que proporcionan las clulas T (cap. 9).

Resumen
Los genes reordenados que codifican inmunoglobulinas por medio de recombinacin V(D)J pueden diversificarse ms mediante hipermutacin somtica, conversin gnica y cambio de clase, todas las cuales dependen de procesos de reparacin y de recombinacin del DNA iniciados por la enzima desaminasa de citidina inducida por activacin (AID). Al contrario de la recombinacin V(D)J, esta diversificacin secundaria slo ocurre en las clulas B y, en la hipermutacin somtica y en el cambio de clase, despus de la activacin de las clulas B por antgenos. La hipermutacin somtica diversifica la regin V por medio de la introduccin de mutaciones puntuales. Cuando esto incrementa la afinidad por el antgeno, las clulas B activadas que producen la inmunoglobulina mutada son seleccionadas para supervivencia, lo que a su vez da por resultado un aumento de la afinidad de los anticuerpos por el antgeno a medida que procede la respuesta inmunitaria. El cambio de clase no afecta la regin V pero incrementa la diversidad funcional de las inmunoglobulinas al reemplazar la regin C en el gen de inmunoglobulina expresado primero con otra regin C de la cadena pesada para producir anticuerpos IgG, IgA o IgE. El cambio de clase proporciona anticuerpos con la misma especificidad para antgeno pero distintas capacidades efectoras. La conversin gnica es el principal mecanismo usado para proporcionar un repertorio de inmunoglobulinas diverso en animales en los cuales slo puede generarse una diversidad limitada a partir de los genes de la lnea germinal mediante recombinacin V(D)J. Implica el reemplazo de segmentos de la regin V reordenada por secuencias derivadas de seudogenes.

Resumen del captulo 4


Los receptores de los linfocitos son notoriamente diversos y las clulas B en desarrollo usan el mismo mecanismo bsico para lograr esta diversidad. En cada clula, genes funcionales que codifican las cadenas de las inmunoglobulinas y los receptores de clula T se ensamblan por medio de recombinacin somtica a partir de grupos de segmentos gnicos separados que juntos codifican la regin V. Los sustratos para el proceso de unin son matrices de segmentos gnicos V, D y J, que son similares en todos los loci de genes de receptores de antgenos, aunque hay algunas diferencias importantes en los detalles de su disposicin. Las protenas especficas de linfocitos RAG-1 y RAG-2 dirigen el proceso de recombinacin V(D)J en las clulas T y en las B. Estas protenas funcionan en conjunto con enzimas modificadoras de DNA ubicuas y al menos con otra enzima especfica de linfocitos, la TdT, para completar los reordenamientos de genes. Dado que cada tipo de segmento gnico est presente en mltiples versiones, un poco diferentes, la seleccin aleatoria de un segmento gnico de cada grupo para el ensamble es la fuente de una considerable diversidad potencial. Durante el proceso de ensamble, un alto grado de diversidad importante desde el punto de vista funcional se introduce en las uniones de los segmentos de genes mediante mecanismos de unin imprecisos. Esta diversidad se concentra en el DNA que codifica los lazos CDR3 de los receptores, que yacen en el centro del sitio de unin a antgeno. La asociacin independiente de las dos cadenas de las inmunoglobulinas o de los receptores de clula T para formar un receptor de antgeno completo multiplica la diversidad general disponible. Adems, clulas B maduras activadas por antgeno inician un proceso de mutacin puntual somtica del DNA de la regin V, lo que crea muchas variantes de las regiones V ensambladas originales. Una diferencia importante entre las inmunoglobulinas y los receptores de clula T es que las primeras pueden estar unidas a la membrana (receptores de clula B) o ser secretadas (anticuerpos). La capacidad de la misma molcula para expresar una forma, tanto secretada

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Captulo 4: Generacin de receptores de antgenos de los linfocitos

Fig. 4-28. Cambios que ocurren en los genes de inmunoglobulina y de receptor de clula T durante el desarrollo y la diferenciacin de las clulas B y de las T. Todos los cambios que establecen diversidad inmunitaria son irreversibles, puesto que implican cambios en el DNA de las clulas B o de las T. Ciertos cambios en la organizacin del DNA o en su transcripcin son nicos para las clulas B. No se ha observado hipermutacin somtica en los receptores de clula T funcionales. Los procesos especficos para las clulas B, como la recombinacin de cambio de isotipo, permiten que la misma regin V se fije a varias regiones C de cadena pesada funcionalmente distintas y por lo tanto crean diversidad funcional de una manera irreversible. En cambio, la expresin de IgM frente a IgD, y de la forma unida a la membrana frente a la secretada de todos los tipos de inmunoglobulinas pueden, en principio, regularse de modo reversible.

Evento

Proceso

Naturaleza del cambio

El proceso ocurre en: Clulas B Clulas T

Ensamble de la regin V Diversidad de unin Activacin transcripcional Recombinacin de cambio Hipermutacin somtica Expresin de IgM e IgD sobre la supercie Forma de membrana frente a forma secretada

Recombinacin somtica de DNA Unin imprecisa, insercin de secuencia N en el DNA Activacin del promotor por proximidad al potenciador Recombinacin somtica de DNA Mutacin puntual en el DNA Corte y empalme diferencial de RNA Corte y empalme diferencial de RNA

Irreversible Irreversible Irreversible pero regulado Irreversible Irreversible Reversible, regulado Reversible, regulado

S S S S S S S

S S S No No No No

como una unida a la membrana, se debe al corte y empalme diferencial del mRNA de la cadena pesada para incluir exones que codifican diferentes formas de extremos carboxilo. Las regiones C de cadena pesada contienen tres o cuatro dominios de inmunoglobulina, mientras que las cadenas de los receptores de clula T slo tienen una. Por ltimo, las clulas B tienen la capacidad de aumentar la diversidad de las inmunoglobulinas por medio de tres mecanismos que implican eventos de mutacin somtica dependiente de AID del repertorio primario (hipermutacin somtica, conversin gnica y cambio de clase). La hipermutacin somtica y la conversin gnica incrementan la diversidad mediante cambios de las regiones V de los genes que codifican inmunoglobulinas. Los anticuerpos tambin tienen diversas funciones efectoras mediadas por sus regiones C. El cambio de clase permite el uso de varias regiones C de la cadena pesada alternativas con la misma regin V, lo que produce anticuerpos con la misma especificidad pero con funciones efectoras diferentes. De este modo, la progenie de una clula B nica puede expresar varias clases de anticuerpos diferentes, lo que maximiza las posibles funciones efectoras de un anticuerpo especfico para un antgeno determinado. En la figura 4-28 se resumen los cambios que ocurren en los genes de inmunoglobulinas y de receptores de clula T durante el desarrollo de las clulas B y de las clulas T.

Preguntas
4-1 a) Cules son las dos clases de reordenamientos somticos de DNA que ocurren en el locus del gen de inmunoglobulina? b) Comprense los mecanismos que generan estos tipos de reordenamientos. c) Cul de estas clases de reordenamientos tambin ocurre en los loci que codican el receptor de clula T? d) Cules seran las consecuencias de la actividad de la AID en las clulas T? 4-2 a) Cules son los genes especcos de linfocitos cruciales involucrados en la recombinacin V(D)J? b) Cules son sus principales actividades enzimticas? c) Cules de estas actividades se usan de preferencia en la formacin de genes de cadena pesada reordenados en comparacin con genes de cadena ligera? d) Cul de estas actividades se usa slo en el procesamiento de uniones codicadoras, si es que se emplea alguna? Cul en el procesamiento de las uniones de seal? e) De qu manera esto explica las uniones de seal precisas en comparacin con uniones codicadoras imprecisas?

Referencias de seccin

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4-3 El proceso de recombinacin V(D)J completo usa actividades enzimticas tanto especcas de tejido (clulas B y clulas T), como inespeccas de tejido (esto es, que se expresan de modo ubicuas). a) Comntense dos actividades enzimticas inespeccas necesarias para la terminacin de la unin V(D)J. b) Por qu estas actividades no originan reordenamientos de DNA V(D)J inapropiados en otros tejidos? 4-4 a) Comntense los cuatro procesos principales que generan diversidad del repertorio de linfocitos. b) Cul de estos procesos no comparten las clulas B y las clulas T? c) De qu manera se relaciona esta diferencia con las clases de reordenamientos de DNA que ocurren en las clulas B y en las clulas T? d) Qu otros procesos suceden en las clulas B que no ocurren en las clulas T, y por qu? 4-5 a) Cules son las funciones siolgicas del cambio de clase de genes de anticuerpos? b) De qu modo el ambiente o las interacciones con agentes patgenos regulan el cambio de clase?

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Referencias de seccin
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178

Captulo 4: Generacin de receptores de antgenos de los linfocitos

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Referencias de seccin

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181

Presentacin del antgeno a los linfocitos T

En una respuesta inmunitaria adaptativa, dos grupos distintos de molculas receptoras muy variables reconocen al antgeno: las inmunoglobulinas que sirven como receptores de antgenos sobre las clulas B y los receptores especficos de antgeno de las clulas T. Las clulas T slo reconocen antgenos que se presentan sobre las superficies celulares (cap. 3). stos pueden derivar de agentes patgenos que se replican dentro de las clulas, como los virus o las bacterias intracelulares, o de agentes infecciosos (o de sus productos) que las clulas captan por medio de endocitosis desde el lquido extracelular. Las clulas infectadas despliegan sobre su superficie fragmentos peptdicos derivados de las protenas de los agentes patgenos y de esta forma las clulas T pueden detectarlos. Estos pptidos externos son llevados a la superficie celular por glucoprotenas especializadas de las clulas hospedadoras, las molculas del MHC, las cuales se describieron en el captulo 3. Dichas molculas son codificadas en una agrupacin grande de genes que se identificaron por vez primera por sus potentes efectos sobre la respuesta inmunitaria contra tejidos trasplantados. Por dicha razn, este complejo de genes se denomina complejo principal de histocompatibilidad (MHC). Se empieza por comentar los mecanismos mediante los cuales se degradan antgenos protenicos a pptidos dentro de las clulas y los pptidos despus son transportados hacia la superficie celular unidos a molculas del MHC. Se ver que las dos clases diferentes de molculas del MHC, conocidas como MHC de clase I y MHC de clase II, obtienen pptidos en ubicaciones celulares diferentes. Los pptidos del citosol estn unidos a molculas del MHC de clase I, y son reconocidos por clulas T CD8, mientras que los pptidos generados en vesculas intracelulares se unen a molculas del MHC de clase II y son reconocidos por clulas T CD4. Los dos subgrupos funcionales de clulas T se activan as para iniciar la destruccin de agentes patgenos que residen en estos dos compartimientos celulares distintos. Algunas clulas T CD4 activan clulas B indiferenciadas que han internalizado un antgeno especfico y en consecuencia tambin estimulan la produccin de anticuerpos contra agentes patgenos extracelulares y sus productos. La segunda parte de este captulo se enfoca en los genes que codifican los MHC de clases I y II, y su notoria variabilidad gentica. Hay varias molculas del MHC diferentes en cada clase y cada uno de sus genes es muy polimrfico, con muchas variantes en la poblacin. El polimorfismo del MHC tiene un profundo efecto sobre el reconocimiento antignico por parte de las clulas T y la combinacin de mltiples genes y polimorfismo extiende en gran medida el rango de pptidos que pueden ser presentados a las clulas T por cada individuo y por cada poblacin en riesgo por un agente patgeno infeccioso. Asimismo, se consideran los hechos de que el MHC contiene genes que no codifican molculas del MHC y que los productos de muchos de estos genes participan en la produccin de complejos pptido:MHC.

182

Captulo 5: Presentacin del antgeno a los linfocitos T

Tambin se contempla un grupo de protenas, codificadas tanto dentro como fuera del MHC, que son similares a las molculas del MHC de clase I pero que tienen un polimorfismo limitado. Desempean diversas funciones, una de las cuales es la presentacin de antgenos lipdicos microbianos a las clulas T y a los linfocitos citolticos naturales (NK).

Generacin de ligandos de receptor de clula T


La funcin protectora de las clulas T depende de su capacidad para reconocer clulas que portan agentes patgenos o que han internalizado a stos o a sus productos. Las clulas T hacen esto al reconocer fragmentos peptdicos de protenas derivadas de los agentes patgenos en forma de complejos de pptidos y molculas del MHC sobre la superficie celular. La generacin de pptidos a partir de un antgeno intacto involucra la modificacin de la protena nativa y por lo general se denomina procesamiento de antgeno. El despliegue del pptido en la superficie celular por la molcula del MHC se denomina presentacin de antgeno. Ya se describi la estructura de las molculas del MHC y se observ cmo se unen a antgenos peptdicos en una hendidura sobre su superficie externa (vanse las secciones 3-13 a 3-16). En este captulo se describir la manera en que se generan pptidos a partir de agentes patgenos presentes en el citosol o en el compartimiento vesicular y se cargan sobre molculas del MHC de clase I o del MHC de clase II, respectivamente.

5-1

Las molculas del MHC de clase I y las del MHC de clase II transportan pptidos a la supercie celular desde dos compartimientos intracelulares

vescula secretora

citosol

ncleo

endosoma lisosoma aparato de Golgi

retculo endoplsmico

Fig. 5-1. Hay dos compartimientos intracelulares principales, separados por membranas. El primero es el citosol, que tambin se comunica con el ncleo mediante los poros nucleares localizados en la membrana nuclear. El segundo es el sistema vesicular, que comprende el retculo endoplsmico, el aparato de Golgi, los endosomas, los lisosomas y otras vesculas intracelulares. Puede considerarse que el sistema vesicular es continuo con el lquido extracelular. Vesculas secretoras brotan del retculo endoplsmico y son transportadas por medio de fusin con membranas de Golgi para mover contenido vesicular fuera de la clula, mientras que el material extracelular se capta mediante endocitosis hacia los endosomas.

Los agentes infecciosos pueden replicarse en dos compartimientos intracelulares (fig. 5-1). Los virus y ciertas bacterias se replican en el citosol o en el compartimiento nuclear contiguo (fig. 5-2, primer panel), mientras que muchas bacterias patgenas y algunos parsitos eucariticos se replican en los endosomas y en los lisosomas que forman parte del sistema vesicular (fig. 5-2, tercer panel). Antgenos exgenos derivados de agentes infecciosos extracelulares o de otras clulas infectadas por agentes patgenos tambin pueden entrar al citosol de clulas presentadoras de antgeno especializadas (fig. 5-2, segundo panel), como se describir ms adelante con mayor detalle. El sistema inmunitario tiene diferentes estrategias para eliminar agentes patgenos del citosol y del sistema endosmico. Las clulas infectadas por virus o por bacterias citoslicas son eliminadas por clulas T citotxicas, que se distinguen por la molcula correceptora CD8 (vase la seccin 3-17). La funcin de las clulas T CD8 es matar clulas infectadas; este es un importante medio para eliminar fuentes de nuevas partculas vricas y bacterias citoslicas obligadas, lo que libera al hospedador de la infeccin. Los agentes patgenos y sus productos ubicados en los compartimientos vesiculares de las clulas los detecta una clase diferente de clula T, distinguida por la molcula correceptora CD4 (vase la seccin 3-17). Las clulas T CD4 tienen varias actividades distintas, que ejecutan diferentes subgrupos CD4 efectores. Los primeros subgrupos que se reconocieron fueron el de las clulas TH1, que activan a los macrfagos para matar a los patgenos intracelulares que albergan y que tambin proporcionan ayuda a las clulas B para generar anticuerpos, y el de las clulas TH2, que responden a parsitos y ayudan en la produccin de anticuerpos. Un subgrupo de clulas T CD4 recientemente identificado se nombr TH17 por su capacidad de produccin de la citocina proinflamatoria interleucina 17. En ciertas situaciones, las clulas T CD4 tienen una actividad citotxica similar a la de las clulas T CD8. Por ejemplo, las clulas T CD4 humanas especficas para virus pueden matar linfocitos B infectados por el virus de Epstein-Barr (EBV). Otros subgrupos incluyen al menos dos tipos de clulas T CD4 reguladoras: uno se forma durante el desarrollo en el timo y los otros se generan en la periferia durante una respuesta inmunitaria.

Generacin de ligandos de receptor de clula T

183

Agentes patgenos citoslicos

Presentacin cruzada de antgenos exgenos

Agentes patgenos intravesiculares

Agentes patgenos y toxinas extracelulares

cualquier clula

macrfago

clula B

Degradacin en Unin de los pptidos a Presentacin a

Citosol MHC de clase I Clulas T CD8 efectoras

Citosol (mediante retrotranslocacin) MHC de clase I Clulas T CD8 indiferenciadas La clula presentadora, generalmente una clula dendrtica, activa a la clula T CD8

Vesculas endocticas (pH bajo) MHC de clase II Clulas T CD4 efectoras Activacin para eliminar bacterias y parsitos intravesiculares

Vesculas endocticas (pH bajo) MHC de clase II Clulas T CD4 efectoras Activacin de clulas B para que secreten Ig y eliminar bacterias/toxinas extracelulares

Efecto sobre la clula presentadora

Muerte celular

Los antgenos microbianos pueden entrar al compartimiento vesicular de dos modos. Algunas bacterias, entre ellas las micobacterias que causan tuberculosis y lepra, invaden los macrfagos y florecen en vesculas intracelulares. Otras bacterias proliferan fuera de las clulas, donde causan dao hstico al secretar toxinas y otras protenas. Estas bacterias y sus productos txicos pueden internalizarse por medio de fagocitosis, endocitosis o macropinocitosis en las vesculas intracelulares de clulas que luego presentan los antgenos del agente patgeno a las clulas T. Las clulas presentadoras de antgeno incluyen a las clulas dendrticas que se especializan en iniciar las respuestas de las clulas T (seccin 1-7), a los macrfagos que se especializan en captar partculas (seccin 2-4), y a las clulas B que internalizan con eficiencia antgenos especficos a travs de la endocitosis mediada por receptores de antgenos unidos a las inmunoglobulinas de sus superficies (fig. 5-2, cuarto panel). Las molculas del MHC de clase I transportan pptidos que se originan en el citosol hacia la superficie celular, donde son reconocidos por clulas T CD8, mientras que las molculas del MHC de clase II llevan pptidos que se originan en el sistema vesicular hacia la superficie celular, donde son reconocidos por clulas T CD4. Como se expuso en la seccin 3-17, la especificidad de esta reaccin se debe al hecho de que las clulas CD8 y las CD4 se unen a molculas de los MHC de clase I y de clase II, respectivamente. Las diferentes actividades de las clulas T CD8 y de las CD4 pueden considerarse en su mayor parte adaptadas para afrontar agentes patgenos que se encuentran en diferentes compartimientos celulares pero, como se comentar, hay comunicacin auxiliar importante entre estas dos vas.

5-2

Los pptidos que se unen a molculas del MHC de clase I se transportan de manera activa desde el citosol hasta el retculo endoplsmico

Las cadenas polipeptdicas de las protenas destinadas a la superficie celular, incluso las cadenas de las molculas del MHC, se transfieren durante la sntesis hacia la luz del retculo endoplsmico. Aqu, las dos cadenas de cada molcula del MHC se pliegan de modo correcto y se ensamblan entre s. Esto significa que el sitio de unin a pptido de la molcula del MHC de clase I se forma en la luz del retculo endoplsmico y nunca queda expuesta al citosol. Sin embargo, los fragmentos de antgeno que se unen a molculas del MHC de clase I por lo general derivan de protenas vricas producidas en el citosol. Esto suscit la interrogante de cmo los pptidos derivados de protenas en el citosol son capaces de unirse a molculas del MHC de clase I para ser llevados hacia la superficie celular.

Fig. 5-2. Los agentes patgenos y sus productos pueden encontrarse en el compartimiento citoslico o en la seccin vesicular de las clulas. Primer panel: todos los virus y algunas bacterias se replican en el compartimiento citoslico. Sus antgenos son presentados por molculas del MHC de clase I a clulas T CD8. Segundo panel: antgenos exgenos de una clula moribunda infectada por virus que es fagocitada por una clula dendrtica pueden retrotransportarse al citosol, donde es posible que se degraden y que sean cargados sobre molculas del MHC de clase I. Dicha presentacin cruzada tiene importancia para permitir que las clulas dendrticas activen clulas T CD8 indiferenciadas especficas para virus que no infectan clulas dendrticas por s mismos. Tercer panel: otras bacterias y algunos parsitos son captados en endosomas, por lo general por clulas fagocticas especializadas como macrfagos. Ah son eliminados y degradados, o en algunos casos pueden sobrevivir y proliferar dentro de la vescula. Sus antgenos son presentados por molculas del MHC de clase II a clulas T CD4. Cuarto panel: protenas derivadas de agentes patgenos extracelulares pueden entrar al sistema de vesculas intracelular al unirse a receptores de superficie, lo cual va seguido por endocitosis. Esto se ilustra aqu para protenas unidas por la inmunoglobulina de superficie de clulas B (el retculo endoplsmico y el aparato de Golgi se han omitido por simplicidad). Las clulas B presentan estos antgenos a clulas T auxiliares CD4, que despus pueden estimular a las clulas B para que produzcan anticuerpos. Otros tipos de clulas que portan receptores para las regiones Fc de molculas de anticuerpo tambin pueden internalizar antgenos de esta manera, y son capaces de activar clulas T.

184

Captulo 5: Presentacin del antgeno a los linfocitos T

Deciencia del MHC de clase I

Diagrama esquemtico de TAP

Luz del ER

TAP1
Membrana del ER

TAP2

dominio transmembrana hidrfobo dominio de casete de unin a ATP (ABC)

Citosol

Fig. 5-3. TAP1 y TAP2 forman un transportador de pptidos en la membrana del retculo endoplsmico. Todos los transportadores de la familia de casete de unin a ATP (ABC) estn compuestos de cuatro dominios (panel superior): dos dominios transmembrana hidrfobos que tienen mltiples regiones transmembrana y dos dominios de unin a ATP. TAP1 y TAP2 codifican una cadena polipeptdica con un dominio hidrfobo y un dominio de unin a ATP cada uno; las dos cadenas se ensamblan en un heterodmero para formar un transportador de cuatro dominios. A partir de similitudes entre las molculas de TAP y otros miembros de la familia transportadora ABC, se cree que los dominios de unin a ATP yacen dentro del citosol, mientras que los dominios hidrfobos se proyectan a travs de la membrana hacia la luz del retculo endoplsmico (ER) para formar un conducto a travs del cual pueden pasar pptidos, como se muestra en el panel inferior en una reconstruccin microscpica de la estructura del heterodmero TAP1: TAP2. La proyeccin a muestra la superficie luminal del ER del transportador de TAP, mirando desde arriba la parte superior de los dominios transmembrana, mientras que en la proyeccin b se muestra la molcula en el plano de la membrana. Los dominios de unin a ATP forman dos lbulos por debajo de los dominios transmembrana y no son visibles en esta proyeccin. Estructuras TAP cortesa de G. Velarde.

La respuesta es que los pptidos son transportados desde el citosol por protenas ubicadas en la membrana del retculo endoplsmico. Los primeros indicios de este mecanismo de transporte provinieron de clulas mutantes con un defecto de la presentacin de antgeno por molculas del MHC de clase I. Aunque en circunstancias normales ambas cadenas de molculas del MHC de clase I se sintetizan en estas clulas, hay mucho menos protenas del MHC de clase I que lo normal que sobre la superficie celular. Este defecto se puede corregir por medio de la adicin de pptidos sintticos al medio que baa a las clulas, lo cual sugiere que la mutacin afecta el suministro de pptidos a las molculas del MHC de clase I. Esta mutacin tambin indic que se requieren pptidos para la aparicin y el mantenimiento de molculas del MHC de clase I en la superficie celular y fue la primera indicacin de que las molculas del MHC son inestables en ausencia de pptidos unidos. El anlisis del DNA de las clulas mutantes mostr que dos genes que codifican miembros de la familia de protenas casete de unin al ATP (ABC) estn mutados o faltan en estas clulas. Las protenas ABC median el transporte dependiente de ATP de iones, azcares, aminocidos y pptidos a travs de membranas en muchos tipos de clulas, incluso bacterias. Las dos protenas ABC que faltan en las clulas mutantes normalmente se relacionan con la membrana del retculo endoplsmico. La transfeccin de las clulas mutantes con ambos genes restituye la presentacin de los pptidos por parte de las molculas del MHC de clase I de la clula. Estas protenas ahora se llaman transportadores asociados con el procesamiento antignico 1 y 2 (TAP1 y TAP2). Las dos protenas TAP forman un heterodmero (fig. 5-3) y las mutaciones en uno u otro gen TAP pueden evitar la presentacin del antgeno por molculas del MHC de clase I. La infeccin vrica de la clula aumenta el suministro de pptidos citoslicos hacia el interior del retculo endoplsmico. Los genes TAP1 y TAP2 se mapean dentro del MHC (vase la seccin 5-11) y son inducibles por interferones, que se producen en respuesta a infecciones por virus. En estudios in vitro en los que se usan fracciones de clulas normales, las vesculas microsmicas que imitan al retculo endoplsmico internalizan pptidos, que despus se unen a molculas del MHC de clase I ya presentes en la luz del microsoma. Las vesculas de clulas con deficiencia de TAP1 o de TAP2 no transportan pptidos. El transporte de pptidos al interior de microsomas normales requiere hidrlisis de ATP, lo que demuestra que el complejo TAP1:TAP2 es un transportador de pptidos dependiente de ATP. Experimentos similares muestran que el complejo TAP tiene cierta especificidad para los pptidos que transporta. Prefiere pptidos de ocho a 16 aminocidos, con residuos hidrfobos o bsicos en el extremo carboxilo (las caractersticas exactas de los pptidos que se unen a las molculas del MHC de clase I [vase la seccin 3-14]) y tiene un sesgo contra la presencia de prolina en los primeros tres residuos del extremo amino. El descubrimiento del complejo TAP esclareci la manera en que los pptidos vricos acceden a la luz del retculo endoplsmico y se unen a molculas del MHC de clase I, pero no explic la forma en la que se generan estos pptidos.

5-3

Los pptidos para transporte al interior del retculo endoplsmico se generan en el citosol

En las clulas las protenas se degradan y se sustituyen con protenas recin sintetizadas. Gran parte de la degradacin protenica que ocurre en el citosol se lleva a cabo por medio de un gran complejo de proteasa multicataltico, llamado el proteasoma. ste es un extenso complejo cilndrico de alrededor de 28 subunidades, dispuestas en cuatro anillos apilados de siete subunidades cada uno. Tiene un centro hueco revestido por los sitios activos de las subunidades proteolticas. Las protenas que se van a degradar se introducen en el centro del proteasoma, donde se degradan a pptidos cortos que a continuacin se liberan. Diversas pruebas implican al proteasoma en la produccin de ligandos peptdicos para molculas del MHC de clase I. El proteasoma forma parte de la va de degradacin dependiente de ubiquitina para protenas citoslicas. Marcar experimentalmente protenas con ubiquitina resulta en una presentacin ms eficiente de sus pptidos por molculas del MHC de clase I. Los inhibidores de la actividad pro-

Generacin de ligandos de receptor de clula T

185

teoltica del proteasoma tambin inhiben la presentacin antignica por molculas del MHC de clase I. Se desconoce si el proteasoma es la nica proteasa citoslica capaz de generar pptidos para transporte al interior del retculo endoplsmico. Dos subunidades del proteasoma, llamadas LMP2 (o b1i) y LMP7 (o b5i) son codificadas dentro del MHC cerca de TAP1 y de TAP2. Junto con molculas del MHC de clase I y protenas TAP, su expresin es inducida por interferones, que se producen en respuesta a infecciones vricas. Dos subunidades del proteasoma expresadas de modo constitutivo se sustituyen por LMP2 y LMP7. Asimismo, una tercera subunidad, MECL-1 (tambin conocida como b2i) que no est codificada dentro del MHC, es inducida por interferones y desplaza tambin una subunidad constitutiva del proteasoma. Por lo tanto ste puede existir en dos formas, como proteasoma constitutivo (presente en todas las clulas) y como inmunoproteasoma (que se encuentra en clulas estimuladas por interferones). Se cree que las tres subunidades inducibles del inmunoproteasoma y sus contrapartes constitutivas son las proteasas activas. La sustitucin de componentes constitutivos por sus contrapartes inducibles por interferones parece cambiar la especificidad enzimtica del proteasoma, de manera que hay un incremento de la divisin de polipptidos en los residuos hidrfobos y una divisin reducida en los residuos cidos. Esto produce pptidos con residuos carboxilo terminales que son residuos ancla preferidos para la unin a la mayora de las molculas del MHC de clase I y son tambin las estructuras predilectas para el transporte por TAP. La produccin de pptidos antignicos de la longitud correcta se potencia mediante una modificacin adicional del proteasoma inducida por interfern- (IFN-). Esta es la unin al proteasoma de un complejo protenico llamado complejo activador del proteasoma PA28. ste es un anillo de seis o siete miembros compuesto por dos protenas, PA28 y PA28, las cuales son inducidas por el IFN-. Los anillos PA28 se unen a uno u otro extremo del cilindro del proteasoma, o a ambos extremos y, al abrir los extremos, aumenta la velocidad a la cual se liberan pptidos

PA28

cmara cataltica

PA28

Fig. 5-4. El activador del proteasoma PA28 se une a ambos extremos del proteasoma. Panel a: Los anillos heptamricos del activador del proteasoma PA28 (amarillo) interactan con las subunidades (rosado) en ambos extremos del proteasoma central (las subunidades que constituyen la cavidad cataltica del centro estn en azul). Dentro de esta regin se encuentra el anillo (verde), una abertura estrecha parecida a un anillo que normalmente est bloqueada por otras partes de la subunidad (que se muestra en rojo). Panel b: acercamiento del anillo . Panel c: la unin de PA28 (que no se muestra por simplicidad) al proteasoma cambia la conformacin de las subunidades , moviendo las partes de la molcula que bloquean el anillo y abriendo el extremo del cilindro. Cortesa de F. Whitby.

186

Captulo 5: Presentacin del antgeno a los linfocitos T

desde el proteasoma (fig. 5-4). Adems de slo proporcionar ms pptidos, esta velocidad de flujo incrementada permite que pptidos en potencia antignicos escapen al procesamiento adicional que podra destruir sus propiedades antignicas. La traduccin de mRNA propios o derivados de agentes patgenos en el citoplasma no slo genera protenas plegadas de modo apropiado, sino tambin una cantidad importante (tal vez hasta 30%) de pptidos y protenas que se conocen como productos ribosomales defectuosos (DRiP). stos incluyen pptidos traducidos a partir de intrones en mRNA empalmados de manera inapropiada, traducciones de marcos de lectura desplazados y protenas plegadas de modo errneo. Los DRiP son reconocidos y marcados por ubiquitina para su degradacin rpida por el proteasoma. Este proceso al parecer derrochador garantiza que las protenas tanto propias como las derivadas de agentes patgenos generen abundantes pptidos para suministro al proteasoma para la presentacin final por parte de las molculas del MHC de clase I. El proteasoma tambin puede aumentar el acervo de pptidos mediante un mecanismo de corte y empalme, en el cual un segmento interno de una protena se elimina y los segmentos polipeptdicos no contiguos circundantes se unen y se usan como el pptido presentado por el MHC de clase I. Aunque todava no est clara la frecuencia con la cual ocurre el corte y empalme, hay varios ejemplos de clulas T CD8 especficas para tumores que reconocen antgenos peptdicos formados de esta manera. El proteasoma produce pptidos listos para ser transportados al interior del retculo endoplsmico. En esta etapa, chaperones celulares, como el complejo de anillo de TCP-1 (TRiC), un chapern del grupo II, protege a estos pptidos contra la degradacin completa en el citoplasma. Sin embargo, muchos de estos pptidos son ms largos que los que pueden unirse a las molculas del MHC de clase I. Por lo tanto, la divisin en el proteasoma puede no ser el nico procesamiento de antgenos para las molculas del MHC de clase I. Hay muy buenas pruebas de que los extremos carboxilo de antgenos peptdicos de hecho se producen por medio de divisin en el proteasoma. Los extremos amino pueden producirse mediante otro mecanismo. Los pptidos demasiado largos como para unirse a molculas del MHC de clase I aun pueden transportarse al interior del retculo endoplsmico, donde sus grupos amino terminales pueden ser recortados por medio de una aminopeptidasa llamada aminopeptidasa del retculo endoplsmico asociada con la preparacin del antgeno (ERAAP). Al igual que otros componentes de la va procesadora de antgenos, la ERAAP se regula en direccin ascendente por el IFN-. Los ratones que carecen de ERAAP exhiben defectos en la estibacin de pptidos sobre las molculas del MHC de clase I y las clulas T CD8 muestran respuestas alteradas, lo que indica que la ERAAP es una aminopeptidasa esencial y nica en esta va procesadora de antgenos.

5-4

El transporte retrgrado del retculo endoplsmico al citosol permite que protenas exgenas sean procesadas para la presentacin cruzada por molculas del MHC de clase I

Las molculas del MHC de clase I tambin pueden presentar pptidos derivados de protenas de la membrana y secretadas, por ejemplo, las glucoprotenas de envolturas vricas. Las protenas de la membrana y las secretadas se transfieren a la luz del retculo endoplsmico durante su biosntesis, pero los pptidos unidos por molculas del MHC de clase I portan evidencia de que dichas protenas se han degradado en el citosol. Las porciones de carbohidrato enlazadas a asparagina por lo general presentes en protenas unidas a membrana o en protenas secretadas pueden eliminarse en el citosol mediante una reaccin enzimtica que transforma el residuo de asparagina en cido asprtico, y este cambio de secuencia diagnstico puede observarse en algunos pptidos presentados por molculas del MHC de clase I. Ahora parece ser que las protenas localizadas en el retculo endoplsmico pueden regresar al citosol por medio del mismo sistema de translocacin que las transport al interior del retculo endoplsmico en primer lugar. Este dispositivo recin descubierto, conocido como translocacin retrgrada (retrotranslocacin), puede ser el mecanismo normal mediante el cual prote-

Generacin de ligandos de receptor de clula T

187

nas ubicadas en el retculo endoplsmico sufren recambio y protenas plegadas de manera inadecuada se eliminan. Una vez de regreso en el citosol, los polipptidos son degradados por el proteasoma. Los pptidos resultantes despus se transportan de regreso a la luz del retculo endoplsmico por medio de la TAP y se cargan en las molculas del MHC de clase I. Debido a este mecanismo de retrotranslocacin, las molculas del MHC de clase I tambin pueden presentar pptidos derivados de protenas provenientes de otras clulas que han sido introducidas en el sistema vesicular desde el ambiente extracelular. stas pueden incluir, por ejemplo, protenas provenientes de clulas infectadas por virus o de un trasplante de tejido. La presentacin de antgenos exgenos por molculas del MHC de clase I a clulas T CD8 se llama presentacin cruzada (fig. 5-2) y se reconoci por vez primera a mediados de la dcada de 1970, mucho antes de que se comprendiera el mecanismo. En un experimento temprano en el que se document la presentacin cruzada, clulas esplnicas de un ratn de un tipo de MHC, H-2b, se inyectaron en un ratn receptor H-2bd (portador de los tipos del MHC tanto b como d). Los ratones tambin difirieron en su trasfondo gentico fuera del MHC. Sorprendentemente, algunas clulas T CD8 mostraron respuesta a antgenos externos expresados por las clulas inmunizantes, aunque se habra esperado slo una respuesta de clulas T CD4 a estos antgenos exgenos. Estas respuestas las restringieron las molculas del MHC de clase I H-2d del receptor. Se interpret que este resultado significaba que las clulas T CD8 podan reaccionar a pptidos derivados de las clulas inmunizantes pero que fueron presentados por una molcula del MHC de clase I del hospedador. El reconocimiento de la presentacin cruzada precedi al reconocimiento de que la retrotranslocacin estaba involucrada, y el modo en que las protenas derivadas de manera exgena se transportaban al citosol de la clula hospedadora al principio fue un enigma. La maquinaria bioqumica precisa comprendida en la retrotranslocacin es el tema de investigaciones actuales, pero una vez que las protenas exgenas han alcanzado el citosol pueden ser degradadas por el proteasoma, y sus pptidos ser transportados de regreso al retculo endoplsmico y cargados en protenas del MHC de clase I. La presentacin cruzada no slo ocurre en antgenos de injertos de tejidos o de clulas, como en el experimento original antes descrito, sino tambin en respuesta a antgenos vricos, bacterianos y tumorales. La presentacin cruzada ocurre particularmente bien en un subgrupo de clulas dendrticas que expresan CD8 sobre su superficie; son en particular eficientes para introducir antgenos exgenos al sistema endosmico mediante fagocitosis y translocarlos de ah al citosol para su procesamiento y presentacin subsiguiente por molculas del MHC de clase I. Esta va es importante en la activacin de clulas T CD8 indiferenciadas contra virus que no infectan clulas presentadoras de antgeno, como las clulas dendrticas.

5-5

Las molculas del MHC de clase I recin sintetizadas se retienen en el retculo endoplsmico hasta que se unen a un pptido

La unin a un pptido es un paso importante en el ensamble de una molcula del MHC de clase I estable. Cuando se interrumpe el aporte de pptidos hacia el retculo endoplsmico, como en el caso de clulas con mutaciones en los genes TAP, molculas del MHC de clase I recin sintetizadas se retienen en el retculo endoplsmico en un estado parcialmente plegado. Esto explica la causa de que las clulas con mutaciones en TAP1 o en TAP2 no expresan molculas del MHC de clase I en la superficie celular. El plegamiento y el ensamblaje de una molcula del MHC de clase I completa (vase la fig. 3-20) dependen de la asociacin de la cadena del MHC de clase I primero con microglobulina 2 y despus con el pptido; este proceso involucra varias protenas accesorias con funciones parecidas a las de los chaperones. Slo despus de que el pptido se ha unido, se libera la molcula del MHC de clase I del retculo endoplsmico y se le permite viajar a la superficie celular. En los seres humanos, las cadenas del MHC de clase I recin sintetizadas que entran a las membranas del retculo endoplsmico se unen al chapern calnexina, que retiene la molcula del MHC de clase I en un estado parcialmente

Deciencia del MHC de clase I

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Captulo 5: Presentacin del antgeno a los linfocitos T

Fig. 5-5. Las molculas del MHC de clase I no abandonan el retculo endoplsmico a menos que se unan a pptidos. Las cadenas del MHC de clase I recin sintetizadas se ensamblan en el retculo endoplsmico con una protena unida a la membrana, la calnexina. Cuando este complejo se une a la microglobulina 2 (2m), el dmero de MHC de clase I :2m se disocia de la calnexina y a continuacin la molcula del MHC de clase I parcialmente plegada se une al transportador de pptidos TAP por medio de interaccin con una molcula de la protena asociada con TAP tapasina. Los chaperones calreticulina y Erp57 tambin se unen para formar parte de este complejo. La molcula del MHC de clase I se retiene dentro del retculo endoplsmico hasta que es liberada por la unin de un pptido, que completa el plegamiento de la molcula del MHC. Incluso en ausencia de infeccin, hay un flujo continuo de pptidos del citosol al interior del ER. Los productos ribosomales defectuosos (DRiP) y las protenas antiguas marcadas para destruccin son degradados en el citoplasma por el proteasoma para generar pptidos que se transportan a la luz del retculo endoplsmico por medio de la TAP, como aqu se muestra, y algunos se unirn a molculas del MHC de clase I. Una vez que un pptido se ha unido a la molcula del MHC, el complejo pptido:MHC abandona el retculo endoplsmico, es transportado a travs del aparato de Golgi y por ltimo a la superficie celular.

plegado en el retculo endoplsmico (fig. 5-5). La calnexina tambin se asocia con receptores de clula T, inmunoglobulinas, y molculas del MHC de clase II parcialmente plegados y por consiguiente tiene una funcin crucial en el montaje de muchas protenas inmunitarias. Cuando la microglobulina 2 se une a la cadena , el heterodmero :microglobulina 2 parcialmente plegado se disocia de la calnexina, y se une a un complejo de protenas llamado complejo de carga de MHC de clase I. Un componente de este complejo (la calreticulina) es similar a la calnexina y probablemente desempea una funcin de chapern similar. Un segundo componente del complejo es la protena relacionada con el TAP, tapasina, codificada por un gen dentro del MHC. La tapasina forma un puente entre molculas del MHC de clase I y el TAP, lo que permite que el heterodmero de :microglobulina 2 parcialmente plegado espere el transporte de un pptido idneo desde el citosol. Un tercer componente de este complejo es el chapern Erp57, una oxidorreductasa de tiol que puede tener cierta funcin en el rompimiento y la formacin de novo del enlace disulfuro en el dominio 2 del MHC de clase I durante la carga del pptido. La calnexina, el Erp57 y la calreticulina se unen a varias glucoprotenas durante su ensamblaje en el retculo endoplsmico y parecen formar parte del mecanismo de control de calidad general de la clula. El ltimo componente del complejo de carga del MHC de clase I es la molcula TAP misma, cuya funcin como transportador tambin es la mejor comprendida. Los otros componentes parecen ser esenciales para mantener a la molcula del MHC de clase I en un estado receptivo a pptido y tambin para llevar a cabo una funcin de edicin de pptido, lo que permite el intercambio de pptidos de baja afinidad unidos a la molcula del MHC de clase I por pptidos de mayor afinidad. Ciertamente, las clulas carentes de calreticulina o de tapasina muestran defectos en el ensamblaje de molculas del MHC de clase I y expresan complejos de clase I en la superficie celular que contienen pptidos subptimos, de baja afinidad. La unin de un pptido al heterodmero parcialmente plegado al final lo libera del complejo de carga del MHC de clase I. La molcula del MHC de clase I por completo plegada y su pptido unido ahora pueden abandonar el retculo endoplsmico y ser transportados hacia la superficie celular. Todava no est claro si el complejo carga de modo directo pptidos en las molculas del MHC de clase I, o

Las cadenas del MHC de clase I parcialmente plegadas se unen a la calnexina hasta que se ensambla la microglobulina 2

El complejo de MHC de clase I : 2m se libera de la calnexina, se une a un complejo de chaperones (calreticulina, Erp57) y a la TAP por medio de la tapasina

El proteasoma degrada protenas del citosol y productos ribosomales defectuosos (DRiP) a fragmentos peptdicos. La TAP transporta pptidos al ER

Un pptido se une a la molcula del MHC de clase I y completa su plegamiento. La molcula del MHC de clase I se libera del complejo de TAP y se exporta a la membrana celular

calreticulina

ER
calnexina

MHC de clase I

Erp57 tapasina

2m

TAP TAP

protenas normales (>70%)

Citosol
fragmentos peptdicos

DRiPs (<30%) ribosoma

proteasoma

Ncleo

protena antigua

Generacin de ligandos de receptor de clula T

189

si la unin a l simplemente permite que la molcula del MHC de clase I investigue los pptidos transportados por el TAP antes de que se difundan en toda la luz del retculo endoplsmico o se transporten de regreso al citosol. Casi ninguno de los pptidos transportados por el TAP se une a las molculas del MHC en dicha clula, y se eliminan con rapidez del retculo endoplsmico; hay pruebas de que se transportan de regreso al citosol por medio de un mecanismo de transporte dependiente de ATP distinto al del TAP, conocido como complejo Sec61. En clulas con genes TAP mutantes, las molculas del MHC de clase I en el retculo endoplsmico son inestables y al final se transfieren de regreso al citosol, donde se degradan. De esta manera, la molcula del MHC de clase I debe unirse a un pptido para completar su plegamiento y para ser transportada hacia delante. En clulas no infectadas, los pptidos derivados de protenas propias llenan la hendidura de unin al pptido de las molculas del MHC de clase I maduras y son transportados a la superficie celular. En clulas normales, las molculas del MHC de clase I se retienen en el retculo endoplsmico durante cierto tiempo, lo que sugiere que estn presentes en una cantidad mayor que el pptido. Esto tiene mucha importancia para la funcin inmunitaria de las molculas del MHC de clase I porque deben estar inmediatamente disponibles para transportar pptidos vricos hacia la superficie celular si la clula es infectada.

5-6

Muchos virus producen inmunoevasinas que intereren con la presentacin de antgenos por molculas del MHC de clase I

La presentacin de pptidos vricos por molculas del MHC de clase I en la superficie de una clula emite seales a las clulas T CD8 para que maten a la clula infectada. Algunos virus producen protenas, llamadas inmunoevasinas, que permiten al virus evadir el reconocimiento inmunitario al evitar la aparicin de complejos pptido:MHC de clase I sobre la clula infectada (fig. 5-6). Algunas inmunoevasinas vricas bloquean la entrada de pptido al retculo endoplsmico al dirigirse al TAP (fig. 5-7, panel superior). Por ejemplo, el virus del herpes simple

Virus

Protena

Categora

Mecanismo

Virus del herpes simple 1 Citomegalovirus humano (HCMV) Virus del herpes bovino

ICP47 Bloquea la entrada de los pptidos al retculo endoplsmico

Bloquea la unin del pptido a TAP

US6

Inhibe la actividad de ATPasa de TAP

UL49.5

Inhibe el transporte de pptidos por TAP

Adenovirus

E19 Retencin del MHC de clase I en el retculo endoplsmico

Inhibidor competitivo de la tapasina

HCMV Citomegalovirus (CMV) murino HCMV Virus del herpes murino 68 CMV murino

US3

Bloquea la funcin de la tapasina

M152

Se desconoce Transporta algunas molculas del MHC de clase I recin sintetizadas al citosol Actividad de ligasa de E3-ubiquitina Interere con el reconocimiento por linfocitos citotxicos mediante un mecanismo desconocido Fig. 5-6. Las inmunoevasinas producidas por virus interfieren con el procesamiento de los antgenos que se unen a molculas del MHC de clase I.

US2

mK3

Degradacin del MHC de clase I (dislocacin) Se une al MHC de clase I en la supercie celular

m4

190

Captulo 5: Presentacin del antgeno a los linfocitos T

Las evasinas vricas US6 e ICP 47 bloquean la presentacin de antgeno al evitar el movimiento del pptido a travs del transportador de pptido TAP
calreticulina Erp57 MHC I tapasina

ER

US6

TAP

calnexina

produce una protena, ICP47, que se une a la superficie citoslica del TAP y evita que los pptidos entren al transportador. La protena US6 del citomegalovirus humano impide el transporte de pptidos al inhibir la actividad ATPasa del TAP, y la protena UL49.5 del virus del herpes bovino inhibe el transporte de pptidos por el TAP. Los virus tambin pueden evitar que los complejos pptido:MHC lleguen a la superficie celular al retener molculas del MHC de clase I en el retculo endoplsmico (fig. 5-7, panel medio). La protena E19 del adenovirus interacta con ciertas protenas del MHC de clase I y contiene un motivo que retiene al complejo protenico en el retculo endoplsmico. E19 tambin evita la interaccin entre la tapasina y el TAP, necesaria para la carga del pptido sobre la molcula del MHC de clase I. Varias protenas vricas pueden catalizar la degradacin de molculas del MHC de clase I recin sintetizadas mediante un proceso conocido como dislocacin, que inicia la va que en circunstancias normales se usa para degradar protenas del retculo endoplsmico plegadas de modo inadecuado al dirigirlas de regreso al citosol. Por ejemplo, la protena US11 del citomegalovirus humano se une a molculas del MHC de clase I nacientes y junto con una protena ubicua de la membrana del retculo endoplsmico del hospedador, la derlina1, las lleva al citosol, donde se degradan (fig. 5-7, panel inferior). Casi todas las inmunoevasinas vricas provienen de virus con genomas de DNA como la familia del virus del herpes, que tienen genomas grandes y cuya estrategia de replicacin en el hospedador involucra un periodo de latencia o de quiescencia.

ICP 47

5-7
Citosol

Los pptidos presentados por molculas del MHC de clase II se generan en vesculas endocticas acidicadas

La protena del adenovirus E19 compite con la tapasina e inhibe la carga de pptido sobre protenas del MHC de clase I nacientes

E19

E19

proteasoma

La protena de CMV US11, unin con la derlina, causa dislocacin de molculas del MHC de clase I nacientes de regreso al citosol para su degradacin

Varias clases de agentes patgenos, entre ellos el parsito protozoario Leishmania y las micobacterias que causan lepra y tuberculosis, se replican dentro de vesculas intracelulares en los macrfagos. Dado que residen en vesculas rodeadas por membrana, las protenas de estos agentes patgenos por lo general no son accesibles a los proteasomas del citosol. En cambio, despus de la activacin del macrfago, las protenas contenidas en vesculas (que a menudo son protenas globulares estabilizadas por medio de enlaces disulfuro intramoleculares) son reducidas y degradadas por proteasas dentro de las vesculas a fragmentos peptdicos que se unen a molculas del MHC de clase II. De esta manera se llevan a la superficie celular, donde las clulas T CD4 pueden reconocerlas. Los agentes patgenos y las protenas extracelulares que se internalizan en las vesculas endocticas tambin se procesan de este modo y sus pptidos se presentan a las clulas T CD4 (fig. 5-8). La mayor parte de lo que se sabe acerca del procesamiento protenico en la va endoctica proviene de experimentos en los cuales se alimenta a macrfagos con protenas simples, que son captadas mediante endocitosis; de esta manera puede cuantificarse el procesamiento de antgeno agregado. Las protenas que se unen a la inmunoglobulina de superficie de las clulas B y que se internalizan por medio de endocitosis mediada por receptores, se procesan mediante la misma va. Las protenas que entran a las clulas por medio de endocitosis se transportan

MHC I

US11

derlina

Fig. 5-7. Las inmunoevasinas vricas se dirigen al complejo de carga de pptido en el retculo endoplsmico. En el panel superior se muestra el bloqueo de la entrada del pptido al retculo endoplsmico (ER). La protena ICP47 citoslica del HSV1 evita que los pptidos se unan a TAP en el citosol, mientras que la protena US6 del CMV humano interfiere con la transferencia dependiente de ATP de pptidos por medio de TAP. En el panel central se muestra la retencin de molculas del MHC de clase I en el ER mediante la protena E19 de

adenovirus. sta se une a ciertas molculas del MHC y las retiene en el ER por medio de un motivo de retencin en el ER y al mismo tiempo compite con la tapasina para evitar la asociacin con TAP y la carga del pptido. En el panel inferior se muestra cmo la protena US11 del CMV humano se asocia con molculas del MHC de clase I recin sintetizadas y las dirige de regreso al citosol mediante un conducto de membrana del ER, la derlina-1. Una vez en el citosol la protena del MHC es marcada para su degradacin en el proteasoma.

Generacin de ligandos de receptor de clula T

191

El antgeno es captado desde el espacio extracelular hacia vesculas intracelulares Espacio extracelular

En endosomas tempranos de pH neutro, las proteasas endosmicas son inactivas

La acidicacin de las vesculas activa las proteasas para degradar antgenos a fragmentos peptdicos

Las vesculas que contienen pptidos se fusionan con vesculas portadoras de molculas del MHC de clase II

Citosol

a los endosomas, que se acidifican cada vez ms conforme progresan hacia el interior de las clulas y al final se fusionan con lisosomas. Los endosomas y los lisosomas contienen proteasas, conocidas como proteasas cidas, que se activan a pH bajo y finalmente degradan los antgenos protenicos contenidos en las vesculas. El material particulado de mayor tamao internalizado mediante fagocitosis o macropinocitosis tambin se puede manejar por medio de esta va de procesamiento antignico. Los frmacos que incrementan el pH de los endosomas (como la cloroquina), inhiben la presentacin de antgenos que entran a la clula de este modo, lo que sugiere que las proteasas cidas se encargan del procesamiento de antgenos internalizados. Entre estas proteasas cidas estn las proteasas de cistena, las catepsinas B, D, S y L; esta ltima es la enzima ms activa de esta familia. El procesamiento antignico puede imitarse hasta cierto grado mediante la digestin de protenas con estas enzimas in vitro a pH cido. Las catepsinas S y L pueden ser las proteasas predominantes comprendidas en el procesamiento de antgenos vesiculares; los ratones que carecen de catepsina B o de catepsina D muestran procesamiento normal de antgenos, mientras que aquellos sin catepsina S muestran algunas deficiencias en dicho procesamiento. Es probable que el repertorio general de pptidos producidos dentro de la va endosmica refleje las actividades de las muchas proteasas que se encuentran en los compartimientos endosmico y lisosmico. Quiz sea necesario reducir los enlaces disulfuro, en particular los intramoleculares, antes de que las protenas que los contienen puedan digerirse en los endosomas. Una reductasa de tiol inducida por IFN- presente en el compartimiento endosmico (la reductasa de tiol lisosmica inducida por IFN- [GILT]) lleva a cabo esta funcin en la va procesadora de antgenos. Las molculas del MHC de clase II presentan principalmente pptidos de protenas de la va vesicular y las del MHC de clase I presentan pptidos derivados de protenas intracelulares. Sin embargo, como se describi en la seccin 5-4, hay intercomunicacin entre estas vas, lo que permite la presentacin cruzada de protenas exgenas por molculas del MHC de clase I. Por el contrario, no es sorprendente que un nmero importante de pptidos unidos a molculas del MHC de clase II surge a partir de protenas, como la actina y la ubiquitina, que se encuentran en el citosol. El mecanismo ms probable por el cual las protenas citoslicas se procesan para la presentacin al MHC de clase II es el proceso normal de recambio protenico conocido como autofagia, en el cual protenas y organelos citoslicos se transportan a los lisosomas para su degradacin. La autofagia es constitutiva pero puede potenciarse por situaciones de estrs celular como la inanicin, cuando la clula debe catabolizar protenas intracelulares para obtener energa. En el proceso de microautofagia, el citosol se internaliza de forma continua en el sistema vesicular por medio de invaginaciones lisosmicas, mientras que en la macroautofagia, que se induce por inanicin, un autofagoso-

Fig. 5-8. Los pptidos que se unen a molculas del MHC de clase II se generan en vesculas endocticas acidificadas. En el caso que se ilustra aqu, antgenos extraos extracelulares (como bacterias o antgenos bacterianos) han sido captados por una clula presentadora de antgenos, como un macrfago o una clula dendrtica inmadura. En otros casos, las fuentes de los antgenos peptdicos pueden ser bacterias o parsitos que han invadido la clula para replicarse en las vesculas intracelulares. En ambos casos, la va de procesamiento de antgeno es la misma. El pH de los endosomas que contienen los agentes patgenos internalizados disminuye de modo progresivo, lo que activa proteasas dentro de las vesculas para degradar el material engullido. En algn momento de su trayectoria hacia la superficie celular, molculas del MHC de clase II recin sintetizadas pasan por dichas vesculas acidificadas, se unen a fragmentos peptdicos del antgeno y los transportan a la superficie celular.

192

Captulo 5: Presentacin del antgeno a los linfocitos T

ma de doble membrana engulle citosol y se fusiona con los lisosomas. En una tercera va de autofagia se usa la protena cognada de choque trmico 70 (Hsc70) y la protena de membrana asociada al lisosoma 2 (LAMP-2) para transportar protenas citoslicas a los lisosomas. La autofagia se ha demostrado en el procesamiento del antgeno nuclear del virus de Epstein-Barr 1 (EBNA-1) para su presentacin a las clulas T CD4.

5-8

La cadena invariable dirige molculas del MHC de clase II recin sintetizadas hacia vesculas intracelulares acidicadas

Fig. 5-9. La cadena invariable se divide para dejar un fragmento peptdico, CLIP, unido a la molcula del MHC de clase II. A la izquierda se muestra un modelo de la cadena invariable trimrica unida a heterodmeros : del MHC de clase II. La porcin CLIP se muestra en color rojo, el resto de la cadena invariable en verde y las molculas del MHC de clase II en amarillo. En el retculo endoplsmico, la cadena invariable (Ii) se une a molculas del MHC de clase II con la seccin CLIP de su cadena polipeptdica situada a lo largo del surco de unin al pptido (modelo y panel izquierdo). La Ii se divide despus del transporte hacia una vescula acidificada, inicialmente justo a un lado de la molcula clase II del MHC (panel central). La porcin restante de la Ii (conocida como pptido inducido por leupeptina o fragmento LIP) retiene los segmentos transmembrana y citoplsmico que contienen las seales que dirigen complejos Ii:MHC de clase II a la va endosmica. La divisin subsiguiente (panel derecho) del fragmento LIP deja slo un pptido corto an unido a la molcula clase II; este pptido es el fragmento CLIP. Modelo estructural cortesa de P. Cresswell.

La funcin de las molculas del MHC de clase II es unirse a pptidos generados en las vesculas intracelulares de macrfagos, clulas dendrticas inmaduras, clulas B y otras clulas presentadoras de antgenos y presentar estos pptidos a las clulas T CD4. La va biosinttica de molculas del MHC de clase II, como las de otras glucoprotenas de superficie celular, empieza con su translocacin al interior del retculo endoplsmico y por lo tanto se debe impedir que se unan de manera prematura a pptidos transportados a la luz del retculo endoplsmico o a los polipptidos recin sintetizados propios de la clula. Puesto que el retculo endoplsmico est muy bien dotado de cadenas polipeptdicas desplegadas y parcialmente plegadas, se necesita un mecanismo general para evitar su unin al surco abierto de unin al pptido de la molcula del MHC de clase II. La unin se evita mediante el ensamblaje de molculas del MHC de clase II recin sintetizadas con una protena conocida como la cadena invariable (Ii) asociada al MHC de clase II. La cadena invariable forma trmeros; cada subunidad se une de modo no covalente a un heterodmero : del MHC de clase II (fig. 5-9). Una cadena Ii se une a la molcula del MHC de clase II; parte de su cadena polipeptdica yace dentro del surco de unin al pptido, lo que bloquea el surco y evita la unin de pptidos o de protenas parcialmente plegadas. Mientras este complejo se ensambla en el retculo endoplsmico, sus componentes se asocian con calnexina. Slo cuando el ensamblaje termina para producir un complejo de nueve cadenas, el complejo se libera de la calnexina para el transporte hacia afuera del retculo endoplsmico. Cuando forma parte del complejo de nueve cadenas, la molcula del MHC de clase II no puede unirse a pptidos ni a protenas desdobladas, de manera que aquellos presentes en el retculo endoplsmico por lo general no son presentados por molculas del MHC de clase II. Hay evidencias de que en ausencia de cadenas invariables muchas molculas del MHC de clase II se retienen en el retculo endoplsmico como complejos con protenas plegadas de modo errneo. La cadena invariable tiene una segunda funcin: dirigir el transporte de las molculas del MHC de clase II a un compartimiento endosmico de pH bajo donde puede ocurrir la carga de pptidos. El complejo formado por heterodmeros : del MHC de clase II y la Ii se retiene durante 2 a 4 h en este compartimiento. Durante este periodo, la Ii se divide por medio de proteasas cidas como la catepsina S en

La cadena invariable (Ii) se une al surco de la molcula del MHC de clase II


ER Ii

La Ii se divide inicialmente para dejar un fragmento unido a la molcula de clase II y a la membrana

La divisin adicional deja un fragmento peptdico corto, CLIP, unido a la molcula de clase II

Citosol

Generacin de ligandos de receptor de clula T

193

varios pasos, como se muestra en la figura 5-9. Las primeras divisiones generan una forma truncada de Ii que permanece unida a la molcula del MHC de clase II y la retiene dentro del compartimiento proteoltico. Una divisin subsiguiente libera la molcula del MHC de clase II del fragmento de Ii asociado con la membrana, lo que deja un fragmento corto de Ii llamado CLIP (que significa pptido de cadena invariable asociado a clase II) an unido a la molcula del MHC. Las molculas de MHC de clase II relacionadas con el CLIP no pueden unirse a otros pptidos. El CLIP se debe disociar o ser desplazado para permitir que un pptido se una a la molcula del MHC y permitir que el complejo se lleve a la superficie celular. La catepsina S divide a la Ii en casi todas las clulas positivas para MHC de clase II, incluso clulas presentadoras de antgeno, mientras que en clulas epiteliales corticales del timo la catepsina S parece ser sustituida por catepsina L. Todava no se define con claridad el compartimiento endosmico en el cual la Ii se divide y las molculas del MHC de clase II encuentran al pptido. Casi todas las molculas del MHC de clase II recin sintetizadas se llevan a la superficie celular en vesculas, que en algn momento se fusionan con endosomas entrantes. No obstante, tambin hay evidencias de que algunos complejos MHC de clase II:Ii se transportan primero a la superficie de la clula y despus se internalizan de nuevo en los endosomas. En uno u otro caso, los complejos MHC de clase II:Ii entran a la va endosmica y ah encuentran pptidos derivados de protenas propias a los que se unen. La microscopia inmunoelectrnica usando anticuerpos marcados con partculas de oro para localizar Ii y molculas del MHC de clase II dentro de clulas, sugiere que la Ii se divide y los pptidos se unen a molculas del MHC de clase II en un compartimiento endosmico particular llamado el MIIC (compartimiento del MHC de clase II), en etapas tardas de la va endosmica (fig. 5-10). Al igual que con las molculas del MHC de clase I, las molculas del MHC de clase II ubicadas en clulas no infectadas se unen a pptidos derivados de protenas propias. Las molculas del MHC de clase II que no se unen a pptidos despus de la disociacin de la cadena invariable son inestables en el pH cido del endosoma y se degradan con rapidez.

MIIC

5-9

Una molcula especializada parecida a MHC de clase II cataliza la carga de molculas de MHC de clase II con pptidos

Otro componente de la va vesicular de procesamiento de antgenos se revel mediante anlisis de lneas de clulas B humanas mutantes con un defecto de la presentacin antignica. Las molculas del MHC de clase II en estas lneas celulares se ensamblan de manera correcta con la cadena invariable y parecen seguir la ruta vesicular normal. Sin embargo, no se unen a pptidos derivados de protenas internalizadas y a menudo llegan a la superficie celular con el pptido CLIP an unido. El defecto en estas clulas yace en una molcula parecida a MHC de clase II llamada HLA-DM en los seres humanos (H-2M en los ratones). Los genes que codifican HLA-DM se encuentran cerca de los que codifican TAP y LMP (ahora tambin conocidos como PSMB) en la regin del MHC de clase II (vase la fig. 5-12); codifican una cadena y una cadena muy similares a las de otras molculas del MHC de clase II. No obstante, la molcula HLA-DM no se expresa en la superficie celular, sino que se encuentra de manera predominante en el MIIC. HLA-DM se une a molculas del MHC de clase II vacas, que de otro modo se agregaran, y las estabiliza; adems, cataliza tanto la liberacin del fragmento CLIP de complejos MHC de clase II:CLIP como la unin de otros pptidos a la molcula del MHC de clase II vaca (fig. 5-11). Sin embargo, la molcula del HLADM no se une a pptidos y el surco abierto que se encuentra en otras molculas de MHC de clase II est cerrado en la molcula HLA-DM. HLA-DM tambin cataliza la liberacin de pptidos unidos de manera inestable desde molculas del MHC de clase II. En presencia de una mezcla de pptidos capaces de unirse a molculas del MHC de clase II, como ocurre en el MIIC, HLADM se une de modo continuo a complejos pptido:MHC de clase II, eliminando pptidos unidos con debilidad y permitiendo que otros pptidos los sustituyan. Es probable que los antgenos presentados por molculas del MHC de clase II tengan

Fig. 5-10. Las molculas del MHC de clase II se cargan con pptidos en un compartimiento intracelular especializado. Las molculas del MHC de clase II se transportan del aparato de Golgi (marcado con una G en esta micrografa electrnica de un corte ultradelgado de una clula B) a la superficie de la clula por medio de vesculas intracelulares especializadas llamadas compartimiento de MHC de clase II (MIIC). stas tienen una morfologa compleja, que muestra vesculas internas y hojas de membrana. Anticuerpos marcados con partculas de oro de diferentes tamaos identifican la presencia tanto de molculas del MHC de clase II (partculas de oro pequeas) como de la cadena invariable (partculas de oro grandes) en el aparato de Golgi, mientras que slo molculas del MHC de clase II son detectables en el MIIC. En consecuencia, se cree que en este compartimiento la cadena invariable se divide y ocurre carga de pptido. Fotografa ( 135 000) cortesa de H.J. Geuze.

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Captulo 5: Presentacin del antgeno a los linfocitos T

La cadena invariable (Ii) forma un complejo con la molcula del MHC de clase II, lo que bloquea la unin de pptidos y de protenas plegadas de manera errnea

La Ii se divide en un endosoma acidicado y deja un fragmento peptdico corto, CLIP, an unido a la molcula del MHC de clase II

Los antgenos que experimentaron endocitosis se degradan a pptidos en los endosomas, pero el pptido CLIP bloquea la unin de pptidos a molculas del MHC de clase II

El HLA-DM se une a la molcula del MHC de clase II, lo que libera al fragmento CLIP y permite que otros pptidos se unan. Despus la molcula del MHC de clase II viaja hacia la supercie de la clula

Ii

HLA-DM

Retculo endoplsmico

Citosol

Fig. 5-11. El HLA-DM facilita la carga de pptidos antignicos sobre molculas del MHC de clase II. La cadena invariable (Ii) se une a molculas del MHC de clase II recin sintetizadas y bloquea la unin de pptidos y de protenas desdobladas en el retculo endoplsmico y durante el transporte de la molcula del MHC de clase II hacia vesculas endocticas acidificadas (primer panel), donde las proteasas dividen la cadena invariable y dejan el pptido CLIP unido a la molcula del MHC de clase II (segundo panel). Dentro de endosomas acidificados, los agentes patgenos y sus protenas se degradan a pptidos, los cuales no pueden unirse a molculas del MHC de clase II ocupadas por CLIP (tercer panel). La molcula parecida a clase II, HLA-DM, se une a complejos MHC de clase II:CLIP y cataliza la liberacin de CLIP y la unin de pptidos antignicos (cuarto panel).

que persistir sobre la superficie de las clulas presentadoras de antgeno durante algunos das antes de encontrar clulas T capaces de reconocerlos. La capacidad de HLA-DM para eliminar pptidos unidos de manera inestable, a veces llamada edicin de pptidos, asegura que los complejos pptido:MHC de clase II desplegados sobre la superficie de la clula presentadora de antgeno sobrevivan el tiempo suficiente para estimular a las clulas CD4 apropiadas. Una segunda molcula del MHC de clase II atpica, llamada HLA-DO (H-2O en los ratones) se produce en clulas epiteliales del timo y en clulas B. Esta molcula es un heterodmero formado por la cadena HLA-DO y la cadena HLADO (fig. 5-12). HLA-DO no est presente en la superficie celular; slo se encuentra en vesculas intracelulares y no parece unirse a pptidos. En cambio, acta como regulador negativo de HLA-DM, unindose a l e inhibiendo la liberacin de CLIP de molculas del MHC de clase II catalizada por la HLA-DM y la unin de otros pptidos a estas molculas. La expresin de la cadena HLA-DO no incrementa por el IFN-, mientras que la expresin de HLA-DM s. De este modo, durante respuestas inflamatorias en las cuales las clulas T y los linfocitos citolticos naturales (NK) producen IFN-, la expresin aumentada de HLA-DM tiene la capacidad para superar los efectos inhibidores de HLA-DO. Se desconoce por qu la capacidad presentadora de antgeno de clulas epiteliales del timo y de clulas B debe regularse de esta manera; en clulas epiteliales del timo el propsito puede ser seleccionar clulas T CD4 en desarrollo al usar un repertorio de pptidos propios diferentes de aquellos a los cuales sern expuestos como clulas T maduras. La participacin de la HLA-DM para facilitar la unin de pptidos a molculas del MHC de clase II es paralela a la de la TAP para facilitar la unin de pptidos a molculas del MHC de clase I. Por lo tanto, parece probable que los mecanismos especializados para suministrar pptidos han coevolucionado con las molculas del MHC mismas. Tambin es probable que los agentes patgenos hayan creado por evolucin estrategias para inhibir la carga de pptidos sobre molculas del MHC de clase II, de manera muy parecida al modo en que los virus han encontrado maneras de subvertir el procesamiento y la presentacin de antgenos por medio de las molculas del MHC de clase I.

5-10

La unin estable de pptidos a molculas del MHC proporciona una presentacin de antgenos ecaz en la supercie celular

Para que las molculas del MHC desempeen su funcin esencial de sealizacin de infeccin intracelular, el complejo pptido:MHC debe ser estable en la superficie de la clula. Si el complejo se disociara con demasiada facilidad, el agente

Generacin de ligandos de receptor de clula T

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patgeno en la clula infectada podra escapar a la deteccin. Adems, las molculas del MHC sobre clulas no infectadas podran captar pptidos liberados por molculas del MHC sobre clulas infectadas, y emitir falsamente seales hacia clulas T citotxicas de que una clula sana est infectada, lo que desencadenara su destruccin injustificada. La unin estrecha de pptidos a molculas del MHC hace que estos dos resultados indeseables sean poco probables. La persistencia de un complejo pptido:MHC sobre una clula puede medirse por su capacidad para estimular clulas T, mientras que el destino de las molculas del MHC mismas puede rastrearse de modo directo mediante tincin especfica. De esta manera puede mostrarse que complejos pptido:MHC especficos sobre clulas vivas se pierden de la superficie y se internalizan de nuevo como parte del recambio protenico natural a la misma velocidad que las molculas del MHC mismas, lo que indica que la unin al pptido es en esencia irreversible. Esta unin estable permite que molculas del MHC transporten con eficiencia incluso pptidos raros hacia la superficie celular, y permite el despliegue a largo plazo de estos complejos sobre la superficie de la clula infectada. Esto satisface el primero de los requisitos para la presentacin eficaz de antgeno. El segundo requerimiento es que si un pptido debe disociarse de una molcula del MHC de superficie celular, los pptidos del lquido extracelular circundante seran incapaces de unirse al sitio vaco de unin al pptido. De hecho, se ha mostrado que la eliminacin del pptido de una molcula del MHC de clase I purificada requiere la desnaturalizacin de la protena. Cuando el pptido se disocia de una molcula del MHC de clase I en la superficie de una clula viva, la molcula cambia de conformacin, la microglobulina 2 se disocia y la cadena se internaliza y se degrada con rapidez. De este modo, casi todas las molculas del MHC de clase I vacas se pierden con rapidez de la superficie celular. A pH neutro, las molculas del MHC de clase II vacas son ms estables que las del MHC de clase I desocupadas, aunque las primeras tambin se eliminan de la superficie celular. Se agregan con facilidad y la internalizacin de dichos agregados puede explicar su prdida de la superficie. Ms an, la prdida del pptido de molculas del MHC de clase II es ms probable cuando las molculas transitan a travs de endosomas acidificados como parte del proceso normal de reciclaje de la membrana celular. A pH cido, las molculas del MHC de clase II tienen la capacidad de unirse a pptidos presentes en las vesculas, pero aquellas que no logran hacerlo se degradan con rapidez. De esta manera se evita con eficacia que las molculas del MHC de clase I y las de clase II adquieran pptidos de modo directo desde el lquido extracelular circundante. Esto garantiza que las clulas T acten de manera selectiva sobre clulas infectadas o sobre clulas especializadas para la ingestin y la presentacin de agentes patgenos, mientras preservan clulas sanas circundantes.

Resumen
La caracterstica ms distintiva del reconocimiento de antgenos por parte de las clulas T es la forma del ligando reconocido por el receptor. Esto comprende un pptido derivado de un antgeno externo y unido a una molcula del MHC. Las molculas del MHC son glucoprotenas de superficie celular con un surco de unin al pptido que puede acoplarse a una amplia variedad de pptidos diferentes. La molcula del MHC se une al pptido dentro de la clula y lo lleva a la su superficie, donde una clula T puede reconocer al ligando combinado. Hay dos tipos de molculas del MHC, las de clase I y las de clase II, que adquieren pptidos en diferentes sitios intracelulares y que activan las clulas T CD8 y CD4, respectivamente. Las molculas del MHC de clase I se sintetizan en el retculo endoplsmico y adquieren sus pptidos en dicha localizacin. Los pptidos cargados en el MHC de clase I derivan de protenas degradadas en el citosol por una proteasa multicataltica, el proteasoma. Los pptidos generados por dicha molcula se transportan al retculo endoplsmico por medio de una protena heterodimrica de unin a ATP llamada TAP y despus quedan disponibles para unirse a molculas del MHC de clase I parcialmente plegadas que se mantienen atadas a la TAP. La unin a los pptidos es una parte integral del ensamblaje de molcula del MHC de clase I y debe ocurrir

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Captulo 5: Presentacin del antgeno a los linfocitos T

antes de que la molcula del MHC de clase I pueda completar su plegamiento y abandonar el retculo endoplsmico para ir a la superficie celular. El proteasoma degrada protenas citoslicas normales, lo que permite la deteccin y la eliminacin de agentes patgenos citoslicos, como los virus, por clulas CD8 especializadas para matar cualquier clula que presente pptidos externos. El proteasoma tambin puede degradar protenas que se han transportado al interior del citosol desde el sistema vesicular por medio de transporte retrgrado. Esto puede ocurrir, por ejemplo, cuando una clula dendrtica ha fagocitado clulas muertas eliminadas por un virus. Transportar antgenos vricos exgenos al citosol permite a las clulas dendrticas no infectadas procesar estos antgenos y presentarlos a clulas T CD8 indiferenciadas en el fenmeno de presentacin cruzada, que es importante para la generacin de respuestas inmunitarias eficaces. A diferencia de la carga de pptido sobre molculas del MHC de clase I, las molculas del MHC de clase II no adquieren sus ligandos peptdicos en el retculo endoplsmico debido a su asociacin temprana con la cadena invariable (Ii), que se une a su surco de unin al pptido y lo bloquea. Son dirigidas por la Ii hacia un compartimiento endosmico cido donde (en presencia de proteasas activas, en particular catepsina S, y con la ayuda de HLA-DM, una molcula parecida a MHC de clase II especializada que cataliza la carga de pptido) se libera la Ii y se unen otros pptidos. De este modo, las molculas del MHC de clase II se unen a pptidos provenientes de protenas que se degradan en endosomas. Ah pueden captar pptidos de agentes patgenos que han entrado al sistema vesicular de macrfagos, o de antgenos internalizados por clulas dendrticas inmaduras o los receptores de inmunoglobulina de clulas B. El proceso de autofagia puede transportar protenas del citosol al sistema vesicular para su presentacin por molculas del MHC de clase II. Las clulas T CD4 que reconocen complejos pptido:MHC de clase II tienen diversas actividades efectoras especializadas. Subgrupos de clulas T CD4 activan macrfagos para matar a los agentes patgenos intravesiculares que albergan, ayudan a las clulas B a secretar inmunoglobulinas contra molculas extraas y regulan respuestas inmunitarias.

El complejo principal de histocompatibilidad y sus funciones


La funcin de molculas del MHC es unirse a fragmentos peptdicos derivados de agentes patgenos y desplegarlos sobre la superficie celular para su reconocimiento por las clulas T apropiadas. Las consecuencias casi siempre son nocivas para el agente patgeno (se mata a las clulas infectadas por virus, se activan los macrfagos para que maten bacterias que viven en sus vesculas intracelulares y se activan las clulas B para que produzcan anticuerpos que eliminen agentes patgenos extracelulares o para que los neutralicen). De esta manera, hay fuerte presin selectiva a favor de cualquier agente patgeno que haya mutado de tal modo que escape a la presentacin por parte de una molcula del MHC. Dos propiedades separadas del MHC hacen difcil que los agentes patgenos evadan respuestas inmunitarias de esta manera. En primer lugar, el MHC es polignico: contiene varios genes diferentes de MHC de clase I y de MHC de clase II, de modo que cada individuo posee un grupo de molculas del MHC con diferentes rangos de especificidades de unin a pptidos. En segundo lugar, el MHC es muy polimrfico; es decir, hay mltiples variantes de cada gen dentro de la poblacin en conjunto. De hecho, los genes del MHC son los ms polimrficos conocidos. En esta seccin se describe la organizacin de los genes en el MHC y se comenta de qu manera surge la variacin en las molculas del MHC. Tambin se describe la forma en que los efectos de la poligenia y del polimorfismo sobre el rango de pptidos que pueden unirse contribuye a la capacidad del sistema inmunitario para responder a la multitud de agentes patgenos diferentes y que evolucionan con rapidez.

El complejo principal de histocompatibilidad y sus funciones

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5-11

Muchas protenas involucradas en el procesamiento y en la presentacin de antgenos son codicadas por genes dentro del complejo principal de histocompatibilidad

El complejo principal de histocompatibilidad se localiza en el cromosoma 6 en los seres humanos y en el cromosoma 17 en los ratones, y est formado por al menos 4 106 pares de bases. En los seres humanos contiene ms de 200 genes. A medida que la investigacin contina definiendo los genes ubicados dentro del MHC y alrededor del mismo, se dificulta el establecimiento de fronteras precisas para este locus, que ahora se cree que podra abarcar hasta 7 106 pares de bases. Los genes que codifican las cadenas de las molculas del MHC de clase I y las cadenas y de las molculas del MHC de clase II estn enlazados dentro del complejo; los genes que codifican la microglobulina 2 y la cadena invariable estn en diferentes cromosomas (cromosomas 5 y 15, respectivamente, en los seres humanos, y cromosomas 2 y 18 en los ratones). En la figura 5-12 se muestra la organizacin general de los genes que codifican los MHC de clases I y II en los seres humanos y en los ratones. En el hombre estos genes se llaman genes del antgeno leucocitario humano o HLA, porque se descubrieron por vez primera mediante diferencias antignicas entre leucocitos de diferentes individuos; en los ratones se conocen como genes H-2. Los genes que codifican el MHC de clase II murino en realidad se identificaron por vez primera como genes que controlaban la respuesta inmunitaria a un antgeno dado y originalmente se llamaron genes Ir (de respuesta inmunitaria). Debido a esto, los genes A y E del MHC de clase II murino a menudo se denominan I-A e I-E; sin embargo, esta terminologa no debe confundirse con la de los genes del MHC de clase I. Hay tres genes de la cadena de clase I, llamados HLA-A, -B y -C. Tambin hay tres pares de genes de las cadenas y del MHC de clase II, llamados HLA-DR,-DP y -DQ. Sin embargo, en muchas personas la agrupacin HLA-DR contiene un gen de la cadena adicional cuyo producto puede aparearse con la cadena DR. Esto significa que los tres grupos de genes pueden producir cuatro tipos de molculas del MHC de clase II. Todas las molculas de los MHC de clase I y de clase II pueden presentar pptidos a las clulas T, pero cada protena se une a un rango diferente de pptidos (vanse las secciones 3-14 y 3-15). Por lo tanto, la presencia de varios genes diferentes para cada clase de MHC significa que cualquier individuo est equipado para presentar un rango mucho ms amplio de pptidos que si slo una molcula del MHC de cada clase se expresara en la superficie celular.

Estructura gnica del MHC humano HLA


DP TAPBP B A DOA A DM B LMP/ TAP DOB DQ B A DR B B A HLA-B HLA-C HLA-A

clase II

clase III

clase I

Estructura gnica del MHC de ratn H -2


O TAPBP H2-K A A M B LMP/ TAP O B A B A E B A H-2D H-2L

clase I

clase II

clase III

clase I

Fig. 5-12. Organizacin gentica del complejo principal de histocompatibilidad (MHC) en los seres humanos y en los ratones. La organizacin de los principales genes del MHC se muestra para los seres humanos (en los cuales el MHC se llama HLA y est en el cromosoma 6) y los ratones (en quienes el MHC se denomina H-2 y se localiza en el cromosoma 17). La organizacin de los genes del MHC es similar en ambas especies. Hay agrupaciones separadas de genes del MHC de clase I (rojo) y de genes del MHC de clase II (amarillo), aunque en el ratn un gen del MHC de clase I (H-2K) parece haberse translocado en comparacin con el MHC humano, de manera que la regin de la clase I en los ratones est dividida en dos. En ambas especies hay tres genes de clase I principales, denominados HLA-A, HLA-B, y HLA-C en los seres humanos y H2-K, H2-D y H2-L en los ratones. Cada uno de estos codifica la cadena de la protena del MHC de clase I respectiva (HLA-A, HLA-B, etc). La otra subunidad de una molcula del MHC de clase I, la microglobulina 2, es codificada por un gen localizado en un cromosoma diferente (el cromosoma 15 en los seres humanos y el cromosoma 2 en los ratones). La regin de clase II incluye los genes que codifican las cadenas y (designados A y B, respectivamente, en los nombres de los genes) de las molculas del MHC de clase II HLA-DR, HLA-DP y HLA-DQ (H-2A y H-E en el ratn). Adems, los genes del transportador de pptidos TAP1:TAP2, los genes LMP que codifican subunidades de proteasoma, los genes que codifican las cadenas de DM, y DM (DMA y DMB), los genes de las cadenas y de la molcula DO (DOA y DOB, respectivamente) y el gen de la tapasina (TAPBP) tambin estn en la regin del MHC de clase II. Los llamados genes de clase III codifican otras protenas diversas con funciones en la inmunidad (fig. 5-13).

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Captulo 5: Presentacin del antgeno a los linfocitos T

En la figura 5-13 se muestra un mapa ms detallado del locus del MHC humano. Una inspeccin de este mapa muestra que muchos genes dentro de este locus participan en el procesamiento o en la presentacin de antgenos, o que tienen otras funciones relacionadas con la respuesta inmunitaria innata o adaptativa. Los dos genes TAP yacen en la regin del MHC de clase II, en estrecha relacin con los genes LMP, mientras que el gen que codifica tapasina (TAPBP), que se une tanto a TAP como a molculas vacas del MHC de clase I, yace en el borde del MHC ms cercano al centrmero (fig. 5-13). El enlace gentico de los genes del MHC de clase I (cuyos productos llevan pptidos del citosol a la superficie celular) con los genes TAP, de la tapasina y del proteasoma (LMP) (cuyos productos transportan pptidos del citosol al retculo endoplsmico) sugiere que todo el MHC se ha seleccionado durante la evolucin para el procesamiento y la presentacin de antgenos. Cuando las clulas se tratan con los interferones IFN-, - o -, hay un notorio incremento de la transcripcin de los genes de la cadena y de la microglobu-

TAP1 LMP2

MHC de clase II
TAPBP

DPB1 DPA2 DPB2 DPA1

DMA DMB DOA

LMP7 DQB2 DQB1 DRB2 DQA2 DRB1 TAP2 DOB DQB3 DQA1 DRB3

DRA DRB9

100

200

300 CYP C4B 21B

400

500

600

700

800

900

1000

(1050)

CYP C4A 21Ps


Bf C2 LTB

MHC de clase III

TNF LTA MICB MICA

(1050) 1100

1200

1300

1400

1500

1600

1700

1800

1900

2000

(2080)

MHC de clase I B

E MICC

(2080)

2200

2300

2400

2500 MICD

2600

2700

2800

2900

3000

(3100)

MHC de clase I

A G

MICE F

(3100)

3200

3300

3400

3500

3600

3700

3800

3900

4000

4100

Fig. 5-13. Mapa detallado del MHC humano. Organizacin de las regiones de las clases I, II y III del MHC humano; las distancias genticas aproximadas se dan en miles de pares de base (kbp). Casi todos los genes localizados en las regiones de las clases I y II se mencionan en el texto. Los genes adicionales indicados en la regin de clase I (p. ej., E, F y G) son genes parecidos a clase I y codifican molculas de clase IB; los genes de clase II adicionales son seudogenes. En la regin de clase III se muestran los genes que codifican las protenas del complemento C4 (dos genes, mostrados como C4A y C4B), C2 y factor B (que se muestra como Bf) y genes que codifican las citocinas factor de necrosis tumoral- (TNF) y linfotoxina (LTA, LTB). Estrechamente enlazado a los genes

C4 est el gen de la 21-hidroxilasa (que se muestra como CYP 21B), una enzima involucrada en la biosntesis de esteroides. En esta figura, los genes que se muestran en gris oscuro y cuyos nombres estn en letras cursivas son seudogenes. Los genes estn agrupados por colores; aquellos del MHC de clase I se muestran en rojo, excepto los genes MIC (que se muestran en azul); stos son distintos de los otros genes parecidos a clase I y estn bajo un control transcripcional diferente. Los genes del MHC de clase II se muestran en amarillo. Los genes ubicados en la regin MHC que tienen funciones inmunitarias pero no se relacionan con los del MHC de clase I ni con los del de clase II se muestran en prpura.

El complejo principal de histocompatibilidad y sus funciones

199

lina 2 del MHC de clase I, y de los genes del proteasoma, de la tapasina y TAP. Los interferones se producen en etapas tempranas de infecciones vricas como parte de la respuesta inmunitaria innata, como se describe en el captulo 2, de modo que este efecto aumenta la capacidad de las clulas para procesar las protenas vricas y presentar los pptidos derivados de virus resultantes en la superficie celular. Esto ayuda a activar las clulas T apropiadas e iniciar la respuesta inmunitaria adaptativa en respuesta al virus. La regulacin coordinada de los genes que codifican estos componentes puede facilitarse por el enlace de muchos de ellos en el MHC. Los genes HLA-DM, que codifican para la molcula DM, cuya funcin es catalizar la unin de pptidos a molculas del MHC de clase II (vase la seccin 5-9), tienen una clara relacin con los genes del MHC de clase II. Los genes DOA y DOB, que codifican las subunidades DO y DO de la molcula DO, un regulador negativo de DM, tambin tienen una relacin bien establecida con los genes del MHC de clase II. Los genes clsicos de este ltimo complejo, junto con el gen de la cadena invariable y los genes que codifican DM, DM y DO, pero no DO, estn regulados de manera coordinada. Esta regulacin distintiva de los genes del MHC de clase II por el IFN-, que es sintetizado por clulas T del tipo TH1 activadas, y por las clulas CD8 y por los NK activados, le permite a las clulas T que muestran respuesta a infecciones bacterianas para incrementar la expresin de las molculas relacionadas con el procesamiento y la presentacin de antgenos intravesiculares. La expresin de todas estas molculas es inducida por el IFN- (no por los IFN- o -), mediante la produccin de un activador transcripcional conocido como transactivador del MHC de clase II (CIITA). La falta de CIITA causa inmunodeficiencia grave debido a la produccin nula de molculas del MHC de clase II. Por ltimo, el locus del MHC contiene muchos genes llamados no clsicos del MHC, cuya estructura se asemeja a la de los genes del MHC de clase I. stos, a menudo llamados genes del MHC de clase Ib, se retoman en la seccin 5-18, luego de completar la exposicin sobre los genes clsicos del MHC.

Deciencia del MHC de clase II

5-12

Los productos protenicos de los genes del MHC de clase I y del MHC de clase II son muy polimrcos

Debido a la poligenia del MHC, cada persona expresa al menos tres molculas del MHC de clase I presentadoras de antgeno diferentes y tres (o a veces cuatro) molculas del MHC de clase II sobre sus clulas (seccin 5-11). De hecho, el nmero de diferentes molculas del MHC expresado sobre las clulas de la mayora de las personas es mayor debido al polimorfismo extremo del MHC (fig. 5-14) y a la expresin codominante de productos de genes del MHC.

Fig. 5-14. Los genes del MHC humano son muy polimrficos. Con la notable excepcin del locus DR, que es monomrfico desde el punto de vista funcional, cada locus tiene muchos alelos. En esta figura las alturas de las barras muestran el nmero de diferentes alelos de HLA asignados por el Comit de nomenclatura del sistema HLA de la OMS (WHO Nomenclature Committee for Factors of the HLA System) en enero de 2006.

MHC de clase II

MHC de clase I
728

MHC de clase Ib

503 414

210 120 68 23 DPB DPA DQB 32 DQA DRB 3 DRA 8 B C A E 23 G 20 F MICA 60 25 MIKB

200

Captulo 5: Presentacin del antgeno a los linfocitos T

Fig. 5-15. La expresin de los alelos del MHC es codominante. El MHC es tan polimrfico que en la mayora de los individuos tiende a ser heterocigtica en cada locus. Los alelos se expresan a partir de ambos haplotipos del MHC en cualquier individuo y los productos de todos los alelos se encuentran sobre todas las clulas que los expresan. En cualquier apareamiento, pueden encontrarse cuatro posibles combinaciones de haplotipos en la descendencia; de este modo, los hermanos tambin tienen probabilidad de diferir en los alelos del MHC que expresan; hay una probabilidad de uno en cuatro de que un individuo comparta ambos haplotipos con un hermano. Una consecuencia de esto es la dificultad para encontrar donadores idneos para los trasplantes de tejidos.

Fig. 5-16. El polimorfismo y la poligenia contribuyen con la diversidad de las molculas del MHC expresadas por un individuo. El gran polimorfismo de los loci del MHC clsicos asegura una diversidad en la expresin gnica del MHC en la poblacin en conjunto. No obstante, sin importar qu tan polimrfico sea un gen, ningn individuo puede expresar ms de dos alelos en un solo locus gnico. La poligenia, la presencia de varios genes diferentes, relacionados y con funciones similares, garantiza que cada individuo produzca varias molculas del MHC diferentes. El polimorfismo y la poligenia se combinan para producir la diversidad de las molculas del MHC que se observan dentro de un individuo y en la poblacin total.

El trmino polimorfismo viene de las palabras griegas poli, que quiere decir mucho, y morfo, que significa forma o estructura. Como se usa aqu, expresa variacin en un locus gnico entre especies y por lo tanto en su producto protenico; los genes variantes que pueden ocupar el locus se llaman alelos. Hay ms de 400 alelos de algunos genes humanos de los MHC de clases I y II, mucho ms que el nmero de alelos de otros genes encontrados dentro del locus MHC (fig. 5-14). Cada alelo del MHC de clase I y del MHC de clase II es relativamente frecuente en la poblacin, de modo que slo hay una pequea probabilidad de que los loci del MHC correspondientes en ambos cromosomas homlogos de un individuo tengan el mismo alelo; la mayora de los individuos sern heterocigticos en los loci del MHC. La combinacin particular de alelos del MHC que se encuentra en un cromosoma slo se conoce como haplotipo del MHC. La expresin de los alelos del MHC es codominante; los productos protenicos de los dos alelos en un locus se expresan en la clula y ambos productos gnicos tienen la capacidad de presentar antgenos a las clulas T (fig. 5-15). De esta manera, el polimorfismo extenso en cada locus tiene el potencial de duplicar el nmero de molculas del MHC diferentes expresadas en un individuo y de incrementar la diversidad ya disponible por medio de poligenia (fig. 5-16).

Polimorsmo

Poligenia

Polimorsmo y poligenia

El complejo principal de histocompatibilidad y sus funciones

201

Por consiguiente, con tres genes del MHC de clase I y cuatro posibles grupos de genes del MHC de clase II en cada cromosoma 6, una persona de forma habitual expresa seis molculas del MHC de clase I diferentes y ocho molculas del MHC de clase II distintas sobre sus clulas. Para los genes del MHC de clase II, el nmero de molculas del MHC diferentes puede incrementarse an ms mediante la combinacin de cadenas y codificadas por diferentes cromosomas (de manera que dos cadenas y dos cadenas pueden generar cuatro protenas diferentes, por ejemplo). En los ratones se ha demostrado que no todas las combinaciones de cadenas y pueden formar dmeros estables y por lo tanto, en la prctica, el nmero exacto de diferentes molculas del MHC de clase II expresado depende de cules alelos estn presentes en cada cromosoma. Todas las protenas de los MHC de clase I y de clase II son polimrficas en mayor o menor grado, con la excepcin de la cadena DR y su homlogo en ratones, E. Las secuencias de estas cadenas no varan entre diferentes individuos y se dice que son monomrficas. Esto podra indicar una limitacin funcional que evita la variacin de las protenas DR y E, pero no se ha encontrado una funcin especial con estas caractersticas. Muchos ratones, tanto domsticos como salvajes, tienen una mutacin en el gen E que evita la sntesis de la protena E. Por lo tanto carecen de molculas H-2E de superficie celular, lo cual indica que si las molculas H2-E tienen una funcin especial, es poco probable que sea esencial. Las evidencias sugieren que el MHC surgi despus de la divergencia evolutiva de los agnatos (vertebrados sin mandbula) por medio de mltiples duplicaciones de un gen ancestral desconocido para producir genes de clase I y de clase II, que han experimentado una mayor divergencia gentica. Los polimorfismos del MHC en genes del MHC individuales parecen tambin haber sido enrgicamente seleccionados por presiones evolutivas. Varios mecanismos genticos contribuyen con la generacin de nuevos alelos. Algunos de los cuales surgen por mutaciones puntuales y otros por conversin gnica, un proceso en el cual una secuencia de un gen es reemplazada, en parte, por secuencias de un gen diferente (fig. 5-17). Los efectos de la presin selectiva a favor del polimorfismo pueden observarse con claridad en el patrn de mutaciones puntuales en los genes del MHC. stas pueden clasificarse como sustituciones, que cambian un aminocido, o como permutas silenciosas, que simplemente cambian el codn pero dejan igual el aminocido. Las sustituciones ocurren dentro del MHC con mayor frecuencia que las permutas silenciosas de lo que se esperara, lo que proporciona evidencia de que el polimorfismo se ha seleccionado de modo activo en la evolucin del MHC. En las secciones que siguen se describe la manera en que los polimorfismos del MHC benefician a la respuesta inmunitaria y el modo en que la seleccin impulsada por agentes patgenos puede explicar el gran nmero de alelos del MHC.

El gen ancestral del MHC experimenta duplicacin y divergencia gnicas

Mltiples genes del MHC

Conversin gnica entre cromosomas mal alineados durante la meiosis

Cromosoma separado despus de la meiosis

5-13

El polimorsmo del MHC afecta el reconocimiento de antgenos por las clulas T al inuir sobre la unin a pptidos y sobre los contactos entre el receptor de clula T y la molcula del MHC

Los productos de alelos individuales del MHC pueden diferir uno de otro hasta por 20 aminocidos, lo que hace que cada protena variante sea muy distinta. La mayora de las diferencias se localizan en superficies expuestas del dominio extracelular ms lejano desde la membrana, y en el surco de unin al pptido en pa