Fundamentos de Inmunologa Linfocitos T CD4+ Carlos A. Parra-Lpez MD. Ph.

Inmunologa Celular La respuesta inmune celular esta mediada por la accin de los Linfocitos T (LT) (generados en el Timo) por lo cual se llama respuesta inmune celular Timo Dependiente. Una vez activados los Linfocitos T activan otras clulas efectoras. La respuesta inmune celular desde el punto de vista evolutivo representa el nivel mas especializado de la respuesta inmune. El refinamiento de esta respuesta esta determinado por una serie de factores propios de ella que son caractersticos: 1. 2. 3. 4. 5. 6. Reconocimiento del antgeno altamente especifico. Selectividad o capacidad para discriminar entre lo propio y lo extrao. Respuesta altamente especializada Alto grado de cooperatividad entre muchas clulas Auto-regulacin Memoria inmunolgica (generacin de Linfocitos T de Memoria). Reconocimiento Antgeno por LT. del

Los LT alfa/beta hacen parte fundamental del SISTEMA INMUNE ADAPTATIVO. Estos LT son de dos tipos: LT- CD4 y LT-CD8 debido a que expresan los co-receptores de las molculas HLA (las molculas CD4 y CD8 respectivamente) los cuales son indispensables para iniciar la activacin de los LT. Los LT solo se estimulan luego de que son estimulados por las clulas presentadoras del antgeno (APCs) cuando estas les presentan PEPTIDOS en el contexto de Inmunologia de Rojas, 14 Ed. Cap 9. molculas MHC clase I o Clase II. El receptor para el antgeno de los LT (tambin llamado TCR), es un conjunto de molculas sobre la superficie del LT, que es nico en cada LT y es el encargado de reconocer el complejo MHC-pptido sobre la APC.
a

Hay otros LT denominados LT-NKT y LT-Gama Delta cuya funcin crea una interfase entre el SISTEMA INMUNE INNATO y el SISTEMA INMUNE ADAPTATIVO. Estos LT tambin poseen TCRs pero estos NO reconocen PEPTIDOS como los LT alfa/beta.

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Los LT-NKT reconocen GLIPCO-LIPIDOS presentados sobre la APC en el contexto de molculas similares a molculas MHC clase I llamadas Molculas CD1. Los LT -Gama Delta reconocen molculas pequeas como alquil- aminas y nucletidos las cuales son presentadas por molculas parecidas a molculas MHC clase I (como MIC-A y MIC-B) o por protenas de la familia de Choque Trmico (como HSP-70). Eventualmente el TCR de estos LT-Gama/Delta puede reconocer antigenos de manera directa (es decir sin que sea presentado por molculas presentadoras del antgeno sobre las APCs. Este reconocimiento de antigenos por el TCR de LTGama/Delta es de alguna forma similar al reconocimiento de antigenos por las Inmunoglobulinas. Receptor para el antgeno de los LT (TCR). Durante la maduracin, los LT adquieren un receptor para el reconocimiento del antgeno compuesto por dos cadenas (Alfa/Beta o Gama/Delta) muy polimorfitas. Las cadenas Beta y Delta estan conformadas por varios dominios codificados por una serie de mini-genes denominados dominio variable (V), de diversidad (D), de unin (J) y algunos constantes (C) (organizacin VDJC). Las cadenas Alfa y Gama tienen la misma organizacin pero carece de dominios de Diversidad (organizacin (VJC nicamente). En el genoma humano existen ms de 250 fragmentos gnicos (VDJ) los cuales sufren precombinacin somtica durante el desarrollo de los LT con el fin de producir TCR con cadenas Beta (VDJ) y Alfa (VJ) con una elevada diversidad (alrededor de 10 millones distintos).

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Los genes que codifican para las cadenas del TCR estn distribuidos en cuatro locus, los TCRA y TCRD en el cromosoma 14 y los TCRB y el TCRG del cromosoma 7. Por efecto de precombinacin somtica de los genes estos locus, por el efecto de nucleadas y ligasas y la adicin de nucletidos por la enzima deoxi-rribo-nucleotidil-transferasa y la accin de exonucleasas, se genera la gran variedad de TCR. El TCR es un receptor de membrana sin segmentos intra-citoplasmticos que solo reconoce el antgeno cuando es presentado en el contexto de molculas MHC-clase I o MHC-clase II sobre la superficie de una clula presentadora del antgeno.. Para trasmitir la seal de activacin el TCR se asocia al complejo CD3 que esta integrado por 3 cadenas diferentes: gamma, delta y epsilon (), agrupadas como heterodimeros , . Adicionalmente al CD3 el TCR esta asociado a la cadena zeta () cuya porcin intracitoplasmatica es responsable de transmitir la seal al interior de la clula luego que el TCR ha sido estimulado por un complejo MHCpptido. Tanto el complejo CD3 como la cadena zeta ( ) tienen motivos de activacin dependientes de tirosina (ITAMs), que al ser fosforilados inician la activacin de los LT. Activacin de los LT Para que el LT sea activado se necesitan tres seales: Seal 1: Estimulacin del TCR por un complejo Pptido-MHC. Seal 2: Seal de co estimulacin generada desde la APC a travs de molculas co-estimulatorias como B7-1/B7-2 (CD80/CD/86), y que estimulan la molecula CD28 sobre el LT. Seal 3: Generacin de citoquinas en el micro-ambiente en donde se lleva a cabo el contacto de la APC con el LT.

Sinapsis inmunolgica Es un complejo multi-molecular altamente organizado y dinmico que permite flujo bidireccional de mensajes entre el LT y la APC que le presenta en antgeno. Este complejo esta compuesto de varias zonas: Zona Central de Reconocimiento: conformada por TCR-CD3-Antgeno-MHC I/II. CD4/CD8, CD28-CD80/86, la forman las molculas de adhesin que favorecen la adherencia del LT y la APC como LFA-1-ICAM-1, CD2-LFA3. Finalmente en la periferia de la sinapsis se

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encuentran las molculas CD45 y CD43 que por su gran tamao son excluidas hacia la periferia.

Sinapsis inmunolgica (tomado de la Inmunologia de Rojas). Secuencia de eventos de la transmisin de la seal de la sinapsis al interior del LT 1. Reconocimiento del Antgeno por parte del TCR. 2. La fosfatasa CD45 retira el fosfato de una de las tirosinas inhibidoras de las kinasas Fyn y Lck que se encuentran asociadas al complejo CD3 y a los coreceptores (CD4/CD8). 3. Auto-fosforilacion de ITAMs 4. Reclutamiento al sitio y activacin de ZAP-70 con lo cual se activan varias cascadas de sealizacin. 5. Una primera cascada se inicia con la activacin de la fosfolipasa C gama 1 (PLC 1). Esta se encarga de convertir el fosfatidil inositol di-fosfato PIP2) en inositol tri-fosfato (IP3) y produccin de di-acil glicerol (DAG). El IP3 se une a receptores de las cisternas del retculo endoplasmico donde induce la liberacin de depsitos intracelulares de Calcio hacia el citosol de la clula. El aumento de Calcio estimula la enzima Calmodulina que es una kinasa. 6. La Calmodulina activada activa a su vez a Calcineurina, una Fosfatasa que defosforila el factor de trascripcin nuclear NFAT , el cual una vez defosforilado ingresa al ncleo en donde estimula la transcripcion de genes como la IL-2 (Factor de divisin y replicacin de los LT). 7. Una segunda cascada iniciada con la activacin de ZAP-70 es la fosforilacion de LAT la cual mediante hidrlisis de GTP activa la protena Ras conlleva a la activacin de MAP kinasas (kinasas activadas por mitgenos) encargadas de activar el factor de trascripcin AP-1 compuesto por las protenas d-fos y c-jun el cual va al ncleo e inicia la transcripcion de genes. 8. La tercera cascada iniciada por ZAP-70 se inicia con la activacin por DAG de la protena kinasa C. Esta kinasa fosforila al inhibidor del factor nuclear Kappa/Betta (NF-kB) lo cual permite su ingreso al ncleo.

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9. La traslocacin al ncleo de NFAT, AP1 y NFkB dan lugar al inicio de la transcripcin de multiples genes entre los cuales esta el de la Interleukina-2 (IL2) y genes anti-apoptticos de la familia del Bcl-2. 10. Un potente agente inmuno-supresor utilizado para contrarrestar fenmenos autoinmunes es la Ciclosporina A, la cual acta inhibiendo la calcineurina, que como se menciono es importante para la activacin del factor NFAT.

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PARTE I

Bases Moleculares de la Diferenciacin de la Respuesta Inmune Celular de Linfocito TCD4+ Ayudadores en dos Sub-Tipos: (T Helper: Th-1 y Th-2 )

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Bases Moleculares de la Respuesta y de la Diferenciacin del Linfocito T CD4+ Ayudador (T Helper: Th-1 y Th-2) INTRODUCCIN: Importante en la adquisicin de la inmunidad adquirida Requiere la proliferacin y diferenciacin de linfocitos T CD4+ vrgenes (naive) Requiere la integracin : Ag / APC / LT CD4+ Regulacin de dos sistemas de inmunidad: a- Th-1 regula la induccin de RESPUESTA INMUNE CELULAR. b- Th-2 regula la induccin de la RESPUESTA INMUNE HUMORAL. PROLIFERACIN DEL LT: IL-2 factor fundamental en la proliferacin e inicio de la diferenciacin El reconocimiento del Ag:MHC y la co-estimulacin inducen la secrecin de IL2 y la expresin del receptor de IL-2 de alta afinidad

Diferenciacion de la Respuesta de Linfocitos T (Respuesta Inmune Adaptativa)

IL-2

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CARACTERSTICAS DE LA RESPUESTA DEL LT CD4+ del tipo-1 (T- helper-1 o Th-1)

RESPUESTA Th-1
IFN-
IL-12

Los LT que no han experimentado contacto con el antgeno (LT- vrgenes o naive) se diferencian hacia Th-1 cuando la Clula Presentadora del Antgeno (p. ej. Macrfago, Clula Dendrtica) presenta el antgeno a estos linfocitos en la presencia de IL-12. Adems de la funcin de la IL-12 en la polarizacin de la respuesta de LT CD4+ hacia el fenotipo Th-1 la IL-12 tiene otras funciones como: 1- Activacin de las funciones microbicidas del Macrfago. 2- Activacin de las funciones citolticas de clulas NK. 3- Activacin de las funciones citolticas de Linfocitos T CD8+ citotxicos. Otras Interleuquinas producidas por las clulas presentadoras del antgeno que FAVORECEN la diferenciacin Th-1 son: IL-18 e IL-1.

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La respuesta del linfocito T- CD4+ del tipo-1 o Th-1 se caracteriza por la produccin de IFN por estos linfocitos. El IFN es la Interleuquina mas importante en la diferenciacin de LT CD4+ hacia el fenotipo Th-1. El IFN producido por los LT CD4+ de tipo-1 (Th-1) favorecen una respuesta de tipo CELULAR caracterizada por: 1- Activacin de las funciones citolticas de las clulas NK. 2- Efecto antiviral en clulas infectadas por virus. 3- Induce la activacin del Macrfago (Aumenta la produccin de NO). 4- En los Linfocitos B induce la produccin de anticuerpos opsonisantes: IgG1 e IgG3 los cuales mejoran la FAGOCITOSIS y la funcin microbicida de los Macrfagos. 5- Aumenta la funcin citltica de Linfocitos T- CD8+ citotxicos contra clulas infectadas con virus o clulas tumorales. 6- Aumenta la expresin de molculas MHC clase I y clase II por las Clulas Procesadoras y Presentadoras del antgeno (Clulas Dendrticas, Macrfagos, Linfocitos B). La sealizacin del receptor de la IL-12 (la Interleuquina importante para la diferenciacin Th-1) es mediada por el STAT-4. La respuesta de LT-CD4+ Th-1 esta relacionada con la buena respuesta (resistencia) a las infecciones por patgenos INTRACELULARES del Macrfago (T. gondii; T. cruzy; M. tuberculosis; Leishmania spp; Salmonella spp; Shiguella spp etc). El IFN- producido por los LT-CD4+ Th-1 inhibe la respuesta de LT-CD4+ del tipo-2 o Th-2. Alteraciones en el silenciamiento de la respuesta de LT-CD4+ Th-1 puede generar procesos auto-inmunes (p. ej.: Artritis reumatoidea, lupus, esclerosis mltiple, diabetes tipo I).

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CARACTERSTICAS DE LA RESPUESTA DEL LT CD4+ del tipo-2 (T- helper-2 o Th-2):

IL-4
RESPUESTA Th-2

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Los LT que no han experimentado contacto con el antgeno (LT- vrgenes) se diferencian hacia Th-2 cuando la Clula Presentadora del Antgeno (Macrfago, Clula Dendrtica) presenta el antgeno a estos linfocitos en la presencia de IL-6 (posiblemente???). Interleuquinas producidas durante la respuesta de LT CD4+ tipo-2 o Th-2 son: IL-4, IL-13, IL-10, IL-5, IL-6. La respuesta del linfocito T- CD4+ del tipo-2 o Th-2 se caracteriza por la produccin de IL-4 por estos linfocitos. La Interleuquina mas importante en la diferenciacin de LT CD4+ hacia el fenotipo Th-2 es la IL-4. La IL-13 tiene funciones idnticas a las de la IL-4. La IL-10 producida por LT-CD4+ inhibe la activacin del Macrfago inducida en esta clula por el IFN. La IL-4 producida por los LT CD4+ de tipo-2 (Th-2) favorecen una respuesta de tipo HUMORAL (produccin de anticuerpos) caracterizada por: 1- Produccin por los Linfocitos B de anticuerpos tipo Ig-E e IgG4. 2- Anticuerpos neutralizantes de virus y bacterias. 3- La produccin de IgE que promueve activa degranulacin de mastocitos. 4- La produccin de IgE que promueve activacin de Eosinfilos. La sealizacin del receptor de la IL-4 (la citoquina importante para la diferenciacin Th-2) es mediada por el STAT-6. La respuesta de LT-CD4+ Th-2 esta relacionada con la buena respuesta (resistencia) a las infecciones por patgenos EXTRACELULARES como los parsitos intestinales (tenias, tricocefalos, oxiuros etc). La respuesta de LT-CD4+ Th-2 esta relacionada con una respuesta deficiente (susceptibilidad) a las infecciones por patgenos INTRACELULARES (T. gondii;T. cruzy; M. tuberculosis; Leishmania spp; Salmonella; Shiguella etc). La IL-4 producida por los LT-CD4+ Th-2 inhibe la respuesta de LT-CD4 del tipo-1 o Th1.

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Alteraciones en el silenciamiento de la respuesta de LT-CD4+ Th-2 puede generar proceso alrgicos (Ej.: Asma; Rinitis Alrgica, Atopia etc.).

OTRAS CITOQUINAS TH2

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RESUMEN: DIFERENCIACION DEL LT AYUDADOR Th-1

IL-12 Th-2 IL-4

Cell Biology (2000).10:545

CARACTERISTICAS DE LARESPUESTA DEL LT CD4+ CD25+ del tipo-supresor (clulas T-CD4+ supresoras): Son linfocitos que expresan constitutivamente la cadena alfa del receptor de IL-2 (CD25). Modulan la actividad de linfocitos T-CD4+ especialmente la de LT-CD4 Th-1. Su actividad de supresin es debida a la secrecin de Interleuquinas supresoras de la respuesta inmune como: 1. TGF-Beta 2. IL-10.

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Induccin de tolerancia de Linfocitos T en la periferia por: Linfocitos T CD4 reguladores. Linfocitos T CD25+ / CD4+ (TGF-e IL-10) supresores

Th0
INMUNIDAD CELULAR autoinmunidad Hipersensibilidad retardada ( DTH) Citotoxicidad mediada por Clulas T. Rechazo injerto

Th1

Th2

INMUNIDAD HUMORAL autoinmunidad mediada por anticuerpos. Alergias. TOLERANCIA

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