P. 1
problemes1

problemes1

|Views: 0|Likes:
Published by Joana2290

More info:

Categories:Types, School Work
Published by: Joana2290 on Apr 02, 2012
Copyright:Attribution Non-commercial

Availability:

Read on Scribd mobile: iPhone, iPad and Android.
download as PDF, TXT or read online from Scribd
See more
See less

04/02/2012

pdf

text

original

S

e
m
i
n
a
r
i
s
SEMINARIS TIPUS 2.- Cinètica enzimàtica
1.-
20 µmol NO
2

5 min
a) v =
1
0,1 ml E
= 40
U.I.
ml E
b) v = 40
1 ml E
0,5 mg proteïna
= 80
U.I.
ml E
U.I.
mg proteïna
µmol NO
2

min⋅ml E
c) v = 40
1 min
60 s
100 ml
1 mol NO
2

10
6
µmol NO
2

= 6,67 ⋅10
−5
kat (mol/s)
µmol NO
2

min⋅mg proteïna
d) v = 80
1000 mg
1 g
1 mol NO
2

10
6
µmol NO
2

mol NO
2

min⋅molE
e) v = 4.000 ≡ 4.000
molècules NO
2

min⋅molècula E
1 molècules E
2 centres actius
= 2.000
= 4.000
50.000 g proteïna
1 mol E
mol NO
2

min⋅molE
molècula NO
2

min⋅centre actiu
1 min⋅molècula E
4000 molècules NO
2

60 s
1 min
s⋅molècula E
molècula NO
2

f) t = = 0,015
Es necessiten 0,015 s perque 1 molècula d’enzim transformi 1 molècula de substrat a producte.
(o perque 1 mol d’enzim transformi 1 mol de substrat)
1 min
60 s
= 66,67
mol NO
2

s⋅molE
1 min
60 s
= 33,33
molècula NO
2

s⋅centre actiu
S
e
m
i
n
a
r
i
s
2.-
µmol substrat
min
25,2
50 µl = 25,2 U.I. 42
U.I.
mg proteïna
1 min
60 s
12 mg proteïna
ml
3.-
a) Per a calcular el número de recanvi, l’enzim ha d’estar el més homogeni possible
Extracte cru: v = 0,4
U.I.
mg proteïna
k
cat
= 65 = 2.600 min
−1
µmol substrat
min⋅mg E
1 mol substrat
10
6
µmol substrat
1 ml
1000 µl
= 0,42 µkat = 4,2⋅10
−7
kat
Mostra pura: v = 65
U.I.
mg proteïna
S’utilitzarà la
preparació homogènea
b) k
cat
(Número de recanvi) =
molècules de substrat trasformades
temps
1000 mg E
1 g E
40.000 g E
1 mol E
(Mostra pura)
1 min
60 s
= 43,33 seg
−1
1
43,33 seg
−1
= 0,023 seg t = FALS: 0,023 seg < 0,1 seg
= 420⋅10
−9
kat = 420 nkat
c)
S
e
m
i
n
a
r
i
s
4.-
[Fumarat] (mM)
0,8
1,3
2,0
3,3
5,0
10,0
v (mmol producte/l⋅min)
1,43
1,97
2,50
3,10
3,60
4,08
1,250
0,769
0,500
0,303
0,200
0,100
(mM
−1
)
1
[Fumarat ]
1
v
(l⋅min/mmol producte)
0,699
0,508
0,400
0,323
0,278
0,245
[E] = 2⋅10
−6
M
HOOC−CH=CH−COOH + H
2
O HOOC−CHOH−CH
2
−COOH
FUMARAT MALAT
v =
K
M
+ [S]
V
max
[S]
=
K
M
V
max
1
[S]
1
V
max
+
1
v
= 0,397
1
[S]
+ 0,202
1
v
V
max
=
1
0,202
K
m
= 0,397⋅V
max
= 0,397 ⋅ 4,95 = 1,96 mM
= 4,95 mmol producte/ l⋅min
V
max
= k
cat
[E]
T = 2,47⋅10
3
min
−1
k
cat
=
V
max
[E]
T
=
4,95 mmol/l min
2⋅10
−6
mol/l
1 mol
1000 mmol
r = 0,99991
0,0 0,2 0,4 0,6 0,8 1,0 1,2 1,4
0,0
0,1
0,2
0,3
0,4
0,5
0,6
0,7
1
/
v
1/[Fumarat]
= 2470 min
–1
= 617,5 min
−1
centre
–1
k
cat
=
Centre actiu 4 centres
2470 min
–1
S
e
m
i
n
a
r
i
s
5.-
[Substrat] (µM)
17,4
26,7
52,6
166,6
400,0
∆D.O. als 5 min
0,073
0,085
0,100
0,114
0,117
6-FOSFOGLUCONAT + NADP
+
RIBULOSA-5-P + CO
2
+ NADPH + H
+
MÉS AFINITAT K
m
= 11,44 µM
MENYS VELOCITAT V
max
= 3,90 10
−3
µmol/ml min
pH = 7,6 pH = 9,0
0,0337
0,0470
0,0750
0,1280
0,1670
D.O. = ε [NADH] l
v =
∆ [NADH]
∆ t
l = 1 cm
ε = 6,22 ml⋅cm
−1
⋅µmol
−1
=
∆ D.O.
ε l ∆ t
v =
∆ D.O.
6,22 ml⋅cm
−1
⋅µmol
−1
⋅ 1 cm ⋅ 5 min
[Substrat] (µM)
17,4
26,7
52,6
166,6
400,0
v (µmol/ml⋅min)
0,0575
0,0374
0,0190
0,0060
0,0025
(µM
−1
)
1
[Substrat]
1
v
(ml⋅min/µmol)
2,35 10
−3
2,73 10
−3
3,21 10
−3
3,67 10
−3
3,76 10
−3
pH = 7,6 pH = 9,0
1,08 10
−3
1,51 10
−3
2,41 10
−3
4,12 10
−3
5,37 10
−3
425,5
366,3
311,5
272,5
266,0
pH = 7,6 pH = 9,0
925,9
662,2
414,9
242,7
186,2
pH = 7,6
MENYS AFINITAT K
m
= 84,51 µM
MÉS VELOCITAT V
max
= 6,31 10
−3
µmol/ml min
pH = 9,0
pH = 7,6
pH = 9,0
Més afinitat a pH 7,6
= 13392,21
1
[S]
+ 158,47
1
v
r = 0,99992
= 2934,02
1
[S]
+ 256,51
1
v
r = 0,9998
V
max
=
1
256,51
K
m
= 2934,02⋅V
max
= 11,44 µM
= 3,90⋅10
−3
µmol/ml⋅min
V
max
=
1
158,47
K
m
= 13392,21⋅V
max
= 84,51 µM
= 6,31⋅10
−3
µmol/ml⋅min
pH = 9,0
pH = 7,6
0,00 0,01 0,02 0,03 0,04 0,05 0,06
0
200
400
600
800
1000
1
/
v
1/[6-P-gluconat]
= 0,34 10
–3
V
max
K
m
= 0,075 10
–3
V
max
K
m
(V
max
/K
m
)
pH=7,6
= 4,53
(V
max
/K
m
)
pH=9,0
L’enzim és 4,53 vegades més eficaç a pH 7,6 que a pH 9,0

You're Reading a Free Preview

Download
scribd
/*********** DO NOT ALTER ANYTHING BELOW THIS LINE ! ************/ var s_code=s.t();if(s_code)document.write(s_code)//-->