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Universidad Nacional San Luís Gonzaga de Ica Facultad de Medicina Humana “Daniel Alcides Carrión”

CONTENIDO

A. PLASMIDOS

I.

Definición…………………………………………………………………………………………… 03

II. Clasificación………………………………………………………………………………………. 06 III. Estructura de un plásmido………………………………………………………………. 06 IV. Mecanismos de transferencia genética……………………………..……………. 06 V. Usos terapéuticos ……………………………………………………….……………………. 06

B. TRANSPOSONES

I. Definición ………………………………………………………………..……………………. II. Clasificación ………………………………………………………………………...………. III. Estructura de un transposón ………………………………………………………. IV. Tipos de transposones bacterianos en función de su estructura .. V. Aplicaciones ………………………………………………………………………………….

06 06 06 06 06

SEMINARIO DE MICROBIOLOGIA

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INTRODUCCION

SEMINARIO DE MICROBIOLOGIA

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que en el caso del ADN son Adenina (A). que se enlazan entre si conformando una doble hélice. poseen además ADN extra cromosómico. En términos bioquímicos. Muchas bacterias. denominado ADN plasmídico. que portan información génica para una variedad de funciones no esenciales para la célula en condiciones normales de crecimiento. la composición y estructura de los ácidos nucleicos bacterianos. Citocina (C) y Guanina (G). a la que podemos referirnos como “cromosoma bacteriano”. De esta forma. Los enlaces entre las dos hebras de ADN están dados por puentes de hidrógeno entre las purinas de una cadena con las pirimidinas de la otra. De esta manera. circular y covalentemente cerrado. tendrá una estructura primaria determinada por la secuencia de las bases que la componen. está dada por sus bases nitrogenadas._______________________________________________________________________ A. A esto se le llama complementariedad de bases. Brevemente. es decir que la A SEMINARIO DE MICROBIOLOGIA 3 . DEFINICION Universidad Nacional San Luís Gonzaga de Ica Facultad de Medicina Humana “Daniel Alcides Carrión” Toda la información genética esencial para la vida de la célula bacteriana. la A forma dos puentes de hidrógeno con la T. una cadena o hebra de ácido nucleico. La variación entre los distintos nucleótidos que conforman la cadena de ácido nucleico. también circular cerrado. A y G se denominan bases púricas o purinas. Timina (T). que conforman un esqueleto de azúcares y fosfatos que es constante a lo largo de toda la macromolécula. PLASMIDOS I. por estar contenido en estructuras llamadas “plásmidos”. El ADN como macromolécula. y en el caso del ARN en vez de T se encuentra Uracilo (U). mientras que la C forma 3 puentes de hidrógeno con la G. está contenida en una única molécula de ADN de doble cadena. es la misma que para cualquier célula. y C se denominan bases pirimidínicas o pirimidinas. está compuesto por 2 cadenas nucleotídicas o hebras antiparalelas. U. conviene recordar que los ácidos nucleídos son macromoléculas compuestas de nucleótidos unidos en forma covalente por medio de enlaces fosfodiester entre los carbonos de las posiciones 3´ y 5´ de dos residuos de azúcares adyacentes. mientras que T.

Este es el caso de la producción de beta lactamasas por cepas Neisseria gonorrhoeae. Los plásmidos. Como ejemplo. podemos mencionar el caso de la producción de la toxina tetánica. mientras que los más pequeños pueden estar en hasta 100 copias por célula (plásmidos multicopia). se encuentran en una o unas pocas copias.2 millones de pb o lo que es lo mismo 4. Staphylococcus aureus o Haemophylus influenzae. muchas bacterias poseen información génica contenida en moléculas de ADN distintas a las del cromosoma bacteriano. Cada plásmido contiene al menos una secuencia de ADN que sirve como un origen de replicación u ORI (un punto inicial para la replicación del ADN). solo son capaces de comportarse como tales. permitiendo que la bacteria sobreviva a la acción de los mismos. que poseen un plásmido que les confiere resistencia a ciertos antibióticos beta lactámicos como Penicilina y Ampicilina. En general los plásmidos de mayor tamaño. En muchos casos. Por esto pueden encontrarse más de una copia del mismo plásmido dentro de la célula bacteriana. los plásmidos contienen genes que codifican para enzimas capaces de degradar algunos antibióticos. agente causal del tétanos. Si bien el ADN plasmídico no porta información genética esencial para la vida de la bacteria. lo cual habilita al ADN para ser duplicado independientemente del ADN cromosomal. por Clostridium tetani. Como se mencionó. son moléculas circulares de ADN de doble cadena que constituyen una unidad de replicación independiente del cromosoma._______________________________________________________________________ es complementaria a la T y la C lo es a la G. sí portan genes que le confieren nuevas propiedades fenotípicas y que en algunos casos le son muy útiles para su adaptación al crecimiento en ciertos ambientes. Los plásmidos de la mayoría de las bacterias son SEMINARIO DE MICROBIOLOGIA 4 . y de esa manera podemos decir por ejemplo que el ADN cromosómico de Escherichia coli tiene un tamaño de 4. cuando portan un plásmido en particular que contiene genes que le permiten expresar moléculas de adhesión a los tejidos del huésped o sintetizar sustancias tóxicas para éste. Estos enlaces permiten mantener estable la estructura de la doble hélice de ADN en la que pueden distinguirse pares de nucleótidos o mejor dicho pares de bases (pb).200 kilobases (Kb). Muchas bacterias potencialmente patógenas para el hombre. Estos pb pueden utilizarse como unidad de tamaño o longitud para las moléculas de ADN. denominadas Universidad Nacional San Luís Gonzaga de Ica Facultad de Medicina Humana “Daniel Alcides Carrión” plásmidos.

pero también se conocen algunos lineales. Los plásmidos se utilizan en ingeniería genética por su capacidad de reproducirse de manera independiente del ADN cromosomal como así también porque es relativamente fácil manipularlos e insertar nuevas secuencias genéticas. Hay otros métodos de selección además de la resistencia a antibióticos. puede mantenerse en contacto por un largo tiempo. lo que facilita enormemente su aislamiento y purificación. rompe el cromosoma y se sitúa en medio. debido a la fuerte crítica de grupos ecologistas contra la posibilidad de presencia de antibióticos en los organismos modificados genéticamente. vale decir tienen la capacidad de insertarse en el cromosoma Digamos que bacteriano. con lo cual. ser duplicado en cada división celular del del huésped y volverse parte básica de su mapa genético. Cuando ese plásmido se ha insertado se les da el nombre de episoma. Hay algunos plásmidos Universidad Nacional San Luís Gonzaga de Ica Facultad de Medicina Humana “Daniel Alcides Carrión” integrativos. Los plásmidos usados en ingeniería genética son llamados “vectores”. Estos son usados para transferir genes desde un organismo a otro y típicamente contienen un marcador genético SEMINARIO DE MICROBIOLOGIA 5 . como los basados en fluorescencia o en proteínas que destruyen las células sin uso de antibióticos. Los plásmidos usados en Ingeniería Genética suelen contener uno o dos genes que les confieren resistencia a antibióticos y permiten seleccionar clones recombinantes. Estos nuevos métodos de selección de plásmidos son de uso frecuente en agrobiotecnologia. están presentes en forma de muchas copias por célula. esto es._______________________________________________________________________ circulares. los cuales reensamblan superficialmente los cromosomas de la mayoría de eucariontes Algunas clases de plásmidos poseen además la propiedad conocida como "replicación relajada". la también automáticamente maquinaria celular reproduce el plásmido.

pueden transferirse de una célula a otra mediante su inserción en un plásmido conjugativo o en un cromosoma o mediante un proceso de transformación cuando son liberadas de una célula muerta. Algunos de estos plásmidos no sólo se transfieren entre cepas de la misma especie. CLASIFICACIÓN SEGÚN SEAN AUTOTRANSMISIBLES POR CONJUGACIÓN O NO: a) Plásmidos conjugativos (auto transmisibles) Son aquellos que transportan los genes para los pilis sexuales y para la transferencia de los plásmidos a otra célula._______________________________________________________________________ confiriendo un fenotipo el cual puede ser seleccionado a favor o en contra. Universidad Nacional San Luís Gonzaga de Ica Facultad de Medicina Humana “Daniel Alcides Carrión” II. permitiendo transferencia horizontal de información genética entre grupos bacterianos filogenéticamente alejados. permitiendo una fácil inserción de fragmentos de ADN en ese lugar. b) Plásmidos no conjugativos. Pueden transmitirse de una célula a otra sin que la célula donadora los pierda. el cual es una pequeña región que contiene los sitios de restricción más comúnmente usados. Carentes de esta propiedad de conjugación. SEMINARIO DE MICROBIOLOGIA 6 . La mayoría también contienen un polivinculador o sitio de clonado múltiple (MCS). sino que son capaces de hacerlo entre especies y géneros muy diversos. recibiendo el muy apropiado nombre de plásmidos promiscuos o de amplio espectro de hospedadores.

resistencia frente a uno o varios antibióticos. que es la estructura de penicilinas y derivados  CAT( cloranfenicol acetil transferasa): que es una enzima que acetila la molécula del cloranfenicol. Por ejemplo:  B. Suelen ser plásmidos pequeños (menos de 10 kb). Pero esto no afecta a la replicación del plásmido. que de esta manera se “amplifica” y aumenta aún más su proporción respecto del cromosoma. Tienen una enorme importancia desde el punto de vista clínico._______________________________________________________________________ SEGÚN SU CONTROL DE REPLICACIÓN VEGETATIVA: Universidad Nacional San Luís Gonzaga de Ica Facultad de Medicina Humana “Daniel Alcides Carrión” a) Plásmidos de control estricto del número de copias: Tienen bajo número de copias por cromosoma en la misma célula. por lo que las bacterias que secreten esta enzima serán resistentes al cloranfenicol SEMINARIO DE MICROBIOLOGIA 7 . ya que para que se inicie cada ciclo de replicación cromosómica se necesita un nuevo “pool” de determinadas enzimas. b) Plásmidos de control relajado Alto nº de copias por cromosoma (más de 10).lactamasas: son enzimas que degradan específicamente el anillo blactámico. lo que afecta a la replicación del cromosoma. Algunos de ellos tienen un sistema de replicación especial. y son amplificables cuando a las bacterias que los poseen se les añade cloramfenicol: este antibiótico detiene la síntesis de proteínas.. SEGÚN EL TIPO DE FENOTIPOS QUE CODIFICAN : a) Plásmidos R (Factores R o factores de resistencia) Confieren a las bacterias que los contienen. Suelen ser plásmidos de tamaños medianos (unas 30 kb) a grandes (cientos de kb) P. Son plásmidos que contienen genes que codifican enzimas que destruyen o modifican moléculas que constituyen el antibiótico. ej. el factor F se mantiene a 1-2 copias por cromosoma. inactivándola.

c) Plásmidos toxigénicos: Son plásmidos que contienen genes que codifican proteínas de secreción que son tóxicas para el ser humano._______________________________________________________________________ Universidad Nacional San Luís Gonzaga de Ica Facultad de Medicina Humana “Daniel Alcides Carrión” b) Plásmidos bacteriocinogénicos Contienen genes que codifican a una Bacteriocina. Que confieren rutas metabólicas capaces de utilizar como fuentes de carbono y energía sustancias que otros organismos no pueden catabolizar: SEMINARIO DE MICROBIOLOGIA 8 . E. una proteína de secreción que es tóxica para otras células de la misma especie que no contengan el mismo factor Bacteriocinogénico. de lo contrario no lo serán. Dentro de una misma especie bacteriana. coli es habitante habitual del intestino. aquellas cepas que contengan un Plásmidos toxigénico serán virulentas. Son factores de virulencia. algunas de ellas debido a la presencia de Plásmidos toxigénicos que contienen genes que codifican una enterotoxina muy potente que cuando se libera en la mucosa intestinal da lugar a un cuadro diarreico d) Plásmidos que codifican factores de colonización Para la invasión de los tejidos de su hospedador. Un buen ejemplo de esto son las cepas enterotoxigénicas de E. pero existen cepas que si lo son. e) Plásmidos de cepas de Pseudomonas. producidas por las bacterias para competir con bacterias de la misma especie. Son proteínas tóxicas.coli. por lo que normalmente no es un microorganismo virulento.

plásmidos que suministran resistencia a antibióticos y capacidad de virulencia. plásmidos TOL/XYL (degradación del tolueno y xileno).. los miembros del grupo de incompatibilidad IncP1 poseen todos la propiedad de ser capaces de replicarse de manera estable en una amplia gama de células bacterianas hospedadoras. Una colección de plásmidos incompatibles constituye un grupo de incompatibilidad. seguido de una letra mayúscula y a veces de un número) están estrechamente relacionados. ESTRUCTURA DE UN PLASMIDO IV. Por ejemplo. desde hace algún tiempo que ciertas parejas de plásmidos (por ejm: un plásmido F y un plasmido F’ o dos clases diferentes de plásmidos F’) no pueden replicarse de manera estable en la misma célula bacteriana. MECANISMOS DE TRANSFERENCIA GENETICA SEMINARIO DE MICROBIOLOGIA 9 . plásmidos NAF (degradación del naftaleno). III. por lo que esta propiedad es utilizada con frecuencia como sistema de clasificación. con frecuencia revela otras cosas acerca de él. Se dice que dos de estos plásmidos son incompatibles. Dos plásmidos son incompatibles (no pueden permanecer establemente en la misma célula) Como se sabe. porque comparten un mismo sistema de replicación y segregación de las copias. Una gran variedad de pruebas sugiere que los plásmidos miembros de un mismo grupo de incompatibilidad (designado por Inc. etc. ej. Universidad Nacional San Luís Gonzaga de Ica Facultad de Medicina Humana “Daniel Alcides Carrión” Existen igualmente plásmidos que codifican más de un tipo de fenotipos: p._______________________________________________________________________ i) ii) iii) plásmidos OCT (degradación del octano). SEGÚN EL GRUPO DE INCOMPATIBILIDAD. El hecho de saber a qué grupo de incompatibilidad pertenece un plásmido.

al expresarse codifican y realizan una acción terapéutica. el uso de plásmidos para la producción a gran escala de vacunas de DNA está orientado a la prevención de enfermedades como las mencionadas. Los plásmidos utilizados con fines terapéuticos y de prevención. las de malaria de dos millones y las del SIDA de un millón. cáncer. exhiben tres partes básicas en su conformación: el gen de resistencia a antibióticos._______________________________________________________________________ V. Un prerrequisito para el uso efectivo de la terapia génica o de la vacunación con DNA es la transferencia eficiente del material genético a la célula receptora. USOS TERAPEUTICOS PRODUCCIÓN DE VACUNAS DE DNA Recientemente se ha reportado que las muertes al año por tuberculosis son de tres millones. para las cuales no existen vacunas aún. Estos genes. donde se introducen genes en células del cuerpo humano. ya que ofrecen mayores ventajas de seguridad y de aplicación que los vectores de tipo viral. Se considera que las vacunas de esta nueva generación serán más seguras. la fibrosis cística. y más fáciles de producir que las convencionales. Universidad Nacional San Luís Gonzaga de Ica Facultad de Medicina Humana “Daniel Alcides Carrión” SEMINARIO DE MICROBIOLOGIA 10 . el gen insertado y el origen de replicación. o su costo es muy elevado. En la actualidad. TERAPIA GÉNICA Otra aplicación de los plásmidos es en terapia génica. como el tratamiento de enfermedades hereditarias monogénicas o adquiridas. que otro tipo de plásmidos. como la hemofilia. baratas. alrededor del 24% de los protocolos en desarrollo emplean plásmidos superenrollados como vehículos de transferencia debido a que éstos son más eficientes en la transferencia del material genético. problemas vasculares y desórdenes neurológicos. Actualmente.

este también puede ser usado para producir proteínas en grandes cantidades desde el gen insertado. Estas técnicas se emplean normalmente para la producción de proteínas en gran escala. ya que podemos hacer que una bacteria produzca una proteína humana y lograr una superproducción. En algunas SEMINARIO DE MICROBIOLOGIA 11 ._______________________________________________________________________ PRODUCCIÓN DE GRANDES CANTIDADES DE PROTEÍNAS Otro uso importante de los plásmidos es fabricar grandes cantidades de proteínas. DEFINICION Un transposón o elemento genético transponible es una secuencia de ADN que puede moverse de manera autosuficiente a diferentes partes del genoma de una célula. como por ejemplo insulina. TRANSPOSONES Universidad Nacional San Luís Gonzaga de Ica Facultad de Medicina Humana “Daniel Alcides Carrión” I. es decir a la utilización de organismos vivos o de sus productos con fines prácticos. Solo como la bacteria produce la proteína que le confiere si resistencia a los antibióticos. o inclusive antibióticos. B. El transposón modifica el ADN de sus inmediaciones. ya sea arrastrando un gen codificador de un cromosoma a otro. En este proceso. Como las bacterias se multiplican muy rápidamente y pueden expresar grandes cantidades de proteínas. En este se deja crecer la bacteria que contiene el plásmido que encierra al gen de interés. denominados biorreactores. que actualmente es producida por bacterias en grandes recipientes de cultivo. como en el caso de la insulina humana. Esta es una forma barata y fácil de producir genes o proteínas que este codifica de forma masiva. se pueden causar mutaciones y cambio en la cantidad de ADN del genoma. es posible lograr una sobreproducción de la proteína deseada. A esto justamente se dedica la biotecnología. rompiéndolo por la mitad o haciendo que desaparezca del todo. Anteriormente fueron conocidos como "genes saltarines" y son ejemplos de elementos genéticos móviles. un fenómeno conocido como transposición.

la mayor parte del ADN basura (hasta un 50% del total del genoma) corresponde a transposones. SEGÚN CONTENIDO  Transposón simple Secuencia de inserción o elemento de inserción (IS): contienen una secuencia central con información para la transposasa. los transposones se integran en el ADN celular en lugares bien determinados. CLASIFICACION Universidad Nacional San Luís Gonzaga de Ica Facultad de Medicina Humana “Daniel Alcides Carrión” Existe una amplia diversidad de elementos genéticos móviles y pueden ser clasificados en base a su contenido y su estrategia y mecanismo de transposición. II. aunque muy parecida. Por ello fue laureada con el premio nobel en 1983. Su existencia fue propuesta por Barbara McClintock en el maíz. A diferencia de los provirus.  Transposón compuesto (Tn) Contienen un elemento de inserción (IS) en cada extremo en orden directo o inverso y una región central con la transposasa que además suele contener información de otro tipo. poseen información en la zona central para SEMINARIO DE MICROBIOLOGIA 12 . Por ejemplo. sin embargo. su existencia no se demostró hasta mucho más tarde en bacterias. Cuando un transposón simple se integra en un determinado punto del ADN aparece una repetición directa de la secuencia diana (5-12 pb). una enzima necesaria para la transposición._______________________________________________________________________ especies. los factores de transferencia de resistencia (RTF). y en los extremos una secuencia repetida en orden inverso. Esta secuencia repetida en orden inverso no es necesariamente idéntica.

Tras eso une los SEMINARIO DE MICROBIOLOGIA 13 .dándole una ventaja selectiva a las bacterias que lo posean. ATGCA) en el genoma aceptor. la tetraciclina. y realiza dos cortes de doble cadena a la misma altura en el genoma donante. No aumenta el número de copias del transposón en el interior de la célula. Se expresa la transposasa. A continuación localiza una secuencia diana (pongamos.  Clase II o retrotransposones: Se mueven en el genoma siendo transcritos a ARN y después en ADN por retrotranscriptasa. A su vez. se clasifican en los de origen retroviral (retrotransposones con LTR) y de origen no retroviral (retrotransposones sin LTR)._______________________________________________________________________ resistencia a antibióticos como el cloranfenicol. SEGÚN MECANISMO DE TRANSPOSICIÓN  Transposición conservativa: EL transposón sale de la sede donadora que queda vacía y se incorpora en una nueva sede (sede receptora).  Clase III o MITE. dejando aislado el transposón. la kanamicina. SEGÚN ESTRATEGIA DE TRANSPOSICIÓN  Universidad Nacional San Luís Gonzaga de Ica Facultad de Medicina Humana “Daniel Alcides Carrión” Clase I o DNA transposones: Se mueven directamente de una posición a otra en el genoma usandouna transcriptasa para copiar y pegarse en otro locus del mismo. y realiza un corte cohesivo. Por sus siglas en inglés "Miniature Inverted-repeats Transposable Elements".

pero sí aquellas relacionadas con la capacidad de moverse entre los elementos de ADN replicativos (plásmidos y cromosomas) sin la ayuda de la maquinaria recombinatoria del hospedador.  Universidad Nacional San Luís Gonzaga de Ica Facultad de Medicina Humana “Daniel Alcides Carrión” Transposición no conservativa: En este caso la transposasa realiza un corte cohesivo no solo en la secuencia diana. Al igual que en la transposición conservativa. que puede ser letal si no se repara. la secuencia señal queda duplicada. o Transposición replicativa: se produce una replicación desde los extremos 3’ del genoma aceptor. Queda. sin embargo. dejando el integrón en el genoma receptor. la resolvasa. A continuación la resolvasa rompe el cointegrado mediante una recombinación recíproca. un hueco en el genoma donante. lo que acaba por duplicar el transposón._______________________________________________________________________ extremos a los del transposón aislado. SEMINARIO DE MICROBIOLOGIA 14 . que según cómo lo resuelva dará lugar a una de las siguientes transposiciones: o Transposición no replicativa: el genoma donante se libera. Es un elemento móvil no replicativo. mediante un curioso mecanismo que forma un intermediario llamado “estructura entrecruzada”. en este caso se habla más de recombinación que de transposición. y la ADN Polimerasa de la célula rellena las zonas de cadena sencilla dejadas en la secuencia señal tras el corte cohesivo. y produciendo un genoma mixto llamado “cointegrado”. Debido a esto. A continuación integra todo el genoma donante con el aceptor. Realmente. que puede ser letal si no se repara. ESTRUCTURA DE UN TRANSPOSÓN Un transposón se define como un segmento de ADN que no codifica sus propias funciones de replicación. III. sino también en el genoma donante. dejando un corte a cada lado del transposón. queda un hueco en el genoma donante. Esta estructura es resuelta por un segundo enzima. que une los extremos del ADN aceptor original (ahora con una de las copias del integrón) y libera el genoma donante de nuevo con su transposón.

Las IR de los transposones suelen tener varios pb (entre 10 y 30) y no siempre son una copia perfecta entre ellas._______________________________________________________________________ Una característica común en los transposones. la secuencia de inserción o transposón se inserta en este corte generado en el ADN diana. Otra característica común. basta con que presenten alta homología. Una vez ocurrida la transposición. exceptuando a los transposones RC. Su presencia es consecuencia de la inserción del transposón. se encuentran dispuestas en orientación inversa. siendo una idéntica o prácticamente idéntica a la otra. pero aún así siguen formando una repetición invertida. estas secuencias generadas a cada lado del eje de simetría. es que contienen secuencias repetidas en sus extremos denominadas secuencias repetidas invertidas (IR). exceptuando aquellos denominados transposones Rolling‐Circle (RC). una en cada hebra. hay un proceso natural de rellenado de “huecos” que deriva en la formación de estas DR al duplicarse en la misma cadena: SEMINARIO DE MICROBIOLOGIA 15 . no se hallan contiguas. es la presencia adicional de secuencias cortas repetidas directas (DR) en el ADN diana una vez ha ocurrido el proceso de transposición (sitio diana en azul). Son dos secuencias que. Durante el proceso de transposición. generando un eje de simetría entre ellas: Universidad Nacional San Luís Gonzaga de Ica Facultad de Medicina Humana “Daniel Alcides Carrión” En el caso de los transposones.

flanqueados por una pareja de IS del mismo tipo formando así un transposón compuesto. IS630. IS110 e IS200/605. Una de las diferencias con una IS. La longitud de estas DR._______________________________________________________________________ IV. IS3. IS6. IS110. IS30. IS1380. que quedan flanqueando la IS. Fueron descubiertas y estudiadas. y por otro son el punto de anclaje en las reacciones de corte y transferencia de cadena que llevan a la transposición del elemento. por ejemplo. Su estructura es sencilla. Sólo algunas excepciones notables carecen de ellas: son las familias IS91. para IS1 son 9 pb. Las IR tienen una doble funcionalidad: por un lado. es característica para cada elemento y generalmente siempre se generará una duplicación de longitud determinada. no porque transportasen ningún tipo de gen relevante. ISAs1 e ISL3. Actualmente se conocen múltiples familias de IS. sino porque las mutaciones insercionales que provocaban implicaban la inactivación del gen en el cual se transponían. las IS van flanqueadas por unas secuencias repetidas invertidas. TRANSPOSONES COMPLEJOS (CLASE II) SEMINARIO DE MICROBIOLOGIA 16 . IRR e IRL (Inverted Repeat Right/Left respectivamente). de entre 2 y 14 pb. Como ya se ha apuntado en el apartado anterior. IS200/IS605. proporcionan el sitio exacto para el reconocimiento específico de la transposasa. IS5. IS91. TRANSPOSONES COMPUESTOS (CLASE I) Son elementos genéticos móviles formados por una serie central de genes. TIPOS DE TRANSPOSONES BACTERIANOS EN FUNCIÓN DE SU ESTRUCTURA GENÉTICA. Tras la inserción se generan las DR en el ADN diana. es que aporta al menos una alteración del fenotipo celular por la expresión de dichos genes centrales. Esta enzima está codificada por uno o dos marcos de lectura abierta que consumen la práctica totalidad de la longitud del elemento. Universidad Nacional San Luís Gonzaga de Ica Facultad de Medicina Humana “Daniel Alcides Carrión” Secuencias de inserción: IS Las secuencias de inserción son los transposones bacterianos más pequeños. IS982. IS4. IS256. Las familias son: IS1. ya que codifican poco más que la transposasa que les permite promover su propia transposición e integrarse en multitud de sitios específicos. IS21. Se denominan con las siglas IS y un número. que por si solos no podrían transponerse. IS66.

a través de múltiples eventos de transposición. SEMINARIO DE MICROBIOLOGIA 17 . La función de las TnpA de estos transposones es atrapar y mantener dos iones Mg2+ que participan en la fragmentación del enlace fosfodiéster del ADN durante el proceso de transposición. más los determinantes de resistencia que transporte. La estructura genética consta de una transposasa junto a una resolvasa. estableciéndose de manera estable entre la población bacteriana portadora gracias a las propiedades que confieren y permiten a dicha población sobrevivir a las fuerzas selectivas a las que normalmente se ve afectada. POS DE TRANSPOSONES EN FUNCIÓN DE LA TRANSPOSASA Transposones DDE: Las transposasas de la mayoría de los transposones con mecanismo conservativo. pero sí lo están en el centro activo cuando se genera la proteína. Un centro activo tal que éste se puede hallar también en otras conocidas proteínas como la integrasa del VIH y la proteína RAG‐1 (generación de anticuerpos en vertebrados) entre otros. son los transposones conjugativos. por casualidad. Los transposones complejos pueden moverse entre el cromosoma bacteriano y los plásmidos presentes en la bacteria. Estas enzimas pertenecen a una antigua superfamilia de proteínas que catalizan reacciones de transferencia de grupos fosforilo (PO4) a través de mecanismos basados en la presencia de dos iones metálicos._______________________________________________________________________ Universidad Nacional San Luís Gonzaga de Ica Facultad de Medicina Humana “Daniel Alcides Carrión” Se cree que los anteriores transposones de clase I surgen. transposón con mecanismo replicativo. Estos tres aminoácidos no están próximos en el polipéptido. y también las de otras como Tn3. Hay un grupo de transposones de clase II que pueden transferirse con una estructura circular similar a la de los plásmidos. Recientemente se ha determinado este centro activo en la transposasa codificada por IS1. de ahí la denominación DDE. El origen de la generación de esta otra clase II de transposones está mucho menos clara que el propuesto para los de clase I. todo ello flanqueado por una copia de una IR en cada extremo. La presencia de estas dos enzimas les permite su recombinación e integración en el cromosoma bacteriano o en plásmidos. poseen una característica común: la presencia de tres aminoácidos esenciales para su actividad: dos ácidos aspártico (D) y un ácido glutámico (E).

sino que implica un movimiento RC para integrarse en el ADN diana. V. Su representante es IS91. En todos los casos donde se da un movimiento genético por RC. el mecanismo de transposición no pasa por un intercambio de hebras. la proteína ejecutora tiene una tirosina en su centro activo cuya función es unirse covalentemente al grupo fosfato en el extremo 5’ del ADN implicado en el proceso de replicación o transferencia. Este tipo de elementos están a medio camino entre integrasas y transposasas. Transposones S e Y. Los transposones Y y S se transponen por un mecanismo de recombinación no‐homóloga específica de sitio. APLICACIONES Transposones como vectores para transgénesis estable de genes a células madre y generación de SEMINARIO DE MICROBIOLOGIA 18 . Ejemplo de este tipo de mecanismo es uno de los tres tipos de replicación en plásmidos. de ahí la denominación Y2._______________________________________________________________________ Universidad Nacional San Luís Gonzaga de Ica Facultad de Medicina Humana “Daniel Alcides Carrión” Transposones Y2: Transposones Rolling‐circle (Tn‐RC) Las transposasa de este tipo de transposones poseen dos tirosinas esenciales en su centro activo. como ocurre en los transposones DDE. se denominan transposones Y y transposones S. Existe otra clase de elementos genéticos que se transfieren sin utilizar ni TnpA‐DDE ni TnpA‐Y2. En este caso. Según posean en su centro activo una tirosina o una serina.

Klf4 y c-Myc se consigue transformar células somáticas en células pluripotentes con capacidades similares a las células madre embrionarias. Esto tiene varios problemas como:   Baja tasa de integración Integración de varias copias repetidas seguidas. Esto permite la eliminación del transgen una vez completada la reprogramación. La variante hiperactiva SB y los transposones piggyBac muestran una eficiencia comparable a la de los vectores virales en la transgénesis. Por ejemplo se pueden introducir horquillas (hairpins) cortas en cromosomas para obtener un sistema de bloqueo mediante interferencia por ARN. La eficiencia en la transferencia estable de genes por el sistema SB es similar a la obtenida con vectores virales. Es cierto que aún falta cerrar del todo la posibilidad de que el transposón salte a una nueva localización durante su proceso de eliminación del genoma. lo que muchas veces causa el silenciamiento de su expresión SEMINARIO DE MICROBIOLOGIA 19 . Sox2. TRANSGÉNESIS EN OOCITOS Y EMBRIONES En vertebrados. pero la reprogramación celular usando transposones como vector augura un futuro brillante a la medicina regenerativa. Inicialmente esto solo podía conseguirse mediante retro o lenti-viral transducción._______________________________________________________________________ células madre pluripotentes inducidas. Los transposones son vectores prometedores para terapia génica y celular. Universidad Nacional San Luís Gonzaga de Ica Facultad de Medicina Humana “Daniel Alcides Carrión” El reciente descubrimiento de las células madre pluripotentes inducidas (iPSCs: induced Pluripotent Stem Cells) abre un futuro prometedor para la medicina regenerativa. Además el mecanismo “cortar y pegar“ muchas veces no se completa y en los casos en los que se corta sin pegarse el transposón desaparece. Tecnologías basadas en transposones pueden ser eficaces para transferir genes a cultivos celulares. Con sólo inducir la expresión de los genes que codifican las proteínas Oct4. los métodos clásicos para expresar genes no presentes en el genoma se basan en la micro-inyección de construcciones de genes en oocitos o en huevos fertilizados. Ya se ha conseguido generar iPSCs mediante el sistema de trasposición piggyBac y la eliminación del transgen que contenía los factores responsables de la reprogramación celular. limitando su aplicación clínica por motivos de seguridad.

En el sistema experimental de 2 componentes la transposición está controlada por la transsuplementación de la transposasa. Todos estos problemas se pueden solucionar usando transposones. para buscar componentes involucrados en la reparación de ADN. Es necesario estudiar cada gen dentro de las rutas biológicas en las que participa. MUTAGÉNESIS A ESCALA GENÓMICA La mutagénesis de genes específicos permite diseccionar su función pero en la mayoría de los casos la función de un gen no puede analizarse aisladamente. Las células embrionarias deficientes en Blm tienen una elevada tasa de recombinación homóloga con lo que tienden a perder la heterocigosidad y en muchos casos pueden convertir una mutación simple en una bi-alélica. Este sistema fue capaz de detectar 4 genes involucrados en reparación de ADN mientras que previos estudios que usaban como vector retrovirus sólo fueron capaces de detectar 2 genes. pero la probabilidad de generar mutaciones bialélicas de un mismo locus es extremadamente baja. En este sistema se acopla por un lado la transposasa. y por otro un sistema de captura de genes (gene-trapping) que se encarga de la mutagénesis y de proporcionar una señal detectable para poder seleccionar los mutantes. La mutagénesis insercional a escala de genoma realizada con transposones permite este tipo de estudios globales y es una de la las tecnologías más productiva y versátil de las existentes para bloquear y manipular genes a escala de genoma. El sistema Blm se usa para realizar mutagénesis insercional a escala genómica en células somáticas. Se ha usado el transposón piggyBac en células madre embrionarias de ratón Blm-deficientes. En este sentido se ha desarrollado ya un sistema basado en la transposasa hiperactiva SB100X que permite una transgénesis del 45% en embriones de ratón. Las construcciones para captura de genes SEMINARIO DE MICROBIOLOGIA 20 . La inactivación de las 2 copias de un gen suele ser siempre necesaria para detectar cambios fenotípicos._______________________________________________________________________  Universidad Nacional San Luís Gonzaga de Ica Facultad de Medicina Humana “Daniel Alcides Carrión” La integración se produce tarde en el desarrollo lo que causa mosaicismo con respecto al transgen. La mutagénesis insercional en células somáticas plantea el reto de trabajar con genomas diploides.

El sistema que asocia SB a un sistema de captura de oncogenes permite tanto bloquear la expresión de oncogenes como sobre expresarlos. Se han usado sistemas de transposición de 2 componentes basados en el uso los transposones SB. El sistema de 2 componentes al insertarse en un intrón bloquea la expresión del gen en el que se inserta. TRANSPOSONES EN SISTEMAS EXPERIMENTALES DE CÁNCER SB ha sido usado en ratón para sobre-expresar genes y generar modelos animales de cáncer experimental. Universidad Nacional San Luís Gonzaga de Ica Facultad de Medicina Humana “Daniel Alcides Carrión” MUTAGÉNESIS CON LINE-1 El uso del retrotransposon LINE-1 para mutagénesis tiene varias ventajas:  Como su mecanismo de transposición es de tipo “copiar y pegar” el donante se mantiene estable.   Se pueden diseñar de forma que la transposición se produzca una sola vez La retro-transposición puede controlarse usando sistemas como Cre-loxP Un problema del uso de LINE-1 es que un 90% de las transposiciones se asocian con reordenamientos y esto puede dificultar la determinación de los nuevos sitios de inserción. Minos. pero permite la transcripción del gen reportero que sirve para seleccionar los mutantes. SEMINARIO DE MICROBIOLOGIA 21 . un gen que codifica una proteína “reporter” que sea fácilmente detectable directa o indirectamente (fluorescencia._______________________________________________________________________ llevan en 3’ un sitio para splicing alternativo. El sistema es similar al basado en retrovirus pero permite establecer tumores en regiones como hígado y cerebro en las que antes no era posible. PiggyBac y Tol2. color) y en 5’ una secuencia poli-A que determina la terminación de la transcripción.

_______________________________________________________________________ Universidad Nacional San Luís Gonzaga de Ica Facultad de Medicina Humana “Daniel Alcides Carrión” SEMINARIO DE MICROBIOLOGIA 22 .

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