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EMBRIOGENESIS SOMTICA INTRODUCCIN A LA EMBRIOGENESIS SOMTICA: La embriognesis somtica es una tcnica biotecnolgica de gran importancia, que esta comenzando

a tomar campo en los ltimos tiempos. Para poder entender este tema, debemos conocer trminos o palabras claves y definir algunos conceptos importantes. Qu es la embriognesis como proceso biolgico en las plantas? Se puede definir la embriognesis en las plantas como el conjunto de procesos fisiolgicos que conducen a la transformacin de una sola clula, el cigoto, en un individuo multicelular ms complejo. Qu es la embriognesis somtica? La embriognesis somtica es un mtodo que permite la formacin de embriones somticos, ya sea de manera directa o indirecta, es decir con formacin previa del callo embriognico. Cultivo de Tejidos Vegetales I. Fundamentos y aplicaciones; Guillermo E. Delgado y Consuelo Rojas Idrogo. Universidad Nacional Pedro Ruz Gallo. Lambayeque-Per. La embriognesis somtica (asexual o adventicia), consiste en del desarrollo de embriones a partir de clulas que no son el producto de una fusin gamtica, o en otras palabras, es una proceso por el cual se produce una estructura bipolar (embrin) a partir de una clula somtica. Encuentros en la Biologa; Carlos Lpez Encina y Rosa Pern Quesada. Facultad de Ciencias de la Universidad de Mlaga. Palabras clave: callo, embrin, clulas somticas, polipolidizacin, aneuploidizacin. EMBRIOGENESIS SOMTICA IN VITRO: La embriognesis somtica como tcnica de micropropagacin en la biotecnologa puede utilizar los siguientes tejidos como explantes.

Tabla 1. Explantes a partir de los cuales se puede realizar Embriognesis In Vitro. Explante Hipocotilos Imagen Explante pices Imagen Explante Pednculos Imagen

Peciolos

Pednculos

Hojas Jvenes

Tipos de Embriognesis Somtica In Vitro: Como se explico en la definicin de Guillermo E. Delgado y Consuelo Rojas Idrogo. El mtodo de la embriognesis se puede dividir en dos: Embriognesis Directa e Indirecta. Embriognesis Directa: La forma directa implica la existencia de clulas somticas predeterminadas a seguir la va embriognica y las clulas del explante primario se desarrollan para formar embriones.

Imagen 1.Plntula de coco obtenida por embriognesis. Embriognesis Indirecta: Implica la necesidad de una induccin para que las clulas sigan la va embriognica, tras pasar por una fase proliferativa (callo) y cambiar su competencia a la expresin de embriognesis.

Imagen 2. Callos formados durante la embriognesis indirecta.

Ventajas de la Embriognesis: La embriognesis como tcnica de biotecnolgica, nos brinda las siguientes ventajas: Posibilidad de manipular grandes cantidades de embriones en medio lquido: al tratarse de una tcnica de micropropagacin se puede manipular grandes cantidades de embriones (pequeos conjuntos de clulas), en un medio lquido nutritivo. Mnima manipulacin manual y espacio de laboratorio. Obtener un producto libre de patgenos y contaminantes: siempre y cuando el proceso sea realizado con todas las medidas y el cuidado microbiolgico. Permite encapsular los embriones produciendo semillas sintticas Automatizacin de la produccin: llegando a utilizar bioreactores.

Desventajas de la Embriognesis: La tcnica tambin presenta puntos en contra tomando en cuenta la evolucin del desarrollo del embrin: Tasa de regeneracin baja. Generacin asincrnica Poca informacin sobre la calidad y establecimiento en suelo. Diferencias entre embriones somaticos y cigoticos Una primera diferencia entre embriones cigticos y somticos son sus sistemas de iniciacin. Los
embriones cigticos se forman a partir de la unin de los gametos, la doble fecundacin y las plantas que se originan son hbridas por la recombinacin meitica de sus genes.

Por el contrario, los embriones somticos se originan de clulas vegetativas de un nico individuo y las
plantas resultantes son duplicados genticos o clones de la planta madre.

Sin embargo, tanto los embriones cigticos como somticos comparten similar ontogenia. Ambos
embriones pasan por los estados globular, torpedo y cotiledonal en especies dicotiledneas y conferas o por los estados globular, escutelar y coleoptilar en monocotiledneas .

No obstante, existen diferencias significativas que limitan su uso como mtodo de propagacin. Por
ejemplo, especies que son monoembrinicas y producen embriones cigticos va un suspensor, generalmente dan origen a embriones somticos por un sistema evolutivo poco desarrollado donde se forma una masa de tejido embrional ( denominado complejo proembrional ) con mltiples embriones somticos. Las razones para este retroceso hacia un tipo de desarrollo primitivo son desconocidas . Dicha masa de embriones somticos se desarrolla en forma asincrnica, de tal forma que mltiples estados de desarrollo embrional estn presenten en el cultivo en cualquier momento. Al desarrollarse en diferentes momentos estn sujetos a cambios en el rgimen nutricional del medio de cultivo. En este ambiente fluctuante desde el punto de vista nutricional, los embriones se vuelven desorganizados, forman nuevas clulas embriognicas y de esta manera contribuyen a la asincrona

Tambin ocurre una germinacin precoz, donde dichos embriones forman solo races o tallos; no es
una germinacin que de origen a una plntula normal.

Otro problema es que los embriones somticos generalmente muestran anormalidades estructurales
como cotiledones extras y meristemas apicales pobremente desarrollados. Todos estos problemas se deben a las condiciones de cultivo y no a factores intrnsecos de los embriones somticos, ya que embriones cigticos inmaduros al ser removidos de las semillas y cultivados in Vitro presentan similares irregularidades.

Otra diferencia significativa entre embriones cigticos y somticos, es que a los embriones somticos
les falta la fase de quiescencia.

Los embriones cigticos maduros de las semillas ortodoxas, al llegar a la madurez se deshidratan y
entran en un periodo de reposo o quiescencia, que es el principal factor para que las semillas puedan ser almacenadas.

Por el contrario, los embriones somticos continan creciendo, algunos germinan, otros se vuelven
desorganizados y se transforman en tejido proembrional y otros mueren. La falta de una fase de reposo en los embriones somticos es el mayor obstculo de su utilizacin como semilla artificial.

Aplicaciones de la Embriognesis Somtica en la Biotecnologa Vegetal La tcnica de embriognesis somtica es aplicada en la biotecnologa en los siguientes aspectos: Propagacin masiva de plantas. Conservacin de Germoplasmas Mejoramiento de germoplasmas y plantas. Produccin de embriones sin variacin somaclonal Produccin de semillas sintticas y plantas libres de patgenos. FASES DE LA EMBRIOGENESIS SOMTICA: Induccin del callo embriognico Esta fase comprende la seleccin y desinfestacin del explante, asi como su inoculacin en el medio de cultivo, llamado tambien primario o de induccin. Este medio de cultivo vara en eficiencia entre una especie a otra e inlcusive entre genotipos de una misma especie a otra e inclusive entre genotipos de una misma espcie, tal como fue observado en alfalfa. Un hecho notable en este medio de cultivo primaro es la presencia de auxinas, en

aproximadamente el 60% de las especies revisadas por Evans et al., (1981) y Ammirato (1983), destacando el 2, 4-D y en menor proporcin el AIA y ANA. En algunas familias como las Apiaceae las auxinas son las nicas hormonas requeridas y en las Poaceae el 2,4-D es la nica hormona inductora. Las citocininas tienen un papel menor aunque en algunos sistemas resultan esenciales pero en muy bajas concentraciones. Induccin y maduracin de los embriones somticos En la mayora de los casos, donde se indujo el callo embriognico, fue necesario transferirlo a un segundo medio de cultivo, denominado medio de cultivo secundario o de induccin y maduracin de los embriones somticos. Este medio de cultivo por lo gneerla carece de hormonas, o las auxinas son incoporadas en muy bajas concentracines. En algunos sistemas ha isdo rqueridoa la suplementacion de bjaas oncentraciones de citocininas y giberlinas. En esta fase el problema no es tanto la formacin de los embriones somticos, los que pueden ser fcilmente induciods, sino la fomracin en grandes cantidads y con la plasticidad de que puedan riodamente convertirse en plantas, fase esta que ha resultado muy difcultosa envarios sistemas. Los conceptos de embriognesis somtica de lata frecuencia (HFSE) y embriognesis somatica de baja frecuencia (LFSE), en base al numero de embriones somaticos producidos, fueron desarrollados posteriormente. El desrrollo normal de un embrin somatico en esta fase del proceso, y como ya ha sido ampliamente destacado, sigue la secuencia: globular, acoazonada y torpedo; sin embargo, es posible observar aglunas otras formas complmenetarias como la de torpedo tardio, ctiledonar y torpedo expandido como ocurren en la embriognesis somatica del camote. Desarrollo de embriones somticos en plantas En esta fase, el embrin somtico, que ha alcanzado el estadio de torpedo, se convierte en planta integra potencialmente capaz de ser trnasferida con xito a condiciones de campo. Esta fase usualmente la alcanza en el mismo medio de cultivo secundario; sin embargo, no han sido muy numerosos los protocolos establecidos con enraizamiento del embrin somtico; la formacin de una planta y su transferencia al suelo.

EMBRIOGNESIS SOMTICA: UNA ALTERNATIVA PARA LA PROPAGACIN, MEJORAMIENTO Y CONSERVACIN DE GERMOPLASMA EN CACAO (PAPER) INTRODUCCIN El cacao (Theobroma cacao) es un rbol que se introdujo de Mxico y Amrica Central en frica en 1822 en Santo Tom y en 1850 en Ghana. Despus del caf y del azcar, el cacao es la tercera mercanca agrcola exportada en el mundo, representando en 1988 ms de 2000 millones de dlares de intercambio comercial. En la tcnica de embriognesis somtica, el caco se ha comportado como recalcitrante por los bajos niveles de respuesta que se ha logrado y por la variabilidad de la misma en cuanto a los diferentes genotipos. DESARROLLO Explantes, desinfeccin e induccin de callos En el cacao se han probado diferentes explantes para la induccin del proceso de la embriognesis somtica en cotiledones y en hojas. La desinfeccin de los explantes de ha logrado con el uso del hipoclorito de sodio al 2% durante 20 minutos cuando se ha trabajado con los cotiledoneos , e hipoclorioto de sodio al 1% entre 15 y 20 minutos cuando se han utilizado como explantes ptalos y estaminoides. La induccin de callos se realiz en medio MS suplementado con agua de coco, casena hidrolizada, tiamina y cido naftalenactico para el caso de los cotiledones, donde adems se pudo observar la formacin de embriones somticos con caractersticas asincrnicas.

La formacin de callos tambin se ha obtenido a partir de ptalos y estaminoides en medio MS con combinaciones de cido 2,4-D y quinetina. Estos explantes son los que mayor importancia tienen para la propagacin del cultivo, ya que el cacao por se un planta algama los cotiledones llevan implcita una variabilidad natural productora de su cruzamiento, aunque los mismos se pueden emplear cuando se parte de cruzamientos conocidos. En el caso de ptalos y estaminoides representan a la planta y pueden encontrarse durante casi todo el ao en cantidades que oscilan entre 20 y 100 mil flores. Diferenciacin de embriones somticos Los callos obtenidos de estaminoides han resultado se los de mayor potencial para la formacin de embriones somticos en medios con las sales MS diluidas a la mitad, suplementada con sacarosa, cido giberlico, quinetina, cido nafatalenactico y vitaminas en el clon UF-613. Estos resultados nos indican la posibilidad de obtener embriones somticos a partir de callos formados de estaminoides en una frecuencia ms elevada. Los embriones se encontraban en estado globular, acorazonado y torpedo, lo cual indica un alto grado de asincrona, caracterstica del proceso embriognico en medio slido.

(b) embrin en estado globular, (d) embrin en estado acorazonado, (e) embrin en estado torpedo

Maduracin y conversin en plantas de los embriones somticos Los embriones en estado de torpedo fueron transferidos a medios de maduracin que contenan las sales Driver Kunikyuki (DKW) suplementados con cido abscico, sacarosa 6% y la combinacin de ambos. Con el tratamiento de sacarosa 6% se obtuv un mayor porcentaje de respuesta en el aumento de tamao de los embriones, cambio de coloracin de los cotiledoneos, de blancos a violceos, lo que indica la acumulacin o sntesis de reserva por parte de los embriones. Los embriones somticos tambin manifestaron la elongacin del hipocotilo, lo cual indica el inicio de la germinacin y conversin de los embriones. Luego de transferir los embriones en germinacin hasta medios para tal fin se obtuvo la conversin de una parte de ellos hasta un 20%. Sin dudas es esta parte donde se presentan mayores dificultades del mtodo de propagacin.
BIBLIOGRAFIA: http://es.wikipedia.org/wiki/Embriog%C3%A9nesis_som%C3%A1tica http://www.fagro.edu.uy/~fisveg/docencia/cursos%20posgrado%20y%20optativos/curso%20 de%20micropropagacion/mateoricos/Embriognesis%20somtica%202008.pdf Cultivo de Tejidos Vegetales I. Fundamentos y aplicaciones; Guillermo E. Delgado y Consuelo Rojas Idrogo. Universidad Nacional Pedro Ruz Gallo. Lambayeque-Per. Encuentros en la Biologa; Carlos Lpez Encina y Rosa Pern Quesada. Facultad de Ciencias de la Universidad de Mlaga.