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TEMA 1

INTRODUCCIN A LOS
MTODOS INSTRUMENTALES
Tipos, seleccin y calibracin
Prof. Luis Pea
ANLISIS INSTRUMENTAL
Contenido
Tipos de mtodos instrumentales
Seleccin de un mtodo analtico
Calibracin de los mtodos instrumentales
Tipos de mtodos instrumentales
Para este estudio, es conveniente considerar las propiedades
qumicas y fsicas que se puedan utilizar en el anlisis
cualitativo o cuantitativo.

La tabla 1 enumera la mayora de las propiedades
caractersticas que se utilizan actualmente en anlisis
instrumental. La mayor parte de ellas requieren una fuente de
energa para estimular una respuesta medible que procede
del analito.
Tipos de mtodos instrumentales
Tabla 1. Propiedades qumicas y fsicas que se emplean en
los mtodos instrumentales
Propiedades Mtodos instrumentales
Emisin de la radiacin Espectroscopia de emisin (rayos X, UV, visible, de electrones,
Auger); fluorescencia, fosforescencia y luminiscencia (rayos X,
UV y visible)
Absorcin de la
radiacin
Espectrofotometra y fotometra (rayos X, UV, visible, IR);
espectroscopia fotoacstica; resonancia magntica nuclear y
espectroscopia de resonancia de espn electrnico
Dispersin de la
radiacin
Turbidimetra; nefelometra, espectroscopia Raman
Refraccin de la
radiacin
Refractometra; interferometra
Difraccin de la
radiacin
Mtodos de difraccin de rayos X y de electrones
Rotacin de la radiacin Polarimetra; dispersin rotatoria ptica; dicrosmo circular
Tipos de mtodos instrumentales
Tabla 1. Propiedades qumicas y fsicas que se emplean en
los mtodos instrumentales (Continuacin)
Propiedades Mtodos instrumentales
Potencial elctrico Potenciometra; cronopotenciometra
Carga elctrica Culombimetra
Corriente elctrica Polarografa; amperometra
Resistencia elctrica Conductimetra
Masa Gravimetra (microbalanza de cristal de cuarzo)
Razn masa a carga Espectrometra de masas
Velocidad de reaccin Mtodos cinticos
Propiedades trmicas Gravimetra y volumetra trmica; calorimetra de barrido
diferencial; anlisis trmico diferencial; mtodos de conductividad
trmica
Radiactividad Mtodos de activacin y de dilucin isotpica
Seleccin de un mtodo analtico
La segunda columna de la tabla 1 pone de manifiesto que el
qumico actual dispone de una enorme serie de
herramientas para realizar los anlisis, tantas que, de hecho,
la eleccin resulta, a menudo, difcil.

En este apartado se estudia cmo se realiza dicha eleccin.
Seleccin de un mtodo analtico
1.- Definicin del problema
Para poder seleccionar correctamente un mtodo analtico,
es esencial definir con claridad la naturaleza del problema
analtico, y esta definicin requiere contestar a las siguientes
preguntas:
Qu exactitud se requiere?
Tiempo y esmero que
requerir el anlisis
De cunta muestra se dispone?
Sensibilidad del mtodo
Seleccin de un mtodo analtico
1.- Definicin del problema
En qu intervalo de
concentraciones est el analito?
Intervalo de
concentraciones al que
debe adaptarse
Qu componentes de la
muestra interfieren?
Selectividad requerida
Seleccin de un mtodo analtico
1.- Definicin del problema
Cules son las propiedades
fsicas y qumicas de la
matriz de la muestra?
Algunos se usan con
disoluciones de analito,
muestras gaseosas o con
slidos directamente
Cuntas muestras hay que
analizar?
Aspecto econmico
As, se puede escoger un mtodo, siempre que se conozcan las
caractersticas del funcionamiento de los distintos mtodos
instrumentales indicados en la tabla 1.
Seleccin de un mtodo analtico
2.- Caractersticas de funcionamiento de los instrumentos;
parmetros de calidad
En la tabla 2 se enumeran los criterios cuantitativos de
funcionamiento de los instrumentos, criterios que se pueden
utilizar para decidir si un determinado mtodo instrumental
es o no adecuado para resolver un problema analtico.
Estas caractersticas se expresan en trminos numricos y
se denominan parmetros de calidad
Seleccin de un mtodo analtico
2.- Caractersticas de funcionamiento de los instrumentos;
parmetros de calidad
Para un problema analtico dado, los parmetros de calidad
permiten reducir la eleccin de los instrumentos a tan slo
unos pocos y entonces la seleccin entre ellos ya se hace
con los criterios cualitativos de funcionamiento como:
velocidad,
facilidad y comodidad,
habilidad del operador,
coste y disponibilidad del equipo y el coste por muestra.
Seleccin de un mtodo analtico
2.- Caractersticas de funcionamiento de los instrumentos;
parmetros de calidad
Tabla 2. Criterios numricos para seleccionar mtodos
analticos.
Criterio Parmetro de calidad
Precisin Desviacin estndar absoluta, desviacin
estndar relativa, coeficiente de variacin,
varianza.
Sesgo Error absoluto sistemtico, error relativo
sistemtico
Sensibilidad Sensibilidad de calibracin, sensibilidad
analtica
Seleccin de un mtodo analtico
2.- Caractersticas de funcionamiento de los instrumentos;
parmetros de calidad
Tabla 2. Criterios numricos para seleccionar mtodos
analticos. (Continuacin)
Criterio Parmetro de calidad
Lmite de deteccin Blanco ms tres veces la desviacin
estndar del blanco
Intervalo de
concentracin
Concentracin entre el lmite de
cuantificacin (LOQ) y el lmite de linealidad
(LOL)
Selectividad Coeficiente de selectividad
Seleccin de un mtodo analtico
2.- Caractersticas de funcionamiento de los instrumentos;
parmetros de calidad
Precisin:
Se define como el grado de concordancia mutua entre los
datos que se han obtenido de una misma forma. La precisin
indica la medida del error aleatorio, o indeterminado, de un
anlisis.

Los parmetros de calidad de la precisin se definen en la
tabla 3.
Seleccin de un mtodo analtico
2.- Caractersticas de funcionamiento de los instrumentos;
parmetros de calidad
Precisin:
Tabla 3. Parmetros de calidad para la precisin de los
mtodos analticos.
Trminos Definicin*
Desviacin estndar
absoluta, s
Desviacin estndar
relativa (RSD)
Desviacin estndar
de la media, s
m

Coeficiente de
variacin, CV
Varianza
2
s
100 - =
x
s
CV
N
s
s
m
=
x
s
RSD=
( )
1
1
2

=

=
N
x x
s
N
i
i
Seleccin de un mtodo analtico
2.- Caractersticas de funcionamiento de los instrumentos;
parmetros de calidad
Sesgo:
El sesgo mide el error sistemtico, o determinado, de un
mtodo analtico.
El sesgo se define mediante la ecuacin:
Donde es la media de la poblacin de la concentracin
de un analito en una muestra cuya concentracin
verdadera es x
t
.
t
x sesgo =
Seleccin de un mtodo analtico
2.- Caractersticas de funcionamiento de los instrumentos;
parmetros de calidad
Sensibilidad:
En general se acepta que la sensibilidad de un instrumento o
de un mtodo es una medida de su capacidad de diferenciar
pequeas variaciones en la concentracin del analito.
Dos factores limitan la sensibilidad:
Pendiente de la curva de calibrado
Reproducibilidad o precisin del sistema de medida.
Seleccin de un mtodo analtico
2.- Caractersticas de funcionamiento de los instrumentos;
parmetros de calidad
Sensibilidad:
La definicin cuantitativa de sensibilidad, aceptada por la
Unin Internacional de Qumica Pura y Aplicada (IUPAC), es
la de sensibilidad de calibrado, que se define como la
pendiente de la curva de calibrado a la concentracin objeto
de estudio.
Seleccin de un mtodo analtico
2.- Caractersticas de funcionamiento de los instrumentos;
parmetros de calidad
Sensibilidad:
La mayora de las curvas de calibrado que se usan en
qumica analtica son lineales y se pueden representar
mediante la ecuacin:
Donde:
S: seal medida
c: concentracin del analito
S
bl
: seal instrumental de un blanco
m: pendiente de la lnea recta (sensibilidad de calibrado)
bl
S mc S + =
Seleccin de un mtodo analtico
2.- Caractersticas de funcionamiento de los instrumentos;
parmetros de calidad
Lmite de deteccin :
La definicin cualitativa ms aceptada para el lmite de
deteccin es la mnima concentracin o la mnima masa
de analito que se puede detectar para un nivel de
confianza dado.
Este lmite depende de la relacin entre la magnitud de la
seal analtica y el valor de las fluctuaciones estadsticas
de la seal del blanco.
Seleccin de un mtodo analtico
2.- Caractersticas de funcionamiento de los instrumentos;
parmetros de calidad
Lmite de deteccin :
As, la mnima seal analtica distinguible S
m
se considera
que es igual:
Donde:
S
bl
: seal media del blanco
k: mltiplo emprico, un valor 3 garantiza 95% de confianza
s
bl
: desviacin estndar del blanco
bl bl m
ks S S + =
Seleccin de un mtodo analtico
2.- Caractersticas de funcionamiento de los instrumentos;
parmetros de calidad
Lmite de deteccin :
Luego, ya conociendo Sm y la sensibilidad de calibrado (m)
se calcula el lmite de deteccin (c
m
) como:
m
S S
c
bl m
m

=
Seleccin de un mtodo analtico
2.- Caractersticas de funcionamiento de los instrumentos;
parmetros de calidad
Intervalo lineal:
La figura 1 ilustra la definicin del intervalo lineal de un
mtodo analtico, que va desde la concentracin ms
pequea a la que se puede realizar en medidas cuantitativas
(lmite de cuantificacin, LOQ) hasta la concentracin a la
que la curva de calibrado se desva de la linealidad (lmite de
linealidad, LOL).
Para las medidas cuantitativas se toma como lmite inferior, en general, la que
corresponde a diez veces la desviacin estndar de las medidas repetidas en un
blanco o 10S
bl

Seleccin de un mtodo analtico
2.- Caractersticas de funcionamiento de los instrumentos;
parmetros de calidad
Intervalo lineal:
Figura 1. Intervalo lineal de un mtodo analtico. LOQ = lmite de
cuantificacin; LOL = lmite de linealidad.
Seleccin de un mtodo analtico
2.- Caractersticas de funcionamiento de los instrumentos;
parmetros de calidad
Selectividad:
La selectividad de un mtodo analtico indica el grado de
ausencia de interferencias con otras especies que
contiene la matriz de la muestra.
Seleccin de un mtodo analtico
2.- Caractersticas de funcionamiento de los instrumentos;
parmetros de calidad
Selectividad:
Considrese, por ejemplo, una muestra que contiene un
analito A as como dos especies potencialmente
interferentes B y C. Si c
A
, c
B
y c
C
son las concentraciones
de las tres especies, y m
A
, m
B
y m
C
corresponden a su
sensibilidad de calibrado, la seal total del instrumento
vendr dada por:
bl C C B B A A
S c m c m c m S + + + =
Seleccin de un mtodo analtico
2.- Caractersticas de funcionamiento de los instrumentos;
parmetros de calidad
Selectividad:
Se define ahora el coeficiente de selectividad de B
respecto a A como
El coeficiente de selectividad indica, por tanto, la
respuesta relativa del mtodo para la especie B cuando
se compara con A.
A
B
A B
m
m
k =
,
Seleccin de un mtodo analtico
2.- Caractersticas de funcionamiento de los instrumentos;
parmetros de calidad
Selectividad:
Un coeficiente similar para C con respecto a A ser
La sustitucin de estas relaciones en la ecuacin anterior
conduce a
A
C
A C
m
m
k =
,
( )
bl C A C B A B A A
S c k c k c m S + + + =
, ,
Seleccin de un mtodo analtico
2.- Caractersticas de funcionamiento de los instrumentos;
parmetros de calidad
Selectividad:
Los coeficientes de selectividad pueden variar desde cero
(no hay interferencia) hasta valores bastante superiores a
uno.
Los coeficientes de selectividad son parmetros de calidad
tiles para informar sobre la selectividad de los mtodos
analticos. Lamentablemente no se usan mucho excepto
para caracterizar el funcionamiento de los electrodos
selectivos de iones.
Calibracin de los mtodos
instrumentales
Todos los mtodos instrumentales, excepto dos, requieren
una calibracin, proceso que relaciona la seal analtica
medida con la concentracin del analito.

Los tres mtodos ms frecuentemente utilizados para la
calibracin son:
curva de calibrado
adicin estndar
patrn interno
Calibracin de los mtodos
instrumentales
Curvas de calibrado
Para realizar este mtodo se introducen en el instrumento
varios patrones que contienen concentraciones exactamente
conocidas del analito y se registra la seal instrumental.
Normalmente esta seal se corrige con la correspondiente
seal obtenida con el blanco.

En condiciones ideales el blanco contiene todos los
componentes de la muestra original excepto el analito.
Calibracin de los mtodos
instrumentales
Curvas de calibrado
Figura 1. Curva de calibracin tpica, absorbancia corregida
frente concentracin del patrn.
Ecuacin de la curva
se obtiene por mnimos
cuadrados
El xito del mtodo de la curva de calibrado depende, en
gran medida, de la exactitud que tengan la concentracin
de los patrones y de lo que se parezca la matriz de los
patrones a la de las muestras que se analizan.
Lamentablemente reproducir la matriz de muestras
complejas suele ser difcil o imposible y sus efectos dan
lugar a errores por interferencias. Para minimizarlas, a
menudo, es necesario separar el analito del interferente
antes de medir la seal del instrumento.
Calibracin de los mtodos
instrumentales
Curvas de calibrado
Mtodo de la adicin estndar
Calibracin de los mtodos
instrumentales
El mtodo de la adicin estndar es especialmente til
para analizar muestras complejas en las que la
probabilidad de que se produzcan efectos debidos a la
matriz es considerable.
Una de las formas ms habituales de aplicar el mtodo es
la siguiente:
Mtodo de la adicin estndar
Calibracin de los mtodos
instrumentales
1) Varias alcuotas idnticas V
x
de la disolucin problema
con una concentracin C
x
se transfieren a matraces
aforados de volumen V
t
.
V
x
= 1 ml
V
x
= 1 ml V
x
= 1 ml V
x
= 1 ml
V
t
= 50 ml
Mtodo de la adicin estndar
Calibracin de los mtodos
instrumentales
2) A cada uno de ellos, se le aade un volumen variable
(V
s
, ml) de una disolucin patrn del analito que tiene una
concentracin conocida C
s
.
V
x
= 1 ml
V
s
= 0,5 ml
V
x
= 1 ml
V
s
= 1 ml
V
x
= 1 ml
V
s
= 1,5 ml
V
x
= 1 ml
V
s
= 2 ml
V
t
= 50 ml
Mtodo de la adicin estndar
Calibracin de los mtodos
instrumentales
3) Se aaden entonces los reactivos adecuados y cada
disolucin se diluye hasta un volumen determinado (V
t
).
4) Se realizan las medidas instrumentales en cada una de
esas disoluciones dando una seal S en el instrumento.
Mtodo de la adicin estndar
Calibracin de los mtodos
instrumentales
Si la respuesta del instrumento es proporcional a la
concentracin, como debe ser para que el mtodo sea
aplicable, se puede escribir que:
Donde k es una constante de proporcionalidad.
t
x x
t
s s
V
C kV
V
C kV
S + =
Mtodo de la adicin estndar
Calibracin de los mtodos
instrumentales
La representacin de S, en funcin de V
s
, es una lnea
recta de la forma:
Donde la pendiente m y la ordenada en el origen b
vienen dadas por:
b mV S
s
+ =
t
s
V
kC
m =
t
x x
V
C kV
b =
Mtodo de la adicin estndar
Calibracin de los mtodos
instrumentales
Figura 1. Representacin grfica de la recta de calibrado
en un mtodo de adicin estndar.
Mtodo de la adicin estndar
Calibracin de los mtodos
instrumentales
Para determinar m y b puede utilizarse un tratamiento por
mnimos cuadrados; C
x
se puede obtener a partir de la
relacin entre estas dos cantidades y los valores conocidos
de C
s
, V
x
y V
s
. As,
o
s
x x
t s
t x x
C
C V
V kC
V C kV
m
b
= =
x
s
x
mV
bC
C =
Mtodo de la adicin estndar
Calibracin de los mtodos
instrumentales
Entonces, la varianza relativa del resultado (S
c
/C
x
)
2
se
toma como la suma de las varianzas relativas de m y b.
Esto es,
Se puede obtener el valor de la desviacin estndar en C
x
,
suponiendo que las incertidumbres en C
s
, V
s
y V
t
, son
despreciables con respecto a las de m y b.
Donde S
m
, es la desviacin estndar de la pendiente y S
b
es la desviacin
estndar de la ordenada en el origen.
2 2
2
|
.
|

\
|
+ |
.
|

\
|
=
|
|
.
|

\
|
b
s
m
s
C
s
b m
x
c
Mtodo de la adicin estndar
Calibracin de los mtodos
instrumentales
La raz cuadrada de esta ecuacin da:
2 2
|
.
|

\
|
+ |
.
|

\
|
=
b
s
m
s
C s
b m
x c
Mtodo de la adicin estndar
Calibracin de los mtodos
instrumentales
La diferencia entre el volumen aadido de patrn en el
origen (cero) y el valor del volumen en el punto de
interseccin de la lnea recta con el eje de las x (V
s
)
o
, es el
volumen de patrn que equivale a la cantidad de analito en
la muestra.
Tambin se puede dibujar manualmente una grfica de los
datos, y la parte recta de la misma se extrapola hasta el
origen como se muestra en la lnea de puntos de la figura 1.
Figura 1. Representacin grfica de la recta de calibrado en
un mtodo de adicin estndar.
Mtodo de la adicin estndar
Calibracin de los mtodos
instrumentales
Resolviendo esta ecuacin para C
x
, se obtiene:
Adems, la interseccin con el eje de las x corresponde a la
seal cero del instrumento, as que se puede considerar:
0 = + =
t
x x
t
s s
V
C kV
V
C kV
S
( )
x
s s
x
V
C V
C
0
=
Mtodo de la adicin estndar
Calibracin de los mtodos
instrumentales
Con el objeto de ahorrar tiempo o muestra, es posible realizar
este mtodo utilizando solamente dos volmenes de muestra,
y en este caso se har una nica adicin, de V
s
ml del patrn
a una de las dos muestras y entonces:
Donde S
1
y S
2
son las seales analticas de la muestra diluida
y de la muestra diluida ms patrn aadido, respectivamente.
t
x x
t
s s
V
C kV
V
C kV
S + =
2
t
x x
V
C kV
S =
1
Mtodo de la adicin estndar
Calibracin de los mtodos
instrumentales
Dividiendo la segunda ecuacin por la primera, despus de
reordenar se obtiene:
( )
x
s s
x
V S S
C V S
C
1 2
1

=
Mtodo del patrn interno
Calibracin de los mtodos
instrumentales
En un anlisis, un patrn interno es una sustancia que se
aade a todas las muestras, blancos y patrones de
calibrado en una cantidad fija.
Tambin puede ser un componente mayoritario de las
muestras y los patrones pero que est en una
concentracin lo suficientemente elevada como para que
se pueda considerar que es la misma en todos los casos.
Mtodo del patrn interno
Calibracin de los mtodos
instrumentales
En este caso el calibrado es una representacin grfica del
cociente entre la seal del analito y la seal del patrn
interno en funcin de la concentracin de analito de los
patrones.
En las muestras, este cociente se utiliza para determinar la
concentracin de analito a partir de la curva de calibrado.
S
e

a
l

d
e
l

a
n
a
l
i
t
o

/

S
e

a
l

d
e
l

p
a
t
r

n

i
n
t
e
r
n
o

Concentracin de analito de los patrones
Figura 2. Representacin grfica de la recta de calibrado
en un mtodo del patrn interno.
Mtodo del patrn interno
Calibracin de los mtodos
instrumentales
Si se elige y se usa adecuadamente un patrn interno, se
pueden compensar algunos errores aleatorios o
sistemticos como por ejemplo:
fluctuaciones de las seales
efectos de la matriz
errores que se producen en la preparacin de la muestra,
disolucin y filtrado

Mtodo del patrn interno
Calibracin de los mtodos
instrumentales
hallar la sustancia adecuada que sirva a estos efectos, as
como para incorporarla a las muestras y a los patrones de
forma reproducible.
Al aplicar este mtodo se debe tener cuidado de lo siguiente:
asegurar la ausencia de patrn interno en la matriz de la
muestra de tal forma que la nica procedencia del patrn sea
la cantidad aadida.
Mtodo del patrn interno
Calibracin de los mtodos
instrumentales
Por ejemplo, el litio es un patrn interno adecuado para las
determinaciones de sodio o potasio en suero sanguneo,
debido a que el comportamiento qumico del litio es similar al
de ambos analitos pero no aparece de forma natural en la
sangre.