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INMUNIDAD CELULAR

METODOS DE LABORATORIO Dr. Folch

SEPARACION DE POBLACIONES CELULARES
CENTRIFUGACIÓN DIFERENCIAL a) b) c) d) Linfocitos Polimorfonucleares neutrófilos Monocitos Eosinófilos y basófilos

.

Igs de membrana Linfocitos T: CD-3 Linfo. CD-16 Célula NKT: CD-56. Citotóxico CD-3. Helper / hiper. FoxP3 . CD-8 Célula NK: CD-56.retardada CD-3. CD25. CD-4 Linfo. CD-3 Célula madre: CD-34 Macrófagos: CD-14 Otras: CD-4.ESTUDIO DE SUBPOBLACIONES LINFOCITARIAS • • • • • • • • • • Leucocitos totales: CD-45 Linfocitos B: CD-19.

SEPARACION DE POBLACIONES CELULARES • SEPARACION INMUNOMAGNÉTICA • CITOMETRÍA DE FLUJO (SORTING) .

IMMUNOBEADS .

Perlas magnéticas pueden ser separadas .

.

.

SEPARACION DE POBLACIONES CELULARES • SEPARACION INMUNOMAGNÉTICA – CITOMETRÍA DE FLUJO (SORTING) .

Un esquema de citometría .

citómetro .

Células CD-3. CD-4 positivas .

Medicion de subpoblaciones .

Un ejemplo de citometría de flujo .

de respuesta inmunosuprimidos en pacientes con linfomas o leucemias permite su tipificación .¿Qué nos pueden decir las subpoblaciones celulares? inmunodeficiencias capacidad de responder enfermos de Ca cap.

Pruebas funcionales Proliferción celular Citotoxicidad .

Activación de linfocitos:una forma de evaluar su capacidad funcional Proliferación Medición de citoquinas Medición de Ca intracelular Expresión de IL 2-R ¿CUANDO SE PIDE? .

Citotoxicidad • Linfocitos T CD-8 • Células NK y NKT • Células macrofagicas y otras (ADCC) .

Apoptosis: una forma de morir • Fragmentacion del DNA • Medición de anexina V • Determinación de caspasas Significado biológico de la Apóptosis .

Fragmentación DNA nuclear .

Célula apoptótica .

Producción de citoquinas • • • • • RT-PCR Microarrays Elisa Ensayo biológico Tinción intracelular .

microarray .

Tinción de citoquinas intracitoplasmáticas .

Inmunidad celular natural • Neutrófilos Fagocitosis Actividad microbicida reducción de azul de nitrotetrazolium quemiluminiscencia • Eosinófilos • Monocitos generación de LTC4. ensayo de unión superoxido fagocitosis actividad microbicida producción de citoquinas (monoquinas) .

El neutrofilo .

Neutrofilo y mecanismos de ataque a patógenos .

Reacción de azul de Nitrotetrazolium .

Emisión de luz .

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