Membrane biologice Membranele celulare prezente n toate celulele sunt expresia evident a organizrii moleculelor n structuri funcionale.

Chiar dac membranele prezint o diversitate pronunat, ele au n comun trsturi caracteristice: funcionalitatea, compoziia, orientarea constituenilor polari i nepolari, natura interaciilor realizate ntre molecule constituente. n acest sens, membranele reprezint funcional, bariere de separare ntre compartimente apoase care au compoziii diferite, care permit transportul limitat al componenilor sistemelor apoase. Membranele sunt constituite din lipide i proteine structurale i funcionale. Lipidele membranare sunt preponderent polare: fosfogliceride, sfingolipide, glicolipide, la care se adaug colesterolul liber. Compoziia n componente lipidice a membranelor determin natura i funcia acestora (Tabel 7-8). n genere raportul colesterol/fosfatidiletanolamin este o constant a structurii membranare, iar raportul fosfatidilcolin/sfingomielin este dependent de specie.
Tabel 7-8. Compoziia n lipide a unor membrane biologice

Lipidul Acidul fosfatidic (%) Fosfatidilcolina (%) Fosfatidiletanolamina (%) Colesterol (%)

Membrana eritrocitar 1,5 19 18 25

Membrana neuronal 0,5 10 20 26

Peretele bacterian E.Coli 65 -

Tehnicile moderne de investigaie au artat c moleculele lipidelor se aranjeaz n structuri bistratificate n constituirea membranelor (Fig. 7-45). Astfel, zonele nepolare lipidice sunt orientate spre interior, interacionnd prin intermediul forelor hidrofobe, n absena contactului intim cu apa, iar zonele hidrofile ale lipidelor se orienteaz nspre exterior, n contact direct cu lichidele biologice.

Fig. 7-45. Orientarea lipidelor n dublul strat pentru constituirea membranelor biologice

Teoria dublului strat lipidic, care st la baza structurii tuturor membranelor, este verificat de coeficienii de permeabilitate ai diferitelor substane (Fig. 7-46). Proteinele care intr n constituia membranelor difer de la o membran la alta, diferind n acelai timp i raportul proteine/lipide care definesc membrana (Tabel 7-9).

Fig. 7-46. Coeficienii de permeabilitate ai unor ioni i molecule prin dublul strat lipidic Tabel 7-9. Compoziia chimic a unor membrane biologice

Membrana Eritrocit uman

Proteine (%) 49

Lipide (%) 43

Zaharide (%) 8

Mielin Perete bacterian Gram pozitiv

18 75

79 25

3 -

Proteinele care intr n structura membranelor pot fi grupate n extrinseci i intrinseci. Proteinele extrinseci (periferice) interacioneaz slab cu suprafaa dublului strat lipidic i sunt uor extractibile (soluii saline). Proteinele intrinseci (integrate) interacioneaz puternic cu dublul strat lipidic prin intermediul zonelor -helicale i pot fi eliminate dup denaturare cu detergeni sau guanidin. Alctuirea complex a unei membrane reprezint o structur limit la care fosfolipidele ajung gradat sub form bistratificat i sub aceast form se asociaz cu proteinele formnd sisteme stabile lipoproteice. De-a lungul timpului s-au elaborat mai multe modele de complexe lipoproteice care s determine constituirea membranelor. Printre acestea se numr: modelul sandwich de proteine care conin n partea interioar dublul strat lipidic (Fig.7-47a); modelul mixt n care membrana este considerat tot un sandwich de proteine i puine lipide n exterior i un complex de lipide i proteine n interior; modelul mixt constituit din uniti repetitive n care lipidele i proteinele formeaz complexe lipoproteice individuale globulare care interacioneaz reciproc (Fig.7-47b); modelul mozaic fluid n care membrana celular este considerat ca o soluie de proteine globulare i lipide, orientate bidimensional ntr-un solvent viscos (matrice) constituit din dublul strat fosfolipidic (Fig.7-47c).

Fig. 7-47. Modele de membrane: a. model sandwich; b. model mixt constituit din uniti globulare repetitive; c. model mozaic fluid.

Modelul de membran mozaic fluid elaborat de Singer i Nicolson corecteaz inconsistena termodinamic a modelelor clasice de tip trilaminar (dublu strat lipidic cuprins ntre dou straturi proteice). Modelele trilaminare sunt termodinamic instabile datorit faptului c zonele nepolare din proteinele membranare sunt expuse apei, fiind necesar energie din exterior pentru stabilizare. Starea de energie liber minim este atins n membranele n ipoteza mozaic fluid, n mediul apos, cnd resturile nepolare ale aminoacizilor din proteine i catenele hidrocarbonate lipidice sunt orientate nct s evite contactul cu apa, iar cele polare din proteine, lipide i zaharide sunt orientate n contact direct cu apa. Din aceast cauz membranele biologice sunt structuri asimetrice. Moleculele proteice integrate pot traversa stratul dublu lipidic n aa fel nct s aib contact cu mediile biologice de pe ambele pri. Moleculele nepolare i nencrcate electric pot traversa pasiv membranele prin difuzie translaional, cu viteze determinate de viscozitatea lipidelor. Transportul activ, n opoziie cu transportul pasiv, presupune deplasarea ionilor anorganici sau a substanelor puternic polare mpotriva gradientului de concentraie. Dac n transportul pasiv sistemul pierde energie liber (exergonic) n transportul activ sistemul ctig energie liber (endergonic). Procesul endergonic este cuplat cu hidroliza exergonic a ATP. Dac substana transportat este neionic dar polar, aceasta necesit pentru transport o substan transportoare (carrier) i astfel se realizeaz transportul mediat (facilitat). Pentru substanele ncrcate electric intervin n procesul de transport dou gradiente: un gradient de potenial (de sarcin electric) i un gradient de mas. n procesele de transport mediate pasiv sau activ, variaia vitezei de transport n raport cu concentraia substanei transportate este descris de o hiperbol echilater, asemntoare cu cinetica MichaelisMenten din cinetica enzimatic (Fig. 7-48). Deci sistemele de transport mediat prin membrane conin un situs de legare a substanei transportate, complementar, asemntor situsului catalitic specific enzimelor (Fig. 9-11).

Fig. 7-48. Curba de corelare n transportul mediat prin membrane

Membranele sunt structuri foarte dinamice care includ difuzia lateral i rotaia moleculelor, micarea segmentelor catenelor i micarea flip-flop dintre cele dou monostraturi ale bistratului lipidic. Altfel zis, mobilitatea exprim viteza de reorientare a moleculelor, n timp. Fluiditatea membranelor este dependent de numeroi factori (Tabel 7-10). Scderea colesterolului membranar, a proteinelor integrale, creterea nesaturrii acizilor grai i descreterea ionilor de calciu, determin creterea fluiditii membranare. Membranele biologice sunt structuri lipoproteice care delimiteaz organitele celulare de citosol i celulele de mediul exterior. Acestea sunt implicate n recepia unor semnale din mediu, n realizarea unor reacii biochimice de suprafa i n transportul selectiv al substanelor. Membranele sunt deci structuri fluide n care stratul dublu lipidic are o grosime cuprins ntre 5 i 10 nm, a cror integritate este asigurat de interaciile de natur slab dintre catenele hidrofobe, manifestate n interiorul lor. Aceast structur este o barier pentru trecerea moleculelor hidrosolubile sau a ionilor.
Tabel 7-10. Factori care influeneaz fluiditatea membranar

Factorii

Parametrii

Fizici Chimici

Temperatura Presiunea Potenialul membranar Nesaturarea acizilor grai Coninutul n colesterol Coninutul de lipide peroxidate Coninutul de vitamine liposolubile Coninutul de proteine integrate Coninutul de proteine periferice Valoarea pH-ului i fora ionic Coninutul de detergeni Existena polimerilor solubili Capacitatea de legare a anticorpilor

Datorit diferitelor tipuri de lipide i proteine care intr n alctuirea membranelor, acestea prezint o structur asimetric, materializat prin funcionalitate diferit pe cele dou fee. Asimetria transversal a membranelor induce i o polarizare electric, de regul orientat cu sarcina negativ spre interior. Diferena de potenial dintre cele dou fee ale membranelor este de aproximativ 60mV i joac un rol esenial n excitabilitate, transportul de substane i conversia chimic a energiei. Proteinele i lipidele constituente ale membranelor prezint o circulaie liber continu materializat printr-o micare de translaie n planul membranei, o micare de rotaie n jurul unei axe perpendiculare pe suprafaa membranar i prin micri de rotaie n jurul unor axe din planul de separaie al celor dou monostraturi lipidice (flip-flop). Micrile flip-flop sunt consumatoare de energie i se produc cu o vitez redus, necesitnd traversarea zonei hidrofobe din membran de ctre zona hidrofil a moleculelor care efectueaz rotaia. Asocierile proteice, lipoproteice i lipidice prezente de-a lungul membranelor, confer acestora un aspect de mas mobil, caracterizat de o asimetrie longitudinal. n condiii de temperatur joas, membrana prezint grosime maxim a dublului strat i rigiditate maxim datorit lungimii maxime a zonelor hidrofobe din dublul strat, care delimiteaz o suprafa minim nchis. Prin creterea temperaturii, agitaia termic crete determinnd creterea mobilitii catenelor hidrofobe constituente ale dublului strat. Datorit modificrilor conformaionale, catenele hidrocarbonate din dublul strat din poziii opuse se ntreptrund (Fig. 7-49) determinnd scderea grosimii membranare i a rigiditii acesteia, concomitent cu creterea suprafeei delimitate. Dac dublul strat lipidic asigur structura fundamental a membranelor, proteinele membranare determin funcionalitatea acestora. Membranele celulare se difereniaz unele fa de altele dependent de funciile pe care celulele le au la nivelul esuturilor. Mitocondria este organitul celular cu rol preponderent energetic i este alctuit din dou membrane, una extern neted i elastic i cealalt intern rugoas, cu suprafa funcional mare. Membranele mitrocondriale sunt constituite preponderent din proteine (60-65%) care au rol structural sau enzimatic. Proteinele structurale interacioneaz prin intermediul forelor hidrofobe cu alte proteine structurale sau proteinenzime constituind complexe insolubile, care la rndul lor interacioneaz cu fosfolipidele constituind astfel membranele mitocondriale. Majoritatea proteinelor din membranele mitocondriale sunt enzime respiratorii i se constituie n uniti respiratorii, implicate n lanul de transport electronic.

Fig. 7-49. Modificri produse n structura i comportarea fizico-mecanic

a membranelor, prin nclzirea acestora

Membrana eritrocitar are funcii mecanice i de transport, lipidele reprezentnd componenta preponderent, alturi de unele glicoproteine. Majoritatea lipidelor membranare sunt glicerofosfolipide, care au capacitatea de a genera dublul strat lipidic datorit caracterului amfifil. Aproximativ 25% din lipidele membranare eritrocitare l reprezint colesterolul, care se intercaleaz paralel sau perpendicular pe planul membranei. n genere, proteinele membranare eritrocitare au caracter hidrofob i sunt intercalate n dublul strat lipidic, zonele hidrofile extinzndu-se la suprafaa celulelor. Spectrina, reprezentnd aproximativ 25% din totalul proteinelor membranei eritrocitare, este constituit din dou catene polipeptidice similare, care sunt constituite la rndul lor din multipli ai unui numr de 106 resturi de aminoacizi. Spectrina strbate membrana eritrocitar, fr a o strpunge i are rolul de a constitui sistemul contractil membranar care este rspunztor de proprietile contractile ale eritrocitelor. Pentru realizarea traversrii substanelor prin membrane, acestea sunt prevzute cu canale, care prezint similitudine arhitectural. Acestea sunt segmente helicoidale, organizate n conuri n jurul canalului central, care converg ntr-un punct denumit poarta canalului. Prin rotaia segmentelor, diametrul porului crete n dreptul porii i n acest mod se realizeaz deschiderea porului. Selectivitatea ionic este determinat de sarcin resturilor aminoacizilor prezeni n vestibulul intern i extern al porului (Fig. 7-50).

Fig. 7-50. Stuctura schematic a unui por membranar

Conform acestor concepii, canalele ionice sunt constituente membranare celulare care permit schimbul transmembranar al ionilor conform gradientului lor electrochimic. Canalele ionice pot fi considerate elemente fundamentale n semnalizarea celular, fiind implicate n transmisia influxului nervos, contracia muscular, eliberarea i rspunsul hormonal, transportul epitelial i traducerea semnalelor mecanice. Dup stimulul care controleaz deschiderea sau nchiderea canalului, se disting canale dependente de potenial, de fixare a unui ligand sau de tensiune membranar. Glicoforina A este o glicoprotein amfifil integral constituit din 3 segmente distincte: un segment constituit din resturi de aminoacizi cu caracter hidrofob imersat n dublul strat lipidic; un segment constituit din resturi de aminoacizi cu caracter hidrofil, care include i captul C-terminal al proteinei, dincolo de partea interioar a membranei; un segment constituit din resturi de aminoacizi cu caracter hidrofil, care include i captul aminoterminal, care se extinde n afara membranei n mediul apos. Acest ultim segment are legate covalent 16 lanuri oligozaharidice (Fig. 7-51). Existena lanurilor oligozaharidice pe captul aminoterminal al glicoforinei, alturi de alte oligozaharide prezente pe alte glicoproteine sau glicolipide membranare, determin apariia antigenelor de grup sanguin i respectiv a receptorilor i markerilor de recunoatere celular. Lanurile oligozaharidice de pe suprafaa exterioar membranar constituie un strat pufos care cptuete celulele, denumit glicocalix. Pentru eritrocitele umane sunt cunoscui aproape 100 determinani de grup sanguin, care reprezint 15 sisteme de grup sanguin, genetic distincte. Dintre acestea doar dou sisteme de grup sanguin prezint importan chimic major: sistemul ABO

(Landsteiner) i sistemul Rh. Evidenierea analitic a grupelor sanguine se realizeaz cu ajutorul anticorpilor specifici sau a lectinelor specifice, extrase din plante.

Fig. 7-51. Localizarea glicoforinei A fa de dublul strat lipidic din membrana eritrocitar uman

Sistemul ABO se distinge prin prezena a trei markeri de grup sanguin, antigenele A, B, H, care sunt componeni ai glicocalixului eritrocitar (Fig. 7-52). Schematizarea determinanilor antigenici eritrocitari este prezentat n tabelul 7-11. Componena antigenelor A, B, H difer doar prin natura resturilor monozaharidice din capetele nereductoare. Determinantul antigenic H este precursorul determinanilor antigenici oligozaharidici de tip A i B i este caracteristic indivizilor de tip sanguin O. Schema determinrii grupelor sanguine cu ajutorul lectinelor este prezentat n figura 7-53. Indivizii de tip sanguin A posed o enzim care adaug specific un rest de N-acetilgalactozamin captului nereductor oligozaharidic de tip H. Indivizii de tip sanguin B posed o alt enzim care adaug specific un rest de galactoz captului nereductor oligozaharidic de tip H. Diferena funcional a celor dou enzime const probabil n substituirea unui rest de aminoacid cu altul, n structura primar polipeptidic a acestora. Indivizii cu eritrocite de tip A posed anticorpi anti determinant antigenic B, n plasma sanguin, iar cei care au celule de tip B posed n plasma sanguin anticorpi anti A.
Tabel 7-11. Componena determinanilor antigenici eritrocitari

Determinantul H A

Structura determinantului antigenic - GluNAc-Gal--(1-4)-L-Fucoza--(1-2) - GluNAc-Gal--(1-4)-L-Fucoza--(1-2) GalNAc--(1-3)

- GluNAc-Gal--(1-4)-L-Fucoza--(1-2) Gal--(1-3)

Fig. 7-52. Structurile determinanilor antigenici: H (a); A (b); B (c)

Indivizii care au eritrocite care posed ambii determinani antigenici A i B (tip AB) nu posed n plasma sanguin anticorpi anti A i respectiv anti B. Indivizii de tip O, care la nivelul eritrocitelor nu posed nici antigenul A nici antigenul B, posed n plasma sanguin att anticorpi anti A ct i anticorpi anti B.

Fig.7-53. Schema de determinare a grupelor sanguine cu ajutorul lectinelor

Amestecarea unor cantiti egale de snge de grupe diferite produce ntotdeauna aglutinarea, chiar dac donatorul universal (tip O) poate fi transfuzat n cantiti care s nu depeasc 500ml oricrui individ, iar acceptorul universal (tip AB) poate primi pn la aceeai cantitate de snge de la oricare donator. Prin depirea acestor limite i prin transfuzia sngelui de tip A individului de tip B sau invers, se determin aglutinri masive la nivelul sngelui primitorului, care adesea conduc la blocaje fatale ale vaselor de snge. Din aceast cauz, n transfuziile masive, pentru prevenirea aglutinrii, se administreaz exclusiv snge de izogrup. Structura antigenelor care determin sistemul ABO se transmite ereditar. Spre deosebire de anticorpii anti A i anti B din sistemul ABO, n sistemul Rh nu exist anticorpi naturali, ei apar dup imunizarea mamei Rh(-) cu hematiile Rh(+) sau dup transfuzii multiple cu snge provenit din donatori Rh(+) acceptorilor Rh(-). Antigenul de tip Rh este un aglutinogen ntlnit cu o frecven de 85% n populaia alb, ntlnit de asemenea i n maimuele Rhesus de la care provine i denumirea. Persoanele care nu posed acest antigen la nivelul eritrocitelor reprezint aproximativ 15% i din aceast cauz sunt categorisite ca Rh(-). Prin imunizarea indivizilor Rh(-) cu eritrocite Rh(+) apar la nivel circulator anticorpi capabili s recunoasc i s hemolizeze eritrocitele Rh(+). n timpul sarcinii unei mame Rh(-) cu ft Rh(+) (de regul la a doua sarcin cu ft Rh(+) se biosintetizeaz anticorpi anti eritrocit Rh(+) care strbat placenta determinnd hemoliza eritrocitelor Rh(+) fetale, dezvoltndu-se astfel eritroblastoza fetal. n aceast afeciune transportul oxigenului se realizeaz defectuos n organismul fetal, fiind afectat dezvoltarea sistemului nervos i este favorizat apariia unor edeme ale ftului i placentei. Incompatibilitatea Rh feto-matern este astfel o boal foarte grav, care poate determina moartea noului nscut n primele zile de via.