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ESTUDIO DE DIHÍBRIDOS (wdp x fb) EN Drosophila melanogaster CON LIGACION CROMOSOMICA AL SEXO (w-f) Y ENTRECRUZAMIENTO DE ALELOS (b-dp

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C. Sandra, R Andrea, R. Jennifer.
Laboratorio de Genética, Universidad del Tolima, Barrio Santa Helena, Ibagué- Colombia.

Resumen Se realizó un experimento con líneas de mutantes de Drosophila melanogaster para comprobar los patrones hereditarios en un cruce black forked (bf) ♀ con white dumpy (wdp) ♂, observando la expresión de caracteres dominantes, recesivos, ligados al sexo y los posibles entrecruzamientos. Se obtuvo de sucesivamente la Filial 1 y 2; fenotipos silvestres en hembras y Forked en machos se observaron para la primera generación y 12 mutaciones diferentes para la segunda. Los resultados se analizaron mediante el uso de la prueba de Chi- cuadrado con el fin de verificar la asertividad en experimento. Finalmente se concluye que hay asociación entre las variables estudiadas (ligamiento al sexo y probabilidad de recombinación) pero sin embargo, los datos presentan un margen de error que se debe al azar, a problemas en el conteo realizado o con la identificación de las mutaciones. Palabras clave: Drosophila melanogaster, mutaciones, dihíbrido, ligado al sexo, entrecruzamiento, Chicuadrado. INTRODUCCION Uno de los organismos más utilizados en experimentos de genética, es la Drosophila melanogaster, o mosca de la fruta, que se caracteriza por ser de pequeño (de 2 a 3 mm), por tener un ciclo vital corto (10 – 11 días a 25ºC) y por tener un elevado número de descendientes por pareja aproximadamente poner 500 huevos. Drosophila es ideal como modelo biológico experimental porque es fácil de reproducir y manejar la cual se puede mantener en viales de vidrio alimentándola con una papilla compuesta por fruta (banano), levadura, azúcar y/o melaza, mezclada con agar-agar. Drosophila melanogaster tiene 4 parejas de cromosomas: Los cromosomas sexuales X y Y (I) y 3 parejas de autosomas (II, III, IV). Los cromosomas Y y IV son pequeños y telocéntricos y la mayoría de los genes se localizan en los cromosomas X, II y III que son metacéntricos y grandes. El cromosoma Y es heterogametico y contiene algunos genes relacionados con la espermatogénesis. La determinación del sexo depende de la relación entre el número de cromosomas X (nX) y el de complementos autosomicos que lleve el individuo (nA); si (nX / nA) = 1 el individuo será hembra y si (nX / nA) = 0,5 el individuo será macho. El fenotipo normal de la Drosophila melanogaster corresponde a cuerpo de color marrón claro, ojos grandes y rojos, y alas que sobrepasan la longitud del abdomen y son transparentes y ligeramente puntiagudas. Las nerviaciones de las alas están compuestas por 5 venas longitudinales y dos transversales. En los machos, la parte distal dorsal del abdomen es oscura y en la parte ventral se encuentra el pene rodeado por las placas genitales (que le sirven para sujetarse a la hembra), son más pequeños que las hembras y en el tarso del primer par de patas, poseen una estructura compuesta de unos pelos gruesos y cortos, llamada “peine sexual” que permite distinguir sexos

Imagen tomada de Archivo Fig.php?id=57 El experimento llevado a cabo con Drosophila se fundamentaba en el estudio de las siguientes mutaciones: Dumpy (dp) es un mutante autosómico recesivo situado en la posición 13 del cromosoma dos. y cambia la secuencia de aminoácidos que codifica una proteína funcional. la mutación ocurre por errores de marco de lectura.uniandes. de coloración blanquecina.co/genetica/no do. Este fenotipo se observa en expresión de los pigmentos que dan la coloración del cuerpo. en la parte ventral el último segmento lleva la placa vaginal. Se expresa con un color de cuerpo negro mate. Yellow (y). que . Posee alas truncadas y reducidas a 2/3 de su longitud. Estudios realizados revelan que hay cierto tipo defectos visuales en estos mutantes. debido a la descarboxilación del aspartato origina entonces la melaninización. como desplazamiento y dominio del vuelo.edu. incluyendo la tráquea y las células del tendón del músculo. El gen produce la beta-alanina.php?id=57 Este gen corresponde a un fenotipo mutante que afecta el tamaño y la forma de las extremidades. antes de que emerja el adulto.co/genetica/no do. White (w). median el anclaje de los músculos de la cutícula.incluso en las pupas maduras.uniandes. Mutación dumpy (dp). de coloración clara y terminación puntiaguda. Los patrones Fig1. Ebony (e)…etc. la cutícula torácica. En Drosophila es posible encontrar diversas mutaciones como Black (b).5 ubicado en el cromosoma dos. Mutación black (b). 3. El gen también se asocia a defectos en el proceso cuticular y no cuticular . el mutante negro en Drosophila responde anormalmente a estímulos visuales como el adecuado reconocimiento del objetivo y dirección. 2. la tráquea y piezas bucales. Tomado de http://cienciasbiologicas. Dumpy (dp). lo que genera el corrimiento de todos los codones. Dumpy se expresa en varios sitios de adhesión celular cutículaepidérmica. Drosophila Fenotipo silvestre.edu. White (w). Esto explicaría su utilidad como variación morfológica de los tejidos a través de su regulación de las propiedades mecánicas que podría poseer la mosca. lo cual sugiere un problema con las funciones de orden superior visual. Forked (f). Las hembras tiene un abdomen más grande. Fig. Black (b) corresponde a un mutante autosómico recesivo situado en la posición 48. Tomado de http://cienciasbiologicas. De acuerdo con sus fenotipos de cutícula.

como resultado del experimento es posible encontrar dimutantes como White. alas truncadas y reducidas. con ojos color blanco. 5. es decir guanina y triptófano.dumpy. Fenotipos trabajados. a los ojos durante el desarrollo de pupación. Fig. . dumpy forked con alas truncadas y setas retorcidas y trimutantes. lo anterior permite reiterar las leyes mendelianas que son imprescindibles en lo que el estudio de un gen se refiera. como white-dumpyforked (wdpf). forked y dumpy pueden estar ligadas al sexo. retorcidas y dobladas con los extremos bifurcados o totalmente doblados. Todas las anteriores mutaciones y posibles variaciones de las mismas son posibles en la cruza de individuos para Drosophila melanogaster.5 del cromosoma X. Los individuos que la presentan poseen cerdas acortadas. Tomado de archivo. Es una mutación recesiva ligada al sexo en la posición 1. Tomado de archivo White Se conoce como la primera mutación encontrada en Drosophila melanogaster. en Drosophila melanogaster existen infinidad de mutaciones que son útiles en el ejercicio de cruces dihibridos o cualquier otra forma de cruza. setas retorcidas. La proteína producida por la mutación del gen de tipo white sirve como un anclaje de unión de transporte de ATP. En general. hacer recombinación en la meiosis. Descubierta en 1910 por Thomas Hunt Morgan. White Black. Mutación forked (f). Forked (f) que es un mutante recesivo ligado al sexo situado en la posición 56. los cuales. Mutación white (w). Finalmente.Fig. 4. Mutaciones con diferentes patrones de herencia como White. Black forked mutante de cuerpo negro y setas retorcidas. Morgan realizo cruces experimentales con dicha mutación.7 ubicado en el cromosoma X. que es un mutante de ojos y ocelos color blanco y cuerpo de color negro mate. quien en cierta ocasión recogió un solo macho mutante de ojos blancos de una población de moscas que suelen tener los ojos rojos brillantes en estado silvestre. black. Cromosoma 1 y 2 en Drosophila. que lleva los precursores de los pigmentos del ojo color rojo y marrón. mutante de ojos y ocelos color blanco y alas truncadas. lo llevaron a la conclusión de que esta mutación estaba de alguna manera conectada físicamente al gen que determina el género en Drosophila. o segregarse independientemente una de otra por lo las proporciones fenotípicas y genotípicas son variables y dependen de muchos factores.

Las hembras fueron depositadas en un medio de cultivo para su mantenimiento.Nn. . espuma. iluminación como también las condiciones del medio para que se reproduzcan.e) en un frasco estéril con medio de cultivo. cepas Black forked (bf) ♀ y White dumpy (wdp) ♂ Se realizo una separación de hembras vírgenes correspondientes a Black forked (bf). controlando los factores ambientales temperatura. pero seleccionando solo los machos y descartando las hembras.. Luego de obtener un número adecuado de individuos en la F1 era necesario establecer el cruce teórico con el fin de definir las proporciones fenotípicas esperadas así poder cruzar individuos de F1 que serán ahora los parentales de la segunda generación cruzándolos de la manera anteriormente descrita. En ese momento se sacaron los parentales (P1) y se llevaron a la morgue. un individuo cuyo genotipo contiene dos alelos distintos en cada locus. humedad. un frasco eterizador. los alelos A y a se combinan con los alelos B y b con la misma probabilidad. quien realizó cruzamientos entre variedades o líneas puras que diferían en tres caracteres (AABBCC x aabbcc). A estos organismos se les conoce como polihíbridos. es decir.. se pueden formar 2n. como los alelos se combinan independientemente.. Se realizo el mismo procedimiento con la cepa white dumpy (bdp). Si los loci en estudio son bialélicos (por ejemplo: A. es decir. gotero). Como los alelos se reparten al azar entre los gametos (ley de la segregación independiente) para cada locus X. y así lo harán al combinarse los alelos C y c. los adultos machos se descartan en la morgue (frasco con alcohol). Los organismos (bf) ♀ y (wdp) ♂ se depositaron en proporciones adecuadas (15 hembras y 15 machos. p. Los polihíbridos producen tantos tipos de gametos distintos como combinaciones diferentes de n alelos hayan. Finalmente después de obtenida la F2 se separaron machos y hembras de MATERIALES Y METODOS Para el trabajo de adormecimiento.a . Un polihíbrido (ABC) es un individuo heterocigoto para n loci. cartulina plastificada.n) el genotipo polihíbrido es AaBb.Los patrones hereditarios fueron descubiertos y planteados por Gregory Mendel. y por último el material biológico. pequeño. Por otra parte. b . los 2n tipos de alelos se formarán con la misma frecuencia (1/2n). Las proporciones fenotípicas se ven afectadas por el entrecruzamiento cromosómico (crossing over) donde dos cromosomas se aparean e intercambian secciones de su ADN. llamado recombinación genética. B. embudo . Fue necesario además el uso de cloroformo para adormecer las moscas. medios de cultivo para alimentar cepas de Drosophila que en este caso se utilizo medio con banano. sexado y clasificación de las moscas fue necesario adecuar un kit de laboratorio (pincel 0. con el kit se adormecen todas las moscas y a través de una buena inspección se seleccionan las hembras vírgenes.x la mitad de los gametos serán de "tipo X" y la otra mitad de "tipo x". mediante la revisión cada seis horas de los organismos. Pasados 6 días fue posible observar una serie de larvas vermiformes blancas comiendo vorazmente del medio. N. las cuales empiezan a ascender por las paredes del frasco hasta empupar.0. Es decir.. tapa eterizadora. El resultado de este proceso es un intercambio de genes.

. NUMERO DE INDIVIDUOS OBTENIDOS EN LA DESCENDENCIA F2. En la F1 se obtiene un numero total de 198 individuos. 1/04/2011 8/04/2011 15/04/2011 ♀ Emerge conteo F2 y 23/04/2011 26/05/2011 F2 arrojo un número individuos Finalización conteo F2 RESULTADOS Y DISCUSIÓN En la filial 1 se obtiene fenotipo silvestre para hembras (♀) las cuales genotípicamente son heterocigotos para cada carácter estudiado (color de ojos. de los cuales. DE Comentarios (bf) ♀ y fueron necesarios seis días para un correcto aislamiento.cada una las mutaciones posibles en un número mínimo de 500 individuos. teniendo una mayor precaución con el aislamiento de dimutantes y trimutantes ya que se entregan vivas al cepario del laboratorio de genética de la Universidad del Tolima. GRAFICO 1. Número total de hembras 15. Los caracteres b w Dp gran de S Wf Dpf Wdp Wb bf Wdpf Wfb TOTAL ∑ TOTAL 37 69 18 115 15 6 10 5 14 1 7 339 116 43 0 40 267 0 17 0 0 21 0 0 504 843 GRAFICO 2. CRONOGRAMA ACTIVIDADES. fueron utilizados 35 machos (♂) y 40 hembras (♀) como parentales para la F2. forma de las alas y cetas). Machos: 15. Los machos (♂) son genotípicamente hemicigotos para los alelos de las mutaciones white forked (herencia ligada al sexo) expresándose solo el carácter forked y siendo silvestre dominante sobre el color de ojos White. Actividad Entrega de medios de Drosophila STOCK Siembra de hembras vírgenes y machos (P1) Emerge F1 Siembra F1xF1 Fecha 22/03/2011 dumpy y black no se expresan pero genotípicamente son heterocigotos para los alelos del macho. Se siembra una réplica con 10 individuos de cada sexo Según las proporciones TABLA 2. cuerpo. de hembras 15. MUTACION/SEX Se siembran dos ♂ O replicas cada una f10 42 con 10 machos y hembras. NUMERO DE INDIVIDUOS UTILIZADOS COMO PARENTALES DE LA F2. Machos: 15. TABLA 1. NUMERO DE INDIVIDUOS observadas se OBTENIDOS EN LA sembró F1xF1 Número total DESCENDENCIA F2.

Observado. white dumpy forked (1♂) white forked black (7♂). Los valores esperados se obtienen según las frecuencias fenotípicas del cruce teórico (véase anexos).408 ♀ α: 0.563 X2c= ♂= 233.7 X2c:233. Es posible entonces comprobar la existencia de alelos dominantes y recesivos. Para F2 se obtiene entonces en mayor proporcion al fenotipo silvestre (267♀.563 Grados de libertad: 6-1: 5 ♂ α: 0.09 X2c:263. los cuales pueden segregarse según la ubicación en el cromosoma durante la meiosis para un numero α maximo de ocho fenotipos esperados en un cruce dihibridido. 115♂=382). white forked (15♂).05 19. Puesto que los resultados son muy significativos al nivel del 1% hay evidencia suficiente para rechazar la hipótesis nula y aceptar la hipótesis alternativa.07 15. mediante la multiplicación del número de la muestra por la frecuencia para cada fenotipo.01 24. que hay entrecruzamiento o recombinación de los alelos bdp y ligamiento de los alelos wf para el sexo en Drosophila melanogaster.408 Grados de libertad: 12-1: 11 Como el valor calculado para X2c es mayor que el valor tabulado. 37♂=80).black forked(21♀. El ajuste se calcula así: X2= ∑(No. Esperado)2 No.18♂=58). 42♂=158). se dice. Hipótesis alternativa: H1: X2 >0 Existe dependencia en de los alelos ligados entrecruzamiento para en el cruce dihíbrido melanogaster. Sin embargo.black (43♀. white black (5♂).Existe segregación independiente para los alelos wf ligados al sexo y bdp para el cruce dihíbrido en Drosophila melanogaster. .No. dumpy(40♀.05 α: 0.68 α: 0.01 11. seguido de la mutación forked (116♀. los datos obtenidos no son completamente iguales a los esperados por lo cual es necesario hacer un ajuste con la prueba conocida como Chi cuadrado X2 para examinar la probabilidad de que estas desigualdades ocuran por azar. Esperado Para el análisis de los datos fue necesario plantear una prueba de hipótesis genética de la siguiente manera: Hipótesis nula: Ho: X2: 0 la segregación al sexo wf y los alelos bdp de Drosophila X2c= ♀= 263. white dumpy (10♂). Algunas mutaciones se expresaron solo para el genero masculino como: white (69♂). 14♂=35).

PROPORCIONES HEMBRAS OBSERVADAS ESPERADAS EN LA F2.01 21. 124. por lo tanto la hembra de setas (Forked) cuando se cruza con machos silvestre para este carácter.3 El ajuste de datos no es bueno. Las diferentes clases de mutaciones permiten corroborar patrones hereditarios y comprobarlos experimentalmente mediante la ejecución de cruces teóricos y la comprobación de datos obtenidos mediante la prueba (Chi. Estos resultados se le pueden atribuir a errores en el conteo y/o sexado.01 42.01 336. TABLA 4.99 62. característica para estos genes. puesto que los machos de la especie de Drosophila melanogaster son hemicigotos para los caracteres ligados al sexo.TABLA 3. 115 42 18 37 69 14 5 10 15 6 7 1 339 ESP.cuadrado).01 21.01 21.49 21. PROPORCIONES MACHOS ESPERADOS OBSERVADOS EN LA F2.01 21.99 124. Los alelos de genes recesivos ligados al sexo (f-w) se encuentran más frecuentemente en los machos que en las hembras. sin embargo las proporciones fenotípicas observadas no son muy precisas y se concluye que el modelo no es útil para procesos futuros. 42. 267 116 40 43 17 21 504 ESP. las mutaciones esperadas en el cruce teórico son efectivamente obtenidas. Los fenotipos de la F1 permiten evidenciar las leyes mendeliadas en función de la dominancia y recesividad de genes ubicados en los cromosomas autosomicos.01 42. FENOTIPO ♀ s f dp b fdp bf TOTAL OBS. DE Y problemas de fenocopia.03 21. contaminación u omisiones en el procedimiento.49 73.2 DE Y Drosophila melanogaster es una excelente modelo para el trabajo de cepas en cruces de genética.33 469. CONCLUSIONES FENOTIPO ♂ S F Dp B W Bf Wb Wdp Wfdp fdp wfb wfdp TOTAL OBS. estos caracteres no aparecen en las hembras a menos de que el progenitor paterno tenga la mutación.01 62.03 21.03 42. La cruza alelos w-f ligados al sexo y involucran el patrón de herencia cruzada. En el caso de que la mutación ligada al sexo (w) aparece en el macho progenitor. toda la descendencia masculina en F1 será igual a su progenitora. .03 21. da como resultado la desaparición del rasgo (w) en la F1 pero re aparece solo en los machos de la F2.01 21. comprobándose así el patrón de herencia que salta una generación para los genes ligados al sexo.

Universidad Complutense de Madrid. STOPFORD B.ucm. Las desviaciones mencionadas entre los valores observados y esperados del cruce en el modelo experimental dihibrido sugieren que deben ser consideradas como evidencia de ligamiento. co/genetica/nodo. mostro preocupación por el estado del presente trabajo. M13 9PT.htm Practicas de Análisis mendeliano. Los alelos para las mutaciones b-dp que se encuentran en el mismo cromosoma están ligadas. tercera edición.En las características ligadas al sexo. Editorial Mc Graw – Hill. MB.es/info/genetica/grupo d/index. Guía de trabajo online. básico para la variabilidad genética de una especie. Genética. University of Melbourne. UK PHILLIPS AM.edu. Department of Genetics. University of Manchester. BIBLIOGRAFIA Cruzamiento Poli híbrido. Manchester. Australia. Agradecimiento al docente Alejandro Bastidas por su ayuda en cálculos estadísticos y por supuesto a la docente María Eloísa Aldana. The Drosophila black enigma: the molecular and behavioural characterization of the black mutant allele.. BREMBS B. Victoria. WILKIN. School of Biological Sciences. los cuales mostraron interés por el estado del experimento y ayudaron en un mejor entendimiento del cruce teórico. quien . sin embargo en el proceso de recombinación las cromatidas no hermanas de cromosomas homólogos intercambian genes. Encontrado en: http://www. Mutantes en Drosophila. México 1992. los gametos parentales y recombinantes formados por la hembra pueden observarse en los machos de la F2 sin importar el genotipo de los mismos. KELLY LE. proceso donde se producen gametos recombinantes. WILLIAN D STANFIELD. Encontrado en http://cienciasbiologicas. Parkville. AGRADECIMIENTOS Se agradece a los asistentes del laboratorio de genética de la Universidad del Tolima. Drosophila dumpy is a gigantic extracellular protein required to maintain tension at epidermal-cuticle attachment sites. Universidad Complutense de Madrid. SMART R. Guía de trabajo online.uniandes.php?id=57. Genética de poblaciones. Universidad del los Andes. en Drosophila Melanogaster esto ocurre para hembras y no para machos. STRAUSS R.