Universidad de Sonora

Unidad Regional Sur

División de Ciencias e Ingeniería

Departamento de Químico Biológico y Agropecuarias

Manual de Prácticas de Laboratorio De Química Analítica II
Q. Guadalupe Hernández Salomón

Q. Guadalupe Morales Higuera Q. Leonardo Téllez Verdugo

NAVOJOA, SONORA

ENERO 2009

PRACTICA # 1 COLORIMETRIA DETERMINACION COLORIMÉTRICA DE NUTRIENTES EN TIERRAS OBJETIVO: Utilizar la propiedad de los compuestos químicos de colorarse cuando intervienen en reacciones químicas específicas. Aprovechar, además, que en condiciones controladas la coloración es directamente proporcional a la cantidad de compuesto. TEORIA: Algunos estudios han mostrado que se requieren 16 elementos químicos para el crecimiento saludable de las plantas. La escasez de uno solo puede afectar seriamente los rendimientos y las utilidades en la agricultura. Nutrientes primarios (N, P, K), se requieren en mayor cantidad para el desarrollo adecuado de la planta. Nutrientes secundarios (Ca, Mg, S); también se requieren en cantidades bastante sustanciales. Micronutrientes (B, Cu, Fe, Mn, Mo, Zn, Cl). Se llaman así debido a que la planta requiere de ellos en pequeñas cantidades. La planta no asimila de la tierra los otros elementos necesarios (C, O, H). PROCEDIMIENTO

1.

A 5 gramos de la muestra de tierra por analizar (que debe de estar seca y finamente molida), se añaden 10 ml de solución extractiva, se agita unos minutos y se filtra (no debe añadirse agua). Al líquido filtrado se le llama “extracto del suelo” y lleva disueltos los elementos a cuantificar.

NITROGENO NITRICO. 2. En una placa de porcelana se coloca una gota de extracto de suelo (ES) y se le agrega 4 gotas de difenilamina, se reposa 2 minutos, se agita y compara con la coloración de la tabla de Morgan adjunta. Varía, según la concentración de azul fuerte a azul pálido. NITROGENO AMONIACAL.

3.

4 gotas de ES se le agrega 2 gotas de reactivo de Nessler, se reposa 1 minuto y se compara. La coloración varía de café a amarillo.

FOSFORO. 4. 10 gotas de ES y 1 gota de molibdato de sodio y 2 gotas de oxalato estanoso, se agita y reposa un minuto. La coloración varía de azul a blanco MANGANESO 10 gotas de ES y 1 gota de KOH, agitando se agregan 2 ó 3 gotas de bencidina y se compara inmediatamente (coloración fugaz). Varía de azul verdoso a azul no muy intenso. MAGNESIO 10 gotas de ES, 1 gota de KOH y 3 gotas de amarillo de titanio, se agita y se reposa 1 minuto. La coloración varía de rojo carmín a amarillo naranja. POTASIO

5. 6.

7.
CALCIO

En un tubo pequeño de 1 cm. de diámetro y fondo plano se colocan 10 gotas de ES, 1 gota de cobalnitrito de sodio y 12 gotas de alcohol isopropílico. Se reposa 2 minutos y se compara verticalmente con las líneas negras de la carta de referencia.

8.

10 gotas de ES y 2 gotas de oxalato de amonio, se reposan 5 minutos y se comparan verticalmente. La coloración varía de blanco a transparente.

PREPARACION DE REACTIVOS 1. Solución extractiva: 10 gramos de acetato de sodio en 100 ml de ácido acético al 3%.

2. 3. 4.

Ácido acético al 3%: 3 ml de ácido acético se aforan a 100 ml con agua destilada.

Difenilamina: solución al 2/1000 ó .2/100 en H2SO4 concentrado, sin que la temperatura no exceda de 24° C en la preparación.

Reactivo de Nessler: (200 ml). 10 gr de KI en 30 ml de agua destilada, agregar solución saturada de HgCl 2 (4.4 gr en 70 ml de agua destilada) y 80 ml de KOH al 50%; completar a 200 con agua destilada. 5. Molibdato de sodio: 12.5 gr en 100 ml de agua tibia. Por separado, mezclar 50 ml de ácido acético y 550 ml de agua destilada. Mezclar las dos soluciones lentamente y agitando. No debe haber precipitado. 6. Oxalato estanoso: Disolver en 10 ml de ES lo que se pueda tomar con la punta de un palillo. Se debe preparar el día que se utiliza. 7. Bencidina: 0.1 gr de bencidina en 20 ml de ácido acético; diluir a 200 ml con agua destilada. 8. KOH: solución acuosa al 15%. 15 gr en 100 ml de agua destilada. 9. Amarillo de titanio (tiazol). 50 mg en 20 ml de agua destilada. 10. Cobalnitrito de sodio: 5 gr de Co(NO3)3 (nitrato de cobalto), incluyendo agua de cristalización, disueltos en 47.5 ml de agua destilada y 2.5 ml de ácido acético. Por separado, disolver 30 gr de nitrito de sodio (NaNO 2) en 50 ml de agua destilada. Mezclar ambas soluciones en partes iguales 24 horas antes de usarse. Despide vapores venenosos. 11. Alcohol isopropílico. Grado reactivo. 12. Oxalato de amonio. Solución acuosa al 105. 10 gr en 100 l de agua destilada. CUESTIONARIO 1. Entregar el resultado del análisis de los nutrientes contenidos en su muestra de tierra.

2.

Investigar las reacciones de coloración de cada nutriente en este método (Método de Morgan).

PRACTICA #2 COLORIMETRIA ELABORACION DE UN COMPARADOR VISUAL PARA LA DETERMINACION DE NITRITOS OBJETIVO: Determinar microgramos (μg) de una sustancia aprovechando algunas de sus propiedades para desarrollar una serie tipo. TEORIA: El método se basa en la comparación del color rojizo producido cuando los nitritos reaccionan con el ácido sulfanílico y el alfa-naftilamina. La sensibilidad es tan grande que detecta pequeñísimas cantidades de nitrito. PROCEDIMIENTO:

1. 2.

La solución madre, cuya concentración es de 100μg de N de NO 2-/ml, se diluye para obtener una solución estándar de 1 μg de N/ml.

Se coloca 0.0, 1,2 3, 4, 5, 6, 7, 8,9 y 10 ml de ésta en una serie de tubos de ensaye y se completa cada uno a 10 ml con agua destilada. 3. Se agita y luego se agrega a cada tubo, 1 ml de ácido sulfanílico, se vuelve a agitar y se deja en reposo de 2 a 3 minutos. 4. En seguida se añade 1 ml de solución de alfa-naftilamina, se agita y se deja transcurrir 10 minutos para realizar la comparación.

5.

Se procede de igual manera con una muestra que debe proporcionar el instructor y determinar su concentración comparándola con la serie tipo la cual tiene: 0, 1, 2, 3,4, 5, 6, 7, 8,9 y 10 μg de N/10 ml.

PREPARACION DE REACTIVOS

1. 2.

Solución madre de NaNO2. disolver 0.4928 gr. de NaNO 2 anhidro en un litro. Concentración final 100 μg de N en NO2-/ml.

Solución de ácido sulfanílico. Disolver 0.8 gr de ácido sulfanílico en 100 ml de ácido acético 5N. 3. Solución de alfanaftilamina. Disolver 0.5 gr de alfanaftilamina en 100 ml de ácido acético 5 N. CUESTIONARIO

1. 2.

Entregar la concentración de su problema en μg de nitrógeno de NO2-/ml.

Investigar la reacción que ocurre entre los nitritos, el ácido sulfanílico y el alfanaftilamina ( es una reacción de diazotización).

PRACTICA # 3 USO, MANEJO Y CUIDADOS DEL ESPECTROFOTOMETRO SPECTRONIC 21 MILTON ROY COMPANY OBJETIVO: Manejar correctamente el espectrofotómetro, aprender a calibrarlo y conocer sus principales cuidados. TEORIA: En este tipo de instrumentos la luz incide sobre una rejilla de difracción ó un prisma de cuarzo que divide la luz en su espectro, moviendo la fuente de luz o un espejo. El espectro formado puede hacerse pasar a través de una abertura. La amplitud de la banda es de 35 milimicras, pero hay hasta de fracciones de milimicrones. Este arreglo es un espectrofotómetro llamado “monocromador” (selección de un color), y es indudable que el espectrofotómetro ofrece la longitud de onda en el espectro visible que se desee. Cuando la luz seleccionada pasa a través de un tubo especial (celda), conteniendo la solución, parte de la luz es absorbida. La luz que emerge incide sobre una fotocelda o tubo fotomultiplicador que transforma la energía luminosa en energía eléctrica, esta energía resultante se mide directamente por un galvanómetro. La escala del galvanómetro en algunos instrumentos está marcada en % de transmitancia o de absorbancia. MATERIAL Espectrofotómetro Spectronic 21 2 celdas para espectrofotómetro Pañuelos desechables REACTIVOS Agua destilada PROCEDIMIENTO 1. Conectar a la corriente 110 V.

2. 3. 4.

Encender el aparato en posición ON (1).

Esperar por 15 minutos a que el aparato se estabilice. Mover el botón AT y colocarlo en 0 de Transmitancia ( 2)

Seleccionar la longitud de onda (3), deseada, observando la ventanilla correspondiente. 5. Calibrar el aparato de la siguiente manera: a) Coloque la celda con el blanco en el porta muestra (4) b) Gire el botón 2 hasta que el indicador de la escala quede en 100% de transmitancia (5).

6. Cambie la celda del blanco por la celda que contiene la muestra problema y anote la lectura

5

4

3

2

1

CUESTIONARIO: 1. Proporciones un diagrama esquemático del espectro electromagnético. 2. Investigue las leyes fundamentales de la fotometría 3. Proporcione un diagrama esquemático del sistema óptico de un espectrofotómetro (monocromador)

PRACTICA #4 USO, MANEJO Y CUIDADOS DEL ESPECTROFOTOMETRO (TURNER MOD. 340) OBJETIVO: Manejar correctamente el espectrofotómetro, aprender a calibrarlo y conocer sus principales cuidados. TEORIA: El espectrofotómetro es un instrumento en donde la luz incide sobre una rejilla de difracción o sobre un prisma que divide la luz en su espectro que pasa a través de una abertura. Esta luz seleccionada pasa a través de una celda o tubo conteniendo una solución de la muestra que se va a analizar, siendo una parte de la luz absorbida. La luz que emerge incide sobre una foto celda o tubo fotomultiplicador que transforma la energía luminosa a energía eléctrica. Esta energía resultante se mide directamente por un galvanómetro. La escala del galvanómetro está marcada ya sea por % de transmitancia o absorbancia. MATERIAL Espectrofotómetro Turner 340 2 celdas para espectrofotómetro Pañuelos desechables REACTIVOS Agua destilada PROCEDIMIENTO DESCRIPCION DEL ESPECTROFOTOMETRO A) Botones de control e indicadores: 1. MODE SWITCH.

2.

   3.

OFF. El aparato está apagado TRANS. Leer transmitancia ABS. Leer absorbancia

ZERO. Cuando el aparato está en TRANS el botón ZERO-SET se presiona, y se mueve el botón ZERO para poner la pantalla a 0.0% T 100% T/0A.

Si está en TRANS se usa este botón para poner 100%T en la pantalla. Si está en ABS se usa este botón para poner 0.000 A en la pantalla. Este control consta de dos indicadores: el botón COARSE es para aproximar y e l botón FINE es para ajustar lecturas exactas.

4. 5. 6. 7. 8. 9.

DISPLAY.- Es la pantalla que indica hasta 3 dígitos después del punto.

TRANS.- Indica la luz conducida cuando el aparato está en modo de transmitancia. ABS.- Indica la luz conducida cuando el aparato está en modo de absorbancia. WAVELENGTH READOUT.- Indica la longitud de onda en nanómetros con 3 WAVELENGTH ADJUST.-Es para seleccionar la longitud que se desea dígitos trabajar. ZERO-SET.- Este botón se presiona cuando el aparato se ajusta a 0.0% T con el botón ZERO.

B)

Porta muestras ( Cuvette Holder)

En esta sección se introduce la celda con la muestra, con la línea blanca hacia al frente hasta que alcance el fondo, se cierra y se observa la lectura en la pantalla digital. CALIBRACIÓN 1. Conectar el aparato en corriente 110 V. 2. Encender el aparato en posición TRANS, espere 15 minutos para que se estabilice. 3. Seleccione la longitud de onda con el botón WAVELENGTH. 4. Inserte apropiadamente en posición el filtro de luz.

5.

Coloque la celda ya sea con agua destilada o con el blanco en el porta muestras. 6. Presione y sostenga el botón ZERO-SET, ajuste con el botó ZERO hasta que la lectura indique 0.00 y suelte el botón ZERO-SET. Mediciones de transmitancia a) Seleccione el botón en posición TRANS. b) Ajuste con el botón 100%T/0A COURSE aproximadamente a 100. c) Ajuste con el botón 100%T/0A FINE exactamente a 100.0

d)
a) b) c) d)

Coloque la celda con la muestra en el porta muestras y lea la transmitancia en la pantalla.

Mediciones de absorbancia Seleccione Ajuste con Ajuste con Coloque la el botón en posición ABS el botón 100%/0A COURSE aproximadamente 0.000 el botón 100%/0A FINE exactamente a 0.000 celda con la muestra y lea la absorbancia en la pantalla.

Cuidados 1. Coloque el instrumento en un espacio en el laboratorio libre de vibraciones. Deje un área entre el aparato y la pared aproximadamente 2 pulgadas para que circule aire. 2. Verifique si el voltaje del interruptor es apropiado para el aparato. 3. Mantenga el aparato desconectado en caso de no utilizarlo. 4. No moverlo innecesariamente, en todo caso hacerlo cuando el aparato esté frío. 5. Las celdas deben lavarse solamente con agua destilada y secar con pañuelo de papel

B. STRAY LIGHT FILTER C. CUVETTE HOLDER

8. WAVELENGTH ADJUST 4. DISPLAY 5. TRANS - 6. ABS

9. ZERO SET

1. MODE SWITCH

7. WAVELENGTH READOUT 2. ZERO 3. COARSE-FINE 100%T/0A

PRACTICA # 5 ESPECTROFOTOMETRIA VISIBLE OBJETIVO: Examinar las curvas espectrales de absorción del permanganato de potasio y del dicromato de potasio. Obtener la longitud de onda de máxima absorción. Adquirir habilidad en el manejo del aparato. TEORIA: Al pasar un haz de luz a través de una solución se produce un fenómeno de absorción parcial. Ciertas longitudes de onda quedan detenidas por el medio (b); otras logran atravesarlo y se observa entonces un color determinado.

Transmitancia Po
b

P

Energía radiante Incidente

Espesor del líquido

Energía radiante Trasmitida

La relación entre la energía radiante transmitida P y la incidente P 0 es una constante T a la que se le llama TRANSMITANCIA definida por: T = P/ P0 Al logaritmo en base 10, del recíproco de la transmitancia T, se le llama ABSORBANCIA (A) A = Log 1/T A = - Log T MATERIAL

Espectrofotómetro Balanza Analítica 3 matraces de aforación de 1 litro REACTIVOS

1 vaso de precipitado de 100 ml 1 pipeta de 10 ml 1 probeta de 100 ml

PERMANGANATO DE POTASIO (KMnO4) 5X10-4M. Calcular la cantidad necesaria para preparar un litro. Disolver en 500 ml de agua destilada, agregar 15 ml de ácido sulfúrico concentrado, mezclar y aforar a un litro. DICROMATO DE POTASIO (K2Cr2O7) 5X10-4M. Proceder de la misma forma que para el permanganato PROCEDIMIENTO

1. 2.

Se determina la absorbancia de una solución de permanganato de potasio 5X10 M en un rango de 400-600 nanómetros (nm), de longitud de onda en el espectrofotómetro designado. Luego se determina la absorbancia en intervalos mas cortos de longitud de onda (de 20 en 20 variando la longitud de onda), donde los cambios estructurales sean evidentes.
4

Se repite lo anterior, pero usando la solución de dicromato de potasio 5X10-4M 3. Presentar los datos en la siguiente forma: LONGITUD DE ONDA KMnO4 %T 400 420 440 460 480 500 520 540 560 580 600 CUESTIONARIO 1. Elaborar gráficas de los espectros de las dos soluciones indicando la longitud de onda de máxima absorción. Utilice papel milimétrico para graficar lambda contra absorbancia y papel semilogarítmico para lambda contra % de transmitancia. 2. Investigar las longitudes de onda recomendadas para cada solución. A K2Cr2O7 %T A

PRACTICA # 6 NITRATOS EN EL SUELO POR EL METODO DEL ACIDO FENOLDISULFONICO OBJETIVO: Construir la gráfica de calibración para nitratos en suelos y determinar con ella la concentración de muestras problemas. TEORIA: En la gran mayoría de suelos, el nitrógeno inorgánico combinado se encuentra en forma de ión NH4+ o NO3-. La determinación de nitratos en suelos es complicada debido a que la cantidad de esta forma mineral de nitrógeno en los suelos está sujeta a cambios rápidos originados por los procesos de amonificación, nitrificación y otros procesos microbiológicos no bien conocidos. Esto significa que las muestras tomadas para la determinación de nitrógeno de nitratos deben ser analizadas inmediatamente después de su muestreo. El método colorimétrico empleado con mayor frecuencia en suelos es que hace uso del ácido fenildisulfónico. MATERIAL Espectrofotómetro Balanza analítica 1 probeta de 100 ml 1 baño maría 1 termómetro 1 parrilla eléctrica 1 frasco obscuro REACTIVOS 3 matraces de aforación de 1 litro 9 vasos de 100 ml 9 matraces elermeyer de 250 ml 1 bureta de punta recortada 8 matraces de aforación de 100 ml Papel filtro Whatmann # 42

1. 2.

ACIDO FENILDISULFONICO. Disolver 25 gramos de fenol en 150 ml de ácido sulfúrico concentrado, agregar 75 ml de ácido sulfúrico fumante (13-15% SO 3) y calentar en baño maría por dos horas a una temperatura de 95 a 100 0 C. guardar en un frasco de vidrio obscuro. HIDROXIDO DE AMONIO 1:1. Mezcle volúmenes iguales de NH4OH concentrado y agua destilada. SOLUCION ESTANDAR DE NITRATOS. Disolver exactamente 7.2160 gramos de nitrato de potasio (seco a 1050 C) en agua y aforar a 1 litro.

3.

4. 5.

solución estándar diluida de nitratos 10 ppm de N-NO3. Tomar 10 ml de la solución anterior y aforar a 1 litro con agua destilada. SOLUCION EXTRACTORA. Disolver 1 gramo de CaSO 4 dihidratado en agua y aforar a 1 litro.

PROCEDIMIENTO 1. 2. 3. 4. Pesar 10 gramos de suelo y agregar a un matraz elermeyer de 250 ml. Agregar 50 ml de solución extractora y agitar durante 15 minutos. Filtrar con papel Whatmann # 42 Tomar una alícuota del filtrado, la cual puede ser de 20 ml, dependiendo de la concentración de nitratos de la muestra. Agregar esta alícuota a un vaso de precipitado de 100 ml.

5. 7.

Evaporar la muestra junto con el blanco que contendrá los mismos mililitros de solución extractora que la muestra, a una temperatura de 95 -100o C. 6. Agregar 2 ml de ácido fenoldisulfónico al residuo por medio de una bureta de punta recortada. Inclinar el recipiente de tal manera que el ácido entre en contacto con todo el residuo. Después de 10 minutos de reposo, agregar de 30 a 40 ml de agua y 15 ml de solución de hidróxido de amonio. Un método alternativo de agregar el hidróxido es agregando hasta que el color vire a amarillo y después agregarle 3 ml más. 8. Agregar la solución del paso 7 a un matraz volumétrico de 100 ml, y aforar a la marca con agua destilada. 9. Poner un poco de solución del paso 8 en una celda y tomar lectura de 420 milimicras ajustando a 100% de transmitancia con un blanco de reactivos. 10. Determine la concentración en ppm de la muestra problema utilizando la gráfica de calibración construida. PREPARACION DE LA CURVA DE CALIBRACION

1.

Tomar alícuotas de 0, 2, 4, 6, 8,10 y 12 ml del estándar de 10 ppm de nitrógeno y agregarles junto con 10 ml de la solución extractora a vasos de precipitado y proceder con los pasos 5, 6,7 y 8. 2. preparar la gráfica usando % de transmitancia y ppm de nitrógeno. NO3 10 ppm blanco 0 ml 2 4 6 8 10 12 Probl. 20 SOLUCIÓN EXTRACTORA 10 10 10 10 10 10 10 10 H2O DESTILADA af. a 100ml NO3 ppm 0.0 0.2 0.4 0.6 0.8 1.0 1.2 ? A %T

ppm (NO3) = lectura en la curva X aforación/ alícuota ppm (NO3) = lectura de la curva X FD FD = factor de dilución = aforación/alícuota CUESTIONARIO 1. Construir la gráfica de calibración para nitratos 2. ¿Cuál es la importancia de la determinación analítica de nitratos en suelos?

PRACTICA # 7 SULFATOS EN SUELOS Y AGUA OBJETIVO.- Construir la gráfica de calibración para sulfatos en suelos y aguas y determinar con ella la concentración de muestras problemas. TEORIA: El azufre se representa en muchas formas en el suelo, entre las que se pueden mencionar, los sulfuros, sulfatos y derivados orgánicos. Se ha encontrado que existe una relación estrecha entre el carbono, nitrógeno y el azufre de los suelos, misma que indica que una gran parte del azufre se presenta en los compuestos orgánicos. Para que una determinación se incluya la mayoría del azufre, se necesita convertir este elemento a una forma mas simple, tal es el caso de la oxidación del azufre a sulfatos, o reducción de cualquiera de sus compuestos a sulfuros. La determinación se basa en la afinidad que tiene el bario por los sulfatos. MATERIAL Espectrofotómetro Balanza analítica 1 pipeta de 5 ml REACTIVOS HCl 6N Cloruro de bario (BaCl2.H2O) em cristales de 20-60 mallas Sulfato de potasio grado reactivo (K2SO4) PROCEDIMIENTO 10 matraces de aforación de 50 ml 10 matraces elermeyer de 125 ml

1. 2.

Se toma uma alícuota de suelo de 2 ml de extracto de suelo, se Le adiciona 1 ml de HCl 6N y se afora con agua destilada a 50 ml en un matraz volumétrico. Efectuadas las diluciones se pasa a un matraz elermeyer de 125 ml y se le agrega 0.5 gr de BaCl 2 para precipitar el BaSO 4, se agita durante dos minutos y se realiza la lectura en el espectrofotómetro en longitud de onda de 420 nm lectura en la curva X aforación/ alícuota

ppm (SO4) =

CURVA DE CALIBRACION PARA SULFATOS SOLUCION ESTANDAR DE SULFATOS.- Disolver 1.8141 gr de K2SO4 en un litro de agua destilada. SOLUCION ESTANDAR DE SULFATOS DILUIDA A 100 ppm.- Tomar 100 ml de la solución anterior y aforarla a un litro:

1. 2.

Tomar alícuotas de 0-40 del estancar de 100 ppm de sulfatos y proceder como en la muestra problema cada vez. Preparar las gráficas usando el % de transmitancia y ppm de sulfatos.

3. Determine la concentración en ppm de la muestra problema utilizando la gráfica de calibración construida. SO4 (100ppm) (diluciones) 0 5 10 15 20 25 30 35 40 muestra CUESTIONARIO. 1. Construir la gráfica de calibración para sulfatos 2. ¿Cuál es la importancia de la determinación analítica de sulfatos en suelos? Aforar a 50 ml ppm 0 10 20 30 40 50 60 70 80 A

PRACTICA # 8 DETERMINACION DE LA GLUCOSA EN SUERO TECNICA DE HULTMAN CON ORTOTOLUIDINA OBJETIVO: Construir la gráfica de calibración para glucosa en suero y determinar Corella la concentración de muestras problemas. TEORIA: La ORTOTOLUIDINA reacciona específicamente con las aldohexosas en solución acética caliente para formar una mezcla en equilibrio de glicosilamina y la correspondiente base de Ziff. El color verde formado es proporcional a la cantidad de glucosa presente. MATERIAL Espectrofotómetro Balanza analítica 6 matraces de aforación de 100 ml 6 tubos de ensaye de 16x150 mm (con tapón de rosca) 1 pipeta de 1 ml 1 baño maría REACTIVOS Ortotoluidina Solución estándar de glucosa de 1 mg/ml

Solución de glucosa de 3mg/ml PROCEDIMIENTO 1. En un tubo de ensaye de 16x150 mm, añadir 0.1 ml de suero (problema), en otro tubo añadir 0.1 ml de agua destilada (blanco), y en otro añadir 0.1 ml de solución patrón de glucosa 1 mg/ml (testigo) 2. Agregar 5 ml del reactivo de ortotoluidina a cada tubo y mezclar. 3. Tapar los tubos y colocarlos en baño de agua hirviendo durante 10 minutos (el nivel del agua en el baño, debe ser superior al nivel de los reactivos en los tubos). 4. Sacar los tubos y enfriarlos (con agua fría corriente). 5. Leer a una longitud de onda de 630 nanómetros. 6. Ajustar a 100% de transmitancia o 0 de absorbancia con el blanco de reactivos (el color es estable 20 minutos) 7. Determine la concentración de glucosa utilizando la gráfica de calibración construida o por cálculos. CURVA DE CALIBRACION # Tubo 1 2 3 4 5 Ml de solución glucosa 3mg/ml 0.0 0.5 1.0 2.0 3.0 de Agua destilada 3.0 2.5 2.0 1.0 0.0 Miligramos en 100 ml 0.0 50.0 100.0 200.0 300.0

De cada una de estas diluciones tomar 0.1 ml y proseguir como se indica en la técnica a partir del paso 2.

VALORES NORMALES DE GLUCOSA EN SANGRE. DE 70 A 100 mg en 100 ml de plasma

A

50

60

70

80

100

110

120

130

140

150

160

GLUCOSA (Mg/ml) CALCULOS: ABSORBANCIA DEL PROBLEMA ABSORBANCIA DEL TESTIGO X 100 = mg glucosa /100

CUESTIONARIO: 1. Construir la gráfica de calibración para glucosa. 2. ¿Cual es la importancia analítica de la determinación de glucosa en suero?

PRACTICA # 9 REFRACTOMETRIA MANEJO Y CUIDADOS DEL REFRACTOMETRO DE ABBE-3L MR OBJETIVO: Manejar correctamente el refractómetro. Realizar su calibración, determinar el índice de refracción de sustancias puras y conocer sus principales cuidados. TEORIA: Cuando un rayo de luz penetra en un medio en que su velocidad de propagación es diferente (con respecto al medio original), el rayo sufre una desviación conocida con el nombre de refracción de la luz

MATERIAL Refractómetro 1 gotero REACTIVOS Agua destilada Cloroformo PROCEDIMIENTO CALIBRACION

Pañuelos desechables Algodón Benceno Alcohol etílico

1.

Conecte el aparato a corriente de 110 V, baje la palanca de encendido hacia el centro 2. Calibrarlo con agua destilada (nD = 1.3325) de la siguiente manera:

a)
b) c) d) e)

Abra la tapa del prisma (3), y limpie completamente el prisma de medición y el prisma superior (2). Deposite y disperse en el prisma de medición una gota de agua destilada Cierre el prisma superior. Si la muestra es líquida la tapa (5), permanece cerrada. Acerque la fuente luminosa (1), y regule la intensidad girando la lámpara para ver bien la zona de “sombra luz”, si no se observa correctamente, entonces regularla con el dial de calibración (6), debe de hacerse mas visible la separación sombra-luz. Aproximar y centrar la sombra luz al centro de la cruz con el manubrio que se encuentra en la parte central lateral derecha.

NOTA: el cloroformo nD = 1.4428 y el benceno nD = 1.4979 f) Se mueve la palanca de encendido del centro hacia abajo. Deberá marcar 0 de sólidos totales disueltos (std), y 1.3325 nD; si no es así, utilizar la llavecita de calibración y ajustar a ésa lectura, introduciendo en el orificio de calibración que se encuentra a un lado del manubrio de calibración. MEDICION DE MUESTRAS PROBLEMAS

3. Se apaga el aparato pasando la palanca de encendido hacia arriba, enseguida se baja (1), se levanta el prisma superior (2) y se abre la tapa (5), se limpia bien y con mucho cuidado, se deposita y se distribuye una gota del problema, se cierra (2) y (5). 4. Se prende el aparato colocando la palanca de encendido hacia el centro, se sube (1), se centra la sombra-luz en el centro de la cruz con el manubrio, se baja la palanca de encendido hacia abajo. 5. Se observa y anota la lectura la cual será indicada por el trazo que pasa verticalmente en el campo visual.

CUIDADOS DEL REFRACTÓMETRO Este aparato proporciona una máxima precisión y una rápida y fácil operación. Para mantener estas propiedades, se debe limpiar cuidadosamente todo el tiempo y tener un cuidado especial con su sistema de prismas; estos cuidados son:

1. 2.

Utilizar un detergente no iónico para limpiar los prismas, después de cada muestra, se pueden limpiar con algodón empapado con alcohol etílico, benceno o éter de petróleo para eliminar los compuestos insolubles en agua. Los compuestos solubles en agua se eliminan con agua destilada tibia. . El prisma superior debe de estar cerrado cuando no se usa. Los cristales de los prismas son muy delicados y fácilmente astillables, debe evitarse aplicadores de metal o de vidrio y solo debe de usarse algodón absorbente libre de polvo para limpiar los prismas. Alrededor de los prismas tienen resinas epóxidas, las cuales son resistentes a varios materiales, sin embargo existen solventes que pueden reaccionar con ellas, por lo cual no deben usarse ciertas sustancias como el N,N-dimetilformamida, fenoles, cresoles y otros ácidos alquitrantes; soluciones de ácido acético y N,N- dimetilacetamida.

3.

CUESTIONARIO 1. 2. 3. 4. 5. ¿En que consiste el índice de refracción? ¿A que se le llama refracción especifica? ¿Qué es la refracción molar? ¿Cuáles son las variables que afectan a las mediciones del índice de refracción? Dibujar un diagrama del refractómetro de Abbe, señalar cada parte y mencione porque es el instrumento mas usado 6. ¿Cuáles son las aplicaciones de la refractometría? 7. Proporcione un diagrama esquemático de un refractómetro

PRACTICA # 10 DETERMINACION REFRACTOMETRICA DE AZUCARES OBJETIVO: Adiestrarse en el manejo del aparato y cuantificar el azúcar de un jugo o refresco comercial. TEORIA: El índice de refracción es valioso en los análisis cuantitativos, cuando se ha obtenido una sustancia en estado razonable puro, la determinación del índice de refracción disminuye inmediatamente las posibilidades que debe corroborarse para su identificación. MATERIAL Refractómetro Balanza analítica 4 matraces de aforación de 100ml SUSTANCIAS Sacarosa Jugo o refresco comercial PROCEDIMIENTO 1. A partir de sacarosa pura y agua destilada, se prepara una serie de soluciones tipo con 0,5,10,30 y 50 % de concentración en sacarosa (con 5 0 10 ml de cada solución son suficientes) 2. Determinar el índice de refracción a cada solución y hacer una gráfica de los resultados obtenidos nD contra concentración en %. 3. Con la ayudad de la gráfica determine el % de sacarosa en la solución problema (jugo o refresco comercial). CUESTIONARIO 1. Construir la gráfica nD contra porcentaje de sacarosa y la concentración de la muestra problema 2. Investigar el efecto de la temperatura y la fuente de luz en las determinaciones refractométricas 4 vasos de precipitado de 50 ml 1 gotero

PRACTICA # 11 DETERMINACION DE ALCOHOL ETILICO POR REFRACTOMETRIA OBJETIVO: Construir la gráfica índice de refracción contra concentración para el sistema aguaalcohol y cuantificar el etanol en licores diversos. TEORIA: Para el análisis seguro de una mezcla es requisito que el sistema a cuantificar presente una curva de composición-índice de refracción casi lineal para componentes de interés. Generalmente esta condición se cumple para rangos pequeños de concentración y componente químicamente similares; sin embargo, algunos sistemas presentan máximos o mínimos; por ejemplo, el sistema etanol-agua estudiado en esta práctica. MATERIAL Refractómetro 7 matraces de aforación de 100 ml 1 probeta de 50 ml REACTIVOS Alcohol etílico Tequila Vodka PROCEDIMIENTO 1. A partir de etanol puro y agua destilada, se prepara una serie de soluciones tipo con las concentraciones siguientes (porcentaje en volumen): 0, 10, 30, 50, 70,80 y 100 %. 2. Se determina el índice de refracción a cada solución y se hace una gráfica de los resultados obtenidos nD contra concentración, se pide al maestro una solución problema (de preferencia licores sin color: tequila, vodka, ginebra, etc) y con la ayuda de la gráfica se determina la concentración alcohólica del licor. CUESTIONARIO 1. Realizar una tabla experimental y la gráfica de nD contra % en volumen. 2. Determinar el valor máximo de la curva y la concentración de los licores analizados 1 probeta de 100 ml 1 gotero

Ginebra Brandy Whisky

PRACTICA # 12 POLARIMETRIA MANEJO Y CUIDADOS DEL POLARIMETRO SR-6 OBJETIVO: Manejar correctamente el polarímetro. Realizar su calibración, determinar la rotación específica de compuestos ópticamente activos y conocer sus principales cuidados. TEORIA: Muchas sustancias transparentes tienen la propiedad de rotar el plano de luz polarizada. Estos materiales se conocen como sustancias ópticamente activas. Se ha observado que la rotación es proporcional a la concentración y al espesor de la celda y se define como rotación específica [∞]D a la rotación que sufre 1 grasmo de sustancia en 1 ml solución y con un espesor de 1 decímetro (dm).

[∞]D = α/CL

α = angulo en grados L = espesor de celda en dm C = concentración en g/ml de solución

MATERIAL Polarímetro Balanza analítica 5 matraces de aforación de 100 ml REACTIVOS Sacarosa Lactosa Maltosa PROCEDIMIENTO CALIBRACION: 1. Conecte el polarímetro en la caja de control; luego conecte la caja de control en el transformador y finalmente conecte el transformador a la corriente de 110 V. 2. Encienda la unidad por medio del botón rojo (switch de apagado-encendido) y active la lámpara de sodio con el botón amarillo, ambos se localizan en la caja de control. 3. Mire a través del campo de medición para verificar que la lámpara de sodio esté activada, la luz puede en principio aparecer de un color rojo débil pero después de aproximadamente dos minutos la luz deberá se amarillo brillante; en este tiempo la unidad queda lista para usarse. Fructosa Glucosa

4.

Gire el vernier de tal manera que el “0” quede en la misma posición del “0” de la escala circular. Ajuste la lupa a través del campo de medición de tal manera que la línea divisoria entre las medias sombras estén enfocadas. Las medias sombras deben aparecer con igual brillantez. El punto sobre la escala circular que da igual brillantez en las medias sombras puede no estar exactamente en el centro del vernier y en el “0” de la escala circular. En este caso anote el punto de igual brillantez de las medias sombras sobre la escala circular y realice las apropiadas compensaciones para las siguientes mediciones.

MEDICION 5. Inserte el tubo de medición lleno con la muestra dentro de la cámara de medición con el extremo expandido hacia arriba. Elimine la luz de la cámara, girando el protector que está en la cámara de medición. 6. Observe por el ocular, y si lo oscuro de la media sombra está a la derecha, entonces se dice que la sustancia es dextrógira (gira la luz polarizada a la derecha). Si la sombra oscura está a la izquierda se dice que la sustancia es levógira (gira la luz polarizada a la izquierda). 7. Gire el vernier en la misma dirección que la rotación hasta que las dos medias sombras aparezcan con igual brillantez. 8. Lea los grados de rotación en la escala circular. Usualmente se realizan tres o cuatro mediciones y se saca el promedio. EJEMPLO Tomar 4 gramos de la sustancia que quiere determinar (sacarosa9, adicione agua hasta 100 ml de solución. La polarización en un tubo de medición de 1 dm +2.65. Entonces el poder de la rotación específica es: [∞] = 2.65/ 1x4 X 100 = 66.25 EJEMPLO Una solución de azúcar de caña es polarizada en un tubo de 2 dm y muestra una ∞ = *10 0. el poder de rotación especifica [∞] de la azúcar de caña se sabe que es *66.5 8bibliograficamente para la sustancia pura). Por lo tanto para determinar la concentración C : C = 10/2 X 66.5 X 100 = 7.52 Esto significa que esta solución contiene 7.52 gr de azúcar de caña por 100 ml de solución. ROTACION ESPECÍFICA BIBLIOGRAFICA DE SUSTANCIAS PURAS D-gilceraldehído L-arabinosa D-xilosa D-ribosa D-glucosa D-manosa D-galactosa D-fructosa Maltosa Lactosa Sacarosa + 13.5 + 10.4 + 19.0 - 23.7 + 42.7 + 14.2 + 81.5 - 92.0 +138.0 + 52.5 + 66.5

EL QUE UN CARBOHIDRATO TENGA UNA ROTACION OPTICA POSITIVA O NEGATIVA NO ES CONSECUENCIA DE QUE SU ESTRUCTURA SEA “D” O “L”

CUIDADOS DEL POLARIMETRO 1. En primer lugar guarde el instrumento en buenas condiciones de trabajo, es esencial que el tubo de medición nunca sea insertado húmedo dentro de la cámara de medición.

2.

El tubo de medición lleno, no debe gotear, puede usarse un trapo limpio o paño para limpiarlo. Los tubos no deben sostenerse en la mano por periodos largos de tiempo, puesto que este puede causar alteraciones dentro del líquido y además inhibir la brillantez.

3. 4.

El tubo debe ser insertado en la cámara de medición con el extremo ensanchado hacia arriba. 5. Al llenar e tubo debe de hacerse con sumo cuidado procurando evitar la formación de burbujas. 6. Al cerrar el tubo, una vez lleno, hágalo de una manera segura, pero que no quede demasiado apretado el tapón. CUESTIONARIO 1. ¿Cuáles son los compuestos ópticamente activos? 2. ¿Cuál es el compuesto dextro? 3. ¿Cuál es el compuesto dextro? 4. ¿De que depende la rotación específica? 5. ¿De que depende la rotación angular? 6. Dibuje el diagrama del polarímetro, cuales son cada una de sus partes? 7. ¿Para que se usa la luz de sodio? 8. ¿Cuáles son los solventes empleados en los métodos polarimétricos? 9. ¿Cuáles son sus aplicaciones? 10. ¿Cómo se define la rotación específica? 11. Proporcione un diagrama esquemático del polarímetro

PRACTICA # 13 DETERMINACION POLARIMETRICA DE AZUCAR EN MUESTRAS DE BEBIDAS NATURALES Y COMERCIALES OBJETIVO: Construir la gráfica de concentración contra rotación angular para la sacarosa y aplicarla al análisis de muestras que la contengan. TEORIA: Con frecuencia la rotación angular aumenta linealmente con la concentración. Algunas sustancias muestran diferentes comportamientos en distintos solventes. Se ha observado, también, variaciones hiperbólicas y parabólicas con la concentración. La sacarosa y la mayoría de otros azúcares producen, variaciones aproximadamente lineales. MATERIAL Polarímetro Balanza analítica 6 matraces de aforación de 100 ml REACTIVOS Sacarosa Jugo de caña Jugos comerciales PROCEDIMIENTO Jugos naturales Bebidas gaseosas

1. 2.

Se prepara una serie de soluciones tipo (a partir de sacarosa y agua pura), cuyas concentraciones sean: 5, 10, 25,50 y 70 gr. /100 ml. Se aconseja preparar de 50 a 100 ml de cada una. Se toma la rotación angular de cada una y con los datos de la longitud de la celda y el peso del soluto en 1 ml de solución, se calcula además la rotación específica (∞) que corresponde al sistema. Hay que hacer una gráfica de ∞ contra concentración de sacarosa y pedir al instructor una muestra problema (jugo de caña, bebida gaseosa, etc.). Se realiza también su cálculo mediante la fórmula y se comparan los resultados.

3.

CUESTIONARIO 1. Entregar la gráfica y la concentración en sacarosa de la muestra proporcionada calculada por los dos métodos. 2. Investigar otras aplicaciones cuantitativas 3. Comparar este método con el refractométrico.

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