You are on page 1of 13

2012 USPC Official 12/1/11 - 04/30/12 General Chapters: <62> MICROBIOLOGICA...

Pgina 1 de 13

62 EXAMEN MICROBIOLGICO DE PRODUCTOS NO ESTRILES; PRUEBAS PARA MICROORGANISMOS ESPECIFICADOS INTRODUCCIN Las pruebas que aqu se describen permitirn la determinacin de la ausencia, o la ocurrencia limitada de los microorganismos especificados que pueden ser detectados en las condiciones que se describen. Las pruebas estn diseadas principalmente para determinar si una sustancia o preparacin cumple con la especificacin establecida para la calidad microbiolgica. Cuando se usa para tales propsitos, se deben seguir las instrucciones que se indican a continuacin, incluyendo el nmero de muestras que deben tomarse y la interpretacin de los resultados como se indica a continuacin. Se pueden usar procedimientos microbiolgicos alternativos, incluyendo mtodos automatizados, siempre y cuando se haya demostrado su equivalencia con el mtodo farmacopeico. PROCEDIMIENTOS GENERALES La preparacin de muestras se realiza como se describe en Examen Microbiolgico de Productos No Estriles: Pruebas de Recuento Microbiano 61. Si el producto a examinar posee actividad antimicrobiana, sta debe removerse o neutralizarse en la medida de lo posible como se describe en Examen Microbiolgico de Productos No Estriles: Pruebas de Recuento Microbiano 61. Si se emplean sustancias tensoactivas en la preparacin de la muestra, se debe demostrar su ausencia de toxicidad para los microorganismos y su compatibilidad con cualquier inactivador usado, como se describe en Examen Microbiolgico de Productos No Estriles: Pruebas de Recuento Microbiano 61. PROPIEDADES DE PROMOCIN DEL CRECIMIENTO Y PROPIEDADES INHIBITORIAS DE LOS MEDIOS IDONEIDAD DE LA PRUEBA Y CONTROLES NEGATIVOS Se debe establecer la capacidad de la prueba para detectar microorganismos en presencia del producto a examinar. Se debe confirmar la adecuabilidad de la prueba si se introdujera un cambio en la ejecucin de la prueba o en el producto, que pudiera afectar los resultados de la prueba. Preparacin de las Cepas de Prueba Usar suspensiones estables estandarizadas de cepas de prueba, como se indica ms adelante. Las tcnicas de mantenimiento de cultivos del lote de semilla (sistemas de lote de semilla) se usan de forma tal que los microorganismos viables empleados para la inoculacin correspondan a no ms de cinco pases a partir del lote maestro de semilla original.

http://www.uspnf.com/uspnf/pub/getPFDocument?usp=34&nf29&supp=2&collection=/d... 18/01/2012

2012 USPC Official 12/1/11 - 04/30/12 General Chapters: <62> MICROBIOLOGICA... Pgina 2 de 13

MICROORGANISMOS AEROBIOS Cultivar por separado cada cepa bacteriana de prueba en contenedores que contengan Caldo Digerido de Casena y Soya o Agar Digerido de Casena y Soya a una temperatura entre 30 y 35 durante un perodo de 18 a 24 horas. Cultivar por separado la cepa de prueba de Candida albicans en Agar Sabouraud Dextrosa o en Caldo Sabouraud Dextrosa a una temperatura entre 20 y 25 durante un perodo de 2 a 3 das. Staphylococcus aureus Pseudomonas aeruginosa Escherichia coli Salmonella enterica ssp. enterica serotipo Typhimurium o como alternativa Salmonella enterica ssp. enterica serotipo Abony Candida albicans Por ejemplo ATCC 6538, NCIMB 9518, CIP 4.83 o NBRC 13276 Por ejemplo ATCC 9027, NClMB 8626, CIP 82.118 o NBRC 13275 Por ejemplo ATCC 8739, NCIMB 8545, CIP 53.126 o NBRC 3972 Por ejemplo ATCC 14028 Por ejemplo NBRC 100797, NCTC 6017 o CIP 80.39 Por ejemplo ATCC 10231, NCPF 3179, IP 48.72 o NBRC 1594

Para preparar las suspensiones de prueba, usar Solucin Amortiguada de Cloruro de Sodio y Peptona de pH 7.0 o Solucin Amortiguadora de Fosfato de pH 7.2. Utilizar las suspensiones dentro de 2 horas o dentro de 24 horas, si se almacenan a una temperatura entre 2 y 8 CLOSTRIDIOS Emplear Clostridium sporogenes, por ejemplo ATCC 11437 (NBRC 14293, NCIMB 12343, CIP 100651) o ATCC 19404 (NCTC 532 o CIP 79.3). Cultivar la cepa clostridial de prueba en condiciones anaerbicas en Medio Reforzarlo para Clostridios a una temperatura entre 30 y 35 durante un perodo de 24 a 48 horas. Como una alternativa para la preparacin y posterior dilucin de una suspensin fresca de las clulas vegetativas de Cl. sporogenes, para la inoculacin de prueba se emplea una suspensin estable de esporas. La suspensin estable de esporas puede mantenerse a una temperatura entre 2 y 8 durante un perodo validado. Control Negativo Para verificar las condiciones de prueba, se prepara un control negativo utilizando el diluyente seleccionado en lugar de la preparacin de prueba. No debe ocurrir crecimiento de microorganismos. Tambin se prepara un control negativo cuando se prueban los productos descritos en Productos de Prueba. Un control negativo que no cumple con lo esperado requiere que se realice una investigacin.

http://www.uspnf.com/uspnf/pub/getPFDocument?usp=34&nf29&supp=2&collection=/d... 18/01/2012

2012 USPC Official 12/1/11 - 04/30/12 General Chapters: <62> MICROBIOLOGICA... Pgina 3 de 13

Propiedades de Promocin del Crecimiento e Inhibitorias de los Medios Analizar cada lote de medio listo para usar y cada lote de medio preparado a partir del medio deshidratado o de los ingredientes. Verificar las propiedades adecuadas de los medios pertinentes como se indica en la Tabla 1.
Tabla 1. Propiedades de Promocin del Crecimiento, Inhibitorias e Indicadoras de los Medios Prueba/ Medio Propiedad Prueba para bacterias Gram-negativas tolerantes a la bilis Caldo Mossel para Enriquecimiento de Enterobacterias Agar Violeta Rojo Bilis Glucosa Promocin del crecimiento Inhibitoria Promocin del crecimiento + Indicadora Promocin del crecimiento Inhibitoria Promocin del crecimiento + Indicadora Promocin del crecimiento Cepas de Prueba E.coli P aeruginosa S. aureus E. coli P aeruginosa E. coli S. aureus E. coli

Prueba para Escherichia coli Caldo MacConkey Agar MacConkey Prueba paraSalmonella Caldo Rappaport Vassiliadis para Enriquecimiento de Salmonella

Agar Xilosa Lisina Desoxicolato

Inhibitoria Promocin del crecimiento + Indicadora

Salmonella enterica ssp. enterica serotipo Typhimurium o Salmonella enterica ssp. enterica serotipo Abony S. aureus Salmonella enterica ssp. enterica serotipo Tphimurium o Salmonella enterica ssp. enterica serotipo Abony P. aeruginosa E. coli S. aureus E. coli Cl. sporogenes Cl. sporogenes C. albicans C. albicans

Prueba para Pseudomonas aeruginosa Agar Cetrimida Prueba para Staphylococcus aureus Agar Manitol Sal Promocin del crecimiento + Indicadora Inhibitoria Promocin del crecimiento Promocin del crecimiento Promocin del crecimiento Promocin del crecimiento + Indicadora Promocin del crecimiento Inhibitoria

Prueba para Clostridios Medio Reforzado para Clostridios Agar Columbia Prueba para Candida albicans Caldo Sabouraud Dextrosa Agar Sabouraud Dextrosa

http://www.uspnf.com/uspnf/pub/getPFDocument?usp=34&nf29&supp=2&collection=/d... 18/01/2012

2012 USPC Official 12/1/11 - 04/30/12 General Chapters: <62> MICROBIOLOGICA... Pgina 4 de 13

Prueba de las Propiedades de Promocin del Crecimiento, Medios Lquidos Inocular una porcin del medio apropiado con un nmero pequeo (no ms de 100 ufc) del microorganismo adecuado. Incubar a la temperatura especificada durante un tiempo no mayor que el perodo ms corto indicado en la prueba. Se produce un crecimiento claramente visible del microorganismo, comparable al obtenido anteriormente con un lote de medio analizado y aprobado previamente. Prueba de las Propiedades de Promocin del Crecimiento, Medios Slidos Realizar el Mtodo de Extensin en Superficie (vea Mtodos de Recuento en Placa en Examen Microbiolgico de Productos No Estriles: Pruebas de Recuento Microbiano 61), inoculando cada una de las placas con un nmero pequeo (no ms de 100 ufc) del microorganismo adecuado. Incubar a la temperatura especificada durante un tiempo no mayor que el perodo ms corto indicado en la prueba. Se produce un crecimiento del microorganismo comparable al obtenido anteriormente con un lote de medio analizado y aprobado previamente. Prueba de las Propiedades Inhibitorias, Medios Slidos o Lquidos Inocular el medio apropiado con al menos 100 ufc del microorganismo adecuado. Incubar a la temperatura especificada durante un tiempo no menor que el perodo mayor indicado en la prueba. No se produce crecimiento del microorganismo de prueba. Prueba de las Propiedades Indicadoras Emplear el Mtodo de Extensin en Superficie (vea Mtodos de Recuento en Placa en Examen Microbiolgico de Productos No Estriles: Pruebas de Recuento Microbiano 61), inoculando cada una de las placas con un nmero pequeo (no ms de 100 ufc) del microorganismo adecuado. Incubar a la temperatura especificada durante un perodo que se encuentre en el intervalo indicado en la prueba. Las colonias son comparables en apariencia, y las reacciones indicadoras son comparables a las previamente obtenidas con un lote de medio analizado y aprobado previamente. Idoneidad del Mtodo de Prueba Para cada producto nuevo a analizar, realizar una preparacin de la muestra como se indica en el prrafo pertinente en Pruebas de Productos. Al momento de la mezcla, agregar cada cepa de prueba en el medio de crecimiento indicado. Inocular individualmente las cepas de prueba. Usar un nmero de microorganismos equivalente a no ms de 100 ufc en la preparacin de prueba inoculada. Realizar la prueba como se indica en el prrafo pertinente en Pruebas de Productos, empleando el perodo ms corto de incubacin indicado. Se deben detectar los microorganismos especificados con las reacciones indicadoras, como se describe en Pruebas de Productos. Cualquier actividad antimicrobiana del producto requiere de una modificacin del procedimiento de la prueba (vea Neutralizacin/Eliminacin de la Actividad Antimicrobiana en Examen Microbiolgico de Productos No Estriles: Pruebas de Recuento Microbiano 61).

http://www.uspnf.com/uspnf/pub/getPFDocument?usp=34&nf29&supp=2&collection=/d... 18/01/2012

2012 USPC Official 12/1/11 - 04/30/12 General Chapters: <62> MICROBIOLOGICA... Pgina 5 de 13

Para un producto determinado, si la actividad antimicrobiana no puede neutralizarse con respecto al microorganismo para el cual prueba est indicada, se asume que el microorganismo inhibido no estar presente en el producto. PRUEBAS DE PRODUCTOS Bacterias Gram Negativas Tolerantes a la Bilis Preparacin de la Muestra e Incubacin Previa Preparar una muestra empleando una dilucin 1 en 10 de no menos de 1 g del producto a analizar, como se indica en Examen Microbiolgico de Productos No Estriles: Pruebas de Recuento Microbiano 61, excepto que como diluyente de eleccin se debe usar Caldo Digerido de Casena y Soya, mezclar e incubar a una temperatura entre 20 y 25 durante un perodo suficiente para resucitar las bacterias pero que no estimule la multiplicacin de los organismos (por lo general 2 horas pero no ms de 5 horas). Prueba de la Ausencia A menos que se indique algo diferente, usar un volumen correspondiente a 1 g del producto, como se indica en Preparacin de la Muestra e Incubacin Previa, para inocular Caldo Mossel para Enriquecimiento de Enterobacterias. Incubar a una temperatura entre 30 y 35 durante un perodo de 24 a 48 horas. Subcultivar en placas de Agar Violeta Rojo Bilis Glucosa. Incubar a una temperatura entre 30 y 35 durante un perodo de 18 a 24 horas. El producto cumple con la prueba si no se desarrollan colonias. Prueba Cuantitativa Seleccin y Subcultivo Inocular cantidades adecuadas de Caldo Mossel para Enriquecimiento de Enterobacterias con la preparacin, como se indica en Preparacin de la Muestra e Incubacin Previa y/o con diluciones de la misma que contengan respectivamente 0.1 g, 0.01 g y 0.001 g ( 0.1 mL, 0.01 mL y 0.001 mL) del producto a examinar. Incubar a una temperatura entre 30 y 35 durante un perodo de 24 a 48 horas. Subcultivar cada uno de los cultivos en una placa de Agar Violeta Rojo Bilis Glucosa. Incubar a una temperatura entre 30 y 35 durante un perodo de 18 a 24 horas. Interpretacin El crecimiento de colonias constituye un resultado positivo. Indicar la menor cantidad del producto que produce un resultado positivo y la mayor cantidad que produce un resultado negativo. Determinar la cantidad probable de bacterias a partir de la Tabla 2. Escherichia coli Preparacin de la Muestra e Incubacin Previa Preparar una muestra empleando una dilucin 1 en 10 de no menos de 1 g del producto a analizar como se indica en Examen Microbiolgico de Productos No Estriles: Pruebas de Recuento Microbiano 61 y usar 10 mL de la cantidad correspondiente a 1 g 1 mL, para inocular una cantidad adecuada (determinada como se describe en Adecuabilidad del Mtodo de Prueba) de Caldo Digerido de Casena y Soya, mezclar e incubar a una temperatura entre 30 y 35 durante un perodo de 18 a 24 horas.

http://www.uspnf.com/uspnf/pub/getPFDocument?usp=34&nf29&supp=2&collection=/d... 18/01/2012

2012 USPC Official 12/1/11 - 04/30/12 General Chapters: <62> MICROBIOLOGICA... Pgina 6 de 13

Tabla 2. Interpretacin de Resultados Resultados para Cada Cantidad de Producto 0.1 g o 0.1 mL + + + 0.1 g o 0.1 mL + + 0.1 g o 0.1 mL + Nmero probable de bacterias por g o mL de producto ms de 103 Menos de 103 y ms de 102 Menos de 102 y ms de 10 Menos de 10

Seleccin y Subcultivo Agitar el contenedor, transferir 1 mL de Caldo Digerido de Casena y Soya a 100 mL de Caldo MacConkey, e incubar a una temperatura entre 42 y 44 durante un perodo de 24 a 48 horas. Subcultivar en una placa de Agar MacConkey a una temperatura entre 30 y 35 durante un perodo de 18 a 72 horas. Interpretacin El crecimiento de colonias indica la posible presencia de E. coli. Esto se confirma mediante pruebas de identificacin. El producto cumple con la prueba si no se presentan colonias o si los resultados de las pruebas de identificacin son negativos. Salmonella Preparacin de la Muestra e Incubacin Previa Preparar el producto a analizar como se indica en Examen Microbiolgico de Productos No Estriles: Pruebas de Recuento Microbiano 61 y usar una cantidad correspondiente a no menos de 10 g 10 mL para inocular una cantidad adecuada (determinada como se describe en Idoneidad del Mtodo de Prueba) de Caldo Digerido de Casena y Soya, mezclar e incubar a una temperatura entre 30 y 35 durante un perodo de 18 a 24 horas. Seleccin y Subcultivo Transferir 0.1 mL de Caldo Digerido de Casena y Soya a 10 mL de Caldo Rappaport Vassiliadis para Enriquecimiento de Salmonella e incubar a una temperatura entre 30 y 35 durante 18 a 24 horas. Subcultivar en placas de Agar Xilosa Lisina Desoxicolato. Incubar a una temperatura entre 30 y 35 durante un perodo de 18 a 48 horas. Interpretacin El crecimiento de colonias bien desarrolladas de color rojo, con o sin centros negros indica la posible presencia de Salmonella. Esto se confirma mediante pruebas de identificacin. El producto cumple con la prueba si no se presentan colonias de los tipos descritos o si los resultados de las pruebas de identificacin confirmatorias son negativos.

http://www.uspnf.com/uspnf/pub/getPFDocument?usp=34&nf29&supp=2&collection=/d... 18/01/2012

2012 USPC Official 12/1/11 - 04/30/12 General Chapters: <62> MICROBIOLOGICA... Pgina 7 de 13

Pseudomonas aeruginosa Preparacin de la Muestra e Incubacin Previa Preparar una muestra empleando una dilucin 1 en 10 de no menos de 1 g del producto a analizar como se indica en Examen Microbiolgico de Productos No Estriles: Pruebas de Recuento Microbiano 61) y usar 10 mL de la cantidad correspondiente a 1 g 1 mL, para inocular una cantidad adecuada (determinada como se describe en Idoneidad del Mtodo de Prueba) de Caldo Digerido de Casena y Soya, y mezclar. Cuando se analizan parches transdrmicos, filtrar el volumen de muestra correspondiente a un parche de la preparacin (vea Parches Transdrmicos en Preparacin de la Muestra en Examen Microbiolgico de Productos No Estriles: Pruebas de Recuento Microbiano 61) a travs de un filtro de membrana estril, y colocar en 100 mL de Caldo Digerido de Casena y Soya. Incubar a una temperatura entre 30 y 35 durante un perodo de 18 a 24 horas. Seleccin y Subcultivo Subcultivar en una placa de Agar Cetrimida e incubar a una temperatura entre 30 y 35 durante un perodo de 18 a 72 horas. Interpretacin El crecimiento de colonias indica la posible presencia de P. aeruginosa. Esto se confirma mediante pruebas de identificacin. El producto cumple con la prueba si no se desarrollan colonias o si los resultados de las pruebas de identificacin confirmatorias son negativos.

Staphylococcus aureus Preparacin de la Muestra e Incubacin Previa Preparar una muestra empleando una dilucin 1 en 10 de no menos de 1 g del producto a analizar como se indica en Examen Microbiolgico de Productos No Estriles: Pruebas de Recuento Microbiano 61 y usar 10 mL de la cantidad correspondiente a 1 g 1 mL, para inocular una cantidad adecuada (determinada como se describe en Idoneidad del Mtodo de Prueba) de Caldo Digerido de Casena y Soya, y homogenizar. Al analizar parches transdrmicos, filtrar el volumen de muestra correspondiente a un parche de la preparacin (vea Parches Transdrmicos en Preparacin de la Muestra en Examen Microbiolgico de Productos No Estriles: Pruebas de Recuento Microbiano 61) a travs de un filtro de membrana estril, y colocar en 100 mL de Caldo Digerido de Casena y Soya. Incubar a una temperatura entre 30 y 35 durante un perodo de 18 a 24 horas. Seleccin y Subcultivo Subcultivar en una placa de Agar Manitol Sal, incubar a una temperatura entre 30 y 35 durante un perodo de 18 a 72 horas. Interpretacin El crecimiento de colonias amarillas o blancas rodeadas de una zona amarilla indica la posible presencia de S. aureus. Esto se confirma mediante pruebas de identificacin. El producto cumple con la prueba si no se desarrollan colonias de los tipos descritos o si los resultados de las pruebas de identificacin confirmatorias son negativos.

http://www.uspnf.com/uspnf/pub/getPFDocument?usp=34&nf29&supp=2&collection=/d... 18/01/2012

2012 USPC Official 12/1/11 - 04/30/12 General Chapters: <62> MICROBIOLOGICA... Pgina 8 de 13

Clostridios Preparacin de la Muestra y Tratamiento Trmico Preparar el producto a analizar como se indica en Examen Microbiolgico de Productos No Estriles: Pruebas de Recuento Microbiano 61. Tomar dos porciones iguales correspondientes a no menos de 1 g o 1 mL del producto a examinar. Calentar una porcin a 80 durante 10 minutos, y enfriar rpidamente. No calentar la otra porcin. Seleccin y Subcultivo Usar 10 mL o la cantidad correspondiente a 1 g o 1 mL del producto a analizar de ambas porciones, para inocular cantidades adecuadas (determinadas como se describe en Adecuabilidad del Mtodo de Prueba) de Medio Reforzado para Clostridios. Incubar en condiciones anaerbicas a una temperatura entre 30 y 35 durante 48 horas. Luego de la incubacin, realizar subcultivos a partir de cada contenedor en Agar Columbia, e incubar en condiciones anaerbicas a una temperatura entre 30 y 35 durante 48 a 72 horas. Interpretacin El crecimiento anaerbico de bacilos (con o sin endoesporas) que da una reaccin de catalasa negativa indica la presencia de Clostridios. Esto se confirma mediante pruebas de identificacin. El producto cumple con la prueba si no hay presentes colonias de los tipos descritos, o si las pruebas de identificacin confirmatorias son negativas. Candida albicans Preparacin de la Muestra e Incubacin Previa Preparar el producto a analizar como se indica en Examen Microbiolgico de Productos No Estriles: Pruebas de Recuento Microbiano 61, y usar 10 mL o la cantidad correspondiente a no menos de 1 g o 1 mL, para inocular 100 mL de Caldo Sabouraud Dextrosa, y mezclar. Incubar a una temperatura entre 30 y 35 durante un perodo de 3 a 5 das. Seleccin y Subcultivo Subcultivar en una placa de Agar Sabouraud Dextrosa e incubar a una temperatura entre 30 y 35 durante un perodo de 24 a 48 horas. Interpretacin El crecimiento de colonias blancas puede indicar la presencia de C. albicans. Esto se confirma mediante pruebas de identificacin. El producto cumple con la prueba si no se desarrollan tales colonias o si las pruebas de identificacin confirmatorias resultan negativas.

SOLUCIONES RECOMENDADAS Y MEDIOS DE CULTIVO [NOTA Esta seccin se proporciona como informacin.] Las siguientes soluciones y medios de cultivo han resultado satisfactorios en el cumplimiento de los objetivos para los cuales se indican en la prueba de contaminacin microbiana en la Farmacopea. Se pueden usar otros medios si se puede demostrar su adecuabilidad.

http://www.uspnf.com/uspnf/pub/getPFDocument?usp=34&nf29&supp=2&collection=/d... 18/01/2012

2012 USPC Official 12/1/11 - 04/30/12 General Chapters: <62> MICROBIOLOGICA... Pgina 9 de 13

Solucin Amortiguadora Concentrada Transferir 34 g de fosfato dihidrogenado de potasio a un matraz volumtrico de 1000 mL, disolver en 500 mL de Agua Purificada, ajustar con hidrxido de sodio a un pH de 7.2 0.2, agregar Agua Purificada a volumen y mezclar. Dispensar en contenedores y esterilizar. Almacenar a una temperatura entre 2 y 8. Solucin Amortiguadora de Fosfato de pH 7.2 Preparar una mezcla de Agua Purificada y Solucin Amortiguadora Concentrada (800:1 v/v), y esterilizar.

Solucin Amortiguada de Cloruro de Sodio y Peptona de pH 7.0 Fosfato Dihidrogenado de Potasio 3.6 g Fosfato Hidrogenado Disdico Dihidrato 7.2 g (equivalente a 0.067 M de fosfato) Cloruro de Sodio 4.3 g Peptona (de carne o casena) 1.0 g Agua Purificada 1000 mL Esterilizar en un autoclave utilizando un ciclo validado.

Caldo Digerido de Casena y Soya Digerido Pancretico de Casena 17.0 g Digerido Papanico de Soya 3.0 g Cloruro de Sodio 5.0 g Fosfato Hidrogenado de Potasio 2.5 g Glucosa Monohidrato 2.5 g Agua Purificada 1000 mL Ajustar el pH para que despus de la esterilizacin sea de 7.3 0.2 a 25. Esterilizar en un autoclave utilizando un ciclo validado. Agar Digerido de Casena y Soya Digerido Pancretico de Casena 15.0 g Digerido Papanico de Soya 5.0 g Cloruro de Sodio 5.0 g Agar 15.0 g Agua Purificada 1000 mL Ajustar el pH para que despus de la esterilizacin sea de 7.3 + 0.2 a 25. Esterilizar en un autoclave utilizando un ciclo validado.

Agar Sabouraud Dextrosa Dextrosa 40.0 g Mezcla de Digerido Pptico de Tejido Animal 10.0 g y Digerido Pancretico de Casena (1 : 1) Agar 15.0 g Agua Purificada 1000 mL Ajustar el pH para que despus de la esterilizacin sea de 5.6 + 0.2 a 25. Esterilizar en un autoclave utilizando un ciclo validado.

http://www.uspnf.com/uspnf/pub/getPFDocument?usp=34&nf29&supp=2&collection=/d... 18/01/2012

2012 USPC Official 12/1/11 - 04/30/12 General Chapters: <62> MICROBIOLOGICA... Pgina 10 de 13

Agar Papa Dextrosa Infusin de papas 2 00 g Dextrosa 20.0 g Agar 15.0 g Agua Purificada 1000 mL Ajustar el pH para que despus de la esterilizacin sea de 5.6 0.2 a 25. Esterilizar en un autoclave utilizando un ciclo validado.

Caldo Sabouraud Dextrosa Dextrosa Mezcla de Digerido Pptico de Tejido Animal y Digerido Pancretico de Casena (1 : 1)

20.0 g 10.0 g 1000 mL

Agua Purificada Ajustar el pH para que despus de la esterilizacin sea de 5.6 0.2 a 25. Esterilizar en un autoclave utilizando un ciclo validado.

Caldo Mossel para Enriquecimiento de Enterobacterias Digerido Pancretico de Gelatina 10.0 g Glucosa Monohidrato 5.0 g Bilis de Buey Deshidratada 70.0 g Fosfato Monobsico de Potasio 2.0 g Fosfato Dihidrogenado de Sodio Dihidrato 8.0 g Verde Brillante 15 mg Agua Purificada 1000 mL Ajustar el pH para que despus del calentamiento sea de 7.2 0.2 a 25. Calentar a 100 durante 30 minutos y enfriar inmediatamente.

Agar Violeta Rojo Bilis Glucosa Extracto de Levadura 3.0 g Digerido Pancretico de Gelatina 7.0 g Sales Biliares 1.5 g Cloruro de Sodio 5.0 g Glucosa Monohidrato 10.0 g Agar 15.0 g Rojo Neutro 30 mg Cristal Violeta 2 mg Agua Purificada 1000 mL Ajustar el pH para que despus del calentamiento sea de 7.4 0.2 a 25. Calentar hasta el punto de ebullicin, pero no calentar en autoclave.

http://www.uspnf.com/uspnf/pub/getPFDocument?usp=34&nf29&supp=2&collection=/d... 18/01/2012

2012 USPC Official 12/1/11 - 04/30/12 General Chapters: <62> MICROBIOLOGICA... Pgina 11 de 13

Caldo MacConkey Digerido Pancretico de Gelatina 20.0 g Lactosa Monohidrato 10.0 g Bilis de Buey Deshidratada 5.0 g Prpura de Bromocresol 10 mg Agua Purificada 1000 mL Ajustar el pH para que despus de la esterilizacin sea de 7.3 0.2 a 25. Esterilizar en un autoclave utilizando un ciclo validado.

Agar MacConkey Digerido Pancretico de Gelatina 17.0 g Peptonas (de carne y casena) 3.0 g Lactosa Monohidrato 10.0 g Cloruro de Sodio 5.0 g Sales Biliares 1.5 g Agar 13.5 g Rojo Neutro 30.0 mg Cristal Violeta 1 mg Agua Purificada 1000 mL Ajustar el pH para que despus de la esterilizacin sea de 7.1 0.2 a 25. Calentar a ebullicin durante 1 minuto, agitando constantemente, y luego esterilizar en un autoclave usando un ciclo validado.

Caldo Rappaport Vassiliadis para Enriquecimiento de Salmonella Peptona de Soya 4.5 g Cloruro de Magnesio Hexahidrato 29.0 g Cloruro de Sodio 8.0 g Fosfato Dipotsico 0.4 g Fosfato Dihidrogenado de Potasio 0.6 g Verde de Malaquita 0.036 g Agua Purificada 1000 mL Disolver, calentando ligeramente. Esterilizar en un autoclave utilizando un ciclo validado, a una temperatura que no exceda de 115. El pH debe ser de 5.2 0.2 a 25 luego del calentamiento y esterilizacin en autoclave.

http://www.uspnf.com/uspnf/pub/getPFDocument?usp=34&nf29&supp=2&collection=/d... 18/01/2012

2012 USPC Official 12/1/11 - 04/30/12 General Chapters: <62> MICROBIOLOGICA... Pgina 12 de 13

Agar Xilosa Lisina Desoxicolato Xilosa 3.5 g L-Lisina 5.0 g Lactosa Monohidrato 7.5 g Sacarosa 7.5 g Cloruro de Sodio 5.0 g Extracto de Levadura 3.0 g Rojo de Fenol 80 mg Agar 13.5 g Desoxicolato de Sodio 2.5 g Tiosulfato de Sodio 6.8 g Citrato Frrico Amnico 0.8 g Agua Purificada 1000 mL Ajustar el pH para que despus del calentamiento sea de 7.4 0.2 a 25. Calentar a ebullicin, enfriar a 50 y verter en placas Petri. No calentar en un autoclave.

Agar Cetrimida Digerido Pancretico de Gelatina 20.0 g Cloruro de Magnesio 1.4 g Sulfato de Potasio 10.08 Cetrimida 0.3 g Agar 13.6 g Agua Purificada 1000 mL Glicerol 10.0 mL Calentar a ebullicin durante 1 minuto con agitacin. Ajustar el pH para que despus de la esterilizacin sea de 7.2 0.2 a 25. Esterilizar en un autoclave utilizando un ciclo validado.

Agar Manitol Sal Digerido Pancretico de Casena 5.0 g Digerido Pptico de Tejido Animal 5.0 g Extracto de Carne 1.0 g D-Manitol 10.08 Cloruro de Sodio 75.0 g Agar 15.0 g Rojo de Fenol 0.025 g Agua Purificada 1000 mL Calentar a ebullicin durante 1 minuto con agitacin. Ajustar el pH para que despus de la esterilizacin sea de 7.4 0.2 a 25. Esterilizar en un autoclave utilizando un ciclo validado.

http://www.uspnf.com/uspnf/pub/getPFDocument?usp=34&nf29&supp=2&collection=/d... 18/01/2012

2012 USPC Official 12/1/11 - 04/30/12 General Chapters: <62> MICROBIOLOGICA... Pgina 13 de 13

Medio Reforzado para Clostridios Extracto de Carne 10.0 g Peptona 10.0 g Extracto de Levadura 3.0 g Almidn Soluble 1.0 g Glucosa Monohidrato 5.0 g Clorhidrato de Cistena 0.5 g Cloruro de Sodio 5.0 g Acetato de Sodio 3.0 g Agar 0.5 g Agua Purificada 1000 mL Hidratar el agar y disolver calentando hasta ebullicin y revolviendo constantemente. Si friera necesario, ajustar el pH para que despus de la esterilizacin sea de 6.8 0.2 a 25. Esterilizar en un autoclave utilizando un ciclo validado.

Agar Columbia Digerido Pancretico de Casena 10.0 g Digerido Pptico de Carne 5,0 g Digerido Pancretico de Corazn 3,0 g Extracto de Levadura 5,0 g Almidn de Maz 1,0 g Cloruro de Sodio 5,0 g Agar, de acuerdo a la capacidad de gelificacin 10.0 15,0 g Agua Purificada 1000 mL Hidratar el agar y disolver calentando hasta ebullicin y revolviendo constantemente. Si friera necesario, ajustar el pH para que despus de la esterilizacin sea de 7.3 0.2 a 25. Esterilizar en un autoclave utilizando un ciclo validado. Dejar enfriar a una temperatura entre 45 y 50, agregar, siempre que sea necesario, sulfato de gentamicina correspondiente a 20 mg de gentamicina base y verter en placas de Petri. Informacin Auxiliar Por favor busque su pregunta en las Preguntas ms frecuentes antes de contactar a la USP. Tema/Pregunta Captulo General Contacto Radhakrishna S Tirumalai, Ph.D. Cientfico Principal Coordinador 1-301-816-8339 USP34NF29 Pgina 56 Pharmacopeial Forum: Volumen No. 29(5) Pgina 1722 Comit de Expertos (GCM2010) Captulos Generales Microbiologa

http://www.uspnf.com/uspnf/pub/getPFDocument?usp=34&nf29&supp=2&collection=/d... 18/01/2012