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AISLAMIENTO E IDENTIFICACION DE ENTEROBACTERIAS

OBJETIVOS
Definir la metodología para su procesamiento. Establecer una guía de interpretación adecuada de los resultados para que éstos proporcionen una información lo más rápida y útil posible

INTRODUCCION
Definimos como bacteriemia la presencia de bacterias en la sangre que se pone de manifiesto por el aislamiento de éstas en los hemocultivos. La bacteriemia es una complicación grave de las infecciones bacterianas, con importantes implicaciones pronósticas, que se presenta en general en pacientes hospitalizados. El término fungemia se utiliza para designar la presencia de hongos en la sangre, de forma análoga a como hemos definido bacteriemia. La mayoría de las fungemias son causadas por levaduras como Candida y Criptococcus y tienen las mismas implicaciones y metodología diagnóstica que las bacteriemias por lo que las describiremos de forma conjunta. Septicemia o sepsis son expresiones que se emplean a menudo para denominar el sindrome clínico con el que se manifiestan las bacteriemias, independientemente del resultado de los hemocultivos. Por ello, resulta bastante confuso y preferimos no utilizarlo en esta revisión. La bacteriemia y la fungernia se producen cuando la multiplicación y llegada de microorganismos a la sangre supera la capacidad del sistema reticuloendotelial para elirninarlos. La invasión del torrente sanguineo se produce desde un foco de infección extravascular, a través de los capilares o de las vías linfaticas, o desde un foco intravascular como en la endocarditis. La diferenciación entre bacteriernias continuas como aquellas en que los microorganismos estan llegando constantemente a la sangre y bacteriemias intermitentes, en las que se encuentran en la sangre de forma discontinua, es difícil de establecer y no tiene interés en la práctica.

infecciones respiratorias. el aislamiento de un microorganismo en los hemocultivos es trascendente porque establece el diagnóstico etiológico de la bacteriemia y permite conocer la sensibilidad del microorganismo causal a los antimicrobianos. CARACTERISTICAS GENERALES DE LAS BACTERIEMIAS.La bacteriemia y la fungernia tienen implicaciones pronósticas importantes ya que se asocian a una elevada mortalidad que oscila entre el 20 y 40%. de los casos de verdadera bacteriernia de aquellos en los que la positividad se debe a un inadecuado procedimiento de extracción y procesamiento de la muestra. 4. puede deberse a la irrupción directa de los microorganismos en el torrente cardiovascular como en el caso de pacientes adictos a drogas. 2. La aplicación de una buena metodología para la extracción y procesamiento de los hemocultivos debe perseguir: 1. La mayoria de los microorganismos son capaces de invadir el torrente sanguíneo. temperatura y atmósfera de óptimo crecimiento y período de incubación. 3..La identificación precisa de los agentes causales de la bacteriemia y su sensibilidad a los antimicrobianos. . La distribucición de los agentes causales de la bacteriemia y la fungemia ha . El descenso de ésta se encuentra claramente relacionado con la administración de un tratamiento antibiótico adecuado lo más precozmente posible. sin ninguna otra manifestación clínica. en la medida de lo posible. Para ello deben tenerse en cuenta sus diferentes requerimientos nutricionales.La deteccición precoz de la presencia de bacterias en sangre de forma que las modificaciones del traramiento que ello conlleva se puedan realizar con la mayor rapidez. portadores de catéteres intravasculares y sometidos a cirugía cardíaca. Por ello.. Se presenta a cualquier edad y están especialmente predispuestos a padecerla los pacientes con graves enfermedades de base y los sometidos a maniobras que causan alteraciones de los mecanismos generales y locales de defensa frente a la infección.La diferenciación. hasta el shock séptico con fracaso multiorgánico. ETIOLOGIA DE LAS BACTERIEMIAS. o bien la puerta de entrada puede ser inaparente. La incidencia de la bacteriemia depende de la población estudiada y oscila entre 5 y 30 casos por cada 1000 pacientes hospitalizados.El aislamiento de todos los microorganismos productores de bacteriemia. Las manifestaciones clínicas de las bacteriemias son muy variadas y van desde un cuadro febril. etc. La bacteriemia puede ser una complicación de infecciones localizadas como infección urinaria...

El diagnóstico definitivo de la bacteriemia se establece cuando se aísla el microorganismo causal en la sangre. al uso generalizado de catéteres intravasculares. pero se atribuyen a la utilización de antibióticos de amplio espectro. Los motivos de este cambio no se han establecido con exactitud. la necesidad de realizar hemocultivos deriva de los siguientes hechos: 1. en aproximadamente el 14% de los casos en los que se obtienen hemocuitivos se establece el diagnóstico de bacteriemia.. por una parte. ha provocado la aparición cada vez más frecuente de bacteriemias causadas por agentes que en el pasado eran causa muy rara de infección (Corynebacterium. 3. el aumento de pacientes con neoplasias o infección por VIH. FUNDAMENTO TEORICO CLASIFICACIÓN DE LOS HEMOCULTIVOS Los hemocultivos se pueden clasificar según el tipo de paciente.) DIAGNOSTICO DE LAS BACTERIEMIAS. a la mayor agresividad de la cirugía y a la utilización de maniobras terapéuticas invasivas. mediante el cultivo de ésta.. a la mayor supervivencia de enfermos graves.El hemocultivo no es una técnica costosa y su obtención no conlleva ningún riesgo para el paciente. Existen dos datos que ilustran este hecho. Por otra parte.El aislamiento de una bacteria en los hemocultivos aporta una valiosa información a la hora de elegir el tratamiento antimicrobiano adecuado. pues los . Además.variado en los últimos años y actualmente los microorganismos Gran positivos.Las características clínicas de la bacteriemia y las situaciones en que puede presentarse son tan variadas que no permiten establecer un diagnóstico clínico con suficiente certeza... igualan o superan en frecuencia a los bacilos Gram negativos. en el 1425% de los pacientes hospitalizados se sospecha bacteriemia y se les extraen hemocultivos y por otra. a la aparición de resistencia a los antimicrobianos en microorganismos comoSraphylococcus aureus o Enterococcusque pueden causar brotes de infección hospitalaria. especialmente estafilococos y enterococos.. 2.. gravemente inmunodeprimidos. Todo ello obliga a mantener un alto índice de sospecha y extraer hemocultivos a muchos de los pacientes que ingresan en el hospital o que consultan por sospecha de infección.

Septichek. Según la toma de la muestra pueden ser hemocultivos periféricos o centrales (obtenidos a través de un catéter venoso central). en sistemas semiautomatizados como el sistema Lisiscentrifugación o en sistemas automatizados como BACTEC. etc. También pueden clasificarse según el tipo de microorganismos que se esté investigando. BacT/Alert. se pueden clasificar según la metodología de los distintos sistemas de hemocultivos en métodos convencionales (manuales). fastidiosos. micobacterias u hongos. .microorganismos son distintos según si se trata de un paciente inmunosuprimido o inmunocompetente. anaeróbicas. también si se trata de pacientes adultos o pediátricos o si se trata de enfermos que estén o no bajo terapia antimicrobiana. Por último. ya que se requieren distintos sistemas de hemocultivos según si se sospechan bacterias aeróbicas.

5% . bilis esculina CINa al 6.COCOS Gram (+) En racimos DNASA y/o coagulasa ntibiogra ma En diplos o cadenas Gram (-) Antibiogra ma en agar chocolate y CO2 Optoquina.

Antibiograma COCOBACIL OS Gram (-) Antiobiograma en agar chocolate y CO2 BACILOS Gram (+) Corynefor mes Gram (-) Pruebas bioquímica s de identificaci ón Antibiogra ma Esculina Antibiogra ma en agar sangre LEVADURAS Medios para .

Se deja secar la preparación. La observación de las colonias se caracteriza por su tamaño. Cada colonia consiste de millones de células bacterianas. se fija al calor suave y se trata como sigue Paso 1. la sangre. . Tinción con cristal violeta. Paso 2. Las colonias se tiñen por la técnica de Gram y las células bacterianas teñidas individualmente se observan bajo el microscopio. el líquido cerebroespinal) se estrían sobre placas de cultivo y las colonias aisladas de las bacterias (las cuales se observan a simple vista) aparecen después de uno a varios días de incubación. esta otra característica es relevante en la diferenciación.hongos MATERIALES Heces Oria Agar nutritivo Agar emb Agar mac conkey RESULTADOS casos para el aislamiento e identificación diagnóstica de bacterias Paso 1. Las muestras de fluidos corporales (por ejemplo. la textura. Esto a menudo requiere horas adicionales de tiempo de crecimiento. Paso 3. LA TINCIÓN DE GRAM Un toque del asa sobre la colonia bacteriana se debe disolver sobre una gota de agua y extender como una capa fina sobre un portaobjetos. la orina. el color y (si ha crecido en agar sangre) las reacciones de hemólisis. En caso de que el organismo requiera oxígeno para el crecimiento. La morfología colonial es altamente importante como un primer paso en la identificación bacteriana. Las bacterias se tipifican usando colonias aisladas para sembrar pruebas bioquímicas.

aureus. todas las bacterias en la preparación permanecen de color púrpura o azul. Las bacterias gram positivas ya están teñidas con cristal violeta y permanecen de color púrpura. pares.pneumoniae . para así decidir cuan significativo puede ser un resultado determinado. Ya están disponibles y son actualmente usadas otro tipo de pruebas de diagnóstico molecular. S. por ejemplo la lactosa? Algunas veces.Bacillus spp. la probabilidad de representar una infección verdadera es mayor al 90%. Las bacterias gram negativas se tiñen de color rosa. o Propionibacterium acnes no constituyen una bacteremia verdadera en la gran mayoría de los casos. pleomórficas [forma variable]. el agente aislado y el número de cultivos positivos.Paso 2. Paso 3. ¿fermentara la bacteria un azúcar. Fijación con una solución de yodo. hay otras tinciones disponibles que son menos empleadas (por ejemplo tinciones para esporas y cápsulas). Tinción de contraste con safranina. micobacterias u hongos levaduriformes . En cambio. la presencia de un hemocultivo positivo debe interpretarse a la luz del cuadro clínico. Paso 4. Extracción con alcohol u otro solvente. enterobacterias.. Las preguntas que se deben hacer incluyen:     ¿Se trata de bacterias gram positivas o negativas? ¿Cuál es la morfología (bastones.)? ¿Aparecen las células en forma separada o formando cadenas. espirales. cocos. .? y ¿De que tamaño son las células? Aparte de la tinción de Gram. etc. por ejemplo. Decolora algunas bacterias (las Gram negativas) y no otras (las Gram positivas). racimos.Cuando se aisla agentes como S. etc. agentes tales como Corynebacterium sp. A continuación la apariencia de las bacterias se observa bajo el microscopio. CONCLUSIONES Por otro lado. De la placa de aislamiento primario se toma otra colonia similar y luego se examinan las propiedades bioquímicas. Estabiliza el cristal violeta. las bacterias se identifican (por ejemplo: por aglutinación) con anticuerpos disponibles comercialmente que reconocen antígenos definidos en la superficie de la bacteria.

En situaciones tales como abscesos intraabdominales.En bacteremias por más de un agente.bvsde. para así decidir si constituyen o no verdaderos patógenos.paho. las bacteremias o fungemias son por un microorganismo único.pdf http://es. no es infrecuente aislar más de un agente en hemocultivos. neutropénicos febriles con mucositis intensa o grandes quemados. en la gran mayoría de las situaciones clínicas. deberemos utilizar para cada microorganismo aislado los mismos criterios antes mencionados.org/bvsaidis/resisoli/iii-131.com/doc/44240059/Aislamiento-e-identificacion-de-bacterias . infecciones de catéteres. BILIOGRAFIA http://www. Sin embargo.scribd.