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CAPíTU lO 24
Aminoácidos, péptidos
y proteínas
24.1
Introducción
Las proteínas son las mol&: ulas orgánicas más abundantes en los animales, y juegan un pa-
pel importante en todos los aspectos de la estructura y funciones de las células. Las pro-
teínas son biopolímeros de a-aminoácidos. denominados así porque el grupo amino está
enl azado al átomo de carbono a, átomo más próximo al grupo camonil o. Las propiedades
físicas y quími cas de las proteínas se delenninan a part ir de los aminoácidos que las for-
man. Las subunidades de aminoácidos individuales están unidas mediante «enlaces ami-
c\.a¡" conocidos como enlaces peptfdicos. En la Figura 24. 1 se represent a la estructura ge-
neral de un a-aminoácido y de una proteína.
Las proteínas tienen un ampLi o intelValo de estruclUras y propiedndes catalít icas de-
bido a su diferente composición en aminoácidos. Debido a su versati lidad, las proteínas
tienen una gran variedad de funciones en los seres vivos. En la Tabla 24. l se enumeran al-
gunas de las funciones de las princi pales proteínas.
átomo de cllrhono a °
\ 11
Il
z
N- CH - C-OII
7 I
lfUl') o. anuOQ R - cadcrla lalera!
a ·aminoácido
íi \i\

I I I I I
1114
e H) CH
2
0H H CH
2
S1-1 CH(CH)h:
o
11

I
eH,
alanina
pequeña sección de UI1II proceína
o
11

- I
CH
2
0H·
scrina
... Figura 24.1
o
11
II ...
. I
H
glicina
aminoácidos individuales
o
11
II , N-CH- C- 0I1
- I
CH,sH
cistcfna
o
11
H.,l\ -CH- C-OH
- I
CH(Cl-IJh:
vaJina
Estructur.l de una prole[na general y de los aminoácidos que la forman. Los aminoácidos están
unidos mediant e .. enlaces amilla» denominados enlaces pcptídicos.
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24.2 Estructurn y estereoquímica de los a-ami noácidos 111S
TABLA 24.1 Ejemplos de funciones de las proteinas
Clases de proteínas
proteínas estructurales
enzimas
proteínas de transpone
proteínas eomráctiles
proteínas p-otcctoras
honnonas
toxinas
Ejemplo
colágeno, queratina
ADN poLimerasa
hemoglobina
actina, miosina
anticuerpos
insulina
veneno de la.., serpicmes
Fundones del ejemplo
tendones, piel, pelo, uñas
repliCll ción y reparación del ADN
transpone de Ü:2 a las células
pnxluce la contracción de los músculos
compleja las proteínas extrañas
regula el metabolismo de la glucosa
incapacita a las presas
El estudio de las proteínas es una de las principales mmas de In bioquímica y no está
clara la sepnnlción entre la química orgánica de las proteínas y su bioquímica. En este cnpf-
tulo, se comienza el estudio de las proteínas a partir de las propiedades de sus constituyen-
tes, los aminoácidos. También se estudia cómo se enlazan los aminoácidos (monómeros)
para fonnar los jXllfmeros de proteínas y cómo dependen las propiedades de las proteínas de
las de sus constituyentes, los aminoácidos. Se necesitan estos conocimientos básicos pnmel
posterior estudio de la estructura de las proteínas, y de sus funciones bioquímicas.
El ténnino aminoácido define a cualquier molécula que contiene un grujXI amino y un gru-
jXI ácido; sin embargo, este télminocasi siempre se utiliza pam designar a un a-nminoácido.
El a-aminoácido más simple es el ácido ammo acético, denominado glicina. Otros aminoá-
cidos comunes tienen Cadenas laterales (simbolizadas por R) sustituidas en el átomo de car-
bono u. Por ejemplo, la alanina es el aminoácido con un grupo metilo como cadena lateral.
o
11
H,N-CH,-C-OH
glicina
o
11
H,N-CH-C-OH
1
R
aminoácido sustituido
o
11
HN-CH- C-OH
, 1
CH
1
alanina ( R =- e H,)
Excepto la glicina, lodos los a-aminoácidos son quirales. En todos los casos (excepto
en la glicina), el átomo de carbono a es asimét rico y constituye un centro quira!. En casi to-
dos los aminoácidos naturales, el átomo de carbono a tiene configuración (S). En la Figura
24.2 se represenw la proyección de Fischer del enantiómero (S) de la alanina, con la cadena
de carbonos en la vertical y el carbono carborulico en la parte superior. Se puede observar que
la (S)-alanina tiene una configuración similar a ladel L-(- )-gliceraldehído. con el grujXI ami-
no a la izquierda en la proyección de Fischer. Como su estereoquímica es simi.lar a la del
L-(-)-gliceraldehído, a los (S)-aminoácidos nnturales se los c1asificn como L-aminoácidos.
A pesar de que los L>-aminoácidos se encuentran ocasionalmente en la natumlezn, ge-
neralmente se denominn aminoácido a los L-aminoácidos. Se ha de recordar que la no-
menclatura D y L. como la designación R y S, se refieren a In configuración del átomo de
------
COOH CHO COOH
1 1 1
/C", /C" , /C",
l ¡zN \ '·CH
3
110 VCHzÜH H, I'; V R
H H H
COOH CHO COOH
H 2 ~ + H HO+H H,N+ H
CH, CHzOH R
(S)-alani.na L-(- )-gliccraldehído L-aminoácido
(!--alanina) configuración (S)
24.2
Estructura
yestereoquímica
de los
a-aminoácidos
... Figura 24.2
Casi todos los aminoácidos
naturales tienen configuración
(S), con estcreoquími ca parecida .
a la del L-(-)-gliceraldehído, por
lo que se denominan
L-aminoácidos.
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1116 Capítulo 24; Ami noácidos, péptidos y proteinas
las bacterias requi eren enzimas
especificos, denominados race-
masas. para interconvertir o y
l-aminoácldos. l os mamiferos
no utilizan o-aminoáddos. por lo
que se han desarrollado com-
puestos que bloquean las réH:e-
masas como antibióticos poten-
ciales.
carbono asimétrico. Si no se conoce el signo de la rotación óptica, (+) o (- ), se ha de de-
tenninar experimentalmente.
Los aminoácidos tienen muchas de las pmpiedades y reacciones de las aminas y de
los ácidos carboxílicos. La combinación de un grupo amino básico y un grupo carboxíli-
ca ácido en la misma molécula da lugar a propiedade.", y reacciones características. Las ca-
denas laterales de algunos aminoácidos lambién lienen grupos funcionales que dan lugar
a propiedades interesantes y experimentan reacciones características de esos grupos.
24.2A Aminoácidos estándar de las proteínas
Hay veinte a-aminoácidos, denominados aminoácidos que prácticamente se en-
cuentran en todas las proteínas. Los aminoácidos cstándar difieren unos de ot ros en la es-
truclU .. l de las cadenas laterales enlaJ.ada'i a los átomos de carbono u. Todos los aminoácidos
estándar son L-aminoácidos. En la Tabla 24.2 se representan los veinte aminoácidos estándar,
agrupados según las propiedades químicas de sus cadenas latcmles. El nombre de cada ami-
noácido aparece abreviado con tres let ras y un sfmbolo de una letra (que aparece en verde
en la tabla). para utili zarlo cuando se escri ben las est ructuras primarias de las proteínas.
TABLA 24.2 Aminoácidos estándar
Nombre 51mbolo Abreviatura
1
Estructura
la cadena lat eral es H o un grupo alquilo (no polar)
glicina G GI)' HzN-CH-COOH
[f¡
a1anina A
v Vru
"kucina L l<u
"¡solcucina ,,<
"'fcni lalanina F
prolina
p
Pro
la cadena lateral contiene un grupo - OH
! CH(CH,CH) !
H
2
N-CH-COOH

CHz-CH-CH)
I
CI-1
3
H N-CH-COOI-I
, I
I CH
3
Cf-I CI-lzCf-l
l
]
H'N-[J:,-o l
serina S Ser H¡N-CH-COOI-l
'1rconillll T
• Aminoácidos esenciales.
CH
2
- OH
HN- CH- COOI-l
,
I HO- CH - CH, I
Grupo funcional
de la cadena lateral
ninguno
grupo alQuito
grupo alquilo
grupo alclui lo
grupo alquilo
grupo aromático
CSlructum cfcliclI rígida
grupo hKlroxilo
grupo hKlroxilo
Punto
isoeléctrico
6.0
6.0
6.0
6.0
6.0
5.5
6.3
5.7
5.6
(continúa en la p(íghul siguiente)
I Nota de los tradllctores: se ulili zan habitualmclI!C las abreviaturas de los nombres ingleses de los ami-
noácidos; por ejemplo. Gly en tugar de GIl. pam la gli cina o Phc en lugar de Fen para la fcnil alanina.
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24.2 Estruct um y estereoquímica de los a-amino.1cidos 1117
TABLA 24.2 (continuación)
Nombre 51mbolo Abreviatura
tirosina y T)'I
la cadena lalcm1 contiene: azufre
cisterna e
e"
OOmetionina M
Estructura
HzN-CH-cexm
1, --- ----¡
1 CH,--O-0H ,
H;.N-CH-COOH
I
¡CH, SHI
la caden1t lalcm1 contiene nitrógeno no rnísico
aspardgina N Asn H
2
N-CH- COQH
rJ -:-::-:-::7l
[ CH! A
glutamina Q 0 1"
IriplÓfano w
T'P
la cadcn1t laleral es ácida
ácido aspártico O
ácido glulámico E
la cadena laleroJ.I es Msica
*Iisina K Ly,
· arginino R A,.
H Ifis
• Ami noácidos escndales.
H N-CH-COC>H
, I
, c--=- ::--: 1
I CH
2
CH
2
A NH,
H N-CH- CCX>H
,
«N-V
H
H:¡N-CH-COQH
7:H,-COOHl
I '
H N-CH-COOl-1
, 1


!
CI-I
I
eH] CH¡ NH i NII
2
1
NH
Grupo fundonal
de la cadena lateral
grupo - OH fcn61ico
liol
sulfuro
amida
amida
indol
ácido carboxílico
ácido carboX11 ico
gruJXI amino
gruJXI guanidioo
anillo de imidaz.ol
Punto
isoeléctric.o
5.7
5.0
5.7
5.4
5.7
5.9
2.8
3.2
9.7
10.8
7.6
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1118 Capítulo 24: Aminoácidos, péptidos y proteínas
La gelatina SE' obtiene a partir
del colágeno. proteioa estructu-
ral compuesta principalmente de
glicina. prolina e hidroxiprolina.
Como consecuencia. la gelatina
tiene un valor nutricional bajo.
ya que car«e de muchos de los
aminoacidos esenciales.
En la Tabla 24.2 se puede observar que la prolina es diferente de otros aminoácidos
estándar, ya que su grupo amina, enlazado al átomo de carbono en posición a con el gru-
po carboxíl ico, fonna parte de un anillo. Esta esrructum cíclica hace que los péPlidos que
contienen proLina tengan una fuer¿a y una rigidez adicional.
prolina GCOOH
7 ....... H ........... ca!'booo a
H '-grupo a -aroino
PROBLEMA 24.1
Represente en tres dimensiones los aminoácidos siguientes:
(a) L-fcnilalanina (b) L-arginina (e) I)-scrina (d) L-t riptófano
PROBLEMA 24.2
La mayoría de los aminoácidos naturdles ti er'ICn centros quiral es (álomOS de carbono en a asi·
métricos) denominados (S) según la convención de Cahn·lngold-Prelog ($c(;ó 6n 5.3); sin embargo,
los derivados natumles de la cisteína tienen un centro quiml (N).
(a) ¿Qué relación hay cntre la (R).-ciste(na y la (,s)·alanina? ¿Tienen configuración tridimcnsio.-
nal opuesta (tal como sugieren sus nombres) O bien tienen la mi sma configuración?
(b) La (sralanma es un I.·aminoácido (Fi guru 24.2). ¿La (R)--cistcina es un o.aminoácido o un
J.·amiooácido?
24.28 Aminoácidos esenciales
Los seres humanos pueden simctizar aproximadamente la mitad de los aminoácidos que
fonnan las proteínas. el te. .. to de aminoácidos. denominados a mi nmicidos esenciales. han
de ser ingeridos en la dieta. Los diez ami noácidos esenciales. mm'Cados con un asterisco
(*) en la Tabla 24.2, son los siguientes:
arginina (Arg) valina (Val)
treonina (Thr) fenilalanina (Phe)
lisina (Lys) triptófano (Trp)
metionina (MeO
histidina (His)
leucina (Leu)
isoleucina Ole)
A la .. proteínas que proporcionan todos los aminoácidos esenciales en la proporción
correcta para la nutrición humana se les denomina proteínas complet as. Ejemplos de pro-
tefnas completas son aquellas que se encuentran en la carne, el pescado, la leche y los
huevos. En los adultos es adecuado ingerir 50 g de proteínas completas por día.
A las proteínas que son severamente deficientes en uno o más de los aminoácidos
se les denomina proteínas incompletas. Si las prOleínas en la dieta de una per·
sona vienen principalmente de un recurso incompleto, la cantidad de proteínas que puede
si ntetií'.ar el organismo humano es limitada debido a la deficiencia de aminoácidos. Las pro-
teínaS que contienen la'i plantas generalmente son incompletas. El arroz., el mafz y el tri·
go son dcficientes en lisina. El arroz también carece de treonina y el maiz también care·
ce de triptófano. Las judías. guisantes y otms legumbres son los que tienen las proteínas
más completas entre las plantas, pero son dcllcientes en metionina.
Los vegetarianos pueden conseguir una ingesra adecuada de aminoáci dos esencia·
les si comen diferentes tipos de plantas. Se pueden elegi r las protefnas de las plantas que
sean complementarias. de fonna que unas plantas suplan los amino{icidos de los que son
carentes Olr' dS. Una alternativa es añadir a la dieta vegetariana un complemento aliment a·
ri o rico en proteínas como la leche o los huevos.
PR08LEMA 24.3
El herbicida glifosfato (Roundup<!) mata las plant as debido a que inhibe un enz.ima ncccsurio
pard la síntesis de fcni lalanina. Al carecer de fcni lalanina. la pl anta 00 puede sintetizar las pll)-
tcina .. que necesita, por lo que se debil ita gradualmente y muere. A pesar de que una pequeña
cantidad de glifosfalo e. .. mortal para una plant a, la toxicidad para un ser humano es bastante baja.
Sugiern por qué este poderoso herbicida ticne muy poco efccto en los seres humanos.
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24.3 Propiedades ácido-base de los aminoácidos 1119
24.2C Aminoácidos raros e ¡nusuales
Además de los aminoácidos estándar, en las proteínas se encuentran otros aminoácidos en
pequeñas pro¡:H)rciones . Por ejempl o, la 4-hidroxiprolina y la 5-hidroxilisina son fonnas
hidroxiJadas de aminoácidos estándar. Se denominan aminoácidos raros, a pesar de que
frecuentemente se encuentran en el colágeno.
H f k
COOH
N H
1
H
4-hidroxiprolina
6 5 4 3 2 I
H N-Cl' -CH-CH -CH -CH-COOH
, ~ 1 ' ' 1
OH NHz
5-hidroxil isina
Algunos de los enanti6meros D, menos frecuentes en los aminoácidos, también se en-
cuentran en la naturalela. Por ejemplo, el ácido D-glutámico se encuentra en las paredes
celulares de muchas bacterias y la D-serina se encuentra en los gusanos de tierra. Algunos
aminoácidos naturales no son a-aminoácidos: el ácido y-aminobutírico (GABA) es uno de
los neurotransmisores del cerebro y la ¡3-alanina es un constituyente de la vitamina ácido
pantoténico.
COOH
H+NH,
CH,CH,COOH
ácido D-g1ulámieo
H-f:
, . "
CH -CH - CH -coml
I 2 2 2
, "
CH - CH - COOH
l' ,
CHpH NH, Nl-I,
D-senna ácido -y-aminobut meo ¡3-alanina
A pesar de que generalmente los aminoácidos se escriben con un grupo carboxíJico
(- COOH) y un grupo amino (-NH
2
), su estructura real es iónica y depende del pH.
El grupo carboxílico pierde un protón, dando lugar a un ión carboxiJato, y el grupo ami -
no se protona y da lugar a un ión amonio. A esta estructura se le denomina Ión dipolar o
zwiUerión (del alemán «Ión dipoJar»).
o
11
H N-CH-C-OIi
, 1
R
estructura nculrd
(componente minoritario)
o
, 11
H , N - C H - C - O ~
1
R
i6n dipolar o 'lwitlCnón
(oompooeme mayori tario)
La naturaleza dipolar de los aminoácidos hace que éstos tengan algunas propieda-
des características:
1. Los aminoácidos tienen puntos de fusi6n altos, generalmente superiores a 2()()OC.
+
H
3
N- CH
2
- COO-
glicina, pf := 2620C
2. Los aminoácidos son más solubles en agua que en éter, dicloromelano y otros di -
solventes orgánicos comunes.
3. Los amjnoácidos tienen momentos dipolares (P) mucho más grandes que las ami-
nas o los ácidos por separado.
+
H
3
N-CH
2
-COU CH
3
-CH
2
- CH
2
-NH
2
CH
3
- CH
2
- COOH
glicina. JL = 14 O propilamina, JL = 1.4 D ácido propiónico, JL = J. 7 D
24.3
Propiedades
ácido-base de
los aminoácidos
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1120 Capítulo 24: Aminoácidos, péptidos y proteína ..
+
4. Los aminoácidos son menos ácidos que la mayoría de los ácidos carboxílicos y
menos básicos que la mayorb .. de las aminas. De hecho. la parte ácida de una mo-
lécula de aminoácido es el grupo -NH
3
+. no el grupo -COOH; la parte básica es
el grupo - COO- y no el grupo -NH
2
_
R
+ I
R-COOH H
3
N-CH-COO-
pKa 10
pKb = 12
Como los aminoácidos contienen el grupo ácido (-NHj) y básico (- COO,. son
anfóteros (tienen propiedades ácidas y bás icas). La fonna predominante del aminoácido
depende del pH de la solución. En una solución ácida. el grupo -COO- se protona y se
obtiene el grupo -COOH. y la molécula tiene una carga tolal positiva. Si el pH aumen-
ta, el grupo -COOH pierde su protón aproximadamente a pH = 2. A este punto se le deno-
mina pKal> primera constante de disoci ación ácida. Si el pH sigue aumentando, el grupo
- NHj pierde su protón a un pH entre 9 y 10. A este punto se le denomina pK
1I2
, segun-
da constante de disociación ácida. Por encima de este pH, la molécul a tiene una carga
total negativa.
-OH + - OH
li,N- CH-COOH

• HN- CH-COO- H,N- CH- COO-
I
H+ , I w
I
R R R
cali6nicn en ml'diIJ áódo pK
a
, "" 2 ntUlm pK
al
as 9- 10 adóllIco en medio hfu.ico
... Figu ra 24.3
Curva de valoración de la glicina.
El pH controla la carga de la
glicina: caliooK:a por debajo de
pH = 2.3; aniónica por encima
de pH = 9.6 y zwittcriónica entre
pH = 2.3 Y 9.6. El pH isoeléctrioo
cs6.0.
En la Figura 24.3 se representa una curva de vaJomción de la glicina. La curva co-
mienza en la parte inferior izquierda, donde la glicina se encuentra completamente en su
fonna catiónica. Se añade lentamente una ba<;e y se registra el pH. A pH = 2.3, la mitad
de la forma catiónica se ha transformado en la forma zwiucriónica. A pH = 6.0, prácti-
camente toda la glicina se encuentra en la forma zwitteriónica. A pH = 9.6, la mitad de
4
,--""'-- --+---"co.5'---i2., (}
J.--/
!." ~ - - H i . CU, e-o
./
í !
pK
a2
= 9.6
punto
isocléctrico
= 6.0
!
f"rma aniónit-a
PO! tneima d .... pH \}.O
O
+ 11
HI-- H
3
N- CH
2
- C- 0 -
7:wiueriÓll próximo
al punto isoeléctrico
2 - ~ O
( 1: ' PKat = 2.3 + 11
1'- =, - - - - --t-- HIN-CH,-C- 0 11
O I roomr cmjónit.:a
0.5 1.5 2 por deb;ljo de pH :u
equivalentes de - OIi añadidos
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24.4 Puntos isoeléclTicos y electroforesis 1121
la fonna zwineriónica se ha transformado en la forma básica. A partir de este gráfico se
puede ver que la glicina está mayoritariamente en la forma cati ónica a valores de pH
inferi ores a 2.3, en la forma aniónica a valores de pH superiores a 9.6 y en la forma
zwiUeriónica a valores de pH entre 2.3 y 9.6. Variando el pH de la solución se puede con-
trolar la carga de la molécula. Esta capacidad de controlar la carga de un ami noácido es
úti l para separar e identificar los aminoácidos por electroforesis, tal como se descri be en
la Sección 24.4.
Los aminoácidos presentan una carga positi va en soluciones ácidas (pH bajo) y carga ne-
gativa en soluciones básicas (pH alto). Hay un pH intcnnedio donde las dos formas del ami-
noácido se encuentran en la misma proporción, como el zwi tteri 6n dipolar con una carga
ncGi de cero. A este pH se le denomina pH isoeléctrico o punto isoelédrico.
W
+

24.4
Puntos isoeléctricos
y electroforesis
H,N-CH- COO-
I
« )
- OH
H N-CH- COO-
, I
H)N- CH- COOl'¡
I
R R R
pH alto
(¡uúooico en medio básico)
pH isoeléctrico
(neulro)
pll bajo
(caliónico en medio ácido)
En la Tabla 24.2 se da el valor de Jos puntos isoeléctncos de Jos aminoácidos están-
dar. Se puede observar cómo el pH isoeléctri co depende. de manera predecible. de la es-
tructura del aminoácido:
aminoácidos con carácter ácido:
aminoácidos neutros:
aminoácidos con carácter básico:
ácido aspártico (2.8), ácido glutámico (3.2)
5.0 a 6. 3
lisi03 (9.7). arginina (10.8), histidina (7.6)
El ácido aspártico y el ácido glutámico tienen cadenas laterales que contienen gru-
pos de ácidos carboxílicos. Estos aminoácidos ti enen puntos isoeléctricos ácidos con un
valor de pH de alrededor de 3. Se necesi ta una solución ¡'{cida pllI"d. prevenir la desproto-
nación del segundo grupo de ácido carooxílico y hacer que el aminoácido permanezca en
su estado isocléctrico neutro.
Los aminoácidos básicos (histidina. lisina y arginina) lienen punt os isoeléctricos
para valores de pH de 7.6,9.7 y 10.8, respectivamente. Estos valores reflejan la débil ba-
sic idad del anillo imidazol, basicidad inlemledia de un grupo ami no, y la fuerte basicidad
del grupo guanidino. En cada caso se necesita una solución básica para prevenir la proto·
nación de la cadena lateral básica para hacer que el ami noácido permanezca neutro.
El resto de los aminoácidos se consideran neutros, sin cadenas laterales fuertemen-
te ácidas o básicas. Sus punlos isoeléctricos son li geramente ácidos (entre 5 y 6) ya que el
grupo -NHj" es ligerdmente más ácido que el grupo -C(XT básico.
PROBlEMA 24.4
Reprcscnte la estructura de la fonna predominante de:
(a) valina a pH = 11 (b) prolill8 a pH = 2
(e) lI rginina a pH = 7 (d) ácido glutámico a pH = 7
(e) me¡r.cla de aJ:mina, lisirla y áci do aspártico a (i) pH = 6; (ii) pH = 11 ; (iii) pH = 2
PROBl EMA 24.5
Rcpresente las fonnas de resonancia de un grupo guanidino protonado y cxplique por qué la ar-
gillina tiene un punto isocléctrico fuertemente básico.
PROBlEMA 24.6
J
A pesar de que el triptófano coul ienc un grupo amino helerocíclico, se considera un amillQ.leido
neutro. Explique por qué el nitrógeno iodólico del triptMallO es mucho menos básico que los ni·
trogenos imidazólicos de la histidina.
snr.F.RF.NC'TA
PARA RESOLVER PROBLEMAS "-
En su punto isoeléct rico (PIE), un
aminoácido tiene una carga total
de cero, estando balanceados el
grupo N H ~ V el grupo COO- . En
una wlución más ácida (PH más
bajo), et grupo carbonilo se
protona V la carga total es
posit iva. En una solución más
básica (pH más alto), el grupo
amino pierde su protón V ta carga
total es negativa.
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1122 Capítulo 24: Aminoácidos, y proteínas
.... Figura 24.4
Representación simpli ficada de la
separación clcctmforética de la
alanina, lisina y ácido aspánico a
pH = 6. La lisina cali 6nicacs
al.Iuída hacia el cátodo, el ácido
aspánico aniónico es atraído
hacia el ánodo y la alanina se
encuentra en su punto .
isucléclrico, por lo que no se
mueve.
Las diferencias en los puntos isoeléclticos se pueden ulili7.ar para separar me7..clas
de aminoácidos por electroforesis. Se coloca una línea de una mezcla de aminoácidos en
el cent ro de una capa de gel de aeritamida o en un trozo de papel de fi ltro humidiHcado
con una solución tampón. En los extremos del gel o del papel se colocan dos electrodos y
ent re ell os se aplica un potencial de varios miles de voltios. Los aminoácidos cargados
positivamente (catióni cos) son atraídos porcl electrodo negati vo (cátodo) y los aminoáci·
dos cargados negati vamente (ani6nioos) son atraídos por el electrodo positivo (ánodo). Un
aminoácido en su punlo isoeléclrico no ti ene carga. por lo que no se mueve.
A modo de ejemplo, considérese una mel.cla de alanina, li sina y ácido aspárt ico en
una solución lampón de p¡'¡ = 6. La alani na se encuentra en su punlo isoeléctrico, en sU
forma zwiucri ónica di polar con una carga tolal de cero. Un pH = 6 es más áci do que el
pI-! isoeléclrico de la lisina (PH = 9.7), por lo que la lisina está en su forma catiónica. El
ácido aspárt ico tiene un pH isoeléctrico de 2.8, por lo que se encuentra en forma aniÓllica.
Estr/lctura a pH = 6
,

,
Ji N- CJi - COO-
, I
Ji N- CIl - COO-
, I
H,N CII - COO-
I
CH,
alanilla (carga O)

lisina (carga + 1)
CJi, - COO
ácido asp.'inico (carga - 1)
Cuando se aplica un voltaje a una mezcla de alanina, Ii sina y áci do aspártico a
pH = 6, la alanina no se mueve, la Hsina se mueve hacia el cálodo y el ácido aspártico sc
mueve hacia el ánodo (Figura 24.4). Después de un per íodo de ti empo, se recupemn los
ami noácidos separados, cortando el papel o raspando las bnndas del gel. Si se utilj za la elec-
troforesis como una téc ni ca alUl lítica (para detemlinar los aminoácidos presentes en una
me7.cla), el papel o el gel se tratan con un reaclivl? como la ninhidrina (Sección 24.9),
para hacer que las bandas senn visibles al adquiri r color, lo que permite identificar a los
aminoácidos comparando sus posiciones con los valores estándar.
PROBLEMA 24.7
Represcnte la separación electroforét iea de Ala, Lys y Asp a pH = 9.7.
PROBLEMA 24.8
Represente la separación electmforel ica de Trp, Cys y His a p H = 6.0.
fuell ll! .+.-____
de ellergfa ,.
Principio cátodo ánodo
+
Final
humidificado
con solución tampón a pH = 6
hnea de aphLaciool.jLK: Ala, I AJ,p
-
fuente

/
de energía ,-
'\
I
,átodo áoodo
-
+
"-
1,
/
I
<;e mlll'\e IJIk: i¡l la
/ Ala no se !lIlIeve
Lys' 'iC muevc hacia la carga neE;8tiv/!
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24.5 Sfmesis de aminoácidos
24.5
Síntesis
1123
Los aminoiicidos naturales se pueden obtener hidrolizando proteínas y sepamndo
la mezc:la de aminoácidos. pero es más barato sintetizar los aminoácidos puros. En
algunos casos se necesita un aminoácido inusual o enunliómerO no natural, por lo que se
delx: sintetizar. En este capítulo se consideran cuatro métodos de síntesis de ami noáci-
dos. Todos estos métodos son ampliaciones de reacciones que se han estudiado con
anterioridad.
de aminoácidos
24.5A Aminaci6n reductora
La aminación reductora de cetonas y aldehídos es uno de los mejores métodos para la sín-
tesis de aminas (Sección 19.19). También se fonnan aminoácidos. Cuando se I.rata un
a-cetoácido con amoniaco, la cetona reacciona para Coonar una imina. La imina se redu-
ce a ami na mediante hidrógeno y un catalizador de paladio. En estas condiciones. el
ácido carbox.ílico no se reduce.
o N- H
11
R-C-COOH
exceso de NH,
,
!'
R-C-COO- ¡'NH"
11,
Pd'
NH,
, .
R- CH- COO-
Q-amiooácido a -celOácido iminl!
Esta síntesis completa se lleva a cabo en un solo paso tratando el a-celoácido con
amoniaco e hidrógeno en presencia de paladio como cataUzador. El producto es un a-ami-
ncY<lCido racémico. En la reacción siguieme se muestra la síntesis de la feni Jalanina racé-
mica a partir del ácido 3-feniJ-2-oxopropanoico.
?i
Ph-CH
2
-C-COOH
áddo 3-fenil-2-oxoprupanoico
Pd
NH
I '
Ph-CHz-CH- COO- +NH
4
(sal de amollio)
(30%)
La aminación reductora se asemeja a la síntesis biológica de los aminoácidos, por lo
Que se puede denominar símesis biomimética (<<imitación del proceso biológico»). La
biosíntesis comiem'..3 COIl la ami nación reductiva del ácido a-cetoglutári co (i ntennedio en
el metaboli smo de los carbohidratos), utilizando ión amonio como precursor del grupo
amino y NADH como agente reductor. El producto de esta reacción, catali zada por un
enzima, es el enanti ómero L puro del ácido glutámico.
7
HOOC- CH
2
CH
2
- C-COO +
ácido o-celOglulárico
o
H H I
+ QC-NH,
1\ + H+
lazlarl
NADH
enri ma
• 1\' 11
I '
HOOC-CH
l
O I
1
- CH-COO-
ácido l.-glulámico
En la biosrntesis de otros aminoácidos se utili7..a ácido L·glutámico como precursor
del grupo amino. A esta reacción. en la que un grupo amino se mueve de una molécula a
otra, se la denomina transaminación y a los enzimas que catal i7..an estas reacciones se
los denomina Por ejemplo, en la sigui ente reacción se muestra la biosín-
tesis del ácido aspárti co a partir de ácido glutámico como precursor del grupo ami no.
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1124 Capítulo 24: Aminoácidos, péplidos y proteínas
Una vez más la biosíntesis, calalizada por un enlJma, da lugar al enantiómero L puro del
producto.
' NH
1 '
o
HOOC-CH,CH,-CH-COO-
ácido L-glutámico
D
HOOC-CH,CH,-C-COO-
ácido a-cetoglutárico
o
+
o
I
HOOC-CH, - C-COO-
ácido oxaloacélico
PROBLEMA 24.9
lransaminasa ,
+
+NH
1 '
HOOC-CH
2
- Cl-I -COO-
ácido L-aspártico
Explique cómo se podrían obtener los siguicnles ami noácidos en el laboratorio medianle la ami-
nación reducl iva de los O'-cctoácidos apropiados.
(a) alaruna (b) ¡cucina (e) scrina (d) glUlal11ina
24.58 Aminación de un a-haloácido
La reacción de HeU-Volhard-Zelinsky (Sección 22.4) es un método efectivo para la bro-
mación en la posición a de un ácido carboxHico. El a -bromoácido se lransfonna en un
a-aminoácido racémico por aminación directa. utilizando un gmn exceso de amoniaco.
Br O
11
R-CH,-C-OH
ácido carboxnico
1 i
R-CH-C- OH
a-bromoácklo
' "
NH, O
1 n
R-CH-C-O- -I-NH
4
(D,L)-a-aminoácido
(sal de amonio)
En la Sección 19.19 se vio cómo la aminaci6n directa no suele seruo buen método
de síntesis de aminas, dando !,rrandes cantidades de productos sobrealquil ados. Sin embargo,
en este caso, la reacción da lugar a rendimientos aceptables, ya que se utiliza un gran ex-
ceso de amoniaco, haciendo que el amoniaco sea el nucleófi lo que probablemente des-
place al bromo. Además, el ión carboxil ato adyacent e al grupo amino del producto redu-
ce la nucleofilia de dicho grupo amiDo. En la sec uencia siguiente se muestra la bromación
del ácido 3-fenilpropanoico. seguida del desplazamient o del i6n bromuro, para dar lugar
a la sal de amonio de la fenil alanina racémica.
Ph - CH1-Cl-f1-COOH
ácido 3-fenilpJOpaooico
(I) Br.,{P8 r
J
- ,
B,
I
Ph-CH
2
-CH-COOH
PROBLEMA 24.10
B,
I
Ph- ClI1-ClI - C(X)H
I\H,
excesode J\H, I
.:c::=c:.:--''-'+l Ph- CI-I,-CH-QXJ- ~ N H ~
(U.L)· fenilalanina (sal)
(30-50%)
Explique cómo utilizaría la bromaci ÓII. seguida de 3minaci6n, para silll ctilar los siguientes ami-
noácidos:
(a) gli ci na (b) lcucina (e) valina (d) ácido glutámico
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24.5 Síntesis de aminoácidos 1125
24.5C Síntesis de Gabriel y malónica
Uno de los mejores métodos para sintetizar aminoácidos consiste en combinar la sÚl tesis
de Gabriel de aminas (Sección 19.19C) con la síntesis malónica de ácidos carboxíJicos
(Sección 22.16). La slntesis malónica convencional implica la alquilación del maJonato de
dietilo, seguida de hidrólisis y dcscarboxilación, para dar lugar a un ácido acético alqui-
lado.
[ grupo éster Tempol"lll )

COOEt
I W
H-C- C- OEt
1
H
éSTer malóllico
COOEI
I W
H-C-C-OEt
1
R
CO,1
H O
1 11
H-C-C-OH
1
" ácido acético alquilado
Paro. adaptar esta síntesis a la obtención de aminoácidos, se tendóa que comenzar con
un éster malórlico que contuviera un grupo a-amino. El grupo amino deberla estar prote-
gido en forma de amida no nucl eofíJica para evitar que fuera atacado por un agente
alquilante (RX).
La síntesis de Gabriel y malónica comienza con el éster N-ftalimidomalónico. Se
puede pensar en el éster N-ftalimidomalónico como en una molécula de glici na (ácido
aminoacético) con el grupo amino protegido en fonna de amida (en este caso una ftalimida)
para evitar que actúe como un nueleófilo. El ácido está protegido como éster etíl.ico y la
posición a está activada por el grupo éster adicionaJ (temporal) del malonato de dietilo.
..
COOEt
O
éster del N-ftalimidomal6nico
grupo éster Temporal
O COOEt

:1 H ácido protegido
I glicina
amina prolcgida
De la misma forma que la síntesis maJónica da lugar a ácidos acéticos sustituidos,
la síntesis del éster del N-ftaJimidomal6nico da lugar a ácidos aminoacéticos sustituidos:
a-aminoácidos. El éster del N-ftalimidomalónico se alquila de la misma forola que el és-
ter malónico. Cuando el éster del N-ftalimidomalónico se hidroliza, el grupo ftalimido se
hidroli za junto con los grupos éster. El producto es un ácido aminomalónico alquilado. La
descarboxiladón da lugar a un a-aminoácido racémico.
Síntesis de Gabriel y malónica

éster temporal )
oG
° COOEt
O
N-b¡H (t) "'"" ,
(ff" (') R X
COOET
O
éster del N-fl alimidomalónico

COOEt
O
alquil ado
[
COOHl

COOH
hidroliwdo
CO,l
H
, ¡
HN-C-R
, 1
COOH
a -aminoácido
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1126 Capítulo 24: Aminoácidos. péptitlos y proteínas
~ .. ceOEt
~ ' - f H
O COOEt
°
11
La síntesis de Gabriel y malónica se uülizan para sintetizar muchos aminoácidos
Que no se pueden obtener por aminación directa de haloácidos. En el ejemplo siguiente se
muestra la síntesis de la metionina. que se obtiene con un rendimiento muy bajo median-
te aminación directa.
PROBLEMA 24.11
Explique cómo utili7..aria la sínlesis de Gabriel y Imilónica pura obtener.
(H) valina (b) fcni lalanina (e) ácido glulámit:O (d) ¡cucina
"'"PROBLEMA 24.12
(O,L)-melionina
<50%,
En la sfntesis de Gabriel y malónica se uti lj7..a un éster del aminomalónico con el grupo amino pro-
tegido en Conna de ftatímida. Hay una variación cil la que el grupo ¡¡mino está protegido en for-
ma de grupo acetamido. Proponga cómo uti lizarla la síntesis del éster acetamidomblórtico para
obtener fenilalanina.
COOEt
o O
I I
CH -C-N- C-C-O-EI
, I I
1-1 H
éster del acetamidoma16nico
24.50 Síntesis de Strecker
La primera síntesis conocida de un aminoácido se realizó en 1850 en el laboratorio de
Adolph Strecker en Tübingcn. Alemania. Strecker añadió acetaldehido a una solución
acuosa de amoni aco y HeN. El producto que se obtuvo fue a-amino propionit ri lo. que
Strecker hidroli zó a alanina racémica.
Síllfes;s de S/r eckel" de alani no
~ N I I
1 '
11 0 '
CH,- C- H + NH, + HCN
~
CH-C-H
, 1
acetaldel1fdo a -aminopropionitrilo
COOl!
(D,l.)-alanina
<<iO%¡
Mediante la síntesis de St.recker se puede oblcner una gran variedad de amiooácidos a
partir de aldehídos apropiados. A continuación se muestra el mecanismo. Primero, el aldehído
reacciona eon amoniaco para fonnar una ¡mina La ¡mina es un análogo nitrogenado del grupo
carbonilo y es e1ectrofilica cuando se protana. El ataque del ión cianuro a la imíoa protonada da
lugar a a-aminonitrilo. El mecanismo es similar al de la formación de una cianohidrina, excep-
to en que en la sÚ1tesis de Slrecker el ión cianuro ataca a la ¡mina en lugar de al aldehído.
Pa.w 1: formación de la ;mi/lo (mecanismo en la $t.'CCi6n 18. 16)
·0·
N- H
n H' 11
R-C-H + :NH]
<=>
R-C-H + H,O
aldehfdo ¡mina
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Paso 2: l/laque del cianllro

11 Hl'CN
R- C-H
imina
H ........ "'" ....... .1-1
N
ti!
R-C-H
l CN
NII
1 '
R- C-H
1
CN
a-aminonitri lo
24.5 S rntc:,;is de aminoácidos 1127
En un paso separado, la hidrólisis del a-aminoni trilo (Sección 21.7D) da lugar a un
a-aminoácido.
R
1
H,N-CH-C= N
a-aminonitril0
PROBLEMA RESUELTO 24.1
R
• 1
H,N-CH- COOH
a-aminoácido (forma ácida)
Explique cómo obtendría isolcucina mediante una srntesis de Stre<:ker.
SOLUCiÓN
La isoleucina tiene un grupo sec-bulilo en la cadena laternl. Recuerde que el CH]-CHO. mediante la síntesis de Strccker, da lugar a
alanina, con CH" en la eadena laler.d; por lo tanto, el sec-buti l-CHO debería dar lugar a isoleucina.
CH
J
O
I I
CH
3
CH
2
CH-C-II
src-butil-CJ 10
(2·metilbuumal)
PROBLEMA 24.13
IICN

?H
J
7
Hl
CH¡CH
2
CH-C-H
I
C=N
(u.) Explique cómo obtendrfa fenilalanina medi ante una sínt esis de Slrccker.
(b) Proponga un mecanismo pl.lrn cada paso del apanado (a).
PROBLEMA 24.14
Explique cómo obtendría los siguientes aminoácidos mcdiall.tc una sfnl csis de Streckcr.
(a) Jcucina (b) glicina (e) vaJina
RESUMEN Sintesis de aminoácidos
l . Aminación reductora (Sección 24.5A)
o N-H
11
R-C-COOH
exceso de NH
J
1I
.. ) R-C-COO- "'"NH
4
H,

Pd
a<etoácido
2. AminaciÓll de un a-haloáddo (Sección 24.5B)
o
I
R-rn1- C- OH
áctdo carboxOico
( 1) Br:zIPBr
J

(2) HP
iminll
B, O
I I
R-CH- C- OH
a-bromoácido
NH,
(gran exceso)
SfT(;FRFNf'TA
PARA RESOLVER PROBLEMAS
En la §Íntesis malón ka, utllke la
cadena lateral del aminoácido
deseado (ha de ser un buen sustrato
Sr.¡2) para a lquilar al éster. En la
srntesis de Strecker. el carbono del
grupo aldehido se convierte en el
carbono tl' del aminoácido: oomience
con (cadena latefal]-----frtO.

1
R-CH-COO-
a-aminoácido

R- CH-C- O- +NH.
(D,I..}-a-ami no sal
(sal de amoll io)
w
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1128 Capítulo 24: Aminoácidos, péplidos y proteínas
3. Síntesis de Gabriel y mal6nica (Sección 24.5C)
grupo é!oler temporal

O COOEt
b;ter del N-ftali midnnalónioo
( 1) base
,
(2) R X

H O'
-'----+
O COOEl
alquilado
"'"
[
HNJ
OO
:]
, I
COOH
hidrolií'MO
co,t
H
• I
HN-C-R
, I
COOH
a-aminoácido
4. Síntesis de Strcckcr (Sección 24.50)
o
11
R-C-H
+
aldehklo
24.6
Resoluci ón de
105 aminoáci dos
NH, +NH
HP
I H ot I '
NH) + HCN

R- C-H -'----+ R- C- H
I I
C=N COOH
a -aminonitrilo a-aminoácido
Todas las síntesis de aminoácidos de laboratorio descritas en la Sección 24.5 dan lugar a
la obtención de racémicos. En la mayoña de los casos, s610 los enantiómeros L son bio-
lógicamente activos. Los enanliómeros O incluso pueden ser tóxicos. Los enantiómeros pu-
ros L se necesi tan para la síntesis de péptidos si el producto ha de tener la actividad de la
sustancia natural. Por lo lanlo, es necesario resolver el ami noácido racémico en sus enan-
tiómeros.
En muchos los aminoácidos se pueden resolver medi ante los métodos que se
han estudiado con anterioridad (Sección 5. 16). Si un aminoáci do racémico se transfonna
en una sal con un ácido o una base quiral ópticamente puros, se fonnan dos sales di aste-
reoméricas. Estas sales se pueden separar por métodos físicos tales como la cristali7..ación
selectiva o la cromatografía. Les enanriómeros puros se regeneran a partir de las sales
diastereoméricas separadas. La estricnina y la brudna son sustancias naturales básicas óp-
ticamente activas y el ác ido tartárico se utiJi 7..a comO ácido ópticamente activo para resol-
ver mezclas racémicas.
La r esolución enzimática también se utili7..a para separar los enantiómeros de los
aminoácidos. Los enzimas son moléculas quirales con actividades catalíticas específicas.
Por ejemplo, cuando se trata un aminoácido acUado con un enzima como la acilasa del ri-
ñón de cerdo o la carboxipeptidasa. el enzima rompe el grupo acilo de las moléculas que
tienen confi guración natural (L). El enzima no reconoce los o-aminoácidos. por lo que
éstos no son afectados. El o-aminoácido acilado y el L-aminoácido desacil ado se separan
con facilidad de la mezcla. En la Figura 24.5 se representa cómo se lleva a cabo esta
desacilaciÓll enzimática selectiva.
PROBLEMA 24.15
Sugiera cómo separarla el L-aminoácido l ibre de su cnli llliómero D aci lado en la Figur.l 24.5.
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COOH
I
HN-C- H
2 I
R
COOH
I
H- C- NH
I 2
R
D-aminoácido
ammoácido racému,:o
.. Figura 24.5
o COOH
U I
CH - C- NH- C- H
3 I
R
COOH O
I 11
H- C- NH - C- CH
I 3
R
acilado
aci lasa
24.7 Reacciones de los aminoácidos
COOH
I
H
2
N- C- H
I
R
l. es desacilado
COOH O
I 11
H- C- NH- C- CH
I 3
R
o no es afectado
(mezda fácil de sepamr)
Un cnzima aci lasa (como la acil asa dd riñón de cerdo o lacarboxipeplidasa) sólo desacil a al
aminoácido natural L.
24.7
1129
Los aminoácidos experimentan muchas de las reacciones estándar tanto de las ami-
nas como de los ácidos carboxílicos: sin embargo, las condiciones para algunas de estas
reacciones se han de seleccionar cuidadosamente, para que la rea¡;;ción del grupo amino
no interfiera con la del grupo carooxilo y vkeversa. Se estudiarán dos de las reacciones
más útiles, la esterificación del grupo carboxilo y la aci lación del grupo amino, Estas
reacciones con frecuencia se suelen utilizar para proteger el gru)X) carooxilo o el grupo ami-
1l0, mientras se modifica el otro grupo o se ensambla a olro aminoácido. Los aminoácidos
lambién experimentan reacciones que son específicas de la estructura de los a-aminoáci-
dos. Una de estas reacciones, características de los aminoácidos, es la fonnación de un pro-
ducto coloreado cuando se tratan con ninhidrina, estudiada en la Sección 24.7C.
Reacciones de
los aminoácidos
24.7A Esterificación del grupo carboxilo
De la ntisma fonna que los ácidos carooxílicos monofuncionales. los aminoácidos se es-
lerifican mediante el tratamiento con gran exceso de un alcoh,ol y un catali zador ácido
(genemlmenle He l gaseoso), En estas condiciones ácidas. el gru)X) amino se encuentra en
su fonna protonada (-NH
3
+), por lo que no interfiere en la esterificadón. El siguiente
ejemplo Huslra la eslerificación de un aminoácido.
Ph- O t -OH
, ,
Ha
CI - O
• I
H N-CH-C-O- CH Ph
}-" 1
H
2
C .. , ......... CH
2
CH,
éster bendlico de la prolina
(90%)
Los é!i teres de los aminoácidos generalmente se utili zan COl11o deriV'ddos protegidos
para prevenir que el grupo carboxilo rea(:cione de manera no deseada. Los grupos protec-
tores más frecuentes son los ésteres metílicos, etílicos y bencíl icos. Un ácido. en disolu-
ción a¡;;uosa, hidroliza al éster y regenera el aminoácido li bre.
O o
• 11 • 11
H N-CH- C-OCII CH
) I 2 J
H
3
N-
r
H-C-OH + CH
3
CH
2
- 0 I1
CH
2
- Ph CH
2
- Ph
éster etíli co de la fenilalanina leni lalanina
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1130 Capítulo 24: Aminoácidos, péptidos y proteínas
los ésteres bencílicos son particularmente úti les como grupos protectores ya q ue se
pueden eli minar bien por hidrólisis ácida o por hidrogenólisis (<<ruptura por adición de hi -
drógeno,.) neutra. la hidrogenaci6n catalítica rompe el éster bencíl ico. transfonnando el
grupo bencil o en tol ueno y dejando desprolegido el aminoácido. A pesar de que el meca-
nismo de esta hi drogenóli sis no es bien conocido. aparentemente depende de la facilidad
de fannación de intennedi os bencnicos.
o
+ 11 --10r H N-CH- C-OCl I,
'1 -
CHI-Ph
éster bendlico de la fenilalanina feni lalanina tolueno
La descarboxi lación es una reac-
ción importante de los aminoá-
cidos en muchos procesos bioló-
gicos.la flistamina, que produce
mucosidad e irritaci6n en los
ojos. se sintetiza en el cuerpo
mediante la descarboxilacibn de
la histidina. El enzima Que cata-
liza esta reatci6n se denomi na
histidina.-descarboxilasa.
hislamina
PROBLEMA 24.16
Proponga un mecanismo para la hidróli sis, calali:lada por un ¡Ícido, del éster clnico de lu fenila·
lanina.
PROBLEMA 24.17
Represeme ecuaciones para la fonnación e hidrogcnóli sis del éster bendl ico de la glulamina
24.78 Acilación del grupo ami no: formación de amidas
Al igual que un alcohol esterifICa el grupo carboxi lo de un aminoácido. un agente acHan-
te transfonna el grupo antino en una amida. La aci lación del grupo amino se suele lJevar
a cabo IXira protegerlo de reacciones nucleofílicas no deseadas. Para la acilacióo se utili -
za una amplia variedad de cloruros de ácido y de anhídri dos. El c1orofonniato de bencilo
ac il a el grupo amino para dar lugar a un derivad() benciloxicarboníl:ico, que con frecuen-
cia se utili za como grupo protector en la síntesis de péptidos (Sección 24. 10).
hislidinu
H N- CH- COOH
, 1
CH, CH(CH,),
1eucina
(anhídritllllll,:él1co)
(dorofonmal() de hrncllo)
o
!
CI! - C- NH- CH-COOH
, 1
! ~
N
d
N-uceli lhislidina
o
I
PhCH,O- C-NH- CH-COOH
1
CH,CH(CH,),
N-bencilollicarbooileucina
(90%)
El grupo amino del derivado N-bendloxicarbonilo está protegido como la amida de
un éster carbamato (un uretano, Sección 2 1. 16), que es hidrolizado con más facilidad que
la mayoría de las amidas. Además, el semiéster de este uretano es un éster bencílico que
experimenta hi drogenólisis. La hidrogen61i sis catalítica del aminoácido N-benci loxicar-
bonilo da lugar a un ácido carbámico inestable que se descarboxila rápidamente para dar
lugar al aminoácido desprolegido.
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24.7 Reacciones de los aminoácidos 1131
o H

,
I 1
HO- C- N-CH-C(X)H
1
'iH,
CH(CH
3
h
N-benciloxicarbooileucina loluefMl un ácido camámico
PROBLEMA 24.1B
Represenlc ecuaciones para la formaci6n e hidrogen61i sis dc la N-benciloxicarbonilmctionina.
24.7C Reacción con ninhidrina
La ninhidrina es un real-1ivo común para visualizar las manchas o bandas de los aminoá-
cidos que se han separado por cromatografía o electroforesis. Cuando la ninhidrina reac-
ciona con un aminoácido. uno de los productos es de color violeta intenso. anión estabi-
lizado por resonancia denominado pÚlpura de RuhenuU/II. La ninhidrina produce el mismo
colorante púrpura. independientemente de la estructura del aminoácido original . La cade-
na lateml del aminoácido se pierde en fonna de aldehído.
Reacción de Uf! aminoácido eOIl ninhidrina
C0
2
t
H N- CH- COOH
, 1
CH,
1
CH(CH,),
leucina
H,N-CH-COOH
1
R
+ 2o--t°
H

piridina
,
++ CO,!
R- CHO
O O O
aminoácido ninhiJrill H púrpura de Ruhemann
La reacción de aminoácidos con ninhidrina puede delecLUr aminoácidos en una amplia va-
riedad de sustratos. Por ejemplo. si se toca una hoja de papel con los dedos. las ondula-
ciones dénnicas de éstos dejan trazas de aminoácidos debido a las secreciones de la pieL
Eltralamiento del papel con ninhidrina y piridina da lugar a que estas secreciones se vuel-
van de color púrpura, fonnando una huella dactilar visible.
PROBLEMA 24.19
Utilice formas de resonancia para moslrar la deslocalización de la carga ncgativa en el anión púr-
pura de Ruhemann.
RESUMEN Reacciones de ami noácidos
l. Esterificación del grupo carooxiJo (Sección 24.7 A)
R O
+ 1 11
H
3
N-CH-C-O
aminoácitlo
+
R'-OH
alcohol
11+

R O
+ 1 11
H,N-CH-C-O-R'
amino éster
2. Acilaci6n del grupo amino: fonnadón de amidas (Sccción 24.7B)
R O
1 11
H
2
N- CH- C- OH +

R'-C-X
O R O
11 1 i
R'-C-NI-I - CH- C-OH
aminoácido agente acilaote aminoácido acilado
+ H,O
+ H-X
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1132 Capitulo 24: Aminoácidos, p6ptidos y proteínas
3. Reacción con ninhidrina (Seai6n 24.7C)
H,N-CII -COOH
I
R
aminoácido
,
,o=(:
O
ninhidrina
pUidina I
oQ-N-90
O O
púrpur.l de Ruhemann
,
+
R-0I0
ca,!
4. Formación de enlaces pcpl:ídicos (Secciones 24.10 y 24.11)
o
. I
H.N- rn- c- o-

+
o
• I pénlKla ,,<1,,0
H N'-O -I- C- O- •
• I
R'
o
• I I
H N- CH- C- NH- CH- C- O-
• I I
R' R!
Los aminoácidos también experimentan otras reacciones caracterfsticas de las aminas y de los ácidos.
24.8
Estructura
y nomenclatura
de péptidos
y proteínas
o
n
R- C- OH +
ácido
.... Figura 24.6
La estabilización por resonancia
de una amida da lugar a SU gran
estabi lidad, a la disminución de
b.1Sicidad del átomo de nit rógeno
y a la rotación restri ngida
(carácter de doble enlace parcial)
del enl ace e-N. En un pépli do.
al enlace amida se le denomina
enlace peplfdico. el cual
condiciona que haya seis álomos
en un plano: el e y el P del grupo
calbonilo, el N y su H, y los dos
átomos de carbono a asociados.
24.8A Estructura de los péptidos
La reacción más importante de los aminoácidos es la fonnación de enlaces péptídicos.
Las aminas y los ácidos pueden reaccionar, con la pérdida de agua, para fonnar amidas.
En el laboratorio se puede obtener una amida mezclando el ácido y la amina. Al calentar
la mezcla se desprende el agua:
o O
I +
,,"oc
11
IIl..i - R'
R-C-O- H
3
N- R' R-C-NH- R' '1- 11,0
ulIlina
,,'
¡unida
En la Sección 2 1.13 se vi o cómo las amidas son los derivados de ácido más estables.
Esta estabilidad en parte se debe a la fuerte interacción por resonancia entre los electro-
nes no enl azantes del nitrógeno y el grupo carboni lo. El nitrógeno del grupo amida ya no
es una base fuerte y el enlace C- N ti ene restringida la rotación debido a su carácter de
doble enlace parcial. En la Figura 24.6 se representan las fomlas de resonancia que se utj-
li zan para explicar el carácter de doble enlace parcial y la rotación restringida de un enla-
ce amida. En un péptido, este carácter de doble enlace parcial hace que seis átomos se en-
cuentren posicionados rígidamente en un plano.
Un ami noácido, como tiene un grupo amino y un grupo ácido. es muy apropiado
para fonnar uniones amida. En condiciones adecuadas, el grupo de una molécula
'0'
n
......... C, .. ......... R
R N
1
H
:0:
1
......... ......... R
R N
1
H
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24.8 Estructur'd y nomenclatur'd de péplidos y proteínas
INlenninal 1 ICtermi113.1 1
\ o o o o o o o o 0 1
I 11 11 11 11 11 Q 11 11 11 1
JI N-eH - c - .. - ClI - L - N- OI - C- NH-CH - c - NlI - CJI - C- NI I - CH - C-N- CJI - c - NI I - CIl-C - NIl - CH - c-o-
1 < V V ~ 61
2
~ ' 1 , V ¿IJ, <
"H 6 I 6- <NH
I O OH I
f'C, ,fC'
- -, - ~
Arg Pro Pro Gly I'he Ser Pro T-'t1e Arg
... Figura 24.7
La hormona humana bradiqui nina es un nonapéptido con un grupo - NH
3
+ en el extremo N
lenninal y un - COO- libre en el eJ\tremo C terminal.
condensa con el grupo carbonil o de otra. El producto que se obtiene es una amida deno-
minada dipéplido. ya que está fonnada por dos aminoácidos. La unión amida entre ami-
noácidos se denomina enlace pcptídico. A pesar de tener un nombre especial, un enlace
pePlídico es un enlace amida, ya estudiado con anterioridad.
R' H
\ ¡
C
T / '\. pérdida de H
2
0
H,N ¡-O- '----'--+,
O
enlace pcplidi co
O
n
R2 11
\ 1
H N C C
3 '\. / " .. / '\.
C N C-O-
/\ 1 I
H RI 11 O
1133
De esta fonna, se puede enlazar cualquier número de aminoácidos en una cadena con-
tinua. Un péptido es un tx>límero de aminoácidos unidos por enlaces amido entre el gru-
po amino de cada aminoácido y el grutx> carboxilo del aminoácido vecino. A cada unidad
de aminoácido del péptido se le denomina residuo. Un polipéptido es un péptido que
contiene muchos residuos de aminoácido. pero su masa molecular suele ser menor de 5 000.
Las proteínlls contienen muchas unidades de aminoácidos, con masas moleculares com-
prendi.das entre 6000 Y 40 000 000. El término oligopéptido se utiliza ocasionalmente
para designar pépfidos que contienen entre cuatro y diez residuos de am.inoácidos. En la
Figura 24.7 se representa la eslructur'd del nonapéptido bradiquinina, honnona huma que
controla la presión sanguínea.
Al extremo del péptido con el grupo amino libre (- NHn se le denomina extremo
N4errninal y al extremo con el grupo carboxilo libre (- COO, se le denomina extremo
C-terminal. La estructura de los péptidos generalmente se representa con el N-tenninal
a la izquierda y el C-tenninal a la derecha. tal como eslá representada la bradiquinina en
la Figura 24.7.
la oxerina A es un neuropépti-
do descubierto recientemente
que contiene 33 aminoácidos.
Una fundón del péptido puede
ser regular el dclo del sueño. La
oxerina A provoca insomnio.
mientras que su ausencia provo-
ca sueño.
24.88 Nomenclatura de los péptidos
Los péplidos se nombran comenzando por el exlremo N-lenninal, y a los nombres de los
residuos de los aminoácidos implicados en las uniones amido (lodos excepto el último) se
les añade el sufijo -jJ de los grupos aciJo; por ejemplo, el nombre del siguiente dipéptido es
alanilsenna El residuo alanina lieneel suftio-il, ya que ha acilado al nitrógeno de la serina.
I
O I O
+ 11 11
H N-CH-C NH-GI-C-O-
l
' 1 1
CH, CH,OH
alaml senna
Ala-Ser
w
w
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1134 Capí1ulo 24: Aminoácidos, péptidos y proteínas
... Figura 24.8
La cisti na, dímero de 111 cisteína.
se obtiene cuando dos residuos de
cisleína se oxidan y fonnan un
puente disulruro.
La bradiquinina (Figura 24.7) se nombra de la fanna siguiente:
arginil -prolil -prolil-glicil-feni lalani l-seril-proliJ-feni lalariil -arginina
Esta fonnade nomenclalUra es incómoda y diffcil, por lo que se utili za un sistema más COf-
to, en el que los aminoácidos se representan mediante abreviaturas de tres letras. Estas
abreviaturas, dadas en la Tabla 24.2,. genemlmenle se fonnan con las tres primeras lelras
del nombre. De nuevo hay que tener en cuenta que los aminoácidos se represenlan con el
extremo N-Ienninal a la izquierda y el C-temlinal a la derecha El nombre abreviado de la
bradiquinina es el siguiente:
Arg-Pro-Pro-Gly-Phe-Ser-Pro--Phe-Arg
También se utilizan ampliamente los símbolos con una letra (también dados en la Ta-
bla 24.2). Si se ut ili zan símbolos con una sola letra. la bradiquinina se simboli zaría de la
fonna s iguiente:
RPPGFSPFR
PROBLEMA 24.20
Represente la<; estructuras completas de los péplidos siguientes:
(a) Thr·Phc-Mct (b) scril-argini l-glicil-fcni lalanina (e) IMQDK (d) ELVIS
24.SC Uniones disulfuro
Las uni ones amido (enlaces peptídicos) fonnan la columna vertebral de las cadenas de
aminoácidos conocidas como péptidos y proteínas. Es posible una segunda clase de enla-
ce covaJente cuando hay cualquier residuo de cisteína Los residuos de cistefna pueden
formar puentes disulfuro (también denominados uniones dis ul furo) que pueden unir dos
cadenas o una sola cadena fomlando un anillo.
la oxidación suave enlaza dos moléculas de un liol para formar un puente disulfll-
ro. Esta reacción es reversible, y una reducción suave rompe el d isll lfuro.
R-SH + HS- R
dos moléculas de liol
[oxidactón]
,
,
[ """""ón [
R- S - S - R + H
2
0
disulfuro
De forma análoga, dos grupos sulfhidrilo (- SH) de ciSleína se oxidan para dar lu-
gar a un par de aminoácidos unidos por enlace d isulfuro. Al dímero de cisteína con enla-
ce di sulfuro se ledenontina cislina. En la Figura 24.8 se representa la fomlación de un puen-
te disulfuro en la cistina que enlaza dos cadenas de péptidos.
cadena
O
peptfdica
[[
NH- CH- C
~
[
eH,
I
SH
SH
[
eH,
[
NH- CH- C
-
c""'""
[[
peptidica
O,
.
dos resIduos de clstellla
101
(OIl idación)
,
1"1
(reducción)
O
[[
~
NH- CH-C
[
CH,
I
s
I
+ H
2
O
S
[
eH,
[
~
NH-CH- C
[[
O
puente dl sulfuro de la CISlma
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24.8 Estructura y nomenclatura de péplidos y proteínas
O-C NH
- CH
2
- S+ - c 11- N - CH - ct NH - e H - ct NH- CH
T 11 I \ 11 1 11 1
N-1cnninal l o "-/ o 12 o H
puente dumlfuro de la cislina
H)C eH)
Ile--Gln
I \
Tyr Asn
I \
Cys- S-S-Cys ....... Pro -- Leu ---- Gly· NH
2
F i;;l: I c.t:m¡nal : (fonna amida)
... Figura 24.9
Estructura de la oxitocina humana. Una unión disulfuro obliga a parte de la molécula a foonar un
gran anillo.
Dos residuos de cisteína pueden fonnar un puente disulfuro con una cadena peptí-
dica simple, fonflando un anillo. En la Figura 24.9 se representa la estructura de la oxi to-
cina humana, honnona peptídica que produce contracciones del músculo uterino liso, in-
duciendo al parto. La oxitocina es un nonapéptido con dos residuos de cisleína (en las
JXlsiciones I y 6) que unen parte de la molécula fonnando un gran anillo. Cuando se re-
presenta la estructura de un péptido compucado, con frecuencia se utilizan fl echas para co-
nectar los aminoácidos que indican la dirección del exlTemo N-tcnninal al C-IenninaJ. Se
puede observar que el extremo C-tenninal de la oxitocina es una amida primaria (Gly. NH
2
)
en lugar de un grupo carboxilo libre.
En la Figura 24.10 se representa la estructura de la insulina bovina, hormona peptí-
dica más compleja que regula el metabolismo de la glucosa. La insulina está fonnada por
dos cadenas de péptidos separadas: la cadena A contiene 21 residuos de aminoácidos y la
cadena B contiene 30. Las cadenas A y B se enlazan en dos posiciones mediante puentes
disulfuro; la cadena A ti ene un enlace disulfuro adicional con seis residuos de aminoáci-
dos en un anillo. El extremo C-Iennina! de los aminoácidos de las dos cadenas se en-
cuentra en amidas primarias.
Los puentes disulfuro generalmente se alteran en el proceso de fonnación de ondas
permanentes en el pelo, cuando se hacen «las pennanentes» en la peluquería El pelo está
fonnado de proteínas, que se hacen rígidas y fuertes en gran parte debido a los enlaces di-
sulfuro. Cuando el pelo se trata con una solución de un tiol, como el 2-mercaptoetanol
(HS- CH
2
-CH
2
- OH), los puentes disulfuro se reducen y se rompen. El pelo se enro-
lla sobre rulos y se pennite que los enlaces disulfuro se reordenen. bien por oxidación con
el aire o aplicando un neutralizantc. Los enlaces se reordenan en posiciones nue-
vas, haciendo que el pelo adquiera las fonnas curvadas marcadas JXlr los rulos.
o
11
C-NH
2
C-tenninal
(fonna amida)
1135
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1136 Capítulo 24: Aminoácidos. péptidos y proteínas
I N-lcnninal I
\
I cadena A I
I C .... erminal l
7
Gly -lIe-- Val- Glu-- Gln_Cys- s - S-Cys _ Ser_ Leu __ Tyr _ Gln __ Leu - Glu- Asn -- T)'r- Cys-- Asn-NH
2
¡ ¡ I
Cys Val S
I "Ala __ Ser"" , - -- - - -- - - --- - - - -- - - - - - - -.- .- - -- - - - -- - - - .--- - -- _.-
S : S
--- ------- --------- ------, -------------- ---- I
S Val- Glu __ Ala_ Leu _Tyr __ Leu_ Val_ C"ys--Gly-- Glu
I I ¡
I
v"
I
''1<
(
I N-tcnninal I
I cadena B I
A Fi gura 24.10
Estructura de la insulina bovina. Dos cadenas se unen en dos posiciones mediante puentes
disulfuro y un tercer enlace disulfuro se encucnlra foonando parte de un anillo en la cadenaA.
¡
24.9
Determinación
de la estructura
de los péptidos
La insulina es relativamente una proteína simple, a pesar de que sea una estructura orgá-
nica complicada ¿Cómo es posible detenninar la estructura compleru de una proteína que
tiene cientos de residuos de aminoácidos y una masa molecular de muchos miles? Los
químicos han desarrollado formas inteligentes para determinar la secuencia exacta de ami-
noácidos en una proteína. A continuación se estudiarán algunos de los métodos más fre-
cuentes.
24.9A Ruptura de uniones disulfuro
El primer paso para la determinación de la estructura es romper todos los enlaces disul-
furo, separando las cadenas de péptidos individuales y abriendo los anillos con uniones di -
sulfuro. A continuación se purifica y analiza, de forma separada, las cadenas peptídicas in-
dividuales.
Los puentes de cistina se rompen fácilmente reduciéndolos a la forma tiol (cisteína).
Sin embargo, estos residuos de cisterna reducida tienen tendencia a reo xi darse y volver a
formar los puentes di sulfuro. Se consigue una ruptura más permanente oxidando las unio-
nes disulfuro con ácido peroxifórmico (Figura 24.11). Esta oxidación transforma los puen-
tes di sulfuro a grupos de ácido sulfónico A las unidades de cisterna oxidadas
se las denomina residuos de ácido cisteico.
24.9B Determinación de la composición de los aminoácidos
Una vez que se hayan roto los puentes disulfuro. y que se han aislado y purificado las ca-
denas peptídicas individuales. se ha de determinar la estructura de cada cadena. El primer
paso es determinar qué aminoácidos están presentes y en qué proporciones. Para analizar
la composición de aminoácidos, se hidroliza completamente la cadena peptídica calentán-
dola durante 24 horas en Hel 6 M. Se coloca la mezcla resultante de aminoácidos (el hi-
dmlizado) en la columna de un analizador de amin04cidos, representada en la Figura 24.12.
En el analizador de aminoácidos, Jos componentes del hidrolizado se disuelven en
una solución tampón acuosa y se separan pasándolos a través de una columna de inter-
cambio iónico. La solución que emerge de la columna se mezcla con ninhidrina. que
reacciona con los aminoácidos para dar lugar a un color de ninhidrina púrpura. La absor-
ción de la luz se registra en un papel registrador en función del tiempo.
El tiempo requerido para que cada aminoácido pase a través de la columna (tiempo
de retención) depende de la fuerza con que el aminoácido interaccione con la resina in-
lercambiadora de iones. El ti empo de retención de cada amino.-i.cido se sabe a partir de los
ensayos previos realizados con patrones de los aminoácidos puros. Los aminoácidos que
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24.9 Detenninación de la estructura de los péptidos 1137
o
11
O
11
NH- CII - C""""""'"
1
CH,
1
S
1
S
1
CH,
1
O
11
H- C- OOH

1
r
2
ácido cisleico
SOl H
SO, H
1

T
H2
ácido cisleicu

solución
e mnhidrma d
\
-
-
l J

-
s


1
¡
S-s
11
O
-
O
11
H- C-OOH
- --
- -
-
solución

hidrolizado
__ resma de intercambio iónico
} '''' Me"",,,, ,m;noiku'",
se mueven a diferentes
velocidades
!f
1
Ji

_() )Iy
fotocélul a
-
L residuosJ
/
,
'2

11
O
-
"-

"

tiempo_
,
registro
están presentes en una muestm se identifican comparando sus tiempos de retención con los
valores conocidos. El área de cada pico es proporcional a la cantidad de aminoácido que
está representado en ese pico, por lo que se pueden detenninar las canridades de aminoá-
cidos presentes.
En la Figura 24.13 se representa un registro estándar de una mezcla equimolecular
de aminoácidos, junto con el registro del hidrolizado de la bradiquinina humana (Arg-Pm-
Pro-Gly-Phe-Ser-Pro-Phe-Arg).
.... Figura 24.11
Oxidación de una proteína
mediante la ruptum de todas las
uniones disulfuro por el ácido
peroxifónnico, oxidando la
cistina a ácido cisteico.
.. Figura 24.12
En un analizador de aminoácidos.
el hidroli zado pas.1. a través dc
una columna de intercambio
iónico. La solución que emerge
de la col umna se I rata con
runhidrina y su absorbancia se
registra en función del tiempo.
Cada aminoácido se identifica por
el tiempo de retención necesario
para pasar a través de la columna.
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1138 Capítulo 24: Aminoácidos, péptidos y proteínas
.. Figura 24.13
Utilización de un anali zador de
aminoácidos para dcletminar la
composición de la bradiquinina
humana. Los picos de la
bradiquinina para la Pro, Arg y
Phe son más grandes que Jos de la
mezcla equimolccular estándar,
ya que la bradiquinina ti ene tres
residuos Pro, dos residuos Arg y
dos residuos Phe.
estóndar
(} ..... di
.:¡.,'"
' v
... "

bradiquinillQ
!
1
fu L
<

e

II -,c' <t' &'
(iempo -


Secuenciación de 105 péptidos: análisis de los residuos terminales El anali zador
de aminoácidos detemlina los aminoácidos presentes en un péptido. pero no indica su se·
cuencia: orden en el que van unidos. La secuencia peptfdica se destruye en el paso de la
hidróli sis. Para determinar la secuencia de aminoácidos, sólo se ha de romper un ami no-
ácido de la cadena y dejar intacta el resto de la cadena. Los aminoácidos se pueden rom-
per por cualquier extremo del péptido (por e l N-Ienninal o por el C-temlinal), por lo que
exislen mélodos que penniten la escisión selectiva por cada tipo de extremo. A este mé-
todo general para la secuenciación de péptidos se le denomina análisis de los residuos
terminales.
24.9C Secuenciación a partir del extremo N-terminal:
degradación de Edman
El método más efici ente para la secuenciación de péplidos es la degradación de Edman.
Se trata un pépLido con isotiocianato de renilo, seguido de una hidróli sis ácida suave. Los
productos son la cadena peplídica acortada y un derivado helerocídico del aminoácido
del extremo N-tenninal denominadofeniltiohilla1llolna.
Paso 1: ataque del grupo amino libre al isoriociaTwlO de fenilo.
El producto n; I/Iwfe/lilliourea
pt, - Ñ" c=s'
.. .... 5 :
Ph - j\ _ r
I

, I I
"" I
t
H

, I I
R' O R' O
Paso 2: el Ira/amiento con flCI da lugar a /tI delación y ex pulsión de la cadena
peplídica acortada
feniltiourea protonada
s
I
... c ... .
HN :\I!., Ph
\ '"" =
I I
RI OH
=
.. ..,..5 :
Pll - '\H- C
I
I IN-CH-C-NH
"" 1 1
s
I
, c,
R' O
fenil tiollrea
HN N- l 'h
\ , =
H-C-C +
I 'O
R'
feniltiohidllnt oína
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24.9 Detenninación de la estructura de los péptidos
Paso 1: ruptura y determinación del aminoácido del N-termino
o
.. 11 (1) f'h- N=C=S
H
2
N - CH - C - NH -Tyr- lIe-Gln -ipéptido]
I (2) Hp+
01
1 '
50
3
H
s
11
/ C, ..
UN N- Ph + 112N - Tyr - lIe- G1n -i péptido]
\ I
C H - C ~
1 O
CH
2
50
3
H
ácido cisteico
fcniltiohidantoina del
ácido ciSICico
Paso 2: ruptura y determinación del segundo aminoácido (11/11:\'0 aminoácido del N-termüw)
S
O 11
/ f' , ..
UN N- Ph + I-IzN- lIc - Gln-ipéptido]
\ I
.• 1I (1) Ph- N= C= S
1-1 N- CH-C- f\,'l-I -IJc- Gln-ipéptidol
2 1 (2) H)O+
~ '
~ - c ~ O
OH
OH
fcniltiohidanlo¡na de la lirosilla
.. Figura 24.14
Los dos primeros pasos de la secuenciación de la oxilocina bovina se ¡Iustmn en eSla figura. En
cada degradación de Edmlln se rompe el aminoácido del N-terminal y se forma su derivado de
feniltiohidantofna. El péptido acortado está disponihle pam el paso siguiente.
El derivado de fenihiohidantofna se identifica por cromatografía, comparándolo con
los derivados de feniltiohidantoína de los aminoácidos estándar, lo que da la idemidad del
aminoácido N-tenninal original. El resto del péptido pennancce intacto, por lo que se uti -
lizan degradaciones de &lman posteriores para identificar los aminoácidos adicionales de
la cadena. Este proceso es adecuado para una automatización, por lo que se han desarro-
llado varios tipos de secueneiación automáticas.
En la Figura 24. 14 se representan los dos primeros pasos de la secuenciación de la
oxitocina bovina. Antes de la sceuenciación, la muestra de oxitocina se trata con ácido
pcroxifónnico para transfonnar el puente disulfuro en residuos de ácido ciSlcico.
En leoría, las degradaciones de Edman podrían secuenciar un péptido de cualquier
longitud. Sin embargo, en la práctica los repetidos ciclos de degradación producen algu-
nas hidrólisis inlemas del péptido, con pérdida de muestra y acumulación de subproduc-
tos. Después de aproximadamente treinla ciclos de degradación, es imposible que los aná-
lisis posteriores sean precisos. Un péptido pequeño. como la bradiquinina, se puede
determinar por completo mediante degradaciones de &lman, pero las proteínas más gran-
des se hande romper cn pequeños fragmentos (Sección 24.9E) antes de que puedan ser se-
cuenciadas por completo.
PROBLEMA 24.21
Represente la estructura de los derivados de la feniltiohidanto(na de:
(a, alanina (b) valina (e) lisina (d) prolina
PROBlEMA.24.22
Lndique el tercer y cuarto paso de la secucnci ación de 1<1 oxitocina bovina. Utilice la Figura 24. 14
como guía
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1140 Capítulo 24: Aminoácidos, péplidos y proteínas
la ruptura enzimatica selec:tiva
de las proteinas es critica en mu-
chos procesos biológicos. Por
ejemplo. la coagulación de la san-
gre depende del enzima trombt-
na. que rompe el fibrinógeno en
puntos espedficos para producir
fibrina, la proteína que forma un
ooáguto.
PROBLEMA 24.23
El método de Sanger para la determinación N-terminal es una alternativa menos frecuente a la
degradación de Edman. En el método de Sanger, el péptido se trata con el reactivo de Sanger. el
2,4-dinitrofluorobenceno, y a cont inuaci ón se hidroliza haciéndolo reaccionar con He! acuoso 6
M. El aminoácido N-tenninal se recupera en forma de su 2,4-<1initrofenil derivado y se identifica.
Mé/(Jdo de Sanger
O,N-Q-F +

2,4-dinilrofluorobcnccno
(rclICli \'o de
°
.. I
H, N-CH-C-NHi péplido l
I
R'
péplido
1-10 6 M,calor
,
02N--<D>--NH-?H-COOH
R'
+ aminoácidos
NO!
derivado 2,4 ..dinilrofcnil
(a) Proponga un mecanismo para la reacción del extremo N-tenninal del péptido con 2,4-dini-
trofluorOClCnccno.
(b) Explique por qué generalmente es prererible utilizar L'I degradación de Edman al método de
Sanger.
24.90 Análisis de 105 residuos e-terminales
Comenzar por el extremo C-tenninal no es un método eficiente para secuenciar varios
aminoácidos de un péplido. Sin embargo. en muchos casos, el aminoácido C-tcnninal se
puede identificar utilizando el enzima carboxipefJfidasa, que rompe el enlace peptídico
del residuo C-lenninaL Los productos son el aminoácido C-telminallibre y un péptido
acortado. La reacción posterior rompe el segundo aminoácido que se tnmsfomm en el nue-
vo extremo C-tenninal del péptido acoltado. Ocasionalmente, se hidroliza el péptido com-
plelo en sus aminoácidos individuales.
o O
I I
I [
I I
R"- I R"
carboxipeptidasa
,
HP
l péptidot-NH-CH- C- OH +
I I
R"- I R"
'\. aminoácido libre
(ruprura posterior)
Un péptido se incuba con el enzima carboxipcptidasa, y se controla y monitorjza la
aparición de aminoácidos libres. En teoría, el aminoácido que primero aumenta su con-
centración debería ser el C-lenninal y el siguiente aminoácido que aparece debería ser el
segundo residuo del extremo. En la práctica, se rompen diferentes ami noácidos a veloci-
dades diferentes, lo que hace que sean difíciles de detenninar los aminoácidos más allá del
C-terminal y, oca<;ionalmeme, el segundo residuo de la cadena.
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24.9 DelenninaciÓll de la eslructUrd de los péptidos 1141
24.9E Ruptura del péptido en cadenas más cortas: hidrólisis parcial
Antes de que se pueda )jecuenciar una proteína larga, se ha de romper en cadenas más pe-
queñas. que no contengan más de treinta aminoácidos. Se secuencia cada una de estas ca-
denas fragmentarias y, a continuación. se deduce la estructura completa de la proteína en-
lazando Ins cadenas cortas como si fueran las piezas de un rompecabezas.
La ruptura parcial)je puede llevar a cabo uti1i7..ando ácido diluido en un período cor-
to de reacción o utilizando enzimas como la tr;púna y la quinwtripsilla. La ruptura, cata-
lizada por lUl ácido, no e)j muy selectiva, dando lugar a una mezcla de fragmentos cortos
que se obtienen a partir de la ruptura en varia .. posiciones. Los enzimas son más selecti-
vos, dando lugar a rupturas en pumas predecibles de la cadena.
TRI PSINA: rompe la cadena por los grupos carboxilos de los aminoácidos bás i-
cos lisina )' arginina.
QUIMOTRlPSINA: rompe la cadena por los grupos carboxilo de los aminoáci-
dos aromáticos fenilaJanina. tirosina y loptófano.
En la Figlll"a 24.9 se utiliza oxitocina como ejemplo para ilustrar la utilización de la
hidrólisis parcial. La oxitocina podría ser secuenciada directamente por análisis del extremo
C-lenninaJ y una serie de degradaciones de Edman, pero proporciona un ejemplo simple
de cómo se puede ensamblar una estructura. La hidrólisis parcial, catalizada por un áci-
do, de la oxi tocina (después de la ruptura del puente disulfuro) da lugar a una mezcla Que
incluye los siguientes péptidos:
lIe-Gln-Asn-Cys Gln-Asn-Cys-Pro Pro-Lcu-Gly . Nl-l
2
Cys-Tyr-lIe-Gln-Asn
Cuando se unen las regiones Que se solapan de estos fragmentos, se obtiene la se-
cuencia complela de la oxitocina:
completa
lIe-Gln-Asn-Cys
Gln-Asn-Cys- Pro
Cys-Tyr-ne-Gln-Asn
Cys-Pro-Leu-Gly
Pro-Leu-Gly' NH
2
Cys-Tyr-lIe-Gln-Asn-Cys-Pro-leu-Gly • NH
2
Los dos residuos Cys de la oxi tocina pueden estar involucrados en puentes di sulfu-
ro, bien uniendo dos unidades de estos péptidos o fonnando un anillo. Calculando la masa
molecular de la oxitocina, se puede ver Que ésta sólo contiene Wla de esas unidades pep-
lídicas, por lo tanto. los residuos Cys pueden unir la molécula en un anillo.
PROBLEMA 24.24
Expljque por dónde la tripsina y la quimotripsina romperfan el siguiente péptido:
Tyr-IJe-Ci ln-Arg-Leu-Gly-Phc-Lys-Asn-Trp-Phe-Gly-Ala-Lys-Gly-Ci ln-GIIl . NHz
PROBLEMA 24.25
Después del trotamiento con ácidoperoxifómlico, la hormona pcplfdica vasoprcsina se hidroliza
parcialmente. Se recuperan los siguienles fmgmelllos. Proponga una eSlruc1ura para la vasopre-
sina.
Phe-Gln-Asn
Asn-Cys-Pro-Arg
Pro-Arg-Gly· NHz
Tyr-Phc-Gln-Asn
Cys-l)'r -Phe
Cys-Pro-Leu-Gly
La hidrólisis enzimática de las
proteinas tiene muchas aplica-
tiones. Por ejemplo. la papaína
(del elCtJ'acto de papaya) se utili-
za como ablandador de carne.
Rompe las proteínas fibrosas por
varios puntos. haciendo que la
came sea menos dura.
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1142 Capítulo 24: Aminoácidos, péptidos y proteínas
24.10
Síntesis
de péptidos
en solución
24.10A Introducción
La síntesis total de péptidos no suele ser un método económico para su producción co-
mercial. Los péptidos importantes se suelen obtener a partir de recursos biológicos. Por
ejemplo, la insulina, utiljzada por los di abéticos, al principio se obtcnia a partir del pán-
creas de cerdo. Actualmente, la técnica del ADN recombinante está mejorando la calidad
)' disponibilidad de las sustancias rannacéuticas peptídicas. Es posible exlmer la parte de
ADN que contenga la codificación de una proteína determinada. insertarla en una bacte-
ria e inducir a la bacteria para que pnxluzca la proteína. Se han desarrollado cepas de /:"s-
cherichia coli para producir insulina humana que evi te reacciones peligmsas en las per-
sonas que son alérgicas a los productos derivados del cerdo.
Sin embargo, la sinlesis de péptidos en el laboratorio todavía es un área importante
de la química. Cuando se determina la estructura de un péptido nuevo, general menle se in-
tenta sintetizarlo. La síntesis tiene una doble finalidad: si el material sintético es igual que
el natural, indica que la estructura propuesta es correcta. Además, la síntesis proporciona
una gran cantidad de malerial para pruebas biológicas posteriores.
La síntesis de péptidos requiere la fonnación de enlaces amido entre los ami noáci-
dos que forman la secuencia correcta. Con ácidos y aminas si mpl es, se formaña un enla-
ce amido medi ante la transformación del ácido en un derivado activado (como un haluro
de aci lo o anhídrido) y añadiendo la amina.
o
11
o
11
R- C- X + H
2
N-R' R-C- NH-R' + H- X
(X es un buen grupo saliente, preferenlememe suslraclor de eleclrones.)
Sin embargo, la formación de amidas a partir de aminoácidos no es fácil. Cada ami-
noácido tiene un grupo amino y un grupo earboxilo. Si se act iva cI grupo carboxilo, éste
reacciona con su propio grupo amino. Si se mezclan aminoácidos y se añade un reactivo
para que se emparejen, éstos forman todas las secuencias imaginables. Además, algunos
aminoácidos tienen cadenas latemles que pueden interferir en la formación de péptidos. Por
ejemplo, el ácido g1ulámico ti ene un grupo carboxilo extra y la lisina ti ene un gnJpo ami-
no extra. Como consecuencia, en la sÚltesis de péptidos también se incluyen reactivos ac-
ti vantes para formar los enlaces peptfdicos correctos y reactivos protectores para bloquear
la formación de enlaces incorrectos.
Los químicos han ideado dos métodos diferentes para sinteti zar péptidos. El méto-
do en soluci6n clásico consiste en añadir reactivos a soluciones de cadenas peptídicas en
crecimiento y el mltodo enfase sólido consiste en añadir reactivos a cadenas peptídicas
en crecimiento enl azadas a un soporte sólido. A pesar de que con cada método se puede
utili zar una !,rran variedad de reacti vos y de procedimientos, sólo se estudiará un tipo de
reactivos para el método en solución y un tipo de reactivos para el método en fase sólida.
24.108 Método en solución
Considérese la eSlrucluf'd de la alanil -valil-fenilalanina, un tri péptido simple:
o O O
11 11 11
H N- CH- C-NII- CII- C- NH-CH-C-OH
'1 1 1
CH) CII(CIl
1
) 2 CHl11
alani l vali l
Ala-Val -Phc
fcnilalanina
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24. 10 Síntesis de péptidos en solución
La síntesis de péptidos en solución comienza en el extremo N-terminal y acaba en
el C-terminal, o va de izquierda a derecha, de la forma en la Que se simboliza el péptido.
El primer paso es emparejare! grupo carboxi lo de la alamna con el grupo amino de la va-
lina. Esto no se puede realizar solamente activando el gruJXl carboxi lo de la alanina y aña-
diendo valina. Si se acti vase el grupo carboruJo de la aJani na, reaccionaría con otra molé-
cul a de alanina.
Para prevenir las reacciones colaterales, se ha de proteger el grupo amino de la ala-
nma para hacerlo no nucleofílico. Cuando eJ aminoácido libre se trata con clorofomliato
de bcncilo se obtiene un uretano, o éster carbamato, Que se eli mina fácilmente al final de
la síntesis. Este grupo protector se ha utilizado durante muchos años y se le han dado va-
rios nombres. Se le denomina grupo benciloxicarbonilo, grupo cm·hobemox; (Cbz) o sim-
plemente grupo Z (Z de forma abreviada).
Paso preliminar: protección del grupo omino COIl Z
o
(O)--CH,-O-!-CJ +
doroformi¡lto de bcncilo
Z-CI
o
.. I
H, N-CH- C- OH
. 1
CH,
akmina
Al,
!.>TUpo Z


bcnci lo¡c:icarbonil-atanina
Z-Ata
+ HCl
El grupo amino de la Z-Ala resulta así protegido como una amida no nuc1cofflica del
rencil éster del ácido carbámico. De esta manera, el grupo carboxilo se puede act ivar sin
que reaccione con el grupo amino protegido. En la síntesis en soludón, se activa el grupo
carboxilo tratándolo con doroformiato de elilo. Se obtiene de esta forma un anhídrido
mixto del aminoácido y ácido carbónico que está fuertemente activado frente a un ataque
nucleofílico.
Paso 1: activaci6n del grupo carboxilo
o
11
Z- NHCH- C- OH
1
CH,
alanina protegida
o
11
+ CI-C-OCH
2
CH)
c1oroformiato de elilo
Z- NHCH
1
CH]
anhídrido cid ácido (llrbónio)
o O
I 11
C- O-C-OCHzCH) I + HCI
anh{drido mixto
Cuando se ¡¡.ñade el segundo aminoácido (valina) a la alanina, protegida y activada,
el grupo amino nueleoffl ico de la valina ataca al carbonilo activado de la alamna. despla-
zando el anhídrido y formando un enlace pcpHdico.
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.,
Capftulo 24: Aminoácidos. péptidos y proteínas
Paso 2.' ofJareamiel1lo eOIl el amilf()Ócido
o O
I I
Z- NI1CH-C- O-C-OCHl CH} +
I
CH,
alanina, protegK1a y activada
PROBLEMA 24.26
o
.. i
H, N-CH- C-Otl
. I

vali na
O O
n I + COI
Z- NHC;H- C- NH- CH- C-OH 2
I I + CHJCI-IP I '

Z-Ala-Val
Represente los mecanismos completos para la formación de la Z-Ala, su activación por
mialo de elilo y d aparcamiento con valilla.
En este punto, se tiene protegido el N del dipéptido Z-Ala-Val. La activación del
grupo ca rboxilo de la vaJina. seguida de la adición de fenilalanina, dn lugar al tripéplido
protegido.
Pa.w 1.' aCI;mción del gmpo carlxuilo
Paso 2.' apareamiento eOIl el sigu;ellle aminoácido
0J Q. I O O O
-- Z- Ala-NHO I - t NH- CII- !-Ol-l
I I I I
CII(CII1h H,C- o-I - CII, CH1-Ph
feni lalanina Z-Ala-Val -Phc
PlIr<l. obtener un péptido más largo, se repilen estos dos pasos para la adición de cada
residuo de aminoácido:
1_ Activación del extremo e-lennllal del péplido en crecimiento haciéndolo reaccio-
nar con clorofonni alo dc etilo.
2. Apareamiento con el siguiente aminoácido.
El p<lSO final de la síntesis en solución consiste en desproteger el extremo N-telmi-
nal del péptidocomplclo. Se ha de romper el enl <lce amido del N-tenninal sin rompcrnin-
guno de los enlaces pcplfdicos del producto. Afortunadamentc, el grupo benciloJl: icarbo-
nilo en parte es una amida y en parte un éster de bencilo, y la hidrogenóli sis del éster de
bencilo se produce en condiciones suaves que 110 rompen los enlaces pepLídicos. Esta rup-
tura suave es el motivo por el que se utili za el grupo bencilOJl:iearbonilo (y no otros gru-
pos aci Jo) para proleger el N-tcnninaL
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24. 11 Síntesis de péptidos en fase sólida 1145
Paso filial: eliminaci6n del grupo lJrofecfor
o O

Z-Ala-Val-Phe
PROBLEMA 24.27
eH,
O
.. 11
H NCHC- Yul - PIle
, 1
CH)
Ala-Val-Phe
Explique cómo sinteti zarla Ala- Val-Pile-Gly-Leu a ¡mrtir de Z-Ala-Val-Phe.
PROBLEMA 24.2B
Explique cómo sint eti zaría IJe-Gly-Asn mediante la síntesis en solución.
El método en solución es adecuado para péptidos pequeños, muchos péptidos se han
sintetizado siguiendo esle proceso. Sin embargo, no es fácil sintetizarprotefnas por el mé-
todo cn solución. Incluso pam pequeños péptidos se requieren !,'mn número de reacciones
químicas y de purificaciones. A pesar de que los rendimientos individuales son excelen-
tes, con un gran péplido, el rendimiemo totaJ es muy pequeño, necesitándose varios me-
ses (o años) pam complelar lodos los pasos. La gmn cant idad de tiempo que se requiere y
cJ bajo rendi mi ento total se deben en gran parte a los pasos de purificación. Para los pép-
,idos grandes y para las proteínas, generalmente es prererible utilizar la síntesis de pépti-
dos en fase sólida.
En 1962, Robert Bruce Mcrrifield de la Universidad Rockefeller desarrolló un método
para sintetizar péptidos sin tener que purificar los intennedios: unió las cadenas de pépti -
dos en crecimiento a cuentas de poljestireno sólido. Después de añadir cada aminoácido,
se eliminan los reactivos en exceso lavando las cuentas con disolventc. Estc ingenioso mé-
todo permite la automatización, y Mcrrificld construyó una máquina que podía añadir va-
rias unidades de aminoácidos sin necesidad de que estuviera atendida. Mediante el uso de
esta máquina. Merrifield sintetizó ribonucleasa ( 124 aminoácidos) en sólo seis semanas.
obteniendo un rendimiento total del 17%. Merrifield. JXlr su trabajo en la síntesis de pép-
tidos en fase sólida, obtuvo el premio Nobel de química en 1984.
24.11A Reacciones individuales
Antes de considemf la síntesis de pépfidos en fase sóLida se tratarán tres reacciones im-
ponantes. Primero se verá cómo se une un aminoácido al sopone sólido, cómo y por qué
se protege el grupo amino, y cómo se forman los enlaces peptídicos.
Unión del péptido al soporte sólido La mayor diferencia entre la síntesis de pép-
tidos en solución y en fase sóHda mdica en que la sfntesis en fase sólida se realiza en el
sentido opuesto: comenzando JXlr el exlremo C-temlinal y avanzando hacia el extremo N-
terminal. de izquierda a derecha. según el convenio que se ha elegido pam representar un
péptido. El primer paso consiste en unir el último ami noácido (el del extremo C-terminal)
al sopone sólido.

PARA RESOLVER PROBLEMAS
Recuerde la sfntesls de péptidos
cl ásica (en solución):
1. SentidoN ...... CPrimerose
protege el N·leoninal (con el
grupo Z) y se desprotege al final.
Z. Se empareja cada aminoácido
activando el extremo e-terminal
(con doroformiato de etilo) y se
ensamblan aminoácidos nuevos.
24.11
Síntesis
de péptidos
en fase sólida
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1146 Capítulo 24: Aminoácidos. péptidos y proteínas
Q / H
H

/ "-
H
estircno
grupo
protector
+
El sapone sólido es un lecho de poliestireno especial en el que algunos de los ani-
llos aromát icos ti enen grupos cJorometilo. Este poHmero. con frc(.'Ucncia denominado re-
sina de Merrifield, se obtiene copolimerizando estireno con un bajo porcentaje de p -(clo-
rometi l)-eslircno.
Formación de /0 resina de Me,./"¡field
Qa
Q QQ
CH
2
Cl

O
/ H

/ "-
+CH-CH,-CH-CH, -CH- CH, +
H H
p-(clorometi l)cslircno polfmero
fonna
De la misma forma que otros haluros de bencilo, los grupos c1oromctilo del polímero
reaccionan frente a un ataque SN2. El grupo carboxi lo del aminoácido N-protegido des-
plaza el cloruro, dando lugar a un éster del aminoácido insertado en el polímero. De hecho.
el políme ro sirve como la parte al cohólica de un grupo protector éster para el ex.tremo car-
boxOi co del aminoácido de l extremo
Unión del aminoác:i(lo del e,\7rell1o e -terminal
o
o H H
l .. \ I
r NH-CH-C-O''---...C-CI
1 ..
gmpo
protector
11 ..
rNH-CH- C-O-CII
1 .. ,
CI -
R
O
R
O
p p
Una vez que aminoácido del CXlremo C-tenninal se ha al polímero, la ca-
dena se a partir del grupo amino de este aminoácido. Cuando se completa la sfnte-
sis. el enlace éster con el polímero se rompe con HF anhidro. Debido a que se trata de un
enl ace éster, se rompe con más facilidad que los enl aces amida del péptido.
RIt/Jtllra de1¡Jéptido final
o
11 O
! pépt;do}-C-OH +
p
p
Utilizació n del grupo prot ector terc-but iloxicarbonilo (Boc) El grllpo benci lo-
xicarbonilo (grupo Z) no se puede utili zar en el proceso de fase sólida. ya que el grupo Z
se elimina por hidrogenólisis en contacto con un catalizador sólido. Un péptido enlazado
a un polímero no puede conseguir un contacto adecuado, con un catalizador sólido. que
se necesit a en la hidrogenólisis. El grupo protector del N que se utili:-,.a en el procedimient o
de Mcrrifield es el grupo rerc-butilox.icarbonilo, o Boc de fonna abreviada. El grupo Boc
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24.11 Síntesis de pép:idos en fase sóli da
es similar al grupo Z, excepto en que tiene un grupo tere-butilo en lugar del grupo bcnci-
lo. De la misma fonna que OIros ésteres de (ere-burilo, el grupo protector Boc se elimina
fácilmente en condiciones ácidas.
El cloruro de ácido del grupo Soc es inestable, por lo que se utiliza el anhídrido, di -
carbonato de di-terc-butilo, pan\ enlazar el grupo protector Boc al aminoácido.
Protecci6n del grupo amino COIIIO deri"ado Boc
CH} O O <;:H.l
I I U I
CH -C-O- C-O-C- O-C- CH
, I I '
+ H
2
N - CII - COOH
I
CH) CH)
dicarborulto de di -tl'll,'-bulilo
eH) O
I n
R
aminoácido
CH,
CH -C-O-C+- NII - CH- COOH
, I I
+
I
CH -C- DlI
, I
CH] R CH,
Boc-aminoácido
El grupo Boc se rompc fácilmente mediante un ligero tratamiento con ácido trinuo-
roacético (TFA), CF
3
COOH. La pérdida re un catión lerc-butilo, relativamente estable., del
éster protonado da lugar a un ácido carbámico inestable. la descarboxilaci6n del ácido cnr-
bámico da lugar al grupo amino dcsprotegido del aminoácido. La pérdida de un protón del
catión terc-butilo da lugar a isobutileno.
<¡H, ?
CH - C-O- C- NH- CH
, I I
COOH
CH
1
R
aminoácido-Boc
CH,
I
CH +
1 I
CH,
[
'O- H ]

¡leido carbámico
/CH}

, "-
CH,
isobutileno
CH, tOL H
I .. i .
eH -C-O-C- NH-CH- COOI I -
, I \.V I
CH
3
R
,,","""'"
+ H,N- Cl-f - COOH
I
R
Uf ninoacloo libre
+ co,t
Actualmente, cuando se si ntetizan péptidos genemlmente no se suelen preparM los
propios aminoácidos Boc-protegidos, sino que se compran, para utilizarlos directamente,
ya que la mayor parte de los aminoácidos, protegidos con el grupo Soc, están disponibles
comercialmente.
Utilización de DCC como agente de acoplamiento de péptido5 La reacción
final que se necesita para el procedimiento de Merrifield es la condensación de los en-
laces pcplfdicos que se fonnan. Cuando se trata una mezcla de una ami na y un ácido
con N,N' -dicielohexilcarbodUmida (DCC>, la amina y el ácido reaccionan, y fonoan
una amida. La molécula de agua que se pierde en la condensación transforma el DCC
e n N,N' -diciclohexilurca (DCU).
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1148 CapflUlo 24: Aminoácidos, péplidos y proteínas
o
R- l-o + H)Ñ- R' + o-Ñ-C-N-Q -
ácido amina N,N' -diciclohexi\carbodiimida (OCCJ
o H O 1-1
I
R-C-NH- R'
+ o - ¿ - ! - ~ - Q
amida N.N' diciclohcx ilurea (OCU)
El mecanismo para el acoplamiento del DCC no es lan complicado como parece. El
ión carboxHalo se adiciona al carbono fucllemente electrofílico de la diimidl.l, dando lu-
gar a un derivado de aeilo activado. Este der ivado activado reacciona rápidamente con la
amina para dar lugar a la amida. En el paso final. la OCU sirve como un grupo saliente ex-
celente.
Fomwci61l de 111/ deril'odo di! oeilo activado
D
O N 1"" ""
I .. 11 ______ H-NH, -R'
R-C-Q-C / J
.. ;N''O
o
'ND
i I
R- C-O-C,
activado
eS
Acoplamiento eOIl/a omino y pérdif1a de OCU
o Nil O
I I
R-C-NHR' + O-C ......
,mid, eS
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24. 11 Síntesis de péplidos en fase sólida
PROBLEMA 24.29
Proponga un mecanismo para el acoplamiento del ácido acéti,;o y ani lina, utilizando DCC como
agente de acoplamiento.
A continuación se pondrá un ejemplo para ilustrar cómo se combinan estos proce-
dimientos en la síntesis de pépfidos en fase sólida de Merrifield.
24.118 Ejemplo de síntesis de péptidos en fase sólida
Para comparar, de fonna fácil, los métodos en solución y en fase sóli da, se considerará la
síntesis del mismo tripéptido que se utiliy..ó en el método en solución.
Ala-VaI-Phe
La síntesis en fa'ie sólida se ll eva a cabo en sentido opuesto a la síntesis en solución.
El primer paso es la unión del aminoácido del extremo e-tenninal con el N protegido
(Boc-fenilalanina) al polímero.
o
11
NH-CH-C-O-
1
Ph- CH
2
Boc-Phc
o
p
o
P
El ácido trifluoroacético (TFA) Li bera el grupo protector Boc de la ferulalanina para
que su grupo arnino se pueda acoplar con el aminoácido siguiente.
o
+ I
(TFA)
CF)COOIl

H N-CH-C- O- CH
' 1 '
Boc-"",,--®
p
Ph-CH
. ,
'''''-0
o
1149
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1150 CapíTulo 24: Amino.1cidos. péptidos y pmeína<>
El segundo aminoácido (valina) se añade en su fonua protebrida (N-Boc) para que no
se pueda acoplar consigo mismo. La adición de OCC hace que se acople el gruJXl carbo-
xilo de la valina con el grupo -NH
2
libre de la fenilalanina.
IkK:·Val
Para acoplar el aminoácido final (aJanina), primero se desprotege la cadena tratán-
dola con ácido lrifluoroacélico. A continuación, se añaden la Boc-alanina y la OCc.
Paso 1: lfesproucci6n
o O
I I

(CH,)lCH O
P
(ITA)
CFCOOH
3 •
o O eH
, 1 I I '
+ Cl i ,-C-.oCH!
(CH,hCH I'h-CH, O + ca,
P
Paso 2.- acoplamiento
o o
I I
O

I
eH,
o o o
I I I

(CH,),CH Ph- CH
2
D
p
oce
r¡;;;;1 + DCU
=r eH, JOH,l,CH O
Boc-Ala-Vlll-Phe----(!) f'
Si se estuviera sintetizando un péptido más largo. la adición de cada aminoácido su-
cesivo requeriría la repetición de dos pasos:
l. Utilización de ácido trifluoroacético para desproteger el grupo amino del Hnal de la
cadena en crecimiento.
2. Adición del siguiente Boc·aminoácido, utili7..ando DCC como agente de acopla.
miento.
Um\ vez que se ha completado el péptido, se ha de eliminar el grupo protector Boc
final y se ha de separar el péptido del polímero. El HF anhidro rompe la unión éster que
enlaza el péptido al polímero y también elimina el grupo protector Boc. En este ejemplo
se producen la.;; sisuientes reacciones.
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24.13 Niveles de la estructura de las proteínas 1151
PROBLEMA 24.30
Indiquc cómo Lcu-Gly-Ala-Val-PllC a partir de Boc-Ala-VaI-Pl1e-®.
PROBLEMA 24.31
Indique cómo se podríaobtcncr lIe-Gly-Asn mediante una sfntesis ell rase sólida.
Las proteínas se pueden clasificar de acuerdo a su composición química, su fOlma o su fun-
ción. La composición y la función de las proteínas se esludian detalladamente en los
sos de bioquímica_ En este texto. se explicarán brevemente los diferentes ti pos de proteí-
nas y sus clasificaciones Benerales. .
Las proteínas se agrupan en :úmples y conjugadas de acuerdo con su composición
química. Las proteínas simples son las que cuando se hidroli zan sólo dan lugar a amino-
ácidos. Todas las estructuros de las proteínas que se han visto hasta ahora son proteínas sim-
ples como, por ejemplo, la ins ulina, la ribonucleasa, La oxitocina y la brddiquinina. Las pro-
leínas conjugadas están enla...-..adas a un grupo prostético no proteico como un azúcar, un
ácido nucleico, un lípido o algún otro grupo. En la Tabla 24.3 se recogen algunos ejem-
plos de proteínas conjugadas.
TABLA 24.3 Clases de proteínas conjugadas
Cl ase
glkoproteínas
nuclcoprotcínas
ti poprolcrnas
mCluloproceinas
Grupo prostético
l:urbol!idrat(»
ácidos nucldcos
grasas, colesterol
mClal COmplejlldo
Ejemplos
l'-globulina. inlcrfer6n
ribosomas, virus
lipoprot crnas de densidad a lta
hemOglobina. citocromos
Las proteínas se clasifican como fihrosas o globulares dependiendo de si fomulIl fi -
lamcntos largos o secnTOllan sobre sí mismas. Las pr-oteínas fibrosas son alargadas, fuer-
tes y generalmente insolubles en agua, y su función principal cs formar las partes estruc-
lurales del organismo. Un ejempl o de proteína fibrosa es la a-queratina. que se encuentra
en las pe:wñas de los animales, cn las uñas y en el colágeno de los tendones. Las proteí-
nas globulares se encuentran enrolladas. con formas prácticamente esféri cas, y princi-
palmcnte fomlan parte de los enzi mas, las honnonas o protefnas de transpone. Ejemplos
de proteínas globul ares son la insuli na, la ribonucleasa y la hemoglobina.
24_13A Estructura primaria
Hasta ahora. se ha hablado de la esrructura primaria de las proteínas. La estructura pri-
maria indica la conectividad covalenle que existe entre los átomos, grupos de átomos y
rcsiduos de aminoácidos que existen en la molécul a. Esta definición incluye la secuencia
de amino..1cidos, junto a cualquier puente disulJuro que pueda existir en la molécula pro-
teica. Muchas de las propiedades de las proteínas derivan, directa o indirectamente, de la
estructura primaria. Cualqui er pliegue, enlace de hidrógeno O actividad catalítica depen-
de de la estructura primaria.
24.138 Estructura secundaria
Las cadenas peptídicas tienden a adoptar ciertos ordenamientos moleculares debido a
imeracciones de enlaces de hidrógeno. En particular. los átomos de oxígeno del grupo
carbonilo forman enlaces de hidrógeno con los hidrógenos del grupo amida (N- I-I).
Existen, en general. dos ordenamientos moleculares de las proteínas grocias a los enlaces
de hidrógeno: la hélice a y la lámina plegada. Cada uno de estos dos tipos de ordena-
mientos moleculares debidos a los enlaces de hidrógeno, en el caso de que se produzcan,
se conocen como t.'Structura secundaria de la proteína.
24.12
Clasificación
de las proteínas
snC;FRFNC'T A
PARA RESOLVER PROBLEMAS
RC<:ucrde que la síntesis de péptidos
en fase sólida:
1. VadeIC_N.Primemenlazact
ellrtremo e-terminat N-Boc
protegido al soporte sólido.
2. Acopla cada sucesivo aminoácido
climinando (oon TFA) el grupo
l3cx del extremo N-termi nal. A
oontinuad6n, se añade e l
siguiente aminoácido BO(
protegido con OCC
3. Se separa e l péptido acabado del
techo o soporte sólido con HE
24.13
Niveles
de la estructura
de las proteínas
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1152 Capítulo 24: Ami noáci dos, péptidos y proteínas
R
'c(:l \ O · ..
C=O······ :-rN
\ / \ !" \ ..... H- , \
" ' H-N · H-N .,.. CH C=O N c=o eH
\ / R \ ",O·f .,, ':/ \ ' R'" \
(l-I c=o·· e He, 'R (]-I He" 'R e = 0
R ..... \ \ R'" \ \
e · · · · · · · · · H - ~ e · · · · · · · · · H ~ ... 1f
e", gris
N=lizul
O'" rojo
R:: \'ente
UI tela de araña está formada
principahncnlc por fibroína,
proteína que t iene una estructura
secundaria de lámina plegada. la
di sposición en lámina plegada
pcnn.ilc que haya múlt iples
enlaces de hidrógeno ent re las
moléculas. lo que le confiere una
gmn resistencia mecánica.
... Figura 24.16
Rcordcnamicnlo de lámina
plegada. Cada grupo carboni lo
JX..'Ptídico está unido mediante
enlace de hidrógeno al hidrógeno
del grupo N- I-I de tina cadena
pcptrdica adyacente.
.&. Figura 24.15
On:lenamienlo a-hclicoKlal. Cada grupo carboni lo pcptídi t.'O se une mediante un enl ace de
hidrógeno a un hidrógeno del grupo N-H de la siguicme vuelta de la hélice. Las cadenas
laterales se simboLizan por esferas verdes en el model o molecular de J:l figura.
Si la molécula se enrolla de forma helicoidal. cada oxígeno del grupocarbonilo se pue-
de unir mediante un enlace de hidrógeno al hidrógeno del grupo N- H de la siguiente vuel-
ta de la hélice. Muchas proteínas se enrollan fonnando una hélice a (hélice que se aseme-
ja a un tomillo que gira a la derecha, en el sentido de las agujas del reloj ) con las cadenas
lat erales colocadas en la parte exterior de la hélice. Por ejemplo, la proteína fibrosa a-que-
ratina se dispone en una estnlct ufa de hélice a y la mayoría de las protcmas globulares con-
tienen segmentos de hélice a. En la Figura 24. 15 se representa una di sposición en hélice a.
Los segmentos de péptido también pueden fonnar ordenamientos de enlaces de hi -
drógeno, alineándose unos al lado de los ot ros. En estos ordenamie ntos. cada grupo ear-
bonito de una de las cadenas fonna un enl ace de hidrógeno con el hidrógeno del grupo
N - H de la cadena adyacente. Este ordenamiento puede hacer que se alineen muchas mo-
léculas de péptidos unas ali ado de las otras, d:mdo lugar a una lámina bidimensional. Los
ángulos de enlace enlre las unidades de aminoácidos son los que resullan del plegamien-
to (crecimiento) de la lámina con las cadenas lalemles de aminoácidos di spuestas hacia la-
dos ali emos de la lámi na La fibroma de la seda, proteína pri ncipal de las sedas de los in-
sectos y arácnidos, lienen una estructura secundaria de lámina plegada. En la Figura 24. J 6
se representa la est ructura de lámina plegada.
Una proteína puede tener o no la mi sma estructura secundaria a lo largo de toda la
cadena. Algunas partes se pueden encontnu enro lladas en fomla de hélices a, mienlras
H

O H

O 11

O .. ..
1
,.'
a 1
.,'
I 1
"
I
........CH
....... N, ....... 0 :1 ............... C, ....... N, ....... CH ............... C ........ ....... N, ....... 01, / c,
/
C N C N C N CH
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....... 'c ....... 'Qi/ ' N/ 'e/ ........ CH ............... N ....... 'e/ ........ CH ....... 'N/
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24. 13 Niveles de la estructura de las proteínas 1153
... Figura 24.11
En la estructura terciaria de una prolCfna glot.Jlar típica se rtlC'l.Clan scb'lllenlos de hélice a con
segmCnlOS de enrollamiento al azar (.'U los puntos donde se dobl a la hélice.
que otras pueden estar alineadas fomlando una lámina plegada. Algunas partes de la cadena
puede quc no tengan estructura secundaria y a esta pane de la cadena no estructurada se
la denomina enrollamiento HI 31.3r. La mayoría de las proteínas globulares, por ejemplo,
contienen segmentos de héli ce a O láminas plegadas separadas por ondulaciones de enro-
lI amientos al azar, permitiendo que la molécula adquiera su forma globular.
24.13C Estructura terciaria
La estructura terciaria de una protcfna es su confornlación tridimensional completa. Se
ha de recordar que la estructura secundaria es una estruct ura l o c ~ t l () parcial. Panes de la
proteína pueden tener una estructura a-heli coidal, mielllras que otras panes pueden tener
estructura de lámina plegada y otras partes pueden tener enrollamientos al azar. La
estructura terciaria incluye todas las estructuras secundarias, y todos los enrollamientos y
pliegues que haya en medio. En la Figura 24.17 se representa la estructura terciaria de una
proteína globular tfpi ca.
El enrollamiento de un enziml:t puede producir efectos cataUt icos importantes. Las
cadenas latcmles polares, hidroJílical· (con afinidad por el agua), están orientadas hacia la
pnrte externa del glóbulo. lAls grupos no polares. hidrojóhicm' (repelentes del agua). es-
tán dispuestos hacia el interior. El enrollamiento en la eonfomlación apropiada permite que
una región determinada del enz.ima, denominada siti o activo, se una al sustrato y calali ce
la reacción. Una reacción que transcurre en el sitio activo, en e l interior de un enzima, se
puede producrr en condiciones no polares, prácticamente anhidras, ¡mient ras queel siste-
ma completo está disuelto en agua!
24.130 Estructura cuaternaria
La estructura cuaternaria se refiere a la asociación de dos O más cadenas de péptidos de
la proteína completa; por ejemplo, la hemoglobina. transportadora de oxígeno en la san-
gre de los mamfferos. está fornlada por cualfO cadenas pcptfdieas unidas para formar una
proteína globular. En la Figura 24. 18 se resumen los cuatro niveles de la estructura de la
proteína.
Las estructuras terciarias de las
protcinas se detenninan medi ante
cristalografía de myos-X. Se
bombanlca un cristal de la
proterna con r.!yos X, cuyas
longitudes de onda son adecuadas
pa .... .! scrdifracladas por los
espaciadores atómicos regulares
del (.Tistal. A cont inuación, un
computador detcnnina las
localizaciones de los átomos del
(.TiSIlII.
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1154 Capítulo 24: Aminoácidos. péplidos y proccínas
"" Figura 24.18
Comparación esquemática de Jos
niveles de est rucluTlIS de las
proteínas. Lacst ruct urd primaria
es la eSlruclurn enlazada
coValcntcmcme, incluyendo la
secuencia de aminoácidos y los
puentcs dis ulfuro. La CSlruclurd
secundaria incluye laS áreas de
hélices 0:, láminas plegadas o
CflTollamicntos al alar. En la
CSlrocturn terciaria se incluye la
conformación total de la
mol&:ula. En la cslrlK;tura
cualCmaria se incluye la
asociación de dos o más cadenas
pcpHdicas de la protefna aCliVll..
24.14
Desnaturalización
de las proteinas
Desnaturalización irreversible de
la albúmina de huevo. La clara de
huevo deja de ser transparente y
se solidifica CUOlndO se calienta.
Ile-Glo
I \
Tyr Aso
I \
Cys-S-S- Cys- Pro Leu- GIY' NH
2
estructura primaria
estJllL1.ura terciaria
li -·- - H···
, ,
e H ...-,:;C
R
~ ' H"' O"'" \
N- eH
, ~ ,
... Q=C R
estructura secundaria
estruch.llll cuaternaria
Para que una proteína sea biológicamente activa ha de tencr la estructuro correcta en todo!¡ los
niveles. L1 secuencia de aminoácidos ha de ser correcta, con los puentes di sulfuro apropiados
para enlv.ar las cadenas mediante residuos de cistina. También son importantes las estructuros
secundarias y terciarias. La proteína se ha de plegar en su conformación narural, con las áreas
apropiadas de hélice ex y lámina plegada. Para un etl7Jma, el si tio activo ha de tener la confor-
mación adecuada, con los grupos funcionales de las cadenas laterales necesarios en las lJOSi-
dones correctas. Las proteínas conjugadas han de tener los grupos prostéticos adecuados y las
proteínas de cadenas múltiples han de tener la combinación de péptidos individuales adecuada.
Con excepción de la e,...;t ruclUra primaria que viene definida por una conectividad co-
valente, todos los otros niveles est ructurales se mantienen por solvatación débil y por en-
laces de hidrógeno o por interacciones de vun der Waals. Pequeños cambios en el am-
biente que rodea las proteínas pueden producir un cambi o confonnacional o químico.
originando su desnaturali1..ación, esto es, la mooificación de la estructura nonnal y ¡Xr-
dida de la act ividad biológica. Hay muchos factores que pueden prooucir la desnaturali-
zación, pero los más comunes son el calor y el pli.
24.14A Desnaturalización reversible e irreversible
El calentamiento de la clara de huevo es un ejemplo de la desnatuni li zación de una proteí-
na por calentamiento. La clara de huevo cOllliene proteínas globulares solubles denomi -
nadas alMminGs. Cuando la clara de huevo se calienta, las al búminas se despliegan y coa-
gulan, dando lugar a una masa sólida blanca caractcr(stica. Las diferentes protefnas ti enen
di stinta capacidad para resistir el efecto desnaturalizante del calor. La albúmina del hue-
vo es bastante sensible al calor, pero las bacterim¡ que viven en los manantiales de agua ca-
liente han desarrollado proteínas que conservan su actividad en agua hirviendo.
Cuando se somete una proteína a un pH ácido, algunos de los grupos carboxilo de
las cadenas laterales se prolonan y pierden su carga iónica, produciéndose cambios con-
fonnacionales que dan lugar a la desnaturali1.ación. En una solución básica, los grupos
amino se desprotonan y, de forma s imilar. pierden su carga iónica. dando lugar también a
cambios confonnacionales y a la dcsnaturali¡..ación.
La leche se vuel ve agria debido a la conversión bacteriana de los carbohidratos en
ácido láctico. Cuando el pli es muy ácido, las proteí nas sol ubles de la leche se desnatu-
rali1...an y precipitan. A este proceso se le denomina coagulaci6n. Algunas proteínas son más
resistentes a las condiciones ficidas y básicas que otras; por ejemplo, la mayoría de los
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24.14 Dcsnaluralización de las prolCínas 1155
enzimas digestivos como la amiJasa y la lripsina siguen siendo activos en condiciones áci-
das en el estómago, incluso a un pH de alrededor de 1.
En muchos casos, la desnaturalización es irreversible. Tal es el caso de la clara de llUe-
vo: al calentarla coagula. pero si se enfrfa no recobra su estTUclura inicial . La leche. cuan-
do se ha cortado, no vudve a su estado inicial si se neutraliza. Sin embargo, la desnatura-
li zación también puede ser reversible si a la proteína sólo se la ha sometido a una
desnaturalización suave. Por ejemplo. una proteína puede separarse de la solución me-
diante una alta concentración salina, que la desnaturaJi ... .-a y hace que la proteína precipi-
te. CWiOdo se redisuelve la proteína precipitada en una solución con una concentración de
sal menor, generalmenle la proteína recupera su actividad y su conformación natural.
24.148 Enfermedades producidas por priones
Antes de .1980, la gente pensaba que todas las enfermedades infecciosas eran producidas por
mi crobios de cualquier tipo. Se tClÚa conocimiento de las enfemlCdades producidas por vi-
rus, bacterias. protozoos y hongos. Sin embargo, había algunas enfernledadcs extrañas en las
que no se había aislado ni se habían hecho cultivos del agente patógeno. Así. en la Enferme-
dad de Creutzfeldt-Jakob (ECJ) en los seres humaoos, cn el scrapie o «tembladera del cor-
dero» en las ovejas o bien en la el/cefalopatía transmisihle en los vi sones (ETM) se producía
una pérdida lenta y gradual de la función cerebral e incluso la muerte. Todos los cerebros de
los enfermos mostraban placas ¡nusuales de proteínas amiloides rodeadas de tej ido e.'POnjoso.
Los científicos que estudiaban estas enfermedades pensaron que había un agente in-
feccioso implicado (no relacionado con causas genéticas o medioambientales), ya que sa-
bían que, por ej emplo, el ETM se podía propagar alimentando a animales sanos con los
restos triturados de los ani males enfernlOs. También se ha estudi ado el kuru, enfermedad
parecida a la OCJ extendida en las tribus donde los mi embros de las familias muestran su
respeto a los muertos comiéndose sus cerebros. Estas enfermedades generalmente se atri-
buían a «virus lentos» que todavía no se habían aislado.
En la década de 1980, el neurólogo Stanley B. Prusiner (de la Uni versidad de Cali-
fornia en San Francisco) preparó un homogeneizado de cerebros de ovejas infectadas con
Jcrapie y separó sistemáticamente todos los fragmentos celulares, bacterias y virus, en-
contrando que el material sobrdUte seguía siendo infeccioso. Separó las proteínas y encontró
una fracción de proteínas que era infecciosa. Sugirió que el :.aapie ( y presumiblemcnte
otras enfemledades similarcs) era causado por un agente infcccioso proteínico al que de-
nominó prott.'Ína prión. conclusión contradecía el principio establecido de que las en-
fennedades contagiosas requerían un patógeno viviente. Muchos científicos escépticos re-
pitieron el trabajo de Pruniser con la esperanza de encontrar contaminantes viral es en las
fracciones infecciosas pero, finalmente, la mayoría de ellos llegaron a la mi sma conclu-
sión. En 1998. Pruniser recibió el premio Nobel en medicina por este trabajo.
A partirdcl trabajo de Pruniser, a las enfemledades producidas por priones se las ha
dado mayor importancia debido a que pueden afectar a los seres humanos. A principios de
1996, algunas vacas del Reino Uni do desarrollaron la «enfennedad de las vacas locas», que
afectaba también a otros animales como las ovejas. Esta enfennedad producía en los ani-
males movimi entos ondulatorios de la cabeí'..a, caídas y, eventualmente, la muerte. Esta
enfernledad, denominada encefalopatía espongiforme bo-¡"ina, o EEB, probablemente se
tnmsmitió debido a que el ganado que se alimentaba con piensos contenían, como fuente
de proteínas, restos tri turados de ovejas infectadas por scrapie. El aspecto más preocu-
pante del brote de EEB era que las personas pudieran contraer una peli grosa enfennedad,
denominada nuel'O \'ariante de la Enfermedad de Creutzje/dt·Jakoh (vECJ) si se alimen-
taban con la came infectada. Desde entonces, una enfennedad similar, denominada en-
fermedad debilitante crónica, o EDC, se ha encontrado en los ciervos y alces salvajes de
las Montañas Rocosas (EE.UU.). Todas estas enfemledades, presumiblemente, producidas
por priones se clasifican como encefa/opatías espol/giformes tral/smisibles, o EETs.
La tCOlÍa ampliamente más aceptada de las enfennedadcs producidas por priones sugiere
que la proteína prión infecciosa tienc la misma estructura primaria que una proteína normal
encontrada en las célul as nerviosas, pero difiere en su estruct ura terciaria. De hecho. es una
versión desnaturalizada. desdoblada, de una proteína nornlal que polimeri7.a para fomlar las
placas de proteínas amiloidcs que se ven en los cerebros de los animales infectados. Cuando
los animales ingieren comida infectada, la proteúla polimerizada no sufre el proceso de
• •
.
. .. .
'-
..
: ; '" , .. .
.. ( . .
.
o-r ., ...
......... .
• o' ...
_ ... _ C<- ...
Mícrofologmfía de un tejido de
cerebro humano nom131. Los
núcleos de las neuronas aparecen
como puntos oscuros.
-' .
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' 0,


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-

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...


. .
·

--



o
Tejido del cerebro de un paciente
infectado con vECJ . Se puede
observar la formación de espacios
vacuolarcs (en blanco) y de placas
de proteína prión (fonnas oscuras.
irregulares) (aumentos 2OQX).
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1156 Capítulo 24: Aminoácidos, péplidos y proteínas
Glosario
del Capítulo 24
digestión y como simplemente es lHla versión desdoblada de una proteína nonnal, el pri60 in-
feccioso no induce al sistema inmunitario del huésped para que alaque el agente patógeno.
Cuando un prión anormal interacciona con una proteína prión normal de las mem-
branas de las células nerviosas, la proteína anomlal de alguna manera induce a las molé-
cul as normales para que cambien su famla (estructura terci aria). Ésta es la parte del pro-
ceso que menos se conoce. Estas nuevas molécul as de proteínas desdobladas inducen,
posteriormente, a que más moléculas cambien de forma. La protefna anonnal poli meriza-
da no se puede romper mediante los enzimas proteasas normales, por lo que se desarro-
llan en el cerebro, y producen las placas y el tejido esponjoso que se asocia con las EETs.
Anles se pensaba que una proteína con la estructura primaria correcta, colocada en
la solución fisiológica adecuada, de forma natural se plegaria y adoptaría la estructura ter-
ciaria correcta, y permanecería de esa foona; era un· error. Ahora se sabe que el plega-
miento de una proteína es un proceso controlado cuidadosamente en el que los enzimas y
las pmte(JJ(J$ acompañan/el' promueven el plegamiento correcto a medida que la proteína
se va sintetl7..ando. Las enfennedadcs producidas por priones hacen pensar que hay muchos
facLOres que hacen que las proteínas se plieguen en conformaciones naturales o no natu-
ral es. y que el plegamiento de la proteína puede tener efectos importantes en sus propie-
dades biológicas dentro de un organismo.
Aminoácido Li teralmente, cualquier mo lécul a quccolltiene un grupo amioo (- NH
2
) y un grupo
carboxilo (- COOH). Elténnino generalmente h/K.'C referencia 3 un a-aminoácido. con el grupo
amino enlazado al átomo de carbono más próximo al grupo carboxil o. (p. 1115)
Aminoácidos esenciales Ami noácidos estándar que no han sido biosintcli 7..ados por los seres hu-
manos y han de ser sumini strados con la dieta. (p. J 11 8)
Aminoácidos est.ándar Los veinte a-aminoácidos que se encuentran L'U prácticamente todas las pro-
teínas nalumlcs. (p. 111 6)
Análisis de r ~ i d u o s tl!rminales Sccuenciación de un péptido mediante la eliminación e identifi -
cación del residuo en el exm:mo N-lCminal o en el C-tenninaJ. (p. I 138)
C-Ierminal (extn'mo C-tennirutl) Extremorle la cadena flCptklica con un grupo caTbonilo libre o de-
rivado. Cuando se representa el péplido, generalmente el extremo C-tenni nal se representa :l la derecha.
FJ grupo ¡¡ mino del aminoácido que contiene el C-tenninallo une con el resto del péptido. (p. 1133)
Dcg ..... dMción de EdmMn Método para eliminar e ident ificar el aminoácido del extremo N-terminal
de un péptido sin dest ruir el reslo de lacadcna pept ídica. $ctratacl péptido{.·on feni lisotiohidantofna,
seguido de una hidróli sis ácida suave para transfonnar el aminoácido del extremo N-terminal en su
derivado de feniltiooidantoína. La degradacióo de Edman se puede ut ilizar de fonna sucesiva para
dctemlinar la secuencia de muchos residuos comenUlndo por el N-teonina!. (p. 11 38)
Iksmdurali'l.ación Altemci6n no nat ural de la confonnaciÓll o estado j6nico de la proteína. La
desnaturnli7.1lción gcnernlmente da lugar a la precipitación de la protefna y a la pérdida de su act i-
vi<htd biológica. La desnalurnliz1tción puet:lc ser reversibl e, como en la precipitación salinll de una
protcfnll, o irreversible, como cuando se calicnta 1M claro de huevo. (p. 11 54)
EJedroforesis Procedimiento para separar moléculas cargadas debido a su migración en un cam-
po eléctrico fuerte. La dirección y la velocidad de migración dependen en gran medida de la carga
media de las moléculas. (p. 11 22)
Enlaces peptídicos Uniones amida L"ntre aminoácidos.. (p. 1133)
Enrollamienlo al azar Tipo de estructura secundaria de una protcflla donde la cadena no (..'Stá en-
roll ada en fonna de hélice ni al ineada en una lámina plegada. En las proteínas globularcs. lll s vuel -
tas que pliL'gan la molécul1t pant que adquiera su forma globular gcncralment l! son segmentos de en-
roll amientos al azar. (p. 11513)
Em'jma Catalizador biol6gil.:oque contiene una proIcfna. Muchos enzimas también Contit!llCfl gru-
pos /)IVSl éticos, const ituyentes no prolcínicos que son esenciales paro la actividad catal ít ica del en-
úma. (p. 1151)
E!,1.ruL1ura eualernaria Asocbci6n de dos o más cadenas peptídicas en una proteína compuesta.
(p. 1153)
Eslrudura primaria Conectividad covalcntc de una proteína. Secuencia de aminoácidos junto
1.-'011 los puentes <lisulfuro. (p. 11 51)
EslructU"'d secundaria Di sposición u ordcllamiemo molecular debido a los enl aces de hidrógeno
locales de una proteína. La estructura secundaria generalmente es dclt ipo: héliet! a. lámina plega-
da o enroll amicnto al azar. (p. 11 51)
Eo,1.rudura terciaria ConfonnaciÓll tridimensional completa de una proteína. (p. 11 53)
Grupo pruslHico Parte no protcfni ca de una protcfna conjugada.. Ejemplos de grupos protéticos
son los azúcares, Lípi dos, ácidos nucleicos y complejos metáliCC6. (p. 11 53)
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Glosario del Capítulo 24
Hélke a Confonnación hclicoidal de un péplido en la que los grupos cartxmil o de una vuelta de
la hél ice están enlazados mcdiantcenlat'CS de hidrógeno a los hidrógcnos del grupo N-H de la si-
guiente vueha. Estos enlaces de hidrógeno adicionales hacen que esta disposición hc1.icoidal sea
bastamccstabte. (p. 1151)
Hidrogcnólisis Ruptura de un enlace por la adición de hidrób'Cno: por ejemplo, la hidrogenólisis
cataJ{tiea rompe los ésteres de bencilo. (p. 11 30)
o
R-!-O-CH,-<O)
Ión dipolar (zwitterión) Estructura con una carga 10la1 de cero, ¡xro que liene Wl suStltU)'CfI tc car-
gndo positivamentc y un sustitu)'ente cargado ncgativantCflte. La mayoría de los aminoácidos se
encuentran cn fonnas iónicas dipolllres. (p. 1119)
t.-aminoiicido Aminoácido que tiene una configuración estcrcoquímiea simi lar a la del L-{- )-gl i-
ccraldehído. La mayoría de los aminoácidos naturales tienen configuración L. (p. 111 5)
Liimina Confonnación dc un péptido en dos dimensiones con las c<ldenas pcptídicas ali-
neadas unas al lado de las otl"'dS. Los !trupos carboni lo dc cada c<!dcna peptfdica se unen mediante
enlaces de hidrógeno a los hidrógenos del grupo N-f-I de la cadena <!dyacente y las cadenas I¡¡ te-
rales se di sponen en lados alternativos de la lámina. (p. 1151)
Método de Sanger Método pard deteml inar el aminoácido del extremo N-terminal de un péptido.
Se trata el pépcido con 2,4-dinitronuorobcnccno (reactivo de Sangcr) y, a continuación, se hidroli -
7.8 por completo. El aminoácido derivado es fácil de idenli fi t1tr, pero el resto del péptido se destru-
yecn la hidróli sis. (p. 1140)
N-terminal (extremo N-terminal) ExtTCmo de la cadena peptfdica l:on un grupo amino libre o
derivado. Según el convenio elegido para representar el péptido, el extremo N-ternlinal general-
mente se enCUCf1[ra a la i7.Quiercla. El grupo carboxilo del aminoi'kido con el extremo N-tcnninallo
une al resto del péptido. (p. 1133)
OIigopéptido Pequeño polipéptido 'lue contiene entre cuatro y diez residuos de aminoácidos. (p. 11 33)
Péptido CWllquicr polfmcro de aminoi'kidos que se unen medi¡¡nt e enlaces amido entre el grupo
¡¡mino de cada aminoácido y el grupo carboxi.lo del aminoáci(lo vecino. Los ténninos dipéptido, /1';-
péptido, ctc., se suelen utili zar para especificar el número <k aminoácidos del péptido. (p. 11 33)
PoIipéptido Péptido que cont)cne muchos residuos de aminoácidos. A pesar de que las proteínas
son polipéptidos. el término polipéptido se suele utilizar con moléculas de masas moleculares m{lS
bajas que las de las proteínas. (p. 11 33)
Proteína Biopolímero de aminoácidos. Las protcfnas son polipéptidos de masas moleculares s u-
periores a 6 OOCI urna. (p. 1133)
Proteína conj ugada Proteína que eonticne un grupo prostético no protetoo como un azúcar. áci-
do nuclci(:o. Iípido o ión mclá.lico. (p. 11 5 1)
Protefna prión Agente infeccioso protc(nico que se cree que promueve el dcsplegamiento y la po-
li mcri7.<lción de las moléculas proteínicas nonnales, dando lugar 11 amiloides y a la destruc-
ción del tejido nctvioso. (p. 1155)
Protefnas completas Proteínas que proporcionan todos los aminoácidos csmciales, prácticamente en la
proporción adecuada para la nutrición humana. Ejemplosde este tipo de putcfnas secncucntran en la car-
ne, el pesclldo. la leche y los hUC\'os. Las proteinas illC'Ompletas son dcfkicntes en uno o más de}os ami-
noácidos esenciales. La mayoría de las proteínas que ronticncn las plantas son incompletas. (p. I 118)
Protcfnas fibrosas Tipo de proteínas que son alargadas. fuertes, en forma de cuerda y general-
mcnte insolubles en agua. (p. 11 51)
I'roteínas globulares 'Iipo de prolcfnas que tienen una fonna relativamente esférica Las prOlcJ-
nas globulares generalmente tiene!l masas moleculares más pequeñas y son más solubles en agua
(IUe las proteínas fibrosas. (p. 1151)
simples Proteínas que s610 están fonnadas ¡x>r aminoácidos (no li enen grupos prostéti -
cos). (p. 11 51)
Punto isoeléctrico (pl-l isoeléctril..'O) pH en el que un ami noácido (o proteína) no se mueve en la
clcct roforesi s. Para este valor de pH, la catBa media de las molécul as C$; cero, 1.."0(1 la mayorfa de las
moléculas en su fonna zwitteriÓlliea. (p. 1121)
Residuo Unidad de aminoácido de un péptido. (p. 113)
Resoludón em'jmátlca Utilización de enrimas para separar enant iÓmcros. Por ejemplo. el enanlió-
mero de un aminoácido se puede adiar y, a continuación, se trata con acilasa de riñón de cerdo. El
enzima hidrol iza el grupo aci lo del L-aminoftcido natural, pero no reacciona con el o-amiooácido. La
fl'IC7.cla resultante del L-aminoáeido libre y del D-aminoácKlo acil ado se separa fácilmente. (p. 1128)
Seeuencia Corno nombre. orden cn el que los amino{tcidos se uncn cuando fonnan un ¡x'!ptido.
Como verbo (secuenciación), detcnnil1acióll de la secuencia de un péplido. (p. 1138)
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1158 CapÍl ulo 24: Aminoácidos. péplidos y proteínas
Síntesis lJiomimética srnlcsi s realizacl<l en el laboratorio (IUC se asemeja a una s íntesis biológica
(biosíntcsis); por ejempl o. la srlllesis de aminoácidos por ami naci6n reducliva se ascmcj¡¡ a la bio-
síntesi s del ácido g1utámico. (p. 1123)
Síntesis de en fase sólida Método en el qLC el aminoácido del cXlrcmo e-terminal se
une a un soporte sólido (cuclllas de policsti rcno) y el pq,tido se sintet u.a ro el sentido C_ N me-
dianLC sucesivos acoplamientos de los aminoácidos protegidos. Cuando el péptido está completo,
se sepam del sopoTlC sólido. (p. 1145)
Síntesis de péplidos en solución (símesis clásica de péptidos) Cualquiera de los diversos métodos
en los que los aminoáci dos prolcgidos son acoplados en solución, en la secuencia COfTocla. dando
lugar al péptido deseado. La mayoría dC CSlos métodos se reali:t..an en el sentido N _ C. (p. 1142)
Síntesis de SIrrt.'ker Síntesis de a-aminoácidos mediante la reacción de un aldehído con amonia-
co e ión cianuro, seguida de hidrólisis del int.eJ'TTlC(}io a-ami no ni (rilo. (p. 11 26)
Silio uetivo Región de UII enzima que cnht7..a con el sustrato y catatiza la reacción. (p. 11 53)
Transuminudón Transferencia de un grupo amino de una molécula a otra. La transaminación es
un métotlo común de bi osíntesis de aminoácidos. Coo frecuencia se ut ili 7..3 ácido g1utámÍL'O como
s ustancia precursora del grupo amino. (p. 11 23)
Unión disulfuro (puente disulfuro) Enlace entre dos residuos de ci stc(na que se fonna mediante
la oxidación SU!lVC de sus grupos liol !l disulfuro. (p. 1 I 34)
Zwitterión (ión dipolar) Est ruclUra con una cHrga lotal dc<;cro pero que tiene un susliluyenlc l:ar-
gado positivamente y un susti tuycntel:argado negativlI.menle. La mayorra de los aminoácidos se
encucnlr<m cn las formas zwittcnónicas. (p. 1119)
I Pautas esenciales para resolver los problemas del Capítulo 24
1. Nombrar correctamente Jos aminoácidos y los péptidos. y represenlar las estructuntS a par-
tir de sus nombres.
2. Utili zar representaciones en perspectiVa y proyecciones de Fi scher para mostrar la estere-
oquCmica de los O- y L-aminoácidos.
3. Expli car qué !lminoácidos son ácidos. cuáles son Msicos y cuáles neut ros. Hacer uso del
punto isoeléctrico para predecir si un aminoácido deternlinado estará l:argado positivamente.
negativamente o será neutro a un determinado pH.
4. Explicar cómo se podrfa utll izar cada una de las siguiente síntesis para obtCllCr un deter-
minado aminoácido:
( 1) Aminación rcductiva.
(2) I-IVZ seguido de amoniaco.
(3) Slntesis malónica de Gabriel.
(4) Síntesis de Stnx:ker.
5. Predecir qué productos se obteoor.,tn 11 partir de las siguientes reacciones de aminoácidos:
eSlerificación. acilaci6n. reacción con ninhidrina.
6. Utili zar IH infomlllción que se deduce dci análi sis de los residuos terminales y la hidróli sis
parcial para dctcrnlinar la estructura de un péptido desconocido.
7. Expl icar cómo ulili l.atÍa la s íntesis de péptidos en solociÓfl o en fase sólida para obtener un
delenninado péptido. Uti lizar los grupos protectores apropiados para prevenir acopiamien-
tos no deseados.
8. DiS<.:utire identificar los cuatro niveles de cstructum de las protcillllS (primario. secundario,
terciario, cuaternario). Explicar cómo afecta la estructura de una proteína a sus propieda-
des y cómo cambia la estructura con la desnatural ización.
Problemas
24.32 Defina cada uno de los siguientes términos y ponga un ejemplo.
24.33
(u) a-aminoácido
(e) puente disulfuro
(1) hidrogcn61isis
(m) grupo plOSt éli<;o
(q) cstructUr.H;uatcmana
(u)
(b) JX"OIdnacoojugada
(O degradación de Edman
Ü) pomo ;oool&.oc'O
(n) estructura primaria
(r) sfntcsis de pEptidos en fase sólida
Represente la cr;lructura completa del siguiente péplido:
VII I-Gln-Mel ' NH
2
(e)
(g)
(k)
(o)
(s)
pr-otcfna desnaturaJizada (d) ión dipolar
resolucioo ellzimática (b) aminoácido esencial
I.-amino ..'icido (1) pépl.ido
CSltut1unt secundaria (p) estructum terciaria
síntesis de Streckcr (1) zwitterión
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24.34
24.35
24.36
26.37
24.38
24.39
24.40
24.41
24.42
24.43
Prediga los prOOUC1OS de las siguientes reacciones:
(e) Lys + exceso de (el-f3eOhO --
CHa
1 NH), HCN
(.)
",O
(g) ácido isovalérioo + Br:JPBr) --
piridina


Problemas 1159
o ¿H,
ti Hz_ Pd
(b) Ph- CH
2
- O-C- NH- H-COOH )
(d) (D.L)-prol.ina
{12 ""IXW de
(2) acila.<l de riMIl de cerdo, IIp
,
(n producto del apartado (e)
HP"

(h) producto del apartado (g) + exceso de NH) ---
ExpLique cómo sinteti7.aría cualquiera de los aminoácidos estándar a partir de cada una de las siguientes sustancias de
partida. Se puede uti li 7J\r cualquier reactivo adicional que sea necesario.
O (b) eH -eH- e H -COOI-I
1I 1 I 2
(¡¡) (CH3)2CH - b -COOl-I CI-I1CH]
(d) (O/-clI,n,
Explique cómo transromlaña alanina en los derivados siguientes. En cada caso, rcprcscnlc la estructura del producto.
(a) alaJtina isopropil éster (b) N-bcnzoi lalanina
(e) N-bcnci loxicarbonil alanina (d) lerc-but iloxicarbonil alanina
Sugiera un método para la sfnlesis de un enanti6mero 1) no natural de la alanina a part.ir del cnantiómero t del ácido
láClioo, fáci lmcnltl disponible.
CH
3
- CI-IOH- COOH
ácido láctico
Explique cómo utili7..arfa la sfnttl sis de Gabriel y 1l1111ónica para la obtención de hi slidina. ¿Qué estereoqufmica se espera
que tenga este producto sintético'!
Expl ique cómo uti li7.aña la síntesis Slrcckcr proa la obtcnción de Iri plófano. ¿Qué eslcrcoquímica se espera que tenga este
producto sintético?
Escriba las estruct uras complcl<lS de los siguientcs pépt idos. Diga si cada uno de los péplidos es ácido, básico o neut ro.
(a) mctionil -troonina (b) treonil-mctiooina (e) argini l-Ieucil-lisina (d) Gl u·Cys-Gln
La siguiente estructura está representada de forma convencional.
CH O O
1 ' 11 11
c u e H eH - e - NI-I
J 2 I I 2 2 .1
NH-CO-CH¡NU
2
(a) Señale el extremo N-terminal yel C-terminal. (b) Señale los et11accs pcptJdit'OS.
(e) ldentiftquc y señale los aminoácidos preSCnlcs. (d) Diga el nombre completo y el nombre abreviado.
La aspartamo es un éster dipcpl ídi<:o de sabor muy dulee. La hidrólisis completa de la aspartama da lugar a
fenil alanina, ácido aspánk'O y metano!. La incubación suave oon carboxipcptidasa no produce cfCf.-'I.o en la aspartama. El
tr.t1amienlo de la aspartama con isotiocianat o de fen jlo. seguido de hidróli sis suave, da lugar a la feniltiohidant oína del
ácido aspártico. Proponga una estructura par .. la aspartama.
La determinaciÓll de la masa IT\Olccular de un péptido desconocido indicó que se tralaba de un pcntapéptjdo. Un análisis
de los aminoá<: idos mOStró que contenía los residuos siguientes: una Gly, dos Ala, una MtlI y una F1\C.
Ellralamicnto del pcnl apéplido original con camoxipcplidasa dio lugar a la obtención de a[anin¡¡ como el primer
aminoácido eliminado. E1lratamiento secuencial del penlapéptido con feni lisOliocianalo. seguido de hidróli sis suave. dio
lugar a Jos siguientes derivados:
primera vez ICrcera vez
Proponga una cstruClunt pard el pcntapéptido desconocido.
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1"'60
24.44
24.45
24."
Capítulo 24: Aminoácidos, péptidos y proteínas
Represente los pasos y los intcnncdios de la síntesis de 11c-Leu-Phc,
(a) mediante el proceso en solución (b) mediante el proceso en fase sólida
Uti lb..antlo las técnicas en solución clásicas, expl ique cómo sillteti7..arfa Ala-Val y. a cont inuación. cómo lo combinarla COfl
11c-Lcu-l'hc para IIc-Lcu-Phc-Ala-Val.
Los pépt idos con frecuenc ia licncn olros grupos funcionales dislinlOS de los grupos amino en el extremo N-terminal y
diferentcs de los grupos carboxilo en el e-terminal.
la) Un tClrapéptido se hidroli7..a calentándolo con 6 M Hel y en el hidrol i7"ado se encuentra que hay Ala, Phe.. Val Y Glu.
Cuando se nculnr.l i7.a cl hidrolizado, se detecta olor a amoniaco. Explique dónde se podría haber incorporado este
amoniaco en el péptido ori ginal.
(b) El tripéptido dei/actOr !i!Jemlizador de la hormona ' irorrópino (A.:l) ticnc como nombre completo
pi rogJutami lhistidiJproti namida. A continuaci ón se represent a su estructura. Di ga los grupos funcionales que hay en
el extremo N-Icrnlinal yen el C-termina].
(e) Etl la hidrólisis ácida, un pcntllpéptido desconocido da Jugar a glicina, alanilla, vatina. \cucina e isolcucina. No se
detecta olor a amoniaco cuando se neutraliza el hidroli z.ado. La reacción (.."on isotiocianato de fenilo, seguida de una
hidrólisis suavc, no da lugar a un derivado de feni ltiohidantofoa. La incubación con carboxiPCPl idasa no produ¡;:c
ningún efecto. Explique estos re&ul wdos.
El ácido lipok"O con frecuencia se encuentra ¡;:crca de los sitios adivos de los en.zimas, enlazado generalmente al pé¡>(ido
mediante una unión amido larga y flexible ron un residuo de lisina.

S- S
ácido Iipoico
o NH
I I

""" """ "eH
'N' ............. ............. I
l
e-o
s-s H !
enlace con el residuo de IL<¡ina
(a) ¿EJ ácido (ipoico es un agente oxidante suave o un agelllc reduclOr SU11ve?
(b) Explique cómo podrfa reaccionar el ácido [ipoi co ron dos residuos Cys pam fornlar un puente disulfuro.
(e) Reprcselllc una ecuación Iljustada para la oxidación o reducción hipotétiCIl, según lo que se predijo en el apartado (a).
de un aldehído por el át: ido (ipoico.
o
I
R-C- H

S-S
24.48 1../1 hi stidina es un residuo cmatftico importante que se encuentra en los sitios act ivos de muchos enzimas. En muchos
casos, 1:1 hi stidina el imina protones o los transfiere de una posición a Olta.
(a) Indique qué átomo de nitr6gcno del hcterociclo de hisl idi na es básico yeuál no.
(b) Ut ilice las fomlas de resonancia para explicar por qué la fonna protonada de la histidina es un catión particulannemc
estable.
(e) Represente la estructura que se fonna cuando la hi stidina acepla un protón en el nit rógeno básico del heterocicl o y, a
cominuación. se desprotona en cl otro nitr6gcno heterodclico. Explique cómo podría funcionar la hi,.tidina como un
conducto pard transferir proIooes entre los ,. it ios entre un enzima y su SUSlrd!O.
24.49 El metabolismo de arginina produce urea y el aminoácido cxtmoo, la ol"rlililUl . La omitina tiene un punt o isock!ctrico
próximo a 10. Proponga una estructurd ¡><1m la omitina.
24.50 El gl utati6n (GSH) es un tripéptido que se uti li7.a como agcme reductor suave para dcstoxi fiear los peróxidos y mantener
los residuos de cistcína de la hcmoglobina y de otras proteínas de las células de sangre roja en el estado reducido. La
hidrólisis completa del glut ati6n da lugar a Gly. Glu y Cys. El tratamicnt o del glut atión con carboxipcptidasa da lugar a
gl.icina COIllO el primer amino{lCido libcrndo. El tratamiento del glutali6n con isotiocianato de fenilo da lugar a la
fcni lLi ohidantofna del ácido glutámi co.
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24.51
Problemas 1161
(a) Proponga una estructura para el g1U1a1ión coherente con esta inJonnación.
(b) La oxi dación del g1utatión da lugar al disulfuro de glutatión (GSSG). Proponga una estructura para el disulfuro del
g1utat ión y escriba una ecuación ajustada para la reacción del glutatión con peróxido de hidrógeno.
La hidrólisis completa de un decapéptido básico desconocido da lugar a Oly, Ala, Leu, He, Phe, Tyr, Olu, Arg, Lys y Ser.
El análisis de los residuos lenninales indica que el del N-leoninal es Ala y el del C-terminal, Be. La incubación del
decapéptido con quimotripsina da lugar a dos dipéptidos, A y B, Y a un tetrapéplido, C. El análisis de los aminoácidos in-
dica que e l péplido A contiene Gly, Olu, Tyr y NH
3
; el pépl ido B contiene Ala, Phe y Lys, y el péptido e cont iene Leu,
lJe, Ser y Arg. El anál isis de los residuos tenninales da los siguientes resultados:
A
B
e
N terminal e tenninal
La incubación del decapéptido con tripsina da lugar a un dipéptido D, un pcntapépl ido E y un tripéptido 1-. EJ análisis de
los residuos tenninales de F indica que el N-lenninal es de Ser y el C-lenninal de He. Proponga una estructura para el
decapéptido y para todos los fragmentos, desde A hasta F.
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