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Índice
1. Introducción.................................................................................................................. 2. Urocultivo...................................................................................................................... 3. Coprocultivo.................................................................................................................. 4. Exudado faringeo........................................................................................................... 5. Exudado vaginal y uretral.............................................................................................. 6. Cultivo de secreción de heridas, exudados y trasudados................................................ 7. Hemocultivos................................................................................................................. 8. Cultivo de liquido cefalorraquídeo y otros líquidos corporales...................................... 9. Vibrio cholerae.............................................................................................................. 10. Bacterias gram negativas no fermentadoras................................................................... 11. Anaerobios.................................................................................................................... 12. Prueba de sensibilidad a los antimicrobianos................................................................. 13. Interpretación de pruebas bioquímicas........................................................................... 14. Indicaciones para el proceso de las muestras................................................................. 15. Técnica de tinción de gram............................................................................................ 16. Técnica. De tinción de Ziehl Neelsen............................................................................ 17. Preparación de soluciones y colorantes.......................................................................... 18. Bibliografía....................................................................................................................

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INTRODUCCION Dada la importancia que tiene la Bacteriología Médica en el diagnostico de las enfermedades es necesario que el personal de laboratorio esté capacitado para desempeñar las técnicas adecuadas que nos van a llevar a aislar e identificar los microorganismos que se encuentran como agentes causales de una infección. Es por esto que para poder cumplir con las actividades eficazmente, el bacteriólogo y demás personal que colaboran en la realización de dichas funciones, necesitan conocer muy a fondo todas las técnicas del laboratorio de Bacteriología Medica, para ello deben contar con un manual de consulta que señale la información fundamental respecto a cada uno de los cultivos, así como las pruebas diferenciales y confirmatorias de cada microorganismo aislado de los especimenes estudiados y de esta manera proporcionar una información útil para el diagnostico. Este manual comprende la metodología a seguir en el desarrollo de los cultivos de mayor importancia medica, como son: Urocultivo, Coprocultivo, Hemocultivo, Cultivo de Exudado Faríngeo, Cultivo de Exudado Vaginal, Uretral, Cultivo de Liquido Cefalorraquídeo y Cultivo de Secreción de Heridas, Exudados, Trasudados y otros Líquidos Corporales. Los datos generales de cada uno de los cultivos aquí citados aportan información suficiente del método, así como de la Flora normal y patología de cada espécimen estudiado, lo cual nos sirve de apoyo para determinar y diferenciar los agentes causales de una infección dad, así como la sensibilidad a los diferentes antimicrobianos. Comprende también control de calidad de bacteriología medica (como son medios de cultivos REACTIVOS Y EQUIPOS). Al final de este, se incluyen la preparación de colorantes, técnicas de tinción de Gram y preparación de soluciones.

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coagulosa-negativas.UROCULTIVO Cultivo de orina Generalidades Las infecciones bacterianas del tracto urinario afectan a las personas de todas las edades y ambos sexos. La flora bacteriana de orina normal difiere de las muestras infectadas. suelen ser estériles. Para diferenciar entre bacterias verdaderas y contaminación se necesita conocer el número de microorganismos en 1 ml de orina. Bacilos coniformes. pero en la uretra suelen existir números pequeños de bacterias. la presencia de mas de dos especies bacterianas diferentes en una muestra de orina. método que permite diferenciar con toda precisión entre infección y contaminación. Sin embargo. Por supuesto. A pesar de lo expuesto. obtenidas en forma natural o por cateterismo suele contaminarse. Aislamiento de una bacteria patógena conocida no confirma obligadamente la existencia de infección de vías urinarias. Enterococos. con mayor frecuencia en la vejiga. ellas representan contaminaciones de uretra. la orina constituye un excedente medio de cultivo para los gérmenes patológicos comunes de las vías urinarias y cuando las bacterias pasan a la orina se multiplican extraordinariamente superando a veces un millón por millones como las muestras de orina. por que suele haberlas. Los microorganismos mencionados en primer termino son las que se encuentran con mayor frecuencia en la orina normal. Los resultados importantes de los cultivos de orina son posibles solo después de estudio cuantitativo. En consecuencia.      Estafilococos. Los estudios de laboratorio y el cultivo de orina son partes necesarias de la evaluación del enfermo en busca de infecciones de vías urinarias. etc. Lactobacilos. la orina puede contener diversos microorganismos. como el caso de pielonefritis crónica. 5 . ya que la orina de la vejiga es normalmente estéril. la presencia de microorganismos aun las patología conocidas. sugiere fuertemente contaminación durante la obtención. Bacilos difteroides. el único medio seguro para el diagnostico especifico es la demostración de las bacterias y los métodos de cultivo adecuados. En el momento de su recolección. porque las muestras suelen estar contaminadas por microorganismos de uretra y genitales externos. Por tal razón. la bacteria suele ser resultado de la prevalencia de un tipo particular de bacterias. vagina. no establece necesariamente el diagnostico de infección de las vías. estimada por una técnica de cultivo llamada recuento de colonias. La orina de riñones y vejiga. la negatividad de un solo cultivo no siempre excluye la presencia de infección.

Placas con agar. 6 . Cándida albicans y otras levaduras. Gardnerella. algodón. Especies de Alcaligenes. Placas con agar Biggy. Pseudomonas aeruginosa y otras especies de Pseudomonas.001 ml. gelosa sangre y Sabouraud y estriar masivamente.. Contar el número de colonias que desarrollan en las placas y multiplicar por 1000. Incubar las placas a 37ºC por 24-72 hrs. Escherichia coli. Especies de providencia y morganella. Neisseria gonorrea. 4.              Materia:        Frasco estéril Benzal Diluido 1:1000. Especies de Salmonella y Shigellas. Desarrollo: 1. Estreptococos beta hemolítico por lo general de los grupos B y D.  Levaduras saprofitas.000 por ml se procede a identificar el microorganismo por los métodos usuales y realizar antibiogramas. saprophyticus). por lo común una o varias de las siguientes bacterias. Proteus mirabilis y otras especies de Proteus y serratea. Estreptococos alfa hemolíticos y beta hemolíticos. Mac Conkey.  Especies de bacillus. excepto la placa de Biggy que se incuba a temperatura ambiente. Placas con agar GS. 3. Enterobacter. vaginalis. Asa calibrada para inocular 0. Mycobacterium Tuberculosis y otras micobacterias. Staphylococcus. La flora de la orina infectada incluye. 2. coagulosa-positiva y coagulosa-negativa (S. Si en numero de bacterias es mayor de 100. Enterococos (Streptococos fecalis). Klebsiella. Agitar el frasco y tomar una asada de orina con el asa calibrada y descargar en línea recta en el centro de la placa de MacConkey.

5. Finalmente informar en numero de bacterias por ml así como que microorganismos se identifico. 7 . y su comportamiento frente a los diferentes antimicrobianos.

24-48 hrs.UROCULTIVO MUESTRA METODO DE ASA CALIBRADA 1:100 Sembrar una asada en cada uno de los medios. CANDIDAS Tubo Germinativo 8 . estriar como se indica en el diagrama. T. AMB. GELOSA SANGRE 37AC 24-48 hrs. STAPHYLOCOCCUS STREPTOCOCCUS Tipificación de látex o coagulasa susceptibilidad AGAR MACCONKEY 37 AC 24-48 hrs. ENTEROBACTERIAS PSEUDOMONAS Pruebas Bioquímicas Susceptibilidad SABOURAUD.

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Yersinia enterocolitica. bacillus cereus. 10 . Tubos de 13 x 100 con citrato de Simona. Tubo con caldo tetrationato o caldo selenito. Frasco gotero con solución salina estéril. de 1 a 4 % restante esta integrada por aerobios que incluyen bacilos Gram-negativos (Predomina E. Frasco con fenol al 5% o benzal. Aeromonas hidrophyla y Vibrio parahemoliticus entero toxígenos. El 96 a 99 % de la flora intestinal normal comprende anaerobios que incluyen bacteroides lactobacillos anaeróbicos. subespecie jejuni. Tubos de 13 x 100 con medio TSI Tubos de 13 x 100 con medio LIA. estreptococos anaeróbicos. Cajas petri con agar SS. cocos Gram (+) Enterococos y números pequeños de Lactobacilos y Cándidas. Mechero. Tubos de 13 x 100 con medio MIO.COPROCULTIVO El estudio bacteriológico de las heces es útil para identificar patógenas que ocasionan trastornos gastrointestinales como fiebre tifoidea y disentería y estados de portador. para Salmonellas. Clostridium. coli) y números pequeños de Pseudomonas y Proteus. Salmonella y Camphylobacter. Asa de platino. Clostridium perfringens y Staphylococcus aureus que suelen ocasionar síntomas gastrointestinales después de la proliferación excesiva de microbios oportunistas que son resultado de la destrucción de la flora normal por antibióticos Escherichia coli. Antisueros polivalentes. Hisopos estériles. Tubos de 13 x 100 con agar UREA. entre los microorganismos patógenas menos comunes están Vibrio cholerae. Tubos de 13 x 100 con caldo malonato. Gradilla. Las mas comunes en vías gastrointestinales son Shigella. La flora bacteriana normal en las heces incluye patógenas. Material:                  Cajas petri con medio MacConkey. Solución de yodo para el caldo tetrationato o selenito. Shigellas y Vibrio cholerae. El objetivo principal de realizar un coprocultivo es que este sirva como apoyo al diagnostico clínico. fectus.

2. Todo se incuba a 36ºC ± 2ºC durante 24 Hrs. El hecho de no transportar rápidamente la muestra permite la proliferación de microorganismos no patógenos.Factores que interviene en los resultados 1. Sembrado de la muestra 1. 4. 5. 3. esterilizando en cada estría el asa de nicromo. En cada medio se deposita con un hisopo una pequeña porción y se produce a realizar estrías cruzadas. La técnica inadecuada de reunión o la presencia de orina. contaminan la muestra de heces. hay microorganismos sensibles al frió. 2 gramos de muestra. 2. lo cual influye en los resultados del estudio. 11 . Inmediatamente que la muestra llega al laboratorio se procede al sembrado. Se produce la lectura siguiendo la marcha descrita. La administración de antibióticos hace que disminuya el numero de bacterias en la muestra e inhibe el desarrollo in Vitro de las bacterias. La refrigeración. En el caldo de tretationato se le agregan 4 gotas de yodo y después se agrega. 4. 3.

COLI SHIGELLA.COPROCULTIVO MUESTRA SIEMBRA DIRECTA Caldo de Tetrationato + 4 gotas de yodo + 2 grs. Inc 8-24 hrs. de la muestra. y resembrar SS SS INVESTIGAR COLONIA SOSPECHOSA DE: SALMONELLA E. REALIZAR BIOTIPO TIPIFICACION CON ANTIGENOS PARA DETERMINAR ESPECIES 12 . COLI SALMONELLA SHIGELLA. REALIZAR: BIOTIPO TIPIFICACION CON ANTIGENOS PARA DETERMINAR ESPECIES SB 37ºC MAC CONKEY INVESTIGAR COLONIA SOSPECHOSA DE: E.

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observando el crecimiento bacteriano. Colocar en la estufa a 35ºC ± 2ºC. Staphylococcus coagulasa-negativa (se puede confundir con estreptococos beta hemolíticos) bacilos difteroides. 14 . Equipo para tinción de Gram. Material: Cajas de petri con Gelosa Sangre (Carnero). Amb. Streptococcus pneumoniae y cándida albicans. Chocolate y aislar con estría cruzada.CULTIVO DE EXUDADO FARINGEO El estudio de Exudado Faringeo y Nasofaringeo es importante para el diagnostico de ciertas infecciones. Entre los patógenos se encuentran: Estreptococos beta hemolíticos del grupo A (Pyogenes) y ocasionalmente del grupo C y G Corynebacterium pertusis Haemophylus influenzae capsulado Mycabacterium. de incubación          Identificar Streptococcus Beta Hemoliticus y Streptococcu pnemoniae. La flora normal en vías respiratorias altas y bajas con frecuencia esta construida por: Streptococcus viridans Branhamella catarrhalis. Técnica de sembrado a) b) c) d) Inocular en Gelosa Sangre de Carnero. a las 24 y 48 hrs. levaduras y bacteroides. Cajas de petri con agar Biggy. así como para establecer el foco de infección de enfermedades como: Fiebre Reumática y Glomérulonefritis Hemorrágica aguda y en la demostración de portadores de estreptococos beta hemolíticos (Pyogenes) Haemophylus influenza en niños menores de 5 años. Hisopos estériles. Abatelenguas Medio de transporte Stuart. Pastorex Streptococcus. Caja de petri con Gelosa Chocolate. la Difteria. rara vez micoplasma pneumoniae Pseudomona aeruginasa. Encubar a Temp. Disco para diferenciación de Streptococcus Pneumoniae. entre ellas están Streptococcus. A si también sembrar en Agar Sabouraud. Leer las cajas de cultivo. la Tosferina.

para Hasemophylus influenza de acuerdo al diagnostico del medico.. Nota: En pacientes menores de 5 años sembrar en agar Chocolate. 15 . o si se prefiere se identifican en método automatizado.Utilizando prueba de látex para Streptococcus Beta Hemolítico o sensidiscos de optoquina para Streptococcus Pneumoniae.

Exudado faringeo MUESTRA SEMBAR EN: GELOSA SANGRE DE CARNERO 5% CHOCOLATE AGAR SABOURAUD GELOSA 37 ºC 24-48 H. EN CO2 AL 5% HAEMPPHYLUS INFLUENZA METODO AUTOMATIZADO MICRO-SCAN 16 . AMB. 24-48 H. CANDIDAS TUBO GERMINATIVO 37 ºC 48 H. STREPTOCCUS BETA HEMOLITICUS STRPTOCOCCUS PNEUMONIAE IDENTIFICACION EN LATEX Ó METODO AUTIMATIZADO MICRO-SCAN TEMP.

NOTA: SOLO PARA NIÑOS MENORES DE 5 AÑOS 17 .

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Hisopos estériles. Enterococos y estafilocos coagulasanegativa. Asa bacteriológica. Los microorganismos mas frecuentes aislados del aparato genital son los siguientes: Bacilos coniformes. no obstante en la mayoría de los casos dicha flora está constituida predominantemente por bacilos de Doderlain y en menor proporción bacilos entéricos gram (-). CERVICITIS gonocócica y un grupo heterogéneo como son: gardnerella vaginalis y algunos causados por germen es anaerobios. Neisseria gonorrhoea. Candidosis. Virus del Herpes Simple. Especulo vaginal. tales como: Tricomoniasis. Saprófitas. glándulas vulvovaginales y cuello uterino de la mujer. Treponema pallidum. Equipo y material:      Guantes estériles. Chlamydia trachomatis. levaduras y protozoarios se hallan colonizando el epitelio del aparato genital masculino y femenino. Tricomonas Vaginalis. así como son: Chlamydia tracomatis.             Lactobacillos. bacteroides SP. En un exudado cervico vaginal la flora vaginal normal varía considerablemente con la edad.EXUDADO VAGINAL Y URETRAL Algunas bacterias patógenas. Enterococos y otros comensales intestinales incluyendo especies de anaerobios. Micoplasma H. bacteroides y otros. Tayer-Martin. frecuentemente de origen hormonal. Haemophilus ducreyi. otras especies de cándida y levaduras. 19 . Cuando aparece un desequilibrio. Las infecciones frecuentemente se indican en la uretra anterior del varón y en la uretra. Mycobacterias no patógenas. se observa la desaparición del bacilo de Doderlain lo que ocasiona que aparezca una flora alterada proveniente el exterior que puede causar vaginitis. el PH de las secreciones y la cantidad de glucógeno presente en el epitelio. Estreptococos Beta Hemolíticas del grupo B y D. Gardnerella vaginalis Cándida Albicans.

2 a 2 ml) 2 Laminilla. Agar Sabouraud en placa. 20 . Leucocitos polimorfonucleares presentes en gran cantidad. Placas con medio de Casman. Neisseria. Vaginitis inespecíficas: Proceso inflamatorio causado por una proliferación anormal de la flora saprofita vaginal (la flora bacilar esta disminuida). Solución salina en tubo (aprox. Trichomona Vaginal. POR CULTIVO: BUSQUEDA DE ANTIGENOS: Las infecciones vaginales se clasifican en 3 tipos: Vaginitis específicas: Proceso inflamatorio caudado por un germen especifico: Cándida.         Placas con medios de Gelosa Sangre (Carnero). Medio de transporte Stuart. Tiras de PH. Hay más leucocitos polimorfonucleares presentes en gran cantidad. Microplasma Hominis y Ureaplasma U. Chamydia T. Enfermedades de transmisión sexual. Principal método de detección POR MICROSCOPIA: Tricomoniasis Sarna Pediculosis Gonorrea Vaginosis Bacteriana Candidosis Cervicitis o Uretritis Chamydiasis Micoplasma Hominis Ureaplasma Urealiticus. 1. Tubo de transporte para Chamydia T. Solución KOH al 10%.

No causa respuesta inflamatoria (por lo cual no hay leucocitos presentes ó si los hay estos son escasos). En este padecimiento frecuentemente encontramos una asociación entre un microorganismo aerobio con un microorganismo anaerobio.Vaginosis bacteriana: Alteración de la ecología vaginal con desplazamiento de la flora lactobacilar normal por microorganismos saprofitos. 21 . el ejemplo típico es la Gardnerella Vaginalis asociada al Mobiluncus.

5 Puede estar presente o ausente Ausente Presente Si/No Tipo de Descarga Flocular Vaginal pH Olor aminado Células Indicadoras Tricomonádidos Lactobacilos > otras bacterias <4.5 Ausente Ausente Ausente Si 22 .5 Presente Presente Ausente No Candidosis Flocular <4.TABLA Descarga Vaginal: Resumen de Diagnostico Características Normal Vaginosis Bacteriana Homogénea >4.5 Ausente Ausente Ausente Si Tricomoniasis Homogénea/Espumosa >4.

24-72 hrs. amb. Tubo Germinativo en suero para Candida albicans 23 .EXUDADO VAGINAL Metodología Lecturas de placas si hay desarrollo se seleccionan colonias por su morfología. EN BASE A LO ANTERIOR FLORA GRAM NEGATIVA FLORA GRAM POSITIVA (COCOS) Solo en secreción Uretral COCOS COCOBACILOS GRAM (-– ) (+) AISLAMIENTO (CASMAN) LACTOBACILLUS GARDNERELLA VAGINALIS STREPTOCOCOS STAPHYLOCOCOS AURES AISLAMIENTO (SM) PRUEBAS: COAGULASA ANTIBIOGRAMA AISLAMIENTO DIPLOCOCOS GONOCOCO AISLAMIENTO GELOSA SANGRE PRUEBA: (LATEX) DIFERENCIACIO N DE GRUPO SABOURAUD Colonias desarrollas a temp.

Gonorrhoae Gardnerella Vaginalis Gelosa Sangre 24-48 37 AC Saboraoud Temp. 24-48hrs KOH al 10% Prueba de Aminas Streptococcus P. 24 .EXUDADO MUESTRA es VAGINAL TINCION DE GRAM Morfología Bacteriana Polimorfonuclear Células Claves MEDIO DE TRANSPORTE Solución Salina Observación en fresco Trichomonas Vaginalis Levaduras Mobiluncus Thayer Martín 37 AC 24-48 hrs. Amb. Látex Para diferenciación Cándida Albicans Cándida SP Tubo germ. N.

Gonorrhoae 37 AC Gelosa Sangre 24-48 37 AC Saboraoud KOH al 10% Prueba Temp. CO2 al 5% N. Amb. Látex Cándida Albicans 25 .VULVO MUESTRA VAGINALES TINCION DE GRAM Morfología Bacteriana Polimorfonuclear es Células Claves MEDIO DE TRANSPORTE Solución Salina de en fresco Aminas Trichomonas Vaginalis Thayer Martín Sal y Manitol Casman Observación 37 AC 24-48 24-48 hrs. 24-48hrs Sthaphylococcus Coagulasa Streptococcus P.

24-48hrs KOH al 26 . Amb. Gardnerella Vaginalis Para diferenciación Cándida SP Tubo Uretrales MUESTRA es Células Claves MEDIO DE TRANSPORTE TINCION DE GRAM Morfología Bacteriana Polimorfonuclear Solución Salina 10% Observación Prueba de en fresco Aminas Thayer Martín Sal y Manitol Casman 37 AC 24-48 hrs.Levaduras Mobiluncus germ. 24-48 37 AC Gelosa Sangre 24-48 37 AC Saboraoud Temp.

Látex Para diferenciación Cándida SP Tubo PRUEBA DE AMINAS GOTERO OLOR AMINAS PORTA OBJETO PACIENTE SECRECION DEL 27 .CO2 al 5 % Trichomonas Vaginalis Levaduras Mobiluncus germ. Gonorrhoae Gardnerella Vaginalis Sthaphylococcus Coagulasa Streptococcus Cándida Albicans P. N.

CUANDO SE AGREGA UNA SOLUCION E KOH AL 10 % EN LAS SECRECIONES VAGINALES DE UNA PACIENTE CON VAGIINOSIS BACTERIANA. SE LIBERAN AMINAS CON UN OLOR FETIDO O A PESCADO 28 .

0 pH 6.0 5.5 7. Prueba del pH de las secreciones vaginales de una paciente con vaginosis bacteriana. Proceder a la identificación siguiente la marcha descrita para este estudio Pruebas del pH de las secreciones vaginales normales. 2. Leer el tubo de la solución salina y el tubo de KOH al 10%. Tomar del medio de transporte la muestra y proceder al sembrado con estrías cruzadas.5 5. Los medios de Casman y Tayler Martín se incuba en CO2 al 5% a 36ºC.0 7. 3. 4.5 Escala de pH 29 . 4.5 6.Técnica de sembrado: 1. En los medios descritos en la marcha. Teñir el frotis con tinción de Gram.

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Exudados. tejidos gangrenados). Material y equipo:  Hisopos estériles y un tubo con medio Stuar.  Placas con medio Sal y Manitol. Coli y otras enterobacterias. Los cultivos de dicho material pueden hacerse para identificación de microorganismos aerobios (que por lo regular necesitan oxigeno para proliferar y aparecen en heridas superficiales) o anaerobios (microorganismos que necesitan porco o nulo oxigeno y aparecen en zonas con poco riesgo como incisiones postoperatorias. Pseudomonas y otros bacilos y cocobacilos no fermentados así como anaerobios. 31 .CULTIVO DE SECRECION DE HERIDAS Exudados.  Aplicadores estériles de algodón o una jeringa de 10 ml y un tubo con medio especial que contenga CO2 o nitrógeno (para anaerobios). ulceras. El cultivo de secreción de una herida.  Placas con medio Cetrimida.  Guantes estériles. Las indicaciones para cultivo de material de la herida incluyen fiebre e inflamación y secreción en el tejido lesionado.  Torundas con algodón. comprenden el análisis de microorganismos del liquido obtenido de una lesión.  Pruebas Bioquímicas o panel automatizado.  Placas con medio Gelosa sangre (Carnero). Los aerobios que con mayor frecuencia contaminan una herida incluyen Staphylococcus aureus. Strepto Beta Hemolítico del grupo A. trasudados y punta de catéter. para confirmar la presencia de infecciones.  Placas con medio Sabouraud. trasudados y punta de catéter. E.  Placas con medio Mac Conkey.

EXUDADOS MUESTRA Y SECRECIONES TINCION DE GRAM MEDIO DE TRANSPORTE STUAR SABOURAUD SANGRE CETRIMIDA MACCONKEY SAL Y MANITOL GELOSA CANDIDA PSEUDOMONAS STREPTOCOCCUS T. GERMINATIVO BIOQUIMICA Ó METODO LATEX AUTOMATIZADO MICRO-SCAN ENTEROBACTERIAS BIOQUIMICAS Ó METODO AUTOMATIZADO MICRO-SCAN STAPHYLOCOCCUS COAGULASA ANTIBIOGRAMA PRUEBA DE 32 .

CUANDO SOLICITEN CULTIVO PARA HONGOS SEMBRAR EN AGAR DEXTROSA DE SABOURAUD O/Y MICOCEL Y PONER LA MUESTRA EN KOH AL 10 % Y LEER.AMB 37ºC 24-48 H 24-48H MACCONKEY GELOSA CHOCOLATE GELOSA SANGRE 37ºC 24-48 H 37ºC 24-48 H 37ºC 24-48 H 33 . EXUDADO MUESTRA OTICO TINCION DE GRAM MEDIO DE TRANSPORTE STUAR AGAR SABOURAUD SAL Y MANITOL T.

GERMINATIVO PSEUDOMONAS NEISSERIA LATEX Ó P.C. BIOQUIMICAS METODO ANTIBIOGRAMA METODOS AUTOMATIZADO MICRO-SCAN SCAN AUTOMATIZADO MICRO-SCAN STRPTOCOCCUS COAGULASA IDENTIFICACAR EN MICRO- EXUDADO MUESTRA CONJUNTIVAL TINCION DE GRAM MEDIO DE TRANSPORTE STUAR AGAR SABOURAUD SAL Y MANITOL MACCONKEY GELOSA CHOCOLATE GELOSA SANGRE 34 . ALBICANS ENTEROBACTERIAS HAEMOPHILUS STAPHYLOCOCCUS T.

T.AMB 37 AC 24-48 H 24-48H C. BIOQUIMICAS METODOS AUTOMATIZADO MICRO-SCAN 37 AC 24-48 H HAEMOPHILUS NEISSERIA METODO AUTOMATIZADO 37 AC 24-48 H STRPTOCOCCUS LATEX Ó IDENTIFICACAR MICRO-SCAN COAGULASA ANTIBIOGRAMA EN MICRO-SCAN 35 . ALBICANS STAPHYLOCOCCUS T. GERMINATIVO 37 AC 24-48 H ENTEROBACTERIAS PSEUDOMONAS P.

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fiebres y postración ocasionado por la presencia de bacterias en proceso activo de multiplicación y liberando toxinas agresivas y factores asociados a su patogenicidad en el torrente. se deberán extraer 2 ml. el cual se recomienda vaya a condicionado de sustancias neutralizantes de los antimicrobianos inhibidores de la acción completa del suero y de la fagocitosis. Así en el caso de la fiebre. SEPTICEMIA. generalmente refleja una infección activa y diseminadas en los tejidos. de caldo. solo es generalmente afectivas durante la primera semana de la enfermedad por otro lado en la brucelosis los cultivos positivos se obtienen generalmente durante la exacerbación de los síntomas y la elevación de la temperatura. se denomina así a la sola presencia (o invasión) de bacterias en sangre. La sangre para el Hemocultivo. al efectuar la muestra es de 1:10. se toma en condiciones optimas colocándose un frasco de un medio de cultivo enriquecido. la presencia de bacterias en sangre acompañadas de escalofríos. Alcohol isopropanol al 80 % (ó alcohol etílico). sanguíneo. Por lo tanto el hemocultivo constituye un recurso muy importante para el diagnostico de infecciones sistemáticas que presentan en su evaluación una etapa de bacteremia o septicemia. La dilución recomendada. de sangre. con intervalos de 1 hora previa a la aparición de la fiebre y considerar que la muestra contiene bajo numero de bacterias y que en algunas ocasiones estas se eliminan a la sangre en forma intermitente. Ligaduras. tifoidea.HEMOCULTIVO La demostración de la presencia de un microorganismo a partir de la muestra de sangres. Placas de Agar Sangre. Equipo para tinción de Gram. BACTERIEMIA. Algodón. es una septicemia que origina la infección purulenta. La presencia de bacterias en sangre puede originarse por: Bacteriemia. Es por eso que si el frasco de cultivo contiene 20 ml. En algunas enfermedades la positividad del cultivo sanguíneo depende del estudio de la enfermedad. Jeringas estériles y agujas estériles. 37 . Frasco con tinturado yodo al 3 %. PIEMIA. es producida por microorganismos piogenes y da lugar a la formación de abscesos en distintas partes del cuerpo. la recuperación de los agentes involucrados. Material:         1 frasco de Hemocultivo. ya que la recuperación durante la fase crónica no es fácil en condiciones optimas de laboratorio se deben tomar por lo menos tres muestras en 24 horas. Septicemia o piemia.

2. Control de calidad adecuado. NOTA: EL proceso para ingresar la botella al Bacter 9050. Ventajas del sistema automatizado de hemocultivos y cultivos de liquidos corporales 1. 7. 5. 9. dedicado usualmente en el hemocultivo. 4. Aumento en el porcentaje de recuperación de microorganismos en los cultivos positivos. 38 .    Placas de Gelosa Chocolate o Thayler Martín. Contienen factores que neutralizan el antibiótico y permiten la recuperación del microorganismo. Reducción en el tiempo. Reducción de tiempo de trabajo. Placa de Agar MacConkey. 3. Reducción del manipuleo de las muestras ya que eliminamos el proceso de resiembras. Placa de Sabouraud. Placa se Sal y Manitol. se describe en el Manual del Bactec. 6. Entrega rápida y oportuna de resultados al medico. Disminución de cultivos falso negativo. En los medios de cultivos podemos trabajar muestras de sangre y otros fluidos corporales estériles con los mismo beneficios 8.

HEMOCULTIVO Después de que el equipo automatizado nos indica la botella POSITIVA. COAGULASA ANTIBIOGRAMA HAEMOPHILUS NEISSERIA SISTEMA AUTOMATIZADO MICRO-SCAN ENTEROBACTERIAS PSEUDOMONAS/BNF BIOQUIMICAS Ó SISTEMA AUTOMATIZADO MICRO-SCAN C. 37 ºC 24-48 H STRPTOCOCCUS P. AMB 37 ºC 24-48 HRS. 24-48 H STAPHYLOCOCCUS GERMINAT. ALBICANS 39 . Realizar la marcha siguiente: TINCION DE GRAM GELOSA SANGRE SABOURAUD. T. LATEX DIFENGNCIACION DE GRUPO GELOSA CHOCOLATE 37 ºC 24-48 H CO2 al 5% MACCONKEY 37 ºC 24-48 H SAL Y MANITOL T.

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en pacientes inmunosuprimidos podemos encontrar Criptococcus neoformans. bacilos coniformes. 41 . estafilococos o micobacterias. en la meningitis neonatal el microorganismo aislado con mas frecuencia es Escherichia Coli junto con Estreptococos betahemolíticos del grupo B y G listeria monocytogenas (que también pueden afectar a los adultos). predominio de células polimorfonucleares y reducción de la concentración de glucosa en liquido medular. La meningitis bacteriana aguda es una infección de las meninges-membranas que recubren el sistema nervioso central. En la meningitis bacteriana generalmente el liquido cefalorraquídeo es purulento. La Meningitis bacteriana puede se también secundaria a infecciones de otras partes del organismo y raras veces pueden recuperarse especies de Salmonella. con repercusiones en el encéfalo y en la medula espinal con alteraciones más o menos características del líquido cefalorraquídeo ocasionada por diversos microorganismos Gram (-) sobre todo Hemophilus Influenzae. Neisseria meningitidis y Streptococcus pneumoniae. con un recuento de leucocitos aumentado por lo común mas de 1000/mm3.CULTIVO DE LÍQUIDO CEFALORRAQUIDEO El examen bacteriológico del liquido cefalorraquídeo es un paso fundamental en el diagnostico de todo caso de meningitis sospechosa.

Realizar la marcha siguiente: TINCION DE GRAM GELOSA SANGRE SABOURAUD. LATEX DIFENGNCIACION DE GRUPO GELOSA CHOCOLATE 37 ºC 24-48 H CO2 al 5 % MACCONKEY 37 ºC 24-48 H SAL Y MANITOL T. 37 ºC 24-48 H STRPTOCOCCUS P. T.LIQUIDOCEFALORRAQUIDEO Después de que el equipo automatizado nos indica la botella POSITIVA. ALBICANS 42 . COAGULASA ANTIBIOGRAMA HAEMOPHILUS NEISSERIA SISTEMA AUTOMATIZADO MICRO-SCAN ENTEROBACTERIAS PSEUDOMONAS/BNF BIOQUIMICAS Ó SISTEMA AUTOMATIZADO MICRO-SCAN C. AMB 37 ºC 24-48 HRS. 24-48 H STAPHYLOCOCCUS GERMINAT.

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lo que inhibe la absorción de Nac1 e incrementa la secreción de cloro y bicarbonato.COLERA El cólera es una infección persistente en nuestra época. debido a la transportación rápida. El cólera en su forma mas grave. no se habían reportado casos de cólera desde el siglo pasado. Cary-Blair donde Vibrio sobrevive hasta 3 semanas El tratamiento se basa en la restitución de líquidos. provoca un colapso cardiovascular y la muerte dentro de las 24 horas de su aparición. las epidemias importantes se han limitado a zonas con escaso saneamiento ambiental. la cual es una exotoxina conocida como toxina colérica. Cuando la muestra no se procesa de inmediato. produciendo diarrea secretora que puede ser tan severa para producir un litro por hora de gasto fecal. que esta compuesta de una subunidad A (con dos subunidades. en este caso. que en los casos menores graves puede hacerse por vía oral. el diagnostico se hace al aislar Vibrio cholerae de las heces o vomito de los pacientes. vomito. eritromicina y furozolidona como alternativas. la subunidad A1 penetra la membrana celular y activa el AMP cíclico. en la fase aguda puede hacerse mediante hisopado rectal. Las manifestaciones clínicas de la enfermedad se deben a la producción de una enteroxina. 44 . enfatiza la importancia de mantener una vigilancia Epidemiológica. y los estudios epidemiológicos indican que. sin embargo en 1983 se publico el caso de una turista Estadounidense que presento la enfermedad cuatro días después de retornar a su país procedente de un viaje por las costas del estado de Quintana Roo (Cancún). es una enfermedad que consiste en una diarrea aguda. se presenten de 25 a 100 diferentes infecciones que varían de leves a sintomáticas. Aunque el cuadro clínico es muy significativo. por contacto directo. debe usarse un medio de transporte. durante la convalecencia es mejor la toma de la materia fecal. y más actualmente con el problema que se tiene en Perú. También se pueden determinar anticuerpos antitoxinas y vibriocidas. al turismo y a los viajes internacionales. para cada caso grave. las manos sucias y las moscas. En realidad. esta ultima une a la toxina con el receptor gangliosido GM1. El hecho de encontrarlo en naciones desarrolladas como Estados Unidos es de llamar la atención. Esta enfermedad se adquiere por la ingestión de agua o alimentos contaminados con vómitos o heces de pacientes y en menor grado la transmisión ocurre de persona a persona. a menos que no se trate. lo que. deshidratación rápida y acidosis. A1 y A2) y cinco subunidades B. La recolección de muestras de heces para el laboratorio. tales casos son la excepción más que la regla. caracterizada por una perdida masiva de líquidos y electrolitos. y sigue siendo un problema de importancia en áreas como Asia. Lo anterior. aunque se ha elevado la probabilidad de apariciones de casos de cólera importados en países con buenos servicios sanitarios. en México. África y Oceanía. En su mayor parte. La tetraciclina es el antibiótico de elección y se puede considerar al cloranfenicol.

Es reconocido que el principal mecanismo de control para el cólera es elevar el nivel de saneamiento en la comunidad de áreas endémicas. La aglutinación con este antisuero (mas tarde llamado antisuero V. dentro de las infecciones del tracto intestinal en cinco especies se ha demostrado que causan o están asociadas con diarrea.Parahemolyticus V. Fruncí V. Cholerae V. aglutinaban con un solo antisuero. Vulnificus V. Aeromonas y Plesiomonas. V. Hollisae V. Más recientemente. Damsela V. Alginolyticus V. No queda más que enfatizar la importancia de la Vigilancia de epidemiológica. Hollisae y V. Fluviales. El uso de vacunas no ha sido eficaz. Parahemolyticus produce gastroenteritis aguda. cholerae 01) fue tomado como criterio para identificar un organismo V. 45 . Las especies de Vibrio causan infecciones en humanos las cuales pueden ser clasificadas como intestinales o extraintestinales. cholerae. V. el genero Vibrio ha cambiado de un grupo heterogéneo de organismos pobremente caracterizados a un grupo natural bien entendido. cholerae sero grupo 01 y no 01 A mediados de los años 30 fue reconocido que la gran mayoría de lo Vibrio aislado de casos de cólera. ya que solo protege en un 50 % y con una duración de tres meses y no previene la diseminación del microorganismo. Cholerae es bien conocido como causa del cólera y V. ESPECIE DE VIBRIO ASOCIADOS A INFECCIONES HUMANAS V. Metschnikovii V. Mimicus V . con la finalidad de conocer el papel de Vibrio Cholerae como causa de diarreas en nuestro medio. Género vibrio En los últimos años. Mimicus han sido implicados como productores de diarrea. Fernissii se ha aislado de unos pocos casos de diarrea pero no hay evidencia real que el pueda causarla. V. V. En genero Vibrio es ahora mucho mas homogéneo y esta clasificado dentro de la familia Vibrionaceae junto con otros tres géneros: Photobacterium. Fluvialis V.

(+). cholerae no 01. produce diarrea severa. (+) (-) 46 . 2. mayor de 1 mm De diámetro. Positiva. con metabolismo fermentador. Medios de cultivo. colonias amarillas. No es halofilico. Gram Catalasa Oxidasa TSI LIA MIO Citrato Urea Bacilos Gram Negativos. V. Bacilo Curvo Gran Negativo. Identificación. serogrupos 01 y no 01. (+). incluyendo infecciones extraintestinales. de tipo agua de arroz. Pertenece al Serogrupo 01. las cepas de V. Citrato. oxidasa y catalasa positivo. y toxina. como utilizan la sacarosa se tornan de color amarillo al igual que el área que las circunda. 1. 3. Vibrio cholerae Definición. cholerae. cholerae. También puede ser empleado el agar Mac Conkey. Utiliza la sacarosa. Positiva. cholerae no 01 puede causar une enfermedad parecida al cólera. pero tiene un mayor espectro de enfermedades. Para aislar esta bacteria tanto de alimentos como de muestras clínicas se requiere el uso de metodología de enriquecimiento. Agar TCBS (Tiosulfato. cholerae 01 es el serogrupo aislado de casos de cólera. Hoy es aceptado que hay dos grupos de V. Este medio de color verde posee como indicadores de cambio de ph azul de timol y azul de bromotimol. Sales Biliares y Sacarosa). con conocidos como V. a través de la acción de su V. Crecimiento en agar TCBS.Aquellos organismos que no aglutinan con el mencionado antisuero. A/A K/N (+). donde crecerán con la tonalidad de una capa lactosa negativa.

DNAsa Malonato (+) (-) Crecimiento en caldo nutritivo con 0 % NaCl 1 % NaCl 6 % NaCl 8 % NaCl (+) (+) d (53%) (-) Aminoacido en base de moeller Arginia 1% Lisina 1% Ornitina 1% ONPG Prueba del collar (String test) Aglutinación con antisuero 01 (-) (+) (+) (+) (+) (+) NOTA: ó emplear también el método automatizado Micro-Sean. 47 .

Cholerae 01 Colonias Sospechosas.AISLAMIENTO DE VIBRIO CHOLERAE MUESTRA Cari Blair Transportar al laboratorio Sembrar en Agar en Enriquecimiento Agua Peptonada alcalina Incubar toda la noche Incubar 5-8 hrs. Sembrar en agar TCBS Incubar toda la noche Colonias Sospechosas Identificación Bioquímica Antisuero V. 48 .

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estudio recientes han demostrado que casi un 15 % de todos los aislamientos realizados en los laboratorios de Microbiología Clínica. ACHROMOBACTER. Burkholderia cepacie se han encontrado en enfermedades pulmonares de pacientes que sufren fibrosis quistica. Se han observado que las infecciones nosocomiales ocurren en pacientes que han sufrido quemaduras. de los cuales tres han resistido la prueba del tiempo. infecciones en vías genitourinarias. meningitis. El segundo genero bacteriano. aunque su papel en estos casos aun no han sido aclarado. del ambiente o de ambos. osteomielitis. procedimientos quirúrgicos e instrumentación mecánica. corresponden a este grupo de bacterias. Existen informes en los que se señala que Pseudomonas maltophilia ha sido aislada directamente de pus obtenida de lesiones malignas y de fistulas cancerosas. Estos esquemas fueron propuestos por la Dra. De estos.CONOCIMIENTO DE LAS BACTERIAS GRAM NEGATIVAS NO FERMENTADORAS (BGN Nº F) Hasta hace poco las bacterias no fermentadoras eran consideradas como comensales de escasa importancia clínica. los BGNnF se pueden aislar y recuperar en medios de cultivos convencionales. infecciones nosocomiales. El origen de este tipo de infecciones es múltiple y depende de varios factores tales como: el uso de sustancias inmunosupresoras. ojos. son aquellos que sufren de enfermedades neoplásicas malignas. Los demás géneros de este grupo. Como característica común. en donde Pseudomonas aeruginosa surge como un importante patógeno oportunista. neumonía. aislado con mayor frecuencia es ACINETOBACTER el cual se asocia con diversas situaciones como septicemia. Los géneros XANTHOMONAS Y AGROBACTERIUM han sido aislados muy rara vez de fuentes humanas y sobre todo son fitopatogenos. FLAVOBACTERIUM. King ( ) y revisandos por Weaver ( ). La diferenciación de los microorganismos se basa en cuatro características: la utilización 50 . en especial leucemia y linfomas. además han logrado aclarar de manera sustancial la caracterización y significación medica de dichos microorganismos. sin embargo. Para su identificación han sido propuestos un gran número de protocolos. endocartis. agentes antimicrobianos. aunque no menos importante se aíslan con menor frecuencia. Gilardi ( ) y Pickett. mas que en otra situación clínica. como es el caso de la gelosa sangre de carnero. piel y abscesos. oídos. EIKNELLA. Otro tipo de pacientes también susceptibles a la infección por este grupo de bacterias. ALCALIGENES. La infección se produce por microorganismos en la flora normal del paciente. estos son: MORAXELLA. el esquemas de King Weaver fue el primero que se propuso.

Apéndice Nª 1 Cepa Pura Tinción de Gram Prueba de Catalasa Prueba de Oxidasa Siembra en medios para movilidad Siembra en Mac Conkey Además siembra en los diferentes Medios que aparecen en la tabla 51 . hemólisis. El tercer protocolo. capacidad de desarrollo en Agar Mac Conkey.de glucosa. de Pickett sugiere algunas pruebas adicionales no comunes. susceptibilidad a Penicilina y Polimixina. tales como: utilización del Ácido Indolpiruvico (API) y del Ácido Fenilpiruvico. se emplean las pruebas de laboratorio mas accesibles omitiendo las que implican requerimientos especiales o periodos prolongados de incubación. En el esquema de Gilardi. desarrollo de Agar Mac Conkey y Agar Salmonella Shigella (SS). crecimiento a 42 AC. Entre las pruebas que planeta dicho esquema tenemos: utilización de carbohidratos. producción de citocromo oxidasa y la movilidad.

MEDIO OF PARA PRUEBA DE OXIDACION-FERMENTACION (HUGH Y LEIFSON) 52 .Revisar morfología colonial Tinción de Gram Verificación del Crecimiento Realización de Pruebas Bioquímicas ó Método Automatizado Micro-Scan.Apéndice Nº 2 Espécimen Clínico Preparación adecuada A..Tinción de Gram Siembra en Agar Sangre de Carnero Siembra en Agar Mac Conkey Siembra en Agar Sal y Manitol Incubar a 35 AC B..

que se pueden detectar en un medio de fermentación convencional (TSI. Si el carbohidrato no es utilizado por ningún método. La menor relación proteinita-carbohidrato reduce la formación de aminas alcalinas que pueden neutralizar las cantidades de ácidos débiles derivados del metabolismo oxidativo. no hay producción de ácido en ningún tubo. 53 . los patrones de metabolismo son de significado diferencial. facilitando la visualización del viraje del indicador del pH.2 %. c) La concentración de agar esta disminuida del 1. Los organismos fermentados producen una reacción ácida en ambos tipos de tubos. El medio OF de Hugo y Leifson difiere de los medios de fermentación de carbohidratos en lo siguiente: a) La concentración de proteína (peptonas) has sido disminuida del 1 % al 0.00 g 10. El medio OF.00 g. Los organismos oxidativos producen una reacción ácida únicamente en el tubo abierto con poco o ningún crecimiento y sin formación de ácido en el tubo cubierto. La consistencia semisólida permite que los ácidos formados en la superficie difundan por todo el medio. b) La concentración de carbohidratos esta aumentada del 0. El medio OF desarrollado por Hugo y Leifson en 1953. quienes describieron la significancia taxonómica del metabolismo fermentativo vs.5 % al 0. mientras cambios en los tubos abiertos son debidos a la utilización oxidativa del carbohidrato presente. Medio OF de Hugo y Leifson Peptona Glucosa 2. La concentración relativamente mayor de carbohidratos sirva para aumentar potencialmente la producción de ácido. Este medio es también adecuado para determinar la movilidad. los ácidos formados por la degradación oxidativa de la glucosa son sumamente débiles y para su detección se requiere un medio de oxidación-fermentación mas sensibles. Los subproductos de la fermentación son “ácidos mixtos” relativamente fuertes. Ellos mostraron que cuando un organismo es inoculado en dos tubos de medio OF conteniendo un carbohidrato y el medio en uno de los tubos es cubierto con petrolato fundido antes de la incubación. En un cambio. es usado para la determinación del metabolismo o fermentativo de carbohidratos por bacilos gram-negativos como un medio de diferenciación entre especies.25 % por lo cual su consistencia es semisólida. como el descrito por Hugo y Leifson (medio OF).Microorganismos sacarolíticos degradan la glucosa fermentaría u oxidativamente. cuando es suplementado con un carbohidrato apropiado. KIA).5 % al 1%. Los cambios en los tubos cubiertos se deben a una verdadera fermentación. oxidativo de carbohidratos por bacterias gram-negativas.

Cubrir un tubo de cada par con una capa de 1 cm.. 2.50 g. de aceite mineral estéril o parafina fundida. 5..Azul de bromitimol Agar Cloruro de sodio Fosfato dipotásico Agua destilada 0.. Procedimiento: Inocular dos tubos para cada uno de los carbohidratos usados con el organismo a probar. El medio se obtiene comercialmente..03 g. Moraxella spp.Gram (-) 54 .. Los tubos deberán ser picados hasta aproximadamente ¼ de pulgada del fondo usando una aguja de inoculación y un inoculo ligero..... Seguir las indicaciones del fabricante para su preparación. dejando el otro tubo abierto al aire. 1000 ml.. Controles: Fermentadores de glucosa: Oxidador de glucosa: No Sacarolítico: Escherichia coli. Caracteristicas de: Branhamella catarihalis Es un habitante de la nasofaringe 10-97 % • Diplococos. Pseudomonas aeruginosa.00 g...30 g. 0...... Incubar ambos tubos a 35ºC + 2ºC en una atmósfera aeróbica por 48 horas no dar como negativo hasta después de 4 días de incubación Interpretacion: Tubo abierto Ácido (amarillo) Ácido (amarillo) Alcalino (verde) Tubo cubierto Alcalino (verde) Ácido (amarillo) Alcalino (verde) Tubo de metabolismo Oxidativo Fermentativo No sacarolítico Ver también si el organismo es móvil o no por el crecimiento únicamente a lo largo de la línea de incubación (inmóvil) o en todo el medio (móvil).

....................• • • • Oxidasa...(+) Basal Of = inerte Infecciones causadas por B: Catarrhalis • • • • • Otitis Meningitis Bacteremía Septicemia Neumonía Caracteristicas de algunas pseudomonas Ps aeruginosa Ps fluorescens Ps putida...Piocianina: Amarillo Verdoso/Café Azul A + B = Color Verde Brillante • Piorubina: Rojo • Piomelanina: Café Identificacion de Pseudomonas aeruginosa • • • • Morfología y olor Beta-hemólisis Productora de piocianinas Crece a 42ºC 55 ..(+) Inmóvil Catalasa..........Pioverdina: B. Ps Maltophilia Ps cepacia Ps mellei Productoras de Pigmento Oxidasa (-) Pigmentos producidos por Pseudomonas • • A..........

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BGN CURVOS + + 0 - + + + + + - - + + (ESCASO) + 57 . CBGN + I ACINETOBACTER CBGN + 0 (I) ALCALIGENENES B. MEDIANOS GN + + I (NO OXID) ACHROMO BACTER BGN MEDIANOS + + 0 FLAVOBACTERIU M BGN CORTOS V (88) V (88) 0 MORAXEL LA BGN CORTOS CBGN + I (NO SAC) PSEUDOM ONAS. CORRODENS MORFOLOGIA OXIDASA CATALASA METABOLISM O BASAL OF MOVILIDAD CEC. PURIFICAR. IDENTIFICAR TABLA Nº1 IDENTIFICAR PRESUNTIVA DE LAS BACTERIAS GRAM NEGATIVAS NO FERMENTADORAS E.HACER FROTIS. C. MC.

C Positivo Positivo Escaso o Negativo Escaso o Negativo Negativo Negativo 58 .ESQUEMA DE KING WEAVER PARA LA IDENTIFICACION DE BGNnF GENERO Pseudomonas Acinetobacter Flavobacteriu m Moraxella Xanthomonas Alcaligenes METABOLISM MOVILIDAD O Oxidativo Oxidativo Inerte Oxidativo Oxidativo e Inerte Oxidativo Oxidativo e Inerte Positiva Negativa Variable Negativa Positiva Positiva OXIDASA Positiva Negativa Positiva Positiva Negativa o Positiva Positiva DESARROLLO EN Mc.

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Subcultivos incorrectos. 4. Los medios sólidos (que se habrán incubado por 6 a 24 horas en anaerobiosis para lograr mejor reducción).METODOLOGIA PARA AISLAMIENTOS DE ANAEROBIOS Examen directo de la muestra: TINCION DE GRAM. 2. Antes de descartar las pipetas prepare laminillas para la tinción de Gram y de esporas. Si se reciben hisopos deben agitarse primero en 0. El examen microscópico directo de la muestra proporciona información valiosa sobre el tipo de célula presentes así como la morfología y afinidad tintoral de los microorganismos presentes a su vez es un excelente control de cantidad por que si los morfotipos observados no se recuperan en los cultivos aeróbicos o anaeróbicos. Se inoculan dejando una gota con la pipeta Pasteur en la superficie del agar y luego se estrían con asa de platino o de acero inoxidable. Use siempre pipetas Pasteur estériles con algodón en la boquilla. Los medios líquidos deberán hervirse 10 minutos y enfriarse inmediatamente antes de utilizarse. 3. Si se reciben otros productos no habrá la misma jarra. Con los datos obtenidos del examen microscópico directo y la coloración del Gram. Procedimiento de inoculación. El contacto con el oxigeno en las primeras 24 horas de crecimiento puede matar algunos géneros de anaerobios obligados. 7. deberá proporcionarse un informe preliminar el mismo día tomando en cuenta las siguientes ideas o ejemplos que se describen a continuación: Tomando en consideración que únicamente se reportara la morfología sin adelantar la posibilidad de algún genero o especie como certeza: hasta que no se haya confirmado con el cultivo. La pipeta Pasteur debe introducirse hasta el fondo y sin formar burbujas sacarla lentamente dejando el inoculo en todo lo largo del tubo. 6. Inmediatamente terminada la inoculación de los medios introducir caja y tubos en ambiente anaeróbicos. 1. 5. Medios de aislamiento primario mal elegidos o deficientes. el procedimiento puede ser defectuoso por alguna de las siguientes causas: a) b) c) d) e) Colección y/o manejo inadecuado de la muestra. Poco entrenamiento del personal para lograr la identificación. 60 . 8.5 ml de caldo Tioglicolato estéril y luego inocular con pipeta Pasteur como se indico. Defectos en el sistema anaeróbico utilizados.

2. c) Bacilos Gram Negativos pálidos. pleomorficos o con tinción polar en una muestra del genero Bacteroides. Gelosa Sangre anaeróbica incubada en anaerobiosis. una Enterobacteria o un No Fermentador de glucosa. Posiblemente Fusobacterium nucleatum. Peptostreptococcus ó Peptocococcus. Finalmente resembrar en:  Gelosa Chocolate. en un paciente con sospecha de Gangrena gaseosa. gruesos en un fondo necrótico con pocos o ningún leucocito. Tioglicolato incubado en presencia de oxígeno. irregularmente teñidos.Cultivo: 1. muy delgados. e) Bacilos Filamentosos muy aglomerados como gránulos de azufre en una lesión cervicofacial: posiblemente Actinomyces. (CDC). Para el aislamiento primario se sugiere como mínimo los medios de cultivo siguientes:       Gelosa Sangre de Carnero incubada en aire. muy probablemente se trate de un Clostridium perfringens (será muy raro observar esporas en frotis directo o cultivo primario en este microorganismo). filamentos. d) Grupos o Cadenas de Cocos Gram Positivos en un exudado obtenido de una herida intrabdominal con presencia de numerosos neutrofilos. b) Bacilos Gram Negativos pálidos. Gelosa Chocolate incubada en atmósfera de CO2. Tioglicolato enriquecido incubado en anaerobiosis. Agar MacConkey incubada en presencia de oxigeno. 61 . Staphylococcus. Para la Resiembra a partir del: Tioglicolato no enriquecido después de haberse incubado en aire por espacio de 24 horas sembrar en:  Gelosa Sangre de Carnero Tioglicolato enriquecido incubado en anaerobiosis después de 48 horas sembrar en:  Gelosa Sangre anaeróbica (CDC). con puntos finos. a) Bacilos Gram Positivos grandes. posiblemente Streptococcus.

PURIFICAR E IDENTIFICAR. Incubar 37 AC 48 hrs. GELOSA SANGRE GELOSA CHOCOLATE 62 . Incubar 37 AC 48 hrs. Incubar 37 AC 48 hrs. Con oxigeno En dióxido de carbono En anaerobiosis CONTINUAR SOLO CON LOS CUADROS QUE CRECEN EN ANAEROBIOSIS HACER UN FROTIS. En anaerobiosis SEMBRAR CADA COLONIA A CUADRITOS GELOSA SANGRE ANAEROBICA Incubar 37 AC 48 hrs.FLUJO DE TRABAJO PARA IDENTIFICACION DE ANAEROBIOS MUESTRA ADECUADA SEMBRAR GELOSA SANGRE Incubar 37 AC 24 hrs. Con dióxido de En anaerobiosis En anaerobiosis carbono IDENTIFICAR RESEMBRAR A GELOSA SANGRE ANAEROBICA CDC Incubar 37 AC 48 hrs. Incubar 37 AC 48 hrs. Con oxigeno IDENTIFICAR GELOSA CHOCOLATE CALDO TIOGLICOLATO GELOSA SANGRE ANAEROBICA FROTIS Incubar 37 AC 24 hrs.

y reportar al organismo como susceptibles. incluyendo el diámetro del disco. rotando varias veces el mismo en las paredes del tubo para quitar el exceso del liquido. pero no mas de 15 minutos después de incubar la placa. 7) Incubar la placa de manera invertida durante 16-18 horas a 35ºC. 4) En un lapso menor de 15 minutos después de ajustada la turbiedad del inoculo humedecer un hisopo estéril en la suspensión. 8) Examinar la placa y medir los diámetros de las zonas de inhibición. se ponen los discos impregnados con los antibióticos apropiados.5 de nefelómetro de Mcfarland. 5) Inocular la superficie seca de una placa de agar Mueller-Hinton. 9) Interpretar los tamaños de las zonas de inhibición de acuerdo a las tablas respectivas. intermedio y resistente. modernamente susceptible. 6) En un lapso de 3 a 5 minutos. 2) Transferir las colonias a un tubo con 4-5 ml de solución salina estéril y ajustar al tubo 0.PRUEBA DE SENSIBILIDAD A LOS ANTIMICROBIANOS (TECNICA DE BAUER-KIRBY) 1) Seleccionar de 4 a 5 colonias bien aisladas del mismo tipo morfológico de un cultivo de agar en placa. 63 . 3) La turbidez puede ajustarse con solución salina. rotándola en ángulos de 60º y frotando el hiposo.

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INTERPRETACION DE PRUEBAS BIOQUIMICAS Agar Triple Azúcar Hierro (TSI). En este medio, se observa fermentación de lactosa, glucosa y sacarosa producción de ácido sulfhídrico y gas. OBSERVACION Amarillo todo el medio INTERPRETACION Fermentación de glucosa, lactosa y sacarosa Roja la superficie del medio. Fermentación de lactosa negativa, utilización de peptonas. Precipitado negro en el medio Producción de ácido sulfhídrico. Desplazamiento del medio o formación Producción de gas a partir de glucosa. de burbujas Color Reacción Abreviatura Amarillo Ácido A Rojo Alcalina K

Medio mio (movilidad, indol, ornitina) En este medio se observa la movilidad, la producción de indol y la descarboxilación de la ornitina. OBSERVACIONES Si se observa crecimiento a lo largo de la picadura. Cuando difunde el crecimiento fuera de la picadura y se observa turbio el medio. Anillo Rojo al agregar el reactivo de Ehrlich ó kovacs. Anillo Amarillo al agregar el reactivo de Ehrlich. Medio color violeta Medio color Amarillo INTERPRETACION Movilidad Negativa Movilidad Positiva Indol Positivo Indol Negativo. Descarboxilación de la Ornitina Positiva. Descarboxilación de la Ornitina Negativa.

Caldo de malonato

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Ver la utilización del malonato como fuente de carbono. OBSERVAION Color Azul Color Verde/Amarillo Agar citrato de Simmons. En este medio se va la utilización del citrato como fuente de carbono. OBSERVACION Color Verde Color Azul Agar urea de Christensen Determinar la capacidad de un microorganismo de desdoblar la urea, por acción de la enzima ureasa. OBSERVACION Color Rosa Color Amarillo Agar de hierro y lisina (LIA) Se utiliza este medio para observar descarboxilación o desaminación de lisina. OBSERVACIONES Morado todo el medio. Amarillo en el fondo del medio y morado la superficie. Roja la superficie y amarillo el fondo del medio. Precipitado negro en el medio. Color Reacción Abreviatura Morado Alcalina K Morado claro Neutra N INTERPRETACION Descorboxilación de la lisina positiva. Descarboxilación y desaminación de la lisina negativa. Desaminación de lisina positiva. Producción de ácido sulfhídrico. Amarillo Ácida A Rojo Desaminación oxidativa. R INTERPRETACION Ureasa Positiva. Ureasa Negativo. INTERPRETACION Resultado Negativo Resultado Positivo. INTERPRETACION Positivo Negativo

Prueba de la catalasa Comprobar la presencia de la enzima catalasa. 66

OBSERVACION Formación de burbujas Sin formación de Prueba de la oxidasa. Determinar la presencia de las enzimas oxidasas. OBSERVACION La colonia toma un color rosado, después marrón y finalmente negro. No se produce cambio de color en las colonias, o solo adquieren un color rosado pálido por el reactivo. Agar DNAasa (medio con azul de toluidina). Demostración la presencia de desoxirribonucleasa. OBSERVACION Halos Rojo-Rosado Sin cambio de color

INERPRETACION Positiva Negativa.

INTERPRETACION Positiva. Negativa.

INTERPRETACION Positiva. Negativa

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Gonorrhoeae Shigella sp TIPO DE MUESTRA Liquido Cefalorraquídeo Genital Heces/ hisopado rectal COMENTARIO Sensible al frió: procesar inmediatamente. 69 . Sin embargo. líquido cefalorraquídeo. si ocurriera algún retraso.INDICACIONES PARA EL PROCESO DE LAS MUESTRAS. muestras para anaerobios y exudado cervical y/o uretral (para aislamiento de gonococcus). Influenzae TIPO DE MUESTRA Sangre. La única muestra que puede ser refrigerada sin comprometer los resultados es la orina. procesar antes de 2 h. Los especimenes que no deben refrigerarse son: sangre. el microbiológico debe estar familiarizado con el hecho de que muestras pueden ser refrigeradas y cuales no. sangre. secreción óptica y ocular. Heridas. heces (para aislamiento de Shigella) liquido cefalorraquídeo y otros líquidos corporales. S. Meningitidis N. exudados. ORGAMISMO N. tejidos. Respiratoria. Anaerobios. * Todos los especimenes que contienen microorganismos sensibles al frió. COMENTARIO Sensible al oxigeno ORGANISMO H. Sensible a cambios de temperatura y pH: procesar inmediatamente. Pneumoniae. deberán conservarse a temperatura ambiente o 35ºC. Microorganismos sensibles a alteraciones en un medio ambiente. Requiere 5-10 % de CO2 sensible al frió. Sensible al frió y O2 Sensible al frio. Todas las muestras deberán ser procesadas en el laboratorio en cuanto sea posible.

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Todos estos resultados son registrados en las libretas correspondientes para este fin. hidratar y hervir antes de esterilizar se les ajusta el pH con el potenciómetro (peachimetro). Actualmente contamos con las cepas siguientes: Vibrio CH 01. Cada que se abre un nuevo lote de reactivo y colorantes. poniéndose a incubar a 37ºC por espacio de 48 horas. Coli. la mayoría de ellos deberán tener un pH de 7 y solo cuando se trate de Agua Peptonada y TCBS para aislamiento de Vibrio se ajustara a un pH de 8. Al equipo automatizado para hemocultivo se le realiza control de calidad diariamente antes de ser utilizado.Cada que se preparan Medio de Cultivos: Antes: • • Se verifica que no estén hidratados. Cada semana se hace evaluación de la funcionalidad de las autoclaves del área de Bacteriología con el uso de ampolletas Sterikon. 1. TINCIONES 71 . Listeria Monocytogenes. Staphylococcus Aureus. Antes de usar el potenciómetro. Al inicio del día se checa la temperatura del refrigerador y de la estufa incubadora. Shigella Boydii. utilizando cepas conocidas. Una vez que se preparan los medios de cultivo y bioquímicas se someten a prueba de esterilidad escogiendo al azar un 5 % de cada lote que se preparo. Pseudomona aeruginosa. 5. Bacillus Cereus.CONTROL DE CALIDAD EN EL AREA DE BACTERIOLOGÍA. A los medios de cultivo que serán utilizados se les realizara prueba de selectividad. finalmente se revisaran las placas y los tubos para verificar su esterilidad. E. Salmonella C2. estos son sometidos a prueba de funcionalidad con cepas conocidas. Haemophylus Influenzae. 8. 7. 9. Criptococcus Neoformans.4 ± 2. 3. Cándida Albicans. 4. Después de pesar. 2. registrando dichas temperaturas en la hoja de control. 6. una de pH 4 y otra de pH 7. Klebsiella Pneumoniae. Morganella Morganni. este se calibra con soluciones reguladoras.

Escurrir y lavar con agua destilada. lo que dificulta su estudio cuando los exámenes se realizan en fresco. Aunque existen múltiples tipos de tinciones vamos a referirnos aquí a los 2 métodos de coloración especiales mas comúnmente empleados. Cubrir la preparación con safranina durante 10 segundos y lavar y dejar secar. este queda atrapado en las bacterias Gram Positivas y no puede ser arrastrado por el decolorante a causa de la naturaleza físico-química de su pared por el contrario en las Gram Negativas es arrastrado por su alto contenido lipídico. Cuando la bacteria se tiñe con el complejo colorante básico – mordiente. Las bacterias Gram negativas son más permeables al alcohol debido a su alto contenido de lípidos. 7. Se realiza un extendido y dejar secar al aire posteriormente se fija con calor. Lavar nuevamente con agua destilada y decolorar con alcohol-cetona. La tinción de Gram y la tinción de Ziehl–Neelsen. Examinar con aceite de inmersión en objetivo de 100x METODO Cristal Violeta Lugol Alcohol Cetona Safranina GRAM ( + ) Se tiñe de violeta Permanece Violeta Permanece Violeta Permanece Violeta GRAM ( – ) Se tiñe de violeta Permanece Violeta Se decolora Se tiñe de rosa. TINCION DE ZIEHL–NEELSEN: 72 . Cubrir la preparación con Lugol 10 segundos. 3. 5. Tinción de Gram: Fundamento Es una tinción diferencial depende de la naturaleza y composición química de la pared bacteriana. 2.En general las bacterias y otros microorganismos son transparentes. por esta razón cuando se quieren conocer los detalles morfológicos es necesario recurrir a tinciones. Etapas de la tinción de Gram Resultados PASOS Colorante Básico Mordiente Decoloración Contraste Método: 1. Cubrir el frotis con cristal violeta y dejar durante 10 segundos. 6. 4.

apareciendo los bacilos de color rojo sobre un fondo azul. 5. calentar hasta emitir vapores. Resultados PASOS Colorante básico Mordiente Decolorante Contraste Método: 1. 6. Cubrir el frotis con fucsina durante 5 min. hasta que ya no haya restos de fucsina. Decolorar con alcohol ácido durante 2 min. Realizar un frotis de 1 -2 cm. 7.alcohol. Lavar y dejar secar al aire.Fundamento: El fundamento de esta técnica diferencial. de ahí que se emplea este tipo de tinción. Fijar el frotis con calor. ceras y ácidos mucónicos por que esta muy ligado a los lípidos ya que es mas solubles en ellos que en el decolorante (alcohol-ácido). Esta consigue por el calor la Fucsina penetre profundamente y puede resistir la acción de colorante de una solución de ácido. Etapas de la tinción de Ziehl–Neelsen. fundamentalmente fosfolípidos. Estos microorganismos se consideran Gram Positivos. 3. METODO Fucsina Calor Alcohol-ácido Azul de metileno ACIDO-ACOHOL RESISTENTES Se tiñe de rojo Permanece rojo Permanece rojo Permanece rojo NO ACIDOSALCOHOL RESISTENTES Se tiñe de rojo Permanece rojo Se decolora Se tiñe de azul PREPARACIÓN DE SOLUCIONES y COLORANTES 73 . evitando que hierva y lavar con agua. pero se colorean difícil e irregularmente. Lavar con agua y cubrir el frotis con azul de metileno 2 minutos. 4. Dejar secar al aire. Se considera que la ácido-resistencia es debido al alto contenido lipídico de estas bacterias. se basa en la propiedad del ácido alcohol resistencia de algunas bacterias. 2.

Es importante distribuir cantidades de 7 ml en tubos limpios y esterilizados de 9 ml con tapón de rosca. hasta que la solución se aclare (no se deje hervir el medio). rotular y almacenar en lugar oscuro y seco. añadir 9 ml de solución de cloruro de calcio al 1% recién preparada y ajustar el pH a 8.0 g.0 ml.4 (con 10 ml de hidróxido de sodio). dejando un pequeño espacio de aires en la parte superior y con los tapones sin enroscar. Esterilizar a vapor fluente en una olla de presión durante 15 minutos y enroscar los tapones después de esterilizar y enfriar. PREPARACION: Disolver los ingredientes en el agua mientras se calienta en el baño María hirviendo. periodo durante el cual no se tiene que observar ninguna perdida de volumen ni contaminación o alteración de color. Este medio de transporte puede utilizarse durante 18 meses o mas siempre que se mantenga en condiciones apropiadas de almacenamiento. AGAR TCBS 74 .0 g. 1. Una vez enfriada la preparación a 50ºC. 5.Medio de caty-blair Tioglicolato de Sodio Fosfato de Sodio Dibásico Na2HPO4 Cloruro de Sodio Agar Agua Destilada 1. 5.1 g. 991. Registrar la fecha del lote.5 g.

14.0 g. La inhibición de bacterias Gram positivas es llevado a cabo por la incorporación de oxgall. citrato biliares y sacarosa) El agar TCBS es altamente selectivo para el aislamiento de V.0 g.0 g. Formula por litro de agua Extracto de Levadura Digerido pancreático de caseína Digerido peptico de tejido animal Citrato de sodio Tiosulfato de sodio Oxgall. NOTA: Así como se preparan estos medios de cultivos. 10. 0. 5. el cual es una sustancia que contiene una mezcla de sales biliares. 3.0 g. La sacarosa se incluye como un carbohidrato fermentable por el metabolismo de vibrios.2. 10. 0.0 g.04 g.0 g. Enfriar a 45-50ºC y vaciar en placas de petri. El Tiosulfato de Sodio sirve como fuente de azufre y en combinación con citrato ferió. POR HUCKER 75 . NO ESTERILIZAR EN AUTOCLAVE. 5.0 g. 2. una sal biliar nuera.0 g. 1. detecta la producción de ácido sulfhídrico. Suspender 88 g del medio en polvo en 1 litro de agua destilada. y colato de sodio. 3. Parahemolyticus.0 g. se realizan los otros medios. agitando frecuentemente y dejar hervir por 1 minuto. siguiendo las indicaciones de la etiqueta de cada uno. 5.0 g. Cholerae y V. 5.6 ± 0. Preparación 1. deshidratado Colato de sodio Sacarosa Cloruro de sodio Citrato férrico Azul de timol Azul de bromotimol Agar pH final 8. El azul de bromotimol son indicaciones de cambios de pH. así como también para otros vibrios. 10. 20. GRAM MODIFICADO.0 g.(Agar tiosulfato.04 g. Calentar.

. 76 .……2 g.60 ml. Mezclar y conservar en frasco con tapón esmerilado..5 g....Cristal violeta (Sol...…….  Acetona………………..  Alcohol etílico absoluto…………………………………..... Solución conc.….  Alcohol etílico absoluto………………………………………..2..  H2O destilada………………………………………………….... Disolver completamente en 5 ml de agua destilada y agregar:  H2O destilada…………………………………………………......... Concentrada):  Cristal Violeta……………….. de oxalato:  Oxalato de amonio………………………………………………...1 g... Mezcla bien y conservado en frasco ámbar con tapón esmerillado..  Yoduro de potasio……………………………………………. Solución de trabajo: diluir la safranina 1:5 o 1:10 con tapón esmerilado.…....…20 g.……...  Biocarbonato de sodio al 5 % en solución acuosa ………..……………………………………….... Solución de Yodo (Lugol):  Yodo…………………………………………………………...100 ml..100 ml. Alcohol – Acetona para decolorar:  Alcohol etílico absoluto………………………………………. Solución de trabajo: Diluir el cristal violeta 1:10 con agua destilada y mezclar con 4 volúmenes de la solución de oxalato..250 ml. Guardar en frasco con tapón esmerilado.250 ml.... Solución de Safranina concentrada:  Safranina 0…………………………………………………….....100 ml......1 ml..240 ml..

Decolorar con alcohol-acetona o alcohol etílico durante 10 o 20 segundos. 77 .  Cubrir la preparación con safranina durante 15 minutos.  Esporas de color verde y soma celular rojo. Safranina al 0.CUANTIFICACION DEL ESTRIADO DE LAS PLACAS EN MUESTRAS RESPIRATORIAS. lavar y dejar secar al aire. 10 10 10 10 5 5 5 5 5 2º 3º         Shaeffer-fulton para tinción de esporas (4).  Lavar con agua y dejar secar al aire. Cubrir el frotis con cristal violeta y dejar durante 10 segundos.5% en agua destilada.  Lavar con agua de la llave. Cubrir la preparación con lugol y dejar 10 segundos. Colonias en el área estriada 1º + ++ +++ ++++ Método: Fijar el frotis con calor. Cubrir la preparación con safranina durante 10 segundos. Escurrir el colorante y lavar el resto con lugol. Método:  Cubrir la preparación con verde de malaquita y calentar a emisión de vapor durante 1 minuto. Lavar con agua de la llave. Examinar con aceite de inmersión. Verde de malaquita al 5 % en agua.

Solución de KOH al 10 % KOH……………………………. citológico y cultivo. 1. 78 . así como otros líquidos corporales. 4. Dejar secar al aire. LIQUIDO CEFALORRAQUIDEO Cuando hay sospecha de meningitis se recomienda el análisis químico.10 GRS. Lavar con agua y cubrir el frotis con azul de metileno 2 minutos.  Del sedimento se realizara el cultivo como se indica en la marcha de LCR y hacer una tinción de Gram. Realizar un frotis de 1 -2 cm. decolorar con alcohol ácido durante 2 min. Cubrir el frotis con fucsina durante 5 min. 6. en el manual del equipo BACTEC-9050. Una vez inoculada la muestra en el frasco se siguen los procedimientos del sistema automatizado. Tinción de Ziehl-Neelsen. evitando que hierva y lavar con agua. Fijar el frotis con calor. hasta que ya no haya restos de fucsina.100 ML. 3.. 7. 2.  Centrifugar el espécimen a 250 rpm durante 15 minutos. H2O………………………….. 5. estos frascos contienen factores que neutralizan el antibiótico y permiten la recuperación del microorganismo. Lavar y dejar secar al aire. calentar hasta emitir vapores.  Extraer el sobrenadante con una pipeta Pasteur estéril frente a un mechero pasar a otro tubo. NOTA: Si el paciente se encuentra bajo tratamiento de antibióticos es recomendable inocular la muestra de LCR. en un frasco de hemocultivo del sistema automatizado.

L. A. P. 4. 1987. Textos y Atlas. D.. Washington USA : 3.. Gaya C. Carral P. 2. Métodos para identificar Bacilos Gram Negativos no Fermentadores. J. Diagnostico Microbiológico. I. 79 . y H. W. E. Ed. Hausler Jr. Pseudomonas En Lennette E.. Boyle-Scott. Ed. Aguirre L. Panamericana. Elmer W. 5. H.. Koneman. Murria Microbiología Medica Ed. Shadomy (De) Manual of Clinial Microbiology. Ce. Gilardi G. 1985. Panamericana.BIBLIOGRAFIA 1. Suárez A. Balows. M. Diagnostico Microbiológico... Harcourt Bra. Insectología 7 (6): 287-298. Patrick R. J.