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ULCB

MANUAL DE PRCTICAS DE BIOLOGA GENERAL

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Primera edicin, agosto de 2011

Manual de Prcticas de Biologa General Dr. Luis Oblitas Quispe Blga. Mariela Graciela Vinces Carrillo Blga. Jeanne Rossanne Alba Luna

Universidad Le Cordon Bleu - Per


Av. Vasco Nuez de Balboa 530 - Miraflores, Lima - Per Central Telefnica: (511) 617-8310 Fax: (511) 242-9209

Prohibida la reproduccin de este libro por cualquier medio, total o parcialmente, sin permiso expreso de los autores.

Impreso en el Per / Printed in Per

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PRESENTACIN

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NDICE
1. Prctica N 01: Importancia del laboratorio en la Biologa. Reglamento y Normas de Seguridad 2. Prctica N 02: Materiales e instrumentos de laboratorio 3. Prctica N 03: Reconocimiento de Biomolculas: Actividad enzimtica: especificidad y desnaturalizacin por cambio de pH y temperatura. 4. Prctica N 04: Valoracin del pH en alimentos. 5. Prctica N 05: Extraccin de ADN 6. Prctica N 06: Microscopa y Procedimiento para una buena iluminacin en el microscopio. 7. Prctica N 07: Observacin de clulas animales y vegetales. 8. Prctica N 08: Organelas celulares e inclusiones citoplasmticas 9. Prctica N 09: Organismos vivos Bacteria 10. Prctica N 10: Permeabilidad celular 11. Prctica N 11: Observacin del ncleo interfsico de las clulas sanguneas 12. Prctica N 12: Ciclo Celular: Identificacin de mitosis en races 13. Prctica N 13: Identificacin de la cromatina sexual Revisin bibliogrfica Pg. 5

Pg.8 Pg. 15

Pg. 18 Pg. 22 Pg. 25

Pg. 31 Pg.35 Pg. 39 Pg. 44 Pg. 48 Pg. 51

Pg. 54

Pg. 57

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PRCTICA N 01 IMPORTANCIA DEL LABORATORIO EN LA BIOLOGA REGLAMENTO Y NORMAS DE SEGURIDAD

1.

INTRODUCCIN

Al ser una ciencia factual, la biologa emplea el mtodo cientfico utilizando como herramienta varios mtodos, entre ellos el experimental. De all la importancia del desarrollo de experimentos sobre los diversos fenmenos que ocurren en los seres vivos, ya que tienen como fin comprobar los enunciados o propuestas tericas que se hacen acerca de dichos fenmenos. Durante el curso de Biologa se realizan diversos experimentos y prcticas que servirn para la mejor comprensin de los conceptos tericos vistos durante la clase. Para lograr lo mejor posible este propsito, es necesario reconocer el lugar fsico donde se desarrollarn estas actividades, las medidas de seguridad que se deben observar, as como los materiales y sustancias que se usan de manera corriente.

COMPETENCIAS: Familiarizarse, por medio de un recorrido, con la distribucin de las instalaciones y el equipo de seguridad necesarios dentro del laboratorio para poder realizar las prcticas en forma efectiva y segura. Recordar las reglas ms importantes para el buen desarrollo del trabajo en el laboratorio. Identificar por medio de un inventario, los materiales y sustancias que se emplean en un laboratorio de Biologa.

2. 3. 3.1

MATERIALES Y REACTIVOS Cuaderno de notas Cristalera en general Reactivos representativos

PROCEDIMIENTO: Integrar equipos dependiendo del nmero de mesas y asignar un nmero a cada mesa. Hay que reconocer el material del que estn hechas las mesas, el piso, las cortinas, los anaqueles, los cuales deben ser de material poco reactivo (resistentes a la corrosin) o no flamables. As mismo identificar las diversas tuberas que llegan a las instalaciones.

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3.2

Con respecto a los equipos de seguridad hay que ubicar los siguientes: extractor de vapores o campana de extraccin, ducha de seguridad, extintor y botiqun de primeros auxilios. Tambin hay que ubicar las salidas. A partir de toda esta informacin, hay que realizar un esquema de laboratorio. En cada una de las mesas se colocar una charola conteniendo material: cristalera (volumtrico y no volumtrico), de soporte, aparatos, dispositivos y algunos reactivos - colorantes, cidos y bases. El profesor explicar el uso o aplicacin de cada uno de ellos y el alumno tomar nota con las observaciones pertinentes. Se discutir las principales reglas de seguridad y la aplicacin de las mismas para un trabajo seguro.

3.3 3.4

3.5

La seguridad en el laboratorio es responsabilidad tanto del profesor como del alumno. Cualquier actividad en el laboratorio tiene riesgos potenciales y los usuarios deben estar alerta a estos riesgos para evitar accidentes peligrosos, los cuales pueden ocurrir en cualquier momento. Es recomendable e importante tener DISCIPLINA al respecto. Las siguientes son las normas que deben seguirse para garantizar un buen trabajo durante las prcticas: 1. Cada sesin se iniciar a la hora indicada. La tolerancia mxima para ingresar al laboratorio es de 5 minutos. 2. Las faltas al laboratorio se calificaran con cero, salvo haya una justificacin razonable. 3. El alumno deber presentarse en el laboratorio con bata blanca y debidamente abotonada. Sirve de proteccin contra las sustancias qumicas, materiales calientes, etc. Calzar zapatos adecuados (zuecos). 4. No portar joyas (pulseras, anillos, relojes, cadenas, etc.). Las uas cortas y sin esmalte. Los caballeros con el pelo corto y las damas recogido en un moo; en ambos casos usarn una cofia como proteccin. No llevar maquillaje ni tatuajes. 5. El acceso al laboratorio es limitado o restringido. Slo se permite portar la libreta de apuntes, lapiceros /lpices, su manual de laboratorio y los materiales (muestras) en el caso hayan sido solicitados oportunamente. 6. No est permitido comer, beber, fumar, manipular lentes de contacto, maquillarse o almacenar alimentos para uso humano en las reas de trabajo. 7. El laboratorio no es un lugar apropiado para correr, empujar o bromear. Esa conducta poco apropiada puede causar accidentes. Hay que tener orden y compostura que merece el trabajo en el laboratorio. 8. Trabajar con el equipo y en la mesa que se le asign al principio de la clase. Cada equipo se responsabilizar de su rea de trabajo y del material asignado. 9. Realizar solamente aquellas actividades asignadas por el profesor. 10. Lavarse las manos antes, durante (si el caso lo amerita) y despus de cada actividad. 11. No probar ninguna sustancia que se use en el laboratorio. NUNCA pipetear con la boca, se utilizarn los dispositivos pipeteadores auxiliares mecnicos. 12. No emplee el mismo gotero o pipeta para extraer sustancias diferentes.

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13. Antes de utilizar un compuesto o qumico asegurarse bien de que es el que se necesita, observar y leer bien la etiqueta o rtulo correspondiente. Nunca tomar con las manos y menos con la boca el reactivo qumico. De suceder, lavarse con abundante agua. 14. No devolver nunca a los frascos de origen los sobrantes de los productos utilizados sin consultar con el profesor(a). 15. Es muy importante que cuando los productos qumicos de desecho se viertan en la pila de desage, aunque estn debidamente neutralizados, debe dejarse que circule por la misma, abundante agua. 16. Tener cuidado con los borde y puntas cortantes de los tubos u objetos de vidrio. El vidrio caliente no se diferencia a simple vista del vidrio fro. Para evitar quemaduras, dejarlo enfriar antes de tocarlo. 17. Si se debe calentar a la llama el contenido de un tubo de ensayo, observar cuidadosamente estas dos normas: 18. Tener sumo cuidado y en cuenta que la boca del tubo de ensayo no apunte a ningn compaero. Puede hervir el lquido y salir disparado, por lo que podra ocasionar un accidente. 19. Cuando caliente un tubo de ensayo hacerlo por su parte lateral, nunca por el fondo; y luego agitarlo muy suavemente. Utilice el microscopio que le fue asignado el primer da. Recuerde tener mucho cuidado con el transporte del microscopio. 20. El material proporcionado en cada prctica, deber entregarse limpio y seco al final de las misma, siguiendo las instrucciones del profesor (a). 21. En caso de que el material se rompa o extrave, ste deber ser repuesto o pagado en la siguiente sesin por todos los integrantes del equipo presentes en el momento. 22. Mantener el rea de trabajo limpia, sin libros ni papeles, o equipo innecesario alguno. La basura deber depositarse en el tacho correspondiente. 23. Asegurarse de apagar todas las hornillas, salidas de gas y mecheros, as como de desenchufar los aparatos elctricos utilizados y de cerrar todas las llaves de agua al terminar la clase y antes de retirarse del aula.

4.

OBSERVACIONES

PRCTICA N 02 MATERIALES E INSTRUMENTOS DE LABORATORIO

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1.

INTRODUCCIN En la elaboracin del equipo del laboratorio se utilizan los siguientes materiales: Metales: Los ms utilizados son el hierro y sus aleaciones, cobre, nquel, platino, plata y plomo. Con estos metales se fabrican soportes, pinzas, anillos, trpodes, tringulos, rejillas, sacacorchos, recipientes para agua, crisoles, esptulas, mecheros y electrodos, entre otros. Porcelana: Se fabrican cpsulas, crisoles, navecillas, esptulas, embudos, tringulos. Madera: Gradillas, soportes de pie para tubos y embudos. Corcho: Se usa principalmente en la elaboracin de tapones. Caucho: Para fabricar mangueras y tapones. Asbesto: Se emplea en la fabricacin de mallas, guantes y como aislante trmico. Tefln: Utilizado en la fabricacin de mangueras, vlvulas, llaves para buretas, recipientes, empaques entre otros. Vidrio: Es uno de los materiales ms usados en el laboratorio. Aqul que se destina a la fabricacin de equipo de laboratorio debe ser resistente a los cidos y a los lcalis y responder a determinadas exigencias trmicas y mecnicas. El material de vidrio de laboratorio puede clasificarse en dos categoras: Vidriera Comn: Comprende los vasos de precipitados, los erlenmeyers, los balones de fondo plano y de fondo redondo, los embudos (al vaco, por gravedad, de decantacin), tubos de ensayo, condensadores, frascos con tapn esmerilado, vidrios de reloj, tubos de Thiele y otros (figura 1). Vidriera Volumtrica (de alta precisin). Este material suele ser ms costoso debido al tiempo gastado en el proceso de calibracin. Comprende una serie de recipientes destinados a medir con exactitud el volumen que contienen o el volumen que vierten. En los recipientes volumtricos aparece sealado si el recipiente es para verter o para contener, lo mismo que la temperatura a la cual ha sido calibrado.

COMPETENCIA Reconocer los materiales e instrumentos dentro de un diversos usos a los cuales son sometidos.

laboratorio e identificar los

2.

MATERIALES Materiales de Vidrio 1. Tubo de Ensayo: Tubo de vidrio que se utiliza para mezclar sustancias, calentar y ejecutar reacciones.

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2. Beaker: Se usan para preparar, disolver o calentar directamente sobre rejillas planchas de calentamiento. 3. Matraz o Erlenmeyer: Se utiliza para montar sistemas generadores de gases. 4. Kitazato: Es un matraz de pared gruesa con un una conexin lateral, mediante una manguera que conecta a una bomba de vaco y su funcin es filtrar sustancias pastosas y slidos de tamao pequeo de partcula. 5. Matraz de fondo plano: Se utiliza para calentar lquidos. 6. Matraz de fondo redondo: Se utiliza para poner volmenes exactos de soluciones. 7. Embudo de filtracin: Consiste en hacer pasar una mezcla lquida a travs de un filtro colocado en un embudo, los componentes insolubles quedan retenidos en el papel de filtro como residuos y los solubles pasan a travs de los poros. 8. Embudo de decantacin: Se utiliza para la separacin de lquidos miscible e inmiscible para extraer el lquido menos denso separando del menos denso. 9. Vidrio de Reloj: Se utiliza para cubrir recipientes, pesar, transferir slidos, evaporar lquidos a temperatura ambiente. 10. Condensador: Tiene la funcin de condensar los vapores producidos durante el proceso de destilacin y esta compuesto por dos (2) partes: a. Un tubo central de forma diversa, que

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se conecta por un lado al baln de destilacin y por el otro, al frasco receptor de la destilacin. b. Un cilindro de vidrio por donde envuelve al tubo interior y presenta dos (2) tubuladuras laterales por donde penetra y sale el agua de enfriamiento. 11. Matraz Aforado: Sirve para preparar volmenes exactos de concentraciones. 12. Cilindro graduado: Se utiliza para el volumen de lquido en centmetros cbicos (m3). 13. Bureta: Son tubos de vidrios calibrados que suelen terminar en una llave y sirven para medir volmenes de lquidos con mayor precisin y exactitud. 14. Placa de Petri. En ella se cultivan microorganismos, como hongos o bacterias; tambin puede usarse para seleccionar muestras de animales.

15. Frasco gotero. Con el se dosifican lquidos, como colorantes. 16. Frasco de boca y tapn esmerilados: Se usa para conservar y almacenar sustancias. 17. Frasco de Borrell: Sirve para lavados y tinciones de varias muestras simultneas. 18. Portaobjetos. Son laminillas de cristal que pueden ser cncavas, en ellas se depositan sustancias para su observacin. 19. Cubreobjetos: Cubren y protegen las preparaciones u objetos que se observarn al microscopio e impiden que se

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desprendan o muevan al ser observados. 20. Lupas: Son lentes convexos para la observacin detallada de objetos pequeos; como partes de plantas, insectos, etc. 21. Mechero de alcohol: Se emplea como fuente de calor cuando se requiere calentamiento lento. Al usarla debe cuidarse que la mecha est limpia y recortada para que el calor que proporcione sea adecuado. 22. Cristalizador: Recipiente de vidrio empleado en el laboratorio para cristalizar cuerpos que se encuentran en disolucin. 23. Termmetro: Con l se mide la temperatura a diversas sustancias reaccionantes (reactivos). Los hay de vidrio, analgicos, digitales: con y sin sonda. 24. Mechero de gas o de Bunsen: Se emplea para el calentamiento rpido de sustancias. 25. Balanza: Con ella se conoce mide el peso de objetos. Existen de precisin, analticas, semianaliticas, etc. 26. Microscopio compuesto: Hace visibles al ojo humano objetos diminutos, es de suma importancia en un laboratorio. 27. Agitador de vidrio: Estn confeccionados de varilla de vidrio y se utilizan para agitar o mover sustancias, facilitando la homogenizacin. 28. Embudo de Buchner: Son embudos de porcelana o vidrio de diferentes dimetros, en su parte interna se coloca un disco con orificios, en l se colocan los medios filtrantes. Se utiliza para realizar filtraciones al vaco. 29. Aros de precipitados: Permite calentar sustancias y obtener precipitados de ellas. 30. Pipetas. Este material existe en dos presentaciones: a. Pipetas aforadas: permiten medir diversos volmenes segn la capacidad de esta. b. Pipetas volumtricas: no estn graduadas y solo permiten medir un volumen nico. 31. Probeta: Este material permite medir volmenes, existen en presentaciones, las hay de vidrio, de plstico y de diferentes capacidades. diversas

32. Piceta: Es un recipiente que se utiliza para contener agua destilada, este utensilio facilita la limpieza de electrodos, portaobjetos, etc.

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33. Puente de tincin o paralelas: Son dos varillas de vidrio unidas por gomas, sobre las que colocamos los portaobjetos para efectuar tinciones.

Materiales de porcelana 34. Cpsula de porcelana: Sirve para calentar y evaporar lquidos, fundir cristalizar slidos. 35. Crisol: Sirve para calcinar sustancias, fundir slidos.

36. Mortero y pistilo: Sirve para triturar, pulverizar y mezclar slidos.

Materiales de metal 37. Soporte universal: Pieza bsica en el montaje de los sistemas y aparatos como pinzas y anillos de metal. 38. Rejilla de metal con centro de asbesto: Sirve para calentar indirectamente ya que la llama del mechero se concentra en el anillo. 39. Trpode: Soporte matraces, etc. de vaso de precipitado,

40. Aro metlico: Es un componente importante en l para el montaje y construccin de sistemas para calentar y sujetar.

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41. Esptula: Sirve para trasegar slidos y tomar nuestras de slidos. 42. Escalpelo o bistur: Cuchilla muy fina y afilada para realizar incisiones precisas. 43. Pinza para soporte universal: Sirve para sujetar instrumentos en el montaje de sistemas. 44. Pinza de Morh: Son instrumentos metlicos de dos brazos y de forma variada que se utiliza para sujetar y trasladar objetos; tambin, para impedir el paso de fluidos en tubos flexibles. 45. Pinza para tubo de ensayo: Se utiliza para sujetar tubos de ensayos calientes. 46. Gradilla: Se utiliza para colocar los tubos de ensayo. 47. Soporte para Embudo: Sirve para la fijacin de instrumentos de vidrio. 48. Trpode y rejilla de amianto: Con la unin de estos dos utensilios, podemos colocar las muestras sobre la llama del mechero de tal forma que no estn en contacto directo con el fuego, sino que la rejilla se encarga de distribuir uniformemente el calor.

3.

OBSERVACIONES

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PRCTICA N 03

RECONOCIMIENTO DE BIOMOLCULAS Actividad enzimtica: especificidad y desnaturalizacin por cambio de pH y temperatura

1.

INTRODUCCIN Las enzimas comprenden una porcin muy importante de la protena total de la clula, acelerando las reacciones qumicas, por lo tanto son catalizadores biolgicos. Estn presentes en todas las clulas y lquidos biolgicos. Ellas intervienen en todas las reacciones metablicas energticamente posibles. El perfeccionamiento de los mtodos de extraccin y purificacin nos permite obtenerlas en forma pura y cristalina, esto permite estudiar su estructura y mecanismos de accin en la catlisis.

COMPETENCIA: Determinarn los mecanismos de accin de las enzimas. As como los factores que afectan a la reaccin enzimtica (temperatura, pH )

2.

MATERIALES Y REACTIVOS Material biolgico: trozos de hgado, carne de res, tomate y papa (cruda y cocida). Perxido de hidrgeno (H2O2) o agua oxigenada, con gotero Solucin de almidn al 1% con gotero Reactivo de Benedict con gotero Lugol con gotero Agua destilada en una piceta Balanza digital (para pesar 2 gr) Timer Tubos de ensayo de 150x 15mm Gradillas para tubos de 150x15mm Baguetas Probeta 50ml Pipeta, 1ml, 5 ml y 10 ml con propipetas Placas petri de vidrio Esptula ( 8 x grupo)

3.1 Reconocimiento de la catalasa en tejido animal y vegetal

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1. Prepare una batera de 4 tubos de prueba. 2. Coloque en cada uno de ellos 2 g. de hgado, tomate, papa y agua destilada respectivamente. 3. Adicione 3 gotas de perxido de hidrgeno. Observe: La accin que tiene a catalasa sobre el perxido de hidrgeno. La velocidad del desprendimiento del oxigeno. Mida la altura que ha alcanzado la concentracin de oxgeno desprendido en cada uno de los tubos. Haga sus anotaciones.

3.2 Desnaturalizacin de la catalasa por calor Las enzimas tienen una temperatura ptima de accin. La catalasa se encuentra en todos los tejidos vivos, donde descompone el H2O2 en H2O y O2, que al ser gas en solucin acuosa se desprende en forma de burbujas. Por tanto, al aadir agua oxigenada a un tejido vivo, la deteccin de desprendimiento de oxgeno (gas), indicar actividad catalasa. En la mesa hay dos platos con trozos de papa. En uno de ellos, la previamente cocida. Procedimiento 1. Introduzca en dos tubos de ensayo un trozo de papa de cada plato. 2. Aada 1 ml. de H202. 3. Anote sus observaciones. 3.3 Desnaturalizacin a pH cido de la amilasa Las enzimas tienen un pH ptimo de actuacin. Los cambios de pH desnaturalizan la protena y por tanto, inhiben su actividad enzimtica. La amilasa es una de las enzimas encargadas de la digestin del almidn, concretamente hidroliza enlaces 1-4 entre molculas de glucosa. Es una enzima que se encuentra a lo largo de todo el tracto digestivo de los mamferos y que tambin la producen las glndulas salivares. Procedimiento 1. Prepare 2 tubos de ensayo con los siguientes reactivos: TUBO 1 Amilasa (saliva) 2 gotas de agua 2. Agite los tubos y deje reposar por 5 min. 3. Luego agregue 1 ml. de solucin de almidn a cada tubo. TUBO 2 Amilasa (saliva) 2 gotas de HCl 1N papa ha sido

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4. Agite los tubos y dejarlos reposar 10 min para que transcurra la reaccin enzimtica. 5. Realizar la prueba de lugol a cada tubo.

4.

OBSERVACIONES

5.

CUESTIONARIO: 1. Explique detalladamente cmo acta la ptialina y la catalasa. Escriba las reacciones correspondientes. 2. Cul es la importancia de las enzimas en el organismo? 3. A que debe una enzima su capacidad de catlisis?

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PRCTICA N 04 VALORACION DEL pH EN ALIMENTOS

1.

INTRODUCCIN El pH es un indicador de la acidez o alcalinidad de una sustancia. Est determinado por el nmero de iones libres de hidrgeno (H+) en una sustancia. Los valores de pH se encuentran entre 0 y 14. Cuando el pH de una sustancia es mayor de 7, es una sustancia bsica. Cuando el pH de una sustancia est por debajo de 7, es una sustancia cida. El control del pH es muy importante en la elaboracin de los productos alimentarios, tanto como indicador de las condiciones higinicas como para el control de los procesos de transformacin. El pH, como la temperatura y la humedad, son importantes para la conservacin de los mismos. De ah que generalmente, disminuyendo el valor de pH de un producto, aumente el perodo de conservacin. Por ejemplo, el tratamiento de alimentos en una atmsfera modificada con pH inferior a 4,6 puede inhibir la multiplicacin de agentes patgenos como el Clostridium botulinum. Algunos ejemplos: Carnes y embutidos El pH es un indicador importante de las condiciones de salud y alimentarias del animal en el momento del sacrificio. Los valores tpicos deberan rotar entre pH 5.4 y 7.0, y son indicativos de una conservacin correcta de la carne. Con el pasar del tiempo, el valor del pH tiende a disminuir. Adems, es indicativo del grado de dureza de la carne cortada, debido a que el proceso de acidificacin es diverso en los distintos cortes de carne. Valores elevados de pH caracterizan una carne ms oscura, menos sabrosa y de menor valor en el mercado. Ya que estos productos se conservan en ambientes refrigerados, la medida del pH permite controlar que no haya contaminaciones debidas a prdidas de amonaco en los circuitos refrigerados. Bebidas El pH es un factor importante en la produccin de todos los tipos de bebidas. Incluso pequeos cambios del pH en las aguas minerales pueden indicar una contaminacin de las fuentes o de los estratos naturales. Para la calidad de las bebidas es importante controlar el pH tanto del agua como de los jarabes y zumos. El pH juega un papel crucial en la produccin de la cerveza y debe ser controlado regularmente en las diferentes fases de su elaboracin, con el fin de garantizar un producto con buenos estndares cualitativos. Por ejemplo, el valor pH de algunos ingredientes debe ser controlado para crear condiciones favorables a la fermentacin. El pH del vino vara normalmente de 2.8 a 3.8. Su control es muy importante en las diversas fases del proceso productivo, como la fermentacin y la conservacin. Con un pH superior a 3.5, algunas bacterias pueden atacar el vino. Incluso el sabor depende en gran medida del pH: por ejemplo, los vinos secos se convierten generalmente en cidos.

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Leche y derivados El pH de la leche debe ser controlado desde el momento de la recoleccin hasta la entrega del producto, ya que es un indicador vlido de sus condiciones higinicas. El valor normal est en torno a 6.8. Valores inferiores a pH 6.8 pueden indicar una infeccin en el animal, que puede ser grave si el pH es inferior a 4.4. El control del pH puede determinar la presencia de una contaminacin de amonaco debida a prdidas en las instalaciones de refrigeracin. La leche usada para la produccin de quesos debe ser de ptima calidad y su pH puede variar de 6.1 y 6.5, segn el tipo de queso que se debe obtener. El pH tambin se controla durante la elaboracin y maduracin de los quesos. Valores de pH comprendidos entre 4.1 y 5.3 garantizan una ralentizacin del crecimiento de los agentes patgenos en los quesos frescos. Asimismo, el control del pH es muy importante durante las diferentes fases de elaboracin de la mantequilla. Por ejemplo, la nata se enfra tras la pasteurizacin a un valor que debe ser muy preciso. El valor del producto terminado debe ser de pH 5 aproximadamente, que en algunas condiciones puede necesitar aditivos. Un valor entre 4.5 y 6.4 del producto terminado garantiza una mayor conservacin. En la preparacin del yogur, la refrigeracin que sigue a la incubacin de los fermentos, puede comenzar slo cuando el valor del pH ha alcanzado valores de alrededor 4.4-4.6. La fruta agregada al yogur debe tener el mismo valor de pH para evitar reacciones no deseadas. Un producto final ptimo debera tener un pH de alrededor 4.0-4.4 para que pueda ser conservado por ms tiempo. Pan y pasta El pan se conserva ms tiempo si su valor pH est comprendido entre 4.0 y 5.8. Las pastas al huevo deben tener un pH cido para evitar la reproduccin de microorganismos patgenos. Mayonesa y salsas Para garantizar la seguridad higinica de salsas a base de mayonesa, stas se acidifican agregando el vinagre o el jugo de limn, prolongando en este modo el periodo de conservacin de los productos. Mermeladas, jarabes y caramelizados El pH del producto terminado influye en el tiempo de conservacin de este tipo de alimentos. Para las mermeladas y los jarabes debera ser en torno a pH 3.5 y para los caramelizados entre pH 4.5 y 5.0. Adems, el pH se controla en los procesos de elaboracin, como por ejemplo, en la gelatinizacin de mermeladas y confituras. Fruta y verdura Un valor pH entre 2.5 y 5.5 prolonga la conservacin de la fruta fresca e inhibe la reproduccin de microorganismos. Lo mismo ocurre con la verdura en un intervalo entre 4.6 y 6.4 pH. COMPETENCIA:

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Expresarn y analizarn en forma convencional, mediante una escala numrica, el grado de acides, alcalinidad o neutralidad de cualquier sustancia alimenticia.

2.

MATERIALES Y METODOS Potencimetro de mesa o porttil con electrodo para alimentos Soluciones Buffer 4, 7 y 10 Tiras de Papel tipo Pamphea Agua destilada Pinzas de punta fina Beaker de 100ml Baguetas Mortero y piln Placas petri de vidrio 100x15 Tubos de prueba 100x 15 mm Gradilla para tubos. Muestras alimenticias de diversa ndole (coca cola, vino, limn, huevo entero, mayonesa, vinagre, manzana, mermelada, pan, harina, leche, yogurt, queso, jamn, brcoli, manzana, carne de res, carne de pollo, hot dog, etc.).

3.

PROCEDIMIENTO

3.1 Con las tiras de papeles tipo Pamphea probaremos distintos compuestos como vinagre, leche, agua y jugo, ponindolos en contacto alrededor de 5 s. Luego observaremos los cambios de color y compararemos con la tabla de referencia proporcionada. De esa manera, segn el color que tomen estos papeles, determinaremos de forma subjetiva el grado de acidez, alcalinidad o neutralidad que tengan los productos. 3.2 Con el potencimetro de mesa analizaremos los diversos alimentos (lquidos, slidos y semilquidos). Anotaremos los resultados de forma precisa ya que estos instrumentos electrnicos nos reportarn valores objetivos (Precisin y confiabilidad). OBSERVACIONES

4.

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5.

CUESTIONARIO: 1. Cul es la importancia del pH en los alimentos? 2. De lo observado durante la prctica elabore Ud. un cuadro de alimentos con pH cido, bsico o alcalino.

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PRCTICA No. 05 EXTRACCIN DE ADN

I.

INTRODUCCIN La estructura caracterstica del ADN fue descubierta en 1959 por los cientficos Watson, Crick, Franklin y Wilkins, realizando el descubrimiento ms importante en la ciencia biolgica, representando un hito en el inicio de la investigacin en gentica, bioqumica y por consiguiente los adelantes actuales en el mundo de la ingeniera gentica. Descubrieron que el ADN est formado por 2 cadenas de polinucletidos (desoxirribunucletidos) y que entre ellos se enlazan a travs de puentes de hidrgeno, realizndose uniones especificas entre las bases nitrogenadas (A = T y la G C), adquieriendo la forma de una doble hlice o escalera de caracol. Lo maravilloso de este descubrimiento es que en su simplicidad esta encerrada la maquinaria ms importante para los seres vivos, no solo porque transmite el cdigo gentico de una especie, sino que encierra la complejidad de su estructura evolutiva.

II.

COMPETENCIAS Aprender los principios bsicos para la extraccin de ADN en tejido vegetal Descondensar el ADN para su observacin macroscpica. Analizar la estructura caracterstica de la molcula del ADN Observar los nucleosomas.

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III.

Materiales Fresas o papaya Hgado de pollo Detergente lquido sin desinfectante Alcohol etlico al 96 % helado Papayina Licuadora o mixer Beaker Bolsas plsticas tipo zipoc Gaza Sal sin yodo Agua destilada Bagueta Mortero Pipeta de 1mL, 5 mL y 10 mL Probeta de 100 mL Arena estril de construccin Tocuyo estril

IV.

PROCEDIMIENTO 1. Tritura la muestra biolgica en un mortero estril, para realizarlo con mayor facilidad agrgale arena estril, esto ayudar a romper la membrana celular y dejar libres los ncleos. Aadir al triturado 50 mL de agua destilada, remueva con la bagueta y verifique que est como una papilla ligera. Fltrelo sobre la gaza estril, separe los restos de tejidos que no hayan podido ser molidos. Coloque lo filtrado en una probeta y mida el volumen obtenido. Aada al filtrado la misma cantidad de volumen de NaCl 2M, esto permitir que los ncleos se lisen y estallen dejando libre las fibras de cromatina. 6. Coloque 1 mL de detergente lquido (SDS), este detergente permite que el complejo protenas ADN se separ y as obtener ADN libre de protenas de compactacin (Histonas). 7. Proceda a medir 50 mL de alcohol al 96%, este debe estar helado, y debe ser agregado muy despacio, preferentemente hacer que resbale por las paredes del vaso de precipitado a travs de una bagueta, logrando de esta manera que se formen 2 capas, precipitando el

2. 3. 4. 5.

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8.

9.

ADN. Cuando ya se haya formado la interfase, coloca dentro del vaso de precipitado la bagueta y remueve en forma de remolino, siempre en la misma direccin y con mucho cuidado, podrs observar que a la bagueta se adhieren filamentos blancos (fibras de ADN). Para la identificacin de cidos nucleicos pueden agregarse a los filamentos de ADN difenilamina.

V.

OBSERVACIONES

VI.

CUESTIONARIO 1. Por qu la molcula de ADN se ha visualizado y sedimenta? 2. Cul es la geometra molecular de la molcula de ADN 3. Cmo podra diferencia al ADN del ARN

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PRCTICA No. 06 MICROSCOPA Y PROCEDIMIENTO PARA UNA BUENA ILUMINACIN EN EL MICROSCOPIO

I.

INTRODUCCIN Un Aparato fundamental para la investigacin biolgica ha sido el microscopio, con base en la microscopia, se ha podido escudriar en un mundo extremadamente pequeo. Los antecedentes de los modernos microscopios datan de la Grecia clsica y los rabes quienes ya conocan los mecanismos de la ptica. Pero la aparicin del microscopio compuesto se da en el Renacimiento y fue Galileo Galilei quien acopl dos lentes en un tubo, el mismo que fue perfeccionado a fines del siglo XVI por los hermanos holandeses Jans y Zaccharias Jansen.

COMPETENCIA Revisarn y reconocern la estructura del microscopio compuesto. Aprendern a enfocar una preparacin y las normas para su correcto uso.

II.

PROCEDIMIENTO Durante esta prctica nos familiarizaremos con el manejo del Microscopio ptico, utilizaremos un microscopio compuesto o lumnico, en el que la luz atraviesa la muestra con el material a observar y, a travs de un juego de lentes, llega al ojo del observador una imagen aumentada.

Partes de un microscopio ptico

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Partes del Microscopio ptico Las partes esenciales que componen un microscopio ptico son: Parte mecnica 1. 2. Pie o soporte: sirve como base al microscopio, en l se encuentra la fuente de iluminacin, que puede ser un foco o un espejo. Platina: superficie sobre la que se colocan las preparaciones. En el centro se encuentra un orificio que permite el paso de la luz. Sobre la platina hay un sistema de pinzas que sirven para sujetar el portaobjetos con la preparacin y unas escalas que ayudan a conocer qu parte de la muestra se est observando. La platina presenta 2 tornillos, generalmente situados en la parte inferior de la misma, que permiten desplazar la preparacin sobre la platina, en sentido longitudinal y transversal respectivamente. Tubo: cilindro hueco que forma el cuerpo del microscopio. Constituye el soporte de oculares y objetivos. Revlver portaobjetivos: estructura giratoria que contiene los objetivos. Brazo o asa: une el tubo a la platina. Lugar por el que se debe sujetar el microscopio para trasladarlo de lugar. Tornillo macromtrico o de enfoque grosero: sirve para obtener un primer enfoque de la muestra al utilizarse el objetivo de menor aumento. Desplaza la platina verticalmente de forma perceptible. Tornillo micromtrico o de enfoque fino: sirve para un enfoque preciso de la muestra, una vez que se ha realizado el enfoque con el macromtrico. Tambin desplaza verticalmente la platina, pero de forma prcticamente imperceptible. Es el nico tornillo de enfoque que se utiliza, una vez realizado el primer enfoque, al ir cambiando a objetivos de mayor aumento.

3. 4. 5. 6.

7.

Parte ptica 1. Oculares: son los sistemas de lentes ms cercanos al ojo del observador, situados en la parte superior del microscopio. Son cilindros huecos provistos de lentes convergentes cuyo aumento se resea en la parte superior de los mismos (normalmente 10X en los microscopios que se utilizarn en esta prctica). Dependiendo de que exista uno o dos oculares, los microscopios pueden ser mono o binoculares. Objetivos: son sistemas de lentes convergentes que se acoplan en la parte inferior del tubo, mediante el revlver. En esta estructura se pueden acoplar varios objetivos (ordenados de forma creciente segn sus aumentos, en el sentido de las agujas del reloj). Un anillo coloreado es distintivo de los aumentos de cada objetivo, que tambin van reseados en el lateral del mismo. Algunos objetivos no enfocan bien la preparacin al aire, y se deben de utilizar con un aceite de inmersin (normalmente van marcados con un anillo rojo). Estos objetivos de inmersin no se utilizarn normalmente en estas prcticas. Condensador: sistema de lentes convergentes que captan los rayos de luz y los concentra sobre la preparacin, de manera que proporciona mayor o menor contraste. Se regula en altura mediante un tornillo.

2.

3.

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4.

Fuente de iluminacin: en los microscopios a utilizar, el aparato de iluminacin est constituido por una lmpara halgena de bajo voltaje (12V) situada en el pie del microscopio. La luz procedente de la bombilla pasa por un reflector que enva los rayos luminosos hacia la platina. Diafragma o iris: sobre el reflector de la fuente de iluminacin. Abrindolo o cerrndolo permite graduar la intensidad de la luz. Transformador: ya que el voltaje de la bombilla es menor que el de la red, es necesario para enchufar el microscopio. Algunos modelos ya lo llevan incorporado en el pie del microscopio. Adems, el transformador dispone de un potencimetro para regular la intensidad de la luz.

5. 6.

Montaje y enfoque de una preparacin microscpica Antes de observar la preparacin al microscopio, esta debe de ser montada sobre vidrio. Para ello existen dos piezas de vidrio denominadas portaobjetos, que, como su nombre indica, es el soporte sobre el que va la muestra, y cubreobjetos (cubre) que siempre ha de colocarse sobre la muestra. Una vez colocada la muestra en el porta, se debe aadir una gota de agua, o de la solucin acuosa pertinente, y antes de colocar el cubre, evitar interfaces agua-aire, que provocan zonas ciegas. Para enfocar la preparacin se ha de seguir de forma minuciosa el siguiente protocolo: Consejos prcticos En los microscopios que requieren transformador, el enchufe a la red y desenchufe debe hacerse sobre el transformador, y nunca debe desenchufarse el microscopio del transformador. Se debe mantener apagada la luz del microscopio siempre que no se est utilizando, ya que la vida media de la bombilla es corta. Colocar la preparacin sobre la platina de forma que la estructura a observar quede en el orificio central de la platina. Siempre se debe comenzar el enfoque con el objetivo de menor aumento. Colocar el objetivo de menor aumento cuyo amplio campo visual facilita el hallazgo de estructuras importantes. Subir la platina accionando el tornillo macromtrico y mirando la preparacin desde fuera hasta alcanzar el tope superior. En ningn caso tocar la preparacin con los objetivos. Mirando por los oculares, bajar lentamente la platina con el tornillo macromtrico hasta conseguir ver el objeto lo ms ntido posible. Ajustar el enfoque con el tornillo micromtrico hasta verlo claramente.

Cuidados del microscopio: Es importante tener en cuenta los siguientes cuidados y precauciones al usar el microscopio:

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Cuando se transporte el microscopio tmelo siempre con las dos manos. Nunca tenga objetos adicionales en sus manos. Al colocar el microscopio sobre la mesa, sitelo a unos 10 o 15 cm del borde. Si se requiere limpiar los lentes utilice slo el papel y solucin destinada para tal fin. No utilice ningn otro tipo de papel. Nunca use el lente de inmersin si no se le ha solicitado hacerlo. Recuerde que se requiere el uso de aceite, y si no lo hace puede daar el lente. Cuando termine de trabajar deje el microscopio en el lente objetivo de 4X o 10X.

BUENA ILUMINACIN EN EL MICROSCOPIO 1. Utiliza el objetivo de menor aumento. 2. Lleva la lente frontal del condensador a una distancia de 1 a 2 mm de la platina. 3. Cercirate que el diafragma este abierto. 4. Dirige el espejo a la fuente de luz. 5. Observa por el ocular y desplaza el brazo girando con una de tus manos el macromtrico, con la otra mano corrige la direccin del espejo hasta obtener un campo claro sin penumbra.

ENFOQUE 1 1. Toma una lamina portaobjeto limpia. Estas lminas y los cubreobjetos siempre debes tomarlos por los bordes usando tus dedos pulgar e ndice. 2. Coloca el cubreobjetos sobre hoja de papel bond extendida sobre la mesa de trabajo. 3. Con un gotero coloca en el centro del portaobjeto, una pequea gota de agua y sobre esta una pequesima hebra de lana, cubre la muestra con el cubreobjetos y seca los bordes con papel toalla o papel filtro.

ENFOQUE 2 1. Corta un pedazo de papel peridico y coloca la e sobre el portaobjeto limpio y seco. Asegrate que la letra este derecha. Con ayuda de un gotero coloca una gota de agua sobre el papel, y cuando ste se humedezca, coloca el cubreobjetos sobre el evitando que se formen burbujas, (este tipo de lminas preparadas se les denominan preparaciones hmedas). 2. Coloca una de las lminas sobre la platina y asegrala con las pinzas del sistema de desplazamiento que tiene la platina (averigua que funcin tiene este sistema de desplazamiento). 3. Procura que la muestra que has preparado se encuentre en el centro del orificio de la platina. 4. Recuerda que todo esto lo ests haciendo en el microscopio que iluminaste previamente por lo tanto, el objetivo que estas utilizando es el de menor aumento (10X).

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Resolucin del microscopio La resolucin (r) es directamente proporcional a la longitud de onda e inversamente proporcional a la AN (Apertura Numrica). La resolucin mxima de un microscopio de campo claro es de 0,25, es decir con este microscopio no podemos distinguir estructuras menores que este tamao. Resolucin y Magnificacin Mximas

Instrumento ptico Ojo Humano Microscopio ptico Microscopio electrnico

Resolucin 0,1mm 0,2 u 0,1 nm

Magnificacin 2500 1000000

Utilizacin del Microscopio Compuestos de Campo Claro 1. Gira el tornillo Macromtrico y lleva el objetivo a una distancia de 1 a 2 mm entre el objetivo y la lmina preparada ESTA OPERACIN DEBES HACERLA SIN COLOCAR TU OJO SOBRE EL OCULAR. 2. Ahora coloca tu ojo izquierdo sobre el ocular mantn el otro ojo abierto. Si eres zurdo, coloca tu ojo derecho y ten abierto su ojo izquierdo durante todo el tiempo que dura la observacin. NO COMETAS EL ERROR DE CERRAR O SEMICERRRAR ALGUNO DE TUS OJOS. 3. Una vez realizado lo anterior empieza a desplazar hacia arriba el tubo ocular, utilizando el tornillo Macromtrico hasta que empieces a visualizar el espcimen que se encuentra en la muestra que has preparado. Este enfoque se llama ENFOQUE GRUESO. 4. Empieza girar, con tus dedos pulgar e ndice de ambas manos, el tornillo micromtrico hasta que puedas observar ntidamente el espcimen, ESTO ES EL ENFOQUE FINO, que se ajusta a la visin de cada observador. Explica como observas la hebra de lana. En que posicin la letra e a que se debe lo que estas observando. 5. Rota el revlver, de manera que cambias de objetivo. 6. Manipula el tornillo micromtrico y enfoca nuevamente el espcimen que estas observando. Sigues observando los especmenes de la misma manera que con el objetivo de menor aumento. Que cambios notas ahora explicarlos a que se deben. MANTENIMIENTO Y PRECAUCIONES 1. Al finalizar el trabajo, hay que dejar puesto el objetivo de menor aumento en posicin de observacin, asegurarse de que la parte mecnica de la platina no sobresale del borde de la misma y dejarlo cubierto con su funda. 2. Cuando no se est utilizando el microscopio, hay que mantenerlo cubierto con su funda para evitar que se ensucien y daen las lentes. Si no se va a usar de forma prolongada, se debe guardar en su caja dentro de un armario para protegerlo del polvo.

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3. Nunca hay que tocar las lentes con las manos. Si se ensucian, limpiarlas muy suavemente con un papel de filtro o, mejor, con un papel de ptica. 4. No dejar el portaobjetos puesto sobre la platina si no se est utilizando el microscopio. 5. Despus de utilizar el objetivo de inmersin, hay que limpiar el aceite que queda en el objetivo con pauelos especiales para ptica o con papel de filtro (menos recomendable). En cualquier caso se pasar el papel por la lente en un solo sentido y con suavidad. Si el aceite ha llegado a secarse y pegarse en el objetivo, hay que limpiarlo con una mezcla de alcohol-acetona (7:3) o xilol. No hay que abusar de este tipo de limpieza, porque si se aplican estos disolventes en exceso se pueden daar las lentes y su sujecin. 6. No forzar nunca los tornillos giratorios del microscopio (macromtrico, micromtrico, platina, revlver y condensador). 7. El cambio de objetivo se hace girando el revlver y dirigiendo siempre la mirada a la preparacin para prevenir el roce de la lente con la muestra. No cambiar nunca de objetivo agarrndolo por el tubo del mismo ni hacerlo mientras se est observando a travs del ocular. 8. Mantener seca y limpia la platina del microscopio. Si se derrama sobre ella algn lquido, secarlo con un pao. Si se mancha de aceite, limpiarla con un pao humedecido en xilol. 9. Es conveniente limpiar y revisar siempre los microscopios al finalizar la sesin prctica y, al acabar el curso, encargar a un tcnico un ajuste y revisin general de los mismos.

CUESTIONARIO: 1.- Investigue que otros tipos de microscopios existen y descrbalos brevemente.

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PRCTICA N 07

OBSERVACIN DE CLULAS ANIMALES Y VEGETALES I. INTRODUCCIN Las clulas eucariontes de protistas, hongos, plantas y animales, son ms grandes y complejas que las clulas procariontes. Se caracterizan por poseer un ncleo organizado donde se encuentra en ADN y un complejo sistemas de membranas internas, que subdividen a la clula en compartimentos especializados e integrados, que cumplen diversas funciones importantes para la vida celular. Cada compartimento contiene sus propias enzimas y molculas. La organizacin de compartimentos separados por membranas permite a la clula llevar a cabo muchas reacciones qumicas incompatibles en forma simultnea.

CLULA ANIMAL. 1. Presenta una membrana celular simple. 2. La clula animal no lleva plastidios. 3. El nmero de vacuolas es muy reducido. 4. Tiene centrosoma. 5. Presenta lisosomas 6. No se realiza la funcin de fotosntesis. 7. Nutricin hetertrofa.

CLULA VEGETAL 1. Presenta una membrana celulsica o pared celular, rgida que contiene celulosa. 2. Presenta plastidios o plastos como el cloroplasto. 3. Presenta numerosos grupos de vacuolas. 4. No tiene centrosoma. 5. Carece de lisosomas. 6. Se realiza funcin de fotosntesis

COMPETENCIA Identificarn y reconocern una clula eucariticas. Reconocern las partes principales de este tipo de clula. Diferenciarn entre la clula animal y vegetal.

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II. MATERIALES Y MTODOS Epitelio de mucosa bucal Papa Hisopos Portaobjetos y cubreobjetos Azul de metileno Lugol Mechero Pinza de madera Piceta con agua destilada Bistur y pinzas Microscopio compuesto Papel lente

Observacin de clulas del epitelio de la mucosa bucal

El epitelio de la mucosa bucal est constituido por clulas de un contorno irregular que son incoloras a la luz blanca, por lo que, para su observacin es preciso realizar un proceso previo de tincin, en este caso c on azul de metileno, que permitir observar un citoplasma granulado y un ncleo claramente diferenciado.

Mtodo de preparacin de la muestra: Raspar suavemente la cara interior de tu mejilla con un hisopo y deposita su contenido en un portaobjetos extendindolo con cuidado. Fija la muestra a la llama para estabilizar las estructuras y adherirlas al portaobjeto. Para ello, con mucho cuidado coge el extremo exterior del portaobjeto y pasa su cara inferior por encima de la llama, con movimientos circulares y rpidos, ten la precaucin de no calentarlo demasiado para no quemar las clulas. Aade 1-2 gotas de azul de metileno sobre las clulas fijadas y dejar teir durante 3 minutos. Lava suavemente la preparacin para eliminar el exceso de colorante. Para ello, colocar el porta en pendiente bajo el grifo y dejar caer lentamente un chorro fino de agua o con una piceta agrega suavemente un chorro de agua. Seca la parte inferior del portaobjeto y colocar sobre la muestra fijada y coloreada un cubreobjetos. Observa la preparacin y dibjela.

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Observacin de plastidios de las clulas del tubrculo de papa Los leucoplastos son organelas incoloras, cuya funcin es almacenar distintos tipos de sustancias. Los amiloplastos de la papa, almacenan almidn que se depositan en capas sucesivas, por lo que poseen de forma de concha de mejilln, donde se distingue un punto muy refringente en la punta, llamado hilo (donde se acumula mayoritariamente la amilosa), y unos anillos de crecimiento que en conjunto constituyen la loncilla (donde se acumula mayoritariamente la amilopectina). Debido a la presencia de almidn, los amiloplastos se pueden teir con lugol.

Mtodo de preparacin Raspa suavemente con un bistur la superficie de un trozo de papa pelada, y extendiendo esa capa delgada sobre un portaobjetos, solo necesitas una pequea cantidad del raspado. Colcale una gota de agua y luego un cubreobjetos. Observar al microscopio. Una vez estudiada la estructura de los amiloplastos procede a levantar el cubreobjetos y aade una gota de lugol (diluido 1/10), volver a colocar el cubreobjetos y observa la nueva preparacin.

IV. OBSERVACIONES

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V. CUESTIONARIO 1. Indique las diferencias entre clula animal y vegetal. 2. Cules son las caractersticas ms saltantes entre una clula procaritica y una eucaritica? 3. Por qu empleamos azul de metileno, en la observacin de clulas?

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PRCTICA N. 08 ORGANELAS CELULARES E INCLUSIONES CITOPLASMTICAS I. INTRODUCCION El citoplasma se presenta como una sustancia coloidal en donde se encuentran una gran variedad de estructuras llamadas organelas porque desempean alguna funcin de importancia en la clula. Dentro de ellas podemos sealar por ejemplo: Las mitocondrias encargadas de la respiracin celular, Los lisosomas de la digestin celular, El retculo endoplasmtico que se encarga de la sntesis de muchos compuestos,

1. Nucleolo 5: Retculo endoplasmtico rugoso 9: Mitocondrias 2: Ncleo 6: Aparato de Golgi 10: Vacuolas 3: Ribosoma 7: Microtbulos 12: Lisosomas 4: Vescula 8: Microfilamentos 13: Centriolos

Las organelas que presentan las clulas vegetales como los plastidios, cloroplastos, leucoplastos y las inclusiones citoplasmticas (drusas, cistolitos), etc.

COMPETENCIA Conocern las diferentes organelas y entendern su funcin. Diferenciarn las organelas tpicas de la clula vegetal y animal.

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II. MATERIALES Y METODOS Microscopio compuesto Papel lente Laminas y laminillas Gotero Agua destilada en piceta Hojas de afeitar y/o bistur Pinzas finas Lugol Verde de Janus Aceite comestible, papa. aj amarillo, zanahoria. Elodea, semillas de higuerilla, hojas grandes de caucho Harina de maz, trigo, arroz y avena

III. PROCEDIMIENTO OBSERVACION DE LA MITOCONDRIA; en clulas del epitelio bucal. Obtenga la muestra en una lmina limpia, mediante raspado suave de la cavidad bucal. Realice el frotis con la ayuda de otra lmina Deje secar al medio ambiente Lave con agua corriente. Deje secar al medio ambiente Observe al microscopio 10 X y 40X

OBSERVACION DE CROMOPLASTOS, en clulas de zanahoria y aj amarillo

Obtenga cortes finos de zanahoria y aj amarillo Colquelos en laminas separadas Agregue una gota de agua en cada uno de ellos Cubra con laminillas Observe al microscopio 10X y 40X

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OBSERVACION DE CLOROPLASTOS, en clulas de Elodea Seleccione una hoja joven del extremo de una rama de crecimiento Con una pinza coloque la hoja sobre la lmina. Agregue una gota de agua Cubra con la laminilla Observe al microscopio 10 X y 40X

OBSERVACION DE LEUCOPLASTOS, en harina de maz, trigo, avena y arroz. Realice preparaciones hmedas de las diferentes muestras Cubra con la laminilla Observe las distintas variedades de leucoplastos.

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IV. CUESTIONARIO 1. Enumere y describa brevemente la funcin de cada organela de la clula animal. 2. Enumere y describa brevemente la funcin de cada organela de la clula vegetal.

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PRCTICA N 09 ORGANISMOS VIVOS - BACTERIAS

I.

INTRODUCCIN Las bacterias son organismos unicelulares microscpicos que varan de tamao desde 0,1 m de ancho a ms de 5m de dimetro. Tienen una organizacin celular simple con una pared celular rgida y no presentan organelos (mitocondrias, aparato de Golgi, retculo endoplasmtico etc.), presentan un solo cromosoma y habitan en una variedad de ambientes. Las formas ms comunes son: los esfricos u ovales llamados cocos, los cilndricos en forma de bastoncitos llamados bacilos, en forma de coma los vibrios, bastoncitos en espiral los espirilos, miceliales etc. Otras se mantienen en grupos o racimos a manera de racimos de uvas o en cadenas largas.

COMPETENCIA Demostrarn la presencia de microorganismos que se encuentran en ambientes muy diversos como el agua, leche, suelo, sustancias orgnicas en descomposicin o viven como parsitos del hombre y animales, usando para ello indicadores qumicos y tcnicas de coloracin que permitan su observacin al microscopio.

II.

MATERIALES Y METODOS 7 Tubos de ensayo estriles con tapa 1 Pipeta 10mL, 1 pipeta de 1mLcon propipeta Gradilla para tubos 1 Lpiz marcador de vidrio Azul de metileno Aceite de cedro Papel lente Papel metlico Laminas y laminillas

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Batera GRAM ( violeta de genciana, alcohol acetona, lugol, fucsina bsica) Puente de tincin Incubadora a 37 C Microscpio binocular con objetivo de 100X Tapones de algodn Palitos mondadientes 5 muestras de leche de diferentes procedencias

II. PROCEDIMIENTO

A) PRUEBA DE LA REDUCTASA FUNDAMENTO: las bacterias poseen una variedad de enzimas como las reductasas. La deshidrogenada acta sobre el sustrato (leche) liberando hidrgenos que son captados por el azul de metileno. Para estimar el numero aprox. De microorganismo en la leche cruda se utiliza un mtodo indirecto basado en la reduccin del colorante azul de metileno que es un indicador de oxido - reduccin (es azul cuando est oxidado e incoloro cuando esta reducido). La actividad reductora de los microorganismos se manifiesta por el tiempo de la reduccin del colorante a un Temperatura de 37 o 38 C. Procedimiento: Obtener 5 muestras de leche de diferente procedencia (leche de vaca fresca sin hervir, leche de vaca fresca hervida, leche fresca destapada guardada por varios das, leche de cabra, leche pasteurizada). Colocar aspticamente 10 mL de cada muestra en cada tubo de ensayo. Rotular cada tubo usando el lpiz marcador. Agregar 0.5 mL. de azul de metileno. Tapar los tubos. Cubrir con papel aluminio. Dejar reposar por 5 minutos para que acte la reductasa. Incubarlos a 37 C. En posicin vertical. Invirtiendo cada media hora. Observar e interpretar las muestras considerando la decoloracin producida en las muestras de leche. Utilizar el siguiente cuadro para la interpretacin:

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Tiempo de reduccin del azul de metileno 5 horas (300 minutos) 2 a 4 horas ( 60 a 240 horas) Menos de 2 horas (120minutos) Menos de 20 minutos

Contenido microbiano / Calidad 100 000 a 200 000 / BUENA 200 000 a 2 millones/ ACEPTABLE 2 a 10 millones./ REGULAR MALA

RESULTADOS:

TIPO DE LECHE (10 mL) + 0.5 mL DE AZUL DE METILENO TUBO 1 TUBO 2 TUBO 3 TUBO 4 TUBO 5 TUBO CONTROL 10 ml de leche + 0.5 ml de agua destilada

TIEMPO OBSERVACIONES
(MINUTOS)

B) COLORACIN GRAM FUNDAMENTO: el mtodo se basa en la capa tintorial de las bacterias y las divide en 2 grandes grupos GRAM (+) y GRAM (-), cuando las bacterias toman el colorante violeta de genciana o cristal violeta retienen el colorante despus del tratamiento con lugol y lavado con alcohol acetona, se les denomina gram positivas y presentan una coloracin violeta. Si las bacterias no retienen el colorante despus del tratamiento con lugol y lavado con alcohol acetona toman el colorante de contraste (fucsina bsica), dando un color rojo grosella y se le denomina gram negativas. Procedimiento: Con el palillo mondadientes obtenga muestras de sarro dentario Extienda la muestra sobre la lmina. Dejar secar al medioambiente

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Adicionar a la muestra violeta de genciana por 2 minutos Lavar con agua corriente Cubrir con lugol por 1 minuto Lavar con alcohol acetona Lavar con agua corriente Cubrir con fucsina bsica por 1 minuto. Secar la muestra al medio ambiente Observar al microscopio (Objetivo 100X), usando aceite de inmersin. Identifique las diferentes formas de microorganismos de acuerdo a su morfologa.

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IV.

OBSERVACIONES

V.

CUESTIONARIO 1.- Cules son las formas de las bacterias que observ en la prctica? Haga un esquema. 2.- Cul es la razn por la que las bacterias Gram (-) toman la coloracin grosella? 3.- Cual es la razn para que los microorganismos decoloren el azul de metileno?

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PRCTICA N 10 PERMEABILIDAD CELULAR

I.

INTRODUCCION La membrana celular juega un rol fundamental en la regulacin del contenido de la clula, pues tanto los elementos nutritivos como los productos de desecho deben pasar a travs de ella. A fin de comprender estos intercambios de sustancias, definiremos la difusin como el movimiento de las molculas de una zona de alta concentracin a otra de menor concentracin.

Existe con respecto a esto, dos casos muy particulares: la dilisis en la cual se produce la difusin de molculas disueltas o de soluto, y la smosis, en la cual se produce la difusin de molculas de agua a travs de una membrana semipermeable. La presin ejercida por las molculas de agua en su tendencia a difundir durante la osmosis se llama presin osmtica. Las clulas se hallan por lo general rodeadas de un medio liquido, si en este medio la concentracin de sustancias es mayor que la existente dentro de la clula, el medio se denomina hipertnico y el agua tiende a salir de la clula, producindose as la crenacin o plasmlisis celular. Si el lquido extracelular tiene menor concentracin de sustancias que el interior de la clula, el medio se denomina hipotnico, y el agua tiende a ingresar a la clula producindose el hinchamiento de sta. Cuando la concentracin de sustancias en el medio extracelular es igual a la del interior celular, el medio se denomina isotnico y no se produce un desplazamiento neto de molculas de agua manteniendo la clula su forma normal.

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COMPETENCIA Reconocer los medios extra e intracelular. Estudiar y entender los procesos de smosis y de dilisis y diferenciarlos. Comprender cmo los diferentes cambios de concentracin de soluciones pueden afectar a las clulas vivas.

II.

MATERIALES Y METODOS Catfilo de cebolla y una zanahoria grande 500 gr. de azcar granulada Lancetas de puncin Bistur Soluciones salinas de 0.2, 0.9 y 5% con gotero para cada concentracin Algodn y alcohol yodado Laminas y laminillas Vaso de precipitado de 250ml Papel lente Mondadientes Cuchara Agua destilada Microscopio compuesto Plumn indeleble para vidrios Pinzas finas

II.

PROCEDIMIENTO

A)

EXPERIMENTO A Extraer la parte central de la zanahoria con la ayuda de un bistur y cuchara. Colocar dentro de ella el azcar granulado. Colocar la zanahoria con el azcar dentro de un vaso de precipitado grande y mantenerla erguida en posicin vertical con ayuda de los mondadientes. Colocar agua destilada por fuera de la zanahoria, dentro del vaso de precipitado Esperar unas 2 horas para observar el proceso de difusin.

B) EXPERIMENTO B Colocar una capa de epidermis de catfilo de cebolla, en cada una de 3 lminas.

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Agregar a la primera lmina una gota de solucin salina al 0.2%, a la segunda una gota de solucin salina 0.9% y a la tercera una gota de solucin salina al 5%.

Lmina 1 01 capa + 0.2 % SS

Lmina 2 01 capa + 0.9 % SS

Lmina 3 01 capa + 5 % SS

Cubrir con una laminilla Observar al microscopio 10X y 40X: 100 X 400X

Lminas a observar

Lmina 1 (0.2% SS)

Lmina 2 (0.9% SS)

Lmina 3 ( 5 % SS)

C)

EXPERIMENTO C Desinfectar el dedo pulgar con un algodn humedecido en alcohol yodado. Con una lanceta de puncin estril obtener la sangre. Colocar una gota de sangre en cada una de 3 lminas. Agregar a la primera lmina una gota de solucin salina al 0.2%, a la segunda una gota de solucin salina 0.9% y a la tercera una gota de solucin salina al 5%.

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Lmina 1 01 gota de sangre + 0.2 % SS

Lmina 2 01 gota de sangre + 0.9 % SS

Lmina 3 01 gota de sangre + 5 % SS

Observar al microscopio a 10X y 40X Cubrir con una laminilla 100 X 400X

Lminas a observar

Lmina 1 (0.2% SS)

Lmina 2 (0.9% SS)

Lmina 3 ( 5 % SS)

IV

CUESTIONARIO 1. Cul es la composicin qumica de la membrana celular? 2. Qu diferencias existen entre: hemlisis y plasmlisis; y crenacin y turgencia? 3. Semejanzas y diferencias entre osmosis y difusin facilitada

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UNIVERSIDAD LE CORDON BLEU - PER Biologa General ________________________________________________________________________________ PRCTICA N 11 OBSERVACIN DEL NCLEO INTERFSICO DE LAS CLULAS SANGUNEAS

I.

INTRODUCCION

El ncleo es el compartimiento de las clulas eucariticas donde se encuentran las molculas biolgicas portadoras de la informacin gentica: ADN y ARN, asociadas con protenas. El ADN asociado a protenas determina la asociacin supramolecular conocida como CROMATINA. Cuando el ARN se asocia con protenas forma el NUCLELO, que tambin esta integrado por el ADN ncleolar, est delimitado por la envoltura nuclear, compuesta por dos membranas concntricas; una interna y otra externa, que contiene poros, a travs de los cuales se realiza el intercambio de sustancias ncleo citoplasma. Durante su ciclo vital, el ncleo sufre cambios morfofisiolgicos muy importantes que permiten mantener la estabilidad celular (ncleo interfsico) por un lado y tambin originar otras clulas (ncleo en divisin). La forma del ncleo interfsico determina la forma de la clula, las clulas cbicas tienen un ncleo redondo, las clulas alargadas tienen un ncleo ovalado, las clulas aplanadas tienen un ncleo plano. Sin embargo existen una variedad de formas de ncleo en clulas altamente especializadas. Mediante la tcnica de coloracin Wright o Giemsa, podremos reconocer los diferentes tipos de ncleos.

COMPETENCIA Reconocer las diferentes formas de ncleos y su ubicacin en las clulas sanguneas. Aplicar tcnicas para coloracin e identificacin.

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UNIVERSIDAD LE CORDON BLEU - PER Biologa General ________________________________________________________________________________ II. MATERIALES Y MTODOS

Materiales: Colorante Wright o Giemsa Alcohol yodado Alcohol etlico Piceta con agua destilada Lancetas de puncin Lminas cubre y portaobjeto Algodn Blsamo de Canad con gotero Microscopio Binocular

Procedimiento: 1. Con ayuda de una lanceta desechable, realice una puncin del dedo anular de la mano izquierda, previa desinfeccin con alcohol y algodn. 2. Coloque una gota de sangre en la lmina portaobjeto. 3. Haga un frotis extendiendo la gota de sangre con el borde de otro portaobjetos, formando un ngulo de 45 grados. 4. Deje secar al medio ambiente por 5 minutos. 5. Adicione 2 a 3 gotas de colorante Wright y deje reposar la muestra por 10 minutos, observando que la muestra adquiera la intensidad del colorante. 6. Lave con mucho cuidado con agua destilada, deje secar y observe al microscopio. 7. Identifique los diferentes tipos de clulas nucleadas sanguneas (leucocitos): enucleadas, mononucleadas y polimorfos nucleares.
Utilice el objetivo de 100X (con ACEITE DE INMERSIN O BLSAMO DE CANAD) para la observacin de clulas y ncleos.

III:

OBSERVACIONES Hemates

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Leucocitos

IV. CUESTIONARIO: 1. 2. 3. 4. Qu funciones desempea un eritrocito? Qu es un hematocrito y qu valores son los normales? Define que es un hemograma y qu valores tendra una persona con una infeccin viral Indique la funciones que desempean los siguiente elementos formes de la sangre: a. b. c. d. e. f. g. h. i. 5. 6. Hemate __________________________________________________ Neutrfilo: _________________________________________________ Eosinfilo: ________________________________________________ Basfilo: __________________________________________________ Monocito: _________________________________________________ Linfocito: __________________________________________________ Natural Killer: ______________________________________________ Plaquetas: ________________________________________________ Plasma: __________________________________________________ Cul es la composicin qumica de la membrana nuclear? Qu formas de ncleos predominan en los leucocitos humanos

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UNIVERSIDAD LE CORDON BLEU - PER Biologa General ________________________________________________________________________________ PRCTICA N 12 CICLO CELULAR: IDENTIFICACIN DE MITOSIS EN RACES

I. INTRODUCCIN La mitosis es un proceso que ocurre en el ncleo de las clulas eucariotas, consistente en el reparto equitativo del material hereditario (ADN) propio de la clula de origen (clula madre). Normalmente concluye con la formacin de dos ncleos separados (cariocinesis), seguido de la particin del citoplasma (citocinesis), para formar dos clulas hijas. La mitosis completa, que produce clulas genticamente idnticas, es el fundamento del crecimiento, de la reparacin tisular y principalmente parte del mecanismo de reproduccin asexual. Otro tipo de divisin se denomina meiosis y es un proceso que, aunque comparte mecanismos con la mitosis, no debe confundirse con ella ya que es propio de la divisin celular de los gametos (produce clulas genticamente distintas y, combinada con la fecundacin, es el fundamento de la reproduccin sexual y la variabilidad gentica).

COMPETENCIAS Comprobar que la mitosis es un medio para asegurar la distribucin precisa de la informacin gentica de una generacin celular a la siguiente. Comprobar que la divisin celular es adems un proceso que permite el crecimiento. Identificar, nombrar y describir los eventos que ocurren durante las fases del ciclo celular. Diferenciar y reconocer el comportamiento y distribucin de los cromosomas durante la mitosis.

Materiales Races de bulbos de cebolla o ajos. Microscopio ptico compuesto. Agujas de diseccin. Mechero de alcohol Guantes descartables Bistur y tijeras Laminas portaobjetos y cubreobjetos Papel de filtro Papel lente Orcena actica clorhdrica Solucin de alcohol cido actico 3:1 Solucin de HCl 1N/alcohol 95% 1:1

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UNIVERSIDAD LE CORDON BLEU - PER Biologa General ________________________________________________________________________________ Solucin de Carnoy (alcohol 60% - cido actico glacial 10% - cloroformo 30 %) Placas Petri

PROCEDIMIENTOS: Desarrollo de Races 1. Coloque bulbos de cebollas o ajos en vasos pequeos con agua, de tal manera que la parte inferior toque el agua unas 72 horas antes de la prctica, el agua debe removerse cada 24 horas. 2. El frasco debe ser opaco o debe ser cubierto con una cartulina negra, con la finalidad de dar oscuridad a las races. 3. Las races que se desarrollan sern utilizadas durante la prctica.

PREPARACIN DE LAS LMINAS PARA OBSERVAR LAS DIFERENTES FASES DE LA MITOSIS Tcnica 1. Corta trozos de un centmetro de estas races y colocarlos en fijador al menos 24 horas. El lquido fijador puede ser: Farmer (alcohol 75 % - cido actico glacial 25 %) o Carnoy (alcohol 60% - cido actico glacial 10% - cloroformo 30 %). 2. Coloca los pices en tubos de ensayo o placas petri con cido clorhdrico al 5% y calintalo hasta antes de la ebullicin (no ms de 1 minuto) vas a observar el desprendimiento de un vapor blanco. Luego enguada la muestra con abundante agua. 3. Sobre un portaobjeto colocar una gota de colorante. 4. Corta 2mm del pice, colocarlo sobre la gota del colorante y realiza la tcnica del squash. 5. Procede a observar al microscopio, identifica y dibuja las distintas fases mitticas. III. OBSERVACIONES

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UNIVERSIDAD LE CORDON BLEU - PER Biologa General ________________________________________________________________________________ IV. CUESTIONARIO 1. Realiza un cuadro comparativo entre la mitosis vegetal y animal 2. Qu le beneficia a un organismo realizar el proceso meitico? 3. Indique los fenmenos ms importantes que se realizan durante las fases de la mitosis 4. En las siguientes imgenes indique que etapas de la mitosis se observan y por qu

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UNIVERSIDAD LE CORDON BLEU - PER Biologa General ________________________________________________________________________________ PRCTICA N 13 IDENTIFICACIN DE LA CROMATINA SEXUAL

I.

INTRODUCCIN Gracias a los trabajos experimentales en Neurofisiologa realizados por Barr y Bertram (1949), se logr observar por primera vez las diferencias morfolgicas en las clulas de gatas y gatos y de esta manera determinar las diferencias entre las clulas masculinas y las femeninas durante la interfase. Estos investigadores lograron identificar que las clulas femeninas (ovocitos) de la gata presentaban un pequeo corpsculo de 1 2 m de dimetro, adherido a la membrana nuclear, que no aparece en las clulas masculinas normales y que durante mucho tiempo se denomin corpsculo de Barr. Por las relaciones que guarda con la presencia de los cromosomas X, a este cromocentro se le llama actualmente cromatina X. Esta investigacin permiti realizar las mismas observaciones en tejidos de otros organismos obteniendo resultados parecidos y logrando el mejoramiento del mtodo de estudio. Posteriormente esta tcnica permiti la observacin de esta cromatina en individuos sanos y enfermo, determinndose algunos individuos presentaban alteraciones o fallas en la diferenciacin sexual con sndromes como el Turner y Klinelfelter. El perfeccionamiento de este mtodo ha permitido que los investigadores estudien la gran diversidad de las clulas y principalmente la diferenciacin de la cromatina sexual.

COMPETENCIA Observar y diferenciar la cromatina sexual en clulas humanas masculinas y femeninas. Reconocer el cuerpo o corpsculo de Barr en clulas de la mucosa bucal. Comprender la importancia de la cromatina sexual en aquellos sndromes que cursan con problemas de diferenciacin sexual. II. MATERIALES Hisopo de mango largo estril Solucin fijadora: 3 partes de etanol al 95% + 1 parte de cido actico glacial. Cubetas de coloracin Colorante de Aceto-orcena (1 g. orcena + 45 mL de cido actico concentrado; caliente hasta ebullicin, deje enfriar y filtre). Papel filtro Portaobjetos y cubreobjetos Gasa estril (2 paquetes)

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III. PROCEDIMIENTO 1. Limpie la mucosa de la cavidad oral con un pedazo de gasa estril, es recomendable que enjuague previamente la cavidad bucal con agua. 2. Debe mantener la boca abierta y disponer la lengua en el lado opuesto al que va a ser frotado. 3. Para el frotis de la mucosa se utiliza el hisopo estril. Este debe hacerse con presin moderada, asegurndose de obtener una capa de material blanquecino. 4. El material del hisopo se extiende delgada y suavemente sobre un portaobjetos y sta se sumerge inmediatamente en la solucin fijadora. 5. Es recomendable que se obtengan tres portaobjetos de cada lado de la boca. 6. Mantenga por lo menos los portaobjetos sumergidos por 10 min, aunque pueden quedarse en el fijador hasta una semana. 7. Los portaobjetos se colocan en una cubeta de coloracin y el colorante acetoorcena se aplica por 10 minutos. 8. Seque al ambiente, coloque un cubreobjetos sobre la muestra y observe. 9. Observe primero con el objetivo de menor aumento, para buscar reas donde las clulas estn ms extendidas. 10. Identifique los cuerpos de Barr en el interior del ncleo celular (estructuras ligeramente alargadas o plano-convexas, adyacentes a membrana nuclear de coloracin oscura en comparacin con el resto del ncleo).
Utilice el objetivo de 100X (con ACEITE DE INMERSIN O BLSAMO DE CANAD)

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IV. CUESTIONARIO 1. Qu diferencias existen entre los sndromes de Turner y Klinelfelter, indique si estn relacionados con la cromatina sexual. 2. Que otros mtodos diferentes al utilizado en esta prctica, se pueden utilizar para identificar cromatina sexual? 3. Investiga cul es la importancia de la determinacin de cromatina sexual.

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REVISIN BIBLIOGRFICA

1. Gutirrez, J.M 1990. Biologa, unidad, diversidad y continuidad de los seres vivos. Investigaciones de laboratorio y de campo.1ra ed. Mxico. 2. Mlaga, O.; Lazo, F. 1995 Gua de prcticas de Biologa. Facultad de Ciencias Biolgicas. UNMSM.

3. Ramrez Luna, J.; Reyes Lpez A. 2003 Manual de prcticas de Biologa. 1ra ed. Mxico 122p. 4. Universidad de Cartagena. Manual de prcticas de Gentica. 2 da. edicin. Colombia. 2008 5. Manual de Prcticas de Biologa Molecular de la Clula. Segal, Claudia Andrea & Ortega Lule Gustavo. 1era. Edicin. UNAM. Mxico. 2005 6. Hanna Instruments. General Catalog, 2003. Volumen 26.

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