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Tema 12. Recuperación de los Productos Finales 1.- Introducción 2.

- Separación de las partículas
Floculación y Flotación Filtración Centrifugación

1.- Introducción
Recuperación (downstream processing): es un término colectivo, útil para todas las etapas que se requieren a fin de recuperar los productos útiles de cualquier tipo de proceso industrial. Una etapa de recuperación cambia la pureza y/o la concentración de un metabolito. En el proceso ideal de recuperación se optimizan ambos parámetros. Técnicas utilizadas en la recuperación de productos: extracción, destilación, diálisis, cristalización, precipitación, desecación (Ingeniería Química) Recuperación de Material Biológico: Los “bioproductos” frecuentemente son compuestos muy lábiles (pH, temperatura, fuerza iónica, etc.) No existe una operación única, ideal o universal, ni siquiera secuencias de operaciones que puedan ser recomendadas.

3.- Desintegración de los microorganismos
Métodos químicos Métodos biológicos Métodos físicos

4.- Aislamiento y Purificación
Cromatografía Extracción Cristalización y precipitación Desecación

5.- Rendimiento

Procesos de separación que utilizan diferentes propiedades físicas y químicas de las partículas y las moléculas

Metabolitos Intracelulares: ácidos nucleicos, vitaminas, enzimas, antibióticos (griseofulvina) Metabolitos Extracelulares: aminoácidos, ácido cítrico, alcohol, enzimas (amilasas, proteasas) antibióticos (penicilina, estreptomicina...) Metabolitos Intra y Extracelulares: vitamina B 12

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2.. hidrocoloides minerales La Flotación es el proceso reverso a la floculación La flotación se consigue introduciendo gas en el líquido Filtración Vacío Fuerza Motriz Presión Sobrepresión Filtros en Profundidad Filtros en Superficie Filtros en Profundidad (Fibra de Vidrio) Filtros en Superficie (Filtros de Membrana) Hongos Filamentosos Bacterias Unicelulares 2 .Separación de las partículas Floculación y Flotación Tamaño celular: 1 a 10 µm Floculación y Flotación Filtración Centrifugación Formación de Agregados La velocidad de sedimentación de una partícula aumenta con su diámetro (ley de Stokes) Agentes Floculantes: sales inorgánicas. polielectrolitos orgánicos.

000 Da Células Material: ésteres de celulosas.Filtración en Superficie Filtración Estática Colmatación Filtración en Contracorriente Velocidad de Filtración x100 Filtración en Superficie Tipos de Filtración según el tamaño de las partículas Ósmosis reversa Ultrafiltración Microfiltración 0. policarbonatos.001 µm 0. polisulfonas y celulosa Filtro de Tambor Rotatorio a Vacío Filtro de Tambor Rotatorio a Vacío Suspensiones con una alta concentración de sólidos (20-60% de volumen de micelio) 3 .001-0.1 µm 0.1-10 µm <1.000 Da >1. polivinilfluoruros.0001-0.

-Desintegración de los Microorganismos 4 .Centrifugación Separación fluido/partícula Separación fluido/fluido Factores que favorecen la separación de las células por centrifugación Tamaño grande de las partículas (NC) Gran diferencia entre la densidad de las partículas y el líquido (NC) Baja viscosidad del líquido (NC) Radio elevado del rotor de la centrífuga (el estrés mecánico incrementa con el cuadrado del radio) Alta velocidad angular Centrífugas de Flujo Continuo Cuando se trabaja con grandes volúmenes se debe recurrir a centrífugas de flujo continuo 3.-Desintegración de los Microorganismos 3.

quitinasa. desnaturalizan las proteínas.. autolisis Tratamiento con solventes orgánicos: Riesgo de desnaturalización de las proteínas (Aislamiento de enzimas en levaduras) Tratamiento con detergentes: Solubilizan las membranas celulares Son caros.6)-glucanasa mananasa. contaminantes (Plasmólisis de levaduras con altas concentraciones de NaCl) Los tratamientos enzimáticos son muy específicos y las condiciones para la lisis suaves pero son caros Métodos Físicos Ultrasonidos: ampliamente utilizada en laboratorios pero no es adecuada a escala industrial por su alto coste Ciclos de congelación/descongelación: poco efectiva Molinos de bolas: se mezclan las células con bolas de vidrio y se someten a una alta velocidad de mezclado en una vasija de reacción con refrigeración Homogeneizadores: el material biológico se somete a una fuerte presión hidrostática (500 atmósferas) y la presión se libera bruscamente permitiendo que el líquido salga por una válvula 4.Aislamiento y Purificación Cromatografía Extracción Cristalización y precipitación Desecación 5 .3)-glucanasa. ß(1.Métodos Químicos Métodos Biológicos Lisis Enzimática Tratamiento con álcalis o ácidos: Siempre y cuando el producto sea estable a pH extremos (Hormona de crecimiento humano recombinante NaOH pH 11) Bacterias Gram (+): lisozima Bacterias Gram (-): lisozima+AEDT Levaduras: ß(1.

La liofilización es el método de desecación más suave debido a que el agua es sublimada a partir de una masa congelada. Desecación El secado del material biológico es en muchos casos el método final por el que los productos son llevados a una forma estable adecuada para su manejo y almacenamiento. Extracción con solventes orgánicos La extracción. Tienen la ventaja de ser reutilizables. tiene tanto la función de separación como la de concentración. reactivos de diagnóstico e investigación.Cromatografía Los métodos cromatográficos son caros aunque de especial valor para la purificación de materiales biológicos sensibles como productos farmacéuticos. La cristalización se utiliza principalmente para la purificación de compuestos de bajo peso molecular. Tipos de Cromatografías: Filtración en gel Peso Molecular Intercambio Iónico Carga Afinidad Actividad Biológica Cromatoenfoque Punto Isoeléctrico Adsorción Interacciones Hidrofóbicas Caldo Acuoso de Fermentación + Solvente Inmiscible Penicilina + Acetato de Butilo Enzimas + Sistemas Acuosos en fase múltiple Concentración de la fase solvente Purificación adicional Cristalización y Precipitación La cristalización a baja temperatura es una forma muy suave de purificación. cuando se aplica a los productos biológicos. Penicilina G (Caldo de Fermentación) + Acetato de Butilo (Solvente orgánico) + Acetato potásico en solución etanólica Penicilina G 6 . La sensibilidad al calor de la mayor parte de los productos biológicos significa que los únicos métodos que pueden ser utilizados son los que conducen a la eliminación del agua con elevación mínima de temperatura.

.5.Rendimiento Pérdidas en la Recuperación: 20% al 90% 7 .