APOSTILA DE BIOMATERIAIS

Marcelo Henrique Prado da Silva

I INTRODUO
A perda de um rgo ou de uma parte do corpo gera, alm da perda da funo, transtornos sociais e psicolgicos. Os avanos alcanados na medicina e odontologia modernas, aliados ao aumento da expectativa de vida, tm possibilitado o desenvolvimento de tcnicas que geram uma melhor qualidade de vida. A disponibilizao dessas tcnicas tem oferecido novas opes aos pacientes mutilados, como a substituio total ou parcial de ossos fraturados por implantes. Essa tendncia tem sido observada principalmente na implantodontia, onde pacientes edntulos (com perda de dentes) tm optado, cada vez mais, pela utilizao de implantes odontolgicos, ao invs das antigas prteses removveis. O desenvolvimento da implantologia tem dado incentivo pesquisa de biomateriais para esse fim, bem como das reaes que ocorrem na interface tecido-implante. Inicialmente utilizavam-se materiais inertes como os aos inoxidveis e a alumina. Nos anos 70, Per-Ingvar Brnemark introduziu o conceito de osteointegrao como sendo a ligao direta, estrutural e funcional entre osso ordenado e vivo e a superfcie de um implante sujeito a cargas funcionais (BRANEMARK, 1985). Com a introduo desse conceito, as pesquisas passaram a se concentrar em materiais e projetos, visando acelerar a osteointegrao, ou seja, diminuir o tempo necessrio para a aposio ssea. Recentemente, a otimizao das propriedades de superfcie como grau de pureza, acabamento superficial, rugosidade e molhabilidade tem sido explorado. Alteraes na camada de xido de metais como o titnio tambm tm sido bastante investigadas e, paralelamente, tcnicas de recobrimento com materiais bioativos tm sido desenvolvidas. osso. Vrias tcnicas de avaliao da adequao de um novo material para aplicaes biomdicas tm sido desenvolvidas numa tentativa de simular do desempenho do material aps sua insero no corpo humano. Essas tcnicas compreendem testes in vitro e testes in vivo. Para testes in vitro, so utilizados normalmente testes de bioatividade em lquido corporal simulado e estudos em cultura de clulas. Os estudos em cultura de clulas normalmente compreendem testes de citotoxicidade, medies Dentre os materiais bioativos, a hidroxiapatita, Ca10(PO4)6(OH)2 se destaca pela sua semelhana com os fosfatos de clcio presentes na fase mineral do

bioqumicas de atividade celular, avaliao de proliferao, crescimento e morfologia celular.

II REVISO BIBLIOGRFICA II.1 BIOMATERIAIS

Os biomateriais so usados em dispositivos mdicos, sobretudo naqueles que so temporria ou permanentemente implantados no corpo humano. O termo biomaterial foi definido na Conferncia do Instituto Nacional de Desenvolvimento de Consenso em Sade em 1982 como: Qualquer substncia (outra que no droga) ou combinao de substncias, sinttica ou natural em origem, que possa ser usada por um perodo de tempo, completa ou parcialmente como parte de um sistema que trate, aumente ou substitua qualquer tecido, rgo ou funo do corpo (HELMUS E TWEDEN, 1995). O critrio de seleo de biomateriais baseado principalmente na aplicao a que se destinam. Por exemplo, para dispositivos que fiquem em contato com o sangue, esses materiais so: componentes de dispositivos extracorpreos que removem e retornam sangue do corpo; dispositivos que so inseridos em um vaso sanguneo; dispositivos que ficam permanentemente implantados.

Para dispositivos de aplicaes em tecidos moles, os materiais se prope a aumentar ou redefinir o tecido (ex.: implantes de seios e implantes faciais). Em aplicaes ortopdicas e odontolgicas, os materiais so componentes de implantes estruturais (ex.: prteses de juntas e implantes de raiz de dentes) ou so usados para reparar defeitos sseos (ex.: parafusos e pinos inseridos em osso). Quanto ao tipo de material, os biomateriais podem ser: polmeros sintticos, metais, cermicas e macromolculas naturais (ex.: biopolmeros) que so manufaturados ou processados para se adequarem utilizao em dispositivos mdicos que entram em contato ntimo com protenas, clulas, tecidos, rgos e sistemas orgnicos. Os biomateriais devem ser isentos de produzir qualquer resposta biolgica adversa local ou sistmica, ou seja: o material deve ser no-txico, no-carcinognico, noantignico e no-mutagnico. Em aplicaes sangneas, eles devem tambm ser

no-trombognicos.

As complicaes oriundas dos dispositivos implantados iro

variar de acordo com a sua aplicao. Por exemplo, infeces e biodegradao iro afetar dispositivos que tm aplicaes de longa durao como prteses permanentes e vlvulas cardacas. O termo biocompatibilidade foi redefinido em 1987 por Williams como sendo a habilidade de um material desempenhar com uma resposta tecidual apropriada em uma aplicao especfica (WILLIAMS, 1992A). A Tabela 1 lista os tipos de biomateriais usados em diferentes aplicaes: sintticos, bioreabsorvveis, derivados de materiais biolgicos, bioderivados de macromolculas, modificaes de superfcies por passivao, recobrimentos bioativos, adesivos de tecidos, metais e ligas metlicas, cermicas/inorgnicos/vidros, carbonos e compsitos. Tabela 1 Biomateriais e Suas Aplicaes (HELMUS e TWEDEN, 1995). MATERIAL Sintticos No degradveis
Acrlicos Epoxies Fluorcarbonetos Hidrogeis Poli acetatos Poli amidas Poli amida elastomrica Poli carbonatos Poli steres Poli sters elastomricos Poli eteracetonas Poli imidas Poli (metacrilato de metila) Poli metil-penteno Poli olefinas Poli olefina elastomricas Filmes de poli olefina de alta cristalinidade Poli sulfonas Poliuretanos Poli cloreto de vinila Silicones Polietileno de ultra alto peso molecular

APLICAES
Suportes para dispositivos extra-corpreos Suportes, compsitos de fibras Enxertos vasculares, camadas em catter, remendos periodontais, remendos abdominais Camadas para catter, antiadesivos Estruturas para vlvula cardaca, partes estruturais Suturas Catter, curativos para ferimentos Suportes para dispositivos extra-corpreos Enxertos vasculares, bales para angioplastia Catters Componentes estruturais, dispositivos ortopdicos Componentes estruturais, catters Cimento sseo, lentes intra-oculares Suportes para dispositivos extra-corpreos Suturas, bales para angioplastia, catters Tubos, coraes artificiais, catters Bales para angioplastia Componentes de sutura, dispositivos ortopdicos Catters, coraes artificiais, curativos Tubos, bolsas sangneas Juntas para dedos, catters, vlvulas cardacas, curativos Clice acetibular, tecidos de alta resistncia Peptdeos de adeso celular e liberao controlada Liberao controlada Suturas, liberao controlada Suturas, liberao controlada, placas sseas Liberao controlada, placas sseas Liberao controlada Camadas, reconstruo de tecidos moles Implantes sseos, cirurgia reconstrutiva

Bioreabsorvveis
Poli aminocidos - 4 -Poli anidridos Poli caprolactonas Copolmeros de poli cido ltico/cido gliclico Poli hidroxil butiratos Poli ortosteres Colgeno Hidroxiapatita de baixa densidade

MATERIAL Materiais biologicamente derivados

Artrias e veias bovinas Pericrdio bovino Ligamentos bovinos Tendes bovinos Osso bovino liofilizada Osso bovino descalcificado Cordo humbilical humano Vlvula cardaca porcina

APLICAES
Enxertos vasculares Substitutos de pericrdio, vlvulas cardacas Ligamentos Tendes Implantes sseos Implantes sseos Enxertos vasculares Vlvulas cardacas Camadas de enxerto vascular, agente de contraste ultrasnico Membranas para hemodilise Membranas para hemodilise Experimental, camadas, liberao controlada Camadas, curativos, rgos hbridos Camadas Camadas para coraes artificiais Camadas, antiadesivo, anti-inflamatrio ocular e de junta Lipossomos, camadas experimentais tromboresistentes Suturas, camadas experimentais de protenas do tipo seda Tromboresistncia Adsorve albumina para tromboresistncia Arraste reduzido para catters Arraste reduzido para catters Tromboresistncia Lubrificante para agulhas e catters Recobrimentos em implantes edsseos Tromboresistncia Resistncia infeco Adeso celular melhorada Adeso celular melhorada Tromboresistncia Adeso celular melhorada Tromboresistncia Microcirurgia para anastomose de vasos Camada de enxerto vascular, microcirurgia Adeso celular melhorada

Macromolculas bioderivadas
Albumina liofilizada Acetatos de celulose Celulose de cupramnia Quitosana Colgeno Elastina Gelatina liofilizada cido hialurnico Fosfolipdios Seda

Recobrimentos passivos
Albumina Cadeias de alcanos Fluorcarbonos Hidrogels Silicones livres de slica leos de silicone

Recobrimentos Bioativos
Hidroxiapatita Angicoagulantes (ex.: heparina e hirudina) Antimicrobianas Peptdeos aderentes a clulas Protenas aderentes a clulas Superfcies carregadas negativamente Camadas polimerizadas por plasma Trombolticos

Tecidos adesivos
Cianoacrilatos Cola de fibrina Cola de molusco

Metais e Ligas Metlicas

Ligas cobalto-cromo, ligas nquel-cromo, Arames guias, vlvulas de corao mecnico, orifcios e ligas nitinol, (ligas efeito memria de forma), braos, vlvula de corao biolgico implantes ortopdicos e aos inoxidveis, tntalo, titnio e suas ligas odontolgicos, placas para fraturas, pregos e parafusos para reparo sseo, coberturas para veia cava, suportes para coraes artificiais, comandos para marca-passos e para estimuladores eltricos implantveis

Cermicas, inorgnicos e vidros

Vidros bioativos Vitro-cermicas bioativas Alumina de alta densidade Hidroxiapatita Alumina monocristalina Fosfatos triclcios Zircnia Ligao ssea, cirurgia reconstrutiva Ligao ssea, cirurgia reconstrutiva Implantes odontolgicos e ortopdicos Ligao ssea, cirurgia reconstrutiva Implantes ortopdicos e odontolgicos Reparo sseo Implantes ortopdicos e odontolgicos de baixa Vlvulas cardacas, camadas cardiovasculares

Carbonos
Carbono piroltico temperatura) (isotrpico

MATERIAL
Carbono isotrpico temperatura de

APLICAES
ultra-baixa Camadas em polmeros sensveis temperatura

Compsitos
Compsitos de fibra de carbono baseados em uma matriz de epoxi, poli eteracetonas, poli imida, poli sulfona Radiopacificadores (BaSO4; BaCl2;TiO2) misturados em polmeros de poli olefinas, poliuretanos, silicones Radiopacificadores em polimetimetacrilato Materiais potenciais para orifcios, discos e implantes ortopdicos Radiopaco em raios-X para identificao e localizao do dispositivo Cimento sseo radiopaco

A seleo do material a ser utilizado deve levar em considerao as propriedades fsicas, qumicas e mecnicas do material. As principais propriedades que devem ser levadas em conta so: Resistncia: aplicaes que requerem alta resistncia incluem enxertos de veia aorta, vlvulas cardacas, bales de angioplastia e implantes odontolgicos e ortopdicos. especficas; Mdulo (elasticidade, torso ou flexo: o mdulo de torso e de flexo de interesse para materiais como catteres, que podem sofrer torque e fazer percursos tortuosos dentro dos vasos. Muitos elastmeros devem ter capacidade de se alongar com baixa carga, logo, devem ter baixo mdulo de torso, flexo ou elasticidade. Fadiga: os dispositivos que devem suportar esforos cclicos sem permitir propagao de trinca so em sua maioria feitos de poliuretano, polister e metais em geral. Esses dispositivos funcionam em sua maioria como implantes ortopdicos, odontolgicos e cardiovasculares. Rugosidade: em aplicaes onde desejado baixo atrito, como em implantes de juntas ortopdicas, utilizam-se materiais com acabamentos espelhados. Quando se deseja uma integrao tecido-implante, como em implantes endosseos, desejada uma alta rugosidade. Taxa de permeao: dispositivos como lentes de contato requerem uma alta taxa de permeao de gases. Geralmente a permeao decresce com a cristalinidade do material. Os hidrogels so permeveis a gua e so muito utilizados como liberadores de drogas. Alguns desses dispositivos requerem propriedades bastante

Absoro de gua: alguns materiais sofrem mudanas dramticas em sua resistncia a trao, fadiga, fluncia, em seu mdulo de elasticidade, torso ou flexo quando ligeiramente umedecidos. A degradao tambm afetada pela absoro de gua: materiais hidroflicos tendem a se degradar do interior para a superfcie enquanto materiais hidrofbicos tendem a ter primeiramente suas superfcies degradadas.

Bioestabilidade: dispositivos como fios de sutura e liberadores de drogas devem ter sua degradao controlada, enquanto implantes permanentes devem ser estveis.

Bioatividade: a bioatividade se refere propriedade inerente a alguns materiais de participarem em reaes biolgicas especficas. Camadas bioativas podem ser formadas a partir de molculas que previnem cogulo sangneo ou iniciam a degradao enzimtica de um trombo. Algumas superfcies negativamente A carregadas iniciam a degradao de componentes complementares com o potencial para menores efeitos colaterais para tratamentos como dilise. hidroxiapatita muito utilizada como recobrimento para implantes endosseos. Essa camada constitui uma superfcie bioativa para o ancoramento de osso neoformado.

Esterilizao: o mtodo de esterilizao utilizado pode alterar o estado energtico da superfcie de um implante, alterando a resposta celular. Os polmeros podem ter suas propriedades negativamente alteradas quando esterilizados por irradiao com raios gama.

II.4.1 HISTRICO DA OSTEOINTEGRAO O termo osteointegrao foi definido pelo Professor Per-Ingvar Brnemark como sendo a ligao direta, estrutural e funcional entre osso ordenado e vivo e a superfcie de um implante sujeito a cargas funcionais. A osteointegrao foi observada enquanto o Prof. Brnemark estava realizando estudos clnicos in situ e in vivo de osso medular em fbula de coelhos. Esses estudos foram realizados com uma tcnica de microscopia vital que consistia em uma leve insero de uma cmara de titnio contendo um sistema tico na fbula do coelho. As cmaras ticas no podiam ser retiradas do osso ao redor aps um perodo de tempo j que a retirada resultava em osso aderido s cmaras (BRANEMARK, 1985).

Em estudos usando microscopia eletrnica de varredura, observou-se a existncia de uma camada de lipoprotenas entre o implante e o tecido sseo. O conceito de osteointegrao foi ento redefinido com nfase no implante estar em funo, j que a observao do contato direto osso-implante depende da escala de aumentos que estiver sendo utilizada. A definio aceita atualmente a de Zarb e Albrektsson Osteointegrao o processo pelo qual a fixao rgida e assintomtica de um material aloplstico no osso obtida e mantida durante a funo (HOBKIRK e WATSON, 1996). A aplicao mais bvia da osteointegrao em implantes endosseos. No caso de pacientes edntulos, pode-se argumentar que uma prtese preencheria o papel do implante. No entanto, a perda contnua de osso alveolar resultante de estmulo de carregamento para remodelamento inadequado geralmente causa a instabilidade da prtese, gerando problemas funcionais e psicolgicos ao paciente. Inicialmente, tentou-se interpor uma camada amortecedora entre o implante e o tecido sseo, simulando o ligamento periodontal. Aps 30 anos de trabalho experimental e 20 anos de resultados clnicos, Branemark e sua equipe desenvolveram um implante rosqueado que inserido na mandbula ou maxila e conectado prtese atravs de um abutment e um parafuso central, como mostrado na Figura 1.

Figura 1

Representao esquemtica da unidade de ancoragem de Branemark,

composta de: implante rosqueado (i); abutment (a); parafuso central (pc) e prtese dentria (pd) (BRANEMARK, 1985).

A tcnica cirrgica foi empiricamente definida como sendo feita em duas etapas: na primeira, o implante inserido e deixado at que o osso se regenere e remodele durante um perodo que varia de trs a seis meses, sem carregamento; na segunda etapa, a prtese inserida atravs da conexo do abutment e do parafuso central ao implante. Durante a fase de regenerao, formado osso novo prximo ao implante, que est imvel. Quando o implante entra em funo, o osso neo-formado se remodela segundo a magnitude, direo e frequncia do esforo aplicado. Aps cerca de 18 meses, um estado estacionrio alcanado, o que significa que foi alcanado um equilbrio entre as foras atuantes sobre o implante e as capacidades de remodelamento do osso ancorado. As etapas de regenerao e remodelamento podem ser vistas na Figura 2 onde a rea hachurada no topo ilustra a reduo em altura de osso ancorado, expressa em percentagem do nvel original de osso mandibular embutido, que ocorre durante as fases de regenerao e remodelamento (BRANEMARK, 1985).

Figura 2 Relao dinmica entre implante e osso mandibular (BRANEMARK, 1985).

O sucesso da osteointegrao depende de seis fatores (BRANEMARK, 1985): i. Biocompatibilidade do implante; Titnio comercialmente puro, o nibio e o tntalo so conhecidos por serem bioreativos. As ligas Co-Cr-Mo e os aos inoxidveis tm demonstrado menor aceitabilidade no leito sseo. De um modo geral, as ligas metlicas so menos aceitas devido possibilidade de liberao de ons, que podem causar efeitos colaterais locais ou sistmicos.

ii. Caractersticas do desenho; Existe atualmente extensa documentao sobre implantes rosqueados, que demonstraram funcionar durante dcadas sem problemas clnicos. Os outros projetos de implantes como implantes cilndricos lisos, em formato de cunha ou raiz dentria, cnicos e outros requerem mais informaes clnicas. iii. Caractersticas de superfcie; De um modo geral, as superfcies rugosas so preferidas. No entanto, existe um nvel timo de rugosidade ainda no muito bem estabelecido. Superfcies completamente lisas no resultam em boa adeso celular e acabam sendo ancoradas em tecido mole, seja qual for o material utilizado. Superfcies com rugosidade em uma escala que permita a vascularizao so desejadas. Outros parmetros de superfcie que esto sendo investigados so: estado energtico, molhabilidade, pureza, dentre outros. iv. Estado do leito hospedeiro; necessria presena de leito receptor saudvel e com quantidade ssea suficiente. No entanto, pode ser que esses requisitos no sejam satisfeitos. Nesse caso, alternativas so adotadas a fim de se criar as condies favorveis. Uma das tcnicas mais utilizadas a regenerao tecidual guiada, que uma tcnica de enxerto autgeno que reconstitui a perda ssea ocorrida. v. Tcnica cirrgica; A tcnica cirrgica deve impor o menor trauma e o menor sobreaquecimento possveis. Para tanto, utiliza-se baixa velocidade de rotao da broca e refrigerao abundante. O sobreaquecimento pode causar denaturao de uma das enzimas sseas, a fosfatase alcalina, alm da destruio das clulas que participariam na reparao ssea. reabsoro ssea. vi. Condies de aplicao das cargas. De acordo com a tcnica estabelecida por Branemark, utiliza-se uma espera de 3 meses para a aplicao de cargas a implantes inseridos em mandbula e de 4 a 6 meses para aqueles inseridos em maxila. O torque muito elevado no momento da insero do implante tambm pode causar tenso no osso e uma resposta de

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CLASSIFICAO DOS BIOMATERIAIS QUANTO RESPOSTA BIOLGICA Existem vrias classificaes para os materiais quanto resposta biolgicas. Quando se consideram os materiais de maneira genrica (no se restringindo aos biomateriais), os materiais podem ser classificados em txicos e no txicos. Quando se coniderando apenas os biomateriais, estes podem ser classificados em materiais bioinertes, bioreativos e bioativos. DESCOUTS et al. (1995) incluem ainda a categoria de materiais bioartificiais. Esses materiais podem ser definidos como sendo uma combinao de materiais sintticos e clulas vivas. A Figura 3 divide os materiais em trs zonas: na zona vermelha ficam os materiais txicos, na zona amarela, os bioinertes e na zona verde, os materiais que interagem positivamente com o corpo humano.

Figura 3 1996).

Biocompatibilidade de implantes odontolgicos (HOBKIRK E WATSON,

Os materiais aos quais o tecido sseo tem demonstrado maior tolerncia esto na zona verde e so exemplificados pelo titnio, nibio, tntalo e hidroxiapatita (HA). Outros materiais como os aos inoxidveis, ligas Cr-Co-Mo, xidos de alumnio e zircnio, ligas de titnio, dentre outros, so questionveis quanto a funo a longo

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prazo. Os materiais posicionados na zona vermelha so aqueles que apresentam resposta adversa do tecido sseo. A MATERIAIS BIOINERTES So materiais menos suscetveis a causar uma reao biolgica adversa devido a sua estabilidade qumica em comparao com outros materiais. Como exemplos, pode-se citar: carbono, alumina e zircnia (DUCHEYNE E KOHN, 1992). causa da sua boa resistncia ao desgaste. As cermicas so quimicamente muito estveis e, portanto, muito pouco provveis de ter uma resposta biolgica adversa. As cermicas bioinertes mais empregadas como biomateriais so: cermicas base de carbono, alumina e zircnia. A1 CERMICAS BASE DE CARBONO O carbono possui similaridades com o osso em relao rigidez e resistncia. O grafite possui um arranjo hexagonal planar com alta energia de ligao entre tomos no mesmo plano e baixa energia de ligao entre os planos. Essa baixa ligao entre os planos confere um baixo mdulo, prximo quele do osso. H trs tipos isotrpicos de carbono: piroltico, vtreo e depositado por vapor. O A alumina e a zircnia so mais usadas em superfcies de juntas artificiais sujeitas frico por

carbono piroltico obtido atravs da deposio de carbono, a partir de um leito fluidizado, em um substrato. O leito fluidizado formado a partir da pirlise de gs hidrocarbnico em temperaturas na faixa de 1000-2500C. Carbonos isotrpicos de baixa temperatura so formados em temperaturas abaixo de 1500C. O carbono isotrpico de baixa temperatura possui boas resistncia frico e ao desgaste. Tem sido feitas vrias tentativas de recobrimento de metais com carbonos isotrpicos de baixa temperatura. O fator limitante a propenso fratura da camada e a decoeso da mesma do substrato. O carbono depositado por vapor evaporado sobre um substrato a partir de uma fonte de alta temperatura, obtendo-se camadas de at 1m de espessura (DAUSKARDT, 1993). A2 ALUMINA As aluminas policristalinas de alta densidade e alta pureza so utilizadas em cabea de fmur e componentes acetabulares. Alm da estabilidade qumica e inrcia

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biolgica, uma importante caracterstica a resistncia frico e ao desgaste. Geralmente a cabea do fmur confeccionada em alumina e a articulao em polietileno ou alumina. A Figura 4 mostra uma prtese de fmur.

Figura 4 Prtese de fmur de titnio com cabea de alumina. As propriedades fsicas e mecnicas da alumina densa so uma funo da pureza, tamanho e distribuio dos gros, das porosidades e das incluses. A maior limitao da alumina que ela possui baixa tenacidade, baixa resistncia trao e flexo. H ainda uma limitao dimensional quanto ao raio timo. Raios de curvatura muito grandes criam uma superfcie de contato muito grande, aumentando muito a presso de contato. Raios muito pequenos no permitem o escape de partculas de alumina. A3 ZIRCNIA A zircnia surgiu como alternativa alumina por possuir maior tenacidade. A zircnia tem estrutura monoclnica temperatura ambiente e sofre uma transformao isotrpica para estrutura tetragonal. Adies de xido de trio (Y2O3) servem para estabilizar a fase tetragonal temperatura ambiente. A propagao de trincas induz a transfomao da fase tetragonal, que metaestvel, na fase monoclnica. Como os gros monoclnicos so maiores, gerado um campo de tenso compressivo na ponta da trinca. Esse efeito causa uma imobilizao da trinca. As melhores propriedades mecnicas em relao alumina pemitem uma maior liberdade dimensional na confeco dos implantes (HULBERT, 1993). B MATERIAIS BIOREATIVOS Materiais bioreativos: os metais utilizados em ortopedia e em implantodontia dominam essa classe de materiais. No entanto, a maioria dos biomateriais metlicos no bioreativa, ficando mais prxima classe dos materiais bioinertes. A biocompatibilidade dos metais e ligas baseada na formao de uma camada fina e

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aderente de xido estvel. Cada classe de metal deve ter sua composio qumica bem controlada a fim de que no haja degradao qumica da camada de xido nem das propriedades mecnicas do metal ou liga metlica. Os principais metais utilizados como biomateriais so divididos em trs classes: ligas ferrosas (aos inoxidveis), ligas base de cobalto e ligas base de titnio. Os metais classificados como bioreativos ficam no limite entre os materiais bioinertes e os bioativos. Esses metais adquirem bioatividade aps um tratamento de ativao de superfcie do seu xido. So eles o tinio, o nibio e o tntalo. B1 AOS INOXIDVEIS O ao inoxidvel mais utilizado o ao inox 316L, que um ao austentico endurecvel por encruamento. Esse tipo de ao inox tem baixo teor de carbono (0,03% mx.), o que confere maior resistncia corroso em meios salinos e ricos em cloreto. O nquel em sua composio responsvel pela estabilizao da austenita e resistncia corroso. Sua inoxidabilidade dada pelo teor de cromo. Teores deste elemento acima de 28% possibilitam a precipitao de Cr23C6 nos contornos de gro, que seriam stios preferenciais para corroso intergranular. intergranular. As princiapais limitaes da utilizao de implantes de ao inox so corroso e troca inica. Os aos inoxidveis sofrem corroso in vivo e liberam ons do tipo Ni2+, Cr3+ e Cr6+, que podem causar efeitos locais (irritao, inflamao nas reas adjacentes interface implante-tecido) e sistmicos (efeito txico sobre o organismo). B2 LIGAS BASE DE COBALTO As ligas de cobalto mais utilzadas como implantes ortopdicos so: a liga fundida CoCr-Mo (ASTM F75, 1982) e a liga forjada Co-Cr-W-Ni (ASTM F90, 1982). O alto limite de resistncia e a alta resistncia em fadiga fazem dessas ligas uma boa alternativa para utilizao em reconstruo de juntas. B3 TITNIO E LIGAS BASE DE TITNIO O titnio possui uma combinao de alta resistncia mecnica, alta resistncia corroso eletroqumica e resposta biolgica favorvel, que fazem com que ele seja o metal mais utilizado como biomaterial. Dentre as ligas de titnio, a liga Ti-6Al-4V (ASTM F136, 1984) a mais utilizada em vrias aplicaes, incluindo aplicaes biomdicas. O sobreaquecimento durante o processo de soldagem de componentes tambm pode produzir corroso

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O titnio um metal especial dentre os metais leves como alumnio e magnsio por sua elevada razo resistncia/peso. O titnio tambm um metal bastante reativo e em contato com ppm (parte por milho) de O2 ou gua, forma xido de titnio que pode ser TiO, Ti2O3 ou TiO2, que o mais comum. O TiO2 pode apresentar diferentes estruturas cristalogrficas, dentre elas, rutilo e anatsio, podendo tambm ser amorfo. Uma contribuio para a biocompatibilidade do titnio a grande resistncia corroso que conferida por seu xido, que forma uma pelcula contnua e aderente. Uma outra contribuio a sua alta constante dieltrica quando comparada com a de outros xidos. KASEMO E LAUSMAA (1985) atribuem a alta constante dieltrica do TiO2 biocompatibilidade do titnio, j que as interaes entre os xidos e as biomolculas so eltricas e o TiO2 cataltico para um nmero de reaes orgnicas e inorgnicas. O TiO2 promove foras de Van der Waals maiores do que as dos outros xidos, logo apresentando propriedades catalticas em diversas reaes qumicas. WILLMANN (1999) classifica o titnio como bioinerte. Por outro lado, vrios autores (KOKUBO et al., 1996; SOARES et al.,1997; KIM et al., 1996; YAN et al., 1996) tm demonstrado o efeito das modificaes de superfcie sobre a bioatividade do titnio. Nesses substratos, a precipitao de fosfatos de clcio ocorre por adsoro de ons fosfato hidratados, liberao de prtons dos ons fosfato e adsoro de clcio pelo fosfato. O TiO2 no pode se recompor em meio anidro, causando a corroso do metal. A natureza, bem como a composio e espessura da camada do xido depende das condies do meio circunvizinho. Geralmente, em meio aquoso, o xido presente o TiO2. No entanto, pode have uma mistura de xidos outros como Ti2O3 e TiO. Observaes experimentais da interface tecido sseo-Ti mostra um contato ntimo osso-implante. O titnio comercialmente puro no to resistente fadiga quanto certos aos e ligas de titnio. O titnio tem um mdulo de elasticidade intermedirio entre o do aos e o do osso. Sua resistncia ao impacto comparvel aos aos baixo carbono temperados e revenidos (METALS HANDBOOK, 1990A). A seleo do parmetro de propriedades mecnicas mais relevante depende da temperatura de trabalho. A Tabela 2 mostra comparativamente as propriedades mecnicas do titnio comercialment puro, da liga de titnio Ti-6Al-4V e do osso cortical. Observa-se que o mdulo de elasticidade do titnio em torno de 5 vezes o do osso cortical.

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Tabela 2 Propriedades mecnicas de titnio comercialmente puro, Ti-6Al-4V e osso cortical (METALS HANDBOOK, 1990A; METALS HANDBOOK, 1990B). MATERIAL PROPRIEDADES MECNICAS s (Mpa) TITNIO GRAU 4 Ti6Al4V RECOZIDA OSSO CORTICAL 550 895 70 110 124 20 E (Gpa)

A primeira aplicao industrial do titnio foi no incio dos anos 50, na indstria aeroespacial. Para essa aplicao, a alta resistncia mecnica e baixa densidade (55% da densidade do ao) foi um fator atraente. Embora a indstria aeronutica ainda continue a utilizar titnio e suas ligas, a excelente resistncia corroso em diversos meios incluindo os meios oxidantes ricos em cloretos tem levado aplicao em outras reas como na medicina e odontologia, em prteses e implantes endosseos osteointegrados. A resistncia corroso caracterstica do titnio baseada na formao superficial de um filme de xido aderente e estvel que protege o interior do material do meio circunvizinho (METALS HANDBOOK, 1990A). As aplicaes do titnio e suas ligas na rea biomdica incluem desde bombas e dispositivos de coraes artificiais a aplicaes mais estruturais como parafusos e pinos em implantes odontolgicos e prteses sseas para braos, pernas e juntas (METALS HANDBOOK, 1990A). Diversos autores (DE REZENDE et al., 1993; MOHAMEDI et al., 1995; ROBERTS et al., 1986; ORON, 1995) tm demonstrado a superioridade do titnio como biomaterial sobre outros metais. Muitos esforos tm sido concentrados no aprimoramento da osteointegrao. Nesse sentido, os implantes com superfcies porosas especialmente preparadas tm sido utilizados para promover o crescimento sseo em direo aos pros do implante. Dessa forma, obtm-se uma aposio ssea mais forte e mais duradoura. Aplicaes recentes incluem a utilizao da liga Ti-15Mo-5Zr-3Al como fio para suturas e fixao de implantes, bem como a explorao do efeito memria-de-forma em ligas Ni-Ti para criar tenses compressivas a fim de forar a reconstituio de ossos fraturados ou alargar vasos sanguneos (METALS HANDBOOK, 1990B). Apesar do carter inerte, casos de dissoluo da camada de xido tm sido reportados. Estudos recentes esto concentrados no desenvolvimento de

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propriedades de superfcie anteriormente insero no corpo humano.

Como

consequncia, vrias tcnicas de recobrimento tm sido desenvolvidas. Tcnicas de recobrimento com materiais bioativos como a hidroxiapatita, que um fosfato de clcio tm sido exaustivamente estudadas. As propriedades fsicas do recobrimento como tamanho, morfologia, fases presentes, cristalinidade e espessura da camada devem ser avaliadas. Alteraes introduzidas na camada durante o processo de recobrimento podem afetar o desempenho do implante. B4 NIBIO O nibio, como o tntalo e o titnio, um metal bioreativo. Estudos recentes, (OGASAWARA et al. 1999A; OGASAWARA et al. 1999B) tm demonstrado o potencial desse metal em aplicaes biomdicas. Esse potencial pode ser explorado tanto para aplicaes como substituto ao vandio na liga Ti6Al4V quanto na utilizao de nibio puro. Estudos complementares ainda so necessrios para que se caracterize esse metal in vitro e in vivo. C MATERIAIS BIOATIVOS O termo bioatividade definido como sendo a propriedade de formar tecido sobre a superfcie de um biomaterial e estabelecer uma interface capaz de suportar cargas funcionais (DUCHEYNE E KOHN, 1992). O conceito de bioatividade foi introduzido com respeito aos biovidros atravs da seguinte hiptese: A biocompatibilidade de um material para implante tima se o material proporciona a formao de tecidos normais na sua superfcie e, adicionalmente, se ele estabelece uma interface contnua capaz de suportar as cargas que normalmente ocorrem no local da implantao (KOHN E DUCHEYNE, 1992). Trs classes de materiais cermicos parecem cumprir esse papel: vidros bioativos e vitro-cermicas, cermicas de fosfato de clcio e compsitos desses vidros e cermicas com fases inertes.

C1 VIDROS BIOATIVOS (BIOGLASS) E VITRO-CERMICAS

Os vidros bioativos foram desenvolvidos pelo Prof. Larry L. Hench, que sintetizou vrios vidros contendo misturas de slica, fosfato, xido de clcio e soda. Esses materiais foram desenvolvidos para utilizao como implantes e como recobrimento. Quando imersa em um meio aquoso, a superfcie dos biovidros libera ons Na+, K+ e Ca2+. Essas espcies so repostas com ons H3O+ da soluo atravs de uma reao de troca inica que produz uma camada superficial de slica-gel. Uma camada de

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apatita amorfa se forma no topo da camada de slica gel. Essa hidroxiapatita amorfa evolui para hidroxiapatita cristalina (KOKUBO, 1993). C2 FOSFATOS DE CLCIO Os fosfatos de clcio so materiais cermicos com razes Ca/P variadas. Dentre elas, as cermicas de apatita so as mais estudadas. Apatita o nome de uma vasta srie de minerais isomorfos. O nome apatites, do grego, enganadora, justifica as dificuldades envolvidas na sua identificao devido sua falta de estequiometria. As apatitas so formadas sob condies variadas, mas comumente ocorrem como minerais agregados a rochas gneas. Elas tambm ocorrem em rochas sedimentares marinhas formadas por deposio qumica, em fsseis e em rochas metamrficas. Variam amplamente em tonalidade, desde o transparente, passando pelo amarelo, verde, marrom, vermelho e azul. Algumas apatitas exibem um fluorescncia amarela sob luz ultravioleta. Os cristais so hexagonais, prismticos e podem se tornar alongados sempre terminando em faces dipiramidais. As apatitas so definidas pela frmula qumica M10(Y)6Z2 e formam uma gama variada de solues slidas como resultado da substituio de stios M2+, XO43- ou Z-. As espcies M2+ so tipicamente ctions metlicos divalentes como Ca2+, Sr2+, Ba2+, Pb2+ ou Cd2+. As espcies Y3- so tipicamente um dos seguintes nions trivalentes: PO43-, AsO43-, VO43-, CrO43- ou MnO43-. Os nions monovalentes Z- so geralmente F-, OH-, Br- ou Cl-(KOHN E DUCHEYNE, 1992). O nion divalente CO32- no lugar de Z2 d origem s carbonatoapatitas. Os fosfatos de clcio de relevncia biolgica so: fosfato de clcio amorfo, brushita, monetita, fosfato de clcio octaclcio, fosfato de clcio triclcio, pirofosfato de clcio e apatita. Dentre as fases minerais presentes em calcificaes normais, ou seja, no patolgicas, as apatitas so as mais comumente encontradas. Estudos de difrao de Raios-X e anlise qumica em 1926 identificaram a fase mineral da dentina, esmalte e osso como sendo fosfato de clcio com uma estrutura de apatita, idealizada como (Ca)10(PO4)6(OH)2, ou seja: hidroxiapatita. esmalte, dentina e osso. Os membros do grupo das apatitas so diferenciados com base nos seus nions predominantes, isto : fluorapatita (F), hidroxiapatita (OH) ou cloroapatita (Cl), dentre outros. A hidroxiapatita pura um sal duplo de fosfato triclcio e hidrxido de clcio e No entanto, tem sido discutida a no estequiometria bem como a presena de elementos substitutivos na fase mineral do

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tem estequiometria Ca2Ca3(PO4)3OH ou (Ca)10(PO4)6(OH)2. Cada membro pode fazer uma srie de substituies isomrficas catinicas ou aninicas, levando formao dos correspondentes isomorfos ou solues slidas. Estas substituies podem ser isoinicas ou heteroinicas (LEGEROS e LEGEROS, 1993). A Tabela 3 mostra a frmula molecular e os parmetros de rede dos principais membros da famlia das apatitas.

Hidroxiapatita (HA), especificamente hidroxiapatita de clcio, um composto de composio, estequiometria - (Ca)10(PO4)6(OH)2 - e cristalografia definidas. A hidroxiapatita de clcio pertence ao sistema hexagonal, com grupo espacial P63/m, que caracterizado por uma simetria perpendicular a trs eixos a equivalentes (a1, a2, a3), formando ngulos de 120 entre si. A sua clula unitria contm uma representao completa do cristal de apatita, consistindo em grupos de Ca, PO4 e OH empacotados juntos em um arranjo como visto na Figura 5. Os arranjos atmicos da fluorapatita, Ca10(PO4)6F2 e da cloroapatita, Ca10(PO4)6Cl2, onde o fluoreto (F) e o cloreto (Cl), respectivamente, substituem o grupo (OH) na estrutura da apatita so similares. As substituies na estrutura das apatitas nos grupos (Ca), (PO4) ou (OH) resultam em alteraes nos parmetros de rede e em algumas propriedades como solubilidade e morfologia, sem mudana significativa na simetria hexagonal. A maior estabilidade da fluorapatita relacionada a uma Esta dificuldade de difuso mssica atravs do canal formado pelos ons Z-.

estabilidade refletida na observao da menor solubilidade destas apatitas em relao s apatitas sintticas sem flor e tambm em relao s apatitas biolgicas. No caso das cloroapatitas, ocorre perda da simetria hexagonal, exibindo simetria monoclnica (LEGEROS e LEGEROS, 1993).

TABELA 3 Principais membros da famlia das apatitas (NARASARAJU e PHEBE, 1996). No. 1 2 3 4 5 6 Nome Hidroxiapatita de Brio Cloroapatita CdmioArsnico Hidroxiapatita de Cdmio Cloroapatita de Cdmio Hidroxiapatita de Clcio Carbonato Apatitaa Frmula Molecular Ba10(PO4)6(OH)2 Cd10(AsO4)6Cl2 Cd10(PO4)6(OH)2 Cd10(PO4)6Cl2 Ca10(PO4)6(OH)2 Ca10(PO4)6CO3 Parmetros de rede (nm) a c 1,019 0,770 1,007 0,726 0,901 0,962 0,942 0,956 0,661 0,649 0,688 0,687

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7 8 9 10 11 12 13 14 15 16
a b

Cloroapatita Fermorita Fluorapatita Hidroxivanadinita Hidroxiapatita de Chumbo Magnsio Apatita Mimetitab Piromorfitab Hidroxiapatita de Estrncio Vanadinita

Ca10(PO4)6Cl2 Ca10(AsO4)6F2 Ca10(PO4)6F2 Ba10(VO4)6(OH)2 Pb10(PO4)6(OH)2 Mg10(PO4)6(OH)2 Pb10(AsO4)6Cl2 Pb10(PO4)6Cl2 Sr10(PO4)6(OH)2 Pb10(PO4)6Cl2

0,963 0,975 0,935 0,982 0,990 0,930 1,036 0,995 0,976 1,047

0,678 0,692 0,658 0,698 0,729 0,689 0,752 0,732 0,728 0,743

Existe ambiguidade a respeito da frmula molecular Tambm reportados como membros da srie piromorfita

Figura 5 Arranjo atmico da hidroxiapatita (McGREGOR, 1998).

O carbonato, CO32-, pode fazer substituies tanto no grupo da hidroxila OHquanto no do fosfato PO43-, designadas como substituies do tipo A ou B, respectivamente. Estes dois tipos de substituies tm efeitos opostos nos parmetros de rede (eixos a e c): A substituio do tipo A causa uma expanso no eixo a e uma contrao no eixo c, ao passo que a substituio do tipo B causa uma contrao no eixo a e uma expanso no eixo c. As substituies do tipo B associadas a substituies de Ca2+ por Na+ causam mudanas morfolgicas nos cristais de apatita: de acicular para bastes e para 20

equiaxiais com aumento do teor de carbonato (LEGEROS E LEGEROS, 1996B). A existncia de cavidades na estrutura cristalina responde pela porosidade e
consequente atividade superficial das apatitas (BRANEMARK, 1985). Vrias substituies que tambm alteram as propriedades das apatitas ocorrem, alm daquelas mencionadas at aqui. So elas: Ca2+ por Sr2+ e Ca2+ por Mg2+, que causam uma maior solubilidade das apatitas; quando presentes simultaneamente, os substituintes podem ter efeitos sinrgicos ou antagnicos nas suas propriedades. O magnsio e o carbonato tm efeitos sinrgicos sobre a cristalinidade e sobre as propriedades de dissoluo das apatitas sintticas; magnsio e fluoreto ou carbonato e fluoreto tm efeitos antagnicos, o efeito do fluoreto sendo o mais dominante (LEGEROS E LEGEROS, 1996B). A parte inorgnica do tecido sseo consiste em uma fase amorfa e uma fase cristalina, a primeira sendo fosfato triclcio enquanto que a ltima hidroxiapatita. A fase amorfa predomina em ossos novos e parcialmente transformada em fase cristalina com a idade (BRANEMARK, 1985). As apatitas biolgicas, que compem as fases minerais dos tecidos calcificados (esmalte, dentina e ossos) e algumas calcificaes patolgicas (clculo dentrio humano, pedras salivares e urinrias) so geralmente referidas a hidroxiapatitas de clcio, HA. Porm, diferem da hidroxiapatita pura em estequiometria, composio, cristalinidade e em outras propriedades fsicas e mecnicas. As apatitas biolgicas so deficientes em clcio e apresentam substituio pelo carbonato. Estas apatitas apresentam substituies do tipo B associadas a substituies do Ca2+ por Na+. Esta dupla substituio necessria para que haja um balano de cargas. Em algumas espcies de peixe e tubaro, as substituies so do tipo B associada a OH- por F(LEGEROS E LEGEROS, 1996B). A Tabela 4 mostra a ocorrncia dos fosfatos de clcio em sistemas biolgicos. As apatitas biolgicas do esmalte diferem em cristalinidade e concentrao de elementos minoritrios (principalmente CO32- e Mg2+) daquelas da dentina e das dos ossos. A apatita do esmalte dentrio a que possui as menores solubilidade e concentrao de carbonato e magnsio, alm de apresentar o maior tamanho de cristais (LEGEROS E LEGEROS, 1996B).

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Tabela 4 Fosfatos de clcio em sistemas biolgicos (LEGEROS, 1991)

Fosfato de clcio Apatita

Frmula qumica (Ca,M)10(PO4,Y)6Z2

Ocorrncia

Octaclcio fosfato, OCP

di-hidratado, DCPD

Ca8H2(PO4)6.5H2O Brushita, fosfato diclcio CaHPO4.2H2O

Whitlockita, triclcio, -TCP

fosfato (Ca, Mg)9(PO4)6

Pirofosfato de clcio di- Ca2P2O7.2H2O hidratado

Esmalte, dentina, osso, clculo dental, rochas, clculo urinrio, calcificaes em tecido mole Clculo dental e urinrio Clculo dental, condrocalcinose, crystalluria, ossos decompostos Clculo dental e urinrio, pedras salivrias, cries em dentina, cartilagem artrtica, calcificaes em tecido mole Pseudo depsitos de em fluidos sinoviais

J que as apatitas biolgicas no so hidroxiapatitas puras, a estrutura exata destes compostos permanece no identificada, sendo necessria a investigao de apatitas sintticas para se aproximar das apatitas naturais, mais complexas. A ligao da hidroxiapatita com o tecido sseo tem se mostrado satisfatria a longo prazo. No entanto, suas propriedades mecnicas aliadas alta fadiga dos implantes no permitem que seja usada como forma de ancoragem para implante submetidos a carregamentos. Desta forma, o recobrimento em materiais de alta resistncia mecnica tem sido feito atravs de implantes com meios de transferncia de esforos como poros, lacunas, ranhuras ou superfcies rugosas. Alguns autores tm observado trincas na interface metal-cermica (KASEMO E LAUSMAA, 1985). A hidroxiapatita pode ser utilizada como material slido para preenchimento sseo ou como recobrimento para qualquer tipo de metal. II.1.2 ESTABILIDADE DOS FOSFATOS DE CLCIO A insero de um implante no corpo humano causa interaes entre a superfcie do implante e os lquidos corporais. Na interface, acontecem reaes em escala molecular do tipo dissoluo de ons do material, desoro, adsoro e desnaturao de protenas (KLEIN et al., 1993). No caso da superfcie em contato com os fluidos

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corporais ser um fosfato de clcio, pode ocorrer reabsoro do mesmo ou transformao em outro fosfato de clcio mais estvel. Os materiais biodegradveis so utilizados para promover o crescimento de osso. Sua taxa de reabsoro deve ser igual taxa de crescimento sseo. Os mecanismos de biodegradao dos fosfatos de clcio permanecem no estabelecidos completamente. A solubilidade dos fosfatos de clcio geralmente medida em solues tampo. A dissoluo in vitro depende, dentre outros fatores, do pH, do tipo, da concentrao e do grau de saturao da soluo tampo, da composio e cristalinidade dos fosfatos de clcio. A ordem de solubilidade de alguns dos fosfatos de clcio a seguinte: ACP>TTCP>TCP>-TCP>AP>HA (HELMUS E TWEDEN, 1995). Essa diferena reflete a influncia da composio e das e propriedades cristalogrficas dos fosfatos de clcio.

J que as aplicaes dos fosfatos de clcio envolvem contato com gua e outros componentes presentes nos lquidos corporais, importante se conhecer a estabilidade dos mesmos em soluo aquosa.

A. FASES EM EQUILBRIO EM ALTA TEMPERATURA

As condies onde a sinterizao ocorre, envolvem temperaturas entre 1000 e 1500C. A Figura 6 mostra as fases em equilbrio presso atmosfrica, na ausncia de gua: fosfato tetraclcio (C4P), alfa-fosfato triclcio (-C3P), monetita (C2P) e misturas de xido de clcio (CaO) e -fosfato triclcio. Observa-se que a hidroxiapatita no estvel nessas condies. Se a presso de vapor for aumentada de 0 para 500mmHg, o diagrama de equilbrio ser o mostrado na Figura 7, onde observam-se uma grande variedade de misturas contendo apatita (Ap) (DE GROOT et al., 1990). difcil prever quais fases estaro presentes temperatura ambiente, j que os diagramas termodinmicos no levam em considerao a cintica.

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Figura 6

Diagrama de fases do sistema CaO-P2O5 em altas temperatura com

ausncia de gua (DE GROOT et al., 1990).

Figura 7

Diagrama de fases do sistema CaO-P2O5 em altas temperaturas.

pH2O=500mmHg (DE GROOT et al., 1990). A estabilidade dos fosfatos de clcio temperatura ambiente e em solues aquosas determinada pelo pH, como ilustrado na Figura 8. Observa-se que em pHs

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inferiores a 4,8 a fase mais estvel (nas condies da Figura 8) fosfato diclcio, monetita (CaHPO4), ao passo que em pHs superiores a 4,8 a fase mais estvel a hidroxiapatita. Fatores como temperatura e potencial aplicado entre eletrodos podem alterar esses valores de pH. As fases termodinamicamente instveis que so formadas em altas temperaturas mantm sua composio em temperatura ambiente graas baixa cintica de reaes de estado slido em baixas temperaturas. Essas fases reagem somente em sua superfcie, causando o aparecimento de uma fina camada superficial sobre a fase instvel. ser descritas como (DE GROOT et al., 1990): 4Ca3(PO4)2(s) Ca10(PO4)6(OH)2(s) + 2Ca2+ + 2HPO423Ca4P2(O)9(s) + 3H2O Ca10(PO4)6(OH)2(s) + 2Ca2+ 4OHAs fases instveis mais relevantes so Ca3(PO4)2 (-fosfato triclcio) e Ca4P2O9 (fosfato tetraclcio). Essas reaes podem

Figura 8 Solubilidade de vrias fases no sistema CaO-P2O5-H2O em funo do pH (CERAMTEC, 1997). Vrios ons presentes no meio fisiolgico podem ser incorporados rede da hidroxiapatita, dando origem s carbonato apatitas, fluorapatitas, apatitas com substituies parciais de sdio, apatitas com substituies parciais de potssio, dentre

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outras. Essa incorporao pode dar origem a substituio parcial dos ons. Frmulas genricas para essas substituies so como (DE GROOT et al., 1990): Ca10(PO4)6(OH)2-xFx Ca10(PO4)6(OH)2-2x(CO3)X Ca10-x+y(PO4)6-x(CO3)X(OH)2-x+2y 0<x<2 0<y<(1/2)x Como se pode observar, a substituio parcial pode se dar somente no grupo OH- ou em ambos os grupos, OH- e PO43-. As incorporaes de magnsio acontecem tambm no fosfato triclcio, gerando fosfato triclcio contendo magnsio, sendo essa fase mais estvel do que o fosfato triclcio puro. 0<x<2

Ca3-xMgx(PO4)2 BIOVIDROS

0<x<2/3

Os vidros bioativos foram desenvolvidos pelo Prof. Larry L. Hench, que sintetizou vrios vidros contendo misturas de slica, fosfato, xido de clcio e soda. Esses materiais foram desenvolvidos para utilizao como implantes e como recobrimento. Quando imersa em um meio aquoso, a superfcie dos biovidros libera ons Na+, K+ e Ca2+. Essas espcies so repostas com ons H3O+ da soluo atravs de uma reao de troca inica que produz uma camada superficial de slica-gel. Uma camada de apatita amorfa se forma no topo da camada de slica gel. Essa hidroxiapatita amorfa evolui para hidroxiapatita cristalina [1]. O material denominado por bioglass corresponde a um biovidro patenteado pelo Prof. Larry Hench, do sistema CaO-P2O5-SiO2-Na2O. De acordo com o diagrama mostrado na Figura 9, os vidros com composies relativas regio A so bioativos. Os vidros da regio B so inertes e os da regio C so bioreabsorvveis. Vrias outras composies de biovidros foram desenvolvidas posteriormente, algumas patenteadas. Outras, divulgadas em artigos cientficos, caram em domnio pblico.

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BIOVIDROS PARA PREENCHIMENTO DE DEFEITOS SSEOS Vidros bioativos e cermicas podem ser usados sob a forma de grnulos ou corpos porosos em aplicaes onde seja necessrio o crescimento sseo ou como recobrimentos bioativos em aplicaes como implantes onde uma boa adeso ossobiomaterial requerida. [2-7] Essa classe de materiais destinada a report tecido sseo perdido ou guiar o crescimento desse tecido por atravs de uma rea emm um defeito sseo. Quando um vidro do sistema CaO-P2O5 adicionado hidroxiapatita (HA) e o material conjugado sinterizado, a fase vtrea reage com a HA. As fases presentes aps a sinterizao dependero da temperatura de sinterizao, da composio do biovidro e das fraes HA-biovidro. [7-8] particularmente interessante haver fases reabsorvveis como os fosfatos triclcios do tipo beta (-TCP) e alfa (-TCP), uma vez que essas fases so mais solveis do que a HA. [7-8] Os materiais porosos cermicos, vtreos e vitro-cermicos podem ser produzidos atravs de vrias tcnicas como a tcnica da esponja polimrica, processo de agents espumantes e tcnicas que utilizam aditivos orgnicos. [9-11] O principal requisito quanto morfologia dos materiais porosos a existncia de porosidade aberta (inteconectiva) com dimetros de poros superiores a 100 m para permitir vascularizao adequada. [12] Essa interconectividade pode ser alcanada com a adio de agents porognicos, como aditivos orgnicos ou matrizes porosas. entanto, h um compromisso entre porosidade e resistncia mecnica. [9] Um material compsito denominado hidroxiapatita reforada com vidro, glassreinforced hydroxyapatite, GR-HA, produzido pela adio de biovidros HA. As fases presentes sero funo da composio do biovidro, da frao de biovidro utilizada e da temperatura de sinterizao. A bibliografia de biovidros e hidroxiapatitas reforadas com biovidros vasta e aponta a utilizao de materiais com vrias composies [11-17]. PESQUISA DESENVOLVIDA EM PORTUGAL O biovidro de frao molar 0.75P2O5-0.15CaO-0.10CaF2 foi produzido atravs da fuso dos reagentes em cadinho de platina a 1450C durante 1 h. O vidro foi vertido para gua fria e modo em um almofariz de gata. A moagem final ocorreu em um moinho de bolas do tipo planetrio, em etanol, durante 12 horas. Aps moagem o p foi seco a 100C durante uma noite e, posteriormente, desagregado em almofariz de gata e crivado (peneirado) at tamanho inferior a 75m. No

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O biovidro assim produzido serviu de material de base para a produo de hidroxiapatitas reforadas com biovidro. Os compsitos foram produzidos utilizandose hidroxiapatita (Ca10(PO4)6(OH)2) comercial (batch P201, Plasma Biotal; Tideswell, U.K.) e produzindo-se mistura em etanol em moinho do tipo planetrio durante 12 horas para se homogeneizar a mistura. O compsito denominado GRHA (glass reinforced hydroxyapatite) foi utilizado para a produo de biocermicas porosas para preenchimento de defeitos sseos [16-17].

Figura 9 Diagrama para biovidros do sistema CaO-Na2O-SiO2 (L.L.HENCH).

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II.2 TCNICAS DE RECOBRIMENTO Os recobrimentos nos implantes osteointegrados so feitos com duas finalidades principais: criar uma superfcie bioativa ou aumentar a rugosidade superficial. No caso da nfase na rugosidade, so feitos recobrimentos com p de titnio por asperso trmica. Quando o objetivo o aumento da bioatividade, feito o recobrimento com cermicas bioativas e biovidros. Uma outra aplicao para os recobrimentos com fosfatos de clcio o recobrimento como transportador de protenas sseas morfogenticas (DASARATHY et al., 1996). II.2.1 RECOBRIMENTO COM VIDROS BIOATIVOS Os recobrimentos com vidros bioativos tm trs objetivos principais:

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Proteger o substrato de corroso; Proteger os tecidos de produtos de corroso; Fornecer uma ligao interfacial boa com o tecido sseo. Quatro mtodos so utilizados no processo de recobrimento com vidros bioativos (HENCH e ANDERSON, 1993): A. Esmaltagem: nesse processo, o vidro fundido, homogeneizado e resfriado bruscamente e modo at se transformar em p. Esse p aplicado sobre o metal atravs de pintura, asperso ou imerso. A camada aplicada aquecida a uma temperatura acima do ponto de amolecimento do vidro (400-600C) onde o vidro se funde a uma camada de xido do metal formando uma ligao mecnicoqumica na interface. A superfcie externa do p sinterizada e forma uma A fim de se obter essa camada camada coerente de vidro fundida ao metal.

aderente, utilizada uma camada intermediria chamada camada de base, composta por uma mistura de vidro com xido de Co ou Ni, que reage com o metal, geralmente ao. HENCH e colaboradores falharam na tentativa de conseguir uma camada de biovidro sobre uma camada de base. Essa falha se deveu difuso de ons pela camada do biovidro, destruindo sua bioatividade. A soluo encontrada tem sido a aplicao de duas camadas de vidro no substrato. A primeira prov ligao interfacial, enquanto a segunda, mantm sua bioatividade. B. Vitrificao: utilizada principalmente no recobrimento de alumina com biovidros. Um problema a ser superado a diferena de coeficiente de expanso trmica. feito um ajuste da composio qumica do vidro, o que destri a bioatividade do vidro. A soluo aplicar duas camadas: a primeira camada, bastante delgada, misturada a um solvente orgnico. Aps a queima desse solvente a 650C, o vidro fundido alumina a 1350C durante 15 minutos. O resfriamento causa a formao de ilhas de vidro fundido alumina com um gradiente de Al2O3 difundido para dentro do vidro. Uma segunda camada aplicada e aquecida a 1150C durante 30 minutos seguida de um resfriamento lento para aliviar as tenses entre as duas camadas. A segunda camada tem difuso de alumina Logo, essa camada limitada devido temperatura de tratamento mais baixa.

mantm sua bioatividade. A limitao desse processo reside na possibilidade de ocorrncia de trincas, o que causa o desprendimento de lascas do recobrimento.

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C. Asperso trmica chama: o aparato para esse processo consiste basicamente de uma tocha da mistura oxignio-hidrognio ligada a um alimentador de p, que passa por uma tocha na faixa de 3000C. O p rapidamente aquecido e fundido se choca contra o substrato onde se vitrifica. O controle das variveis de faixa de amolecimento do vidro, taxa de tmpera e viscosidade do vidro produzem uma camada lisa e livre de bolhas. D. Imerso rpida: o substrato aquecido para formar uma camada espessa de xido. A seguir, o metal imerso em um recipiente com biovidro fundido. O xido dissolvido no vidro formando uma ligao aderente entre o substrato e o biovidro. Nesse processo, possvel o ajuste da contrao do substrato metlico contrao do vidro. O problema do recobrimento com biovidros que a estrutura do biovidro permite o transporte de ons. Essa peculiaridade permite que se forme uma camada de carbonato apatita, criando stios de ligao para o colgeno. Essa rede aberta tambm permite a liberao de ons de Fe, Mo, Cr, Co, Ni, Ti ou Ta. Se esses ctions estiverem presentes, eles reagem rapidamente com a superfcie e previnem a formao da camada de fosfato de clcio e sua recristalizao em carbonato apatita, o que inibe ou elimina a bioatividade do vidro. II.2.2 RECOBRIMENTOS COM FOSFATOS DE CLCIO O termo recobrimento com hidroxiapatita deve ser utilizado somente quando se tem certeza da composio exata do fosfato de clcio em questo. Mesmo considerandose uma nica tcnica, por exemplo, asperso trmica, camadas com propriedades bastante distintas podem ser obtidas. Isso vai depender dos parmetros operacionais do processo e essa heterogeneidade pode influenciar as propriedades de dissoluo das camadas (PASCHALIS et al., 1995). Outros autores reportaram tcnicas de recobrimento que produzem camadas mais homogneas e menos espessas do que as produzidas por asperso trmica (ZHOU et al., 1996; DEPTULA et al., 1996; MIZUSHIMA et al., 1996; ANDERSON et al., 1997). As propriedades mecnicas das biocermicas so limitadas em relao a solicitaes em trao. Para superar essa limitao, so feitos recobrimentos de metais com Esses biocermicas, ao invs de confeccionar-se o implante com a biocermica.

recobrimentos so feitos atravs de vrias tcnicas, dentre elas: banho do metal em cermica fundida, asperso trmica, deposio por eletroforese, deposio por presso isosttica a quente e deposio por bombardeio inico assistido (KLEIN et al.,

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1993; DE GROOT, 1998, DE ANDRADE et al., 1998A, DE ANDRADE et al., 1998B; DE ANDRADE et al., 1999). A. DEPOSIO POR LASER PULSADO A deposio por laser pulsado feita irradiando-se um um pedao de hidroxiapatita colocado em uma cmara de vcuo com pulsos de uma fonte de laser. A cmara evacuada a 10-6mbar e preenchida com vapor dgua at que se alcance a presso de trabalho (0,45mbar). O feixe de laser, (ArF, =193nm), operando a uma taxa de As placas de titnio so colocadas a uma repetio de 20Hz, focado sobre o pedao de hidroxiapatita, alcanando uma densidade de energia de 0,8mJcm-2. de uma lmpada de halognio. distncia de 5mm da hidroxiapatita e mantido a 455C durante a deposio por meio O substrato desengordurado com acetona e A passivado com cido ntrico em soluo aquosa em banho ultra-snico. implante (GARCA-SANZ et al., 1997). B. BANHO DE METAL EM CERMICA FUNDIDA O banho em cermica fundida envolve a fuso da cermica e a imerso do implante nesse banho. Como desvantagem, tem-se as altas temperaturas envolvidas, o que pode causar a degradao da cermica e alteraes no metal base. desvantagem a dificuldade em se recobrir pequenos poros no metal. C. DEPOSIO POR PROCESSOS ELETROQUMICOS Exitem vrios processos eletroqumicos de deposio que oferecem uma alternativa aos processos que envolvem altas temperaturas e equipamentos caros. Os principais processos eletrolticos so: C.1 DEPOSIO POR ELETROFORESE A deposio por eletroforese envolve a aplicao de um campo eltrico a uma suspenso de partculas de hidroxiapatita em lcool ou gua. alterao do material de partida mnima. Nesse mtodo, a Uma aplicao desse mtodo em Uma outra

hidroxiapatita depositada sobre o implante de titnio seguindo os contornos do

implantes com superfcies irregulares ou porosas, onde outros processos no alcanariam. No entanto, como as partculas so depositadas individualmente, sem ligao umas com as outras, necessrio que se faa a sinterizao do implante

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recoberto. A ligao com o implante fraca. Logo, esse mtodo mais aplicado a implantes onde a presena do recobrimento necessria somente durante um curto perodo de tempo, como implantes porosos. Vrios autores (MODGIL e DAMODARAN, 1993; ASAOKA, 1996; ASAOKA et al., 1996) reportaram a obteno de depsitos uniformes sobre substrato de titnio. No entanto, a adeso aparece como fator limitante desse processo. Em trabalho recente, (PRADO DA SILVA et al. 1998; GIBSON et al., 1999), foi desenvolvida uma tcnica eletroltica de recobrimento com hidroxiapatita que promove camadas com maior aderncia ao substrato do que aquelas obtidas pelo processo de eletroforese. C.2 DEPOSIO ELETROLTICA Os processos eletrolticos de deposio de fosfatos de clcio so relativamente simples, rpidos e envolvem baixos custos. O substrato, geralmente titnio, utilizado como catodo ao passo que utiliza-se como anodo geralmente platina. fonte que aplica uma diferena de potencial entre eles. Os dois eletrodos so imersos em um eletrlito contendo ons Ca2+ e PO43- e ligados a uma O processo pode ser conduzido com ou sem agitao mecnica e a vrias temperaturas. A boa adeso do depsito ao substrato aparece como uma das principais vantagens dos processos eletrolticos (DASARATHY et al., 1996; PRADO DA SILVA et al., 1998; GIBSON et al., 1999). REDEPENNING et al. (1996) obteve um depsito de brushita sobre titnio puro que foi posteriormente convertido em hidroxiapatita. Esse resultado serviu de base para o desenvolvimento da tcnica de deposio de hidroxiapatita em substrato de titnio pelo processo eletroltico utilizada nesse trabalho (PRADO DA SILVA et al., 1998; GIBSON et al., 1999; DA SILVA et al., 1999A). A composio qumica, morfologia e adeso dos fosfatos de clcios depositados pelos processos eletrolticos so dependentes de vrios fatores, dentre eles o valor de pH da soluo (SHIRKHANZADEH, 1998; ASAOKA, 1996; ASAOKA et al., 1997). D. DEPOSIO BIOMIMTICA O processo de deposio biomimtica se baseia na precipitao heterognea sobre substratos de titnio ativados. alcalina, geralmente NaOH, A superfcie do titnio tratada em uma soluo e posteriormente tratada termicamente. Esse

procedimento ativa a superfcie do metal, acelerando a nucleao e crescimento de fosfatos de clcio (SOARES et al., 1997; DE ANDRADE et al., 1998A). A nucleao e

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crescimento do recobrimento de apatita se d aps imerso em uma soluo salina balanceada (soluo de Hanks ou SBF), a 37C por vrios dias (DE GROOT, 1998). Esse processo se assemelha ao processo de biomineralizao ssea (LAYROLLE et al., 1998). E. DEPOSIO POR PRESSO ISOSTTICA A QUENTE Nesse mtodo, o p do material que vai recobrir o metal prensado a quente para se densificar. Para garantir uma presso uniforme sobre a superfcie do metal, utilizado um material para encapsular, geralmente um metal nobre. Uma vantagem desse mtodo a utilizao de temperaturas inferiores s temperaturas utilizadas na sinterizao, j que as temperaturas nesse processo so inferiores a 900C. Esse fato contribui para que as propriedades do substrato metlico e do p prensado no sejam alteradas. WIE et al. (1995), comparando implantes recobertos por esse processo e por asperso trmica, reportou a ausncia de decomposio da hidroxiapatita em fases secundrias.

F. DEPOSIO POR BOMBARDEIO INICO Os mtodos de deposio por bombardeio de feixe inico e bombardeio por radiofrequncia consistem no bombardeio de um metal alvo por um feixe inico em uma cmara de vcuo. Os alvos do material a recobrir so bombardeados formando um filme fino sobre o metal. No caso do recobrimento com hidroxiapatita, os tomos individuais de Ca, P, O e H so depositados formando um material amorfo. requerido um tratamento trmico para fornecer energia suficiente para que haja formao da hidroxiapatita cristalina. Essas camadas geralmente tm melhor adeso e melhores propriedades mecnicas do que as camadas mais espessas. No entanto, ainda so necessrios estudos indicativos da durabilidade de camadas com espessuras inferiores a 1m no corpo humano (LACEFIELD, 1993). Vrios mtodos alternativos tm sido testados no sentido de reproduzir as apatitas biolgicas. Em estudo recente, Yamashita et al. (1996) reportaram o desenvolvimento de um mtodo de deposio de apatita carbonatada do Tipo B, que bastante semelhante s apatitas encontradas no esmalte dentrio e no osso cortical.

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G. ASPERSO TRMICA As tcnicas de asperso trmica consistem em aspergir p de um material sobre o substrato metlico. Uma tocha utilizada para acelerar as partculas em direo ao alvo. O processo pode ser feito com a utilizao de uma tocha de oxignio a alta velocidade ou com uma tocha de plasma (gs ionizado). No primeiro processo, temperaturas mais baixas so utilizadas, o que evita a degradao da camada. Uma outra vantagem que a maior velocidade permite que as partculas penetrem em irregularidades do implante. O processo de asperso trmica a plasma (plasma spraying) o mais estabelecido e o mais utilizado comercialmente de todos os mtodos citados. Nesse processo, uma tocha de gs ionizado empregada. A Figura 10 ilustra esquematicamente o processo de asperso trmica a plasma. temperatura. O gs utilizado geralmente argnio que ionizado ao passar pela zona de descarga de alta Um plasma mais quente pode ser produzido atravs de pequenas adies de hidrognio ou outros gases. A zona de descarga gerada por um arco de corrente que formado entre um anodo de cobre e um catodo de tungstnio. O bico do canho de plasma mantido refrigerado a gua j que as temperaturas so da ordem de 10000C. Como o perodo em que as partculas ficam na zona quente muito curto, a fuso das partculas somente parcial (LACEFIELD, 1993).

Figura 10 Esquema de recobrimento por asperso trmica a plasma.

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As principais variveis no recobrimento por plasma so: distncia do substrato tocha de plasma; corrente; distncia entre anodo e catodo; mistura gasosa empregada; posio em que as partculas entram no plasma. Apesar da alta temperatura do processo, o substrato fica a uma temperatura relativamente baixa, da ordem de 300C, o que representa uma vantagem j que o substrato metlico no sofre alteraes mecnicas. O recobrimento com hidroxiapatita feito geralmente sob presso atmosfrica, ao passo que recobrimentos com ps metlicos so feitos sob vcuo ou em atmosferas inertes. No recobrimento com hidroxiapatita, as partculas so 100% cristalinas, na faixa de 20-40m. Quando estas colidem com o substrato, so deformadas em um formato caracterstico chamado splats, que consistem em partculas espraiadas sobre a superfcie. A espessura final do recobrimento costuma ser da faixa de 40-60m. Essa camada geralmente contm pores considerveis de fosfatos de clcio amorfos e uma pequena poro de fases cristalinas como hidroxiapatita. possvel aumentar-se a cristalinidade e a resistncia da ligao da camada ao substrato atravs de tratamentos trmicos. No entanto, esse tratamento nem sempre vivel por vrias razes: efeitos adversos no substrato, custos adicionais ao processo e possibilidade de contaminao da hidroxiapatita (LACEFIELD, 1993). O recobrimento resultante no sofre delaminao porque a Microscopicamente, o mesma composta de uma infinidade de microtrincas.

recobrimento por asperso trmica consiste em vrias reas aderidas ao substrato. Logo, quando o mesmo se deforma, no ocorre delaminao da camada como um todo (WILLMANN e WIMMER, 1993). No processo de plasma, no h restries quanto natureza do metal a ser recoberto; o nico requisito que a superfcie metlica seja rugosa. Para materiais polimricos, no entanto, h restries quanto temperatura do processo, j que altas temperaturas podem acarretar degradao das propriedades do polmero e estas podem comprometer a biocompatibilidade (WILLMANN, 1997). Os recobrimentos com hidroxiapatita so, de maneira geral, regidos pela norma ASTM F 1185-88, que estabelece a faixa de 50-250m para a espessura da camada

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depositada. No entanto, ainda h muita discusso sobre normalizao (LEMONS e GREENSPAN, 1993). WILLMANN e WIMMER (1993) estabeleceram que quanto maior a espessura, menor ser a resistncia da camada. Esses autores encontraram valores superiores a 35MPa para camadas de espessura de 200m e superiores a 90Mpa para espessuras de 50m, confirmando a tendncia do aumento da resistncia mecnica das camadas com a diminuio da espessura das mesmas. Se o processo de asperso trmica for bem controlado, a camada de hidroxiapatita deve exibir as seguintes propriedades: A percentagem de fases minerais deve ser superior a 98%; A camada dever exibir uma porosidade aberta; A resistncia ao cisalhamento dever ser superior a 35MPa para espessura de 200m. A Tabela 5 lista algumas propriedades importantes dos recobrimentos de hidroxiapatita produzidos por asperso trmica. Tabela 5 Propriedades tpicas da hidroxiapatita cermica (WILLMANN e WIMMER, 1993). Propriedades Densidade terica Resistncia compresso Resistncia flexo Tenacidade fratura Mdulo de Young Dureza Expanso trmica Ponto de fuso Resistncia corroso Valores Padro Observaes 3,16g/cm3 100-200MPa 100MPa mx. 1MPa m1/2 100GPa mx. 500 HV 11x10 K 1650C
-6 -1

Valor ideal, raramente obtido na prtica Considerando-se a densidade terica de 3,16g/cm3 Frgil como vidro de janela Sob alta densidade (valor padro) Decomposio! Aumenta em pHs altos

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II.3 IMPLANTES ODONTOLGICOS

As razes pelas quais so empregados procedimentos cirrgicos reconstrutivos que envolvem implantes variam consideravelmente mas podem ser identificadas como (WILLIAMS, 1992B): substituio de um dente perdido por crie, doena periodontal ou trauma; substituio de osso perdido por um processo de reabsoro relacionado a distrbios nos campos de tenso ou periodontite induzida por bactria; perda tecidual devido a tumores; Trs tipos principais de implantes tm sido usados: totalmente sepultos, subperisticos e endosseos (DE GROOT, et al. 1990). Implantes totalmente sepultos: a no existncia de evidncias cientficas que justificassem essa tcnica fez com que cassem em desuso; Implantes justa-sseo ou subperisticos: Consistem em uma estrutura fundida moldada ao osso maxilar, com projees na cavidade oral, onde fixada a prtese. So utilizados principalmente em mandbula atrfica. Essa tcnica permite bons resultados a curto prazo. A interface osso-implante do tipo fibrosa, o que faz com que em perodos acima de 15 anos, a ocorrncia de fracasso seja grande; Implantes endsseos: os implantes osteointegrados so inseridos no osso maxilar ou mandibular. Esses implantes podem ser recobertos ou no com materiais bioativos e a cirurgia de implantao pode ser feita em uma ou duas etapas. Esses implantes foram desenvolvidos por P. I. BRANEMARK e colaboradores e levou ao desenvolvimento de diferentes geometrias (DE GROOT, et al. 1990). A maior quantidade de informaes clnicas slidas est relacionada ao sistema sueco Branemark de implantes osteointegrados. II.3.1 CLASSIFICAO DOS IMPLANTES ENDOSSEOS: A. QUANTO GEOMETRIA E AO ACABAMENTO DA SUPERFCIE Os implantes endosseos do tipo osteointegrados oferecem um alto ndice de sucesso, de forma que existe no mercado um grande nmero, que continua

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crescendo, de sistemas de implantes. Esses implantes podem ter a forma de cilindros, lminas, parafusos, cones, ou at mesmo imitar a geometria da raiz de um dente. Os primeiros implantes utilizados tinham o formato de lminas com furos ou reentrncias para promover aposio mecnica do tecido sseo e eram genericamente conhecidos como blade vent. Esses implantes eram inseridos em cavidades cuidadosamente preparadas no osso do paciente. Aps o fracasso dos implantes blade-vent, surgiram os implantes transsseos (atravessavam a mandbula), que se assemelhavam a um grampo mandibular. Esse tipo de implante era restrito mandbula e requeria espessura ssea adequada. Uma grande desvantagem era o alto risco de infeco. O implante de desenho cilndrico ou cnico atualmente sinnimo de implante odontolgico. O implante cilndrico pode ser rosqueado ou no. Quanto ao acabamento superficial, os implantes podem ser de titnio puro ou recobertos, sendo que os implantes de titnio puro podem ser lisos ou rugosos. Os recobrimentos so geralmente feitos com material bioativo, principalmente hidroxiapatita. No entanto, so encontrados tambm implantes recobertos com p de titnio por asperso trmica a plasma, visando o aumento da rugosidade superficial. Os implantes de titnio puro rugosos recebem vrios tipos de tratamentos de superfcie para criar essa rugosidade, como jateamento com partculas duras de xidos e ataques qumicos com cido. Os xidos mais utilizados no jateamento so Al2O3, SiO2 e TiO2. A Figura 11 apresenta algumas das vrias geometrias de implantes disponveis atualmente.

Figura 11 Principais geometrias e acabamentos superficiais de implantes disponveis (SPIEKERMANN, 1995).

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B. QUANTO FIXAO AO OSSO Quanto fixao ao osso, os implantes odontolgicos do tipo osteointegrados podem ser classificados em quatro categorias principais: implantes do tipo 1, que so aqueles feitos de material inerte e que no fazem nenhuma ligao com o osso; implantes do tipo 2 so os implantes porosos, onde o osso cresce por entre as reentrncias, promovendo uma fixao mecnica. Os implantes do tipo 3 so bioativos e formam ligao com o osso atravs de reaes qumicas na interface. No tipo 4 recaem os implantes reabsorvveis, que aps algum tempo de insero, so substitudos pelo osso (HENCH e WILSON 1993). Implantes do tipo 1: esses implantes so feitos de materiais inertes e no fazem nenhuma ligao com o osso. A interface osso-implante consiste em tecido fibroso e esse tipo de implanta no apresente estabilidade a longo prazo. Implantes do tipo 2: essa categoria abrange implantes feitos de materiais bioinertes e implantes feitos de materiais bioativos. Nessa categoria de implantes, se enquadram os implantes de cermicas porosas e recobertos com hidroxiapatita sobre metais porosos. Neste caso, a ligao com o osso mais complexa e envolve fatores mecnicos e de bioatividade. Esse tipo de ligao comumente chamado de fixao biolgica. Uma limitao desse tipo de implantes quanto ao tamanho mnimo dos pros. Estes devem possuir dimetro superior a 100m, que o tamanho de pro mnimo necessrio para que os capilares supram o tecido que crescer dentro dos pros. Implantes do tipo 3: esses implantes fazem um tipo de fixao que intermediria entre os implantes reabsorvveis e os bioinertes. Nesses implantes, formada uma camada de carbonato apatita que equivalente em composio e estrutura fase mineral do osso. Essa camada cresce como aglomerados policristalinos e fibras de colgenos so incorporadas estrutura, ligando o implante inorgnico aos tecidos. A interface gerada bastante semelhante quela que ocorre entre o osso e os tendes e osso e ligamentos, tanto em termos de constituintes quanto em termos de distribuio de tenses. Implantes reabsorvveis do tipo 4: os implantes reabsorvveis so projetados para se degradarem a uma taxa igual taxa de reparao do organismo. O resultado final deve ser uma camada muito fina ou inexistente do material reabsorvvel. A limitao

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desse tipo de implante a obteno de um bom desempenho mecnico durante o perodo de regenerao, ou seja: bom desempenho mecnico a curto prazo. Os melhores materiais para implantes reabsorvveis so: fios de sutura compostos de poli (cido ltico) ou poli (cido gliclico), que so metabolizados em dixido de carbono e gua; fosfato triclcio, que decomposto em sais de clcio e fosfato e podem ser usados para preenchimento sseo. C. QUANTO CIRURGIA Os implantes odontolgicos podem ser classificados, quanto aos estgios de cirurgia, em implantes de 1 ou 2 estgios cirrgicos. Implantes de 1 estgio: os implantes de 1 estgio so inseridos no leito receptor e de l emerge para a cavidade oral. O tecido gengival que recebeu a inciso para se ter acesso ao osso suturado cuidadosamente ao redor do implante. O implante permanece sem carregamento durante o perodo de regenerao ssea at que seja inserida a prtese sobre a poro do implante que est exposta. Um exemplo de implante de um estgio o implante Tbingen, que feito de alumina pura e tem a geometria de cones que do ao implante um aspecto de degraus decrescentes. A sua superfcie contm ranhuras longitudinais e pros circulares, para promover aposio mecnica de osso. Esse sistema de implantes utilizado principalmente em substituies de dentes unitrios. A maioria dos implantes cilndricos feita de titnio puro ou de liga de titnio, especialmente a liga Ti-6Al-4V. Um exemplo de implante cilndrico de 1 estgio o sitema ITI, que de titnio puro de superfcie porosa (WILLIAMS, 1992B). Implantes de 2 estgios: os implantes desse tipo so inseridos no leito receptor, porm ficam totalmente submersos na mucosa. Esses implantes permanecem assim, protegidos de solicitaes mecnicas e de interaes com o meio exterior enquanto o tecido sseo se regenera. Esse perodo varia de 16 a 18 semanas para osso mandibular e 20 a 24 semanas para maxila. Aps esse perodo, a mucosa reaberta e a prtese fixada sobre o implante. O exemplo mais notrio de sistema de implante de dois estgios e o sistema Nobelpharma (Branemark). Esse implante um cilindro rosqueado confeccionado em titnio comercialmente puro. Esse sistema de implante recomendado para pacientes totalmente edntulos. Para cada arcada, so indicados em torno de seis implantes,

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dependendo da anatomia de cada paciente. O acesso ao osso feito com uma broca, sob baixa rotao e irrigao farta, para evitar sobreaquecimento e subsequente necrose do tecido sseo. O furo ento rosqueado com o auxlio de um macho e os implantes so inseridos. O torque utilizado na insero dos implantes deve ser minimizado e uma pequena cobertura colocada sobre as terminaes de cada implante. A cavidade fechada e o implante permanece protegido durante o perodo de regenerao. Aps o perodo de regenerao, as coberturas so removidas e so colocados abutments, que so os componentes que fazem a ligao do implante com a prtese. A mucosa suturada ao redor dos abutments e o tratamento prottico comeado poucas semanas mais tarde. bsicos do sistema Branemark A Figura 12 apresenta os componentes

Figura 12 Componentes de um sistema Branemark: (a) implante, (b) pilar prolongador, (c) parafuso do pilar, (d) cilindro de ouro, (e) parafuso de ouro (SPIEKERMANN, 1995). O sistema Core-Vent, projetado tanto para substituies de dentes unitrios quanto para pacientes totalmente edntulos, confeccionado com uma liga de titnio com superfcie porosa. A Figura 13 apresenta alguns sistemas de implantes do tipo corevent.

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Figura 13 Sistema de implantes Biolox e Oraltronics (SPIEKERMANN, 1995). O sistema IMZ tambm emprega implantes cilndricos para substituies unitrias ou mltiplas. Porm, esse sistema possui algumas caractersticas peculiares: esses O sistema Calcitek implantes so multi-componentes e possuem um componente polimrico que projetado para conferir ao conjunto um grau de resilincia. Omnilock possui implantes cilndricos recobertos com hidroxiapatita. Esses implantes apresentam perfuraes na extremidade para promover fixao mecnica. As Figuras 14 e 15 apresentam vrios sistemas de implantes que utilizam cilindros lisos e rosqueados.

Figura 14

Implantes cilndricos: (a) IMZ, (b) Calcitek, (c) Frialit-1, (e) Frialit-2

(SPIEKERMANN, 1995).

Figura 15 Implantes cilndricos rosqueados: (a) antigo ITI de pea nica, recoberto por plasma de titnio, (b) implante de Ledermann, jateado e posteriormente atacado com cido, (c) Branemark, (d) implante ITI, recoberto por plasma de titnio (SPIEKERMANN, 1995).

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II.4 INTERAES OSSO-IMPLANTE

O primeiro tecido a entrar em contato com o implante o sangue, cujo volume envolvendo o implante vai variar em funo da geometria do implante e do stio cirrgico. O cogulo sofrer uma srie de eventos biolgicos que terminaro na formao de tecido sseo ao redor do implante. O implante entrar em contato com percentagens variveis de osso cortical, osso trabecular e medula ssea. Algumas reas estaro comprimindo o tecido sseo enquanto outras estaro em contato com sangue e uma variedade de clulas. Essa caracterstica aponta para o fato de haver na verdade vrias interfaces com o implante(MASUDA et. al., 1997). As clulas no vem um material nu in vivo ou in vitro. A todo momento, o material est condicionado pelos componentes do fluido onde est inserido, seja soro, saliva, ou meio de cultura de clulas. A superfcie do biomaterial estar coberta com uma mistura de lipdios, acares, ons e protenas especficos para a composio qumica, topografia e a densidade de carga do substrato. As caractersticas da superfcie determinaro quais molculas iro adsorver, ao passo que a natureza e orientao dessas biomolculas tero consequncias diretas no recrutamento, ancoragem, proliferao e diferenciao das clulas. A ancoragem das clulas requer a presena de protenas de ligao especficas, enquanto a proliferao e diferenciao requerem que fatores de crescimento e citocinas estejam presentes (BOYAN et al., 1996). Para um entendimento das interaes dos diferentes biomateriais com os tecidos hospedeiros, necessrio um estudo do fenmeno da osteointegrao, da fisiologia do osso e das propriedades que regulam a ligao osso-implante.

II.4.1.1 EMBASAMENTO CELULAR DA OSTEOINTEGRAO Foi destacado que uma das condies indispensveis ao sucesso da osteointegrao a presena de tecido sseo vivel. portanto necessria a presena das clulas que tomam parte nesse processo. So elas: osteoblastos, osteoclastos, ostecitos e clulas indiferenciadas, precursoras dos osteoblastos. Estas ltimas sero estimuladas para a induzir formao de tecido sseo (osteognese).

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Quando o osso traumatizado por ocasio da insero do implante, ocorre a formao de um cogulo. Portanto, necessrio tambm a formao de uma certa quantidade de tecido mole (capilares). O trauma operatrio ir sensibilizar clulas que iro liberar determinados fatores de crescimento que estimularo novas clulas. O equilbrio entre a formao de tecidos moles e de novo osso influenciado pelos mediadores liberados por estas clulas. Esse equilbrio entre os elementos teciduais envolvidos que dita o sucesso ou no da reparao. Influncias externas como aplicao de carregamento antes do tempo, alteraes de pH ou da saturao de O2 podem perturbar a reparao ssea (MASUDA et al., 1998). Ao mesmo tempo em que a injria estimula a resposta reparao, um trauma muito severo pode levar a danos permanentes nos tecidos, impedindo a reparao. Existem trs diferentes linhas que postulam que o estmulo adequado reparao ssea baseia-se no contato: clula-clula, molculas solveis da matriz ou potenciais eltricos gerados por tenses. No primeiro caso, acredita-se que as clulas so Portanto, segundo essa capazes de emitir um sinal qumico que ir influenciar as clulas adjacentes indiferenciadas a se diferenciarem em pr-osteoblastos. No segundo caso, a substncia bsica enfatizada. teoria, haveria uma competio entre os fatores de reparao dos tecidos envolvidos. Dessa maneira, as clulas indiferenciadas seriam estimuladas pelos componentes da matriz. A terceira teoria a de que o sinal eltrico liberado pelo efeito piezoeltrico do osso v deflagrar a resposta reparao (HOBKIRK e WATSON, 1996). Para uma compreenso mais ampla do fenmeno da osteointegrao bem como dos fatores que podem favorec-la, preciso um estudo dos materiais em questo, que so: tecido sseo, lquidos corporais e o material da superfcie de implantes. Esse estudo abrange reas multidisciplinares que envolvem biologia, odontologia engenharia de materiais, qumica, engenharia mecnica, entre outras. Os captulos subsequentes abordaro mais detalhadamente a fisiologia do osso, os materiais usados em implantes e suas propriedades de superfcie, a natureza da ligao ossoimplante e as tcnicas de avaliao in vivo e in vitro de implantes.

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II.4.2 FISIOLOGIA DO OSSO A. INTRODUO O osso cortical uma forma densa e especializada de tecido conectivo onde clulas chamadas ostecitos se encontram inseridas. As clulas vivas respondem por 15% do peso do osso e so responsveis pelo processo incessante de remodelamento: enquanto uma classe de clulas chamadas osteoclastos erode o osso velho, outra chamada de osteoblastos deposita matriz ssea recm-formada. A matriz ssea composta de fibras de colgeno, cristais de um fosfato de clcio complexo e uma substncia de base ou cimento, que compreende um nmero de componentes incluindo mucopolissacardeos. Esta matriz permeada por uma rede de cavidades e canais onde ficam os ostecitos (ALBERTS et al., 1989). Como o osso uma mistura de fibras tenazes (fibrilas de colgeno do tipo I) e partculas slidas (cristais de fosfato de clcio), ele apresenta boa resistncia tanto a cargas compressivas quanto a cargas trativas. O osso pode assumir diferentes morfologias e funes, de acordo com sua localizao no esqueleto humano. O osso cortical, tambm chamado osso compacto, duro e forte e pode ser encontrado na superfcie de ossos planos ou entre as duas extremidades de ossos longos em mamferos, onde caracterstico do crtex sseo. Logo, o nome osso cortical. No osso cortical, os canais vasculares so muito estreitos de forma que o osso cortical macroscopicamente slido. Por outro lado, no osso trabecular grosseiro, esses canais so muito mais largos, variando de um milmetro a um centmetro ou mais de dimetro. No osso trabecular fino, o componente vascular tambm dominante, mas a textura bem mais fina e este somente pode ser observado com um microscpio. proteger o tecido vital. Alm da funo de sustentao, uma outra funo que os diferentes tipos de osso possuem a de Exemplos so: o crnio protegendo o crebro; a coluna vertebral protegendo o sistema nervoso central e o osso trabecular protegendo a medula ssea onde novas clulas sseas podem migrar a partir do tecido hematopoitico para os vasos sanguneos de paredes finas e tomar parte na circulao do corpo.

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Os constituintes do osso esto em equilbrio dinmico, j que h clulas morrendo e sendo repostas; adicionalmente, a fase mineral e o colgeno esto sempre sendo reabsorvidos e depositados durante a vida adulta saudvel. Esse processo permite a manuteno da forma e volume dos ossos e chamado de remodelamento. A fase mineral do osso compreende 70% de seu peso e consiste basicamente de cristais de apatita. O osso representa o maior reservatrio de clcio do corpo humano. Consequentemente, alm das funes de sustentao e proteo de tecido vital, ele desempenha um terceiro papel, no metabolismo, realizando a troca de minerais com o sangue. A quarta funo do osso como um filtro para uma variedade de ons gerados no sangue que podem substituir ons de clcio ou ser incorporados rede dos cristais de apatita, ou ainda serem aderidos matriz orgnica (SOMCHAI, 1992). As propriedades mecnicas do osso cortical esto apresentadas na Tabela 6. Tabela 6 Propriedades Mecnicas do Osso Cortical (SOMCHAI, 1992). PROPRIEDADES MECNICAS Lim. Res. a compresso (MPa) Lim. Res. a trao (MPa) Mdulo de Young (GPa) microdureza (VPN) Tenacidade fratura (MPa.m) B. MACROESTRUTURA DO OSSO A macroestrutura do osso consiste em osso cortical, osso trabecular, medula ssea e vasos sanguneos. O osso cortical composto de sistemas Haversianos ou osteons, onde as lamelas esto arranjadas concentricamente em torno de canais contendo um ou mais vasos sanguneos (Canais de Haversianos). preenchidos com o restante dos osteons velhos. Essas estruturas tubulares Os limites dos osteons so correm longitudinalmente e esto empacotadas juntas, tendo os interstcios demarcados por linhas de cemento da mesma forma que o so algumas lamelas em osso trabecular e algumas lamelas circunferenciais. As fibras de colgeno tambm podem estar orientadas randomicamente formando uma estrutura entrelaada. Isso ocorre em osso imaturo e em algumas comndies patolgicas. Ossos recmformados tm um depsito de colgeno no mineralizado sobre as suas superfcies. Este depsito uma camada bastante fina e est ausente quando ocorre reabsoro. LONGITUDINAL (L) 70-280 70-160 11-21 30-60 2-5 TRANSVERSAL (T) 53 50-53 5-13 8

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Na maioria dos mamferos, o osso cortical formado de fibras finas, mas nos invertebrados inferiores, ele pode ser composto principalmente de fibras grosseiras. A formao de osso compacto novo obtida por trs mecanismos ocorrendo simultaneamente (BOURNE, 1972): a) parcialmente pela consolidao de osso trabecular fino, onde cilindros de osso novo chamados de osteons so formados nos tneis vasculares; b) parcialmente como uma formao direta de osso slido no peristeo e medula de qualquer osso plano existente; c) parcialmente no processo de remodelamento de osso compacto existente, onde os tneis so erodidos e preenchidos novamente com cilindros de osso chamados de osteons secundrios. Osso trabecular, tambm chamado de osso esponjoso ou medular, encontrado nas extremidades e cavidades medulares de ossos longos, bem como nas vrtebras e no centro de ossos planos. Embora tenha baixa resistncia mecnica, o osso trabecular tem um arranjo que funciona muito bem como uma estrutura de amortecimento de peso. O osso trabecular pode ser dividido em duas variedades principais: osso trabecular fino e osso trabecular grosseiro. O osso trabecular fino encontrado no esqueleto de fetos ou em ossos novos patologicamente induzidos. O osso trabecular grosseiro encontrado no esqueleto adulto de mamferos. Ele tem uma estrutura de colmia com vasos sanguneos e gordura no interior das trabculas. A medula permeada com vasos sanguneos, sendo uma fonte de nutrientes que viajam para as lacunas localizadas no osso trabecular. C. MICROESTRUTURA DO OSSO Nos seres humanos e mamferos superiores, o arranjo dos constituintes do osso do origem a duas microestruturas sseas principais: osso entrelaado ou de fibras grosseiras e osso lamelar ou de fibras finas (HANCOX, 1972). A microestrutura do osso composta de osso primrio ou entrelaado, osso secundrio ou lamelar e clulas sseas. O osso entrelaado apresenta espaos grandes contendo gordura, vasos sanguneos e tecido conectivo. Esses espaos so envolvidos por matriz ssea, onde os ostecitos esto randomicamente distribudos. A

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estrutura que observada quando amostras histolgicas so preparadas conhecida como trabcula e corresponde vista plana da matriz ssea circundante. Embora o osso entrelaado seja um material efmero e seja reabsorvido e substitudo por osso lamelar, ele tambm encontrado em locais de ligao de tendes e ligamentos, em raiz de dentes e nas margens de sutura dos ossos do crnio. Nos ossculos da orelha, algum osso entrelaado dito persistir por toda a vida. Osso trabecular entrelaado formado em calos em torno de uma fratura e em alguns ossos em desenvolvimento. Osso compacto entrelaado formado em reas de difise de ossos em desenvolvimento. O osso lamelar tem lamelas Haversianas ou concntricas com vasos sanguneos em canais vasculares localizados no seu centro. Esses canais vasculares juntamente com suas lamelas associadas constituem os sistemas Haversianos, onde os ostecitos so arranjados concentricamente com os canais. Cada lamela contm fibras finas de colgeno aproximadamente paralelas umas s outras. Entre essas fibras, h substncia de base amorfas e cristais de apatita. Ambos os ossos entrelaado e lamelar podem conter canais vasculares esparsos, dando origem a osso compacto ou denso ou podem conter canais largos, formando osso trabecular ou esponjoso. A Figura 16 mostra a microestrutura do osso cortical.

Figura 16 Vista esquemtica do osso cortical (JUNQUEIRA et. al., 1995). Clulas sseas: h trs tipos de cluas sseas distintas das clulas medulares que pertencem ao sistema hematopoitico. Elas so (HANCOX, 1972; JUNQUEIRA et. al., 1995):

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Osteoblastos: so clulas completamente diferenciadas que tm a funo da formao de osso (osteognese). Elas so as responsveis pela sntese dos componentes orgnicos matriz ssea (colgeno do tipo I, proteoglicanos e glicoprotenas), bem como dos componentes inorgnicos. Estas clulas so vistas na superfcie de ossos em formao, constituindo uma espcie de epitlio. Elas tm citoplasma basoflico e ncleo ecntrico, distal em relao superfcie do osso. Os basfilos so devidos presena de cido ribonucleico. A atividade de sntese pode ser medida pela morfologia destas clulas: quando empenhadas na produo de matriz, elas tm citoplasma basoflico e um formato cuboidal a colunar, ao passo que quando a atividade de sntese diminui, elas se tornam planas e os basfilos citoplasmticos diminuem. Estes processos citoplasmticos se tornam mais evidentes quando essas clulas envolvem-se a si mesmas em matriz sintetizada nova. Quando isto ocorre, estas clulas so chamadas de ostecitos. A cavidade onde elas se encontram chamada de lacuna e o espao ocupado pelas extenses citoplasmticas chamado canalculo. A matriz nova que depositada na superfcie de ossos mais velhos chamada osteide, e fica entre a superfcie do osso mais velho e a camada de osteoblastos. Esta nova matriz no calcificada ainda e a aposio de osso completada quando os sais de clcio so depositados nesta nova matriz. Ostecitos: so clulas maduras (anteriormente osteoblastos) que se tornaram inclusas na matriz que eles formaram. lacunas dentro do osso. Eles residem em pequenos espaos ou Essas lacunas esto conectadas umas s outras e aos

espaos vasculares por canalculos, pequenos canais dentro dos quais processos citoplasmticos dos ostecitos se projetam. Atravs dos canalculos, passam fluidos e substncias dissolvidas usadas e produzidas pelo metabolismo celular. Osteoclastos: so clulas gigantes multinucleares cujos citoplasmas contm numerosas mitocndrias. Estas clulas agem como destruidoras do osso e podem ser vistas em pequenos grupos ou isoladamente em superfcies que esto sendo erodidas ou reabsorvidas. Elas so geralmente encontradas em cavidades na superfcie do osso (lacunas de Howship). sugerido que ou osteoclasto pode remover o que depositado por 100 a 1000 osteoblastos. A Figura 17 mostra esquematicamente as clulas sseas.

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Figura 17 Diagrama das clulas sseas(JUNQUEIRA et al., 1995).

II.4.3 NATUREZA DA LIGAO OSSO-IMPLANTE

Na regio que fica em contato com a medula ssea, a resoluo do cogulo sanguneo e a infiltrao de glbulos brancos ser seguida pela invaso do stio cirrgico, atravs de uma rede tridimensional de fibrina e colgeno do tipo III (matriz tridimensional), de clulas endosseas de fentipo osteognico e clulas mesenquimais indiferenciadas com capacidade para se diferenciarem em clulas osteognicas, o que ser concomitante com a nova vascularizao (DAVIES, 1996). Essas clulas so pluripotenciais quanto a sua diferenciao em osteoblastos, condroblastos, clulas musculares ou clulas de gordura. O caminho seguido depender de fatores sistmicos e locais (REDEPENNING, 1996). As clulas interagem com o meio atravs de protenas de adeso especficas. As clulas mesenquimais tendem a usar fibronectina para ancor-las ao colgeno de sua matriz extracelular. A fibronectina sintetizada pelas clulas de origem mesenquimal e est presente no soro do local do trauma cirrgico. A energia de superfcie do material pode influenciar o tipo de protena que sero aderidas ao material mas o potencial para a protena sofrer um rearranjo estrutural tambm uma varivel importante. medida que a orientao da ligao dos ons, minerais, gua, protenas e outras molculas alterada, h uma correspondente mudana na ancoragem de clulas superfcie via adeso de molculas celulares, resultando em uma mudana na morfologia e, finalmente, no comportamento das clulas (REDEPENNING, 1996).

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A arquitetura cortical vascular ser destruda pelo trauma cirrgico independentemente da geometria do implante. No crtex, ocorrer a princpio a necrose do tecido sseo. Somente atravs de remodelamento sseo ocorrer posteriormente uma substituio do osso peri-implante com a possibilidade de formao de novo tecido sseo na superfcie do implante (DAVIES, 1996). Existem duas possveis formas pelas quais as clulas sseas migram para a superfcie do implante: no primeiro, elas vm diretamente da trabcula vizinha; no segundo, as clulas migram atravs da matriz tridimensional. O primeiro mtodo o menos provvel, j que a trabcula vai estar danificada pelo trauma cirrgico e a superfcie estar coberta com protenas adsorvidas. No segundo mtodo, ou seja, migrao atravs da rede tridimensional, preciso que a superfcie do implante ancore a rede tridimensional. A ancoragem necessria para suportar as contraes de tecido que ocorrem quando do remodelamento. Em implantes metlicos, a ancoragem O mecnica, ao passo que acredita-se que ocorra ligao qumica em implantes recobertos com materiais bioativos, que so vidos na adsoro de protenas. conceito de ligao qumica no est ainda estabelecido porque difcil isolar-se o efeito da rugosidade do efeito da composio qumica das camadas de fosfatos de clcio (DAVIES, 1996). Testes in vitro mostraram uma ligao ntima dos produtos da matriz extracelular e os substratos de carbonatoapatita, ao passo que observou-se uma interface abrupta entre substrato de hidroxiapatita e esses produtos (DE BRUJIN, 1996). Acredita-se que a densidade ssea tem um fator preponderante sobre a dissoluo da hidroxiapatita (GROSS, 1996). Um dos princiapais fatores para o sucesso de uma cirurgia de implante a integridade interface osso-implante. Isso significa boa ligao e transferncia de tenses adequada na interface. Vrios elementos contribuem para a integridade da interface, como nvel e distribuio de tenses, reaes teciduais, remodelamento, trauma e cirurgia e movimento relativo entre osso e implante. Uma anlise desses fatores abrange conhecimentos interdisciplinares envolvendo materiais e superfcies, engenharia qumica e mecnica, aspectos biolgicos do meio circunvizinho. Dentre os elementos responsveis pela obteno de resultados satisfatrios em uma cirurgia de implante, pode-se citar (KOHN e DUCHEYNE, 1992): seleo do material do implante;

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propriedades mecnicas do recobrimento; mecanismo de ligao do tecido ao implante; o estado superficial do material e/ou recobrimento; adeso do recobrimento ao implante; tamanho, forma e distribuio da porosidade superficial; viabilidade e propriedades mecnicas do tecido circunvizinho; estabilidade inicial e estmulo ao tecido que est se formando; propriedades elsticas do substrato e do tecido; tipo de carregamento; geometria do implante; resposta biolgica do material.

A resposta biolgica, no caso de metais, est associada com a posio na tabela peridica e com o peso atmico. Os elementos do Grupo II (Be, Mg, Ca, Cd, Sr, Ba, Zn e Hg) mostram acentuada citotoxicidade, ao passo que os elementos dos Grupos IV (Si, Ti, Zr e Sn) e VI (Cr, Mo e W) no mostram toxicidade nem irritao. Os metais de baixo peso atmico dentro de um grupo possuem alta citotoxicidade, irritabilidade e potencial carcinognico, ao passo que os metais de mais alto peso atmico dentro do mesmo grupo so inertes. Exemplo: Cu (Grupo I), V, As e Sb (Grupo V) e Fe, Co e Ni (Grupo VIII) so txicos, ao passo que Au (Grupo I), Ta (Grupo V) e Pd e Pt (Grupo VIII) so inertes (KAWAHARA, 1995). Para exercer um efeito negativo sobre as clulas, o metal deve estar ionizado. Os metais que se ionizam facilmente, como o titnio, so tolerados porque ocorre a formao de um filme estvel de xido. Os metais preciosos no so adequados para utilizao como biomateriais porque geralmente so muito dcteis e os metais preciosos duros contm metais txicos como Cu, Cd e Zn. A tendncia a ionizao no corresponde totalmente com a citotoxicidade porque o padro de resposta celular a metais varia dependendo do tipo de on e do filme passivo sobre a superfcie do metal. Quanto mais a estrutura molecular de um material se assemelhar ao tecido hospedeiro, mais facilmente ele ser dissolvido pelo organismo. Logo, materiais com estruturas moleculares semelhantes a protenas ou polisacardeos so facilmente reabsorvveis. Em estudos de cultura de clulas em meios de cultura contendo soro, foi observado que as clulas tm maior molhabilidade em superfcies hidroflicas do

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que em superfcies hidrofbicas. Esse fato foi atribudo a uma casca de hidrogel que formada ao redor do citoplasma das clulas. Esse hidrogel formado por glicosaminoglicanos, e proteoglicanos. Essa camada deve agir como um material de ligao com a incorporao de uma camada de conformao modificada por lipdios e protenas do meio que so adsorvidos superfcies hidroflicas. Essa forte adeso atribuda a mudanas que ocorrem na camada sanduche, que composta pela camada de conformao e pela matriz extracelular (KAWAHARA, 1995). A Figura 18 ilustra esquematicamente a ligao de uma clula a uma superfcie hidroflica.

Figura 18

Camada de ligao de uma clula a uma superfcie hidroflica

(KAWAHARA, 1995). A avaliao do contato de clulas com filmes metlicos em MET revelou que o contato com filmes de titnio se deu de forma direta, ao contrrio do que foi observado com outros metais como Au, Pt e Pd, onde observou-se evidncia de um espao entre o citoplasma das clulas e o metal (KAWAHARA, 1995). Uma explicao para essa observao que o xido de titnio adsorve molculas de gua. Essa camada de xido hidratada (MOOH) adsorve protenas, lipdios, polisacardeos proteoglicanos e outras macromolculas, que so associadas a ons metlicos e no metlicos e so a base para a formao da camada de conformao. Segundo KAWAHARA (1995), o xido de titnio est em equilbrio dinmico com o tecido sseo e a ligao desse metal com o tecido do tipo bioreativa, e no bioativa. Logo, segundo esse autor, a inteface Ti-osso produz uma ligao qumica, situando o

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titnio entre os materiais bioinertes e os bioativos. Essa bioreatividade faz com que, em contato com soro sangneo, o xido de titnio sofra uma srie de reaes. Uma oxidao adicional ocorre, envolvendo a difuso de tomos do metal para a interface xido/biolquido. Concomitantemente, a dissoluo do xido controlada pelos seguintes fatores (BROWNE e McGREGSON, 1994): Natureza e resistncia da ligao metal-xido; Espessura do xido; Estrutura de defeitos da camada de xido (lacunas, elementos intersticiais, etc.); Grau de ordenao no interior da camada de xido; Comportamento anisotrpico devido a stios de dissoluo preferencial nos planos cristalogrficos especficos. O xido de titnio altamente polar, o que causa a adsoro de molculas de gua e de molculas solveis em gua. A adsoro dessas molculas causa a criao de um campo eltrico formado por uma diferena de potencial ao longo da espessura do xido. Esse campo eltrico encoraja a oxidao do titnio e medida que a espessura da camada de xido aumenta, a diferena de potencial diminui, diminuindo tambm a fora motriz para a sua dissoluo. Outros eventos envolvem a difuso de ons minerais ou tomos (Ca, P) do biolquido para o xido. Ocorre ainda adsoro e desoro de molculas, sendo que o grau de desoro dependente da geometria, rugosidade, e do tipo de molcula envolvida (BROWNE e McGREGSON, 1994). Quando a interface em questo a de uma liga de titnio, outras espcies envolvidas devem ser consideradas. No caso da liga Ti-6Al-4V, estudos indicam a presena de Al2O3 na camada externa do xido dessa liga. Estudos termodinmicos mostram que, em meio aquoso com baixas concentraes de Ca e P, como o soro humano o alumnio instvel, tendendo a se dissolver (SOARES et al., 1999). Quando inserido no corpo humano, acredita-se que a interao interfacial do titnio com os fluidos corporais ocorre em trs passos (KAWAHARA, 1995): Passo 1: imediatamente aps a insero, formado um cogulo ao redor do implante e os tecidos epiteliais e conectivo so ligados camada hidratada do implante atravs da camada sanduche (camada de conformao + matriz extracelular). Essa camada deve estabelecer uma forte ligao entre a superfcie do implante e o tecido neoformado.

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Passo 2: aproximadamente 1 ms aps a insero do implante em osso alveolar, o cogulo reorganizado e os osteoblastos entram em contato direto com a superfcie via extenses citoplasmticas. Passo 3: aproximadamente 3 meses depois, h maior contato direto do tecido sseo com o implante e as fibras colgenas se ligam intimamente superfcie do implante. Estudos recentes apontam um contato ntimo do tecido sseo com a superfcie de titnio atravs de uma camada nanomtrica que consiste de Ti, Ca, P e macromolculas. No caso dos implantes recobertos com cermicas bioativas, formada uma ligao orgnica com o osso neoformado, seguida de osteognese. Esse fenmeno no ocorre sempre devido complexidade do fenmeno interfacial de osteognese. As cermicas bioativas sofrem um processo de dissoluo resultando na cristalizao de apatita in vivo. A engenharia de tecidos pode ser conceituada como a utilizao de materiais para promover a formao de novo tecido, tanto in vitro quanto in vivo. Atualmente, tem-se concentrado estudos na biodegradao do material, j que esse fator influenciar a resposta celular imediata. A engenharia de tecidos requer no somente o Esses eventos envolvem interaes recrutamento de clulas progenitoras adequadas, mas tambm sua subsequente diferenciao em tecido maduro e funcional. complexas de fatores sistmicos (hormnios) e locais (citocinas e fatores de crescimento). O campo dos fatores de crescimento tem recebido ateno especial (BOYAN et al., 1996).

II.4.4 TRATAMENTOS DE SUPEFCIES

O objetivo dos tratamentos de superfcies o estabelecimento de uma ligao qumica e mecnica do osso ao material do implante. Geralmente objetiva-se a criao de uma superfcie rugosa onde feita a aposio mecnica do osso. A maioria dos implantes sem recobrimento feita de titnio puro. O metal usinado at adquirir o formato adequado. Aps a usinagem, feita a limpeza das superfcies para deix-las livres de resduos dos processos de fabricao. Esses resduos podem ser desde lubrificantes de usinagem at partculas de xido no caso de implantes

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jateados. A limpeza feita com detergentes e banhos ultra-snicos. KAWAHARA (1995) verificou que o desengorduramento feito com detergente produzia superfcies com alto ngulo de molhamento e baixa tenso superficial crtica, mesmo quando era feita posterior esterilizao em autoclave. Por outro lado, tratamentos com cido e H2O2 produziram superfcies com baixo ngulo de molhamento e altos valores de tenso superficial crtica. Atualmente, uma infinidade de tratamentos de superfcies tm sido aplicados aos implantes de titnio. Esses tratamentos envolvem desde tratamentos puramente mecnicos que visam o aumento da rugosidade superficial at tratamentos qumicos que envolvem mudanas estruturais na camada de xido. Os trs principais mtodos de modificao das superfcies dos implantes so (KAWAHARA, 1995): 1. Aplicao de recobrimentos por diferentes mtodos: os recobrimentos geralmente so feitos para a criao de uma superfcie bioativa. No entanto, outras finalidades como a preveno da liberao de ons, o mascaramento das contaminaes das superfcies causadas pelos processos de fabricao e a produo de uma supefcie rugosa e porosa tambm so objetivados. 2. Tratamentos qumicos com cidos, anodizao ou implantao inica: os tratamentos qumicos tm por objetivos principais a limpeza da superfcie, criao de rugosidade e ativao da superfcie atravs da alterao estrutural da camada de xido. Os principais tratamentos qumicos so: Ataque cido: os cidos mais utilizados so HF e HNO3. Aps o ataque cido, feita imerso em soluo HF + H2O2. O papel do H2O2 a formao de uma camada estvel de xido, aps a exposio do metal ao cido. Tambm so aplicados na limpeza aps os tratamentos de jateamento para retirar partculas inclusas. Anodizao: esse tratamento feito atravs da utilizao de um anodo de titnio e um catodo de platina, prata, ao inoxidvel, etc. feita a reao eletroqumica em um meio eletroltico e obtm-se superfcies com diferentes coloraes. Em estudo recente, (ISHIZAWA et al., 1995; ISHIZAWA et al., 1996) utilizaram uma soluo de acetato de clcio e -fosfato de glicerol. Aps um tratamento hidrotrmico em

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atmosfera de vapor sob alta presso, foi formada uma camada de hidroxiapatita de aproximadamente 1m de espessura. Observou-se que essa camada bastante efetiva na promoo da osteocondutividade, principalmente em implantes rugosos. Os tratamentos de superfcie que envolvem altas temperaturas tm a vantagem de aumentar a espessura da camada de xido, bem como de estabilizar a mesma. BROWNE e GREGSON (1994) avaliaram a liberao de ons em implantes de liga de titnio com diferentes tratamentos de superfcies. Foi observado que o tratamento trmico a 400C resultou na formao de uma estrutura rutlica ordenada e densa, que foi efetiva na reduo da liberao de ons. A cristalinidade e a microestrutura do xido de titnio tambm influenciam a induo de precipitao de apatita. ISHIZAWA et al. (1995) demostraram a existncia de uma dupla camada intermediria entre o substrato de titnio e a camada de apatita precipitada aps modificao de uma superfcie anodizada. KOKUBO e colaboradores (KOKUBO et al., 1996; KIM et al., 1996A; YAN et al., 1996; MIYAZAKI et al, 1996; KIM et al., 1996B) definiram um tratamento hidrotrmico em soluo de NaOH como forma de ativao da superfcie do titnio. Dessa forma, criada uma superfcie bioativa intermediria entre a camada de apatita precipitada e a camada de xido do substrato metlico. O tratamento mais usual consiste na exposio a uma soluo alcalina seguido de tratamento trmico. Esse tratamento produz uma camada de um titanato alcalino que, em contato com os lquidos corporais, incorpora ons clcio e fosfato. A resistncia ao cisalhamento da interface metal-apatita em amostras de titnio submetidas a tratamento alcalino seguido de tratamento trmico se mostrou bem superior dos processos fsicos de deposio de hidroxiapatita (KIM et al., 1996B). A Figura 19 apresenta esquematicamente as etapas da ativao da superfcie do titnio atravs de tratamento qumico em soluo de NaOH. As etapas de mudana estrutural consistem em: (a) formao de uma camada de titanato alcalino hidrogel; (b) densificao do gel e transformao em uma fase vtrea de titanato alcalino; (c) nucleao de apatita sobre a superfcie aps insero em SBF (simulated body fluid).

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Apatita Titanato alcalino hidrogel Titanato alcalino

Figura 19

Representao esquemtica da evoluo estrutural da ativao da

superfcie do titnio obtida atravs de tratamento qumico em soluo de NaOH (SALAYTER e SLAYTER, 1992). Uma variao do tratamento com NaOH, proposta por WEN et al. (1998), consiste em um ataque cido com HCl e H2SO4 seguido de tratamento alcalino com NaOH em ebulio. O ataque cido tem a funo de criar micropros na superfcie do implante. Os autores postulam que o tratamento alcalino tem duas funes: formao de mais micropros e aumento da camada de xido. FUJISHIRO et al. (1996) utilizaram um tratamento hidrotrmico para precipitar uma camada de monetita entre o substrato de titnio e o recobrimento de hidroxiapatita. A camada de monetita serviu de intermediria entre a camada de xido de titnio e a camada de apatita precipitada sobre o implante. Nitrificao: h dois mtodos para se fazer a nitrificao das superfcies de titnio: implantao inica ou aquecimento a 750C-900C em atmosfera de nitrognio gasoso. No mtodo de implantao inica, so usados nitrognio gasoso e titnio metlico em uma cmara de vcuo para formar TiN. Esse composto intermetlico implantado sobre a superfcie do titnio. O tratamento trmico em atmosfera gasosa tambm produz uma camada de TiN. 3. Tratamento mecnico por jateamento ou usinagem: os implantes sem recobrimento so submetidos a tratamentos mecnicos que visam a aposio mecnica do tecido sseo ao implante. aumento da rugosidade das superfcies. Geralmente essa finalidade alcanada Os detalhes usinados podem ser desde atravs da criao de detalhes usinados na superfcie dos implantes ou atravs do

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superfcies rosqueadas at a criao de furos ou reentrncias para que o osso cresa por entre esses detalhes. O aumento da rugosidade das superfcies. feito geralmente como o jateamento com partculas duras de xido. Os xidos mais usados so xido de Ti, Al ou Si. Aps o jateamento, recomendado um tratamento com cido para retirar possveis incrustaes de partculas de xido e tambm para uniformizar a rugosidade criada pelo processo de jateamento. A necessidade do desenvolvimento e manuteno de uma interface osso-implante em funo para reteno mecnica e transmisso de foras oclusais tem levado diversos autores a estudar a influncia da rugosidade das superfcies de implantes odontolgicos na resposta ssea in vivo (WENNERBERG et al., 1993; WENNERBERG et al., 1997; WONG et al., 1995; SUZUKI et al., 1997; O, GOTFREDSEN et al., 1995; BRANEMARK et al., 1997) e in vitro (KELLER et al. 1990; BOYAN et al., 1996; OSHIDA et al., 1993; KIESWETTER et al., 1996; FUJIMORI, 1995). As caractersticas de superfcie como macro e micro topografia e composio qumica das superfcies afetam as respostas celulares a curto prazo (migrao e ancoragem) e a longo prazo (diferenciao e expresso da matriz) (KELLER, 1998). Aps a limpeza, feita a esterilizao. Esses tratamentos podem afetar a resposta celular. O estado energtico das superfcies depende do tipo de material, do manuseio do implante durante o processo de manufatura, do modo de limpeza e de esterilizao. Tanto contaminantes orgnicos quanto os inorgnicos podem modificar as propriedades qumicas e a energia da superfcie (CARLSSON et al., 1989). Esterilizao definida como a eliminao ou destruio total de toda vida microbiana ou viral. Desinfeco a reduo dos microorganismos patognicos a nveis seguros atravs da inibio dos processos celulares (SINGH e SCHAAF, 1989). O mtodo de esterilizao mais utilizado o de autoclave, que consiste na exposio da superfcie a uma atmosfera de vapor aquecido. Esse mtodo promove um Segundo KELLER et al. aumento da espessura da camada de xido do titnio. No entanto, a esterilizao em autoclave pode promover a adsorso de contaminantes. (1990), os implantes esterilizados com autoclave apresentaram superfcies mais hidrofbicas do que os implantes esterilizados com gs xido de etileno a 130C ou imerso em etanol absoluto por 20 minutos.

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Mtodos alternativos tm sido propostos. Dentre eles, irradiao com Raios Gama, esterilizao dinmica com Raios Ultra-Violeta, esterilizao por descarga de radiofrequncia a plasma e imerso em etanol absoluto, dentre outros. Estudos laboratoriais indicam que a exposio a fontes de Raios Ultra-Violeta promovem uma inativao de 90% de vrus e bactrias, causando uma desinfeco e no uma esterilizao (SINGH e SCHAAF, 1989). O mtodo de esterilizao dinmica consiste na exposio da superfcie a ser esterilizada a uma lmpada germicida especial Ultra-Violeta. Essa lmpada capaz de penetrar nos materiais orgnicos, irradiar todas as irregularidades da superfcie a ser tratada, causar uma excitao da superfcie do titnio e microcombusto de microarestas provenientes do processo de fabricao (DELGADO e SCHAAF, 1990). A esterilizao por descarga de radiofrequncia feita atravs do bombardeio da superfcie com ons formados no plasma. Nesse tratamento, so removidos tomos e molculas da superfcie. Ocorre uma reduo da espessura de xido bem como uma maior limpeza quando comparado com a esterilizao em autoclave (CARLSSON et al., 1989; WENNERBERG et al., 1993; BINON et al., 1992).

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II.5 TCNICAS DE CARACTERIZAO METALRGICA

As superfcies dos implantes devem ser caracterizadas quanto a sua composio qumica, quanto topografia e quanto bioatividade. As tcnicas de caracterizao de composio qumica avaliam o grau de pureza do metal bem como a presena de contaminantes provenientes dos processos de fabricao, limpeza e esterilizao. A caracterizao da topografia envolve a anlise das superfcies com o emprego de vrias tcnicas de microscopia e perfilometria. A energia da superfcie tambm um ponto a ser analisado. Para essa anlise, so utilizados gonimetros para medir o ngulo de contato de um lquido colocado sobre a superfcie a ser analisada. A energia na superfcie de um biomaterial definida pela densidade geral e pela polaridade das cargas. Assim, superfcies com polaridade positiva ou negativa podem ser hidroflicas, ao passo que superfcies com cargas neutras podem ser mais hidrofbicas. O efeito global das cargas nas superfcies aumentar a tenso superficial local, a energia livre de superfcie e a energia de adeso (BOYAN et al., 1996). II.5.1 TCNICAS DE CARACTERIZAO TOPOGRFICA WENNERBERG et al. (1992) estabeleceram que os detalhes de topografia em escala micromtrica podem ter uma influncia sobre as propriedades mecnicas, e de superfcie. Para descrever a topografia das superfcies de implantes, vrias tcnicas so empregadas. As mais utilizadas so (DA SILVA et al., 1998A): A. MICROSCOPIA ELETRNICA DE VARREDURA Nessa tcnica, um feixe colimado de eltrons varre a superfcie da amostra. Os

eltrons espalhados so coletados, gerando um sinal que amplificado e usado para modular o brilho de um tubo de raios catdicos que varrido simultaneamente ao feixe de eltrons. A imagem gerada uma imagem ponto a ponto. Como a profundidade de campo muito grande, essa tcnica muito utilizada em estudos topogrficos. Vrios tipos de contrastes podem ser utilizados de acordo com a finalidade da anlise. Na anlise com contraste por eltrons secundrios, so captados eltrons com baixa energia, oriundos da superfcie da amostra. Essa particularidade permite a anlise de detalhes topogrficos com elevada definio. Na anlise com contraste por eltrons

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retroespalhados, so coletados eltrons de maior energia, oriundos de uma profundidade maior da amostra. Esse contraste fortemente dependente das espcies atmicas envolvidas. Isso faz com que essa tcnica seja potencialmente usada na identificao de fases que no apresentam significantes diferenas morfolgicas. B. MICROSCOPIA TICA CONFOCAL A LASER Os microscpios confocais, em contraste com as outras tcnicas de microscopia tica, removem a luz no refletida do plano focal. Isso conseguido atravs de dois filtros bloqueadores. Se a superfcie est em foco, a luz refletida passar pelo filtro e uma alta intensidade ser registrada. Em caso contrrio, a intensidade registrada ser muito baixa. As contribuies de regies fora de foco para a formao da imagem so efetivamente suprimidas, resultando em uma imagem de alta resoluo e alta preciso no plano vertical (WENNERBERG, 1996). No microscpio confocal, podem ser feitas sees confocais, ou seja: imagens de vrios planos e atravs de um software adequado, esses planos podem ser montados dando origem a um mapa de alturas tridimensionais. Quando so analisadas amostras transparentes, como amostras biolgicas, podem ser analisadas profundidades de alguns dcimos de milmetros. C. MICROSCOPIAS DE VARREDURA COM PONTA DE PROVA Microscopias de varredura com ponta de prova um nome genrico para as tcnicas de microscopia de varredura que utilizam uma pequena ponta de prova posicionada muito prxima amostra sob investigao. Essa ponta de prova usada para medir alguma grandeza que fortemente dependente da separao amostra-ponta de prova. A ponta de prova varre a amostra e uma imagem do relevo da superfcie analisada gerada. Os principais tipos de microscopias de ponta de prova so microscopia de varredura por tunelamento e microscopia de fora atmica. Outras tcnicas so: microscopia de fora de frico, microscopia de varredura por condutncia inica, microscopia de varredura por tunelamento de ftons e microscopia de ressonncia magntica. A topografia dos biomateriais na escala em que ocorrem as interaes com clulas e protenas (de m a nm) possui informaes que so essenciais na avaliao do desempenho do material em contato com os fluidos corporais. Por exemplo, as

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mudanas nas propriedades eletrnicas resultantes de defeitos podem afetar a capacidade de adsoro de protenas e pequenas molculas. Na escala das clulas, a topografia pode afetar a migrao, diferenciao e aderncia de clulas. caracterizao em escalas nanomtricas. C1. MICROSCOPIA DE VARREDURA POR TUNELAMENTO O microscpio de varredura por tunelamento foi o primeiro da famlia dos microscpios de ponta de prova. Seu princpio baseado no efeito tnel, ou seja: uma ponta de prova muito aguda colocada a uma distncia muito pequena (da ordem de nm) de uma amostra e uma diferena de potencial entre elas aplicada. A grandeza medida o fluxo de corrente entre a amostra e a ponta de prova pelo tunelamento quntico. A corrente de tunelamento fortemente dependente da separao amostra-ponta de prova (DESCOUTS et al., 1995). Essa tcnica revela detalhes atmicos como defeitos e processos de adsoro. Essa tcnica tem a vantagem sobre as tcnicas de difrao de permitir uma observao mais local. No campo de biomateriais, as tcnicas de microscopia de varredura por ponta de prova oferecem a vantagem de operarem presso ambiente e possibilitar anlise em lquidos. A ponta de prova montada em um atuador piezoeltrico que guiado por um mdulo de alta voltagem. A ponta de prova pode se deslocar sobre a superfcie da amostra fazendo varredura lateral e perpendicular, permitindo um deslocamento tridimensional. A corrente coletada em um pr amplificador, gerando um sinal de entrada. O sinal de sada proporcional diferena entre a corrente medida e um valor de referncia. Esse sinal de sada amplificado e enviado para os eletrodos dos tubos piezoeltricos. Os tubos de cermica piezoeltrica se retraem quando a corrente de tunelamento maior do que o valor de referncia, ao passo que esses tubos se alongam quando a corrente medida menor do que a referncia. A corrente de tunelamento ento mantida constante durante a varredura, assim como a distncia da ponta de prova superfcie da amostra. Uma imagem tridimensional gerada atravs das alturas da ponta de prova em funo de sua posio lateral (xy). A investigao dos biomateriais com microscopia de ponta de prova bastante til na

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C2. MICROSCOPIA DE FORA ATMICA O microscpio de fora atmica permite ao usurio superar a limitao que a microscopia de tunelamento impe em relao a amostras no condutoras. Tambm pode-se analisar amostras em ambientes midos. Uma ponta de prova posicionada em uma haste de material macio, que varre a amostra analisada. Um feixe laser incide sobre a parte posterior da haste e, aps sofrer reflexo, defletido em um fotodiodo com dois setores. A diferena de intensidade da luz que alcana os dois setores uma medida da deflexo do suporte e fornece um sinal que enviado ao circuito eletrnico. A deflexo ento mantida constante durante a varredura. A varredura feita com fora constante entre a amostra e o suporte. A medida da fora de arraste da ponta de prova sobre o substrato pode ser associada, por exemplo, com a fora de adeso de clulas ao substrato. A aproximao da ponta superfcie analisada menos delicada j que a ponta suportada por um material macio e evitar dano amostra (DESCOUTS et al., 1995). D. PERFILOMETRIA As anlises em perfilometria permitem a quantificao de parmetros de rugosidade. Essa quantificao geralmente feta atravs da utilizao de rugosmetros ou de equipamentos desenvolvidos especificamente para esse fim. Os rugosmetros podem fazer a varredura da superfcie com uma agulha semelhante s agulhas utilizadas nas tcnicas de microscopia de sonda (probe microscopy) ou pode tambm ser feita uma varredura a laser. WENNERBERG et al. (1992) desenvolveram um mtodo de anlise de rugosidade que descreve a topografia de superfcies. Esse mtodo emprega uma varredura confocal a laser sobre a superfcie de uma amostra que fica a uma distncia de trabalho grande. Os principais parmetros obtidos so: Ra, rugosidade mdia tambm chamada de mdia aritmtica. a conveno mais utilizada para rugosidade, especialmente para controle de qualidade e definida como o desvio mdio absoluto da linha mdia sobre o comprimento varrido. No entanto, Ra insensvel a comprimento de onda ou picos e vales muito altos. Rq, rugosidade mdia quadrtica, o desvio mdio sobre o perfil medido no comprimento varrido. geralmente usado para dar significncia terica extra sobre a distribuio de alturas. Rt o mximo valor medido de distncia entre pico e vale sobre o perfil analisado.

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II.5.2 TCNICAS DE MICROANLISE E DE QUMICA ANALTICA Quando uma amostra observada em MEV, as interaes do feixe de eltrons com a superfcie da amostra geram ftons, eltrons Auger, eltrons secundrios, eltrons retroespalhados e emisso de Raios-X caractersticos. As tcnicas de microanlise empregam um detector de Raios-X acoplado ao MEV que os diferencia em termos de energia (EDS) ou comprimento de onda (WDS), sendo mais empregada a espectroscopia por energia dispersiva (EDS). Os Raios-X detectados so comparados aos padres existentes e os elementos constituintes so identificados. A comparao com padres pode fornecer uma anlise qumica semi-quantitativa, embora as tcnicas de microanlise sejam mais usadas em anlise qualitativa. B. ESPECTROSCOPIA DE FOTOELTRONS POR RAIOS-X (XPS) OU

ESPECTROSCOPIA DE ELTRONS PARA ANLISE QUMICA (ESCA) Dois termos gerais que englobam todas as tcnicas que envolvem luz so espectroscopia e espectrometria. O instrumento designado espectrmetro. Qualquer espectrmetro que utilize um fotomultiplicador como detector chamado espectrofotmetro e a tcnica desiganada como espectrofotometria. Na tcnica de XPS, a amostra atingida por um feixe de Raios-X que ejeta eltrons das camadas de valncia. O aparelho, que opera sob alto vcuo, detecta e quantifica a energia associada transio dos eltrons das camadas mais internas que iro ocupar os lugares vagos. Assim, essa anlise se restringe a camadas da ordem de 0,5 a 10nm, podendo fornecer informaes a respeito da interao da superfcie com o meio, identificando por exemplo os filmes de xido presentes (DA SILVA et al., 1998A). O eltron ejetado possui energia cintica dada por Ecin = h Eb - , onde: h a energia do fton incidente; Eb a energia de ligao do eltron emitido; a funo de trabalho.

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Como tanto h quanto so conhecidos, pode-se deteminar Eb atravs da medio da energia cintica, identificando-se, assim, os elementos presentes nas supercies analisadas (MUSTER e DEMRI, 1995). A espectroscopia de fotoeltrons por Raios-X uma ferramenta til na avaliao das mudanas estruturais ocorridas na camada de xido de titnio quando feito o tratamento de ativao da superfcie (TAKADAMA, 1998). A espectroscopia de eltrons para anlise qumica uma ferramenta importante na compreenso das interaes entre as protenas e as superfcies (CHITUR, et al, 1998). C. ESPECTROMETRIA DE EMISSO ATMICA COM FONTE DE PLASMA

ACOPLADO INDUTIVAMENTE (ICP-MS) H vrios mtodos atravs dos quais so gerados tomos a partir de ons. O mais usual a utlizao de uma chama. Quando uma soluo de ons metlicos colocada em uma chama, o solvente evapora deixando cristais do sal anteriormente dissolvidos. A chama usada para essa atomizao na maioria dos instrumentos de absoro atmica, em todas as fotometrias por chama e em todos os instrumentos por fluorescncia atmica. Todos os atomizadores so fontes de energia similares. Um tipo de atomizador utiliza uma fonte de plasma acoplada indutivamente. Nesse caso, alm da atomizao, tambm ocorre a excitao dos tomos (KENKEL, 1992). A espectrometria de emisso atmica com fonte de plasma acoplado indutivamente uma tcnica de emisso estritamente atmica onde uma suspenso da amostra e os padres, so introduzidas em um fluxo de argnio que ir se ionizar gerando o plasma. Uma intensa emisso ocorrer levando possibilidade de deteco e medio de pequenas concentraes de ons metlicos com preciso. Essa tcnica muito mais sensvel do que todas as outras tcnicas atmicas (KENKEL, 1992). D. DIFRAO DE RAIOS-X A difrao de Raios-X pela rede cristalina ocorre sobre uma larga faixa angular quando o comprimento de onda dos Raios-X da ordem do espaamento entre planos de tomos. Os Raios-X com uma faixa estreita de comprimento de onda, em uma regio adequada para anlise por difrao, so obtidos nos espectros K dos metais leves,

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cromo, cobalto, cobre, ferro, mangans, molibdnio e nquel e cobre uma faixa de 0,7 a 2,2 A. Os espectros so obtidos pelo bombardeio dos tomos do elemento com eltrons de energia entre 25 e 50 kV. detectores de Raios-X (MITCHELL, 1996). O espectro K contm trs linhas fortes: 1, 2 e , sendo que 1 e 2 formam uma dupla com estreita separao de comprimento de onda. Os Raios-X podem ser detectados por filme, por um contador ou por um cintilador. Podem ser usados filtros para eliminar efeitos de fluorescncia das radiaes K e L da amostra analisada. A difrao de Raios-X identificar as linhas de difrao correspondentes aos espaamentos interplanares dos materiais cristalinos. O padro resultante (espectro), que composto de espaamentos planares (no eixo x) e intensidades (no eixo y), pode ser comparado a padres do Comit da Junta de Padres de Difrao de Ps (JCPDS) da ASTM para os vrios fosfatos de clcio. Logo, a localizao e a intensidade dos picos fornecero um espectro caracterstico que ser utilizado na anlise qualitativa. Essa anlise identificar a presena de fases cristalinas mas no de fases amorfas nem de baixa cristalinidade (TOTH et al., 1995). A identificao dos espectros obtidos normalmente feita usando-se um ndice de padres (espectros), publicado pela ASTM (American Society for Testing and Materials). Nesse sistema, cada p caracterizado pelas distncias interplanares, d, e pelas intensidades, I, das trs linhas mais intensas no espectro. So fornecidas a lista completa distncias interplanares, suas intensidades relativas, ndices dos planos cristalogrficos, parmetros de rede e constantes fsicas do composto analisado. A difrao de Raios-X tambm permite que se faa anlise quantitativa das fases presentes em uma amostra. No entanto, essa anlise no trivial e vai depender da cristalinidade e da diferena dos coeficientes de absoro das espcies envolvidas. Uma outra limitao que devem ser preparadas curvas de calibrao das espcies em questo, com os cristais distribudos em direes aleatrias, sem orientao preferencial. A anlise por difrao de Raios-X serve, dentre outras razes, para medir a dissoluo, composio e estabilidade de recobrimentos com cermicas bioativas. Uma outra apliacao a medio de parmetro de rede, particularmente importante Os Raios-X nessa regio so facilmente absorvidos e janelas especiais de berlio ou mica so usadas na porta dos tubos e

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quando se est estudando as apatitas com substituies inicas, j que muitas vezes essas substituices causam variaes nos parmetros de rede. Para uma anlise de rotina do p a difrao de raios-x nos d a seguinte informao sobre o composto: identidade: cada composio estrutura cristalina tem seu conjunto de picos de difrao prprios para ngulos de difrao especficos; pureza: se o composto consiste de uma nica fase ou mistura de fases; cristalinidade refletindo o tamanho ou perfeio do cristalito derivado do alargamento do pico de difrao; tamanho e forma aproximados: a forma qualitativa, se longo ou equiaxial, podem ser deduzidas; parmetros de rede: que juntos com anlise qumica indica o tipo e soma de substituio na estrutura; orientao. Embora muitas informaes possam ser obtidas pela difrao de raios-X, a combinao com outros tipos de tcnicas apresenta uma viso mais ampla das propriedades fsico-qumica da hidroxiapatita biolgica ou sinttica. As propriedades de vrias hidroxiapatitas, biolgicas como sintticas, tm sido obtidas utilizando-se a difrao de raios-X e a espectroscopia no infravermelho. Mtodo Rietveld O mtodo Rietveld um mtodo de refinamento estrutural e no um mtodo de determinao estrutural embora constituindo, no entanto, uma parte importante no contexto da caracterizao estrutural. O mtodo Rietveld utiliza os espectros de difrao e tem como caracterstica fundamental a adoo de um modelo adequado ao estudo a realizar, permitindo extrair dos espectros de difrao informaes detalhadas da estrutura cristalina e informaes analticas dos materiais. O difratograma de determinada substncia constitudo por um conjunto de reflexes individuais, funo intrnseca do seu agrupamento atmico, possuindo determinado perfil, cujas caractersticas so: altura, posio, largura, forma e rea, sendo esta ltima proporcional intensidade de Bragg, Ik, em que k representa os ndices de Miller (h, k, l), e I proporcional ao quadrado do valor absoluto do fator de estrutura | Fk |, dependente da natureza dos tomos.

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O modelo estrutural adotado por Rietveld inclui vrios tipos de parmetros (Park, 1980): Parmetros da estrutura cristalina: coordenadas (x,y,z) da posio dos tomos na clula unitria, deslocamentos vibratrios dos tomos, densidade ocupacional das posies atmicas, dimenses (a,b,c) da clula unitria e ngulos (,,) entre os vetores. Parmetros do perfil das reflexes: largura das reflexes, assimetria e forma. Parmetros globais: funo do fundo que engloba o comprimento de onda (1, 2) e o zero da escala 2. Parmetros da intensidade: inclui o fator de escala, que ajusta a altura de todas as reflexes do espectro calculado s do espectro observado. Parmetro de correo da orientao preferencial dos cristalitos da amostra. Estes parmetros, permitem calcular, atravs do algoritmo, um espectro modelo adequado fase que pretendemos estudar, o qual comparado com o espectro observado e a diferena entre ambos minimizada fazendo variar os parmetros no modelo estabelecido, utilizando o processo de minimizao baseado no princpio dos mnimos quadrados at que o melhor ajuste seja obtido entre o padro de difrao observado experimentalmente e o clculo de acordo com um modelo que envolve a estrutura cristalina, fatores instrumentais e caractersticas da amostra. A quantidade minimizada no refinamento por mnimos quadrados o resduo Sy (AOKI, 1988):

Sy =
i

( yi yci ) 2 yi

(2.1)

onde i representa todos os passos em 2 e yi e yci so as intensidades observadas e calculadas no passo i, respectivamente. Esta operao chama-se refinamento estrutural. O clculo de yci resultado da soma de contribuies calculadas a partir das reflexes individuais de Bragg, mais a linha de base. As reflexes individuais so calculadas levando-se em considerao um perfil de reflexes , que aproxima os efeitos das caractersticas do instrumento e da amostra (alargamento dos picos por diminuio dos tamanho de gro) no padro de difrao. O perfil mais indicado para o refinamento de difratogramas de materias nanocristalinos o chamado Thomas-CoxHastings (TCH), resultando de uma mistura dos perfis gaussiano e lorentziano. As larguras das componetes gaussiana e lorentziana do perfil TCH so dadas, respectivamente, pelas expresses:
2 1/ 2 G = ( U tan + V tan + W + cos 2 )

(2.2)

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L = X tan +

Y cos

(2.3)

onde U, V, W, X, Y e Z so coeficientes a serem ajustados de acordo com padro de difrao observado experimentalmente. Em geral, alargamento da linha de difrao em razo de microdeformaes residuais tem uma dependncia angular da forma tan , enquanto a correspondente dependncia angular do tamanho de gro dada pela frmula de Scherrer e da forma 1 / cos (HENCH e POLAK, 2002). O refinamento simultneo de fases mltiplas mas um passo para derivar medidas quantitativas das quantidades relativas presentes. Este o melhor mtodo disponvel para anlise de fase quantitativa que pode refinar, no processo, um bom modelo estrutural para cada fase. As vantagens principais so que todas as reflexes, e no s um subconjunto, so consideradas e h avaliao entre a melhor quantificao e a melhor das estimativas da contribuio de cada reflexo de Bragg a cada ponto dos dados observados. Hill e Howard (1987) publicaram a primeira demonstrao completa de anlise quantitativa de fases com o mtodo Rietveld. No caso deles, estavam com os dados de difrao de nutron. Eles mostraram que existe uma relao simples entre os fatores de escala determinados em refinamento de Rietveld de amostras de mltipla fase e a quantidade de fase:

Wp =
onde:

S p ( ZMV ) p [ Si ( ZMV )i ]

(2.4)

Wp a frao molar de cada fase; S o fator de escala; Z o numero de unidades da frmula por clula unitria; M a massa de clula unitria; V o volume da clula unitria. E. ESPECTROSCOPIA DE ELTRONS AUGER A incidncia de um feixe de eltrons sobre a superfcie de um metal gera uma srie de interaes. Dentre elas, a absoro de Raios-X, que pode decair como fluorescncia (ftons de mais baixa energia) ou eltrons Auger, na faixa de 50eV. Esses eltrons so retirados de regies prximas superfcie da amostra, tornando a tcnica particularmente aplicvel a anlises de superfcies (SLAYTER e SLAYTER, 1992).

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Nessa tcnica, feito um bombardeamento inico prvio a fim de limpar a superfcie antes da anlise ser realizada. diferentes profundidades. F. ESPECTROMETRIA DE TRANSFORMADA DE FOURIER POR RAIOS INFRAVERMELHOS (FTIR) e Raman (FT-Raman) A absoro de radiao Infra-vermelha causa transies de nveis vibratrios de energia das molculas. A utilizao dessa tcnica reside no fato de que somente comprimentos de onda muito especficos de luz Infra-vermelha podem ser absorvidos quando um determinado tipo de molcula est no caminho da radiao. A absorbncia versus o comprimento de onda fornece uma impresso digital da molcula. As bandas, na regio das radiaes Infra-vermelhas, so bastante estreitas e so associadas a uma ligao covalente particular na molcula (KENKEL, 1992). Os instrumentos modernos so projetados para desempenhar a mesma funo dos instrumentos dispersivos. No entanto, no utilizam monocromador dispersor de luz e o espectro obtido muito mais rapidamente. O feixe de luz no-dispersa passa pela amostra e todos os comprimentos de onda e seus correspondentes dados de absoro so recebidos no detector simultaneamente. absoro para cada comprimento de onda individual. As espectroscopias de transformada de Fourier por Raios infra-vermelhos (FTIR)e transformada de Fourier Raman (FT-Raman) fornecem um detalhamento espectral devido eliminao da fluorescncia dos tecidos naturais e dos materiais sintticos. Essa eliminao conseguida com um laser prximo do espectro do infra-vermelho (Nd:YVO4). A utilizao de interfermetros e de tranformada de Fourier permite a obteno dos espectros em tempos mais curtos, aumento do sinal e maior preciso. Ambas as tcnicas fornecem informaes sobre as vibraes moleculares e so tcnicas complementares (REHMAN, 1995A). As tcnicas de FTIR e FT-Raman so reconhecidas como tcnicas analticas para aplicaes biomdicas porque requerem uma preparao de amostras mnima e porque so tcnicas no destrutivas. Os espectros Raman de amostras de osso revelam picos bem definidos associados a fases orgnicas e inorgnicas. Esses resultados permitem a confirmao de que o osso formado por uma matriz mineral e uma matriz orgnica. Na tcnica de feita uma manipulao matemtica (transformada de Fourier) nesses dados para se obter os dados de Uma outra vantagem desse bombardeio que sucessivas camadas atmicas podem ser arrancadas permitindo uma anlise em

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espectroscopia Raman convencional, necessrio fazer-se a desproteinizao do osso para aumentar-se as informaes da fase mineral do osso (REHMAN, 1995B). As pesquisas no sentido de se associar as fases minerais do osso com hidroxiapatita sinttica esto em andamento. Em estudo recente, REHMAN e BONFIELD (1995) demonstraram a possibilidade de obteno de bons detalhes de espectros de infravermelho usando a tcnica de espectometria FTIR fotoacstica. Nesse estudo, foram analisados os espectros da fase inorgnica do osso cortical, de hidroxiapatita sinttica implantvel e de carbonato-apatita sinttica. Dos espectros, foram obtidos os dados mostrados na Tabela 7. Tabela 7 Posies das bandas de infra-vermelho observadas para as amostras
Osso humano -1650-1300 1609 1473 1420 1190-976 ---1046 -961 874 660-520 -605 565 467 445 Osso de carneiro -1650-1300 1609 1471 1419 1190-976 1096 1085 1056 -1012 960 873 660-520 -601 579 470 454 Carbonato apatita 3569 1650-1300 1649 1470 1190-976 ----960 873 660-520 -603 567 469 -Hidroxiapatita comercial (P120) 3568 1650-1300 1648 1454 1419 1190-976 1092 --1042 -962 874 660-520 633 602 566 472 --

analisadas (REHMAN e BONFIELD, 1995).

Localizao dos picos cm-1 Extenso de hidroxila Carbonato v3 ----(m) ----(m) ----(m) Fosfato v3 (vs) (s) (m) (vs) (w) Fosfato v1 (m) Carbonato v2 (ms) Fosfato v4 (m) (vs) (vs) Fosfato v2 (w) ----(vw)

Pela Tabela 7, pode-se observar que o osso humano e o osso de carneiro apresentam resultados quase idnticos. A carbonato apatita sinttica tem um espectro prximo ao do osso humano, ao passo que h uma srie de diferenas entre os espectros da hidroxiapatita pura e o da carbonato apatita. A diferena mais marcante o decrscimo no pico de hidroxila localizado em 3568 cm-1, enquanto a hidroxiapatita pura tem picos bem definidos nessa posio. A hidroxiapatita pura possui uma banda de hidroxila em 624 cm-1, que est ausente na carbonato apatita (REHMAN e BONFIELD, 1995).

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II.6 TCNICAS DE CARACTERIZAO BIOLGICA

A identificao de caractersticas das superfcies que influenciam as interaes com as clulas e com os microconstituintes dos fluidos corporais tem sido realizada atravs dos testes in vitro. Embora a avaliao de como um implante ir se comportar in vivo no possa ser completamente realizada atravs dos resultados de uma anlise in vitro, essas tcnicas fornecem informaes valiosas e apresentam algumas vantagens como a possibilidade de se isolar a varivel de superfcie especfica, rapidez, simplicidade, reprodutibilidade, quantificao e custo. inserido dentro de um organismo vivo. A limitao principal que nunca se consegue reproduzir a biodiversidade que um implante fica sujeito quando MASUDA et al. (1998) listou algumas vantagens e desvantagens oferecidas por estes testes: VANTAGENS: O sistema reprodutivel e existe uma sequncia de eventos bem determinada; possibilidade de isolamento de variveis; Possibilidade de utilizao de mtodos de avaliao da adeso, proliferao e diferenciao; As clulas podem crescer em reas relativamente extensas, fornecendo bastante material para anlise. DESVANTAGENS: Dificuldades de se analisar materiais opacos; Os meios de cultura requerem suplementos, que podem alterar o comportamento das clulas, mascarando os resultados; Ausncia das foras biomecnicas existentes in vivo; Ausncia da resposta inflamatria, neovascularizao e interao com outros tipos de clulas. Dependendo do tipo de investigao que se tem em mente, existem vrios modelos de testes in vitro para se estudar as propriedades biolgicas dos materiais. realizao dos testes in vivo. Os teste in vitro so, em geral, estticos e no levam em considerao a dinmica do implante in vivo. Esses fatores tais como posio anatmica do material (por exemplo, maxila versus mandbula ou tbia versus crnio), comprimento do dispositivo, carga As informaes obtidas sero particularmente teis como uma etapa preliminar

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(direo e intensidade), fadiga e desgaste do material, alteraes no meio e no material e idade do paciente, so todos consideraes importantes que no podem ser feitas in vitro. Adicionalmente, os modelos de cultura de clulas tendem a examinar a resposta de tipos simples de clulas, geralmente linhagens transformadas e, portanto, devem ser interpretados com cautela. Os principais testes in vitro so os testes em lquido corporal simulado (SBF) e os testes de cultura de clulas. Os testes de cultura de clulas podem avaliar o efeito do material sobre as clulas no que se refere multiplicao, funo, toxicidade e adeso. H uma variedade de mtodos de avaliao de toxicidade. No entanto, os materiais no txicos no so necessariamente biocompatveis, o que torna necessria a realizao de outros testes. Nos testes de cultura de clulas, observado como clulas mantidas em cultura interagem com as superfcies. Esses testes tm a vantagem de indicarem no somente a bioatividade, mas tambm a toxidade das superfcies analisadas. II.6.1 TESTES EM LQUIDO CORPORAL SIMULADO Esse tipo de teste consiste em submeter a superfcie de um implante ao contato com um lquido que simula os lquidos corporais. A principal soluo utilizada a soluo de KOKUBO. (SBF, SBF (K-9), KOKUBO SOLUTION) difrao de Raios-X em baixo ngulo, AFM e FTIR. Esses testes so chamados testes de bioatividade porque avalia-se a precipitao ou no de carbonato apatita a partir da soluo SBF. Quando ocorre essa precipitao, o material considerado bioativo. OHGUSHI et al. (1996A) e OHGUSHI et al. (1996B) reportaram a influncia da precipitao de apatita in vitro sobre a diferenciao de clulas em osteoblastos. Segundo esses autores, estudando a precipitao de apatita sobre superfcies vitrocermicas, a transformao da superfcie um fenmeno essencial para o estabelecimento de uma ligao ssea satisfatria. Esse efeito foi tambm reportado por vrios autores estudando modificaes em superfcie de de titnio (LIVIN e KAPLAN, 1996; ISHIZAWA et al., 1996; FUJISHIRO et al., 1996; WEN et al., 1998) ou tntalo (MYIAZAKI et al., 1996). Aps imerso em SBF, a superfcie do implante analisada por tcncias de anlise de superfcie como MEV,

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II.6.2 CULTURA DE CLULAS O processo de formao de osso novo complexo e envolve a interao de uma grande variedade de clulas e condies de superfcies. As clulas mesenquimais so capazes de se diferenciar em osteoblastos quando em presena de concentraes de fatores de crescimento. Logo, a presena e a concentrao desses fatores de crescimento nos primeiros estgios da recuperao do cogulo pode desempenhar um papel importante no tipo de clulas recrutadas para o local, influenciando a resposta biolgica a longo prazo (KIESWETTER et ali, 1996). Dependendo do local de implantao, outros fatores locais ajudam a determinar a diferenciao das clulas mesenquimais em osteoblastos, condroblastos ou fibroblastos. Por exemplo, se o local for bem oxigenado, a osteognese favorecida, ao passo que baixa oxigenao favorece a condrognese. A presena de micromovimentos pode levar a formao de fibrocartilagem. Quando a topografia da supefcie favorece a vascularizao, a osteognese pode ocorrer, ao passo que em locais onde difcil o crescimento de vasos, a condrognese mais provvel. O tipo de rugosidade tambm determinar o nmero e tipos de ancoragens focais das clulas com seu substrato. Observa-se que em supefcies rugosas, as clulas formam As clulas camadas que cobrem os vales entre os picos (BOYAN et al., 1996).

osteognicas so os osteoblastos e os condroblastos. Uma medida da capacidade osteoindutora dos materiais bioativos a diferenciao de clulas precursoras nessas clulas (OHGUSHI et al., 1996B). Segundo MASUDA et al. (1998), os materiais cermicos e metlicos no so verdadeiramente osteognicos, isto : no so capazes de induzir a formao de osso novo pelo recrutamento ou estmulo de clulas precursoras dos osteoblastos. Esses materiais no so, portanto, osteoindutores, ou seja, no tm a capacidade de induzir a formao de osso novo. As superfcies podem ser osteocondutoras, ou seja, podem ser favorveis ao crescimento de capilares e clulas precursoras dos osteoblastos. Ainda necessrio um maior detalhamento no estudo das interaes moleculares e celulares que ocorrem nas superfcies dos implantes in vivo. As clulas usam a morfologia do substrato para a migrao e orientao. Clulas epiteliais e fibroblastos se alinham ao longo de ranhuras que podem ser feitas propositalmente nas superfcies. Esse processo de alinhamento chamado de orientao por contato. O espaamento e a profundidade das ranhuras tm um papel

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importante sobre a orientao por contato. Como as clulas epiteliais, os osteoblastos tambm tm sensibilidade morfologia das ranhuras de um material. Os osteoblastos tm preferncia por pros de 200 a 400mm para encorajar a migrao, ancoragem e proliferao (BOYAN et al., 1996). KELLER (1998) associou diferenas na morfologia e adeso de osteoblastos a substratos metlicos diferena de rugosidade de uma ordem de grandeza. KIESWETTER et al. (1996) estudaram a modulao da rugosidade sobre a produo local de fatores de crescimento e citocinas por clulas MG-63. Esses autores observaram que a rugosidade afeta a proliferao, diferenciao e produo da matriz de clulas MG-63, bem como a produo de citocinas e fatores de crescimento. Foi observada uma menor proliferao celular nas superfcies mais rugosas bem como diferenas na morfologia quando comparada a superfcies lisas. Esse resultado foi associado a um estgio mais avanado de diferenciao, que precedido por uma queda na proliferao. As interaes entre as clulas e os biomateriais favorecida pela adsoro de protenas s superfcies. Os recobrimentos com fosfatos de clcio tm a vantagem de facilitar esse processo de adsoro. Dentre os fosfatos de clcio, a hidroxiapatita (Ca/P=1,67) o que tem maior capacidade de adsorver protenas a sua superfcie (TAKASHIMA et al., 1996). Dentre as protenas no colgenas produzidas pelos osteoblastos, a osteocalcina, tambm chamada de protena Gla ssea (BGP), a protena mais abundante da matriz ssea. A fosfatase alcalina (ALP) se localiza na membrana celular das clulas osteognicas. Esses marcadores bioqumicos so indicadores da capacidade de diferenciao in vitro em osteoblastos (OHGUSHI et al., 1996B). A. AVALIAO DE CITOTOXICIDADE IN VITRO Os testes de citotoxicidade utilizam a resposta celular ao material a ser testado inserido em um meio de cultura. O contato das clulas com o material pode ser de trs tipos: direto, indireto ou extrao.

A1. CONTATO POR EXTRAO

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No mtodo por extrao, so utilizados veculos de extrao para retirar amostras do material a ser testado. Os veculos utilizados so: gua destiladas, soluo salina, saliva artificial, lquido corporal simulado e meio de cultura com soro. Tambm so usados soluao de cloreto de sdio, leos vegetais, de acordo com a norma ASTM F619-79. Solventes, reagentes qumicos, gua e leo no podem ser utilizados em meio de cultura. No existe um nico mtodo de extrao que simule o aspecto real do material no organismo. Segundo NAKAMURA et ali (1995) , o mtodo de extrao mais eficiente o mtodo dinmico que utiliza esferas girantes de alumina. Os mtodos dinmicos de extrao so uma boa alternativa. Esses mtodos tm as seguintes vantagens: Uma carga dinmica pode ser aplicada sobre um material que usado sob tenso como carga oclusal ou atrito; A extrao contnua previne o decrscimo da taxa de extrao causado pelo acmulo de produtos na interface; O processo de extrao pode ser acelerado; Uma extenso do processo permite o estudo de aspectos detalhados do material ao longo do tempo.

A2. CONTATO INDIRETO Nesse mtodo, utilizada uma camada intermediria entre uma monocamada de clulas cultivada no fundo de um frasco de cultura de clulas e o material testado. Essa camada funciona como uma tela, sendo o material mais comumente utilizado o Agar fluido. Pode-se usar ainda um gel de colgeno ou um filto de acetato. (NAKAMURA et ali, 1995) A3. CONTATO DIRETO O mtodo de contato direto consiste em colocar amostras do material no topo de uma monocamada de clulas ou em semear as clulas sobre a superfcie da amostra. Uma variao consiste em se colocar um gradiente de concentrao da amostra no meio de cultura. A intensidade da toxicidade do material avaliada observando-se o

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aspecto das clulas ao longo do gradiente de concentrao da amostra. Um material de alta toxicidade afetar clulas em regies de baixa concentrao. Dentre as desvantagens do mtodos de contato direto esto: Oos materiais solveis em gua tendem a se dissolver muito; Quando o equilbrio for estabelecido, haver um decrscimo na liberao de substncias, havendo um aumento da concentrao adjacente amostra. Essa caracterstica inerente aos mtodos estticos; O efeito do meio de cultura no representa a realidade. Dessa forma, as clulas incubadas sobre teflon no aparecem bem aderidas. No entanto, isso um problema da superfcie do material, no indicando que este seja txico. B. AVALIAO DA MORFOLOGIA A microscopia eletrnica de varredura tem sido utilizada rotineiramente para avaliao da morfologia das clulas sobre as superfcies dos biomateriais. As primeiras observaes das interaes de clulas com substratos indicaram que estas se do atravs de membranas franzidas, adeses focais, placas de adeso e, mais recentemente, contatos focais. Os contatos focais so microestruturas Originalmente, foi proposto que os especializadas apoiadas dentro das clulas que se projetam para os microfilamentos que ficam sob a membrana citoplasmtica. mximo das clulas com o substrato. espraiamento no sempre contatos focais deveriam ter um certo comprimento para garantir adeso e contato Mais recentemente, se sugere que o com a diferenciao das clulas compatvel

mesenquimais, particularmente no caso da condrognese (BOYAN et al., 1996). C. AVALIAO DA ADESO Existem vrios mtodos de avaliao da adeso de clulas aos substratos. ancorados s superfcies (HING et ali, 1999; NAKAMURA, et ali, 1995). Um

mtodo utiliza a observao em MEV da morfologia dos processos celulares Outros mtodos empregam a medio das foras requeridas para retirar as clulas do substrato. Isso pode ser obtido atravs da utilizao de um micromanipulador, de uma centrfuga, ou de um fluxo hidrodinmico (flow cell).

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D. AVALIAO DE CRESCIMENTO E PROLIFERAO Durante a replicao celular, o cido desoxi-ribonucleico (DNA) replicado. A sntese do DNA pode ser marcada com timedina tritiada ([3H]-RdR), que seletivamente incorporada ao ncleo celular durante o ciclo celular. No entanto, tanto o DNA quanto a incorporao de [3H]-RdR podem ser medidas para monitorar a proliferao celular (HUANG, 1997). E. AVALIAO DA ATIVIDADE CELULAR A deteco bioqumica da atividade de fosfatase alcalina um indicador sensvel da atividade dos osteoblastos. Tanto a produo quanto a liberao da fosfatase alcalina podem ser medidas nos lisados celulares e/ou no meio de cultura. A razo ALP/DNA um indicativo da quantidade de atividade de fosfatase alcalina por clula. Segundo HUANG (1997), a variao causada pelas diferenas de formato das amostras pode ser eliminada por essa aproximao.

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