LE WIDAL

1 PRINCIPE : Des dilutions croissantes de srum sont mises en prsence des suspensions O et H de Salmonella typhi, de Salmonella paratyphi A, B et C et ventuellement de Salmonella typhimurium et Salmonella enteritidis ou de suspension Vi . Ceci permet la mise en vidence dans le srum du sujet dagglutinines O correspondant lantigne somatique et dagglutinines H correspondant lantigne flagellaire. 2 REACTIFS : Suspension O : Flacon de 110 mL De S. typhi De S. paratyphi A De S. paratyphi B De S. paratyphi C Suspension H : Flacon de 110 mL De S. typhi De S. paratyphi A De S. paratyphi B De S. paratyphi C Ce srum permettra lidentification complte et prcise de chaque srotype qui seffectue par sro-agglutination en prsence de divers antisrums mono-spcifiques O et H. S. enteritidis a une formule antignique proche de S. typhi, S. typhimurium a une formule proche de S. paratyphi B. 3 MODE OPERATOIRE : 12-

Retirer tous les antisrums du frigo, les dposer

sur la paillasse de

manipulation afin de les ramener la temprature ambiante dans leur carton. Prparer la plaque dagglutination sur laquelle les mlange seffectueront ; Centrifuger le sang recueillit pralablement sur tube sec ; (bouchon rouge) Retirer les ractifs de leur flacon, dposer sur la paillasse : les somatiques (O) 34-

sont en bleu et les flagellaires (H) sont en rouge ; 3

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Dposer une goutte de chaque suspension de somatiques (TO, AO, BO, CO) ; Dposer une goutte de chaque suspension de flagellaires (TH, AH, BH, CH) ; Prlever 400l de srum, distribuer 50l proximit de chaque suspension de Mlanger avec un objet solide ; Homogniser ensuite pendant 2 minutes en tournant la plaque ; Lire sur les huit dpts.

goutte dantisrum ;
8910-

4 INTERPRETATION : Dans les fivres typho-paratyphodiques, les agglutinines O apparaissent vers le 8me jour de la maladie, les agglutinines H vers le 10-12me jour. A la priode dtat, il y aura donc simultanment des agglutinines O et H, ces dernires atteignant un titre plus lev.
a) Cas o le srum ne contient pas les agglutinines O et H

Les homognisations sont ralises pour induire les agglutinations au sein de notre homognat, si le srum est ngatif, aucune agglutination ne sera observe. b) Cas o le srum contient les agglutinines O et H Si par contre le srum contient les agglutinines O et H, des agglutinations seront observes on va alors procder aux dilutions afin de dterminer le titre.
a) Fivre typhode la phase dtat. Coagglutination BO due au facteur 12 commun entre

S. typhi et S. paratyphi B. b) Fivre paratyphode B la priode dtat. Coagglutination TO due au facteur 12. c) Trois hypothses envisager :
fivre typhode au dbut vers le 8me jour : les agglutinines O sont apparues, les

agglutinines H ne le sont pas encore ;

infection due un srotype de Salmonella ayant lantigne O commun avec S.

typhi, mais un H diffrent : rechercher si la suspension H S. enteritidis nest pas agglutine,

infection due un agent pathogne autre quune salmonelle : par exemple,

Yersinia pseudo tuberculosis. Un taux > 1/80 pour les agglutinines O et H est retenu comme limite de positivit du test.

5 METHODES DE DILUTIONS
-

Prlever 50l deau physiologique, et dposer sur 5 zones sur la plaque Prlever 50l de srum ayant agglutin, dposer sur le premier puit, mlanger et retirer Dposer 50l de ractif sur chacun des 5 puits et proximit du mlange srum eau Mlanger puis homogniser la plaque. Observer quel niveau napparait plus les agglutinations ; cette zone constituera alors

dhomognisation,
-

de ce mlange 50l que lon va dposer sur le second puit jusquau 5me puit. -

physiologique;

le titre qui sera not sous forme de fraction (1/80, 1/160, 1/320, 1/640).

Par EMBOLO ENYEGUE ELISEE LIBERT Elve ingnieur biomdical (FMSP 2012)