Esterilizacin 1.

Introduccin: Desde hace mucho tiempo es un reto el control de enfermedades infecciosas por destruccin, disminucin de su nmero o inhibicin de microorganismos. Se puede llevar a cabo con diferentes mtodos en funcin del lugar a aplicar y el grado de erradicacin microbiana que se pretende conseguir. Por esto es conveniente definir algunos conceptos:

Esterilizacin: proceso fsico o qumico que destruye toda forma de vida de vida microbiana, incluidas las esporas. Desinfeccin: tiene por objeto la destruccin de microorganismos mediante agentes de naturaleza qumica (desinfectantes), con el fin de disminuir el nmero de formas vegetativas a niveles mnimos. Desinfectante: es la sustancia qumica que inhibe o destruye microorganismos al aplicarla sobre material inerte sin alterarlo significativamente. Asepcia: trmino que se aplica a los procedimientos utilizados para prevenir que los microorganismos progresen en un medio determinado (quirfano, laboratorio. etc.) Antispticos: son agentes desinfectantes que se utilizan sobre superficies corporales con el fin de reducir la cantidad de flora normal y de contaminantes microbianos de carcter patgeno. Tienen un menor grado de toxicidad que los desinfectantes y generalmente menor grado de actividad. Determinados preparados pueden utilizarse como antispticos o como desinfectantes indistintamente, pero a diferentes concentraciones en cada caso. Antimicrobianos: son sustancias qumicas producidas por microorganismos o sintetizadas qumicamente que a bajas concentraciones son capaces de inhibir e incluso de destruir microorganismos sin producir efectos txico en el husped.

AGENTES QUMICOS (antimicrobianos). Deben ser altamente txicos y voltiles. La mayora slo consiguen desinfeccin, no eliminan ni esporas ni virus. Pueden ser lquidos si el diluyente es H2O se llaman soluciones, si es alcohol se llama tinturas. El mejor es el xido de etileno que es gaseoso.

Los agentes qumicos como el xido e etileno, formaldehdo o glutaraldehdo reaccionan con gran facilidad con diferentes grupos funcionales de los cidos nucleicos y protenas alquilando estos radicales esenciales.
Dentro de los compuestos qumicos podemos encontrar agentes esterilizantes, desinfectantes y antispticos. La efectividad de estos agentes depende de las condiciones bajo las que actan.

Concentracin: vara con el tipo de agente y de microorganismo, pues una misma concentracin del agente puede producir un efecto diferente en distintos microorganismos. Tiempo: los microorganismos no son susceptibles a un agente en la misma forma, por lo que no todos los microorganismos mueren al mismo tiempo. pH: afecta tanto a los microorganismos como a los agentes qumicos. El aumento de pH por encima de 7 incrementa la carga negativa de los microorganismos afectando la concentracin del agente sobre la clula. El pH determina el grado de disociacin y la

efectividad del agente qumico, pues a menor disociacin mayor permeabilidad y mayor efectividad.

Alcoholes Iodo Antispticos Agentes catinicos, aninicos y anfteros Organo Mercuriales Colorantes Cloro y Compuestos clorados Aldehdos Desinfectantes y/o Esterilizantes Oxido de Etileno Compuestos Fenlicos Acidos y Alcalis

Antispticos
Alcoholes
Lesionan la membrana celular de los microorganismos y desnaturalizan protenas celulares. Desorganizan la estructura fosfolipdica. No destruyen esporas y tienen una accin germicida lenta. Los alcoholes de cadena corta tienen un efecto nocivo mayor que los de cadena larga. Se utilizan en concentraciones del 50 al 70%. Los ms utilizados son el etanol e isoproplico.

2.- ALCOHOLES. Se usan los de cadena corta que son solubles en agua. El ms usado es el ETANOL (en un 5-70%). Son agentes deshidratantes, desnaturalizan las protenas y disuelven los lpidos de la membrana. Tambin tienen un efecto de barrido, limpian sobre la piel grasas, clulas muertas, etc. Se usan con agua, no estn al 100% para una mejor penetracin en la clula. Slo desinfecta, no elimina las formas de resistencia. Tambin se usa pero menos el isopropanol y el metanol. ste ltimo no se usa porque no es un buen desinfectante, no mata a M. tuberculosis.

Iodo
Es un agente oxidante que modifica grupos funcionales de protenas y cidos nucleicos. Inactiva protenas y enzimas por oxidacin de los grupos -SH a S-S, pudiendo atacar tambin grupos amino, indoles, etc. Se utiliza como desinfectante de la piel (tintura de iodo: yodo molecular 2% y yoduro de sodio 2% en alcohol), aunque es irritante. Es efectivo contra esporas en una concentracin de 1600 ppm de iodo libre.

Agentes inicos y anfteros

Son sustancias que lesionan la membrana celular debido a que desordenan la disposicin de las protenas y de los fosfolpidos, por lo que se liberan metabolitos desde la clula, se interfiere con el metabolismo energtico y el transporte activo. No son esporicidas ni tubercolicidas an en altas concentraciones. Sus principales ventajas se hallan en que son inodoros, no tien, no son corrosivos de metales, estables, no txicos y baratos.

Catinicos: Sales de amonio cuaternarias. Tienen mayor actividad a pH alcalino y los Gram + son ms susceptibles. Aninicos: Jabones y cidos grasos. Tienen mayor actividad a pH cido y son eficaces contra Gram +. Anfteros: Actan como catinicos o aninicos segn el pH.

Organo Mercuriales
Estos tipos de compuestos se combinan con los grupos -SH de las protenas, inactivando enzimas. Dentro de los mercuriales orgnicos se encuentran el metafen y el mertiolate.

Perxido de Hidrgeno
Es un antisptico dbil, con capacidad oxidante y formadora de radicales libres. Actualmente, el perxido de hidrgeno gaseoso se est utilizando como desinfectante de superficies o descontaminante de gabinetes biolgicos debido a que no posee las propiedades txicas y cancerigenas del xido de etileno y formaldehdo.

Colorantes
Interfieren en la sntesis de cidos nucleicos y protenas (acridina) o interfieren en la sntesis de la pared celular (derivados del trifenilmetano). La acridina se inserta entre dos bases sucesivas del DNA separndolas fsicamente. Esto provoca errores en la duplicacin del DNA. Los derivados del trifenilmetano (violeta de genciana, verde de malaquita y verde brillante) bloquean la conversin del cido UDP-acetilmurmico en UDP-acetilmuramil-pptido.

R = HSO4- Verde Brillante R = Cl- Verde de Malaquita

Violeta de Genciana

Desinfectantes y/o Esterilizantes

Cloro
El cloro, los hipocloritos y las cloraminas son desinfectantes que actan sobre protenas y cidos nucleicos de los microorganismos. Oxidan grupos -SH, y atacan grupos aminos, indoles y al hidroxifenol de la tirosina. El producto clorado ms utilizado en desinfeccin es el hipoclorito de sodio (agua lavandina), que es activo sobre todas las bacterias, incluyendo esporas, y adems es efectivo en un amplio rango de temperaturas. La actividad bactericida del hipoclorito de sodio se debe al cido hipocloroso (HClO) y al Cl 2 que se forman cuando el hipoclorito es diluido en agua. La actividad germicida del ion hipocloroso es muy reducida debido a que por su carga no puede penetrar fcilmente en la clula a travs de la membrana citoplamtica. En cambio, el cido hipocloroso es neutro y penetra fcilmente en la clula, mientras que el Cl2 ingresa como gas. El hipoclorito de sodio se comercializa en soluciones concentradas (50-100 g/l de Cloro activo), a pH alcalino y en envases oscuros que favorecen su estabilidad, pero es inactivo como desinfectante. A causa de sto, es que deben utilizarse soluciones diluidas en agua corriente (que tiene un pH ligeramente cido), con el objeto de obtener cido hipocloroso. Generalmente, se utilizan soluciones con una concentracin del 0.1-0.5% de Cloro activo.

Su actividad est influida por la presencia de materia orgnica, pues puede haber en el medio sustancias capaces de reaccionar con los compuestos clorados que disminuyan la concentracin efectiva de stos.

Aldehdos
Son agentes alquilantes que actan sobre protenas, lo que provoca modificacin irreversible de enzimas e inhibicin de la actividad enzimtica (Adicin nucleoflica de grupos -NH2 y -SH). Se utilizan como desinfectantes y esterilizantes. Destruyen esporas. El glutaraldehdo es el nico esterilizante efectivo en fro. El formaldehdo como gas se utiliza para descontaminar edificios, ambientes, etc. El formaldehdo gaseoso se obtiene por calentamiento del paraformaldehdo (OH (CH2O)n-H), lo que produce las despolimerizacin de este compuesto y la liberacin de formaldehdo. El formaldehdo tiene la desventaja de ser muy irritante y perder actividad en ambientes refrigerados.
6.- ALDEHDOS. Glutaraldehdo: en solucin del 2%. Tiene dos grupos aldehdo. Se puede ciclar. Un OH reacciona con una protena y el otro con otra y las entrecruzan y matan los microorganismos. Se usa para fijar clulas, porque matan inmediatamente. Matan bien a M. tuberculosis y bacterias. Formaldehdo: Es un gas estable a alta temperatura y a determianda concetracin. A temperatura ambiente es slido porque polimeriza y da parafomaldehdo o formol. Es irritante y txico. Esteriliza la campana de siembra y se espolvorea en reas cerradas.

b) Formol o formaldehdo. Es un gas fcilmente soluble en agua que se utiliza al 40% (formalina). Usado en forma gaseosa y en cmara cerrada se emplea en la esterilizacin hospitalaria y en la industria farmacutica. Tambin es muy utilizado como desinfectante ambiental de salas altamente contaminadas que una vez tratadas deben airearse. c) Glutaraldehdo. S emplea sumergiendo el material limpio en una solucin al 2%, se emplea sobre todo en la esterilizacin de instrumentos pticos y los utilizados en terapia respiratoria.

Compuestos Fenlicos
Son desinfectantes que provocan lesiones en la membrana citoplasmtica porque desordenan la disposicin de las protenas y fosfolpidos. Esto causa filtracin de compuestos celulares, inactivacin de enzimas y lisis. El fenol no es usado a menudo como desinfectante por su olor desagradable, por ser muy irritante y por el residuo que queda luego de tratar las superficies.

Los derivados del fenol ms utilizados son el hexaclorofeno (compuesto difenlico) y los cresoles (alquil fenoles). Estos son muy efectivos a bajas concentraciones contra formas vegetativas de bacterias. No son efectivos contra esporas.
1.- FENOL Y DERIVADOS (Cresoles). Desnaturalizan protenas provocando daos en la membrana. A baja concentracin son microbiostticos y a grandes concentraciones son germicidas. No son efectivos contra esporas y virus. Sin embargo son altamente activos aunque exista una alta concentracin de materia orgnica, y adems permanecen activos durante mucho tiempo. El Fenol fue el primer agente qumico usado. A elevadas concentraciones daa las membranas y precipita protenas, a baja concentracin inhibe o inactiva enzimas. Mata a M. tuberculosis. Lister lo us en las operaciones quirrgicas. Actualmente el fenol no se usa mucho, se usan ms los cresoles que son menos irritantes y de mayor efectividad antimicrobiana, el ms usado es el hexaclorofenol pero que se usa slo en casos concretos ya que puede causar daos al individuo, al 3% es inocuo, se lavan bebs. El metil-resorcinol se usa como desinfectante y antisptico (lavarse las manos, etc.).

Oxido de Etileno
Es un agente alquilante que se une a compuestos con hidrgenos lbiles como los que tienen grupos carboxilos, amino, sulfhidrilos, hidroxilos, etc. Es utilizado en la esterilizacin gaseosa, generalmente en la industria farmacutica. Sirve para esterilizar material termosensibles como el descartable y plstico, equipos electrnicos, bombas cardiorrespiratorias, etc. Es muy peligroso por ser altamente inflamable y explosivo, y adems cancerigeno.

a) xido de etileno. Es un gas inflamable y potencialmente explosivo, muy penetrante que incativa microorganismos sustituyendo tomos de hidrgeno lbiles por otros grupos como hidroxilos, carboxilos, etc. El material se expone a esterilizar a un 5-10% de xido de etileno en dixido de carbono a 50-60 en condiciones de humedad controlada durante 4 a 6 horas. Es necesario someterlo despus a un perodo de aireacin debido a su carcter mutegnico. Es un agente efectivo en la esterilizacin de material termolbil como prtesis, catteres, etc.

3.- HALGENOS (I2, Cl2, Br2) 1.- Yodo.- Es uno de los pocos que consigue la esterilizacin. Por una parte es agente oxidante y en ocasiones inactiva ciertos enzimas claves unindose a residuos de tirosina. No les afecta la presencia de materia orgnica. Se usa para quemaduras, piel, infecciones vaginales, etc. Se emplea tintura de yodo (I + H2O + CH3CH2OH), ste puede irritar la piel y puede provocar alergias, ahora se usan iodforos que son I + compuesto orgnico (el Betadine), stos liberan

el yodo en menor cantidad, ms lentamente. 2.- Cloro.- Slo es desinfectante. Produce radicales oxgeno muy reactivos al reaccionar con el agua. Inactiva ciertos enzimas unindose a ellos. No acta sobre las formas de resistencia. Con materia orgnica los radicales se anulan y pierde efectividad. Se usa para: .- Gas comprimido para purificacin de suministro de agua. .- Hipocloritos de sodio y calcio para leja hogar e industria. .- Cloraminas. Tambin para lejas, hogar e industrias. Sueltan el Clula ms lentamente, duran ms tiempo que el hipoclorito. 4.- DETERGENTES. Slo son desinfectantes, destruyen membranas. Son tensioactivos, es decir, disminuyen la tensin superficial y favorecen el arrastre por el agua, dan una funcin de barrido. Los jabones neutros son poco efectivos, ejercen un efecto mecnico sobre los microorganismos. Su actividad disminuye con la materia orgnica. Y son inefectivos contra M. tuberculosis, con el virus de la hepatitis y con esporas. Existen tres tipos: los no inicos, los aninicos y los catinicos (sales de amonio cuaternario) que son los ms usados. Los detergentes catinicos (con carga positiva), alteran con su carga la carga externa de la clula modificando la permeabilidad de la clula. Son compuestos de amonio cuaternario (NH4), en los que los hidrgenos se sustituyen por cadenas de carbono. Uno de los ms usados es el cloruro de benzalconio, al tener carga positiva interacciona con los microorganismos de carga negativa desorganizando la envuelta celular. Son desinfectantes de material mdico, alimentacin y antisepsia de la piel. 5.- METALES. Ciertos metales pesados. Su accin se denomina oligodinmica, es decir son activos en muy bajas concentraciones (ppm). Inactiva especficamente enzimas claves al reaccionar con grupos SH. Son muy txicos y su actividad disminuye con la existencia de fluidos biolgicos. .- Plata: Nitrato de plata. Antisptico. Lavan los ojos de recin nacidos, en casos concretos, para evitar la ceguera, se usa cuando la madre est infectada de Neisseria gonorrea. .- Mercurio: Cloruro de mercurio. ste elemento es altamente txico y es inefectivo con materia orgnica, pero afecta a muchos microorganismos. El mercurocromo es menos txico pero menos efectivo con materia orgnica. .- Cobre: Sulfato de cobre. Se usa como alguicida en piscinas. Se adiciona a pinturas para evitar hongos. .- Zinc: Cloruro de zinc en colutorios bucales. El oxido de zinc es antifngico en pinturas. En general ocasionan problemas medioambientales. 7.- CIDOS Y ALCALIS. A pH extremos los microorganismos mueren. No es general, algunos microorganismos toleran pH muy extremos. Este mtodo se usa para detectar M. tuberculosis al resistir pH bsico (lcalis) el pH ptimo es de 7 aunque soporta un pH mayor por lo cual es diagnosticable. Si es importante el uso de cidos orgnicos en la preservacin de alimentos: .- cido benzoico.- Refrescos, alimentos cidos .- cido srbico.- Quesos .- Propionato clcico.- Pan 8.- AGENTES GASEOSOS . Esterilizan. Se usan en material sensible al calor y a la humedad. Se tiene que realizar en cmaras blindadas semejantes a autoclaves, son agentes alquilantes, (sustituyen radicales de H). El ms usado es el xido de etileno. Tiene elevado poder de penetracin, esteriliza elevados volmenes. Es lento, tiene que estar mucho tiempo con la muestra. Se ha usado para esterilizar naves espaciales. El formaldehdo es de menor efectividad, un derivado suyo se usa ms es el formol, preserva la materia orgnica. La propiolactona no es muy usada ya que pese a ser efectivo es carcingeno. EVALUACIN DE UN DESINFECTANTE. Se somete un microorganismo prueba frente a un agente que se quiere evaluar a diferentes concentraciones y diferentes tiempos. Ej. Staphilococcus aureus. Se pone un n concreto de clulas con diferente concentracin del agente a distinto tiempo. As se sabe a que concentracin y durante cuanto tiempo se pasa a no tener colonias. 1.- Agentes lquidos: Se usan sucesivas diluciones del agente, tomamos muestras a distintos tiempos y luego se siembra cada muestra en un medio de cultivo y se observa si existe o no crecimiento. 2.- Agente slido: Colocamos un trozo sobre una placa de Petri en la que hemos sembrado el microorganismo en csped.. segn el tamao del halo de inhibicin del crecimiento vemos la toxicidad.

1. 2.

Compuestos inorgnicos. Desinfectantes y antispticos.

La actividad de los compuestos derivados de metales pesados (como plata, mercurio, etc.,) se debe a la formacin de sales que se disocian con dificultad de los grupos sulfidrilos de las protenas.

a. Son buenos bactericidas. El nitrato de plata se ha utilizado en el tratamiento de quemaduras en soluciones al 0,5% y en la profilaxis de la oftalmia neonatorum por Neisseria gonorrhoeae.
b. Nitrato de plata y derivados agnticos El ms utilizado como desinfectante de la piel es el mercuriocromo, no es txico y sigue siendo activo en presencia de materia orgnica. c. Derivados mercuriales Es un agente oxidante de efecto fugaz por ser descompuesto por las catalasas de los tejidos. d.Agua oxigenada (perxido de hidrgeno) Agente oxidante que se inactiva en presencia de materia orgnica. Es poco utilizado. En dermatologa es utilizado por su propiedad antifngica. e. Permanganato de potasio Se inactivan en presencia de materia orgnica. El cloro y derivados son agentes oxidantes muy usados en la potabilizacin del agua en forma de cloro gaseoso en grandes establecimientos, y en forma de hipoclorito es utilizado para descartar material biolgico (sangre, suero, etc.) La cloramina es un antisptico menos potente que el hipoclorito, de accin ms lenta pero mejor tolerada en la aplicacin tpica. f. Derivados clorados. g. Derivados yodados. Son agentes oxidantes que se usan en forma de solucin acuosa, combinndolos con detergentes o sustancias orgnicas. Los yodoformos son compuestos que se liberan progresivamente. El Yodo se encuentra en la polivinilpirrolidona (povidona yodada). Existen tambin soluciones alcohlicas. 1. Compuestos orgnicos.

a. Actan desnaturalizando protenas. Su accin es rpida pero se evaporan con facilidad. El alcohol etlico se utiliza en antisepcia a una concentracin del 70%, a esta concentracin se reduce ms la tensin superficial de la clula bacteriana facilitando el proceso de desnaturalizacin. b.
Alcoholes.

Actan precipitando protenas. El hexaclorofeno y el fenol no se emplean por su toxicidad. Otros derivados fenlicos son los cresoles, los que unidos a jabones originan compuestos estables. c. Fenoles. Es un derivado fenlico que acta alterando la permeabilidad de la membrana celular bacteriana. Tiene inactivacin rpida y es bien tolerado por la piel. Se emplea mucho en hospitales en el lavado de la superficie cutnea en forma de solucin (acuosa o alcohlica) o asociada a detergentes no inicos.

d.Clorohexidina. Actan desorganizando las membranas citoplasmticas. Tienen escaso poder bacteriosttico. Se pueden mejorar combinndolos con desinfectantes u otras sustancias tensoactivas como laurilsulfato. e. Detergentes anionicos. Tienen accin antisptica, se inactivan en contacto con jabn, algodn y materia orgnica. Son poco usados. f. Detergentes cationicos. g. Glicoles. Propilenglicol y Etilenglicol, se aplican por medio de unos aparatos llamados glicosatos o en forma de aerosoles para desinfeccin ambiental.