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Avaliao hemogasomtrica em indivduos adultos de cascavel (Crotalus durissus) (Linnaeus,1758) (REPTILIA:SERPENTES:VIPERIDAE) quando da utilizao de analisadores de pH e gases sangneos de uso

clnico. Blood gas and pH evaluation in adult rattlesnakes (Crotalus durissus) (Linnaeus,1758) (REPTILIA:SERPENTES:VIPERIDAE) using a clinical pH and blood gas analyser. Anderson de Oliveira Monteiro , Rafael Verssimo Monteiro , Joo Henrique Neves Soares , Fbio Otero Ascoli , Anibal Rafael Melgarejo Gimenez2, Firmino Mrsico Filho1, Ndia Regina Pereira Almosny1. RESUMO A variao nos mecanismos de transporte de gases sangneos e manuteno do equilbrio cido-bsico bastante grande entre as classes animais, fazendo com que os resultados obtidos por alguns analisadores de pH e gases sangneos e seus parmetros de correo sejam necessariamente distintos. Neste trabalho, o objetivo realizar a avaliao gasomtrica em indivduos adultos de cascavel (Crotalus durissus) (Linnaeus,1758) utilizando-se um analisador de pH e gases sangneos de uso clnico e mostrar a variao que ocorre nos resultados de hemogasometria antes e aps a correo realizada pelo mesmo. A correo automtica feita por tais analisadores acarreta em resultados distantes do real logo, torna-se necessria a utilizao de analisadores, cuja temperatura de trabalho possa controlada ou a utilizao de clculos matemticos com parmetros espcie-especficos. ABSTRACT The variation in the transport of blood gases and in maintenance of acid-base status is extremely large between the animal classes, making the results given by some pH and blood gas analysers and their correction parameters necessarily different. In this research, the objectives were to obtain blood gases and pH data from adult rattlesnakes (Crotalus durissus) (Linnaeus,1758) using a clinical analyser and to demonstrate the existent variation in the results before and after correction. The automatic correction done by these analysers lead to unreal data so, the use of analysers whose work temperature can vary according to the animals temperature is needed or to adopt speciesspecific mathematical correction. INTRODUO Em estudos de fisiologia respiratria comparada, so importantes, entre outros fatores, a compreenso da atuao dos pigmentos transportadores de oxignio, os fatores endgenos e exgenos que os modulam e a mensurao do pH e da presso parcial de gases sangneos. A hemoglobina um pigmento pertencente ao grupo das protoporfirinas, formada por 4 sub-unidades, sendo duas sub-unidades alfa () e duas sub-unidades beta (). Cada sub-unidade composta de um radical Heme e uma cadeia protica. De acordo com a seqncia de aminocidos que forma a cadeia protica que se distinguem as diferentes sub-unidades (ROBINSON, 1998; SCHMIDT-NIELSEN, 1999). Em rpteis, as sub-unidades alfa podem ser A D A D do tipo e e as sub-unidades beta, dos tipos , I, II, IIa, IIb, , (GORR et al, 1998), permitindo um maior variedade de molculas de hemoglobina em relao aos mamferos. Estas molculas de hemoglobina diferem entre si, principalmente, com relao afinidade por O2, influncia que sofrem da temperatura corporal e a regulao alostrica por outras substncias (ROBINSON, 1998; SCHMIDTNIELSEN, 1999). Tal regulao, no homem, co, cavalo, coelho, cobaio e ratos feita pelo 2,3 difosfoglicerato (2,3 DPG), que no est presente em aves, rpteis e peixes (SCHMIDT-NIELSEN, 1999; HARVEY, 2000). Em rpteis, essa situao continua a ser estudada para melhor entendimento porm, suspeita-se que essa ao possa ser exercida pelo bicarbonato (HCO3 ) no caso dos crocodilianos. Em serpentes, alguns autores vm testando a ao de vrios fosfatos orgnicos sobre a afinidade de hemoglobina pelo O2 (JOHANSEN & LYKKEBOE, 1979; BONILLA et al, 1994, 1994a; OGO et al, 1993) e constatam a grande influncia da concentrao de ATP. A avaliao gasomtrica sangnea em serpentes tem sido estudada visando sua utilizao em estudos clnicos (CUSTER & BUSH, 1980; CHERUBINI et al, 2000) e de fisiologia (WANG et al, 1998) porm, estudando-se diferentes espcies e diferentes metodologias. CHERUBINI et al (2000) realizaram determinaes gasomtricas em sangue venoso sistmico de Crotalus durissus terrificus e as amostras foram coletadas de animais contidos manualmente partir da veia caudal ventral e avaliadas em analisador de pH e gases sangneos de uso clnico (onde os eletrodos no se mantiveram temperatura corporal dos animais). Logo, as correes para as devidas temperaturas corporais foram feitas automaticamente pelo prprio aparelho. WANG et al (1998) avaliaram pH e gases sangneos em Crotalus durissus terrificus, sendo sua amostra de sangue arterial coletada de animais em repouso e utilizando uma artria sistmica cateterizada cirurgicamente. As
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Universidade Federal Fluminense. Instituto Vital Brazil.

amostras foram avaliadas utilizando-se um analisador cujos eletrodos eram mantidos temperatura corporal dos animais. CUSTER & BUSH (1980) avaliaram o sangue arterial sistmico de Pituophis catenifer durante o repouso, coletado partir de uma artria sistmica cateterizada cirurgicamente e avaliados em analisador de pH e gases sangneos de uso clnico. Os valores obtidos foram corrigidos para a temperatura do animal atravs de clculos matemticos, segundo literatura consultada pelos autores (HOWELL et al, 1970; SEVERINGHAUS, 1971). O objetivo do presente trabalho realizar a avaliao gasomtrica arterial em indivduos adultos de cascavel (Crotalus durissus) (Linnaeus,1758) utilizando-se analisadores de pH e gases sangneos de uso clnico uma O temperatura padro (37 C) seguida de correo, pelo prprio analisador, para a temperatura corporal dos animais O (25 C). MATERIAL E MTODO No presente trabalho, foi realizada a anlise gasomtrica em 5 serpentes fmeas adultas, canuladas cirurgicamente, pertencentes espcie Crotalus durissus (Linnaeus, 1758), medindo entre 822 e 960 mm de comprimento rostro-cloacal e pesando entre 534 e 638 g. Os animais foram mantidos em cativeiro por no mnimo 1 ano no Serpentrio da Diviso de Animais Peonhentos do Instituto Vital Brazil (IVB), Niteri, RJ, acomodadas em caixas de polipropileno individuais com tampa articulvel, contendo uma folha de papelo ondulado e uma vasilha com gua. Aps 10 dias de recuperao do procedimento cirrgico em sala climatizada, com temperatura de 25C e umidade de 80%. Uma alquota de sangue (1,0 ml) foi coletada em seringa rinsada com heparina e acondicionada em caixa de isopor com gelo reciclvel por um tempo mximo de 20 minutos para realizar a avaliao gasomtrica no Laboratrio de Fisiologia Crdio-Respiratria do Hospital Universitrio Antnio Pedro (UFF). Aps a devida homogeneizao, as determinaes gasomtricas foram realizadas em analisador de pH e 1 o gases sangneos ABL 30 com eletrodos mantidos temperatura de 37 C e estes resultados corrigidos o automaticamente para a temperatura corporal dos animais (25 C). RESULTADOS E DISCUSSO Os resultados obtidos esto resumidos nas tabela 1, juntamente com os valores obtidos por outros autores para a mesma espcie. Tabela 1: Crotalus durissus: Mdias e desvios-padro para pH potencial de hidrognio; pO2 presso parcial de oxignio; pCO2 presso parcial de dixido de carbono; HCO3 bicarbonato de amostras de sangue arterial 1 avaliadas neste trabalho antes e aps correo pelo aparelho ABL 30 para a temperatura corporal dos animais (30 e o 25 C respectivamente), juntamente com os dados para a mesma espcie encontrados em literatura. Monteiro et al, 2002 37 7,412 0,083 84,26 19,477 18,28 1,008 11,80 2,743 Wang et al, 1998 35 7,5 7,6 75,7 4,4 ? ? Monteiro et al, 2002 25 7,590 0,092 39,80 12,228 10,22 0,606 11,80 2,743 Wang et al, 1998 25 7,6 7,7 66,7 3,4 ? ? Cherubini et al, 2000 20 7,53 0,11 16,9 4,64 14,51 3,15 16,09 3,52

Temp ( C) pH pO2 (mmHg) pCO2 (mmHg) HCO3 (mmol/L)

WANG et al (1998) utilizaram um analisador de pH e gases sangneos, cuja temperatura pode ser modificada de acordo com a temperatura dos animais. Esse tipo de anlise muito mais precisa e confivel, tendo em vista que menos fatores alteram os resultados e nenhum clculo matemtico necessita ser feito para ajustes. No presente trabalho, foi utilizado um hemogasmetro clnico, onde os resultados so obtidos temperatura O O de 37 C e corrigidos matematicamente para a temperatura desejada (25 C) o o Os resultados de pH obtidos a 37 C e a 25 C se mostram diferentes porm, bastante prximos aos obtidos o por WANG et al (1998) em temperaturas de 35 e 25 C. o O valor mdio de pO2 obtido a 37 C, neste estudo, bastante prximo dos valores encontrados por WANG et o o al (1998) para temperatura de 35 C enquanto que o valor mdio de pO2 corrigida temperatura de 25 C o extremamente diferente dos valores encontrados pelos mesmo autores para temperatura de 25 C.
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Radiometer Coppenhagen, Denmark.

Sabemos que a temperatura causa alteraes na afinidade da hemoglobina pelo O2, freqncias cardaca e respiratria e, conseqentemente nos valores de pH, pO2 e pCO2. Quando se usa um analisador cujos eletrodos trabalham a uma temperatura fixa, existe a necessidade de correo para a temperatura corporal do paciente (PRUDEN et al, 1994). A correo para obteno dos valores reais na nova temperatura baseia-se em fatores especficos (fator de Bohr, P50, efeito Haldane, etc.) inerentes hemoglobina de cada espcie. Os analisadores clnicos fazem automaticamente os clculos e fornecem o resultado corrigido, quando pedido. No entanto, os parmetros de correo utilizados so referentes ao comportamento da hemoglobina humana. Portanto, estudando-se outras classes animais, os resultados calculados desta maneira podem no ser parecidos com os obtidos de um analisador mesma temperatura do animal. Neste caso, os valores corrigidos obtidos neste estudo e no estudo de CHERUBINI et al (2000) refletem o que seria obtido no caso de um paciente humano hipotrmico. Uma alternativa, utilizar dados espcie-especficos para hemoglobina no momento da correo. Dessa maneira procederam CUSTER & BUSH (1980) e MONTEIRO (2000) mas ainda assim, no se pode afirmar que no existem diferenas significativas entre os valores obtidos e os que seriam encontrados por medies diretamente na mesma temperatura. No foi possvel realizar tais correes matemticas neste trabalho pois a literatura consultada at o momento no descrevia todos os parmetros especficos necessrios (ex. fator de Bohr). CONCLUSES A correo automtica utilizando parmetros de hemoglobina humana, feita por analisadores de pH e gases sangneos, leva a resultados irreais. Para a obteno de resultados corretos, deve-se utilizar analisadores de pH e gases sangneos, cuja temperatura dos eletrodos possa ser variada de acordo com a temperatura do animal ou utilizar clculos matemticos com parmetros espcie-especficos. REFERNCIAS BIBLIOGRFICAS BONILLA, G. O.; FOCESI Jr., A.; BONAVENTURA, C.; BONAVENTURA, J.; CASHON, R. E. Functional properties of the hemoglobin from the South American snake Mastigodrias bifossatus. Comp. Biochem. Physiol. 109A(4): 108595, 1994. BONILLA, G. O.; OYAMA Jr.; NAGAMOTO, C. L.; MATSUURA, M. S. A.; FOCESI Jr., A. Interactions of adenosine triphosphate with snake hemoglobins. Studies in Liophis miliaris, Boa constrictor and Bothrops alternatus. Comp. Biochem. Physiol. 109B(4): 701-07, 1994 a. CHERUBINI, A.L.; CARREGARO, A.B.; CRUZ, M.L.; LUNA, S.P.L. Padronizao dos valores de referncia para hemogasometria em cascavis (Crotalus durissus terrificus). Anais do IV Congresso e IX Encontro da ABRAVAS. p. 19. 2000. CUSTER, R.R.; BUSH, M. Physiologic and acid-base measures of gopher snakes during ketamine or halotan-nitrous oxide anesthesia. JAVMA 177(9): 870-4, 1980. GORR, T. A.; MABLE, B. K.; KLEINSCHMIDT, T. Phylogenetic Analysis of Reptilian Hemoglobin: Trees, Rates and Divergences. J. Mol. Evol. 47: 471-85, 1998. HARVEY, J. W. Erythrocyte metabolism. In: FELDMAN, B. F.; ZINKL, J. G.; JAIN, N. C. Schalms Veterinary a Hematology. 5 Ed., Lippincott Williams & Wilkins, 2000, p. 12528. HOWELL, B. J.; BAUMGARDNER, F. W.; BONDI, K. et al Acid-base balance in cold-blooded vertebrates as a function of body temperature. Am. J. Physiol. 218:600-06, 1970. JOHANSEN, K.; LYKKEBOE, G. Thermal acclimation of aerobic metabolism and O2-Hb binding in the snake, Vipera aspis. J. Comp. Physiol. 130: 293-300, 1979. MONTEIRO, R. V. Resposta cido-bsica a diferentes condies de oxigenao em jacars de papo amarelo, Caiman latirostris (Daudin, 1802). Dissertao de mestrado, Universidade Federal Fluminense, 1999. OGO, S. H.; BERNARDES, C. F.; GLASS, M. L.; TORSONI, M. A.; VERCESI, A. E. Functional properties in snake Bothrops alternatus erythrocytes and modulation of HbO2 affinity by mitochodrial ATP. J. Comp. Physiol. B 163: 61419, 1993. PRUDEN, E. L.; SIEGAARD-ANDERSEN, O.; TIETZ, N. W. Blood gases and pH. In: BURTIS, C. A. & ASHWOOD, E. R. (ed) Tietz Textbook of Clinical Chemistry. 2a Edio, W. B. Saunders, 1994, p. 13751410. ROBINSON, N. E. Gas Transport in the Blood. In: CUNNINGHAM, J. G. Textbook of Veterinary Physiology. W. B. Saunders, 1998, p. 587-94. a SCHMIDT-NIELSEN, K. Fisiologia Animal Adaptao e Meio Ambiente. Reimpreso da 5 Edio, Santos Livraria Editora Ltda., 1999. SEVERINGHAUS, J. W. Effect of temperature change on blood oxygen and carbon dioxide pressures: Man, dog. In: ALTMAN, P. L.; DITTMER, D. S. (ed) Respiration and Circulation. Fed. Am. Soc. Exptl. Biol. p. 218-19, 1971. WANG,T.; ABE, A.S.; GLASS, M.L. Effects of temperature on lung and blood gases in the South American rattlesnake Crotalus durissus terrificus. Comp. Biochem. Physiol. Part A 121: 7-11, 1998.