Gneros

Pseudomonas y Burkholderia
Prof. Aurico Sousa Fonseca Ctedra de Microbiologa e Inmunologa F.C.V.-U.C.V.

CARACTERSTICAS GENERALES
El gnero Pseudomonas pertenece a la familia Pseudomonaceae
Integrada por variedad de especies que habitan en el suelo y las aguas estancadas Algunas forman parte de la flora residente del intestino en animales y el hombre.

Son de vida libre

Se encuentran en materiales orgnicos en descomposicin Tienen un importante papel en la degradacin de dicho material.

CARACTERSTICAS GENERALES
Son bacilos Gram negativos De 0,5 1 m por 1,5 5 m Aerobios No esporulados Mviles Algunos poseen micro cpsulas y pigmentos solubles en agua Son bacilos no fermentadores (BNF) Acusada resistencia a la fagocitosis, los antibiticos y los metales pesados Posee los tres sistemas de recombinacin gentica

Grupos de Pseudomonas?
segn la homologa del ARNr
I. Grupo fluorescente P. aeruginosa, P. fluorescens, P. putida Grupo no fluorescente P. Stutzeri, P. Mendocina, P. alcaligenes , P. pseudoalcaligenes
II. B. pseudomallei, B. mallei, B. cepacia, P. picketti , B. glandioli

III. (Acidovorax, Comamonas) A. delafieldii, C. acidovorans, C. testosteroni IV. P. diminuta, P. versicularis V. Stenotrophomonas: S. maltophilia
Clasifica a las Pseudomonas basndose en la homologa ARNr/ADN y en las caractersticas comunes del cultivo.

INFECCIONES CLINICAS
Pseudomonas aeruginosa
Burkholderia mallei

Burkholderia pseudomallei

Pseudomonas aeruginosa
Fue identificada en 1882 por Gessard. Patgeno ms importante dentro del gnero Pseudomonas teniendo en cuenta:
Cantidad y tipos de infecciones (invasivas y toxgenas) Morbilidad y mortalidad que ocasiona.

A partir de la dcada del 60 se ha incrementado el inters mdico por esta especie

Es uno de los principales agentes causantes de enfermedades adquiridas en el mbito hospitalario, especialmente en pacientes inmunocomprometidos

Pseudomonas aeruginosa
Organismo ambiental Requerimientos nutricionales simples Patgeno oportunista ante mecanismos de defensa alterados, suprimidos o comprometidos
Es necesaria la presencia de factores predisponentes para que ocurra la infeccin Enfermedades malignas Quemaduras Diabetes Pacientes sometidos a la instrumentacin o manipulacin
Cateterizaciones uretrales, traqueotomas, punciones lumbares, infusiones intravenosas de medicamentos y lquidos)

Pseudomonas aeruginosa

En este organismo es inherente la resistencia a la mayora de los antibiticos

Plsmido R

Se considera un importante patgeno en la infeccin intrahospitalaria, reportndose por encima del 20 % de esas infecciones Los pacientes hospitalizados se infectan con fuentes exgenas y endgenas La infeccin raramente ocurre en aquellos con defensas normales.

MORFOLOGA E IDENTIFICACIN

Microorganismos tpicos.
Bacilos Gram negativos rectos o curvos (bastoncillos) Pueden aparecer aislados, en pares o en cadenas Dimetro de 0,6 a 2 m. Son aerobios No esporulados Mviles Poseen de 1 a 3 flagelos polares y muchas proyecciones en su pared denominadas fimbrias. Algunos poseen una microcpsula.

CULTIVO de

Pseudomonas aeruginosa
Aerobio obligado, De fcil crecimiento en medios de cultivos En ocasiones poducen, un olor dulzn, o de uvas. Se desarrolla a temperaturas entre 10 y 42 C. Algunas cepas son hemolticas Los cultivos pueden mostrar varios tipos de colonias:
Lisas, rugosas, mucoides, redondas, alargadas, con pigmentos verde metlico y olor dulzn Presentan, adems, caractersticas bioqumicas enzimticas y de susceptibilidad antimicrobiana diferentes.

CULTIVO DE

Pseudomonas aeruginosa
Producen pigmentos de fenazina en agar nutritivo, despus de 24 horas de incubacin a 37 C y posteriormente a temperatura ambiente. Los mismos pueden ser :
azul (piocianina), amarillo verdoso (pioverdina) rojo (piorrubina) y Marrn oscuro(piomelanina)

Existe, aproximadamente, un 10 % de P. aeruginosa que son apigmentadas

Pseudomonas aeruginosa
Caractersticas de crecimiento
La mayora crece en medios mnimos, sin factores orgnicos de crecimiento
Iones amonio como nica fuente de nitrgeno Glucosa como nica fuente de carbono y energa.

Formacin de pelcula en medio lquido (ayuda a distinguirla de otras especies) Produce cidos de una serie de carbohidratos, (pero no de disacridos) en medio OF de Hugh-Leifson Su metabolismo es estrictamente aerobio.

ESTRUCTURA ANTIGNICA
Poseen antgenos O, H, M.
El antgeno somtico se denomina O (AgO)
El antgeno O est dado por el LPS, el cual est formado por el lpido A (muy txico, (que comprende la endotoxina), un centro constituido por polisacridos y por las cadenas laterales largas de oligosacridos O (especficos de grupo) que es la parte ms externa del LPS y permite seroagruparlas

El antgeno flagelar se designa con la letra H y El antgeno mucoide, con la letra M.

Tienen pili o fimbrias (tipo IV) que se extienden desde la pared celular y permiten la fijacin a clulas epiteliales del hospedero. Los anticuerpos contra antgenos O, H y los pili permiten tipificar las cepas con fines epidemiolgicos.

FACTORES DE VIRULENCIA
1. Pili:
De importancia en la adherencia.

2. Flagelos:
Permiten la motilidad y son inmunognicos.

3. Alginato:
Permite la adherencia de la bacteria a la clula epitelial, interfiriendo en la actividad fagoctica de los neutrfilos.

4. Siderforos:
Adquisicin de Fe.

5. Protenas de la membrana externa:

Inmunognicas.

FACTORES DE VIRULENCIA
6. Piocianina y otros pigmentos fenaznicos:
Inhiben la movilidad ciliar y la proliferacin de linfocitos. Tienen actividad antibitica.

7. LPS:
Actividad endotxica. Es inmunognico.

8. Elastasa (enzima proteoltica):

Solubiliza la elastina del pulmn

9. Proteasa alcalina (enzima proteoltica):

Inhibe la proliferacin de los linfocitos. Es inmunognica.

FACTORES DE VIRULENCIA
10. Proteinasa:
Estimula la activacin de mucina de las clulas del tracto respiratorio. Inactiva la antitripsina 1.

11. Leucocidina:
Citotxica para los PMN y linfocitos; daa los capilares pulmonares.

12. Ramnolpidos (hemolisinas termoestables):

Inactivan o destruyen la estructura ciliar. Realzan la liberacin de mucinas.

13. Fosfolipasa C (hemolisina termolbil):

Degrada la lecitina (componente importante del sulfactante del pulmn). Induce la liberacin de histamina (importante mediador anafilctico). Es inmunognica.

FACTORES DE VIRULENCIA
14. Lipasa:
Inhibe la quimiotaxis de los monocitos.

15. Exotoxina A:
Producto de mayor toxicidad presente en Pseudomonas aeruginosa. Inhibe la sntesis de protenas. Txica para los macrfagos. Es inmunognica.

16. Slime: inhibe la fagocitosis por los PMN.

Es citotxico para los leucocitos.

17. lactamasa:
Le confiere resistencia a los antibiticos.

18. Creatinasa. 19. Catalasa. 20. Argininhidrolasa.

FACTORES DE VIRULENCIA
21. Nitratorreductasa. 22. Ureasa. 23. Fibrinolisina. 24. Colagenasa. 25. Toxina eritrodrmica. 26. Bacteriocinas. 27. Exotoxina S
Inhibe la sntesis proteica; dicho mecanismo no est bien aclarado.

DIAGNSTICO DE LABORATORIO
Muestras
Dependen del cuadro clnico y del tipo de infeccin, siendo tiles el pus, la sangre, la orina, el lquido cefalorraqudeo y el esputo.

Frotis.
Un frotis coloreado con tincin de Gram muestra bacilos Gram negativos rectos o en forma de bastoncillo, que pueden encontrarse aislados, en pares o en cadenas. Los mismos no tienen caractersticas especficas que permitan distinguir entre las Pseudomonas contenidas en las muestras y los bastoncillos intestinales o gramnegativos de otros tipos.

DIAGNSTICO DE LABORATORIO
Cultivo.
P. aeruginosa crece bien en los medios habituales del laboratorio como:
Agar Cetrimida
Agar de eleccin

Agar Mc Conkey, Agar SS,

En condiciones de aerobiosis, y acepta un rango de temperatura entre 10 y 42 C, siendo su temperatura ptima de 35 a 37 C.

Diagnstico de laboratorio
Son oxidasa positivas Son catalasa positivas; Son mviles; Oxidan la glucosa; crecen a 42 C en medio lquido con formacin de pelcula Hidrolizan la arginina y Muestran Kligler alcalino.

IDENTIFICACIN BIOQUMICA COMERCIALIZADA

Entre los sistemas de identificacin comerciales tenemos:

1. Sistema API 20 E (BioMrieux-Vitek). 2. Rapid NFT (BioMrieux-Vitek). 3. Unit N/F System (Remel Laboratories). 4. Oxi/Ferm System. 5. The Vitek GNI. 6. The Minitek.

PRUEBAS SEROLGICAS Y DE TIPIFICACIN

Estas pruebas son importantes desde el punto de vista epidemiolgico, utilizndose combinaciones de dos o ms tcnicas para estos fines:
1.Serotipaje:
Se utilizan antgenos somticos y antgenos flagelares.

2. Piocinotipia:
Permite agrupar las cepas en tipos y subtipos, designndose los tipos con nmeros y los subtipos con letras (A-E).

3. Antibiotipo. 4. Biotipo. 5. Fagotipo.

PRUEBAS SEROLGICAS Y DE TIPIFICACIN

Estas pruebas son importantes desde el punto de vista epidemiolgico, utilizndose combinaciones de dos o ms tcnicas para estos fines:
6. Anlisis con endonucleasas de restriccin y plsmidos. 7. Electroforesis en campo pulsante (PFGE). 8. Reaccin en cadena de la polimerasa (PCR). 9. Ribotipaje. 10. Anlisis del polimorfismo de la longitud de los fragmentos de restriccin (RFLP).

TRATAMIENTO
Es necesario emplear frmacos de forma combinada, pues pueden desarrollar resistencia cuando se usan de forma nica. Deben utilizarse penicilinas activas contra Pseudomona como:
Ticarcilina, mezlocilina, piperacilina, combinadas con un aminoglucsido: gentamicina, tobramicina, amikacina.

Otros medicamentos eficaces son:

Aztreonam, imipenem, quinolonas (ciprofloxacina) y cefalosporinas (ceftazidima y cefoperazona).

Burkholderia
Propuesta por Yabuuchi et al., en 1992 La clasificacin se bas en:
Secuencia de de los ARNr 16s Homologas ADN-ADN Composicin de lpidos y cidos grasos Carctersticas fenotpicas

CARACTERSTICAS GENERALES
Son bacilos Gram negativos, Aerobios estrictos No esporulados Mviles (Excepto B. mallei) Acumulan grnulos de poli-betahidroxibutiratos Fuentes de Carbono: glucosa, glicerol, inositol, galactosa, sorbitol, manosa y manitol Hbitat:
Suelos y vegetales Patgenos oportunistas

ESPECIES SIGNIFICATIVAS

Especie tipo:
Burkholderia cepacia

24 especies descritas
Importantes desde el punto de vista veterinario:
B. mallei (MUERMO EQUINO) B. pseudomallei (MELIOIDOSIS)

Son bacterias multiresistentes

Cuadro comparativo de las caractersticas de cultivo de P. aeruginosa, Murkholderia mallei y Bulkholderia pseudomallei
Caractersticas
Morfologa de la colonias

Pseudomonas aeruginosa
Grande y plana con bordes dentados +a
+ como de uva

Burkholderia mallei
Blanca y suave Granular y marrn con la edad
-

Burkholderia pseudomallei
Desde suaves y mucosa hasta rugosa y de color marrnamarillento +a
rancio
+

Hemlisis en Agar Sangre

Produccin de pigmentos difusibles Olor de las colonias

ninguno

Crecimiento en Agar MacConkey

Crecimiento a 42C

+
+

+b
-

Motilidad
Produccin de oxidasa

+
+ + -

-c + -

+
+ + + +b

Oxidacin de: Glucosa Lactosa Sucrosa

a

40% de las cepas positivas Sobre el 75% de las cepas positivas C 25% de las cepas positivas
b

CONDICIONES CLNICAS QUE SE PRESENTAN POR INFECCIN CON Pseudomonas aeruginosa

Bovinos
Mastitis, metritis, pneumonia, dermatitis y enteritis en terneros

Ovinos
Mastitis, pudricin de la lana, pneumonia y otitis media

Porcinos
Infecciones respiratorias y otitis

Equinos
Infecciones del tracto genital, pneumona y queratitis ulcerativa

Caninos y felinos
Otitis externa, cistitis, pneumona y queratitis ulcerativa

Reptiles
Estomatitis necrtica

CONDICIONES CLNICAS QUE SE PRESENTAN POR INFECCIN CON Burkholderia Burkholderia mallei
Muermo equino, transmisible ocasionalmente a carnvoros y humanos
Forma nasal y cutnea

Burkholderia pseudomallei
Melioidosis o pseudomuermo

DISTRIBUCIN MUNDIAL DE Burkholderia pseudomallei