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Universidad La Salle Facultad de Ciencias Qumicas Laboratorio de Toxicologa Prctica 2: Extraccin e identificacin de txicos voltiles Equipo 1/Seccin B Aguilar

Vzquez Roco Cruz Robles Abdiel F. Gmez Galicia J. Yizuael QFB 12/Febrero/2013

OBJETIVOS

Llevar a cabo el aislamiento de Cianuro (txico voltil) mediante el uso de semillas de la familia Rosasea , llevando a cabo la extraccin mediante maceracin cida. Identificar la presencia de cido cianhdrico mediante el uso de la caja de Conway y llevando a cabo la reaccin de Guignard. Identificar mediante la Reaccin de Guignard que semilla contiene ms porcentaje de HCN. INTRODUCCIN

Nombre Estructura qumica

Metabolismo

Toxicidad (sntomas) Leve Toxicidad (sntomas) Largas dosis Dosis Txica en sangre Dosis letal en sangre DL50

cido Cianhdrico HCN Existe interaccin de l ion Fe+3 , se une al citocromo oxidasa, es un problema debido a que se cierra el paso de electrones y por lo cual se previene el paso de la oxidacin de NADH. El cido Cianhdrico tiene una accin rpida cuando se encuentra en forma de gas porque entra rpidamente al rea pulmonar, mientras que las sales de Cianuro se absorben en un proceso lento. Dolor de cabeza Mareos Taquipnea Taquicardia Apnea Convulsiones Muerte 0.01mg/dl 0.5mg/dl 100mg/70kg por persona

Es un producto que se encuentra con habitualidad en la naturaleza en diversos microorganismos, insectos y en el estadio de crecimiento de muchas plantas como un mecanismo de proteccin, que los convierte en una fuente alimenticia poco atractiva durante ese perodo. El cianuro est presente en forma natural en algunos alimentos como las almendras y en ciertas plantas como el cazabe. El cianuro, particularmente el cido cianhdrico, se describe con un olor a almendras amargas, pero no siempre emana olor y no todas las personas pueden detectarlo. Adems el lmite de deteccin del olor es cercano a la concentracin donde comienza a ser txico.

El mecanismo de absorcin por va digestiva puede verse alterado por las condiciones digestivas y as en ciertos estudios se ha demostrado que la alcalinizacin del pH a nivel del estmago disminuye la absorcin de cianuro. Tras la absorcin el volumen de distribucin del cianuro es de 1.5 l/kg producindose dicha distribucin en unos minutos. El transporte se realiza en un 60% unido a protenas plasmticas, una pequea parte en hemates y el resto de forma libre. La eliminacin se realiza en un 80% en forma de tiocianato, en cuya produccin intervienen varias enzimas, sobretodo la rodanasa, y, adems, se requiere un compuesto dador de grupos sulfato, como es el tiosulfato. Una vez transformado en tiocianato en el hgado 26, este es eliminado va renal. El tiocianato es un compuesto mucho menos txico pero que es capaz de producir clnica cuando sus niveles en sangre son muy elevados 26. El principal factor que limita esta eliminacin es la presencia de cantidad suficiente de dadores de grupos sulfato. El resto del cianuro se excreta va renal y pulmonar unido a cianocobalamina, cistena y oxidado. REACCIONES DESARROLLADAS DE IDENTIFICACIN: Reaccin de Guignard para la identificacin de Glucsidos Cianognicos.

O N O

H O O N
+

O O
-

Na

O N
+

O Na
+

N O

+
O
-

OH Carbonato de Sodio
- N O O Picrato de Sodio +

O O N O
-

Acido Cianhdrico

Acido Pcrico O
+

Na

O N
+

Na

H O O N

O N

O N
+

+
O Na
+ -

+
H O
-

O Na
+

OH O
-

O N O

O N

O N H N O

Na

O N

+
+

+
O
+ -

- N O O 3-hidroxi-2,6-dinitro-4-nitrosobenzonitrilo de sodio

O N O

Na

OH N H O

O N

Na

OH NH

N O
-

N O

N O
-

N O

Isopurpurato de Sodio 5-ciano-3-hidroxi-2,6-nitro-4-hidroxilaminbezonitrilo de sodio

En esta reaccin, el vire del color del papel picrosdico se debe a la formacin de Isopurpurato de Sodio o de cido Isopurprico (entre ms concentracin de Isopurpurato de Sodio, ms va a cambiar de color la tira, llegando hasta un color azul marino en caso de que todo el Picrato de Sodio haya reaccionado). Sntesis de Azul de Prusia mediante Ensayo de Magnin y Tcnica de Chellen-Klassen.

HC

Acido Cianhdrico 6 Na C
+ -

+ +

Na OH

Na C N Cianuro de Sodio

H2O

FeSO 4 Na OH 1/2 O O

Na 4[Fe(CN) 6] Ferricianuro de Sodio Fe(OH) 2 Hidrxido Ferroso

Sulfato Ferroso FeSO 4 Fe(OH)


2

+ + +
6]

Na 2SO 4 Sulfato de Sodio

H2O

Fe(OH 3) Hidrxido Frrico FeNa[Fe(CN) 6] Ferricianuro Ferroso de Sodio Fe 4[Fe(CN) 6] Ferricianuro Frrico

Fe(OH 3)

Na 4[Fe(CN) 6] FeCl 3 Cloruro Frrico N N


4-

FeNa[Fe(CN)

N N Fe
3+

N
4-

Fe N

N Fe Fe
3+

Fe N

N N

Fe

3+

3+

N N
4-

Fe N

N N

Azul de Prusia

Estas reacciones son el combinado de 2 tcnicas debido a que el ensayo de Magnin logra hacer reaccionar el cido Cianhdrico para formar el complejo intermediario del Ferricianuro Ferroso de Sodio, a la vez que, en combinacin con la tcnica de ChellenKlassen, logra formar el Ferricianuro Frrico o Azul de Prusia, mediante la adicin de Cloruro Frrico. El complejo de Ferricianuro Frrico es el que da el vire de color.
RESULTADOS: (gaj) MTODO DE IDENTIFICACIN DEL CIANURO. (En semillas de manzana) Como se muestra en la imagen de la izquierda, en el compartimento, marcado en la figura de la celdilla con la letra "A", C colocamos 1 ml de S.R. de NaOH. En el compartimento "B" A B colocamos el macerado de las semillas de manzana, acidulando con un ml de H2SO4 al 10%. Cubrimos de inmediato la celdilla, fijando la tapa perfectamente con papel PARAFILM y posteriormente la colocamos en la estufa a 60 C, durante 15 minutos. Al trmino del tiempo el contenido del recipiente "A" se pas a un tubo de ensayo y se diluy con 1 ml de agua destilada (Ilustracin 2);

Ilustracin 1
Se pas a un tubo de ensayo y se diluy con 1 ml de agua destilada

Al tubo de ensaye aadimos un ml de S.R. FeSO4 , agitamos y agregamos Ilustracin 2 luego 1 ml de S.R. de FeCl3. Al agregar la solucin y agitar la solucin pas de un color amarillento a una coloracin de un azul elevado (Ilustracin 3), lo que nos indic que la reaccin fue positiva para la identificacin de cianuro en la muestra presuntiva de semillas de manzana, por lo que comprobamos que las semillas de manzana contienen una cantidad ms o menos considerable de cianuro. Posteriormente para obtener un punto extra realizamos el mismo procedimiento pero ahora utilizando la semilla interior del hueso de durazno, de igual manera se ocup la cmara que se mostr al inicio de la prctica y se macer la almendra del hueso del durazno, para posteriormente colocarlo en el rea B de la celdilla, y de igual manera se coloc un mL de H2SO4 al 10%, en el rea A, colocamos un mL de S.R. de NaOH, posteriormente de igual manera la cmara se sell con PARAFILM y se introdujo en la estufa a 60C, durante 15 minutos, posteriormente el NaOH contenido en el centro de la cmara, se coloc en un tubo de ensaye y de igual manera aadimos un ml de S.R. FeSO4 , agitamos y agregamos luego 1 Ilustracin 3 ml de S.R. de FeCl3. Como se puede observar en la Ilustracin 4, de igual manera que en el procedimiento pasado, el tono que se obtuvo primeramente al agregar la S.R. FeSO4, fue color amarillento y al agregar la S.R. de FeCl3, la coloracin cambi a un precipitado de color azul, el cual nos indic que la prueba fue positiva para la bsqueda de Cianuro en la almendra del hueso de durazno. MTODO DE IDENTIFICACIN DEL CIANURO, usando papel picro-sdico. Preparacin del papel: Impregnamos una tira de papel filtro de 1 x 10 cm con Ilustracin 4 una solucin saturada de cido pcrico, una vez impregnada de la solucin dejamos secar a temperatura ambiente. Posteriormente sumergimos la tira en una S.R. de NaHCO3 y secamos completamente. Una vez seca la tira cortamos esta por la mitad, para que entrar por la boquilla del matraz y quedase adherida con la tapa rosca del matraz y pudiese sostenerse y no caerse sobre la muestra (Ilustracin 5). Una vez armado el dispositivo, las semillas que sobraron de manzana se maceraron con un mL de agua destilada para la formacin de una pasta con la molienda de las semillas, rpidamente las semillas de manzana se incorporaron al sistema y se agreg un mL de H2SO4 al 10%, de nueva manera el sistema se coloc en la estufa a 60 C durante 30 minutos una vez pasado el tiempo se sac el sistema y se observ que la reaccin para la bsqueda de cianuro en las semillas de manzana dieron un resultado positivo, debido a que la tira de solucin saturada de cido pcrico e impregnada de S.R. de NaHCO3pas de una coloracin amarillenta a una coloracin marrn, tal como se muestra en la Ilustracin 6. Posteriormente para obtener un punto extra realizamos el mismo procedimiento pero ahora usando las almendras contenidas en los huesos de durazno, una vez que obtuvimos las semillas de durazno maceramos estas almendras rpidamente agregando 1 mL de agua destilada para llevar a la formacin
Ilustracin 5

Ilustracin 7

de una ligera pasta de semillas y posteriormente agregamos el macerado a un sistema de matraz, armado como el que se muestra en la Ilustracin5. Una vez contenido en el matraz y agregamos un mL de H2SO4 al 10%, de nueva manera el sistema se coloc en la estufa a 60 C durante 30 minutos una vez pasado el tiempo se sac el sistema y se observ que la reaccin para la bsqueda de cianuro en la almendra de la semilla de durazno nos dio un resultado positivo, debido a que la tira de solucin saturada de cido pcrico e impregnada de S.R. de NaHCO3pas de una coloracin amarillenta a una coloracin marrn, tal como se muestra en la Ilustracin 7. En ambas muestras como ya se pudo observar, obtuvimos prueba positiva para la bsqueda de cianuro, lo que nos indica que el cianuro como tal no se volatiliz al aire durante la maceracin y que ambas pruebas fueron positivas y con las que obtuvimos nuestro punto extra. DISCUSIN: En general en ambos procedimientos ocupamos las mismas semillas para poder identificar el cianuro que cada una contiene. La elevada constante de formacin de complejos de hierro trivalente y divalente con aniones cianuro es debida al fuerte enlace sinrgico originado por la suma de dos efectos: - Donacin de electrones por parte del ligando en enlace s. - Retrodonacin de electrones por parte del metal en enlace p. Para el caso de la tira de papel: La reaccin de Guignard detecta la presencia de cido cianhdrico (CNH) al actuar ste sobre una tira de papel absorbente impregnada con cido pcrico y carbonato de sodio (picrato de sodio). En la reaccin se estimula la degradacin de amigdalina en cido cianhdrico, cabe mencionar que el Cianuro pasa a gas a una temperatura de 25.7 C Produccin Animal Sitio Argentino de Las muestras que indiquen valores superiores a 4 en la escala debern considerarse peligrosos. Carta de colores para determinacin cualitativa de HCN: Contenido aproximado de HCN segn la escala de colores Contenido de HCN Escala de color (ppm) base hmeda 1 < 10 2 10-15 3 15-25 4 25-40 5 40-60 6 60-85 7 85-115 8 115-150 9 > 150 (Bavera., 2009) Volver de la parte superior En las dos imgenesa: Intoxicaciones podemos observar: Izquierda: el tipo de coloracin que puede dar cierta sustancia con un cierto contenido de cianuro. Derecha: La tabla con la relacin de acuerdo al color que nos dio de resultado la muestra, para indicarnos la aproximada concentracin de HCN en la muestra. Como podemos observar nuestras semillas nos dieron una coloracin aproximada al No. 7, lo cual nos indica que haba una cantidad fuerte de cianuro contenida en cada una de las muestras que se tenan en el matraz. En el caso de la caja nuestro fundamento se basa en que la identificacin directa del HCN en el recipiente que contiene el material es posible gracias a su elevada presin de vapor a temperatura ambiente y procesos hidrolticos que ocurren con cierta rapidez por las condiciones del medio, pH, temperatura, etc. durante el inicio de la reaccin de polimerizacin, se desarrolla un color amarillo- caf en el cianuro de hidrgeno, seguido de

generacin de calor. Si fuera posible, una forma de evitar la explosin es agregar cido y enfriar. El polmero generado no es txico, pero debe tenerse cuidado, pues pueden quedar restos de HCN ocluidos en el slido. En la atmsfera del recipiente se libera CNH que puede deberse a dos tipos de procesos: hidrolticos y putrefactivos Hidrolticos: CN- + H2O CNH + OH CONCLUSIONES: En conclusin consideramos que el cianuro en la actualidad uno de los txicos ms potentes y de accin ms rpida. Podemos encontrarlo en diversas formas y, por tanto, las fuentes de exposicin son mltiples y no nicamente de origen industrial. Como hemos visto las formas en las que se presenta el cianuro son muy variadas y por lo tanto la puerta de entrada a esta intoxicacin puede ser tanto oral, respiratoria como cutnea. Posee la capacidad de unirse a diversas protenas como la mioglobina o las enzimas nitrato reductasa, anhidrasa carbnica, catalasa y diversas metaloenzimas. Debido a su alta afinidad por el hierro en estado frrico (Fe ), el cianuro se une casi inmediatamente al hierro presente en el grupo hemo del complejo citocromo a-a3 presente en los tejidos. De esta manera, inhibe la fosforilacin oxidativa y detiene la produccin de la mayor parte del ATP celular, por impedir la respiracin aerobia. En general se cumplieron con los objetivos propuestos y adems los resultados fueron exitosos, debido a que el desarrollo de la prctica fue bueno y se obtuvo un resultado esperado. REFERENCIAS Kaye S. (1980). Handbook of emergency toxicology. Charles Thomas. USA. 4ed. Lorraine B y Dreishbach. (2003). Manual de toxicologa clnica de Dreishbach: prevencin, diagnstico y tratamiento. Manual Moderno: Colombia. 7ed. A.C. Moffat, J.V. Jackson, M.S. Moss, B. Widdop, E.S. Greenfield. (1986) Clarke's Isolation and Identification of Drugs. The Pharmaceutical Press, London. Alonso L., Gold A., Mijael R. y Slaifstein C. (2009). Glucsidos Cianognicos. [Ref. 10/02/13]. Disponible en: http://www.sciencepub.net/nature/ns0912/010_7312ns0912_64_68.pdf Bavera., M. G. ( Octubre de 2009). REACCIN DE GUIGNARD. Recuperado el 12 de Febrero de 2013, de http://www.produccionanimal.com.ar/sanidad_intoxicaciones_metabolicos/intoxicaciones/94-guignard.pdf
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