José Raúl Pérez Gómez

Dra. Maria Azucena Márquez Lucio

Ing. Bioquimíca

Genetica Microbiana

IS08110075

Microbiología

Cada nucleótido puede contener uno (monofosfato: AMP). que forma parte de la estructura de nucleótidos del ADN Su fórmula es C5 H10 O4 y contiene toda la información genética que será transferida así de generación en generación. la información genética necesaria para crear un ser vivo idéntico a aquel del que proviene (o casi similar.Las bacterias son microorganismos con una extraordinaria capacidad de adaptación a diferentes condiciones ambientales. la capacidad infecciosa de las bacterias patógenas. es decir como esta organizada la información genética. junto con el ARN. EL ADN COMO MATERIAL GENETICO El ADN constituye el principal componente del material genético de la inmensa mayoría de los organismos. como realizan y regulan su expresión. Cada nucleótido del ADN está compuesto de tres subunidades: Ácido fosfórico De fórmula H3PO4. guanina (G) y adenina (A). Bases nitrogenadas Hay cuatro tipos de bases nitrogenadas en los nucleótidos del ADN: timina (T). radica en que poseen la información génica necesaria para colonizar los tejidos de un huésped. dos (difosfato: ADP) tres (trifosfato: ATP) grupos de acido fosfórico Desoxirribosa Es un monosacárido de 5 átomos de carbono (pentosa) derivado de la ribosa. que mecanismos de variación génica poseen. citosina (C). La función principal del ADN es mantener a través del código genético. en el caso de mezclarse con otra cadena como es el caso de la reproducción sexual o de sufrir mutaciones). Para comprender la esencia de esta capacidad es importante conocer las bases de su genética. Entre otras. invadirlos y/o producir sustancias tóxicas que en definitiva causarán la enfermedad. . siendo el componente químico primario de los cromosomas y el material con el que los genes están codificados.

 Timina La timina es una de las cinco bases nitrogenadas que forman parte de los ácidos nucleicos y en el código genético se representa con la letra T. poseen además ADN extra cromosómico.  Guanina La guanina es una de las cinco bases nitrogenadas que forman parte de los ácidos nucleicos y en el código genético se representa con la letra G. junto con la timina. denominada nucleoide que ocupa aproximadamente un tercio del volumen de la célula. También podemos referirnos como “cromosoma bacteriano”. con un anillo aromático y un grupo amino en posición 4 y un grupo cetónico en posición 2. aunque es frecuente encontrar unidades de replicación autónomas llamadas plásmidos. fue descubierta en 1885 por el bioquímico alemán Albrecht Kossel.  Citosina La citosina siempre se empareja con la guanina mediante tres enlace de hidrógeno. sin estar separado del mismo por una membrana. la bacteria sigue siendo viable. que si se pierden. La timina es una base orgánica nitrogenada de fórmula C5 H6 N2 O2 y es un compuesto cíclico derivado de la pirimidina (es una „base pirimidínica‟)  Adenina Es un compuesto orgánico nitrogenado de fórmula C5 H5 N5. también circular cerrado. . Muchas bacterias. Es un derivado pirimidínico. CROMOSOMA PROCARIOTICO El cromosoma procariota es una sola molécula circular de ADN contenida en una región definida del citoplasma. Este cromosoma es el elemento obligatorio del genoma. En el ADN la guanina siempre se empareja con la citosina mediante tres enlaces de hidrógeno. Es un derivado de la purina (es una „base púrica‟) en la que un hidrógeno ha sido sustituido por un grupo amino (N H2) La adenina.

que como tales pueden a su vez superenrollarse. Otras veces no se traducen en ningún cambio (mutación silenciosa). Mutaciones génicas o moleculares Son las mutaciones que alteran la secuencia de nucleótidos del ADN. por estar contenido en estructuras llamadas “plásmidos”. que portan información génica para una variedad de funciones no esenciales para la célula en condiciones normales de crecimiento. El cromosoma bacteriano. actúan introduciendo o eliminando vueltas “superhelicoidales”. cumpliendo un importante rol en los procesos de replicación y transcripción del ADN MUTACION En el ADN Una mutación es un cambio heredable en la secuencia de bases de los ácidos nucleicos que constituyen el genoma de un organismo. que ocurren en condiciones naturales con una muy baja frecuencia y se deben fundamentalmente a errores en los procesos de replicación del ADN. es la misma que para cualquier célula. En términos bioquímicos. Las bacterias poseen enzimas capaces de alterar la estructura del ADN modificando su superenrollamiento. y pueden provocar que se cambie un aminoácido por otro en el producto proteico (mutación por cambio de sentido). Estas enzimas que se denominan genéricamente "topoisomerasas".denominado ADN plasmídico. También puede suceder que el codón se convierta en una señal de terminación (mutación sin sentido) y en ese caso se traduce una proteína incompleta no funcional. Entre las mutaciones puntuales podemos distinguir: . formando de esta manera una serie de dominios topológicos independientes. la composición y estructura de los ácidos nucleícos bacterianos. es suficientemente largo como para formar varios lazos circulares. Mutaciones puntuales Son aquellas que implican un cambio en una única base. ya que como sabemos existe más de un codón para cada aminoácido.

Si el fragmento separado se une a un cromosoma distinto. . Mutaciones cromosómicas La sustitución de un nucleótido por otro no es el único tipo posible de mutación. Entonces. es posible que se produzcan modificaciones más obvias o graves. Si se añaden o quitan pares en un número que no sea múltiplo de tres (es decir si no se trata de un número exacto de codones). Algunas veces se puede ganar o perder por completo un nucleótido. Distinguimos dos tipos que se producen por diferentes mecanismos bioquímicos: o Mutaciones transicionales. Hay dos casos: o Mutación por pérdida o deleción de nucleótidos: En la secuencia de nucleótidos se pierde uno y la cadena se acorta en una unidad. La sustitución de un par AT. toda la información queda alterada. cuando un par de bases es sustituida por otra del otro tipo. y las dos pirimídicas son citosina (C) y timina (T). cuando se añaden o se quitan pares de nucleótidos alterándose la longitud de la cadena. o a un fragmento diferente del cromosoma original. las consecuencias son especialmente graves. sería una transición. la sustitución del par AT por TA o por CG. o Mutaciones transversionales. Las dos bases púricas son adenina (A) y guanina (G). o Mutaciones de corrimiento estructural. invertir y después unirse de nuevo al cromosoma en el mismo lugar. Por ejemplo. A esto se le llama inversión. y este fragmento es adquirido por el otro. y no sólo en él. Algunas veces se pierde un fragmento de un cromosoma que forma parte de una pareja de cromosomas homólogos. Una parte del cromosoma se puede separar. o que se altere la propia forma y el número de los cromosomas. alargándose correspondientemente la cadena. porque a partir de ese punto. el fenómeno se denomina translocación. por ejemplo. Mutación por sustitución de bases: Se producen al cambiar en una posición un par de bases por otro (son las bases nitrogenadas las que distinguen los nucleótidos de una cadena). o Mutación por inserción de nuevos nucleótidos: Dentro de la secuencia del ADN se introducen nucleótidos adicionales. por un par GC. interpuestos entre los que ya había. Además. cuando un par de bases es sustituido por su alternativa del mismo tipo.

y con frecuencia las duplicaciones también lo son.U. Es probable que la mayoría de estos reordenamientos cromosómicos sean la consecuencia de errores en el proceso de sobre cruzamiento. Mutaciones espontáneas o inducidas Espontaneas: Son aquellas que surgen normalmente como consecuencia de errores durante el proceso de replicación del ADN.V. aunque pueden asociarse con mutaciones en los genes cerca de los puntos donde los cromosomas se han roto. respectivamente) y el otro una duplicación. oxido de etileno o nitroso de guanidina  Acido Nitroso: Amino Hidroxilo  Hidroxilamina: GC AT . Análogos de bases nitrogenadas:  5 bromo uracilo Timina  2 amino purina Adenina 2. Agentes mutagénicos físicos  L. Tales errores ocurren con una probabilidad de 10 ^ -7 en células haploides y 10 ^ -14 en diploides.se dice que uno presenta una deleción o deficiencia (dependiendo si el fragmento que se pierde es intersticial o terminal.  Radiaciones Agentes mutagénicos químicos 1. Las inversiones y las translocaciones suelen ser más viables. Por lo general. las deficiencias son letales en la condición homocigótica. Inducidas: Surgen como consecuencia de la exposición a mutágenos químicos o biológicos o a radiaciones. Agentes que reaccionan con el ADN: Agentes alquilantes: mostaza nitrogenada.

Se dice que dos plásmidos pertenecen al mismo grupo de incompatibilidad si son incapaces de coexistir en la misma célula bacteriana. su número de copias en la bacteria o por el tipo de genes que porta (plásmidos de virulencia. transducción mediada por fagos o incorporación en el cromosoma. Tienen . sin cápside dentro de las bacterias y se multiplica dentro de estas mismas. algunos plásmidos no se transfieren en absoluto.Agentes mutagénicos biológicos  Plasmidos  Bacteriófagos  Elementos transponibles Plásmidos     Pequeñas moléculas de ADN circular Autorreplicativas No contienen genes esenciales Confieren habilidades útiles en circunstancias muy especificas (ej. de cientos o miles de pb. La adquisición de ADN plasmídico por una cepa bacteriana. Por último. como transformación. según veremos mas adelante. puede realizarse por medios distintos a la conjugación.) También pueden clasificarse en grupos de incompatibilidad. cápside proteínica en la forma libre.  Fagos virulentos: Solo se propagan por ciclo lítico  Fagos temperados: Pueden propagarse por ciclo lítico o ciclo lisogénico Elementos transponibles Son segmentos de ADN. por ejemplo por su tamaño en pb. Muchos plásmidos. suelen ser capaces de transferirse de una bacteria a otra mediante un proceso llamado conjugación. etc. plásmidos de resistencia a antibióticos. Bacteriófagos Son pequeñas moléculas de ADN o RNA. Resistencia a antibióticos) Los plásmidos pueden clasificarse según distintos criterios. nunca dependientes saltan dentro de la célula y con mucha frecuencia eligen el sitio al azar. en general los de mayor tamaño (que pueden portar hasta 50 o 100 genes).

Este es un evento evolutivo importante y las células tienen mecanismos específicos que aseguran que dicha recombinación se efectúe. Existen 2 variedades de elementos transponibles: RECOMBINACIÓN GENÉTICA Es el proceso mediante el cual elementos genéticos contenidos en genomas de diferentes individuos se combinan. A diferencia de los eucariotas donde la . la resistencia a antimicrobianos como ser el caso de la resistencia de alto nivel a la gentamicina encontrada en algunas cepas de Enterococcus sp. células procariotas y eucariotas. Contienen genes extra.extremos repetidos invertidos. tanto en virus. que pueden codificar para muy distintas propiedades fenotípicas. encontrándose entre las mas importantes desde el punto de vista clínico. Los elementos transponibles están ampliamente distribuidos en la naturaleza. lo que permite que el individuo lleve a cabo alguna nueva función y que pueda dar como resultado una adaptación a los cambios en el medio ambiente. Son responsables también de mutaciones en el ADN.

Estos procedimientos son muy utilizados para introducir experimentalmente ADN extraño. La competencia depende de la presencia de un sistema de captación de ADN específico asociado a membrana. por ejemplo mediante pulsos eléctricos (electroporación) o mediante cambios osmóticos y térmicos. en los procariotas comprende una serie de mecanismos independientes del evento de reproducción célula. carecen de cápsula y no son letales al infectar ratones. conservarlo en forma estable e interaccionar con él se denomina competencia. TRANSFORMACION La transformación es el proceso por el cual ciertas bacterias llamadas competentes son capaces de incorporar ADN exógeno o extraño. La capacidad de captar el ADN exógeno. en una bacteria y así “transformarla” para que adquiera un fenotipo de interés. en la recombinación en bacteriófagos. mas adelantes se reanudara el tema. generando por distintos medios distorsiones en la membrana celular. es posible inducir en el laboratorio la competencia. Los mecanismos de recombinación son llamados:  Transformación  Transducción  Conjugación. pneumoniae. Las bacterias también pueden ser transformadas con ADN viral. . proveniente de otras bacterias. Si bien la mayoría de las bacterias no presentan capacidad natural para captar ADN. Las colonias con bordes rugosos (R) de S. por ejemplo un plásmido. en cuyo caso el proceso se llama transfección.recombinación genética ocurre en asociación a la reproducción sexual. La virulencia del Streptococcus pneumoniae guarda relación con la presencia de cápsula polisacarídica a su alrededor. que se encuentra libre en el medio.

que usan a la bacteria como elemento parasitado. La formación de bacterias recombinantes a partir de las originales. Esto provoca que pueda existir el intercambio de material genético entre bacterias sin que haya contacto celular. la integración del profago siempre es en el mismo punto del cromosoma bacteriano. aunque son minoritarios (1/100000). Este tipo de fagos se denomina fagos transductantes y los cuales. lo que provocará que cuando este fago vuelva a infectar una bacteria. y podemos destacar el fago P22. I. de forma que puede permanecer en este estado estacionario bastante tiempo hasta que se produzca el ciclo lítico. Este proceso es similar a la integración o desintegración del factor F. Como en la conjugación. pueden producir la integración de los marcadores genéticos que llevan en el cromosoma bacteriano receptor y generar bacterias transductantes. Transducción generalizada Cuando se va a replicar un fago. La degradación del cromosoma bacteriano durante el ciclo lítico. hasta que son capaces de parasitar ya por ellos mismos. sean empaquetados por error dentro de cápsidas víricas. formando una serie de nuevos fagos a la vez. II. Respuesta lisogénica: en la que el genoma del fago se integra en el de la bacteria. aunque la diferencia es que en la transducción. puede darse gracias a la acción de un agente filtrable que debía transportar los marcadores entre bacterias. Existen dos formas de transducción la especializada y la generalizada. Así es como se produce la transducción.TRANSDUCCION La transducción es la transferencia de ADN de una bacteria a otra por intermedio de un bacteriófago. No todos los ciclos virales son iguales. posibilita el que algunos trozos de este cromosoma (siempre que sean de la longitud correcta). se produce la lisis de la bacteria para que los fagos puedan abandonar la bacteria. pudiendo destacar dos ciclos principales. Respuesta lítica: el virus se va replicando. introduzca el fragmento erróneo de cromosoma. el lisogénico y el lítico. Este agente es un fago. mientras que el factor F podía integrarse en más de un punto determinado. cuando infectan nuevas bacterias. estas bacterias .

e integrase en su cromosoma como un profago. el fago se libera del cromosoma por entrecruzamiento entre las regiones att_/att. Cuando se inicia el ciclo lítico. Puede entonces perderse una parte del . En un momento determinado. originándose un DNA circular anormal.recombinantes se producen por doble entrecruzamiento entre el segmento de DNA dador y la región homóloga del cromosoma receptor. Transducción especializada Se da gracias a la acción de algunos fagos que se insertan en regiones concretas del cromosoma bacteriano. Un ejemplo es el fago _. Esta escisión suele ser precisa. de forma que solamente pueden transducir genes que se encuentran alrededor de estos. pero puede ocurrir que el punto de entrecruzamiento no se de entre las regiones comentadas. de forma que suele reconstruirse el fago. una cepa bacteriana gal+ y bio+ puede verse lisogenizada por el fago lambda. que se integra por recombinación en una región denominada att del fago y otra homóloga perteneciente al cromosoma bacteriano y situada entre los genes gal y bio. sino entre otras.

cromosoma del fago. pero en cambio se gane un trozo del cromosoma bacteriano con gal+. Estos fagos necesitarán la ayuda de fagos no defectuosos ayudantes. los cuales han perdido una parte de los genes esenciales para el establecimiento del ciclo lítico. gracias a los cuales suplirán las funciones requeridas para replicarse activamente. que portan un conjunto de genes cuyos productos participan en el proceso. Así obtendremos una progenie de fagos transductantes. y que requiere contactos directos entre . promovido por determinados tipos de plásmidos. que reciben el nombre de _dgal+. CONJUGACION La conjugación bacteriana es un proceso de transferencia de información genética desde una célula donadora a otra receptora.

se puede transferir el propio plásmido más un segmento adyacente del cromosoma. que a su vez podrá recombinarse con secuencias homólogas del cromosoma del receptor. de forma que la transferencia de los marcadores suele ocurrir en el orden en que estos están presentes en el DNA a partir del punto de inicio de la transferencia del mismo factor F. La capacidad de conjugación depende de la presencia en la bacteria de plásmidos conjugativos que contienen los genes necesarios para tal proceso. usando la conjugación. pasan con mayor frecuencia y facilidad. Algunos de estos plásmidos se comportan como episomas. tales como la sexducción. primero tenemos que asegurarnos de que los marcadores han pasado al cromosoma receptor. si se produce la conjugación. teniendo en cuenta que gracias al gradiente de transferencia natural. Nosotros seleccionamos para un determinado marcador. dando lugar a un cromosoma híbrido. Los factores F´ son más fáciles de recombinar porque poseen más puntos para recombinar. con intervención de estructuras superficiales especializadas y de funciones específicas (pili sexuales en los Gram negativos. encontrándose en algunas cepas Hfr. El F´ es un caso de factor F modificado. aquellos marcadores que se encuentran más cerca del punto de entrada. Podemos encontrar procesos relacionados con la conjugación. que pueden integrarse en el cromosoma. y contacto íntimo en los Gram positivos). . Esto es debido a que el apareamiento entre las bacterias suele interrumpirse espontáneamente. Proceso podemos usar los datos de la conjugación interrumpida para realizar un mapa con frecuencias de recombinación. teniendo que controlar qué marcadores pasan. en el que se usan elementos F´ para crear diploides parciales. Podemos deducir el orden de los genes que entran gracias a las frecuencias relativas de recombinantes en cruzamientos recíprocos entre los genotipos parentales. es decir.ambas. en este caso. pudiendo estimar que se produce un punto de entrecruzamiento hacia el último marcador. Podemos obtener estirpes F´ con fragmentos muy grandes del cromosoma bacteriano.

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facilita enormemente los aislamientos y la manipulación de los genes individuales.TECNOLOGIA DEL DNA RECOMBINANTE A principios de 1970 el DNA era la molécula mas difícil de analizar. es posible separar regiones determinadas y obtenerlas en cantidades prácticamente ilimitadas. Actualmente el DNA es más fácil de estudiar. era enormemente larga y químicamente monótona. Se puede determinar su secuencia de nucleótidos a una velocidad de varios cientos de nucleótidos al día. . Las técnicas utilizadas en el ADN recombinante Utilización de nucleasas de restricción: Ruptura especifica de ADN.

Una de las primeras endonucleasas de restricción que se caracterizó fue de la bacteria Escherichia coli y se designó EcoRI Enzimas utilizadas en la tecnología de ADN recombinante Endonucleasa de restricción de tipo II ADN ligasa ADN polimerasa I Transcriptasa inversa Polinucleotido quinasa Transferasa terminal Exonucleasa III Exonucleasa de bacteriófago delta .Secuenciación: La secuenciación rápida de todos los nucleótidos de fragmento purificado de ADN. Ingeniería génica: Se pueden alterar secuencias de ADN produciendo versiones modificadas de los genes. Clonación de ADN: Se puede conseguir que un fragmento de ADN se integre en un elemento génico autoreplicante (plásmidos. Endonucleasas de restricción Las endonucleasas de restricción son unos enzimas bacterianos que cortan internamente las moléculas de DNA de una forma específica que viene determinada por la secuencia de los pares de bases. utilizando la capacidad que tiene estas moléculas de unirse a secuencias complementarias de otros ácidos nucleídos. con una gran exactitud y sensibilidad. hace posible determinar los límites precisos de un gen y la secuencia de aminoácidos que codifica Hibridación de los ácidos nucleídos: Hace posible localizar secuencias determinadas de ADN o de RNA. virus) que habita en una bacteria de tal manera que de una molécula de ADN puede ser reproducida generando muchos miles de millones de copias idénticas. los cuales pueden reinsertar en células u organismos.

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