You are on page 1of 5

¿Qué es tinción?

El tamaño de la mayoría de las células bacterianas es tal que resultan difíciles de ver con el microscopio óptico. La principal dificultad es la falta de contraste entre la célula y el medio que la rodea, y el medio más simple de aumentar el contraste es la utilización de colorantes. Una tinción o coloración es una técnica auxiliar utilizada en microscopía para mejorar el contraste en la imagen vista al microscopio. COLORANTES La mayoría de los colorantes son compuestos orgánicos que tienen alguna afinidad específica por los materiales celulares. Muchos colorantes utilizados con frecuencia son moléculas cargadas positivamente (cationes) y se combinan con intensidad con los constituyentes celulares cargados negativamente, tales como los ácidos nucleicos y los polisacáridos ácidos Colorantes histológicos más comunes Los diferentes colorantes reaccionan o se concentran en diferentes partes de las células o tejidos, y estas propiedades son utilizadas como una ventaja para revelar partes o áreas específicas. Azul brillante de Coomassie Coomassie blue (también conocido como azul brillante) es un colorante que tiñe en forma no específica a todas las proteínas con un fuerte color azul. Azul de metileno Azul de metileno se utiliza para teñir células animales, para hacer más visibles sus núcleos. Es también utilizado para teñir los extendidos de sangre para ser utilizados en citología y como colorante vital en el recuento de reticulocitos. Azul Nilo El Nile blue (o Nile blue A), es decir azul Nilo, tiñe a los núcleos de color azul. También puede ser utilizado para teñir células vivas. Bismarck brown Bismarck brown, Marrón Bismarck, (también conocido como Bismarck brown Y o Manchester brown) le imparte un color amarillo a las mucinas ácidas. Se puede utilizar con células vivas. Bromuro de etidio El bromuro de etidio (BE) se intercala en el ADN y le otorga un color rojo naranja fluorescente. A pesar de que no es capaz de teñir células vivas ya que no atraviesa las membranas intactas, puede ser utilizado para identificar células que se encuentran en las etapas finales de la apoptosis, ya que tales células poseen unas membranas mucho más permeables Este colorante puede ser utilizado en combinación con naranja de acridina (NA) en el conteo de células viables. Esta tinción combinada BE/NA le otorga a las células vivas un color verde

Pueden detectarse huevos. Las tinciones con carmín requieren del uso de un mordiente. Además imparte un fuerte color rojo a los eritrocitos. Los exámenes en fresco si constituyen un arma potente de diagnóstico en las infecciones producidas por parásitos intestinales. El cristal violeta es un componente importante en la coloración de Gram. y por tanto vivos. se excita con luz ultravioleta para producir una fuerte fluorescencia azul cuando se encuentra unido al ADN. Eosina La eosina se utiliza más frecuentemente como contracoloración de la hematoxilina. Las muestras de heces deben pretratarse antes de realizar la preparación en fresco con el fin de aclarar y concentrar los parásitos. membrana celular. impartiendo un color que va del rosado al rojo al material citoplasmático. EXAMEN EN FRESCO Los exámenes en fresco permiten visualizar los microorganismos sin necesidad de fijarlos ni teñirlos. quistes y trofozoitos que por sus características morfológicas pueden generar por si solas un diagnóstico definitivo. al ser combinado con un mordiente adecuado. A pesar de ello es posible verlos sin necesidad de teñirlos gracias a la refringencia que despiden y sobre todo a su capacidad de movimiento en medios líquidos. DAPI El DAPI es un colorante nuclear (tiñe el núcleo) fluorescente.fluorescente mientras que las células apoptóticas aparecen con la distintiva fluorescencia rojo-naranja. Los microorganismos en general no presentan demasiado contraste respecto al medio que les rodea. Carmín El carmín es un colorante de un intenso color rojo que puede ser utilizado como sal de litio para teñir glicógeno. y en muchos otros protocolos de tinción. que usualmente es aluminio o alumbre. mientras que las sales de alumbre-carmín son colorantes que se adhieren al núcleo. La eosina puede ser utilizada también en algunas variantes de la coloración de Gram. Además no es visible cuando se utiliza con un microscopio de transmisión corriente. Puede ser utilizado en células vivas o fijadas. El DAPI se une a las regiones de alta repetición A=T en los cromosomas. y algunas estructuras extracelulares. GOTA PENDIENTE . Cristal violeta El cristal violeta. tiñe las paredes celulares de color púrpura.

COLORACION VITAL Las tinciones vitales son aquellas que se efectúan sobre células que están vivas. Es un proceso intermedio entre el examen en fresco y las técnicas de coloración después de la fijación. Tiene como objetico poner de relieve los detalles estructurales de los microorganismos. que no es posible observarlos en fresco. Hay que sellar la preparación con vaselina alrededor de la excavación.8). Una preparación en gota pendiente se realiza colocando una gota del material en un cubreobjetos y cubriéndolo con un portaobjetos (invertido) con una excavación central (portaobjetos excavado) (Figura 3. es que la preparación no se seca y puede ser observada durante un tiempo más largo. Solamente puede tener utilidad en la comprobación de la motilidad de los microorganismos. porque ofrece muy poca información en cuanto a la estructura y composición de las bacterias. La ventaja de esta última técnica. mediante la introducción de un colorante en la circulación de un organismo vivo. .Es una técnica que apenas se utiliza en el diagnóstico microbiológico. sin causar modificaciones físicas o químicas incompatibles con el elemento examinado.

siendo posteriormente teñidos con un colorante contraste como puede ser la fucsina diluida. Técnica de inmersión: permite teñir varias preparaciones a la vez. . se efectúan por decantación libre de colorantes y reactivos. mientras que los Gram – son decolorados. 2. estos son teñidos. TECNICAS DE OBSERVACION DE GERMENES MUERTOS Consiste en exámenes de preparaciones coloreadas que se realiza a gérmenes muertos como lo son las tinciones. Tinciones Diferenciales TINCION DE GRAM Divide a los microorganismos en dos grandes grupos: Gram + y Gram -. Los Gram + son los que resisten a la acción decolorante del disolvente alcohol-acetona. ya que de esta forma son más fáciles de visualizar y se pueden poner de manifiesto características diferenciales. Se caracterizan por una propagación del protoplasma que adopta una configuración esférica u oval. No se sabe porque este grupo de bacterias dan positiva esta tinción. si no que se acumulan en ciertas partes del microorganismo. TINCION ALCOHOL ACIDO RESISISTENCIA Se utiliza para diferenciar bacterias acido alcohol resistente. Se distinguen dos tipos: a) tinción en condiciones normales. Técnicas de vertido: son las utilizadas en microbiología.En general no tiñen. aquellas que resisten la decoloración por una mezcla de acido y alcohol. Se deben de emplear colorantes atóxicos o diluciones muy altas. subterminal o terminal. es decir. pero parece ser que se debe al contenido en lípidos de su pared. Pueden tener una localización central. Es conveniente realizar la tinción de un cultivo joven. se realiza introduciendo la extensión en el /los recipiente/s que contiene/n el/los colorante/s. tras tratamiento con un colorante básico y lugol. para la observación de los microorganismos. TINCION DE ESPORAS Las esporas en las baterías son una forma de resistencia. En la mayoría de los casos. b) tinción en condiciones drásticas. Se clasifican: 1. ya que algunos microorganismos son Gram + solo durante la fase de crecimiento.

. en forma de colorantes concentrados y tinción a emisión de vapores. incluso con objetivos de poco aumento. Su gran ventaja consiste en la observación de los microorganismos luminiscentes sobre fondo oscuro. aunque se encuentren en pequeña cantidad. lo que les hace fácilmente visibles. TINCION FLUORESCENTE Esta tinción está basada en la utilización de colorantes fluorescentes (fluorocromo). aquel que al incidir la luz UV emite luz visible.Para su tinción se utilizan medios muy drásticos. Los más utilizados son el Moeller y Wirtz. es decir. Las tinciones fluorescentes más utilizadas son: auramina-rodamina y naranja de acridina.