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Universidad del Valle

FACULTAD DE CIENCIAS NATURALES Y EXACTAS DEPARTAMENTO DE QUIMICA Perodo Acadmico febrero-junio 2013
PROGRAMA DE: CODIGO: DIRIGIDO A: INTENSIDAD HORARIA: CREDITOS PRERREQUISITOS: VALIDABLE-HABILITABLE: INTRODUCCION: La qumica analtica es una rama de la qumica que estudia las tcnicas y mtodos que sirven para determinar los componentes de la materia en una forma cualitativa y cuantitativa, siendo por lo tanto una herramienta indispensable para el avance de los conocimientos de los diferentes campos de la ciencia. Cada investigacin experimental depende en alguna extensin de los resultados de mediciones analticas. Los investigadores en todas las ciencias fsicas y biolgicas deben recurrir al empleo de datos analticos, de ah la necesidad que esta materia sea conocida por estudiantes de las reas como la biologa, bioqumica, ingeniera qumica y bacteriologa. OBJETIVOS: Familiarizar al estudiante con las tcnicas analticas mas comunes e iniciarlo en el uso de instrumentos como un medio de obtener datos analticos cualitativos y cuantitativos. En esta forma se da una visin de conjunto de la qumica analtica. Se pretende que al finalizar el curso el estudiante pueda hacer uso de su capacidad investigativa en la seleccin del mtodo adecuado para la realizacin de un anlisis. QUIMICA ANALITICA GENERAL 116007M BACTERIOLOGIA Y LABORATORIO CLINICO (3647) 3 Horas/semana 3 116002M Qumica Fundamental (A) SI

CONTENIDO: UNIDAD 1 (DURACION 4 HORAS) Introduccin y conceptos bsicos Evaluacin de datos analticos UNIDAD 2 (DURACION 8 HORAS) Conceptos generales de equilibrio qumico Equilibrios cido-base Volumetra cido-base UNIDAD 3 (DURACION 8 HORAS) Anlisis gravimtrico Volumetra de precipitacin Volumetra de formacin de complejos UNIDAD 4 (DURACION 8 HORAS) Celdas electroqumicas y potenciales de electrodo Potenciometra Titulaciones redox y potenciomtricas Voltametra y sensores electroqumicos UNIDAD 5 (DURACION 9 HORAS) Interaccin de la energa radiante con la materia Espectrometra UV-Vis Espectrometra de absorcin atmica UNIDAD 6 (DURACION 8 HORAS) Mtodos de separacin Cromatografa de gases Cromatografa liquida Electrofresis UNIDAD 7 (DURACION 3 HORAS) Qumica clnica Anlisis ambiental

EVALUACION: Dos exmenes parciales, dos opcionales y un trabajo. 1 examen: Unidades 1-3 2 examen: Unidades 4-6 Trabajo: Unidad 7

BIBLIOGRAFIA: 1) 2) 3) 4) 5) 6) 7) 8) 9) Christian G. Qumica Analtica. Mc Graw Hill. Sexta Edicin, 2009. Skoog, D.; West, F.: Holler, S.; Crouch, D. Fundamentos de Qumica Analtica, Ed. Thompson, 8 Edicin, 2005. S. Higson. Qumica Analtica. Ed. McGraw Hill, 2007. J. Rubinson, K. Rubinson, Qumica Analtica Contempornea, Prentice Hall, 2000. Harris D. C. Anlisis cuantitativo. 2 Edicin. Editorial Revert. 2001. G. Christian, Analytical Chemistry, 5 Ed. John Wiley & Sons, Inc. 1994. Ayres, G. Anlisis Qumica Cuantitativo. Sexta Edicin. Editorial Harla, 1987. R. Day, A. Underwood, Qumica Analtica Cuantitativa, Prentice Hall, 5 Edicin, 1989. L. Hamilton, S. Simpson, Clculos de Qumica Analtica, McGraw-Hill Co, 7 Edicin, 1988.

UNIDAD 1 Introduccin y conceptos bsicos Qumica analtica


rea de la qumica que estudia las tcnicas y mtodos que sirven para determinar los componentes de la materia en una forma cualitativa y cuantitativa. Herramienta indispensable para el avance de los conocimientos en los diferentes campos de la ciencia.
Toda investigacin experimental depende de los resultados de mediciones analticas.

Relacin de la qumica analtica y las otras ramas de la ciencia


Qumica Qumica orgnica Qumica inorgnica Bioqumica Fisicoqumica

Biologa Botnica Gentica Microbiologa Biologa molecular Zoologa Geologa Geofsica Geoqumica Paleontologa

Fsica Astrofsica Astronoma Biofsica

Ingeniera Qumica Mecnica Civil elctrica

Qumica Analtica
Ciencias ambientales Ecologa Meteorologa Oceanografa

Medicina Qumica clnica Farmacia Toxicologa

Agricultura Agronoma Ciencia de los cultivos Ciencias de los alimentos

Ciencias sociales Arqueologa Antropologa Medicina forense

Ciencias de materiales Polmeros Metalurgia Estado solido

Anlisis clasico cualitativo de cationes:

Se basa en que es posible separar en grupos a los cationes existentes en una muestra lquida (mediante la adicin de determinados reactivos denominados de grupo) y, posteriormente, identificar los cationes de cada grupo con la ayuda de reactivos especficos. Fresenius desarroll un esquema cualitativo para el anlisis de cationes que ha tenido una amplia aceptacin (frecuentemente se hace referencia a l como el esquema clsico de anlisis cualitativo de cationes). En este esquema los cationes se dividen en cinco grupos (los 4 que aparecen como precipitados y el que queda en la disolucin final).

Muestra + HCl

Precipitado + disolucin

Grupo I: Ag, Pb, Hg (Precipitado: AgCl, PbCl2, Hg2Cl2) Disolucin + H2S

Grupo II: Bi, Cd, Cu, Hg, Pd, Os, Pd, Rh, Ru (Precipitado: CdS, CuS, HgS, PdS, etc.)
Disolucin + (NH4)2S Grupo III: Co, Ni, Tl, Fe, Cr, Mn, Zn, Al, Be, Ti, Zr, U, Ce, In, Th, Nb, Sc, Ta (Precipitado: CoS, NiS, FeS, etc.) Disolucin + (NH4)2CO3 + NH4Cl) Grupo IV: Ca, Sr, Ba (Precipitado: CaCO3, SrCO3, BaCO3) Disolucin Mg+2, Na+, K+, Li+, Cs+, Rb+, + NH4+

Si

Anlisis Instrumental (Cualitativo y cuantitativo)


Cromatografa de gases:

Cromatogramas de muestras complejas

Cromatografa liquida (HPLC)

fa de fase normal son R=(CH2)3CN, =(CH2)3NH2 y diol.

Cromatografa de intercambio inico y cromatografa por exclusin de tamao

Electroforesis: Tcnica para la separacin de molculas segn la movilidad de estas en


un campo elctrico y depende de la carga elctrica de las molculas y de su masa. La separacin puede realizarse sobre la superficie hidratada de un soporte slido (papel o acetato de celulosa), a travs de una matriz porosa (gel de agarosa o poliacrilamida), o en disolucin (electroforesis libre). La electroforesis se usa en una gran mayora en la materia del ADN recombinante ya que permite saber la carga que poseen los polipptidos, y separarlos. Los cidos nucleicos ya disponen de una carga elctrica negativa, que los dirigir al polo positivo, mientras que las protenas se cargan al unirse con sustancias como el detergente SDS que incorpora cargas negativas de una manera dependiente de la masa molecular de la protena. En un campo elctrico las molculas se movern y pasan por el gel (red tridimensional de fibras cruzadas), las molculas pequeas se movern ms rpidamente y las ms grandes quedan cerca del lugar de partida.

Electroforesis en placa:

Fragmentos de ADN teidos en bromuro de Protenas teidas con Coomassie tras una etidio tras una electroforesis en un gel de electroforesis desnaturalizante en geles de agarosa. poliacrilamida. Gel electrophoresis: 6 "DNA-tracks". In the first row (left), DNA with known fragment sizes was used as a reference. Different bands indicate different fragment sizes (the smaller, the faster it travels, the lower it is in the image); different intensities indicate different concentrations (the brighter, the more DNA).

http://www.youtube.com/watch?feature=player_ embedded&v=sbCusDyYoi0

Electroforesis capilar: La separacin se lleva a cabo en un tubo hueco de dimetro muy


pequeo (menos de 50 m de dimetro).

En el capilar se encuentran la disolucin que contiene las molculas a separar y el tampn o medio electroltico encargado de conducir la corriente. El interior se encuentra formado por grupos silanol (Si-OH), que al ser desprotonados (Si-O-), elevan el pH y favorecen la presencia de analitos especficos. La separacin depende de la relacin masa/carga de las distintas molculas. Adems, existe dentro del capilar otro fenmeno denominado flujo electroosmotico (EOF) debido a que la superficie interna del capilar est cargada. El EOF es el mismo en todo el capilar y afecta de igual forma a todas las molculas arrastrndolas hacia uno de los extremos. La separacin depende del EOF y de la movilidad electrofortica de cada una de las molculas.

CZE: Capacidad de analizar nL (10-9 L) de muestra y sensibilidad de deteccin de los componentes inyectados en concentraciones de attomoles (10-18 mol).

Acoplamiento de cromatografa y espectrometra de masas

Anlisis de gases arteriales


PO2: Presin parcial en Oxgeno Electrodo tipo Clark: Ctodo: O2 + 2H2O + 4e4 OHnodo 4Ag 4Ag+ + 4e-

PCO2: Presin parcial en gas carbnico


Electrodo de Severinghaus

H2O + CO2

H2CO3

H+ + HCO3 -

pH: concentracin de H+
Electrodo de vidrio y un electrodo de referencia

Rangos de referencia PO2 (mmHg): Obstruccin bronquial Problemas vasculares

Normal Aceptable Hipoxemia

97 >80 <80

Cada del gasto cardaco (volumen de sangre expulsada por un ventrculo en un minuto)

Aumento de la demanda de oxgeno


Defectos anatmicos del corazn Bajo contenido de oxgeno inspirado Sangre arterial 35 45

Rangos de referencia PCO2 (mmHg):

Alcalosis respiratoria
PCO2 arterial menor que el rango normal Causada por: Aumento de la ventilacin alveolar

Acidosis respiratoria PCO2 arterial mayor que el rango normal Causada por: Hipoventilacin resultante de: Paro cardaco Enfermedad pulmonar obstructiva crnica Sobredosis de drogas

pH:

Sangre arterial

7,35 7,45

Evaluacin del estado cido-base del paciente Balance entre los sistemas buffer sanguneo, renal y respiratorio. Dficit primario de bicarbonato Exceso primario de bicarbonato Hipoventilacin primaria Hiperventilacin primaria Acidosis metablica Alcalosis metablica Acidosis respiratoria Alcalosis respiratoria

Alcalemia: Aumento de pH en sangre, suero o plasma: Aumento de bicarbonato plasmtico Alcalosis respiratoria por hiperventilacin Acidemia: Disminucin del valor de pH en sangre: Desrdenes renales Envenenamiento por salicilatos Prdida de fluidos corporales alcalinos Valores anormales indicaran:

Neumotrax, Fibrosis intersticial de pulmn, Anemia severa, Disminucin del volumen sanguneo Disminucin de la capacidad de transporte de oxgeno, Asfixia, Diarrea, Exceso de ingestin de anticidos, Hiperventilacin, Enfermedad renal o heptica, Vmitos, Drogas estimulantes de la respiracin, Infecciones severas, Shock.

Miniaturizacin de los instrumentos


(avances de la electrnica y los computadores en los ltimos 30 aos)

Indicadores Porttiles Multifuncin y DATA LOGGERS de gran precisin. Modelos para Presin, Temperatura, Humedad, pH y Redox, Conductividad, concentracin de compuestos en qumica clnica.

Qumica clnica
i-STAT 1 Blood Analyzer StatStrip Glusose Lactate Plus Analyzer Urometer

The Cholestech LDX System

Etapas del proceso analtico

1)

Etapas del proceso analtico Definicin del problema


Tipo de anlisis: Depende de la informacin que se requiere obtener y del tipo de muestra que se analiza. a) Recoleccin de la muestra b) Cantidad de muestra c) Sensibilidad del mtodo d) Precisin y exactitud e) Separacin preliminar (eliminacin de interferencias)
Factores a tener en cuenta: a) Tiempo b) Costo c) Complejidad de las mediciones

Generalmente hay varios procedimientos estndar disponibles en la literatura qumica para la determinacin de un analito en una muestra determinada.
Fuentes bibliogrficas: 1) Manuales de agencias oficiales: EPA (Environmental Protection Agency), AOAC (association of official Analitycal Chemistry), ACS (American Chemical Society). 2) Revistas especializadas: Analytical Chemistry, Analyst, Analytical Letters, Talanta, Applied Spectroscopy, Clinical Chimica Acta, Journal of Chromatography, Journal of the Electrochemical Society, Spectrochimica Acta, Electroanalytical Chemistry, etc. 3) Internet: Bases de datos, Science Direct, Google (10100).

2) Obtencin de una muestra representativa: Generalmente se requiere solo una pequea cantidad del material a analizar (mg). Tipo de muestra: slido, liquido, gas.

Composicin:
Homognea (solucin, aleacin) muestra tomada al azar. Varias muestras individuales.

Heterognea (variacin de la composicin a travs de la muestra) Ejemplos:

1)

Anlisis del contenido proteico de un cargamento de harina: Se toman pequeas muestras de cada bulto y se combinan para obtener una muestra promedio (muestra bruta) (kg).

Reduccin del tamao de la muestra (mtodo de cuarteo): muestra de laboratorio (g).


2) Anlisis de fluidos biolgicos: Condiciones de recoleccin de la muestra son importantes (antes o despus de la ingestin de alimentos). La composicin de la sangre varia considerablemente despus de las comidas.

3) Preparacin de la muestra para el anlisis


a) Medicin de la cantidad de muestra (peso o volumen): Necesario para calcular la composicin porcentual: % analito = peso analito .x 100 peso de la muestra La muestra debe ser medida con la mayor precisin y exactitud posibles: * Peso: balanza analtica (+ 0.0001 g) * Volumen: pipeta volumtrica (+ 0.01 mL)

b) Cantidad de muestra: Anlisis de los constituyentes principales (> 1%): 100-500 mg. Anlisis de trazas (< 1%): 1-5 g.
c) Muestras slidas: * Anlisis sobre base seca: secado a 110 C por 1-2 horas, enfriar y pesar. * Disolucin de la muestra slida seca. d) Muestras inorgnicas (slido): disolucin con cidos fuertes, agentes acomplejantes, agentes oxidantes. e) Muestras Orgnicas: * Anlisis de los componentes inorgnicos (e.g trazas de metales): * Anlisis de las cenizas (combustin a 500-700 C), disolucin con cidos fuertes. * Digestin con agentes oxidantes (destruccin del material orgnico). * Precipitacin de protenas. * Anlisis de los componentes orgnicos: extraccin del componente orgnico con solventes, dilisis, precipitacin, destilacin, etc.

f) Acondicionamiento de la muestra para el anlisis: * Ajuste del pH. * Adicin de reactivos para eliminar interferencias. * Conversin del analito en una forma adecuada para el anlisis: * Anlisis espectrofotomtrico (formacin de un complejo coloreado): Fe Fe+3 + Fenantrolina Fe(fen)2 (compuesto rojo) * Anlisis gravimtrico (conversin a un precipitado adecuado): Fe Fe+3 Fe2O3 (compuesto insoluble)

* Analizas volumtrico (utilizacin de una reaccin cuantitativa): Fe Fe+2 + Cr207-2 Fe+3 (reaccin de oxidacin)

Anlisis Clnico
Anlisis de los constituyentes clnicamente significativos de la sangre y orina: (electrolitos, protenas y sustancias orgnicas)

Composicin de la sangre
1) Elementos celulares: Eritrocitos, leucocitos, plaquetas 2) Plasma (parte liquida): Suero y fibringeno

Anlisis de sangre
Sangre
Centrifugacin o Adicin de acido tricloacetico

- Clulas - Plasma
Coagulacin: eliminacin del fibringeno

Suero (mayora de los anlisis)

Anlisis de fluidos biolgicos


Sangre y orina se colectan despus de ayuno de 8-10 horas (anlisis de glucosa y colesterol) Otros componentes no se afectan por el desayuno: CO2, Cl-, Na+, K+, Ca+2, urea, acido rico, creatinina, albmina, protenas totales glucosa, acido rico, CO2. Recoleccin de la sangre: tubo esterilizado, se adiciona heparina o K2C2O4 para evitar coagulacin

Anlisis de sangre completa: nitrgeno de amino cidos, nitrgeno no proteico,

Ca+2 + C2O4-2 CaC2O4 (Ca+2 se requiere para la coagulacin)

Anlisis del plasma: Albmina, amilasa, bilirrubina, Ca+2, Mg+2, colesterol, Fe, lpidos,
protenas , acido rico, etc.

Anlisis de suero: Na+, K+, Ca+2, Mg+2, Cl-, HCO3 Separacin de las clulas evitando la hemlisis (contaminacin del suero con materiales intracelulares como K+, Fe+3, Mg+2, Zn+2, urea , protenas, etc.). Las muestras de sangre deben ser centrifugadas inmediatamente para separar el suero o plasma de las clulas.

Composicin elemental del cuerpo humano en suero, orina y tejidos (elementos a niveles de trazas)

Composicin del plasma y la orina

Anlisis clnicos en suero y sangre


Composicin elemental

Agua 61.6%

Minerales 6.1%

17%

1.5%

13.8%

Tipos de Anlisis clnicos en suero y sangre

Inmunoensayos
Conjunto de tcnicas inmunoqumicas analticas de laboratorio que tienen en comn el usar complejos inmunes, es decir los resultantes de la conjugacin de anticuerpos y antigenos, como referencias de cuantificacin de un analito (sustancia objeto de anlisis) determinado, que puede ser el anticuerpo (Ac) o un antgeno (Ag), usando para la medicin una molecula como marcador que hace parte de la reaccin con el complejo inmune en la prueba o ensayo quimico. La tcnica se basan en la gran especificidad y afinidad de los anticuerpos por sus antgenos especficos. Su gran sensibilidad y especificidad permite la cuantificacin de compuestos presentes en lquidos orgnicos en concentracin reducida, del orden de ng/mL o de pg/mL. El desarrollo del inmunoensayo ha tenido gran impacto en el campo del diagnostico mdico mediante pruebas de laboratorio o qumica clnica.

Medicin de niveles de hormonas: por ejemplo: hormonas tiroideas o de estrgenos.

Medicin de metabolitos en suero cuya cantidad o presencia son indicios de dao celular: Por ejemplo la medicin de marcadores biolgicos miocrdicos como las troponinas.
Deteccin de virus: por ejemplo de los causantes de hepatitis y su individualizacin. Deteccin del cncer o de clulas tumorales: a travs de sus protenas o marcadores tumorales, liberados en el suero de los pacientes. Detectar exposicin a agentes infecciosos: por ejemplo de rubeola o toxoplasmosis en mujeres embarazadas o en personas inmunosuprimidas. Deteccin de metabolitos indicadores de problemas fisiolgicos, por su presencia o cantidad excesiva, en la sangre : por ejemplo en caso de anemia se mide niveles de ferririna. Medir niveles de medicamentos, drogas objeto de abuso y toxinas en sangre.

PRUEBA DE EMBARAZO EN TIRA (SUERO Y ORINA)


La prueba de embarazo hCG TEST (orina/suero) es un inmunoensayo rpido para la deteccin cualitativa de gonadotrofina corionica humana en orina o suero para la deteccin temprana del embarazo. La hCG es una hormona glicoprotica producida por la placenta en desarrollo, poco tiempo despus de la fertilizacin. En un embarazo normal, la hCG puede ser detectada, tanto en orina como en suero, de 7 a 10 das despus de la concepcin. Los niveles de hCG continuarn aumentando rpidamente, excediendo frecuentemente 100mUI/mL al momento del primer periodo menstrual ausente, llegando a su mximo en 100.000200.000 mUI/mL en un rango de 1012 semanas de embarazo.

La aparicin de hCG en orina y/o suero, luego de la concepcin y su subsecuente incremento rpido en concentracin durante el crecimiento gestacional incipiente, lo hace un excelente indicador para la deteccin temprana del embarazo. La prueba de embarazo hCG TEST (orina/suero), es una prueba cualitativa rpida, que detecta la presencia de hCG en una muestra de orina o suero, con una sensibilidad de 20 mUI/ml. La prueba hCG TEST (orina/suero) utiliza una combinacin de anticuerpos monoclonales y policlonales para detectar selectivamente niveles elevados de hCG en la orina o el suero. Su especificidad inmunolgica elimina reaccin cruzada o interferencia de hormonas glicoprotecas de naturaleza semejante como FSH, LH y TSH en niveles fisiolgicos altos.
La prueba es conducida por la migracin de la orina o suero, observando la formacin de lneas de coloracin. La muestra migra por accin capilar a travs de la membrana para reaccionar con el conjugado de color. Las muestras positivas reaccionan con el conjugado especfico de anticuerpos hCG-coloreados, para formar una lnea en la regin de la prueba de la membrana. La ausencia de esta lnea de color sugiere un resultado negativo. Para efectos de control del procedimiento, siempre aparecer una lnea de color en la regin de control si la prueba fue realizada correctamente y se ha agregado un volumen adecuado de muestra y el empape de la membrana a ocurrido. Catt, K.J./ Dfan, M.L., and Vaitukaitis, J.l., J. Clin. Endocrinal. Metab., 40, 537 (1975). Lenton, E.A., Neal, L.M., Sulaiman,R., Fertility & Sterility 37, 773 (1982).

4) Separacin del analito de las interferencias


Los mtodos de separacin mas comunes: Precipitacin, extraccin con solventes, destilacin, dilisis, cromatografa.

5) Proceso de medicin
Criterios para la seleccin del mtodo: Cantidad de analito, precisin, exactitud, selectividad, sensibilidad, costo y rapidez.

Tipos de anlisis:
1) Mtodos Clsicos: * Anlisis Gravimtrico: a) separacin selectiva del analito mediante precipitacin o volatilizacin; b) medicin no selectiva del peso del precipitado. * Anlisis Volumtrico: el analito reacciona con un volumen medido de un reactivo de concentracin conocida. 2) Mtodos Instrumentales: medicin de alguna propiedad fsica del analito.

* Mtodos Electroqumicos (Medicin de potencial, corriente, carga o conductividad)


* Mtodos Espectrofotomtricos (medicin de la absorcin o emisin de radiacin UV-vis, IR, rayos X, etc.). * Mtodos Cromatograficos (cromatografa de gases, cromatografa liquida, electroforesis).

Caractersticas de los mtodos analticos


Mtodos
Gravimtrico Volumtrico Electroqumico Espectroscpico Cromatogrfico

Sensibilidad (mol/L)
10-1-10-2 10-1-10-4 10-1-10-10 10-3-10-9 10-3-10-9

Precisin (%)
0.1 0.1-1 1-5 2-5 2-5

Selectividad Velocidad
pobre moderada buena buena buena lento lento moderada rpida rpida

Costo
bajo bajo moderado alto alto

En general los mtodos clsicos son mas precisos (< 1%), pero los mtodos instrumentales son mas sensibles, selectivos, rpidos y pueden ser automatizados para analizar varios analitos a la vez. Los mtodos instrumentales son relativos, puesto que requieren de la comparacin contra soluciones de concentracin conocidas (soluciones estndar): requiere de curvas de calibracin.

6) Calculo de los resultados: Composicin relativa (unidades de concentracin): %, M, ppm, ppb.


%(peso/peso) analito = peso analito
peso de la muestra
x 100

(sin unidades)

%(peso/volumen) = peso analito X 100 volumen de la muestra

(g/L, mg/mL, mg/dL))

Molaridad (M) = moles del analito litro de solucin


ppm analito = peso analito x 106 peso de la muestra

(mol/L o mmol/mL)

ppm = mg/L = mg/mL

ppb analito = peso analito x 109 peso de la muestra

ppb = mg/L = ng/mL

femto atto zepto yocto

f a z y

1/1,000,000,000,000,000 or 10-15 10-18 10-21 10-24

1 femtometer (fm) = 1 x 10-15 m 1 attometer (am) = 1 x 10-18 m 1 zeptometer (zm) = 1 x 10-21 m 1 yoctometer (ym) = 1x 10-24 m

Validacin de un mtodo de anlisis


1) Calibracin de los instrumentos con muestras patrn (concentracin conocida y certificada: NIST (National Institute of Standards and Technology) Comparacin de los resultados con otro mtodo aceptado.

2)

3)

Comparacin de los resultados con otros laboratorios.

Evaluacin de los datos del proceso analtico


Precisin: Grado de concordancia entre las medidas repetidas de la misma cantidad. (repetitividad de los resultados). Exactitud: Grado de concordancia entre un valor medido y el valor que se considera verdadero. (veracidad de los resultados). Cifras significativas: numero de dgitos necesarios para expresar un resultado con la precisin medida. C.S: dgitos conocidos mas el primer digito incierto. Ejemplo: 21.3 mg/L + 0.1 (3 cifras significativas) 21 =dgitos conocidos 3 = digito incierto (incertidumbre en + 0.1)

Distribucin normal de una serie de resultados obtenidos de idntica forma (calibracin de una pipeta)

Precisin y Exactitud

Preciso y exacto

Preciso pero no exacto (error sistemtico)

Ni preciso ni exacto

Precisin: Desviacin absoluta d=Xi-X

o desviacin estndar:

Exactitud: Error absoluto E= X-R o % de error %E=(X-R/R)x100 Xi = valor medido, X = valor promedio, R = valor real o aceptado

Tipos de errores en mediciones analticas


1) Errores determinados A) Errores Instrumentales: causados por el comportamiento no ideal de los instrumentos (falta de calibracin o mantenimiento). B) Errores de mtodo: provienen de el comportamiento fisicoqumico no ideal de los sistemas analticos. Anlisis gravimtrico: solubilidad de los precipitados Anlisis volumtrico: error en la deteccin del punto final (error de valoracin) Anlisis instrumental: limitaciones de los instrumentos en los limites de deteccin del analito. C) Errores personales: causados por la inhabilidad o prejuicios del analista.

2) Errores indeterminados: Errores aleatorios (al azar) causantes de la


en las mediciones experimentales (son inevitables).

incertidumbre

NO se pueden predecir ni corregir, se manifiestan por las pequeas diferencias que se obtienen en mediciones sucesivas de la misma cantidad con los mismos instrumentos en condiciones idnticas y por el mismo analista. Siguen una distribucin aleatoria y por lo tanto se pueden aplicar las leyes de la probabilidad: El mejor valor es el valor promedio de varias mediciones idnticas. Existe igual probabilidad de que un resultado individual se encuentre por encima o por debajo del valor promedio. Errores pequeos son mas probables que los errores grandes.

Siguen una distribucin normal o gaussiana (curva normal de error o campana de Gauss).
y = frecuencia de la desviacin, x = valor medido

Y=

m= valor promedio para n infinito s = desviacin normal

La campana de Gauss:
Propiedades de la distribucin normal 1. Es simtrica respecto de su promedio, 2. El promedio y la mediana son iguales 3. Los puntos de inflexin de la curva se dan para x = y x = + . 4. Distribucin de probabilidad en un entorno del promedio: En el intervalo [ - , + ] se encuentra aproximadamente el 68,26% de los datos. En el intervalo [ - 2, + 2] se encuentra aproximadamente el 95,44%. En el intervalo [ -3, + 3] se encuentra aproximadamente, el 99,74%. Estas propiedades son de gran utilidad para el establecimiento de intervalos de confianza.

Desviacin estndar (S)


Es una medida de la dispersin de una serie de datos, que nos indica cunto pueden alejarse los valores medidos respecto al promedio (media), por lo tanto es til para buscar probabilidades de que un evento ocurra.

Se define como la raz cuadrada de la varianza.

S s cuando n Xm
Ejemplo: Mediciones idnticas (Xi), anlisis por triplicado: 15.67, 15,69, 16.03. Promedio: X= (15.67 + 15,69 + 16.03)/3=15.80

Desviaciones absolutas: d=Xi-X: 0.13, 0.11, 0.23 Desviacin estndar:

S(Xi-X)2 = (0.0169 + 0.0121 + 0.0529) = 0.0819


S=(0.0819/3-1)1/2= 0.20

Resultado: X + S

15.80 + 0.20

S es una estimacin de la precisin de varias mediciones.

d=0.16

Caractersticas de la desviacin estndar


La dispersin de los datos disminuye a medida que n

Ss
n: si

y Xm

La precisin del promedio para n medidas es inversamente proporcional a Desviacin estndar del promedio: Sm= S/ n Sm= 0.2/ 3=0.12

,S

La precisin de un anlisis se puede mejorar incrementando el numero de observaciones (n): Sm=0.2/ 10= 0.06

Para disminuir S en 10 veces se necesitan 100 veces mas observaciones: 100 = 10. Desviacin estndar relativa (RSD o %RSD) o coeficiente de variacin (CV): RSD= S/X = 0.20/15.80 = 0.013

%RSD = 0.013X100 = 1.3%

Resultado: 15.80 + 0.20

%RSD= 1.3%

Propagacin del error en un anlisis:


La incertidumbre del resultado esta determinada por las incertidumbres de los datos experimentales y se determina por la varianza

El anlisis implica mediciones, c/u con una incertidumbre determinada: x=f(p,q,r) dx=f(dp, dq, dr)
(dx)2=[(dx/dp)dp + (dx/dq)dq + (dx/dr)dr]2 sx2 = sp2 + sq2 + sr2 o Sx2 =Sp2 + Sq2 + Sr2

La propagacin de la incertidumbre depende del tipo de operacin matemtica: Suma y resta: la incertidumbre se representa por la sumatoria de las incertidumbre absolutas. Para el calculo con los datos: a = b + c d Sa2 = Sb2 + Sc2 + Sd2

Ejemplo: R = (65.06 + 0.07) + (16.13 + 0.01) - (22.68 + 0.02) = 58.51 SR2= (0.07)2 + (0.01)2 + (0.02)2 SR=(0.0049 + 0.0001 + 0.0004)1/2 = 0.07

Resultado: 58.51 + 0.07

Multiplicacin y divisin: La incertidumbre se representa por la sumatoria de las incertidumbres relativas, (Sa)rel= Sa/X

Para el calculo con los datos: a = bc/d

(Sa)2rel = (Sb)2rel + (Sc)2rel + (Sd)2rel

Ejemplo: R = (13.67 + 0.02)(120.4 + 0.2)/(4.623 + 0.006) = 356.0

(Sb)rel = 0.02/13.67 = 0.0015 (Sc)rel = 0.2/120.4 = 0.0017 (Sd)rel = 0.006/4.623 = 0.0013 (SR)rel = (0.0015 + 0.0017 + 0.013)1/2 = 0.0026 SR = (SR)relR = (0.0026)356.0 = 0.93

Resultado: 356.0 + 0.9

Ejemplo: Titulacin de Cl- con Ag+


Datos: VCl-= 25.00 + 0.01 mL , VAg+ = 36.78 , 36.82 y 36.76 mL (anlisis por triplicado) MAg+ = 0.1167 + 0.0002

Calcular la incertidumbre en los moles de Cl- contenidos en 25.00 mL de solucin Vi 36.78 36.82 36.75 - = 36.78 mL V Vi V 0.00 0.04 0.03

(Vi-V)2
0.00 0.0016 0.0009 0.0025

(0.0025)1/2/3-1= 0.035

VAg+ = 36.78 + 0.035 Moles de Cl- = VAg+MAg+ = (36.78 + 0.035)(0.1167 + 0.0002) = 4.292 mmol Cl-

(SMAg+)rel = 0.0002/0.1167 = 0.0017


(SVAg+)rel = 0.035/36.78 = 0.00095 (Smol Cl-)rel = [(0.0017)2 + (0.00095)2]1/2 = 0.019

Smol Cl- = (Smol Cl-)rel (mol Cl-) = (0.019)(4.292 mmol) = 0.0082 mmol
Resultado: 4.292 mmol Cl- + 0.008

Limites de confianza: La teora estadstica permite estimar el rango en el cual el verdadero


valor promedio (m) debe estar con un cierto grado de probabilidad (intervalo de confianza).

LC = X + tS/ n

Xi

t = Factor estadstico que depende del numero de mediciones y el grado de confianza deseado S = Desviacin estndar n = # de mediciones

Valores de t
Grados de libertad (N-1) 1 2 3 4 5 10 Nivel de confianza (%) 90 95 99 6.314 12.706 63.657 2.920 4.303 9.925 2.353 3.182 5.841 2.132 2.776 4.604 2.015 2.571 4.032 1.812 2.228 3.169

25

1.708
1.645

2.090
1.960

2.787
2.570

Ejemplo: una muestra de soda (Na2CO3 comercial) se analizo por voltametra acido-base y se titulo con HCl.
Resultados experimentales: 93.50, 93.58 y 93.43 % de Na2CO3. Cual es el intervalo de confianza en el que existe una probabilidad del 95% de encontrar el valor verdadero. Promedio: X= 93.50 %, S= 0.075 3 medidas (N-1= 2 grados de libertad)

LC = X + tS/ n = 95.50 + (4.303)(0.075)/ 3 = 93.50 + 0.19

t=4.303 (tabla)

[
93.31

]
93.50
93.69

Para N

LC = X + tS/

=X+0

X=m

Si N aumenta

t y S/ n disminuyen

El intervalo de confianza se estrecha.

A mayor numero de medidas realizadas hay mayor confianza de que el valor verdadero caiga dentro del intervalo de confianza.

t disminuye exponencialmente a medida que N aumenta se alcanza un punto donde la disminucin del LC no justifica el gran incremento en el numero de medidas necesarias

La prueba t de student: Sirve para determinar si existe una diferencia estadstica entre los
resultados obtenidos usando 2 procedimientos o mtodos diferentes para un mismo anlisis. Comparacin de un nuevo mtodo con un mtodo aceptado: Se calcula el valor de t y se compara con el valor tabulado para un nivel de confianza deseado. Criterio: Si tcalculado < ttabulado los mtodos son equivalentes.

m = X + tS/ n

+t = (X m) N/S

m se obtiene analizando muestras patrn por el mtodo aceptado Muestras patrn: NIST. Ejemplo: Un nuevo mtodo para analizar Cu en material vegetal: A) Digestin acida B) Anlisis de muestra patrn (NIST): m = 11.7 ppm. C) Nuevo mtodo: X = 10.8 + 0.7 ppm (anlisis de 5 muestras). Es el nuevo mtodo estadsticamente correcto con probabilidad del 95%?

+t = (X m) N/S = (10.3-11.7) 5/0.7 = 2.9


ttabulado = 2.776 (N=5, N-1=4 y 95%)

tcalculado > ttabulado

Los mtodos no son equivalentes con un 95% de probabilidad de que exista un error en el nuevo mtodo.

Rechazo de un resultado dudoso : Generalmente cuando se anlisis por replicado, alguno


de los datos puede diferir marcadamente con los otros. Aplicar criterio de rechazo al dato. Ensayo Q (Quotient=cociente): Mtodo estadstico para series de datos > 3. A) Ordenar los datos en orden decreciente. B) Calcular la diferencia entre el dato dudoso y su vecino mas prximo. C) Calcular el rango de los datos. D) Calcular Q = B/C. Siempre Q < 1. E) Criterio de rechazo: si Qcalculado > Qtabulado El dato se rechaza

N 3 4 5 10

Q90% 0.941 0.765 0.642 0.412

Q95% 0.979 0.829 0.71 0.466

Valores de Q: D.B. Rorabacher, Anal. Chem. 63, 139,(1991)

Ejemplo: Resultados de anlisis de Cl- en suero del mismo paciente: 103, 104, 107 y 114 meq/L. Dato dudoso: 114

Qcalculado = (114 107)/(114-103) = 0.64 Qtabulado (N=4 y 95%) = 0.829 Qcalculado < Qtabulado
El dato se conserva a con un 95% de que sea correcto.

Recomendaciones cuando hay datos dudosos:


Revisin del procedimiento que condujo al dato dudoso y verificar que no hay errores determinados. Hacer (si es posible) una nueva medicin y comparar el resultado. Si no se puede repetir el anlisis aplicar el ensayo Q.

Si el ensayo Q indica que hay que retener el resultado, utilizar la Mediana en lugar del promedio para reportar el resultado del anlisis.
Mediana es el valor central en una serie de medidas ordenadas en orden creciente o decreciente.

Ejemplo: 4.31, 4.41, 4.38 y 4.39.


Promedio : 4.37 Mediana: promedio del par central = 4.38

Resultado: 4.38

Regresin lineal (mtodo de mnimos cuadrados):


Obtencin de la mejor recta posible para una serie de datos. Uso frecuente en las curvas de calibracin.

Ecuacin de una recta:

y = mx + b

y = Variable dependiente, x = variable independiente, b = intercepto, m = pendiente

Estadsticamente la mejor recta posible es la lnea para la cual la sumatoria de los cuadrados de las desviaciones (varianza) de los puntos con la lnea de regresin es mnima. Ecuacin de la lnea de regresin: yl= mXi + b Suma de cuadrados de las desviaciones: S=S(yi-yl)2 = S[(yi (mxi + b)] Mejor recta ocurre cuando S es mnima: S=F(m, b) Solucin matemtica: 2 Ecuaciones con dos incgnitas. dS/dm = 0 y dS/db = 0

m= S(xi - x)(yi - y)/S(xi - x)2 = {S(xiyi) - [(SxiSyi)]/N]}/Sxi2 - (Sxi)2/N

b= y - mx

Ejemplo: Determinacin de riboflavina (vitamina B2) en una muestra de cereal por espectroscopia
de fluorescencia. Datos para la Curva de calibracin: Xi = [riboflavina] (mg/mL) 0.0 0.100 0.200 0.400 0.800 X i2 0 0.01 0.04 0.16 0.64 Yi = Intensidad fluorescencia (UA) 0.0 5.8 12.2 22.3 43.3 XiYi 0.0 0.58 2.44 8.92 34.6

Sxi = 1.500
(Sxi)2 = 2.250

Syi = 83.6
x = 0.300

Sxi2 = 1.500
y = 16.7

Sxiyi = 46.5

m = 46.5 [(1.500)(83.6)/5]/0.850 2.250/5 = 53.7 b = 16.7 - (53.7)(0.300) = 0.6 Ecuacin de la mejor recta: y

= 53.7x + 0.6
15.4 = 53.7x + 0.6

Muestra de cereal: 15.4 UA

x = 0.275 mg/mL