Cromatografia de Excluso Molecular e Cromatografia de Afinidade

Alessandra Honjo Ide Franciane de Almeida Brehm Larissa Richter

INTRODUO
Ambos os mtodos, da excluso molecular e de afinidade, so mtodos de cromatografia LQUIDA; So mtodos muito novos, visto que, seus desenvolvimentos se iniciaram, respectivamente em 1964 e 1987.

Como funciona um HPLC?

Para compreender melhor como funcionam as tcnicas, vamos verificar um pouco o funcionamento de um HPLC.

Como funciona um HPLC?

VIDEO HPLC

CROMATOGRAFIA DE AFINIDADE
, comumente, um mtodo de separao de misturas bioqumicas, baseadas em interaes biolgicas altamente especficas como:
Antgeno e Anticorpo; Enzima e substrato; Receptor e ligante.

USOS DA CROMATOGRAFIA DE AFINIDADE

Purificar e concentrar uma substncia de uma de uma mistura para uma soluo-tampo; Reduzir a quantidade de uma substncia em uma

mistura;
Descobrir qual composto biolgico se liga a uma substncia em particular; Purificar e concentrar uma soluo de enzimas.

QUAL O PRINCPIO DA SEPARAO?

A fase ESTACIONRIA comumente uma matriz gelatinosa,

geralmente de agarose.
A molcula de interesse na mistura deve ter suas caractersticas fsico-qumicas conhecidas, de modo que uma propriedade definida

e diferente das demais deve existir para que seja explorada na

interao com a fase estacionria; Como as outras substncias da mistura no possuem essa

interao, no sero retidas na coluna;

QUAL O PRINCPIO DA SEPARAO?

QUAL O PRINCPIO DA SEPARAO?

Podemos detalhar entre:
A fase estacionria O processo de Eluio

A FASE ESTACIONRIA
O composto de interesse se liga ao

composto contido fase estacionria.

Por exemplo: numa mistura de protenas A, B, C e D, desejamos estudar a protena A, que se liga facilmente com glicose. Portanto, a parede do tubo aonde essa mistura ser despejada conter glicose, que logo atrair a protena A para si, conseqentemente separando-a das demais, que sero filtradas do tubo.

A ELUIO
Aps restar na fase estacionria apenas os

ligante com os compostos de interesse,

despejado no tubo uma soluo contendo os mesmos ligantes contidos na parede do tubo ou reagente desnaturantes (uria, guanidina, etc)

desprendendo a protena da parede do tubo.

No exemplo, adicionado uma soluo de resduos de glicose que fazem com que a protena A se desprenda da parede do tubo, sendo despejada, em meio a soluo, em outro tubo para estudo.

PARA ENTENDER MELHOR:

VIDEO AFINIDADE

APLICAES

INTRODUO
FALTA COMENTAR: Detectores, principais colunas, principais utilizaes, preparo de amostra: Tem naquele livro!

INTRODUO
VIDEO ALE