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Anlisis de caso #1 (Enzimas de restriccin) Un Biotecnologo que trabaja en un laboratorio de Biotecnologa vegetal desea obtener trigo transgnico que

sea resistente al ataque de un hongo que afecta ese cultivo en su pas. Como no existe otra variedad de trigo que tenga genes anti fngicos el Biotecnologo evalu que no podra realizar cruzamientos convencionales y tendra que recurrir a tcnicas de ingeniera gentica. Al investigar en publicaciones cientficas hallo que la cebada tiene genes de resistencia, entonces decidi clonar esos genes de la cebada para luego utilizarlos en la obtencin del trigo transgnico. Busco en base de datos la secuencia del gen de la cebada para analizar con que enzimas de restriccin podra cortar el gen que le interesa, una vez que haya hecho la extraccin del ADN de la planta. El resultado de su anlisis se encuentra en la figura1:

Una vez cortado el gen de inters deber insertarlo dentro de un vector de clonado que se muestra en la figura2, Ver abajo para lo cual deber abrir el sitio mltiple de clonado cortando con alguna enzima. 1. Que vector de clonacin seria el apropiado y que ventajas ofrece? 2. Que enzima (s) habra elegido? Por qu?

Sau96I

BamHI HindIII

EcoRV HindIII Hind III Hind III

Fig.2: Sitio de mltiple clonado dentro del vector de clonado

Vector de clonado

Anlisis de caso #2 (Enzimas de restriccin) La anemia falciforme se debe a una mutacin en el gen de la cadena de lahemoglobina humana. El cambio de la GAG a GTG en el mutante elimina un centro de restriccin de la enzima MstII, que reconoce la secuencia dianaCCTGAGG. Estos hallazgos constituyen la base de un valioso mtodo para detectar la presencia del gen de la anemia falciforme. Proponer una tcnica de diagnostico rpido para distinguir entre el gen normal y el mutante.. En caso de que la prueba diera resultado positivo. Demostrara esto que el mutante contiene GTG en vez de GAG?

Anlisis de caso #3 (Enzimas de restriccin) Tras introducir en una bacteria una nica molcula de ADN de la forma de replicacin (RF) de M13, que contiene un fragmento de ADN extrao, se obtiene una progenie de ADN M13 que contiene una sola hebra del ADN extrao. a. Por qu es tan importante averiguar cual de las dos hebras de ADN es la que se haya en una partcula vrica completa? b. Supongamos que el ADN extrao fue introducido en el genoma M13 por medio de la enzima de restriccin 1, y que el ADN extrao tieneun centro para la enzima de restriccin 2. Cmo se puede determinar cual de las hebras de ADN esta contenida la partcula vrica? c. La electroforesis en gel de agarosa puede distinguir entre ADN de hebra sencilla y de doble hebra. Cmo se podra utilizar este mtodo para determinar i dos partculas fagicas contienen la misma o diferentes hebras de ADN extrao?. Como se podra utilizar una enzima para hacer esta determinacin?