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TONY FRANCIS PLEUS CANTARUTTI

RISCO TXICO DE RESDUOS DE PESTICIDAS EM ALIMENTOS E TOXICIDADE REPRODUTIVA EM RATOS WISTAR

Dissertao apresentada como requisito parcial obteno do grau de Mestre, pelo Curso de Ps-Graduao em Farmacologia, do Setor de Cincias Biolgicas da Universidade Federal do Paran. Orientador: Prof. Dr. Paulo Roberto Dalsenter

CURITIBA 2005

DEDICATRIA

Giulia

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AGRADECIMENTOS

Seria injusto no agradecer, mais injusto seria agradecer apenas a alguns, ento agradeo a todos aqueles que fizeram parte da minha vida, e de alguma maneira contriburam para a realizao deste projeto.

Cada um participou de seu jeito, com seus comentrios, com seu trabalho, com sua experincia, com seus conselhos, com seus ensinamentos, com sua seriedade ou com momentos de descontrao, mas principalmente com incentivo e motivao para sua realizao.

Agradeo a voc, que fez parte de tudo isso.

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EPGRAFE

A mais bela experincia que podemos ter a do mistrio. a emoo fundamental existente na origem da verdadeira arte e cincia. Aquele que no a conhece e no pode se maravilhar com ela est praticamente morto e seus olhos esto ofuscados.

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SUMRIO
LISTA DE FIGURAS.................................................................................................................. LISTA DE GRFICOS............................................................................................................... LISTA DE TABELAS................................................................................................................. LISTA DE SIGLAS.................................................................................................................... LISTA DE SMBOLOS E ABREVIATURAS.............................................................................. RESUMO................................................................................................................................... ABSTRACT............................................................................................................................... 1 INTRODUO........................................................................................................................ 2 REVISO BIBLIOGRFICA.................................................................................................. 3 OBJETIVOS............................................................................................................................ 3.1 OBJETIVO GERAL.............................................................................................................. 3.2 OBJETIVOS ESPECFICOS................................................................................................ 4 MATERIAL E MTODOS....................................................................................................... 4.1 RESDUOS DE PESTICIDAS NA ALIMENTAO E RISCO 10 10 11 11 11 12 12 vii viii ix x xi xii xiii 01 04 09 09 09 10

TXICO..................................................................................................................................... 4.1.1 PRESENA DE RESDUOS DE PESTICIDAS ............................................................... 4.1.2 PESTICIDAS COM RESDUOS ACIMA DO LMR............................................................ 4.1.3 PESTICIDAS COM USO NO AUTORIZADO................................................................. 4.1.4 CARACTERIZAO DE RISCO (%IDA).......................................................................... 4.1.4.1 FRMULAS................................................................................................................... 4.1.5 PRESENA DE DIFERENTES PESTICIDAS NA MESMA CULTURA............................ 4.1.6 PESTICIDAS LISTADOS COMO POSSVEIS DESREGULADORES

ENDCRINOS........................................................................................................................... 4.2 TOXICIDADE REPRODUTIVA EM RATOS WISTAR EXPOSTOS MISTURA DE PESTICIDAS.............................................................................................................................. 4.2.1. ANIMAIS.......................................................................................................................... 4.2.2 SUBSTNCIAS PARA TRATAMENTO............................................................................ 4.2.3 ACASALAMENTO............................................................................................................. 4.2.4 DOSES E TRATAMENTO................................................................................................ 4.2.5 PRENHEZ E LACTAO.................................................................................................. 4.2.5.1 FRMULAS................................................................................................................... 4.2.6 DESCENDENTES NO PERODO LACTACIONAL........................................................... 4.2.7 AVALIAO DOS DESCENDENTES MASCULINOS...................................................... 4.2.7.1 DESENVOLVIMENTO PONDERAL.............................................................................. 4.2.7.2 DESCIDA BILATERAL DOS TESTCULOS ................................................................. 4.2.7.3 SEPARAO PREPUCIAL COMPLETA....................................................................... 4.2.7.4 VARIVEIS REPRODUTIVAS.......................................................................................

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4.2.8 AVALIAO DAS DESCENDENTES FEMININAS.......................................................... 4.2.8.1 DESENVOLVIMENTO PONDERAL.............................................................................. 4.2.8.2 ABERTURA DO CANAL VAGINAL................................................................................ 4.2.8.3 PRIMEIRO ESTRO E REGULARIDADE DO CICLO ESTRAL...................................... 4.2.8.4 VARIVEIS REPRODUTIVAS....................................................................................... 4.3 ANLISE ESTATSTICA...................................................................................................... 5 RESULTADOS....................................................................................................................... 5.1 RESDUOS DE PESTICIDAS NA ALIMENTAO E RISCO TXICO............................... 5.1.1 PRESENA DE RESDUOS DE PESTICIDAS................................................................ 5.1.2 PESTICIDAS COM RESDUOS ACIMA DO LMR............................................................ 5.1.3 PESTICIDAS COM USO NO AUTORIZADO................................................................. 5.1.4 CARACTERIZAO DE RISCO (%IDA).......................................................................... 5.1.5 PRESENA DE DIFERENTES PESTICIDAS NA MESMA CULTURA............................ 5.1.6 PESTICIDAS LISTADOS COMO POSSVEIS DESREGULADORES

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ENDCRINOS........................................................................................................................... 5.2 TOXICIDADE REPRODUTIVA EM RATOS WISTAR EXPOSTOS MISTURA DE PESTICIDAS.............................................................................................................................. 5.2.1 PRENHEZ E LACTAO................................................................................................. 5.2.2 MASSA DE RGOS DAS PROGENITORAS................................................................ 5.2.3 DESCENDENTES NO PERODO LACTACIONAL........................................................... 5.2.4 DESENVOLVIMENTO SEXUAL DOS DESCENDENTES................................................ 5.2.5 CICLO ESTRAL................................................................................................................ 5.2.6 MASSA DE RGOS DA PROGNIE FEMININA........................................................... 5.2.7 MASSA DE RGOS DA PROGNIE MASCULINA....................................................... 5.2.8 CONTAGEM DE ESPERMATOZIDES E PRODUO ESPERMTICA

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DIRIA....................................................................................................................................... 6 DISCUSSO........................................................................................................................... 6.1 RESDUOS DE PESTICIDAS NA ALIMENTAO E RISCO TXICO............................... 6.2 TOXICIDADE REPRODUTIVA EM RATOS WISTAR EXPOSTOS MISTURA DE PESTICIDAS.............................................................................................................................. 6.2.1 DADOS DA PRENHEZ E LACTAO............................................................................. 6.2.2 DESENVOLVIMENTO GERAL DOS DESCENDENTES NO PERODO

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LACTACIONAL.......................................................................................................................... 6.2.3 DESENVOLVIMENTO SEXUAL DOS DESCENDENTES................................................ 6.2.4 AVALIAO DOS DESCENDENTES EM IDADE ADULTA............................................. 6.2.5 CONSIDERAES FINAIS.............................................................................................. 7 CONCLUSES....................................................................................................................... REFERNCIAS......................................................................................................................... ANEXOS....................................................................................................................................

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LISTA DE FIGURAS
FIGURA 1 - ESQUEMA DO PROTOCOLO DESENVOLVIDO.............................................. 15

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LISTA DE GRFICOS
GRFICO 1 - NMERO DE PESTICIDAS ENCONTRADOS OU NO NA FORMA DE RESDUOS NO ALIMENTO................................................................................ GRFICO 2 - PRESENA DE PESTICIDAS ACIMA E DENTRO DO LMR NAS CULTURAS PESQUISADAS................................................................................................... GRFICO 3 - RESDUOS PRESENTES NAS CULTURAS COM USO AUTORIZADO OU NO..................................................................................................................... GRFICO 4 - RESDUOS DE PESTICIDAS COM OU SEM RISCO TXICO.......................... GRFICO 5 - NMERO DE PESTICIDAS PRESENTES NAS CULTURAS INVESTIGADAS.................................................................................................. GRFICO 6 - LISTADOS COMO POSSVEIS DESREGULADORES ENDCRINOS..................................................................................................... GRFICO 7 - MASSA RELATIVA CORPORAL DURANTE A PRENHEZ............................................................................................................ GRFICO 8 - MASSA RELATIVA CORPORAL DURANTE A LACTAO.......................................................................................................... GRFICO 9 - MASSA ABSOLUTA DE FILHOTES NO 1DPN E NO 21DPN................................................................................................................ GRFICO 10 DESENVOLVIMENTO PONDERAL DA PROGNIE..........................................

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LISTA DE TABELAS
TABELA 1 - PRODUTOS FITOFARMACUTICOS COM PROPRIEDADES DE POSSVEL DESREGULAO ENDCRINAS EM ESPCIES ANIMAIS ........................................... 5 TABELA 2 - MASSA RELATIVA DE RGOS DE RATAS EXPOSTAS NA PRENHEZ E LACTAO....................................................................................................................... TABELA 3 - DADOS DA PRENHEZ E LACTAO.............................................................................. TABELA 4 - CARACTERSTICAS DO DESENVOLVIMENTO GERAL DE RATOS WISTAR AT O DESMAME........................................................................................................................ TABELA 5 - DESENVOLVIMENTO SEXUAL DOS DESCENDENTES................................................ TABELA 6 - INTERVALO ENTRE ESTROS, DIA DO PRIMEIRO ESTRO E REGULARIDADE DO CICLO DE RATAS DESCENDENTES EXPOSTAS NA PRENHEZ E LACTAO....................................................................................................................... TABELA 7 - MASSA RELATIVA (%) DE RGOS DE DESCENDENTES FMEAS EXPOSTAS NA PRENHEZ E LACTAO........................................................................................... TABELA 8 - MASSA RELATIVA (%) DE RGOS DOS DESCENDENTES MACHOS EXPOSTOS NA PRENHEZ E LACTAO........................................................................................... TABELA 9 - CONTAGEM DE ESPERMATOZIDES, PRODUO E TEMPO DE TRNSITO ESPERMTICO DIRIO DE DESCENDENTES MACHOS EXPOSTOS NA PRENHEZ E LACTAO.................................................................................................................... 31 32 34 35

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LISTA DE SIGLAS
AMBLAV Associazione Ambiente e Lavoro: Associao do Ambiente e Trabalho ANVISA/MS DE EDSTAC EPA FAO Agncia Nacional de Vigilncia Sanitria do Ministrio da Sade Desregulador Endcrino Endocrine Disruptors Screening and Testing Advisor Committee Environmental Protection Agency: Agncia de Proteo Ambiental Food and Agriculture Organization: Organizao de Alimento e Agricultura IBGE IDA IDR IDTM INCQS/FIOCRUZ/MS Instituto Brasileiro de Geografia e Estatstica Ingesto Diria Aceitvel Ingesto Diria de Resduos Ingesto Diria Terica Mxima Instituto Nacional de Controle de Qualidade em Sade da Fundao Oswaldo Cruz do Ministrio da Sade LMR NPIC Limite Mximo de Resduos National Pesticide Information Center: Centro Nacional de

Informao de Pesticidas NPTN National Pesticide Telecommunications Network: Rede Nacional de Telecomunicaes de Pesticida PAN-UK Pesticide Action Network United Kington: Rede de Ao de Pesticida PARA PFS UFPR WHO Programa de Anlise de Resduos em Alimentos Pesticide Fact Sheet Universidade Federal do Paran World Health Organization: Organizao Mundial de Sade

LISTA DE SMBOLOS E ABREVIATIRAS


% %IDA L A DL50 De F0 F1 g Dg kg n C P dpn ppm PR - Por cento Caracterizao de Risco - Marca registrada - Microlitro - Fmea - Macho - Acasalamento - Dose letal 50% - Desmame - Primeira gerao - Segunda gerao - Grama - Dia de prenhez - Quilograma - Nmero - Graus Celcius - Nvel de significncia estatstica - Dia ps-natal Partes por milho - Paran

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RESUMO O uso de agrotxicos no processo de produo agrcola e a conseqente contaminao dos alimentos tm sido alvo de constante preocupao no mbito da sade pblica. O uso de pesticidas ainda a principal estratgia para o combate e preveno de pragas agrcolas para o aumento de produtividade. Alguns deles so capazes de interferir no sistema endcrino, podendo produzir alteraes reprodutivas. Numerosos agrotxicos figuram entre as substncias qumicas suspeitas de atuarem como desreguladores sobre o sistema endcrino. A exposio da populao aos agrotxicos pode ser atribuda ao consumo de alimentos oriundos da produo agropecuria e ao contato direto, no caso dos aplicadores rurais e ou manipuladores, ou ainda indireto, como no caso das populaes que esto sujeitas aplicao de agrotxicos para controle de vetores das endemias. No Brasil foi desenvolvido o Programa de Anlise de Resduos de Pesticidas (PARA) para avaliar a qualidade dos alimentos quanto ao teor de agrotxicos. O objetivo deste trabalho foi avaliar a taxa de risco crnico de populaes expostas aos pesticidas pela ingesto de resduos de pesticidas em alimentos. Experimentalmente, os animais foram expostos a mistura de pesticidas e variveis reprodutivas foram avaliadas. Os pesticidas foram administrados misturados baseados na dose correspondente Ingesto Diria Aceitvel (IDA) e 100 vezes este valor. Ratas Wistar prenhes foram tratadas diariamente, por via oral, do sexto dia de prenhez ao desmame com a associao de carbaril (CB), lambda-cialotrina (LB) e metamidofs (MF) como produtos comerciais. As doses correspondentes a IDA foram de: CB 0,003mg/kg; MF 0,004mg/kg LB 0,05mg/kg. As progenitoras e os descendentes foram avaliados para as variveis de toxicidade materna, desenvolvimento geral e sexual dos descendentes, incluindo ganho de peso ponderal, massa relativa de rgos (fgado e rins), ndices reprodutivos, tempo mdio para descida dos testculos, separao prepucial, abertura do canal vaginal, dia do primeiro estro, regularidade de ciclo estral, massa de rgos sexuais (epiddimo, testculos) e glndulas sexuais acessrias (prstata e vescula seminal), produo espermtica diria, nmero de espermatozides e trnsito espermtico. Os resultados mostram que vrios alimentos apresentam risco txico devido a presena de resduos de pesticidas em nveis acima dos permitidos pela legislao. No protocolo experimental, os resultados revelam que a exposio mistura dos trs pesticidas foi capaz de induzir alterao no sistema reprodutivo masculino da prognie em doses que no causam toxicidade materna. Porm, este resultado isolado no mostrou ser um efeito adverso capaz de interferir no sistema reprodutivo. Assim, a constatao da problemtica do uso irregular e algumas vezes abusivo e desnecessrio, mostra a necessidade de melhorias na fiscalizao e na prtica agrcola e continuidade de trabalhos como o PARA. Palavras-chave: mistura; pesticidas; carbaril; metamidofs; lambda-cialotrina; toxicidade reprodutiva

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ABSTRACT The use of pesticides in the process of agricultural production and the consequent contamination of food has been the target of constant concern in the scope of the public health. The use of pesticides is still the main strategy for the combat and prevention of agricultural plagues that impair productivity. Some pesticides are capable of interfering with the endocrine system, being able to produce reproductive disorders. Numerous pesticides are suspicion of acting as endocrine system disruptors. The exposition of the population to the pesticides can be attributed to the food consumption of the farming productions and directly by contact in the case of the agricultural applicators and manipulators, or still to the indirect contact, as in the case of the populations that are near from pesticides application for vectors of endemic disease control. In Brazil the Programa de Analise de Residuos de Agrotxicos (PARA) was developed to evaluate the food quality regarding the residues present. The objective of this research was to evaluate the chronic risk of populations exposed to pesticide residues in food. For this, rats were exposed to pesticides mixture and reproductive parameters were evaluated. The mixture dose was based in the Acceptable Daily Ingestion (ADI) and 100 times this value. Pregnant Wistar rats had been treated daily (oral gavage), from the gestational day six to postnatal day 21 (weaning) with the association of commercial carbaryl (CB), lambda-cyhalothrin (LB) and metamidophos (MF). The dose corresponding to the IDA was: CB 0.003 mg/kg; MF 0.004 mg/kg LB 0.05 mg/kg. The progenitors and the progeny were evaluated about maternal toxicity, general and sexual development of the progeny, weight gain, relative organs weight (liver and kidneys), reproductive indexes, testis descent, prepucial separation, vaginal opening, first estrous detection, estrous cycle regularity, organs weight (epididymis and testis) and accessory glands weight (prostate and seminal vesicle), daily sperm production, sperm number and the epidydimal sperm transit. Some food presented toxic risk due the pesticide residues in levels above of the allowed by the legislation. The results evidence that the exposition to the pesticides mixture induced alteration in the male progeny reproductive system in doses that do not cause maternal toxicity. However, this isolated data do not mean an adverse effect capable of interfering with reproduction. Thus, the problematic of the irregular and abusive pesticides use, shows the need of supervise improvement and better agricultural practice, as well the continuity of governmental researches as the PARA. Key Words: mixture; pesticides; carbaryl; metamidophos; lambda-cyhalothrin; reproductive toxicity.

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1 INTRODUO

O uso de agrotxicos no processo de produo agrcola e a conseqente contaminao dos alimentos tm sido alvo de constante preocupao no mbito da sade pblica (ANVISA, 2003a). O uso de pesticidas ainda a principal estratgia para o combate e preveno de pragas agrcolas, buscando maior produtividade com menores custos. Depois da Segunda Guerra Mundial, com o desenvolvimento tecnolgico e industrial ocorrido no sculo XX, houve o crescimento da produo dos pesticidas. A intensificao da explorao agrcola e pecuria, a partir de 1960, conduziu ao aumento na sua produo e utilizao no combate a pragas de lavoura (ECOBICHON, 1996). O Brasil tem grande parte da sua economia baseada na atividade agrcola, sendo o quarto mercado de pesticidas no mundo. Os pesticidas so potencialmente txicos ao homem, mas devido sua importncia econmica, o seu uso muito difundido e os resduos de pesticidas so encontrados nos alimentos, gua e meio ambiente (CALDAS e SOUZA, 2000; PRESIBELLA, 2004). O alimento seguro significa sade e qualidade de vida. A garantia de alimento livre de contaminantes essencial para a preveno de doenas, principalmente nos pases em desenvolvimento, como o Brasil, onde parte da populao enfrenta problemas de carncia nutricional e de acesso ao sistema pblico de sade (CALDAS e SOUZA, 2000). Segundo a Organizao Mundial de Sade (WORLD HELTH ORGANIZATION - WHO), ocorrem, a cada ano, de 30 mil a 40 mil mortes devido a intoxicaes por agrotxicos. Os casos de envenenamento por ingesto ou inalao tambm so altos e chegam a meio milho de pessoas (SANTAMARTA, 2001). A exposio de pessoas aos agrotxicos pode ser atribuda ao consumo de alimentos oriundos da produo agropecuria, ao contato direto, no caso dos aplicadores rurais e ou manipuladores, ou ainda ao contato indireto, como no caso das populaes que esto sujeitas aplicao de agrotxicos para controle de vetores das endemias (ANVISA, 2003a).

Um grande nmero de substncias artificiais foi colocado no meio ambiente, e assim como algumas substncias naturais, tem o potencial de interferirem com o sistema endcrino. As substncias que interferem negativamente com a regulao hormonal so designadas como desreguladoras endcrinas. Estas substncias, entre elas substncias persistentes, bioacumulutativas e organohalgenas, podem acarretar problemas no desenvolvimento, reproduo e comportamento sexual de animais e seres humanos. O organismo imaturo mais sensvel, pois apresenta menor capacidade de metabolizao e eliminao de substncias, e quando expostos a estas substncias, onde se incluem alguns agrotxicos, podem afetar no sistema endcrino (AZIZ e cols., 2001). Muitas populaes de animais j foram afetadas por substncias que tem o potencial de serem desreguladoras endcrinas. Entre as repercusses, figuram a disfuno da tireide em aves e peixes; a diminuio da fertilidade em aves, peixes, crustceos e mamferos; a diminuio do sucesso da incubao em aves, peixes e tartarugas; graves deformidades de nascimento em aves, peixes e tartarugas; anormalidades metablicas em aves, peixes e mamferos; entre outras. Existem tambm vrios trabalhos de avaliao de risco txico de pesticidas no homem e toxicidade (hepatotoxicidade, carcinognese, mutao) de pesticidas em ratos, peixes, entre outros (ANDERSEN e cols, 2002; CALDAS e SOUZA, 2000; CASTILLO e cols., 2000; IYANIWURA, 1989; HEINDEL e cols., 1994; KLINGERMAN e cols., 1993; ITO e cols., 1994, 1995 e 1996; WANG e cols., 1987). Como resultados, podem ser citados: masculinizao de caramujos fmeas, micropenia em crocodilos, reverso sexual em peixes, alterao do comportamendo de aves com reduo da quantidade de ovos eclodidos e debilidade da ninhada (GRAY, 1998; BAKER, 2001). Anormalidades ligadas ao sistema reprodutivo, em seres humanos tambm foram observadas: aumento do nmero de casos de criptorquidismo, hipospdia, abortos, reduo da libido, prejuzos na produo espermtica, impotncia, assim como maior incidncia de tumores de testculo, prstata e mama (SONNENSCHEIN e SOTO, 1998; BAKER, 2001; SULTAN e cols., 2001; GARRY e cols., 2002).

A presena de resduos destes compostos na gua e alimentos leva a uma exposio crnica a vrias substncias qumicas. Estudos realizados com trabalhadores ou animais demonstraram relao entre a exposio crnica a agrotxicos e efeitos adversos sade, com alteraes neurolgicas, reprodutivas, imunes ou metablicas (DALSENTER e cols., 1997; SONNENSCHEIN e SOTO, 1998; KOIFMAN e cols., 2002). A populao brasileira est em constante exposio associao de pesticidas atravs da alimentao, pois um dos pases que mais utiliza estes defensivos na cultura agrcola. Com esse enfoque achamos de real importncia a avaliao do risco txico ao qual essa populao est exposta a resduos de pesticidas. Assim sendo, este trabalho tem o objetivo de avaliar o risco txico da ingesto de resduos na alimentao e a possvel toxicidade reprodutiva em ratos expostos aos pesticidas carbaril, medamidofs e lambda-cialotrina, suspeitos de interferirem no sistema endcrino.

2 REVISO BIBLIOGRFICA

A populao brasileira e mundial constantemente exposta aos pesticidas, e sabe-se que estes compostos so considerados potencialmente txicos ao homem, podendo causar efeitos adversos ao sistema nervoso central e perifrico, ter ao imunodepressora ou ser cancergeno, entre outros. Ainda desconhecido o risco para a sade com a ingesto de pesticidas por meio da dieta alimentar. A caracterizao de risco ser to melhor quanto mais prximos os dados estiverem de uma situao real de exposio. A avaliao da exposio aguda e crnica a resduos de pesticidas j faz parte do processo de registro de pesticidas em vrios governos. (CALDAS e SOUZA, 2000). A Agncia Nacional de Vigilncia Sanitria do Ministrio da Sade (ANVISA/MS), o Instituto Nacional de Controle de Qualidade em Sade da Fundao Oswaldo Cruz do Ministrio da Sade (INCQS/FIOCRUZ/MS) e a Secretaria de Sade do Paran iniciaram em 2001 o Programa de Anlise de Resduos de Agrotxicos (PARA) em alimentos. Este programa visa o rastreamento de substncias utilizadas fora do padro legislativo proposto pela prpria ANVISA (ANVISA, 2003a). O PARA foi desenvolvido, em nvel nacional, como um programa para avaliar a qualidade dos alimentos, frente ao uso de agrotxicos. Esse era um antigo anseio das autoridades sanitrias, nas esferas Federal, Estadual e Municipal, objetivando principalmente garantir a segurana do consumidor em relao aos nveis de resduos de agrotxicos em alimentos. O resultado dessa articulao alcanado entre junho de 2001 e junho de 2003, foi a efetivao da metodologia que conduziu aos resultados e s propostas de mitigao dos problemas. Os resultados da pesquisa de 96 ingredientes ativos em nove culturas, citando, alface, banana, batata, cenoura, laranja, ma, mamo, morango e tomate, foram apresentados no relatrio anual relativo ao perodo entre julho de 2001 e dezembro de 2003 (ANVISA, 2005).

ANVISA fornece, atravs de seu site na internet (http://www.anvisa.org.br), o ndice monogrfico que traz os principais dados de cada pesticida pesquisado, e consta de vrios aspectos qumicos e toxicolgicos importantes para a avaliao de seu uso. Numerosos agrotxicos figuram entre as substncias qumicas suspeitas de atuarem como desreguladores sobre o sistema endcrino. Alguns estudos com animais indicam que a exposio a substncias qumicas hormonalmente ativas, durante o perodo pr-natal ou na idade adulta, aumenta a vulnerabilidade a tipos de cncer sensveis aos hormnios, como os tumores malignos na mama, prstata, ovrios e tero (SANTAMARTA, 2001). A tabela 1 mostra alguns exemplos de substncias com atividade sobre o sistema endcrino e outros efeitos adversos.
TABELA 1 PRODUTOS FITOFARMACUTICOS COM PROPRIEDADES DE POSSVEL DESREGULAO ENDCRINA EM ESPCIES ANIMAIS (modificado de REYS, 2001). Exemplos Inseticidas e Acaricidas DDT, DDE e DDD Lindano Clorpirifs Deltametrina Dimetoato Carbofurano Amitraz Triclorfom Diclorvos Piretrinas Atrazina Linuram Vinclozolina Carbendazim/ Benomil Procimidona Penconazol Procloraz Propiconazol Tridemorfs Epoxiconazol + + + + + + + + + + + + + + Cistos ovarianos Tumores do ovrio Tumores mamrios Sindrome Down Sistema imunolgico Estrognicos + Anti-andrognicos + + Teratognico Neurotxico Antitiroideano Funo placentria Antitiroideano Protiroideano Outros efeitos

Herbicidas Fungicidas

Teratognico Teratognico Antitiroideano Anti-hipofisrio

A diferenciao e desenvolvimento do sistema reprodutivo so dependentes da ao de hormnios. Assim sendo, substncias com potencial de afetar o sistema endcrino podem interferir na produo ou ao de hormnios comprometendo a

identidade sexual, fertilidade ou comportamento. Qualquer substncia exgena, natural ou sinttica, que interfira na sntese, secreo, transporte, ligao, ao ou eliminao dos hormnios naturais chamada de desregulador endcrino (EPA, 1997). A lambda-cialotrina, o metamidofs e o carbaril so listados como possveis desreguladores endcrinos pela PESTICIDE ACTION NETWORK UK (PAN-UK, 2001), por RATNASOORYA e cols.(2002) e por GETTLICH (2003). Estes compostos podem atuar como antagonistas efetivos de um hormnio, ligando-se a um stio de ao e impedindo a ligao do hormnio natural, ou como agonistas, onde a ligao do desregulador endcrino a um stio especfico desencadeia a mesma ao que ocorreria com a ligao do hormnio natural. Estas substncias podem interferir com a sntese do hormnio natural, ou com a remoo do hormnio natural da circulao. Ainda no foi elucidada a possvel ao desreguladora endcrina da lambda-cialotrina, porm a ao estrognica de certos piretrides como a sumetrina, o fenvalerato e a aletrina foram testadas in vitro utilizando linhagens de clulas de carcinoma mamrio humano (MCF-7) para a induo do gene pS2 que sensvel a estrgenos (GO e cols., 1999). Os piretrides, os organofosforados e os carbamatos so inseticidas lipoflicos amplamente utilizados no combate a pragas de animais e plantas. A exposio a eles se d pelos alimentos na forma de resduos e ainda podem ser absorvidos pela pele e atravs da inalao. Suas caractersticas de solubilidade facilitam a excreo da substncia pelo leite e a passagem pela barreira placentria, favorecendo a exposio ao pesticida no perodo perinatal. Assim a exposio do neonato ao inseticida, em concentraes que no revelam sinais clnicos de intoxicao sistmica materna, pode causar danos no indivduo em desenvolvimento. No foram encontrados relatos cientficos envolvendo a exposio crnica, pela via oral no perodo perinatal, aos inseticidas lambda-cialotrina, carbaril e metamidofs, nas doses relativas IDA (Ingesto Diria Aceitvel), que ocasionasse disfunes reprodutivas em ratos.

O carbaril um inseticida metilcarbamato de naftila de classe toxicolgica II segundo a WORLD HEALTH ORGANIZATION - WHO (2000-2002) e segundo a AGNCIA NACIONAL DE VIGILNCIA SANITRIA ANVISA (2003b), ou

moderadamente txico. O mecanismo de ao txica do carbaril atravs da inibio da enzima aceticolinesterase. Os sinais de intoxicao aguda so os mesmos observados com o metamidofs. O carbaril tambm age em outras enzimas alm das colinesterases, como a desidrogenase ltica e as serinas esterases (COX, 1993). A Ingesto Diria Aceitvel (IDA) de resduos de carbaril de 0,003 mg/kg (ANVISA, 2003b) e a dose letal para 50% (DL50) de uma amostra de ratos expostos pela via oral do carbaril de 255 mg/kg (PFS, 1994-2004). A lambda-cialotrina uma mistura de dois ismeros da cialotrina. um inseticida piretride sinttico de segunda gerao, obtido pela adio de um grupo ciandrico ao carbono alfa do anel benzlico. Essa adio aumenta a atividade inseticida do piretride. A lambda-cialotrina apresenta classe toxicolgica II segundo a WORLD HEALTH ORGANIZATION - WHO (2000-2002) e classe toxicolgica III segundo a AGNCIA NACIONAL DE VIGILNCIA SANITRIA - ANVISA (2003b), ou seja, de toxicidade mdia. muito utilizada no combate a insetos em lavouras (PIZZAIA JUNIOR, 2003). Uma formulao do produto microencapsulada (Fortis) divulgada para combater insetos como pulgas, carrapatos e formigas; e aracndeos como a aranha-marrom (Loxosceles sp.) e vrias espcies de escorpies (SYNGENTA, 2004 e HOF e cols., 1995). A labda-cialotrina age no mecanismo de comporta dos canais de Na+ da membrana de axnios e podem inibir a ATPase, assim, tem como resultado final, a diminuio do potencial de ao de impulsos nervosos repetitivos e despolarizao. Seu mecanismo de ao atravs da interao com a subunidade alfa do canal de sdio nos neurnios. Essa interao leva ao retardo no fechamento dos canais de sdio e hiperexcitao de todo o sistema nervoso do inseto (CAGE e cols., 1998).

O metabolismo da lambda-cialotrina heptico, atravs de enzimas do complexo citocromo P450. O composto sofre hidrlise do grupo ster, hidroxilao e conjugao com o cido carboxlico. A principal via de excreo a renal. De acordo com a WORLD HEALTH ORGANIZATION - WHO (2000-2002), a ASSOCIAZIONE AMBIENTE E LAVORO - AMBLAV (2000) e a NATIONAL PESTICIDE TELECOMMUNICATIONS NETWORK - NPTN (2001) a DL50 para ratos espostos pela via oral em ratos do inseticida lambda-cialotrina de 79 mg/kg para machos e de 56 mg/kg para fmeas. Pela via cutnea de 632 mg/kg para machos e 696 mg/kg para fmeas. As doses variam conforme a proporo de ismeros na formulao, sendo os trans mais txicos. A IDA da lambda-cialotrina de 0,05 mg/kg (ANVISA, 2003b). O metamidofs um inseticida organofosforado do tipo fosforotioamidato de classe toxicolgica Ib (altamente txica) segundo WHO (2000-2002) e classe toxicolgica I (altamente txica) segundo a ANVISA (2003b). A DL50 observada em ratos expostos pela via oral em ratos de 15,6 mg/kg para machos e de 13 mg/kg para fmeas (EPA, 2000). Os organofosforados foram desenvolvidos em 1930, na Alemanha. A ao txica de grande parte deles, incluindo o metamidofs, baseada na inibio da enzima acetilcolinesterase, A inibio ocorre por ligao covalente ao sitio estersico da enzima e estabilizada pela formao de nion superxido decorrente da reao. Os sinais de intoxicao aguda esto associados inibio da colinesterase, ou seja, efeitos colinrgicos exacerbados. A toxicidade crnica relacionada a efeitos neurotxicos (WOODS, 1991-1999). A IDA do metamidofs de 0,004 mg/kg (ANVISA, 2003b).

3 OBJETIVOS

3.1 OBJETIVO GERAL

Avaliar o risco txico do uso de pesticidas na alimentao e a possvel toxicidade reprodutiva em ratos expostos a diferentes doses de misturas de pesticidas.

3.2 OBJETIVOS ESPECFICOS

a) Comparar os valores de LMR com os valores residuais determinados pelo relatrio do PARA. b) Comparar os valores de IDA dos pesticidas com os valores consumidos pela populao, tendo como base 60 Kg como peso mdio da populao. c) Comparar a quantidade de pesticidas diferentes encontrados em uma mesma cultura na forma de resduos e seu uso irregular. d) Avaliar a taxa de risco crnico de populaes expostas aos pesticidas, pela ingesto de alimentos contaminados. e) Avaliar a toxicidade reprodutiva em ratas expostas durante a prenhez e lactao, mistura de pesticidas carbaril, lambda-cialotrina e metamidofs, nas doses correspondentes IDA e IDAx100. f) Avaliar a toxicidade reprodutiva em descendentes de ratas expostas durante a prenhez e lactao, mistura de pesticidas carbaril, lambda-cialotrina e metamidofs, nas doses correspondentes IDA e IDAx100.

4 MATERIAL E MTODOS

4.1 RESDUOS DE PESTICIDAS NA ALIMENTAO E RISCO TXICO

Para a realizao deste trabalho foram comparados dados do relatrio do PARA realizado no perodo de 2001/02 e 2003 e dados da tabela de consumo alimentar, com exceo do morango, do qual no foi encontrada pesquisa estatstica de consumo. Este estudo foi feito com o uso da Pesquisa de Oramentos Familiares do IBGE (POF/IBGE) de 1995-1996, pois a nova pesquisa prevista para 2002-2003 ainda no estava acessvel durante sua execuo (IBGE, 2003). Os dados do PARA e da POF/IBGE encontram-se nas pginas eletrnicas oficiais da ANVISA e IBGE, respectivamente. O estudo comparativo entre os dados de 2001/02 e 2003 do

PARA envolve variveis como o Limite Mximo de Resduos (LMR), as concentraes de resduos, a quantidade de pesticidas utilizados em uma mesma cultura, o uso autorizado ou no, a IDA e os valores consumidos de pesticidas, tendo como base 60 kg como de peso mdio da populao. A observao do consumo alimentar anual e a quantidade de resduos presente em cada cultura, permitiu calcular a Ingesto Diria de Resduos (IDR) pra cada pesticida e compar-la com a IDA. A IDR foi presumida como sendo a ingesto diria real de pesticidas per capita quando cruzados os dados da POF/IBGE e os relatrios do PARA/ANVISA.

4.1.1 PRESENA DE RESDUOS DE PESTICIDAS

Durante os perodos de 2001/02 e 2003 foi comparada a presena ou no de resduos de pesticidas (96 diferentes substncias) em nove culturas (2647 amostras). Para a realizao desta comparao foram utilizados os dados do relatrio do PARA apresentado em 2004 (ANVISA, 2005).

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4.1.2 PESTICIDAS COM RESDUOS ACIMA DO LMR

Os pesticidas detectados em forma de resduos foram tabelados em dois grupos: acima e dentro do LMR. Os pesticidas sem limite mximo estabelecido foram includos no grupo acima do limite, considerando os seus LMR como sendo zero. O LMR fornecido na unidade de ppm (partes por milho).

4.1.3 PESTICIDAS COM USO NO AUTORIZADO

Os pesticidas encontrados como resduos nas culturas foram tabulados em dois grupos: pesticidas com o uso autorizado e no autorizado.

4.1.4 CARACTERIZAO DE RISCO (%IDA)

O clculo da Caracterizao de Risco (%IDA) foi feito com base na IDR e na IDA, atravs de adaptao da frmula usada por (CALDAS e SOUZA, 2000). O pesticida foi considerado de potencial risco toxicolgico quando a %IDA foi acima de 100. A IDR foi calculada usando os maiores valores de resduos de pesticidas encontrados no relatrio do PARA e os dados de consumo alimentar (ANVISA, 2003a; COLLUCCI, 2003; IBGE, 2003). A IDA fornecida em mg/kg de peso corpreo/dia

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4.1.4.1 FRMULAS

IDR (mg) = consumo anual de resduos (mg) /365 (dias) Consumo anual de resduos (mg) = resduo (ppm) x consumo anual de alimentos (kg) %IDA = IDR x 100 / IDA x peso corpreo (60 kg). * *A frmula foi adaptada de %IDA = IDTM x 100 / IDA x peso corpreo (60 kg), onde a IDTM Ingesto Diria Terica Mxima (CALDAS e SOUZA, 2000).

4.1.5 PRESENA DE DIFERENTES PESTICIDAS NA MESMA CULTURA

Os pesticidas residuais encontrados foram tabulados quanto a sua presena em cada uma das culturas. Foram formados ento nove grupos: alface, banana, batata, cenoura, laranja, ma, mamo, morango e tomate.

4.1.6

PESTICIDAS

LISTADOS

COMO

POSSVEIS

DESREGULADORES

ENDCRINOS

Atravs da anlise em diversas listas de substncias com possvel atividade endcrina foram pesquisados os pesticidas que estavam inclusos nestas listas.

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4.2 TOXICIDADE REPRODUTIVA EM RATOS WISTAR EXPOSTOS MISTURA DE PESTICIDAS

A partir da adaptao de um protocolo proposto pelo EDSTAC (Endocrine Disruptors Screening and Testing Advisor Committee), o Ensaio de Exposio Gestacional/Lactacional (EPA, 2002), que detecta efeitos reprodutivos e de

desenvolvimento, mediados por alteraes nas vias estrognica, andrognica e tireoideana, que foi utilizado no presente estudo. O protocolo desenvolvido est apresentado esquematicamente na figura 1.

4.2.1 ANIMAIS

Neste estudo foram utilizados 60 Rattus norvegicus (45 fmeas e 15 machos), linhagem Wistar, criados e mantidos no biotrio do Setor de Cincias Biolgicas da Universidade Federal do Paran. Os animais foram mantidos em salas com temperatura controlada (22 C 2), obedecendo ao ciclo claro/escuro de 12 horas (luzes acesas das 7 s 19 horas) e recebendo gua e rao ad libitum. Dez dias antes de iniciarem os experimentos, os animais foram desverminados (Basken suspenso: pirentel e oxantel - Knig: duas doses via oral de 0,1 mL/animal).

4.2.2 SUBSTNCIAS PARA TRATAMENTO

Os pesticidas escolhidos foram os que preencheram os critrios em uma lista de classificao de exposio e clculo do risco txico, presena em listas de possveis desreguladores endcrinos, diferentes classes qumicas e disponibilidade das substncias. Os pesticidas foram adquiridos em lojas especializadas, na forma de produto comercial: SEVIN SC (carbaril 480mg/mL), FORTIS 2,5 CS (lambda-

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cialotrina 25mg/mL) e TAMARON 600 BR (metamidofs 600mg/mL). Foi utilizada gua destilada para a diluio dos pesticidas dos grupos teste e como substncia controle. O veculo foi determinado conforme orientao dos fabricantes dos pesticidas, mantidas condies de pH para maior estabilidade da diluio para administrao nos animais.

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FIGURA 1 - ESQUEMA DO PROTOCOLO DESENVOLVIDO

F0

PRENHEZ

LACTAO

De

gavagem
dg0 dg6 dpn1 dpn21

F0 = Progenitoras A = Acasalamento N = Nascimento dos filhotes dg = Dia de prenhez dpn = Dia ps-natal De = Desmame F1 = 1. Gerao de descendentes

F0

Massa das progenitoras Durao da prenhez Perdas ps-implantaes Massa de rgos: fgado e rins Tamanho das ninhadas Razo sexual ndice de nascimento Massa dos descendentes Viabilidade dos descendentes Desenvolvimento geral dos descendentes machos e fmeas: desenvolvimento ponderal descolamento das orelhas aparecimento dos plos abertura dos olhos

F 1

Desenvolvimento ponderal Descida bilateral dos testculos Separao prepucial completa Contagem de espermatozides Produo espermtica diria Trnsito espermtico Massa: testculos, epiddimos, prstata, vescula seminal, fgado e rins Desenvolvimento ponderal Abertura do canal vaginal Dia do primeiro estro Regularidade do ciclo estral Massa: fgado e rins

F 1

FONTE: Esquema baseado em EPA (2002).

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4.2.3 ACASALAMENTO

Ratas Wistar (n = 45) foram acasaladas com ratos machos adultos durante a fase escura do ciclo de luz (12 horas), na proporo de um macho para trs fmeas. Foram feitos esfregaos vaginais dirios, de cada fmea, para verificar a presena de espermatozides e confirmar a cpula, sendo que o dia de deteco de espermatozides no esfregao vaginal foi considerado como dia zero da prenhez. O esfregao foi realizado com o auxlio de uma micropipeta, atravs da lavagem vaginal com 50 L de gua destilada e posterior avaliao, a fresco, em microscopia tica (aumento 200x). Os acasalamentos foram repetidos diariamente at a obteno de um nmero suficiente de progenitoras para a realizao dos experimentos (15 fmeas por grupo). As fmeas prenhas foram mantidas em caixas coletivas de polipropileno (414 x 344 x 168 mm), em nmero de trs por caixa (uma de cada grupo), e separadas individualmente no nascimento dos filhotes. O dia do parto foi designado como primeiro dia ps-natal, e os filhotes foram desmamados no 21 dia de lactao (dpn21).

4.2.4 DOSES E TRATAMENTO

As fmeas prenhas obtidas durante os acasalamentos foram separadas randomicamente em trs grupos. Foram usados grupos experimentais com 15 animais cada, sendo um para o controle negativo usando o veculo, e dois grupos tratados com a mistura dos pesticidas. Os dois grupos de misturas foram tratados diariamente por via oral (trs gavagem), com duas diferentes doses da mistura de pesticidas do sexto dia de prenhez (dg6) at o 21 dia de lactao (dpn21=desmame). O tratamento foi feito com as drogas isoladas e misturadas in vivo. O grupo controle foi tratado apenas com o veculo (gua destilada), mas com trs gavagens dirias. As doses dos pesticidas foram baseadas na IDA, que representa a dose diria aceitvel para humanos e na IDAx100 (ANVISA, 2003b; NPIC 1997).

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As doses utilizadas foram:

Carbaril (SEVIN 480 SC) IDA = 0,003 mg/kg IDAx100 =0,3 mg/kg

Lambda-cialotrina (FORTIS 2,5 CS) IDA = 0,05 mg/kg IDAx100 = 5,0 mg/kg

Metamidofs (TAMARON 600 BR) IDA = 0,004 mg/kg IDAx100 =0,4 mg/kg

4.2.5 PRENHEZ E LACTAO

O dia em que foram encontrados os espermatozides no esfregao vaginal, inferindo prenhez, foi considerado dia zero da prenhez (dg0). As fmeas prenhas foram mantidas em trs por caixa (uma de cada grupo de tratamento) at o 18 dia de prenhez (dg 18), quando foram separadas individualmente. A diferenciao dos animais nas caixas foi feita atravs de marcas coloridas na base da cauda, utilizando canetas tipo marcador para retro projetor. O tratamento das fmeas prenhas foi iniciado no sexto dia de prenhez (dg 6) evitando influncia dos pesticidas na implantao do embrio no tero (perdas psimplantaes), que em ratos acontece cinco a seis dias aps a fecundao (BERNARDI et al., 2002). O dia do parto foi chamado de primeiro dia ps-natal (dpn1). As fmeas que estavam parindo no horrio da administrao dos pesticidas, no foram tratadas no dia. O tratamento persistiu at o dia 21 dia de lactao (dpn21), quando as progenitoras foram separadas dos filhotes (desmame). No sexto dia ps-natal (dpn6) foi feita a sexagem dos filhotes e mantidos todos na mesma caixa com a progenitora. A

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sexagem foi feita pela visualizao da distncia ano-genital, sendo maior nos machos em relao s fmeas. A massa corporal de cada progenitora foi registrada a cada dia desde o incio da prenhez (dg1) at o fim da lactao (dpn21), sendo avaliada a presena de algum sinal de toxicidade (perda de peso, piloereo, tremores, salivao, diarria, convulses, etc). A partir do 18 dia de prenhez (dg18) cada fmea foi examinada uma vez ao dia (incio da manh) para averiguar o nascimento dos filhotes, registrando o tempo de prenhez. Para obteno de dados da prenhez e lactao foram registrados: o nmero de filhotes nascidos, a proporo de filhotes nascidos vivos (ndice de nascimento), a sobrevivncia durante a lactao (ndices de viabilidade e desmame) e a proporo entre machos e fmeas (razo sexual). No dia do desmame, as progenitoras foram sacrificadas por decapitao. Foram tambm retirados os seus rgos (fgado e rins) para controle da massa e tero para contagem do nmero de implantaes uterinas e registro de perdas ps-implantao. As progenitoras que no pariram at o considerado 26 dia de prenhez foram sacrificadas e feita avaliao do tero para presena de implantaes uterinas. As variveis citadas acima foram determinadas conforme recomendado pela EPA (1996).

4.2.5.1 FRMULAS

a) ndice de nascimento (%) = n de filhotes nascidos vivos n de filhotes nascidos

(x 100)

b) ndice de viabilidade dpn 4 (%) = n de filhotes vivos no dpn 4 (x100) n de filhotes nascidos vivos c) ndice de desmame (%) = n de filhotes vivos no desmame (x 100) n de filhotes nascidos vivos d) razo sexo = n de filhotes machos n de filhotes fmeas

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e) perdas ps-implantaes(%) = nimplantaes - n filhotes nascidos vivos (x 100) n de implantaes

4.2.6 DESCENDENTES NO PERODO LACTACIONAL

A primeira gerao de descendentes foi avaliada sem distino entre os machos e as fmeas. Durante a lactao, a massa corporal de cada filhote foi registrada nos dias 1, 7, 14 e 21 ps-natal. Para as variveis de desenvolvimento geral foram feitas as seguintes avaliaes: tamanho das ninhadas, massa dos filhotes ao nascer e ao desmame, tempo (dias) para descolamento bilateral dos pavilhes auriculares, surgimento de plos e abertura bilateral dos olhos.

4.2.7 AVALIAO DOS DESCENDENTES MASCULINOS

4.2.7.1 DESENVOLVIMENTO PONDERAL

O desenvolvimento ponderal foi feito tomando-se a massa dos descendentes nos dias 1, 7, 14 e 21 aps o nascimento.

4.2.7.2 DESCIDA BILATERAL DOS TESTCULOS

Os descendentes machos foram avaliados quanto ao momento da descida bilateral dos testculos bolsa escrotal, o qual foi investigado atravs da palpao diria da bolsa escrotal a partir do 14 dia ps-natal e subseqentemente at que todos os descendentes apresentaram essa caracterstica.

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4.2.7.3 SEPARAO PREPUCIAL COMPLETA

A separao prepucial foi investigada diariamente a partir do 33 dia ps-natal, atravs da retrao manual do prepcio, at que a separao prepucial estivesse completa em todos os descendentes.

4.2.7.4 VARIVEIS REPRODUTIVAS

O sacrifcio para a investigao das variveis reprodutivas nesses animais foi realizado quando os ratos estavam em idade adulta (110 20 dias). Os animais foram sacrificados e avaliados quanto aos seguintes parmetros: massa relativa dos testculos, epiddimos, glndulas sexuais acessrias (prstata e vescula seminal), fgado e rins; produo espermtica diria; contagem de espermatozides na cauda do epiddimo e tempo de trnsito espermtico na cauda do epiddimo. a) Massa relativa de rgos Foram determinados as massas absolutas e relativas (massa absoluta do rgo x 100/massa corporal) dos testculos, epiddimos, prstata, vescula seminal (com glndulas coaguladoras), fgado e rins. Para rgos pares (testculos, epiddimos e rins) foi utilizada mdia entre os lados esquerdo e direito. A retirada e aferio das massas dos rgos foram feitas logo aps o sacrifcio dos animais por decapitao. Os testculos foram aferidos sem a tnica albulgnea, a prstata foi aferida sem a cpsula prosttica enquanto a aferio da vescula seminal foi realizada aps a retirada do lquido seminal por perfurao e raspagem. b) Produo espermtica diria, contagem de espermatozides na cauda do epiddimo e tempo de trnsito espermtico - Aps a remoo da tnica albugnea, cada testculo foi homogeneizado em 10 mL de cloreto de sdio 0,9% (salina) contendo 0,5% de Triton X-100 em homogeneizador de tecidos por 1 minuto. O homogeneizado foi diludo 10 vezes em salina para a contagem microscpica do nmero de espermtides resistentes a homogeneizao (espermtides nos estgios 17 a 19), em cmara hemocitomtrica de Brker. O nmero de espermtides por animal, obtido pela soma das contagens do testculo esquerdo e direito, foi dividido por 6,1 dias para a converso

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em produo espermtica diria. Esse divisor (6,1) corresponde ao nmero de dias do epitlio seminfero em que as espermtides nos estgios 17 a 19 esto presentes. Para a contagem do nmero de espermatozides, as caudas dos epiddimos foram cortadas em pequenos pedaos, homogeneizadas e processadas da mesma forma que os testculos. O tempo de trnsito espermtico na cauda do epiddimo foi obtido atravs diviso do nmero de espermatozides pela produo espermtica diria.

4.2.8 AVALIAO DAS DESCENDENTES FEMININAS

4.2.8.1 DESENVOLVIMENTO PONDERAL

O desenvolvimento ponderal foi feito tomando-se a massa corporal dos descendentes nos dias 1, 7, 14 e 21 aps o nascimento.

4.2.8.2 ABERTURA DO CANAL VAGINAL

Para cada grupo de tratamento, todas as descendentes fmeas foram separadas randomicamente, no dia do desmame. A partir do 30 dia ps-natal, as descendentes foram examinadas diariamente para registro do dia da completa abertura do canal vaginal.

4.2.8.3 PRIMEIRO ESTRO E REGULARIDADE DO CICLO ESTRAL

A partir do dia da abertura completa do canal vaginal, foi realizado, diariamente, o esfregao vaginal, para a observao, em microscopia tica (aumento de 200x), dos tipos celulares do epitlio vaginal, para o registro do dia do primeiro estro e avaliao da regularidade do ciclo estral, observando o tempo (dias) entre dois estros consecutivos durante quatro estros (trs ciclos completos), em at no mximo 15 dias. Foram consideradas fmeas regulares, aquelas que apresentaram 3 ou 4 estros durante os 15 dias de avaliao.

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4.2.8.4 VARIVEIS REPRODUTIVAS

As descendentes fmeas foram sacrificadas por decapitao, no dia do 4 estro (77 7) ou aps o 15 dias de avaliao, sendo ento retirados fgado e rins. Todos os rgos foram dissecados cuidadosamente para a retirada da gordura adjacente e registradas suas massas, sendo reportado o valor absoluto e em relao massa corporal. Para os rgos pares (rins) foi reportada a mdia das massas.

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4.3 ANLISE ESTATSTICA

As variveis com medidas intervalares e que apresentaram distribuio normal foram analisadas atravs de anlise de varincia (ANOVA). As diferenas entre os grupos foram determinadas pelos testes de Bonferroni. As variveis com medidas ordinais ou aquelas que no apresentaram distribuio normal ou homogeneidade entre as varincias foram analisadas atravs do teste Kruskal-Wallis e as diferenas entre os grupos foram determinadas pelo teste de Dunn. As variveis indicadas como ndices ou percentuais foram analisadas pelos testes de qui-quadrado, com exceo das massas relativas de rgos, que tambm foram analisadas atravs da ANOVA seguido de Bonferroni. O nvel de significncia estatstica utilizado foi de 5% (P < 0,05). A massa corporal dos filhotes e as variveis de desenvolvimento geral e sexual dos filhotes foram analisadas utilizando as ninhadas como unidades estatsticas. O ganho de massa das progenitoras durante a prenhez e a lactao foi analisado por anlise de varincia de uma via. Os dados da prenhez (tamanho das ninhadas, durao da prenhez e nmero de implantaes uterinas), algumas variveis de avaliao da idade adulta (tempo de trnsito espermtico) e as variveis de desenvolvimento geral e sexual das prognies foram analisados pelo teste de Kruskal-Wallis. Variveis como massa corporal e de rgos, produo espermtica diria, contagem de espermatozides na cauda do epiddimo foram analisadas por anlise de varincia de uma via. Os ndices de nascimento, viabilidade e desmame, bem como as perdas pr e ps-implantaes e a razo sexual foram analisados pelo teste do qui-quadrado. Para a anlise estatstica e a confeco dos grficos foi utilizado o programa Graphpad Prism verso 3.0.

5 RESULTADOS

5.1 RESDUOS DE PESTICIDAS NA ALIMENTAO E RISCO TXICO

5.1.1 PRESENA DE RESDUOS DE PESTICIDAS

Como resultado da pesquisa do PARA, onde foram coletadas amostras de nove culturas, sendo 300 amostras de alface, 231 de banana, 368 de batata, 265 de cenoura, 344 de laranja, 208 de ma, 287 de mamo, 287 de morango e 377 de tomate, foram publicados os seguintes resultados: Foi possvel a anlise de 2647 amostras, sendo 1278 delas no ano de 2001/02 e 1369 amostras em 2003. Nas 2647 amostras analisadas foram encontradas 1321 amostras com resduos, e um total de 2256 resduos detectados. Dentre os resduos detectados, 1536 (68,1%) eram de uso regular e 720 (31,9%) de uso irregular. E entre os pesticidas com uso irregular, 640 (88,9%) eram de uso no autorizado e 80 (11,1%) de uso acima do LMR (ANVISA, 2005). Os dados relatados nos grficos abaixo so relativos aos relatrios do PARA dos anos de 2001/02 e 2003. A anlise da IDR para todos os pesticidas presentes nas culturas mostrou que todos estavam com o consumo abaixo da IDA (para os pesticidas em que a IDA estava publicada pela ANVISA). Dos 96 pesticidas analisados, 36 estavam presentes como resduos em 2001/2002 e 37 em 2003 (grfico 1).

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GRFICO 1 - NMERO DE PESTICIDAS ENCONTRADOS OU NO NA FORMA DE RESDUOS NO ALIMENTO

70 60 no.pesticidas 50 40 30 20 10 0 encontrados 1 no encontrados 2 2001/02 2003

5.1.2 PESTICIDAS COM RESDUOS ACIMA DO LMR Dos 36 pesticidas encontrados como resduos nas culturas, 27 estavam em concentraes acima do LMR permitido e 9 dentro do LMR em 2001/02. Em 2003 foram constatados 23 pesticidas acima do LMR e 14 dentro do LMR (grfico 2).
GRFICO 2 - PRESENA DE PESTICIDAS ACIMA E DENTRO DO LMR NAS CULTURAS PESQUISADAS

50 no.amostras 40 30 20 10 0 1 acim a do LMR 2 dentro do LMR ou indefinido 2001/02 2003

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5.1.3 PESTICIDAS COM USO NO AUTORIZADO Dos 96 pesticidas investigados nas nove culturas, 30 resduos de pesticidas foram encontradas em desacordo com a legislao em 2001 e 32 em 2003 (grfico 3).
GRFICO 3 RESDUOS PRESENTES NAS CULTURAS COM USO AUTORIZADO OU NO

50 40 30 20 10 0 uso autorizado 1 uso no autorizado 2

no. resduos

2001/02 2003

5.1.4 CARACTERIZAO DE RISCO (%IDA)

A caracterizao de risco foi feita atravs do clculo apenas para os pesticidas (36 em 2001 e 37 em 2003) em que foi encontrado o valor de IDA no ndice monogrfico da ANVISA. Em 2001 foram encontradas 19 pesticidas que estavam com %IDA>100 (com risco txico) e 4 com %IDA<100 (sem risco txico). Em 2003, o

nmero de pesticidas com risco txico diminuiu para 16 e o nmero de pesticidas que no apresentam risco txico aumentou para 8 (grfico 4).

27

GRFICO 4 - RESDUOS DE PESTICIDAS COM OU SEM RISCO TXICO (23 AMOSTRAS EM 2001/02 E 24 EM 2003)

50 40 No.Pesticidas 30 20 10 0 1 Com risco 2 Sem Risco

2001/02 2003

5.1.5 - PRESENA DE DIFERENTES PESTICIDAS NA MESMA CULTURA No grfico 5 est demonstrada a proporo de diferentes pesticidas utilizados em uma mesma cultura. Pode-se constatar que h um nmero maior de pesticidas em 2003 nas culturas de banana e morango. Em 8 das 9 culturas pesquisadas foram encontrados resduos de pesticidas. A exceo foi a cultura de cenoura. Em todas as culturas positivas para pesticidas foram detectados mais de um pesticida utilizado.

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GRFICO 5 - NMERO DE PESTICIDAS PRESENTES NAS CULTURAS INVESTIGADAS


30 25 no. pesticidas 20 15 10 5 0 1 2 3 4 5 culturas 6 7 8 9 2001/02 2003

NOTA: 1=alface, 2=banana, 3=batata, 4=cenoura, 5=laranja, 6=ma, 7=mamo, 8=morango, 9=tomate.

5.1.6 PESTICIDAS ENDCRINOS

LISTADOS

COMO

POSSVEIS

DESREGULADORES

Entre os 36 pesticidas presentes como resduos nas culturas pesquisadas em 2001/02, 15 (42%) deles estavam presentes em listas como possveis DE. No ano de 2003, apesar dos pesticidas investigados serem diferentes, o nmero de resduos com indicao de DE no se alterou (16 - 43%) (grfico 6).

29

GRFICO 6 - LISTADOS COMO POSSVEIS DESREGULADORES ENDCRINOS (DE)


50 no. pesticidas 40 30 20 10 0 1 listados com o DE 2 no listados com o DE 2001/02 2003

5.2 TOXICIDADE REPRODUTIVA EM RATOS WISTAR EXPOSTOS MISTURA DE PESTICIDAS

5.2.1 PRENHEZ E LACTAO

As fmeas tratadas com os pesticidas combinados foram avaliadas quanto ao ganho de massa durante o perodo gestacional (prenhez) (grfico 7) e perodo lactacional (grfico 8). A administrao da mistura de pesticidas (carbaril, lambdacialotrina e metamidofs) nas doses avaliadas no afetou o ganho de massa corporal das progenitoras no perodo gestacional, nem interferiu na sua massa durante a lactao.

30

GRFICO 7 - MASSA RELATIVA CORPORAL DURANTE A PRENHEZ

140

Massa Corporal (%)

130 120 110 100 0

CONTROLE (n=15) IDA (n=13) IDA x 100 (n=15)

14

21

Dias
NOTAS: Massa corporal relativa de ratas Wistar durante a prenhez (percentual em relao massa corporal no primeiro dia de prenhez). n = nmero de animais. GRFICO 8 - MASSA RELATIVA CORPORAL DURANTE A LACTAO

120

Massa Corporal (%)

110

CONTROLE (n=9) IDA (n=12) IDA x 100 (n=11)

100

90 0 5 10 15 20 25

Dias
NOTAS: Massa corporal relativa de ratas Wistar durante a lactao (percentual em relao massa corporal no primeiro dia de lactao). n = nmero de animais.

31

5.2.2 MASSA DE RGOS DAS PROGENITORAS

A massa relativa dos rgos (fgado e rins) no foi afetada pelos pesticidas nas doses avaliadas para as ratas progenitoras expostas durante a prenhez e lactao (tabela 2).

TABELA 2 - MASSA RELATIVA DE RGOS DE RATAS EXPOSTAS NA PRENHEZ E LACTAO Variveis / Grupos Controle (n=9) Massa relativa do fgado (%) Massa relativa dos rins (%) Massa corporal absoluta (g) 4,63 0,22 0,33 0,01 280 7,50 IDA (n=12) 4,67 0,16 0,33 0,01 287 6,46 IDAx100 (n=11) 4,67 0,20 0,33 0,01 278 6,60

NOTAS: Massa relativa de rgos (em relao massa corporal) de ratas Wistar expostas mistura dos pesticidas Carbaril, Lambda-cialotrina e Metamidofs, nas doses relativas IDA e IDAx100. Os resultados expressam mdia erro padro. As progenitoras foram utilizadas como unidade estatstica.

Os pesticidas no interferiram na durao da prenhez, no ndice de nascimento, desmame e viabilidade, nas perdas ps-implantaes, no tamanho das ninhadas e na razo de sexo (tabela 3).

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TABELA 3 DADOS DA PRENHEZ E LACTAO Variveis / Grupos Controle (n=9) Tempo de Prenhez (dias) Tamanho das Ninhadas ndice de Nascimento % ndice de Viabilidade % ndice de Desmame % Perdas Ps- implantaes% Razo Sexual (%) (m/f) 22,2 0,42 9,90 3,07 97,2 87,2 87,2 13,2 24,2 57 / 43

IDA (n=12) 22,3 0,45 9,75 2,73 98,6 90,0 89,2 9,1 16,6 46 / 54

IDAx100 (n=13) 22,2 0,58 10,0 1,83 100,0 90,7 69,9 2,5 4,47 54 / 46

NOTAS: Ratas Wistar prenhas tratadas diariamente, via oral, do sexto dia de prenhez ao 21 dia de lactao, com mistura dos pesticidas: carbaril, lambda-cialotrina e metamidofs, nas doses relativas IDA e IDAx100. Os resultados expressos como mdia erro padro ou como percentual, exceto na varivel razo sexual, onde foi apresentado a razo machos/fmeas. As ninhadas foram utilizadas como unidade estatstica, exceto na varivel razo sexual, onde cada filhote foi utilizado como unidade estatstica.

5.2.3 DESCENDENTES NO PERODO LACTACIONAL

A massa corporal ao nascer e ao desmame no diferiu entre os descendentes expostos mistura de pesticidas e os que receberam apenas veculo (grfico 9). O desenvolvimento ponderal dos filhotes durante a lactao no foi afetado com a administrao dos pesticidas (grfico 10), bem como o perodo (dias) para descolamento bilateral das orelhas, aparecimento de plos e abertura bilateral dos olhos (tabela 4).

33

GRFICO 9 - MASSA ABSOLUTA DE FILHOTES NO 1DPN E NO 21DPN

50 40

Massa (g)

CONTROLE (n=8) IDA (n=11) IDA x 100 (n=10)

30 20 10 0 1 21

Dia ps-nascimento
NOTAS: Massa corporal absoluta dos filhotes no 1.dpn e no 21.dpn, expostos durante prenhez e lactao mistura de pesticidas carbaril, lambda-cialotrina e metamidofs nas doses IDA e IDAx100. Os resultados expressos como mdia erro padro. As ninhadas foram utilizadas como unidade estatstica. GRFICO 10 DESENVOLVIMENTO PONDERAL DA PROGNIE

200

Massa (g)

CONTROLE (n=8) IDA (n=11) IDA x 100 (n=10)

100

0 0 10 20 30 40 50

Dias
NOTAS: Ganho de massa dos filhotes de ratas Wistar durante a prenhez, com percentual em relao massa no primeiro dia de prenhez, expostos durante prenhez e lactao mistura de pesticidas carbaril, lambda-cialotrina e metamidofs nas doses IDA e IDAx100 Os resultados expressos como mdia erro padro. As ninhadas foram utilizadas como unidade estatstica.

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TABELA 4 CARACTERSTICAS DO DESENVOLVIMENTO GERAL DE RATOS WISTAR AT O DESMAME Variveis / Grupos Controle (n=8) Descolamento de Orelhas (dias) Aparecimento de Plos (dias) Abertura de Olhos (dias) 3,19 0,54 8,62 0,64 15,3 0,46 IDA (n=11) 3,66 0,95 8,79 0,6 15,3 0,51 IDAx100 (n=10) 3,54 1,47 8,67 0,51 15,0 0,56

NOTAS: Caractersticas do desenvolvimento geral de ratos Wistar expostos mistura dos pesticidas: carbaril, lambda-cialotrina e metamidofs, nas doses relativas IDA e IDAx100. Os resultados expressos como mdia erro padro. As ninhadas foram utilizadas como unidade estatstica.

5.2.4 DESENVOLVIMENTO SEXUAL DOS DESCENDENTES

A exposio mistura dos pesticidas no interferiu nas variveis externas de desenvolvimento sexual dos descendentes masculinos e femininos. Entre os tempos mdios para descida dos testculos bolsa escrotal e para separao prepucial houve diferena significativa apenas na varivel separao prepucial entre o grupo IDA e o grupo Controle. O tempo para a abertura do canal vaginal nas fmeas no foi significativamente diferente entre os grupos testados e o grupo controle (tabela 5).

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TABELA 5 - DESENVOLVIMENTO SEXUAL DOS DESCENDENTES Variveis / Grupos Controle (n=8) Descida de Testculos (dias) Separao Prepucial (dias) Abertura de Canal Vaginal al (dias) 15,7 0,38 34,9 0,35 34,7 0,66 IDA (n=11) 15,7 0,24 33,8 0,22* 35,5 1,51 IDAx100 (n=10) 15,3 0,15 34,2 0,20 35,4 1,37

NOTAS: Perodo (dias) para a descida dos testculos, completa separao prepucial e abertura de canal vaginal de ratos Wistar expostos mistura dos pesticidas: carbaril, lambda-cialotrina e metamidofs, nas doses relativas IDA e IDAx100. Os resultados expressam mdia erro padro. As ninhadas foram utilizadas como unidade estatstica.

5.2.5 CICLO ESTRAL

A exposio da mistura dos pesticidas no foi capaz de interferir no ciclo estral de fmeas expostas no perodo gestacional e lactacional. O dia para o primeiro estro, o intervalo de dias entre os estros e a regularidade do ciclo estral (trs ciclos completos) no foram afetados pelos pesticidas em relao ao controle (tabela 6).

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TABELA 6 INTERVALO ENTRE ESTROS, DIA DO PRIMEIRO ESTRO E REGULARIDADE DO CICLO DE RATAS DESCENDENTES EXPOSTAS NA PRENHEZ E LACTAO Variveis / Grupos Controle (n=8) Intervalo (dias) entre estros Dia do 1. estro Ciclo regular 6,20 1,09 38,2 3,30 25 (78,1%) IDA (n=11) 7,42 1,82 39,0 3,62 34 (79,1%) IDAx100 (n=10) 6,29 0,96 40,1 4,38 31 (79,5%)

NOTAS: Intervalo de dias entre os estros, dia do primeiro estro e regularidade do ciclo de ratas Wistar expostas na prenhez e lactao mistura dos pesticidas: carbaril, lambda-cialotrina e metamidofs, nas doses relativas IDA e. IDAx100. Os resultados expressam como mdia erro padro, exceto na varivel de regularidade de ciclo, onde foi expresso o percentual. As ninhadas foram utilizadas como unidade estatstica, exceto nas variveis dia do 1 estro e regularidade de ciclo, onde foram utilizadas cada fmea da prognie como unidade estatstica,

5.2.6 MASSA DE RGOS DA PROGNIE FEMININA Em relao a massa relativa dos rgos da prognie feminina (fgado, rins), houve diferena estatstica significativa entre os grupos teste e o grupo controle para a varivel fgado (tabela 7).

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TABELA 7 - MASSA RELATIVA (%) DE RGOS DE DESCENDENTES FMEAS EXPOSTAS NA PRENHEZ E LACTAO Variveis / Grupos Controle IDA IDAx100 (n=8) Massa corporal absoluta (g) Massa do fgado (%) Massa dos rins (%) 202 8,69 3,46 0,06 0,33 0,01 (n=11) 207 4,91 3,75 0,07* 0,33 0,01 (n=10) 206 4,45 3,82 0,08* 0,33 0,01

NOTAS: Massa relativa de rgos (em relao massa corporal) de ratas Wistar expostas mistura dos pesticidas carbaril, lambda-cialotrina e metamidofs, nas doses relativas IDA e IDAx100. Os resultados expressam mdia erro padro. As ninhadas foram utilizadas como unidades estatsticas.

5.2.7 MASSA DE RGOS DA PROGNIE MASCULINA

A massa relativa dos rgos da prognie de ratos (fgado, rins) no foi afetada pelos pesticidas no protocolo desenvolvido e nas doses avaliadas. (tabela 8). A massa relativa dos rgos sexuais dos descendentes machos (vescula, prstata e epiddimos) no apresentou diferena significativa entre os grupos testados e o grupo controle. Apenas a massa relativa dos testculos apresentou um aumento significativo no grupo IDAx100 em relao ao grupo controle (tabela 8).

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TABELA 8 - MASSA RELATIVA (%) DE RGOS DOS DESCENDENTES MACHOS EXPOSTOS NA PRENHEZ E LACTAO Variveis / Grupos Controle (n=16) Massa corporal absoluta (g) Massa do fgado (%) Massa dos rins (%) Massa dos testculos (%) Massa da vescula seminal (%) Massa da prstata (%) Massa dos epiddimos (%) 374 4,73 3,36 0,06 0,32 0,01 0,40 0,01 0,14 0,01 0,09 0,01 0,14 0,01 IDA (n=22) 371 7,09 3,36 0,05 0,32 0,01 0,43 0,01 0,14 0,01 0,09 0,01 0,15 0,01 IDAx100 (n=20) 355 6,08 3,51 0,06 0,32 0,01 0,44 0,01* 0,13 0,01 0,08 0,01 0,15 0,01

NOTAS: Massa relativa de rgos e glndulas anexas (em relao massa corporal) de ratos Wistar expostos mistura dos pesticidas carbaril, lambda-cialotrina e metamidofs, nas doses relativas IDA e IDAx100. Os resultados expressam mdia erro padro. As ninhadas foram utilizadas como unidades estatsticas. Foram utilizados dois animais de cada grupo (duplicata). Quando os rgos eram pares o resultado foi expresso como mdia entre eles.

5.2.8 CONTAGEM DE ESPERMATOZIDES E PRODUO ESPERMTICA DIRIA

No foram demonstradas diferenas significativas no nmero de espermatozide da cauda do epiddimo entre os grupos expostos aos pesticidas durante a prenhez e lactao e o grupo controle (tabela 9). A produo espermtica diria e o tempo de trnsito espermtico tambm no apresentaram diferena estatstica significativa entre os grupos.

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TABELA 9 CONTAGEM DE ESPERMATOZIDES, PRODUO E TEMPO DE TRNSITO ESPERMTICO DIRIO DE DESCENDENTES MACHOS EXPOSTOS NA PRENHEZ E LACTAO Variveis / Grupos Controle IDA IDAx100 (n=8) No. espermatozides x 10
6

(n=11) 267 15,3 38,8 1,77 7,29 0,36

(n=10) 235 14,5 36,1 1,63 6,56 0,36

241 11,0 47,9 6,74 7,57 0,62

Produo espermtica diria Tempo de trnsito espermtico (dias)

NOTAS: Nmero de espermatozides, produo espermtica e tempo de trnsito espermtico dirio de ratos Wistar machos expostos mistura dos pesticidas carbaril, lambda-cialotrina e metamidofs, nas doses relativas IDA e IDAx100. Os resultados expressam mdia erro padro. As ninhadas foram utilizadas como unidade estatstica.

6 DISCUSSO Os alimentos que fazem parte da cesta bsica da populao brasileira devem apresentar qualidade na hora do consumo, assim como ter qualidade durante sua produo e no restante das etapas (armazenamento, transporte, industrializao, etc). Desta maneira o alimento produzido com qualidade que chega at a mesa do consumidor deve ser saudvel. Durante a produo agrcola o uso de agrotxicos uma das maneiras mais comuns para a obteno de melhores rendimentos. Contaminantes ambientais, como os pesticidas, presentes nas culturas em forma de resduos podem representar riscos para a sade da populao. Como apresentado no relatrio do PARA, pde-se constatar que a grande maioria das culturas investigadas foi positiva para a presena de resduos de pesticidas. A presena de resduos de agrotxicos nos alimentos leva exposio crnica de uma grande variedade de compostos, j que h o consumo desses alimentos e o uso de vrios tipos de pesticidas em uma mesma cultura. Nesta pesquisa foi calculado o risco txico da ingesto crnica de pesticidas encontrados na alimentao, assim como os possveis efeitos adversos da mistura de trs pesticidas sobre a reproduo de animais modelos.

6.1 RESDUOS DE PESTICIDAS NA ALIMENTAO E RISCO TXICO A forma de utilizao de pesticidas constatada pela anlise do relatrio do PARA em 2001/02 foi muito parecida com a do ano de 2003, quando se verifica que o nmero de pesticidas encontrados nas amostras no foi muito diferente entre um relatrio e outro. Resultado este j esperado, pois no houve nenhuma orientao diferente para os produtores em relao ao uso de pesticidas nos dois perodos investigados. O relatrio do PARA apresentou como resultado final vrias amostras com mais de um resduo de pesticidas, assim como muitas amostras com pesticidas usados irregularmente ou com concentraes acima do LMR (ANVISA, 2005).

41

A presena de resduos de pesticidas no autorizados pela legislao leva a um fato preocupante na prtica agrcola. O uso incorreto de pesticidas pelos agricultores deixa uma lacuna a ser preenchida por programas educacionais, que podem ser realizados atravs das universidades, por meio de programas de extenso universitria. No basta a exigncia da venda do produto atravs da apresentao da receita agronmica, mas tambm a indicao correta dos pesticidas para cada cultura, para que estes possam ser utilizados com maior segurana e eficcia. Isso aponta para a ineficcia da simples obrigatoriedade da venda de produtos com receita agronmica como mecanismo de reduo do uso incorreto sem a devida fiscalizao e autuao pelos rgos competentes (SOBREIRA e ADISSI, 2003). No resultado final apresentado no relatrio do PARA o uso no autorizado de pesticidas foi o principal problema do uso irregular. Apesar da forma de avaliao ser diferente, este trabalho chegou a resultado semelhante quanto ao uso irregular. Este um problema que pode ser diminudo atravs de aes governamentais e exigncias para que esse conhecimento seja difundido entre os agricultores. Quando se comparou a concentrao de resduos encontrada com o LMR de cada pesticida, nos dois perodos da pesquisa, verificou-se que houve uma diminuio do nmero de pesticidas como concentraes acima do LMR no ano de 2003 em relao 2001/02 (27 para 23 respectivamente). No se pode definir com exatido os motivos dessa diminuio. Apesar disso, o fato de encontrar amostras em concentraes acima do LMR gera preocupaes, pois, alimentos ingeridos com estes resduos podem levar toxicidade, principalmente se o produto for bioacumulado e a exposio for crnica. Ao avaliarmos o nmero de pesticidas utilizados em uma mesma cultura podemos concluir que muitas vezes esse nmero excessivo, levando em conta que vrios deles so utilizados de maneira irregular. Alm disso, tambm podemos perceber que grande parte deles tem seu uso no autorizado e muitas vezes acima do LMR, o que pode levar a toxicidade em longo prazo. Nesse estudo notamos que algumas culturas destacam-se por esse uso excessivo, como no caso do morango, onde em 2001/02 foram encontrados 15 diferentes tipos de pesticidas e em 2003 esse nmero

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aumentou para 20. A cultura de banana, apesar de no estar entre as culturas com maior nmero de diferentes pesticidas, tambm teve um aumento de quatro para cinco entre os relatrios do PARA de 2001/02 e 2003. Algumas culturas apresentaram uma variedade grande de tipos de pesticidas. As culturas de alface, ma, mamo, morango e tomate, apresentaram mais de sete tipos diferentes de resduos de pesticidas em ambas as avaliaes (ANVISA, 2005). A ANVISA publicou o ndice monogrfico com os principais dados dos pesticidas utilizados na agricultura. Onde consta vrios aspectos qumicos e toxicolgicos importantes para a avaliao de seu uso. Para vrios dos pesticidas citados neste trabalho no consta o valor da IDA no ndice monogrfico, o que prejudicou o clculo de risco txico, j que optamos em utilizar os dados preconizados no Brasil (ANVISA, 2003b). O nmero de pesticidas que apresentaram risco txico foi menor em 2003 em relao 2001/02, passando de 19 para 16 entre os pesticidas utilizados para o clculo. CALDAS e SOUZA (2001) avaliaram 281 compostos atravs da ingesto diria terica mxima (IDTM) e consideraram que 23 deles apresentavam risco sade do consumidor brasileiro. Mesmo com diferentes abordagens, os dois trabalhos levantam a hiptese do risco sade da populao com o consumo residual destas substncias. O risco txico teve uma diminuio na quantidade de pesticidas considerados de risco, porm este risco no deveria existir, j que a IDA e o LMR so variveis aplicadas para dar segurana ao consumidor. Esse uso , muitas vezes, irregular, merecendo contnua avaliao do nvel de resduos de pesticidas e a fiscalizao de seu uso. Esta

fiscalizao no deve ser feita apenas entre estes alimentos, mas abrangendo tambm outras variedades consumidas pela populao brasileira, assim como a abrangncia da totalidade dos estados brasileiros. O nmero de pesticidas encontrados no relatrio do PARA e listados por vrias agncias internacionais com potencial de influenciar o sistema endcrino no diferiu entre os anos de 2001/02 e 2003. A investigao de substncias com possvel atividade endcrina tem crescido atualmente. Vrios centros de pesquisa tm desenvolvido inmeros trabalhos correlacionando possveis efeitos adversos sobre o sistema

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endcrino com exposio ambiental a essas substncias. Este trabalho correlacionou no mnimo 16 diferentes pesticidas com possvel atividade endcrina, evidenciando a necessidade de estudos com estas substncias isoladas ou misturadas em protocolos utilizando-se animais modelo.

6.2 TOXICIDADE REPRODUTIVA EM RATOS WISTAR EXPOSTOS MISTURA DE PESTICIDAS

Alguns estudos mostram dados que relacionam incidncia de intoxicaes com a utilizao de pesticidas, como por exemplo, carbamatos, piretrides e organofosforados (FARIA e cols., 1999; LEVIGARD e ROZEMBERG, 2004). Atualmente h uma crescente preocupao em relao possibilidade de interao entre os diferentes compostos, podendo haver efeitos sinrgicos adversos sobre a sade humana e/ou animal. Uma especial ateno tambm tem sido dada aos possveis efeitos adversos advindos da exposio de substncias qumicas durante os perodos crticos de desenvolvimento, muitas vezes irreversveis (EPA, 1996). Vrios estudos podem ser feitos para caracterizar a toxicidade reprodutiva de substncias isoladas ou misturadas. Dentre esses estudos, a exposio de animais in utero e durante a lactao a substncias suspeitas, um protocolo validado e indicado. Pressupe-se que uma alterao que ocorra em animais de laboratrio possa tambm ocorrer em seres humanos expostos aos mesmos compostos. Desta maneira destacase a importncia deste tipo de teste para a obteno de dados toxicolgicos. Para estimar a toxicidade para seres humanos a partir de um estudo em animais, so respeitadas as diferenas interespecficas, e considerada maior sensibilidade do ser humano em relao a outros mamferos (PRESIBELLA, 2004; DOURSON e cols., 2002; LU, 1991). Pouco se sabe sobre o possvel efeito adverso de misturas, sendo necessria a utilizao de protocolos validados pelas agncias reguladoras e pela comunidade cientfica, com o intuito de avaliar os riscos da exposio aos contaminantes ambientais. Atualmente existem poucos estudos de exposio de pesticidas misturados

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buscando possveis efeitos adversos sobre a funo reprodutiva e possvel sinergismo entre estas substncias. Em funo disso e com a possibilidade de comparao com outras pesquisas que foi desenvolvido esse trabalho. A administrao oral de trs diferentes pesticidas procura aproximar-se da ingesto diria em que a populao est sujeita. A mistura foi feita usando-se os pesticidas carbaril, lambda-cialotrina e metamidofs, substncias suspeitas de interferirem adversamente sobre o sistema endcrino.

6.2.1 DADOS DA PRENHEZ E LACTAO

Os dados obtidos durante o perodo da prenhez e lactao permitem avaliar as condies de toxicidade aparente das progenitoras. A mortalidade materna um sinal de toxicidade, mas existem outras variveis que podem ser usadas como indicativos de efeitos adversos, como a massa corporal durante o tratamento, dados da prenhez e sinais clnicos de toxicidade (EPA, 1991; EPA, 1996). Assim, se no houver sintomas de toxicidade materna, supe-se que o processo de prenhez ocorreu sem a interferncia desses efeitos adversos. Variaes no peso podem indicar efeitos negativos no desenvolvimento dos filhotes. Assim como a diminuio ou o aumento no tempo de prenhez pode influenciar na sobrevivncia dos filhotes. A taxa de sobrevivncia e o ganho de massa dos filhotes na lactao so dependentes de sua massa ao nascer, do estado de sade de cada indivduo, assim como o tamanho da ninhada. Os pesticidas podem interferir no desenvolvimento dos descendentes por afetar diretamente ou indiretamente os filhotes (PRESIBELLA, 2004) A administrao da mistura dos pesticidas (carbaril, lambda-cialotrina e metamidofs) no afetou a massa das progenitoras durante o perodo gestacional e lactacional, assim como a massa do fgado e de rins nas doses testadas. Tambm no foi notada interferncia nos dados da prenhez (tempo de prenhez, ndice de nascimento, ndice de desmame, ndice de viabilidade, perdas ps-implantaes, tamanho das ninhadas e razo sexual), indicando que a mistura nas doses utilizadas no induz toxicidade materna.

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Esses dados corroboram com resultados obtidos por ARAJO (2005), onde estes mesmos pesticidas administrados isoladamente tambm no induziram toxicidade materna. Estes resultados sugerem que o valor da IDA estipulada para estes pesticidas apropriado quando testado em animais, como no protocolo desenvolvido. Mas lembrando que o rico txico existe para a populao brasileira que consome alimentos que apresentam seus resduos.

6.2.2

DESENVOLVIMENTO

GERAL

DOS

DESCENDENTES

NO

PERODO

LACTACIONAL

O desenvolvimento geral no perodo lactacional (desenvolvimento ponderal e o tempo para o descolamento dos pavilhes auriculares, aparecimento de plos e abertura de olhos), no foi afetado pela mistura dos pesticidas carbaril, lambdacialotrina e metamidofs nas doses testadas. Em outro trabalho (ARAJO, 2005) com os mesmos pesticidas, mas administrados isoladamente, tambm no houve interferncia nestas variveis investigadas. Estes resultados so indicativos da ausncia de toxicidade na prognie em desenvolvimento nas doses testadas.

6.2.3 DESENVOLVIMENTO SEXUAL DOS DESCENDENTES

As variveis utilizadas para avaliao da possvel interferncia endcrina dos pesticidas no desenvolvimento sexual foram os tempos para a descida dos testculos para o saco escrotal, separao prepucial, abertura do canal vaginal, dia do primeiro estro e regularidade do ciclo estral. Agentes que influenciem no equilbrio hormonal podem interferir nos processos descritos, podendo acelerar ou retardar estes processos (EPA, 1996). O ciclo estral normal indica um bom funcionamento do sistema neuroendcrino reprodutivo e tambm dos ovrios. Porm, diversos compostos podem induzir alteraes no ciclo estral sem comprometer a fertilidade (PRESIBELLA, 2004; EPA, 1996).

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Neste estudo, os descendentes machos de ratas Wistar expostas mistura de pesticidas carbaril, lambda-cialotrina e metamidofs no perodo gestacional e lactacional, na dose correspondente IDA, tiveram uma antecipao no tempo para a separao prepucial. Esta interferncia foi de aproximadamente um dia e possivelmente devido ao limitado nmero de observaes (uma vez ao dia pela manh). Estes resultados so biologicamente normais, no sendo um indicativo de toxicidade ou de desenvolvimento anormal da prognie. A outra varivel investigada (tempo para a descida dos testculos) no foi afetada em nenhuma dose testada. ARAJO (2005), utilizando o mesmo protocolo com os pesticidas isolados, no encontrou nenhuma diferena nessas variveis investigadas, confirmando que o achado acima citado est dentro da normalidade. Em relao s variveis investigadas na prognie feminina no houve diferena significativa no tempo para a abertura do canal vaginal, no dia para o primeiro estro e na regularidade do ciclo estral. Estes resultados sugerem que a mistura dos pesticidas no induz efeitos adversos nas doses testadas nestas variveis. Quando a mistura foi testada em um teste de (anti)estrogenicidade (utrerotrfico) em ratas imaturas, os resultados sugeriram um efeito estrognico, pois o peso absoluto e relativo do tero foi significativamente maior que o do controle (ARAJO, 2005). Neste trabalho, a administrao dos pesticidas foi feita nas progenitoras com exposio da prognie in utero e durante a lactao, enquanto no teste uterotrfico a administrao foi feita diretamente no animal a ser avaliado. Desta maneira, diferentemente do teste uterotrfico, os pesticidas que atravessam a barreira placentria e que so eliminados pelo leite esto em concentrao menor do que a administrada. Os pesticidas podem sofrer interaes qumicas ou farmacolgicas in vivo, e assim produzir efeitos antagnicos (estrognicos e anti-estrognicos) e com isso diferenciar dos resultados em mistura e isolados. Para confirmar esses dados seria interessante a realizao de novos testes de curta e longa durao com diferentes doses dos pesticidas misturados, isolados e administrados combinados dois a dois.

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6.2.4 AVALIAO DOS DESCENDENTES MACHOS E FMEAS EM IDADE ADULTA

A toxicidade de uma substncia pode ser avaliada investigando-se o aspecto macroscpico e a massa de seus rgos. O fgado e rins so rgos responsveis pela detoxicao do organismo, e em casos de intoxicao podem ter seu volume e/ou peso aumentado. Os animais foram avaliados quanto massa do fgado e dos rins. A massa corporal absoluta dos descendentes, assim como a massa do fgado e dos rins no apresentou diferenas significativas entre os grupos testes da mistura e o grupo controle. Estes resultados indicam que as doses testadas no produziram toxicidade geral nos descendentes. Alm dos rgos de detoxicao, rgos sexuais como testculos e epiddimos e glndulas sexuais acessrias como a vescula seminal e a prstata foram avaliados. As glndulas sexuais acessrias e os epiddimos no apresentaram diferenas significativas de suas massas entre os grupos tratados e o grupo controle. Porm, a massa dos testculos foi significativamente maior no grupo IDAx100 em relao ao grupo controle. A variao na massa de rgos reprodutivos pode ser usada para avaliar a toxicidade reprodutiva de diversos compostos. Alteraes na massa relativa de rgos reprodutivos evidenciam um agente como potencialmente prejudicial ao sistema reprodutivo (ZENICK e CLEGG, 1989). A massa de testculos apresenta uma variao pequena entre animais da mesma espcie, sendo um marcador sensvel de injria gonadal (EPA, 1996). Porm, este achado isolado no pode ser configurado como efeito andrognico, pois em outras variveis investigadas no houve diferena entre os grupos testados. Quando estes pesticidas foram investigados isoladamente (ARAJO, 2005), a massa dos testculos no foi afetada, evidenciando que a mistura teve seu efeito devido a uma possvel interao qumica ou farmacolgica. Outra hiptese a ser levantada que a mistura dos pesticidas induziu efeito estrognico nesta varivel, interferindo por exemplo, na reabsoro de lquidos pelos ductos eferentes, levando a um aumento da massa dos testculos. Esta possvel hiptese corrobora com os

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achados do teste uterotrfico, onde o tero tambm teve aumento de massa quando exposto a mistura dos pesticidas (ARAJO, 2005). Os descendentes tambm foram avaliados quanto a nmero de

espermatozides, produo espermtica diria e tempo de trnsito espermtico. O nmero de clulas espermticas mostra a integridade da espermatognese nos testculos. O nmero de espermatozides na cauda do epiddimo uma das avaliaes mais significativas da funo do epiddimo (AMANN, 1982; ZENICK e CLEGG, 1989). Em nenhuma destas variveis houve diferena significativa entre os grupos testados da mistura de pesticidas e o grupo controle. Esses dados so consistentes com trabalho realizado com os pesticidas isolados, que tambm no apresentaram diferenas nestas variveis (ARAJO, 2005).

6.2.5 CONSIDERAES FINAIS

A avaliao constante do uso de pesticidas na agricultura deve ser continuada e cada vez mais abrangente, tanto quanto ao nmero de alimentos quanto ao nmero de pesticidas. A pesquisa com objetivos de avaliar o risco txico de populaes, devido ao consumo de pesticidas atravs da alimentao, deve ser sempre priorizada antes da liberao de seu uso. A evidncia de qualquer efeito adverso em experimentos com modelos animais, relacionado com o uso de alimentos contaminados, deve ser considerado como um alerta. Para isso devem ser utilizados protocolos experimentais validados por agncias reguladoras internacionais e comunidade cientfica. O estudo avaliando a ingesto da mistura de pesticidas possibilita uma avaliao mais prxima da realidade. O risco txico no deve existir em nenhuma hiptese, pois os valores de IDA e LMR j so definidos para este fim, dando margem de segurana para a quantidade de resduos de pesticidas nos alimentos. Quanto menor o risco maior ser a qualidade dos alimentos, no que se refere ao uso de pesticidas e sade da populao.

7 CONCLUSES Com este trabalho, avaliando o risco txico do uso de pesticidas na alimentao e a possvel toxicidade reprodutiva em ratos expostos a diferentes doses de misturas de pesticidas, podemos concluir que: a) De acordo com a avaliao dos relatrios do PARA de 2001/02 e de 2003, houve um uso mais racional dos pesticidas, j que os LMR foram mais respeitados, apesar de serem ainda altos. b) Dentre os pesticidas que tem seu valor de IDA definido, o consumo per capita de resduos no a ultrapassa, estando dentro da margem de segurana estabelecida. c) O nmero de pesticidas utilizados em uma mesma cultura grande, assim como o nmero de pesticidas com uso irregular, deixando a populao exposta a uma variedade desnecessria de resduos, sendo este, dado preocupante. d) A populao exposta pela ingesto de alimentos contaminados com resduos de pesticidas est sujeita ao risco txico crnico. e) A administrao da mistura de pesticidas carbaril, lambda-cialotrina e metamidofs, nas doses correspondentes IDA e IDAx100, mostrou ser segura no provocando toxicidade em ratas prenhas e lactantes. f) A mistura de pesticidas carbaril, lambda-cialotrina e metamidofs, nas doses correspondentes IDAx100, provocou alterao de peso de testculos nos descendentes em doses que no causam toxicidade materna nem induzem toxicidade geral. O panorama do uso de pesticidas entre os anos de 2001/02 e 2003 teve poucas alteraes. Assim, a constatao da problemtica do uso irregular e algumas vezes abusivo e desnecessrio, mostra a necessidade de melhorias na fiscalizao e na prtica agrcola e continuidade de trabalhos como o PARA.

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Os resultados do protocolo experimental revelam que a exposio mistura dos trs pesticidas capaz de resultar em alteraes nos rgos reprodutivos masculino da prognie exposta.

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ANEXOS

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Pesticidas encontrados como resduos nos relatrios do PARA de 2001/02 e 2003 e listados por diferentes autores como possveis desreguladores endcrinos
Pesticidas FOE (2000) GOETTLICH (2003) PAN-UK (2001)

Acefato Azinfs etlico Azinfs metlico Azoxistrobina Captana Carbaril Carbendazina Carbofurano Cipermetrina Clorotalonil Clorpirifs Clorpirifs metil Deltametrina Diazinona Diclorvs Dicofol Dieldrin Difeconazole Dimetoato Ditiocarbamatos Endosulfano Esfenvalerato Etiona

58

Fenitrotiona Fenpropatrina Fentiona Fentoato Folpeto Imazalil Iprodiona Lambda-cialotrina Metamidofs Metidationa Monocrotofs Parationa etlica Parationa metlica Permetrina Pirazofs Pirimifs metlico Procimidona Procloraz Profenofs Propiconazole Tetradifona Tiabendazole Triazofs Triclorfon Vinclozolina

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Pesticidas encontrados como resduos nos relatrios do PARA de 2001/02 e 2003 %IDA > 100 Pesticidas (com risco txico) Acefato Azinfs etlico Azinfs metlico Azoxistrobina Captana Carbaril Carbendazina Carbofurano Cipermetrina Clorotalonil Clorpirifs Clorpirifs metil Deltametrina Diazinona Diclorvs Dicofol Dieldrin Difeconazole Dimetoato Ditiocarbamatos Endosulfano Esfenvalerato Etiona Fenitrotiona

60

Fenpropatrina Fentiona Fentoato Folpeto Imazalil Iprodiona Lambda-cialotrina Metamidofs Metidationa Monocrotofs Parationa etlica Parationa metlica Permetrina Pirazofs Pirimifs metlico Procimidona Procloraz Profenofs Propiconazole Tetradifona Tiabendazole Triazofs Triclorfon Vinclozolina