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DETERMINACIN CUANTITATIVA DE ACIDO ASCRBICO POR EL MTODO ESPECTROFOTOMTRICO DE MOHR Presentado por: Yuli Chalpartar Carolina Ordoez Estudiantes

de sexto semestre del programa ingeniera en produccin acuicola Presentado a: jesus cabrales

Resumen La vitamina c o acido L-ascrbico, es una vitamina esencial y un importante agente antioxidante hidrosoluble, que se sintetiza qumicamente a partir de la glucosa mediante una serie de reacciones enzimticas. Entre las diferentes propiedades del acido ascrbico cabe mencionar su capacidad de absorber radiacin ultravioleta y evitar el dao fotoqumica en rganos expuestos, como la vista. Para la determinacin de la cantidad de acido ascrbico en muertas biolgica, se tomo 1 ml de jugo de naranja, 1 gr de pimentn y 1 gr de guayaba, luego se procedi a agregar acido oxlico el cual es uno de los principales metablicos del acido ascrbico es decir que la vitamina c es desechada del cuerpo en forma de este acido, despus se realizan varios procesos de filtrado para purificar la muestra, por ltimo se agregan varios tipos de reactivos y se mide su concentracin de vitamina c en un espectrofotmetro. Palabras claves: acido ascrbico, radiacin ultravioleta, dao fotoqumica, acido oxlico, espectrofotmetro

INTRODUCCIN Adems de los com contienen unas sustancias que actan en cantidades mnimas y que son imprescindibles para el correcto funcionamiento del organismo, las vitaminas. Las vitaminas son compuestos biolgicamente muy activos por lo que generalmente se necesitan en cantidades muy bajas, estas sustancias no pueden ser fabricadas por el organismo y deben adquirirse de procedencia exgena, los seres vivos requieren ciertas cantidades diarias de cada vitamina y cualquier alteracin de estos lmites revierte en trastornos de los procesos metablicos. Se habla de avitaminosis si la carencia de una vitamina es total; hipovitaminosis si se ingiere una cantidad por debajo de la necesaria e hipervitaminosis si se consume en exceso alguna vitamina. El acido ascrbico, comnmente llamado vitamina c, presenta un aspecto de cristales blancos, con sabor acido, sensible a la luz y a ciertos metales pesados, es un tipo de

vitamina hidrosoluble y esencial, es sintetizado naturalmente po las plantas superiores y algunos animales, con acepcin del seres humanos, y tambin puede ser sintetizado qumicamente a partir de glucosa, mediante una serie de reacciones catalizadas por enzimas, es considerado uno de los mas potentes agentes antioxidantes del organismo; en humanos se encuentra concentrado en cierto rganos como: ojos, hgado, vaso, cerebro, glndulas suprarrenales y tiroideas. El acido ascrbico tiene caractersticas resuctoras por sus dos grupos donadores de protones, es termohabil y se en el aire con gran facilidad, interviene en muchas reacciones metabolicas importantes, como por ejemplo, actua como cofactor en las reacciones de hidroxilacion en la sntesis del colgeno. Este es esencial para la formacin normal de huesos y dientes y para reforzar paredes capilares. Inhibe inflamacin de las encas, amenia, deficiencia en la cicatrizacin de heridas y suceptibilidad a las infecciones, tambin es importante en el metabolismo de carbohidratos y en controlar procesos infecciosos, la mayori de las reacciones metabolicas el acido ascrbico se deben u fuerte potencial reductor, su actividad antioxidante deriva del dezplasamiento de acido l-ascorbico a su forma oxidada Ldehidroascorbico, esto tambin habilita la molecula para combatir radicales oxidativos y los radicales acuosos Una deficiencia de esta vitamina puede ocasionar una enfermedad llamada escorbuto, que es un sndrome que refleja en piel, mucosas y anexos la inestabilidad y debilidad del colgeno no hidrolizado. Para la determinacin de esta vitamina se utiliza un mtodo conocido como el mtodo de Mohr, el cual consiste en un proceso de doble precipitacin en donde se presenta la formacin de un primer solido, que es la especie a cuantificar, y alcanzado el punto estequiometrico se forma otro precipitado que corresponde a la especie que seala el punto final de la valoracin, este en un mtodo espectrofotomtrico, es decir que se basa en la absorcin de radiacin ultravioleta y visible por el analito, como consecuencia de lo cual se origina un estado activado que posteriormente elimina su exceso de energa en forma de calor El la determinacin del acido ascrbico el mtodo de Mohr funciona de la siguiente manera: el acido ascrbico presenta un mximo de absorcin a 260 nm, en este se utiliza como reactivo principal la 2 nitroanilina, y cuyo mximo de absorcin se lee a 540 nm, para la determinacin de la vitamina c total se precisa la conversin del acido ascrbico en deshidro-ascorbico. Es relativamente especfico y aceptable.

METODOLOGA Como muestra para la determinacin de vitamina c se tomo: 1mL del jugo de la naranja, 1.22 g de pimentn y 1.56 g de guayaba, de las cuales la muestra de pimentn y guayaba se maceraron en un mortero agregando 4 mL de solucin de cido oxlico al 0.15%, hasta obtener el zumo de cada una de ellas, a la muestra del jugo de naranja tambin se le agrego 4 mL de solucin de acido oxlico al 0.15%, este procedimiento de lo hace con el fin de extraer una determinada concentracin de acido ascrbico.

Luego se procedi a filtrar cada uno de los zumos obtenidos anteriormente, a los cuales se volvi a agregar cido oxlico al 0.15%, hasta lograr un volumen de 5 mL de cada uno. Posteriormente se preparo la curva de calibracin, el cual es un mtodo de qumica analtica para medir la concentracin de una sustancia, esta curva se cre rotulando 10 tubos de ensayo, de los cuales anteriormente el profesor haba preparado los tubos: B, 1, 2, 3, 4, 5, 6 y 7, as que se procedi a preparar los tubos D1, D2 Y D3. Agregando los diferentes reactivos como se muestra en la siguiente tabla: Reactivos (ml) Tub o B onitroanilin a Nitrito sodio de 0.1 0.1 Tub o 1 0.1 0.1 Tub o 2 0.1 0.1 Tub o 3 0.1 0.1 Tub o 4 0.1 0.1 Tub o 5 0.1 0.1 Tub o 6 0.1 0.1 Tub o D1 0.1 0.1 Tub o D2 0.1 0.1 Tub o D3 0.1 0.1

Mezcle bien y espere a que se decolore. Si en 5 minutos no ocurre decoracin agregue otros 0.1 ml de nitrito de sodio y descuente este volumen del agua destilada que se agregar posteriormente. Etanol 96% al 3.8 3.8 0.1 0.9 3.8 0.2 0.8 3.8 0.4 0.6 3.8 0.6 0.4 3.8 0.8 0.2 1.0 1.0 1.0 3.8 1.0 3.8 3.8 3.8

Patrn de vitamina C 1.0 cido oxlico EXTRACT O

Mezcle bien y deje en reposo durante 5 minutos NaOH 10% Agua destilada 1.2 3.8 1.2 3.8 1.2 3.8 1.2 3.8 1.2 3.8 1.2 3.8 1.2 3.8 1.2 3.8 1.2 3.8 1.2 3.8

La 0-nitroanilina es el principal reactivo utilizado en el mtodo en mtodo de Morh ya que este da lugar al derivado 2-nitrofenilhidrazida del acido oxlico el cual en presencia del NaOH, forma una sal sdica de color violeta cuya absorbancia se mide a 540 nm.

Los tubos de ensayo preparados anteriormente se procedieron a medir en un espectrofotmetro, el cual es un instrumento que tiene la capacidad de manejar un haz de radiacin electromagntica, separndolo para facilitar la cuantificacin de su energa.

RESULTADOS Los tubos 10 tubos de ensayo fueron medidos en el espectrofotmetro en su respectivo orden, de los cuales se obtuvieron las siguientes medidas de absorbancia: tubos ensayo B 1 2 3 4 5 6 D1 D2 D3 de ABSORBANCIA 0 0,064 0,215 0,328 0,589 0,644 0,846 0,232 0,818 0,409

Primero se midi la absorbancia del tubo de ensayo blanco, al cual se le asigna un valor de 0, de forma que la intensidad incidente y transmitida sean iguales, por lo tanto la absorbancia es igual a 0.

Serra Marcelo, Cafaro thamara, 2007, acta bioqumica clnica latinoamericana, volumen. 41, pag, 525-532 (M. F. Agriello, M. E. Buonsante, C. Franco, A. Abeldao, V. Neglia, M. Zylberman, G. Pellerano. Escorbuto: una entidad que an existe en la medicina moderna. Med Cutan Iber Lat Am 2010;38(2):76-80) Fundamentos de qumica analtica: Equilibrio inico y anlisis qumico

Escrito por Alfonso Clavijo Da, 2002, 473-478. Espectrofometra: Espectros de absorcin y cuantificacin colorimtrica de biomolculas
1 1 1 1 1 2 1 1

Nieves Abril Daz , J. Antonio Brcena Ruiz , Emilio Fernndez Reyes , Aurora Galvn Cejudo , Jess Jorrn Novo , Jos Peinado Peinado , Fermn Toribio Melndez-Valds , Isaac Tnez Fiana Departamento de Bioqumica y Biologa Molecular, 1 Campus Universitario de Rabanales, Edificio Severo Ochoa, 14071-Crdoba,
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Facultad de Medicina, Avda. Menndez Pidal s/n, 14004-Crdoba.