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Material Didtico de apoio a disciplina BVE 270 Professor Marcelo Ehlers Loureiro Professor Carlos Martinez

Participao na editorao e processamento de imagens: Marcelo Francisco Pompelli, Leonardo Carnevalli Dias

1) Sntese de Reservas pelas Folhas: Sntese de Amido e Sacarose


A fotossntese transforma a energia luminosa em energia bioqumica, a qual utilizada nas reaes biossintticas de outras molculas necessrias s clulas. Essa energia encontra-se armazenada na molcula de triose-fosfato (triose-P) produzida no Ciclo de Calvin. Essa triose (gliceraldedo-3-fosfato, 3-PAG - em portugus: 3-GAP - ou dihidroxiacetona-3-fosfato) pode ser utilizada no prprio cloroplasto para a sntese do amido transitrio, ou pode ser transportada para o citosol por uma protena de membrana chamada translocador de triose. Para que esse transporte ocorra, dever ocorrer o contra-transporte de um Pi, do citosol para o cloroplasto. Para cada triose transportada para o citosol, um Pi ser transportado para o cloroplasto. A triose que chega ao citosol poder ser utilizada nas reaes de sntese de sacarose (ou alternativamente, na respirao), que ocorrem basicamente no citosol da clula da folha.

Figura 1 = Destinos da triose produzida pelo ciclo de Calvin para a sntese de reservas energticas pela planta.

As trioses-P produzidas pelo Ciclo de Calvin podem seguir duas rotas metablicas distintas: ou permanecem no estroma e seguem sntese de amido, ou so transportadas ao citosol para a sntese de sacarose. A sntese de amido s ocorre durante o dia, visto que o acmulo de triose para a sua sntese s ocorre na presena da luz. Na sntese de amido, primeiro as trioses-P so utilizadas para a sntese de hexoses, as quais so transportadas como ADP-glicose (ADPG) pela enzima ADPGase (Pirofosforilase da ADPG), enzima-chave no controle da sntese de amido. ADPGase ativada pelo sistema ferredoxina-tioredoxina, o qual tambm s ativo durante o dia. O acmulo de grandes quantidades de amido nos cloroplastos pode levar a um desarranjo nas membranas dos tilacides, afetando a perfeita estrutura dos fotossistemas e, conseqentemente, afetando a captao de energia luminosa e diminuio das taxas fotossintticas. Assim, o controle da sntese de amido essencial, de forma a no prejudicar a fotossntese.

Figura 2 = Micrografia eletrnica mostrando a acumulao. Tanto a regio mais clara como a mais escura faz parte do gro de amido.

A triose transportada ao citosol utilizada na sntese da sacarose, em vrias reaes similares quelas da sntese de amido. A sntese da sacarose leva liberao de quatro fosfatos (Pi), que so essenciais para que o transporte de triose continue (Fig.3). Visto que a taxa de sntese de sacarose excede em at 10 vezes a taxa de sntese de amido, a maior parte da triose produzida no Ciclo de Calvin transportada para o citosol e utilizada na sntese da sacarose. O principal destino da sacarose sintetizada no citosol sua exportao para os rgos dreno (rgos que no sintetizam a energia suficiente que precisam). Tambm ocorre um transporte de sacarose para dentro do vacolo, o qual, junto com o amido transitrio do cloroplasto, servem como substrato para manter a respirao e o transporte de sacarose noite, perodo no qual no h sntese de triose-P. Em algumas plantas, como cevada, no acumulado amido transitrio durante o dia, sendo a sacarose ou os frutanos acumulados no vacolo a principal fonte energtica para sustentar a respirao noturna.

CLOROPLASTO

Figura 3 = Rota biossinttica da sacarose, mostrando os grupos Pi liberados na rota e sua importncia para o transporte das trioses-P para o citosol.

2) Regulao da Sntese de Amido


Como comentado no item anterior, a sntese de sacarose cerca de 10 vezes superior sntese de amido. A enzima-chave na regulao desse processo a ADPGase, a qual regulada alostericamente pelos metablitos Pi (inibidor da atividade enzimtica) e pelo 3-PGA (glicerato 3-fosfato ativador da atividade enzimtica). O Pi oriundo da prpria sntese do amido ou oriundo do citosol (produto da sntese da sacarose) pode se acumular no cloroplasto e inibir a ADPGase alostericamente. Isso ocorre, por exemplo, quando uma reduo significativa nas reaes

Figura 4 = Rota biossinttica de sntese de amido

3) Regulao da Sntese de Sacarose


Duas enzimas-chaves so os principais responsveis pela regulao da sntese da sacarose: SPS (Sintase da sacarose-fosfato) e FBPase (frutose 1,6-bifosfatase). A regulao da enzima FBPase ser abordada no tem Regulao da Gliclise. Concentraremo-nos agora somente na regulao da SPS. A enzima SPS, quando fosforilada pela enzima cinase da SPS, transforma-se em sua forma menos ativa. A ativao da SPS, ao contrrio, depende de sua desfosforilao pela enzima SPS-fosfatase. Dois metablitos regulam o nvel da forma ativa (fosforilada) da SPS, bem como do nvel de atividade enzimtica da forma ativada. Glicose-6-fosfato (G-6-P) inibe a cinase da SPS, inibindo, portanto, a sua inativao. A G-6-P , tambm, um regulador alostrico da SPS ativa: ela liga-se enzima diretamente, aumentando a sua velocidade de reao. G-6-P um sinal, traduzindo o tamanho do reservatrio de hexoses de uma clula, o que ajuda no equilbrio entre duas rotas competitivas: fotossntese e gliclise. Traduz, tambm, o nvel de triose, indicando o nvel de atuao do Ciclo de Calvin. Assim, se G-6-P alto, significa que a gliclise est satisfeita, e que o ciclo de Calvin est atuando em nveis elevados, sendo, ento, o sinal verde para a sntese da sacarose. Por outro lado est o Pi, cujo efeito exatamente o contrrio ao da G-6-P. Alta concentrao de Pi no citosol significa alta sntese de sacarose, e/ou alta taxa de metabolismo + respirao insuficiente a essa demanda, ou reduo do nvel de atividade do Ciclo de Calvin (menos triose sendo transportada para o citosol, acumulando Pi no citosol). Pi um freio sntese de sacarose, e esse freio importante de forma a permitir que a clula de uma folha no sacrifique outras rotas metablicas custa da exportao da sacarose pela folha. Pi ento inibe a fosfatase, que ativaria a SPS, e atua tambm ao nvel da enzima SPS ativada (desfosforilada), inibindo a velocidade da reao catalisada por essa enzima. Pi tambm regula a sntese da sacarose, quando da regulao da enzima FBPase (ver adiante).

Figura 5 = Regulao da sntese da sacarose atravs da regulao da SPS

4) Respirao 4.1 Aspectos Gerais


A respirao um processo de xido-reduo, no qual a energia armazenada nas molculas orgnicas reduzidas (compostos orgnicos de reserva) liberada de forma controlada. A respirao aerbica comum a todos os organismos eucariontes e, em termos gerais, o processo respiratrio nas clulas vegetais e animais similar. A equao simplificada da respirao, geralmente, representada pela oxidao de uma molcula de glicose:

(G = -2880 kJ/mol glicose) Nesta equao, que representa uma reao de xido-reduo, a glicose completamente oxidada a CO2. O oxignio, que serve como ltimo aceptor de eltrons, reduzido para formar gua. Geralmente, a glicose citada como o substrato respiratrio. As fontes de glicose so polmeros, como o amido, ou dissacardeos, como a sacarose. No entanto, no metabolismo celular, outros acares, lipdeos (principalmente triacilglicerol), cidos orgnicos e, em determinadas circunstncias, protenas, podem ser utilizados como substratos respiratrios. A respirao celular ocorre em trs etapas definidas: - A gliclise, catalisada por enzimas solveis localizadas no citosol, que permite a oxidao de uma molcula de glicose, produzindo dois piruvatos, ATP e gerando NADH; - O ciclo de Krebs (ou ciclo do cido ctrico ou ainda ciclo dos cidos tricarboxlicos), que ocorre na matriz da mitocndria, atravs do qual o piruvato oxidado completamente, liberando CO2, gerando ATP e uma considervel quantidade de NADH; - A cadeia de transporte de eltrons, que ocorre na membrana interna das mitocndrias, atravs da qual so transferidos eltrons do NADH para o O2, gerando-se um gradiente eletroqumico de prtons que permite a sntese de ATP via enzima sintetase do ATP (comumente referida como ATPase).

4.2) Mitocndria
A mitocndria uma organela celular de poucos micrmetros (m) de dimetro e comprimento, onde ocorre o ciclo de Krebs e a cadeia de transporte de eltrons. Esta organela est limitada por duas membranas, uma externa e uma interna invaginada. A fase aquosa do interior da membrana interna denominada matriz. A regio limitada pelas duas membranas o espao intermembranar. As invaginaes da membrana interna formam estruturas denominadas cristas. As cristas permitem incrementar significativamente a rea superficial da membrana interna.

Figura 6 = A mitocndria

A teoria endossimbionte hipotetiza que um microrganismo foi absorvido por outro, desenvolvendo um processo de endossimbiose, o que levou ao surgimento da mitocndria (como tambm citado para a origem do cloroplasto). Como evidncias, temos, na mitocndria, a presena de cromossoma e ribossomas de procariotos, e a presena de um processo de replicao, transcrio e traduo, tambm caractersticos de eucariotos. Durante a evoluo, tambm vemos um processo contnuo de fluxo gnico, possuindo os mamferos um genoma mitocondrial muito menor do que o genoma mitocondrial das plantas, as quais so menos evoludas.

4.3) Gliclise
A degradao da sacarose considerada uma primeira fase da gliclise. Duas rotas de degradao da sacarose so possveis: uma via invertase e outra via sintase da sacarose (SuSy; Fig 7). A reao via invertase irreversvel, e no aproveita a energia glicosdica que ligava a frutose glicose na molcula de sacarose. A reao catalisada pela SuSy aproveita essa energia, a qual mantida na ligao UDP-glicose, e aproveitada finalmente na reao seguinte na produo de UTP. Qualquer via de degradao ir originar, no final, frutose-6-fosfato (F-6-P), a qual segue ento para a segunda fase da gliclise (Fig.7).

Figura 7 = Primeira fase da gliclise. A degradao da sacarose pode ocorrer por duas rotas distintas, as quais confluem para o mesmo ponto final (produo de frutose 6-fosfato).

At a formao de 3-GAP, a partir de uma hexose (imagine a hexose ou a frutose formada pela reao da invertase), ocorre o gasto de duas molculas de ATP. Mas a funo da respirao exatamente o contrrio (transformar a energia presente nas ligaes qumicas de uma molcula de acar em ATP). Na verdade, essas primeiras reaes esto preparando a molcula de acar, de forma que as reaes posteriores possam aproveitar melhor a energia presente. A produo de energia comea a partir do 3-GAP. Esse aldedo transformado em um cido, sendo sua energia utilizada na incorporao de mais um fosfato molcula, bem como na gerao de um NADH. Esse fosfato introduzido nessa reao poder, ento, ser utilizado na prxima reao, onde 1,3-PGA transformado em PGA, produzindo ATP. A ltima reao produtora de energia na gliclise a formao de piruvato a partir do fosfoenolpiruvato (PEP), onde ser, ento, produzido um ATP. Cada hexose oxidada na gliclise consumir, portanto, 2 ATPs, e produzir 4 ATPs (saldo lquido de 2 ATPs) e 2 NADH.

Figura 8 = Esquema das reaes da gliclise a partir da Frutose 6-P

Sob condies de anaerobiose, os NADH produzidos na gliclise no podem ser reciclados na cadeia mitocondrial de transporte de eltrons. Assim sendo, ainda no citosol, o piruvato pode ser utilizado como substrato para a Fermentao Lctica ou para a Fermentao Alcolica. Na Fermentao Lctica, o prprio piruvato reduzido a lactato,

utilizando-se o poder redutor do NADH, visando a recuperao de NAD+. Na Fermentao Alcolica, o piruvato inicialmente descarboxilado, resultando em acetaldedo, e este reduzido (utilizando o poder redutor do NADH), resultando em lcool etlico. As fermentaes caracterizam-se por envolverem uma oxidao apenas parcial do substrato orgnico inicial (glicose, em geral), e pelo fato de um composto orgnico ser o aceptor final de eltrons. Assim sendo, compostos orgnicos esto entre os produtos finais (lactato ou lcool etlico + CO2) e o rendimento energtico de apenas 2 ATPs, que correspondem ao saldo da gliclise.

4.4) Ciclo de Kreb


Sob condies aerbicas, o piruvato transportado para o interior das mitocndrias, onde oxidado completamente, no ciclo de Krebs, liberando CO2. O ciclo de Krebs, tambm denominado de ciclo do cido ctrico ou dos cidos tricarboxlicos (TCA), ocorre fundamentalmente na matriz mitocondrial. Na verdade, a oxidao mitocondrial do piruvato ocorre em duas etapas. Na primeira, o piruvato oxidado at acetil-CoA. Na segunda, os grupamentos de acetil so oxidados completamente a CO2, no ciclo do cido ctrico.

4.4.1) Oxidao do Piruvato Na oxidao do piruvato, uma molcula de piruvato convertida em acetil, em uma srie cclica de reaes que removem dois eltrons, dois H+ e um carbono na forma de CO2. Os eltrons e prtons so utilizados para reduzirem o NAD+ a NADH. A unidade acetil transferida para a coenzima A, para formar acetil-CoA. As unidades acetil, carregadas pela acetil-CoA, servem como combustvel intermedirio para alimentar o ciclo do cido ctrico. Os eltrons carregados pelo NADH representam energia potencial que eventualmente utilizada para sntese de ATP, como conseqncia da operao da cadeia de transporte de eltrons.

4.4.2) Ciclo do cido Ctrico No ciclo de Krebs, os dois carbonos do acetil, carregados pela acetil-CoA, so transferidos para o oxaloacetato para formar citrato, que um cido tricarboxlico. Essa primeira reao catalisada pela citrato sintase, principal enzima reguladora do ciclo. Nas etapas seguintes, o citrato oxidado, formando diversos cidos orgnicos tri ou dicarboxlicos. Nas diferentes etapas do ciclo, eltrons e prtons so transferidos ao NAD+ e FAD+ para formar NADH e FADH2, respectivamente. Ocorre, tambm, sntese direta de ATP (fosforilao ao nvel de substrato) e a formao de intermedirios, utilizveis em outros processos biossintticos.

Figura 9 = O ciclo de Krebs

4.4.3) Cadeia de transporte de eltrons e fosforilao oxidativa O sistema de transporte de eltrons formado por quatro complexos proticos inseridos na membrana interna da mitocndria: - Complexo I = NADH desidrogenase (NADH-ubiquinona oxidoredutase) - Complexo II = Succinato desidrogenase (succinato-ubiquinona oxidoredutase)

- Complexo III = Citocromo b-c1 (ubiquinona-citocromo c oxidoredutase) - Complexo IV = Oxidase terminal (citocromo c - O2 oxidoredutase)

Figura 10 = A cadeia transportadora de eltrons

Nesse sistema, eltrons do NADH so transferidos de um complexo a outro at o aceptor final, que o oxignio. Alm dos complexos indicados, tambm participam do transporte as ubiquinonas e o citocromo c. A passagem dos eltrons atravs dos complexos resulta em um transporte vetorial de prtons da matriz para o espao intermembranar. Esse bombeamento de prtons gera um gradiente eletroqumico de prtons (fora prton-motora), que utilizado posteriormente para a sntese de ATP.

Figura 11 = Representao esquemtica dos complexos 1 e 2, indicando o transporte de eltrons atravs desses dois complexos

A B

Figura 12 = Representao esquemtica dos complexos 3 e 4, indicando o transporte de eltrons atravs desses dois complexos. As trs figuras do complexo 3 (A, B e C) representam a oxidao sucessiva de duas molculas de ubiquinona reduzida e a realizao de um ciclo Q, regenerando uma segunda molcula de ubiquinona reduzida.

O gradiente de prtons gerado permite a sntese de ATP no complexo sintetase do ATP, quando os prtons retornam do espao intermembranar para a matriz, atravs do canal protnico deste complexo. Este tipo de sntese de ATP, que utiliza a energia do gradiente eletroqumico de prtons, denominado fosforilao oxidativa. Neste caso, diz-se que a fosforilao est acoplada ao funcionamento da cadeia de transporte de eltrons. por isso que a sintase do ATP tambm denominada Fator de acoplamento. Assim, para cada NADH oxidado na cadeia respiratria, so sintetizados 3 ATPs, e a oxidao de cada FADH2 resulta na sntese de 2 ATPs. Energeticamente, a oxidao completa de 2 piruvatos permite a formao de 8 NADH e 2 FADH2, que possibilita a sntese de 28 ATPs que, somados aos 2 ATPs sintetizados diretamente na fosforilao ao nvel de substrato, perfazem um total de 30 ATPs. Na gliclise, so produzidos 2 ATPs ao nvel do substrato e 2 NADH. Os NADH citoplasmticos no conseguem penetrar no interior das mitocndrias e no tm acesso direto ao complexo I da cadeia respiratria. Entretanto, os seus eltrons podem ser transferidos para

alguns dos transportadores da cadeia respiratria, via sistema de lanadeira (catapulta de NADH) ou atravs de uma NADH desidrogenase adicional, localizada na face externa da membrana mitocondrial interna, presente apenas em mitocndrias de plantas. Neste caso, a energia liberada suficiente para a produo de apenas 2 ATPs para cada NADH citoplasmtico que for oxidado.

Figura 13 = Reaes metablicas da Catapulta de NADH. Ao invs do PEP originar piruvato na srie de reaes glicolticas normais, ele originar malato, consumindo NADH no citosol. O malato ento transportado para a mitocndria aonde ser transformado em piruvato ou oxalacetato, gerando o NADH agora dentro da mitocndria, o qual poder entoser utilizado pelo complexo 1.

Em resumo, a oxidao completa de 1 mol de glicose pelo processo respiratrio permite recuperar 36 ATPs que, energeticamente representam 40% do total da energia contida em um mol de glicose. Na verdade, este rendimento pode variar, dependendo de estarem, ou no, em operao as chamadas vias alternativas, que podem estar presentes nas mitocndrias vegetais.

4.4.4) Vias alternativas de mitocndrias de planta Na figura abaixo podemos visualizar a via predominante e algumas vias alternativas encontradas nas mitocndrias das plantas:

Figura 14 = Esquema representativo do transporte de eltrons pelas vias normais e alternativas na membrana interna da mitocndria.

As mitocndrias de tecidos vegetais podem apresentar certos complexos proticos adicionais na sua membrana interna, que no ocorrem nas organelas de animais. Tais complexos so constituintes do sistema de transporte de eltrons, sendo considerados como vias alternativas, que estariam atuantes apenas em certas situaes especiais. Eles so (ver tambm figura acima): a) Uma NAD(P)H desidrogenase adicional externa, localizada na face externa da membrana interna mitocondrial. Ela capaz de oxidar NADH e NADPH provenientes do citosol, dirigindo os pares de eltrons e hidrognios para as ubiquinonas, que seguem o caminho normal do restante da cadeia de transporte de eltrons. Neste caso, os eltrons no passam pelo complexo I, no havendo, portanto, a conservao de energia correspondente ao primeiro stio de ejeo de prtons. por isso que a oxidao de cada NAD(P)H citoplasmtico rende apenas 2 ATPs; b) Uma NADH desidrogenase adicional interna, localizada na face interna da membrana interna mitocondrial. Ela capaz de oxidar NADH da matriz mitocondrial, embora tenha menor afinidade que o complexo I por estas coenzimas. Tambm neste caso, os eltrons no passam pelo primeiro stio de conservao de energia (complexo I), resultando na sntese de apenas 2 ATPs por NADH que entra na cadeia respiratria por esta via; c) Uma oxidase terminal alternativa, localizada na face interna da membrana interna mitocondrial. Ela tambm denominada de oxidase insensvel ao cianeto, pelo fato de no ser inibida por cianeto, ao contrrio do que acontece com a citocromo oxidase. Esta oxidase alternativa recebe eltrons diretamente das ubiquinonas, entregando-os definitivamente ao O2, para formar H2O. Neste caso, os eltrons no passam pelos complexos citocromo bc1 e citocromo oxidase. Sem o envolvimento destes dois stios de ejeo de prtons, a produo de ATP reduzida, podendo resultar em apenas 1 ATP para cada NADH, caso a cadeia tenha se iniciado pelo complexo I. Se a cadeia respiratria for iniciada por uma

das NADH desidrogenases adicionais e finalizada pela oxidase terminal alternativa, nenhum ATP ser produzido, e toda a energia ter sido perdida como calor; d) Uma enzima desacopladora PUMP, localizada na membrana interna mitocondrial, a qual, atravs do transporte de fosfolipdeos, provoca o transporte de prtons do espao intermembranar para a matriz mitocondrial. Essa enzima pode ser ativada em plantas sob baixas temperaturas e na presena de outros estresses abiticos (mostrada somente na figura abaixo).

Figura 15 = Mecanismo proposto para a ao da PUMP.

As funes fisiolgicas destas vias no esto ainda completamente esclarecidas. Dentre elas, considera-se que as vias alternativas sejam importantes para: 1) Possibilitar a oxidao mitocondrial de NADH e NADPH produzidos no citoplasma; 2) permitir a operao da gliclise e do ciclo de Krebs mesmo sob nveis elevados de ATP, no sentido de garantir a produo de intermedirios metablicos, que podem ser desviados para outras vias metablicas; 3) permitir a continuidade de operao da cadeia respiratria (visando reciclar NAD+), quando a via que envolve os citocromos estiver saturada; 4) em certos casos, canalizar a energia da respirao para a produo de calor (rompimento da camada de gelo ou volatizao de compostos para atrao de insetos polinizadores); 5) contribuir para um mecanismo antioxidativo, reduzindo a sobrecarga de eltrons ou a excessiva polarizao da membrana interna da mitocndria, reduzindo o nvel de produo de radicais livres. Merece destaque a situao especial que ocorre nas espdices de algumas espcies da famlia das Arceas. Nestes casos, a maturidade funcional das inflorescncias

acompanhada por uma acentuada expresso da oxidase terminal alternativa. As reservas energticas so oxidadas rpida e intensamente e a operao desta via alternativa resulta em liberao de calor, que pode elevar a temperatura das inflorescncias em at cerca de 15C acima da temperatura ambiente. Isto permite a volatilizao de compostos aromticos, importantes na atrao de insetos para a polinizao.

5) Regulao da Gliclise
No metabolismo de carbono de folhas de plantas, a regulao da gliclise est intimamente ligada regulao da sntese da sacarose. A regulao da gliclise realizada principalmente por duas enzimas-chaves, que catalisam duas reaes praticamente irreversveis, e que decidem se a frutose-1,6-bifosfato, formada a partir da triose que foi transportada do cloroplasto ao citosol, segue em direo sntese de sacarose ou a piruvato via gliclise. Estas enzimas so a PFK-PPi e a FBPase. Essas duas enzimas so antagonicamente reguladas por um metablito presente em concentraes muito baixas: a frutose-2,6-bifosfato (F-2,6-BP). A concentrao desse metablito regulador , por sua vez, regulada pela concentrao de Pi no citosol, o qual regular a atividade de duas enzimas ligadas sntese / degradao da F-2,6-BP (Fig. 9). A sntese de F-2,6-BP depende da atividade da cinase da F-6-BP, enquanto a degradao depende da fosfatase da F-2,6-BP. o balano entre a atividade dessa cinase e atividade da fosfatase que determinar a concentrao desse metablito regulador (F-2,6-BP) no citosol de uma folha.

Figura 16 = Esquema da regulao da gliclise, apresentando a regulao por metablitos das enzimas envolvidas na sntese e degradao da F-2,6-BP, e seu conseqente efeito no direcionamento ou no da F-6-P para a gliclise.

Como comentado anteriormente, a sntese da sacarose compete com a gliclise pela F-1,6-BP. Um freio necessrio para controlar a sntese da sacarose, de forma a no colocar em risco a respirao. Assim, a concentrao de Pi no citosol aumenta quando da sntese da sacarose, o que ativa a cinase da F-6-P e inibe a atividade da fosfatase da F-2,6-BP, resultando em um dramtico aumento da concentrao de F-2,6-BP no citosol. Esse aumento resulta na ativao da PFK-PPi e na inibio da FBPase, o que acarreta aumento dos nveis da gliclise e diminuio da sntese de sacarose. Essa regulao resulta, ento, na diminuio da sntese de sacarose, evitando a reduo da gliclise a nveis crticos, que poderiam prejudicar o metabolismo da planta. Outros nveis de regulao ocorrem ao nvel da regulao alostrica de outras enzimas, as quais respondem a sinais de fome e de saciedade, os quais muitas vezes atuam ao nvel de uma mesma enzima (veja figura abaixo).

Figura 17 = Efeito de diferentes metablitos na regulao da respirao pela demanda. Setas em verde representam efeito positivo dos efetores metablitos. Quadrados vermelhos representam efeito negativo dos efetores metablito.

Entre os efetores alostricos de sinais de fome, esto, principalmente, o Pi, AMP e o ADP, os quais resultam na ativao das enzimas, resultando em estmulo respirao (estmulo sntese de ATP). So sinais de fartura os metablitos ATP, PEP, NADH, os quais, quando possuem suas concentraes celulares acrescidas, promovem a inibio da respirao (inibio da sntese de ATP e NADH). A atuao em conjunto desses sinais metablicos essencial na regulao da respirao pela demanda energtica da clula, e tambm mantm a homeostase das concentraes dos metablitos da respirao.

6) Alteraes na Gliclise em Plantas sob Condies de Hipxia


Em condies de hipoxia, ocorre uma dramtica inibio do Ciclo de Krebs e da cadeia de transporte de eltrons, resultando em um acmulo de piruvato no citosol. Esse acmulo o gatilho que ir acionar a respirao anaerbica. A inibio dessas duas outras fases da respirao resulta, ento, em dramtica reduo do ATP ao nvel celular. Para sobreviver essa deficincia, plantas desenvolveram mecanismos de tolerncia hipoxia Duas formas de fermentao ocorrem em plantas: a lctica e a etanlica. Energeticamente, a lctica mais favorvel, sendo sempre a primeira forma de respirao anaerbica que ocorre em plantas, sendo seguida da fermentao etanlica, a qual leva a maior perda de energia (tanto na descarboxilao do piruvato como na queima do NADH). As plantas possuem uma capacidade limitada para a fermentao lctica, devido ao fato de que o lactato resulta em decrscimo do pH celular, prejudicando o metabolismo da planta. Assim a reduo no pH inibe a enzima lactato desidrogenase e ativa a piruvato descarboxilase; isto faz com que a planta mude para uma fermentao etanlica, a qual predomina em relao lctica.

Figura 18 = Regulao das rotas fermentativas nas plantas. Mecanismo tambm explica a predominncia da fermentao etanlica em relao a fermentao ltica (efeito diferencial do pH nas duas enzimas apresentadas.

A funo da respirao anaerbica repor o NAD+ oxidado, substrato da gliclise, sem a qual o resultado seria a inibio da gliclise.

7) Via das Penntose Fosfato (PPP)


Tambm denominada de Via Oxidativa das Pentoses, Desvio da Hexose-Fosfato, ou Via do Fosfogluconato. Corresponde a uma oxidao da molcula de glicose, onde um dos primeiros intermedirios o gluconato-6-fosfato, que sofre uma oxidao descarboxilativa, resultando em ribulose-5-fosfato e NADPH. Os dois produtos principais so o aldedo fosfoglicrico (PAG) e a frutose-6-fosfato, ambos tambm intermedirios da gliclise e do ciclo de Calvin. A via da pentose-fosfato, alm de ser uma fonte de poder redutor (NADPH) no citosol, apresenta ribose-5-fosfato e eritrose-4-fosfato como intermedirios importantes, que podem ser desviados para a sntese de nucleotdeos e de compostos fenlicos, respectivamente. Esta via ocorre principalmente no citosol, mas noite tambm ocorre nos cloroplastos, onde inibida pela luz e por NADPH.

Figura 19 = Ciclo das Pentoses Fosfato

A seguinte equao simplificada pode representar globalmente o que ocorre nesta via:

Os NADPH produzidos podem ser oxidados nas mitocndrias, com consumo de O2 e aproveitamento da energia para sntese de ATP, ou podem ser utilizados em processos biossintticos diversos, como a sntese de lipdeos.

Figura 20 = A gliclise, a rota das pentoses fosfato e o ciclo do cido ctrico contribuem com precursores para vrias rotas biossintticas em plantas superiores. As rotas mostradas ilustram a extenso com a qual a biossntese vegetal depende do fluxo de carbono por meio destas rotas e enfatizam o fato de que nem todo o carbono que entra na rota glicoltica oxidado a CO2.

8) Fatores que afetam a respirao


8.1) Disponibilidade de substrato Dentre os compostos orgnicos disponveis, os carboidratos so os mais freqentemente utilizados. Como, de um modo geral, os carboidratos so os compostos produzidos de imediato pela fotossntese, a taxa respiratria vai depender da quantidade de carboidratos que ser direcionada para os processos oxidativos. Assim, quanto maiores forem

as taxas fotossintticas, maior ser a disponibilidade de substratos e maiores tendem a ser as taxas de respirao. Conseqentemente, fatores diversos, como a posio e a idade da folha, assim como o perodo do dia, interferem na intensidade das taxas respiratrias. Assim, a respirao mais elevada durante o dia que noite, menor numa folha mantida sombra do que numa folha sob luz solar, e menor no final do perodo noturno do que logo aps o anoitecer.

8.2) Disponibilidade de Oxignio


Em condies normais, o oxignio raramente chega a representar problema para a respirao das plantas. Isto porque a citocromo oxidase tem afinidade extremamente elevada pelo oxignio, podendo operar sob tenses de 0,05% da tenso de O2 do ar.

Figura 20 = Efeito da concentrao de oxignio na taxa respiratria. O incremento da respirao a baixas tenses de oxignio chamado de Efeito Pasteur

Limitaes respirao podem ocorrer em rgos volumosos, que podem apresentar menor nvel de oxignio disponvel na parte mais interna dos tecidos. Neste caso, importante a participao dos espaos intercelulares na difuso de gases, do exterior at o interior do rgo. Tais espaos podem representar de 2 a 45% do volume total do rgo. Por exemplo, em batata existe cerca de 1% de espaos areos, que se elevam para 8% em razes de milho, chegando a 26 % em razes de arroz. Em razes de plantas mantidas em solos alagados (sob condies de hipoxia ou anoxia), podem ocorrer adaptaes, como o desenvolvimento de aernquimas, razes adventceas, ou de pneumatforos (tpicos de plantas de mangue).

Figura 21 = Mecanismos de tolerncia do sistema radicular a baixos nveis de oxignio no solo.

De um modo geral, quando se submete um rgo a tenses reduzidas de O2, observa-se uma reduo da sua atividade respiratria, proporcional concentrao de O2 utilizada. Entretanto, se o O2 cair a nveis muito baixos (prximos da anoxia), a atividade fermentativa estimulada, resultando em consumo intenso dos substratos respiratrios e conseqente liberao de grandes quantidades de CO2 (Figura 22). Este estmulo liberao de CO2 (pela fermentao), resultante de baixas tenses de O2, denominado Efeito Pasteur. Por isto, quando se armazena frutos sob atmosfera controlada (geralmente com reduo na tenso de O2, aumento na concentrao de CO2 e reduo da temperatura), deve-se tomar o cuidado para no reduzir demais a concentrao de O2 da cmara. A fermentao freqente em algumas sementes (especialmente as de maior tamanho), pelo menos no incio da germinao, uma vez que seus tegumentos tendem a ser impermeveis, dificultando a penetrao tanto de gua como de O2. Existe um caso extremo de adaptao, apresentado por sementes de arroz. Se tais sementes estiverem germinando em solos alagados, a sua atividade fermentativa suficiente para garantir, em primeiro lugar, o desenvolvimento do coleptile, ao invs da radcula, como acontece na maioria das sementes. A parte area da plntula continua o seu alongamento, at que seja atingida a atmosfera, quando os ramos transferem oxignio para permitir a iniciao e o crescimento das razes. As plantas apresentam as seguintes estratgias de tolerncia a hipoxia: 1) Aumento da gliclise e paralela induo da fermentao anaerbica: resultam no aumento da mobilizao das reservas, de forma a manter os nveis mnimos de ATP requeridos para a sobrevivncia e/ou crescimento. 2) Diferenciao de tecidos ou rgos de forma a aumentar o transporte de ar entre os diferentes rgos da planta (Ex: lenticelas, razes adventcias, pneumatforos, diferenciao do aernquima).

Transdutore s de sinal

Alterao metablica celulase Xiloglucanas e

Resposta
Morte celular programada Degradao do protoplasma Degradao da parede

Resposta Aernquima lisgeno

Hipxia

etileno [Ca]

Figura 22 = Representao esquemtica do mecanismo de diferenciao de um aernquima lisgeno por uma raiz na presena de baixos nveis de oxignio.

8.3) Temperatura
A temperatura afeta de maneira ampla a atividade de respirao. Ela capaz de alterar a difuso de gases, a integridade de membranas e, especialmente, a atividade enzimtica. A temperatura tima varia com a espcie e o tecido considerado. Em geral, a respirao aumenta at cerca de 30-35 C, sendo que em torno de 40 C inicia-se o processo de desnaturao das enzimas. Comparativamente, o efeito da temperatura mais pronunciado na fotossntese do que na respirao.

8.4) Tipo e idade da planta


A taxa respiratria dos diversos rgos vegetais pode variar amplamente, dependendo dos diversos tipos celulares que podem estar presentes. Por exemplo, rgos que apresentem grande nmero de clulas muito vacuoladas ou uma grande proporo de clulas mortas (como no lenho), tendem a apresentar taxa respiratria mdia reduzida, apesar de terem atividade respiratria semelhante a de um outro rgo qualquer. A atividade similar torna-se evidente quando se expressa a respirao em relao ao contedo de protenas do rgo.

Em geral, existe uma correlao direta entre a taxa de crescimento da planta e a taxa de respirao. Assim, a respirao elevada durante o perodo de maior crescimento vegetativo e, aps um perodo de estabilidade, observa-se uma queda gradual da taxa respiratria global com a idade da planta, embora ela possa manter-se alta em certas partes, como folhas, razes e flores em crescimento (Figura 23). Em sementes, comum encontrarmos taxas respiratrias extremamente baixas, podendo chegar a zero em certos casos, onde a dessecao resulta no desligamento do metabolismo.

Figura 23 = Taxa respiratria durante o desenvolvimento de uma espcie de planta de ciclo anual.

Em frutos, a taxa de respirao elevada durante a sua formao, quando as clulas esto se dividindo e crescendo rapidamente. Em seguida, a respirao declina gradualmente. Entretanto, alguns tipos de frutos, durante a sua maturao, voltam a apresentar um pico respiratrio, denominado climatrio, acompanhado por uma rpida acelerao no processo de amadurecimento (Figura 36). Mas, tomates, abacates, bananas e caquis so alguns exemplos de frutos climatricos. Ao contrrio, laranjas, uvas, abacaxis e morangos so exemplos de frutos no climatricos.

Figura 24 = Respirao em frutos climatricos e no climatricos. Frutos climatricos apresentam um surto respiratrio aps o final da maturao de um fruto.

Este aumento da respirao em frutos climatricos corresponde a um pico na produo de etileno (um hormnio), o qual proposto estar associado ao aumento da respirao e induo da expresso gnica de protenas envolvidas em modificaes no metabolismo de carboidratos (transformao de amido em acares solveis) e da parede celular (degradao de componentes da parede por poligalacturonase, galactosidases, por exemplo). Nos frutos no climatricos, essas modificaes j se realizaram durante todo o perodo de maturao do fruto, enquanto nos frutos climatricos, essa fase se concentra no final da maturao.