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INFLUENCIA DE DIVERSOS FACTORES EN LA ACTIVIDAD ENZIMATICA Jeison Rosero, Anghy Ruiz, Danilo Tapia Departamento de química (Universidad de Nariño

) Pasto (Nariño-Colombia) anghy-r@hotmail.com 2 ‫210 ‏‬

RESUMEN : En este laboratorio se van a observar las diferentes situaciones en la que se afecta la actividad enzimática de la a-amilasa, la cual se encuentra en la saliva y en el páncreas pero en este caso utilizaremos la amilasa salival (1,4-glucano-glucanohidrolasa). Se realizo varios procedimientos como lo fueron la temperatura, el pH, la concentración optima, la especificidad de la enzima y los metales pesados que actuan sobre esta, para observar en cuál de estos se miraba más afectada la enzima. En la temperatura se tomo en 4 fases, se agregaron 3 tipos diferentes de pH, diferentes medidas de pH y amilasa para la concentración, para la especificidad de la enzima se utilizo la pepsina y la ureasa y para la actividad con metales pesados se utilizo el Hg y el Pb.

INTRODUCCION: Lo primero que se realizo fue la obtención de la amilasa salival de uno de los integrantes de cada grupo, luego se completamos con agua destilada en una probeta hasta obtener 100 ml y así poder trabajar en los diferentes procesos. Rotulamos todos los tubos de ensayo que se utilizaran con los diferentes reactivos, también preparamos un mechero con su respectivo trípode y placa, en este aremos el baño maría de algunos de los elementos que lo requieran, un termómetro para controlar la temperatura del almidón en los tubos de ensayo que serán calentados en baño maría a 38°C la cual es la temperatura optima a la que actúa la enzima.

RESULTADOS: INFLUENCIA DE LA TEMPERATURA SOBRE LA ACTIVIDAD DE LA AMILASA SALIVAL P ara realizar este proceso lo hicimos desde 4 temperaturas diferentes las cuales fueron a 0,20, 40,y90°C . En el tubo uno se puso en baño se hielo por 10 minutos hasta que alcance la temperatura de cero grados, el segundo se dejo a temperatura ambiente, el tercero se llevo a baño maría al igual que el cuarto llevando el uno hasta los 40° y al otro hasta los 90°C. luego de este proceso a cada uno de los tubos se les agrego 0,5 de amilasa salival agitándolo dejándolos a su respectiva temperatura por un minuto más, después de esto se agregan 5 gotas del contenido en una placa previamente con lugol y se espera los respectivos colores A 0°C se inhibe la actividad de la enzima dando una coloración oscura con lugol a 20°C da un color más claro pero aun así la enzima no trabaja de una manera optima, a 40°C el coloe es una amarillo ocre el cual es el adecuado cuando la enzima trabaja adecuadamente, por último a los 90°C también se inhibe la acción de la enzima dando un color oscuro con el lugol. INFLUENCIA DEL PH EN LA ACTIVIDAD ENZIMATICA Tubo 1 2 Solucion almidón 2 ml 2 ml Amortiguador pH 3.0 4 ml Amortiguador pH 5.0 4 ml Amortiguador pH 7.0

3 2 ml

4 ml

3.7.Amilasa salival 0.5% Amortiguador de ph optimo Amilasa salival 1 4ml 5. 0.3ml 3 4ml 5'1ml 0.5% 2ml Amortiguador de pH 4ml optimo Amilasa salival 1ml Pepsina Ureasa PEPSINA 2ml 4ml UREASA 2ml 4ml 1ml 1ml En diferentes tubos se puso amilasa. 0. y también diferentes cantidades de amilasa salival 0. pepsina y ureasa se los llevo a baño maría hasta que alcance la temperatura optima. en los demás resultados nos dio un color oscuro en donde la enzima no trabajara.3ml 2.9.7ml 0.9ml 4 4ml 3. la actividad de la enzima es buena a pH 3 en el cual se observara el color amarillo ocre.5 ml 0. 5. los demás pH darán un color oscuro. CONCENTRACION OPTIMA DE LA ENCIMA Tubo Solución Almidón 0.5.7.9ml 0. primero agregamos el almidón en el tubo de ensayo lo llevamos a baño maría hasta que alcance la temperatura optima . EFECTO DE LOS IONES METALICOS PESADOS SOBRE LA ACCION DE LA AMILASA Tubo Amilasa Solucion Almidon 0.1.7 el color con el lugol es un color ocre claro sabiendo así que la enzima trabajara.1ml 2 4ml 5.2.5 ml 0.1. aquí se agrego 2ml de almidón y 4ml de amortiguador luego se saco 5 gotas en una placa con lugol la enzima solo trabajar con la amilasa salival dando con el lugol un color amarillo ocre.3.5% 2ml Amortiguador de pH 3ml Hg 2ml 2ml Pb 2ml 2ml . luego se agrego diferentes cantidades de amortiguador de pH como lo fueron 5. 5 y 9 y llevándolos a baño maría hasta alcanzar la temperatura optima (38°C) .3. siguiendo en baño maría agregamos la amilasa salival sacamos 5 gotas de cada uno de los tubos en una placa ya con lugol. ESPECIFICIDAD DE LA ENZIMA TUBO AMILASA Solucion Almidon 0. se observo que a pH 3 y 2.9.7ml Este factor que afecta a la enzima. le agregaremos distintas concentraciones de amortiguador de pH y amilasa salival para observar en cuál de estas trabaja la enzima de manera adecuada.5 ml En la primera reacción mesclamos en 3 tubos de ensayo con 2ml de almidón en donde a cada uno se le agrego 4 ml de un amortiguador de pH diferente 3.

3 ml de amortiguador en la amilasa y 2 ml en los demás. . ahí se agrego 2ml de almidón.optimo HgCl2 1% Pb(NO)2 Amilasa salival 1ml 1ml 1ml 2ml 1ml se rotulo tres tubos de ensayo en los cuales se puso amilasa. Hg. y a cada uno 1 ml de amilasa salival luego se sacaron 5 gotas en una placa con lugol dando un color amarillo ocre solo en la amilasa salival. Pb. DISCUCION: Los diferentes resultados en la práctica fueron la variedad de factores los diferentes factores que afectaron la enzima y como estos procesos fueron realizados por nosotros los estudiantes en donde pudo haber errores en la temperatura o en el agregado de los diferentes reactivos. ahora se tiene claro que estos factores son específicos y que tienen una enzima trabaja con una respectiva temperatura y un determinado pH. llevándolos a baño maría hasta que alcanzara la temperatura optima. con Pb dio un amarillo mas oscuro.