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CAPITULO 11

Surco menor

[•'¡gura 11.9. (arriba) Modelo de espacios atómicos de la doble hélice de DNA. (abajo) Representación de un segmento corto desenrollado de pares de nucleótidos, en el que se aprecia cómo los emparejamientos A-T y G-C producen las proporciones de Chargaff. Este modelo corresponde a una de las diversas formas del DNA, llamada forma B (véase fig. 11.10). (Modela de espacios atómicos tomado de C. Yanofsky, «Gene structure and Protein Structure». Copyright © 1967 de Scientific American, Inc. Reservados todos los derechos. Estructura desenrollada basada en A. Konberg, «The Synthesis of DNA». Copyright © 1968 de Scientific American Inc. Reservados todos los derechos.)

propiedad esencial de la molécula genética había sido un misterio. 2. La estructura hace pensar que quizás la secuencia de pares de nucleótidos en el DNA es la que determina la secuencia de aminoácidos de la proteína dictada por un gen. En otras palabras, algún tipo de código genético podría escribir información en el DNA como una secuencia de pares de nucleóti. dos y luego traducirla en un lenguaje diferente de secuencias de aminoácidos en la proteína. Estos datos básicos sobre el DNA son ahora familiares a casi cualquiera que haya leído un texto de biología en una escuela primaria o secundaria, o incluso en periódicos y revistas. Puede parecer trivial y obvio, pero trate de traladarse al escenario de 1953 e ¡imagine la excitación de entonces! Hasta ese momento, la evidencia de que el poco interesante DNA era el material genético resultaba descorazonadora y decepcionante. Pero la estructura de Watson y Crick abría de repente la posibilidad de explicar dos de los grandes «secretos» de la vida. James Watson ha contado-la historia de este descubrimiento (desde su peculiar punto de vista, fuertemente cuestionado por

otros) en un libro fascinante, titulado «La doble hélice», que revela el intrincado juego entre personalidades científicas, las inteligentes apreciaciones, el trabajo duro y el puro azar, que rodearon tan importante avance científico.

Estructuras alternas Además de las formas A y B del DNA, se ha encontrado un nuevo tipo de estructura en cristales de un DNA sintético que contiene purinas y pirimidinas, alternadas sobre la misma cadena. Esta forma de DNA, la forma Z, tiene un esqueleto en forma de zigzag y forma una hélice «a izquierdas». Los dibujos en perspectiva de las figuras 11.11, 11.12 y 11.13 nos permiten comparar estas tres formas sobre la base de unos datos precisos obtenidos con estructuras cristalinas de secuencias sintéticas cortas de DNA, llamadas oligonucleótidos. Que la forma Z ocurra o no en la naturaleza es una cuestión que todavía se sigue debatiendo.

Los esqueletos de azúcar-fósforo se representan como línea y la secuencia de pares de bases es aleatoria. conservativa y dispersiva (fig. . En el DNA A. Vemos que si la analogía de la cremallera es válida el desenrollamiento de las dos cadenas dejará expuestas las bases de cada una de ellas.14 muestra un diagrama del posible mecanismo de replicación propuesto por Watson y Crick. Se supone que los nuevos nucleótidos incorporados proceden de la reserva de nucleótidos libres que debe encontrarse en la célula. (a) DNA A. Pensando un poco veríamos que la molécula de DNA parental podría estar relacionada con las moléculas hijas de tres formas diferentes.14) y otra sintetizada de nuevo (línea de color). cada molécula hija debe contener una cadena de nucleótidos parental (línea negra en la figura 11. Replicación de! DNA Replicación semiconservativa La figura 11. 11. Si este modelo es correcto. cada una de las cadenas actuará como molde.10. Los esquelos azúcar-fosfato de la doble hélice se representan como cintas y los pares de bases como peldaños. cada base expuesta emparejará sólo con su complemen- taria.LA ESTRUCTURA DEL DNA \ (b) Figura 11.15). Dada esta complementariedad de bases. y empezará a reproducir una hélice doble idéntica a la que se abrió. los pares de bases están algo inclinados y desplazados del eje de la doble hélice. Debido a la estricta restricción de emparejamientos impuesta por la estructura del DNA. Dibujo esquemático de la estructura de dos formas del DNA. Estas formas diferentes se denominan semiconservativa (el modelo de Watson y Crick). los pares de bases del DNA B están situados justo sobre el eje de la hélice y son perpendiculares al mismo. o plantilla. Por su parte. Las bases conceptuales de estos dibujos derivan de los análisis de fibras de DNA realizados por Strutter Arnott y otros. En la replicación semiconservativa. Esta predicción se ha sometido a prueba tanto en procariotas como en eucariotas. Imaginemos que la doble hélice es como una cremallera que se abre a partir de un extremo (el inferior de la figura). (b) DNA B.

11. Figura 11. Nótese cómo los grupos fosfato (P) de cadenas opuestas están enfrentados unos con otros a través del surco ^mayor. Este dibujo en perspectiva se ha generado por repetición de las seis bases centrales del octámero GGTATACC. Este dibujo en perspectiva se ha generado por repetición de las 10 bases centrales del dodecámero CGCGAATTCGCG. . Hélice de DNA B. Hélice de DNA A. Nótese el giro amplio de la hélice respecto al DNA A y cómo este giro mejora el apilamiento de las bases a lo largo de cada cadena.278 CAPITULO 11 Figura 11.12.

Las cadenas complementarias aparecen en distinto color.14.13. El modelo de replicación del DNA propuesto por Watson y Crick está basado en la especificidad de los puentes de hidrógeno entre las bases. Hélice de DNA Z. Los grupos fosfato de cadenas opuestas están ahora enfrentados unos con otros a través del profundo surco menor. Figura 11.LA ESTRUCTURA DEL DNA 279 tfgnra 11. . generada a partir de las cuatro bases centrales de CGCGCG. Este dibujo representa la estructura de una hélice «a izquierda» de citosinas y guaninas alternadas.

se establece un gradiente de iones Cs! y CI" en el tubo. respectivamente. respectivamente. La flotabilidad del DNA depende de su densidad (la cual.16).280 CAPITULO 11 fondo del tubo. De esa manera. justo donde la fuerza centrífuga compensa la flotabilidad de las moléculas en el gradiente de cloruro de cesio.). y la segunda generación produce dos bandas: una intermedia y otra ligera. refleja la relación de pares G-C a pares A-T). si el experimento se inicia con cromosomas constituidos por hélices dobles individuales (figura 11. Este es el resultado esperado del modo de replicación semiconservativa.17). tomando muestras después de una y dos divisiones celulares. Tras muchas divisiones celulares en presencia de N15. Cuando células cultivadas en N. el DNA formaba una única banda. Al final. Pero en su trayecto hacia abajo. Las líneas coloreadas representan las cadenas sintetizadas de nuevo. la primera generación produce una banda de DNA intermedia. El DNA extraído de células que han crecido durante mu- Conservativa Dispersiva chas generaciones en medio con N15 puede distinguirse con facilidad del DNA de las células que lo han hecho en medio con N14. de cada hélice doble hija contiene una cadena parental y otra recién sintetizada.15. Tres formas alternativas de replicación del DNA. Meselson y Stahl comprobaron que una generación después de que las células «pesadas» se trasladaron a medio con N14. zan en el gradiente de cloruro de cesio. densidad intermedia entre las densidades de los controles pesado y ligero. Cultivaron células de E. El experimento de Meselson y Stahl Incubación de células En 1958. los iones del cloruro son empujados por la fuerza centrifuga hacia el «pesadas» en N11 Centrifugación de DNA en un gradiente de cloruro de cesio (CsCl). por la posición de equilibrio que alcan- Figura 11. a su vez. en vez del isótopo ligero normal (N14). separaron las células del medio con N15 y las pusieron en un medio con Nu. sin embargo.s se transfieren a medio con N14. Matthew Meselson y Franklin Stahl se propusieron distinguir de manera experimental entre esas tres posibilidades. el DNA formaba dos bandas: una en la posición intermedia y la otra en la posición ligera (fig. .m. que fueron incorporándose a su vez a las nuevas cadenas de DNA. Tales muestras se denominan familiarmente DNA «pesado» y «ligero». Los cultivos crecidos durante muchas generaciones en medio con N15 o N14 permiten establecer los controles de posición de las bandas de DNA «pesado» y «ligero». La replicación dispersiva da lugar a dos moléculas hijas cuyas cadenas contienen ciertos segmentos de DNA parental y otros sintetizados de nuevo. Extrajeron el DNA de las células de cada una de estas muestras y lo pusieron en una centrífuga. El isótopo pesado se incorporó a las bases nitrogenadas. de hecho. Después de dos generaciones en medio con N14. debido a la flotabilidad del DNA (su tendencia a flotar). una hélice doble hija tiene las dos cadenas sintetizadas de nuevo y se conserva la hélice doble parental. en una solución de cloruro de cesto (CsCl). todo el DNA de las células debería estar bien marcado con el isótopo pesado. el resultado sólo es compatible con este modelo. el DNA se «deposita» finalmente en cierta posición del tubo. coli en un medio que contenía un isótopo pesado del nitrógeno (N15). Entonces. 11. En la replicación conservativa. encuentran una concentración de sal cada vez mayor que tiende a empujarlas de nuevo hacia arriba. Si el cloruro de cesio se centrifuga durante muchas horas a velocidades enormes (50000 r. con mayores concentraciones de Semiconservativa (Watson y Crick) ellos en el fondo. También las moléculas de DNA en solución son empujadas hacia el fondo por la fuerza centrifuga.p. La presencia del isótopo más pesado del nitrógeno cambia la densidad de flotación del DNA. El modelo de Watson y Crick corresponde a la primera forma (semiconservativa).

en 1958. Dejó que las células realizaran la mitosis en esta solución. Al descomponerse. Estos resultados pueden interpretarse representando cada cromátida como una molécula única de DNA que se replica de forma semiconservativa (fig.16.17. una banda intermedia en la primera generación y una intermedia y otra ligera en la segunda generación. La autorradiografía es un método en el que. de forma que las emisiones de las partículas beta aparecen como granos o manchas negras. Al colocar una lámina de emulsión fotográfica sobre una célula que contiene H3. Esquema de la autorradiografía de cromosomas de células cultivadas durante un ciclo de división en presencia del isótopo radioactivo del hidrógeno H! (tritio).LA ESTRUCTURA DEL DNA 281 Aspecto cuando se añade colchicina en la primera división p¡n ¡a Aspecto cuando primera sfi añade división colchicina en la segunda división ¡■'¡¡jura 11. La figura 11. Taylor puso las células de raíz en una solución que contenía timidina tritiada (tim¡dina-[H3]).' Posible interpretación de la figura 11. (Véase la explicación de los símbolos en la figura 11. de manera que la timidína-[H3] pudiera incorporarse al DNA. utilizando técnicas citológicas.19). coli de Meselson y Stahl fue prácticamente repetido con cromosomas de células de raíces de judías por Herbert Taylor.) ces como una fotografía.15. las estructuras celulares radioactivas «se fotografían a sí mismas». en efecto. produce una reacción química allí donde una partícula beta choque con la emulsión. La adición de colchicina a esta preparación inhibe la formación del huso acromático. . Cada punto representa la huella dejada por una partícula de radioactividad. se Hi'iiva 1 U‘. Las lineas coloreadas representan cadenas radioactivas. Sólo el modelo semiconservativo de replicación del DNA predice resultados como los de la figura 11. la célula puede teñirse para hacer visibles sus estructuras e identificar la fuente de la radioactividad. Autorradiografía El experimento con E. La localización celular del H3 puede hacerse mediante autorradiografía. de manera que los cromosomas metafásicos no se separan y las cromátidas hermanas permanecen unidas entre sí por el centròmero. Esta puede revelarse enton¡■¡gura 11.18 a nivel del DNA.13. 11.18 muestra los resultados observados cuando se añade la colchicina durante la división en timidina-[H3] o durante la división mitótica siguiente. el nucleótido timidina marcado con un isótopo radioactivo del hidrógeno llamado tritio. Lavó entonces las puntas de raíz y las trasladó a una solución que contenía timidina no radioactiva. el H3 emite partículas beta (electrón con energía). Además.

sólo en un cromosoma humano hay suficiente DNA para alargarlo hasta tres o cinco centímetros. sin necesidad de autorradiografia.19 ponen de manifiesto una de las grandes cuestiones genéticas que quedan por resolver: un cromosoma eucaríótico ¿es esencialmente una única molécula de DNA rodeada por una matriz de proteína? Dos hechos apoyan fuertemente que así es. Los cromosomas al teñirse con Giemsa y un colorante fluorescente.21. Entonces. Mire la figura 11. El tema del empaquetamiento de una molécula larga de DNA se trata en el capítulo 14. Todos los datos de ligamiento (capítulo 5) nos dicen que no necesitamos más que una única serie lineal de genes por cada cromosoma para explicar los fenómenos genéticos. de Sheldon Wolf y Judy Bodycote. Estudios recientes con cromosomas aislados y largas moléculas de DNA apoyan la idea de que cada cromátida es una molécula única de DNA. La estructura del cromosoma Las figuras 11. En este método. Como acabamos de mencionar. que propone una replicación cromosómica durante la meiosis.) . extremos con extremos. Cromosomas en arlequíwde células de ovario de hámster chino (CHO). en efecto. sería casi imposible que los cromosomas se replicaran de forma semiconservativa (yendo todo el material marcado a una cromátida. este procedimiento produce los llamados cromosomas en arlequín (fig. (Ello plantea otro problema interesante: ¿en qué forma está empaquetada esta larguísima molécula que permite una fácil replicación?) El segundo hecho que apoya la hipótesis de una única molécula es que el DNA y los genes se comportan como si estuvieran unidos extremo con extremo en una única ristra o cadena. Este resultado da otro empujoncito a la tumba al modelo de elección de copia del entrecruzamiento (capítulo 5). u orientadas al azar). Las cadenas de DÑA sintetizadas en presencia de bromodeoxiuridina se tiñen de manera diferente que las cadenas del DNA «original». es posible visualizar la replicación semiconservativa de los cromosomas en mitosis.282 CAPITULO 11 Cromosomas en arlequín Usando una técnica de tinción más moderna. según los resultados de Taylor).21 y trate de imaginar cómo esto sería posible. La razón de este patrón es exactamente la misma que la de la figura 11. que sustituye a la timidina en el DNA sintetizado de nuevo. los cromosomas en arlequín son particularmente adecuados para detectar intercambios entre cromátidas hermanas durante la mitosis. hay demasiado DNA en un cromosoma como para que pueda extenderse li- ¿Lado a lado? ¿Extremo con extremo? ■— Figura 11.19. se tiñen los cromosomas con Giemsa y con un colorante fluorescente. Por ejemplo. El método consiste en dejar que los cromosomas pasen dos ciclos de replicación en presencia de bromodesoxiuridina (BUdR). Arriba (véanse flechas). Ninguno de estos modelos puede reconciliarse fácilmente con los datos que apoyan el modelo de replicación semiconservativa del DNA. Algunas alternativas teóricas de empaquetamiento del DNA en un cromosoma eucaríótico. un cromosoma hermanas. ha sufrido dos intercambios entre cromátidas (Fotografía cortesía ¿Apiladas? ¿Aleatoriamente? ( Figura 11.20).20 se ven dos ejemplos. se deja que los cromosomas sufran dos ciclos de replicación en presencia de bromodeoxiuridína (BUdR).18 y 11. En primer lugar. toman la apariencia de la figura. que llamamos grupo de ligamiento. y suficiente DNA en un núcleo para alargarlo hasta un metro. (De paso. en la figura 11. nótese que. Esto significa una molécula muy larga. Taylor demostró que la replicación cromosómica durante la necrosis es también semiconservativa. si hubieran muchas moléculas de DNA en el cromosoma (ya sean dispuestas unas al lado de otras.) Usando técnicas similares. 11.20. Las cadenas de DNA replicadas de nuevo en BUdR se tiñen de forma diferente a las cadenas de DNA «original».

En esta estructura 0. se extrae entonces el DNA y se hace una autorradiografia. Autorradiografia La horquilla de replicación Una predicción del modelo de replicación del DNA de Watson y Crick es que debe encontrarse una horquilla en la molécula de DNA durante su replicación. Cairns extrajo el DNA de las células. La replicación parece comenzar en distintos sitios de estos cromosomas eucarióticos. En células superiores la replicación progresa a partir de múltiples puntos u orígenes. y progresa luego bidireccionalmente. Figura 11. lo puso en un portaobjetos y lo autorradiografió. Durante el segundo ciclo de replicación. £1 origen de replicación La replicación se inicia en las bacterias a partir de un origen fijo. Gire una cinta de goma con sus dedos y compruebe cómo se enrolla. Según el modelo de replicación semiconservativa. Las ideas actuales (apoyadas por buenas pruebas microscópicas) apuntan a un proceso de enrollamiento y superenrollamiento del DNA. Teóricamente. hecho que se deducía también de los datos genéticos descritos anteriormente (capítulo 10). caza y autorradiografia de la replicación de los cromosomas politécnicos (gigantes) de Drosophila. revela muchas regiones en replicación dentro de un mismo brazo cromosómico (figura 11. Freeman and Company.21 En ella resulta aparente que el cromosoma bacteriano es circular. Figura 11. Diagrama de la replicación del DNA avanzado en las dos direcciones a partir del origen. H. Así y todo. timidina-[H3].23 se llaman formas theta (0). paso que denominamos caza. Además. correspondiéndose al movimiento progresivo de la cremallera de replicación. la densidad de granos en los tres segmentos era tal. Tras variar el período y el número de ciclos de replicación en medio «caliente». DMA synthesis. alrededor del anillo. puso a prueba esta predicción dejando que el DNA en replicación de células bacterianas incorporara timidina tritiada. Kornberg.24. y luego añadimos un exceso de timidina «fría». Cairns interpretó los anillos como se muestra en la figura 11. Debe estar empaquetado muy eflcientemente. que podía interpretarse como aparece en la figura 11. con horquillas en movimiento a ambos extremos de la zona en replicación.23. cada molécula hija sintetizada de nuevo debe contener entonces una cadena radioactiva («caliente») y otra no radioactiva («fría»). La figura 11. Un experimento similar de pulso.26).LA ESTRUCTURA DEL DNA 283 nealmente a lo largo del mismo. con lo que parecen ser diferentes regiones de la molécula de DNA replicándose simultáneamente. Tras un ciclo de replicación en aparecieron anillos de puntos en la autorradiografia.) . para observarlo luego al microscopio electrónico. Supongamos que exponemos una célula eucariótica brevemente a timidina-[H3]. paso que denominamos pulso. (izquierda) Autorradiografia de un cromosoma bacteriano después de un ciclo de replicación de timidina tritiada. (derecha) La doble densidad de las manchas radioactivas sobre el autorradiograma parece confirmar este modelo. así puede ocurrir con los cromosomas. [derecha) Interpretación de la autorradiografia.25 muestra el resultado de tal experimento. se vieron realmente las horquillas predichas por el modelo. Volveremos a este asunto en el capitulo 14. (Tomado de A. la hélice doble recién replicada que cruza el círculo tendría ambas cadenas radioactivas. u orquilla. Copyright © 1974 de W.24. no hay una prueba contundente de que estas regiones correspondan en realidad a diferentes Figura 11. en 1963. tal como aparece en la figura 11. John Cairns. Cairns observó toda clase de tamaños en estos patrones autorradiográficos en forma de luna. una de las dos cadenas debe de ser radioactiva.23.22. (izquierda) Autorradiografia de un cromosoma bacteriano durante el segundo ciclo de replicación en timidina tritiada. Formas como las que aparecen en la figura 11.

Forma de replicación de un cromosoma de gura ¡ 1.25. 11. Por ejemplo. se dan ciertas complicaciones (conforme vamos describiendo estas complicaciones.27 la replicación parece un proceso sencillo. el análisis de esta mezcla final de DNA puede considerarse como indicativa en gran manera de la naturaleza del DNA descendiente. Todas las polimerasas de DNA conocidas sintetizan nuevas Esta reacción funciona sólo con la forma trifosfato de los nucleótidos (como el trifosfato de desoxiadenosina o dATP).27 ilustra la reacción de elongación de la cadena. llamada «proteína de unión a DNA de cadena simple» (SSB) (fig. Stryer. una helicasa. que resume muchos de los pasos intermedios de la síntesis de DNA): 1. ya que las dos cadenas están entrelazadas. Esta rotación se lleva a cabo con la ayuda de catalizadores biológicos. que transforman anillos de DNA de una forma topològica a otra.) Drosoplüla revelada por autorradiografia. H.27. Las zonas de cadena sencilla están expuestas a ser degradadas. La doble hélice debe rotar durante el proceso de replicación. la cantidad total de DNA puede ser hasta 20 veces la cantidad del DNA de entrada.3 ed. En un mismo cromosoma se ven varios puntos de replicación señalados con flechas. catalizada por las polimerasas de DNA.28. Copyright © 198? de W. llamados puntos de iniciación de una única molécula de DNA. Al término de la reacción. La idea simple de una molécula abriéndose como una cremallera no es realmente correcta.29).30). Freeman and Company. (Figs. Reacción de elongación de la cadena catalizada por las polimerasas de DNA. 11. Figura ¡1. La figura 11. 11. Por tanto. o reacción de polimerización. Enzimologia de la replicación A finales de los años 50. la girasa de DNA. Aunque en la figura 11. 3. existirían varios puntos de replicación en una misma hélice doble de DNA. Biochemistry.284 CAPITOLO 11 fundamentalmente DNA descendiente. La forma superenrollada puede facilitar el desenrollamiento de la hélice (figura 11. que cataliza la siguiente reacción de replicación: DNA (parental) cebados + superenroliamientos (fig. tomadas de L. 2. Arthur Kornberg consiguió identificar y purificar una enzima.28). de manera que el DNA presente al final debe ser fioiirs ¡U6. Según la interpretación que se muestra. Una forma de replicación del DNA. Se extiende el DNA sobre un portaobjeto y se autorradiografia. una toposiomerasa. puede inducir retorcimientos del DNA. llamada polimerasa de DNA. revelada por autorradiografia. pero las protege otra proteina. probablemente está implicada en el desenrollamiento de la hélice. Una célula es expuesta brevemente a timidlna (H3) (pulso) y transferida luego a timidina no radioactiva (fría) en exceso (caza). La proteina «rep». . pueden interpretarse también como prueba de que los cromosomas están hechos de varias moléculas de DNA separadas. La estructura del cromosoma eucariótico es uno de los problemas genéticos más apasionantes no resueltos todavía (véase capitulo 14). enzimas llamadas topoisomerasas del DNA.27 y 11.31. mire la figura 11.

Copyright © 1988 de W. llamado superenrollamiento «negativo». sólo I. Superenrollamiento catalizado por la girasa de DNA. probapolimerasa Sabemos mientras una cadena es sintetizada de forma continua enzima ligasa del DNA.) 5'-»3’. la otra se fabrica de manera discontinua. La girasa puede abrir y cerrar enlaces fosfodiésteres. molde.. 3. (Modificado de L. la en no la por es dirección la enzima III. En este último que unidos caso. H.) . Strycr.LA ESTRUCTURA DEL DNA 285 cadenas enzima polimerasa blemente. mientras que si lo es. son por la polimerasa por III la la inicia su acción sobre muchos puntos distintos del dejando I y huecos luego rellenados la polimerasa acción de estudiada Kornberg. La girasa también puede generar superenrollamientos en la otra dirección. ira i 12!/. Freeman and Company.a ed. este último facilita la disociación de la doble hélice (véase la íig. (La primera ahora para la por la polimerasa III. La replicación del DNA genera un superenrollamiento «positivo» (parte inferior del dibujo) que resulta de la rotación rápida del DNA en la horquilla de replicación.28). Biochemistry. 11. llamada principal que replicación del DNA. relajando así el superenrollamiento (DNA relajado).

En esta forma superenrollada negativamente. inscritas erróneamente durante la polimerización. deben separarse las cadenas originales. El empleándose las cadenas originales como moldes (c). permitiendo que continúe la síntesis. La figura 11. una polimerasa con una función de síntesis 5'-*3' y otra de corrección por exonucleasa 3'->5 mantiene esta condición necesaria de la síntesis de DNA. Copyright © 1982 de Scientific American. (Tomado de J. Wang. resulta más fácil desenrollar la doble hélice. que requiere un extremo libre 3'—OH no apareado. La fabricación de las nuevas cadenas comienza entonces. La repücación de una molécula circular de DNA de cadena doble puede depender de la capacidad de una topoisomerasa de permitir que el DNA se desenrolle. en dirección 3'->5'. Uno de los mecanismos más frecuentes para duplicar una doble cadena circular es la fabricación de una cadena complementaria de cada cadena original. 11. (d) desenrollamiento es necesario probablemente para que Figura 11. la girasa superenrollada negativamente el anillo de DNA (a). la doble hélice debe ser desarrollada progresivamente. es necesario replicar la información constituida por la secuencia de pares de bases. «DNA topoisomerases». Acción exonucleásica 3'-» 5' de la polimerasa . Para construir las nuevas cadenas. después de lo cual los dos anillos de doble cadena se separarán.31 muestra la actividad exonucleasa 3'-*5'. G.CAPITULO 11 (a) (b) (c) comience la repücación en varios organismos (b). eliminando aquellas bases mal apareadas. por incorporación de un trifosfato de nucleótido libre. En la adición de cada base se requiere la hidrólisis de un enlace fosfato de alta energía. La actividad exonucleasa de corrección sería en dirección 5'-*3' y liberaría la base con el enlace fosfato de alta energía. Para que una célula se divida. La escisión regenera un grupo 3'—OH en el nucleótido anterior. Así pues. ¡bloqueando la continuación de la síntesis! Figura 11.) Tanto la polimerasa de DNA I como la polimerasa III poseen además una actividad exonucleasa. que cumple una función de «corrección de pruebas». Reservados todos los derechos. Ello debe de ocurrir con la ayuda de una o más moléculas de topoisomerasa (d). Para que continúe la replicación.31. de DNA I. En las bacterias. cada anillo está formado por una cadena original y otra nueva. Si las polimerasas actuaran en dirección 3'->5'.27) y el grupo —OH estaría en el nucleótido libre que se va a añadir. Inc.30. entonces el trifosfato estaría sobre la cadena en crecimiento (véase la fig.

En la parte izquierda del esquema. a su vez. DNA Synthesis. por ejemplo) pueden producirse roturas. Confirmaríamos esta suposición si pudiéramos demostrar que los mapas genéticos son coherentes con los mapas del DNA. 4. Dentro del fago. en dirección 5'-» 3'. como paso previo a su replicación o inserción. La circularización se produce al unirse los extremos complementarios («cohesivos») de cadena sencilla. Cuando un objeto lineal como la molécula de DNA se somete a tensiones mecánicas (mediante pipeteo o agitación. de que todas las poiimerasas actúen en dirección 5' -» 3' es que una de las cadenas deba fabricarse de forma discontinua. la cual elimina también el pequeño cebador situado al comienzo del fragmento de doble cadena al que ha llegado ahora. sobre todo en la parte central de la molécula. al hacerse disponibles nuevos segmentos de la cadena antigua. Este paso fue realizado por primera vez mediante algunas manipulaciones bioquímicas y genéticas elegantes. ya que todas las poiimerasas de DNA actúan en dirección 5'-* 3'. conforme la hélice se va desenrollando con la ayuda de la proteína rep. La consecuencia. puede comenzar la síntesis de fragmentos de la cadena nueva. Las regiones de cadena sencilla son estabilizadas por la proteina SSB.32). Kornberg. Circulación del DNA. junto con una segunda protema cifrada por dnuB. La síntesis simultánea de las dos nuevas cadenas de DNA se muestra en la figura 11. La polimerasa de DNA no puede empezar una nueva cadena sobre un molde de cadena sencilla. El DNA y el gen \ Hemos visto ya que el DNA es el material genético y que consiste en una secuencia lineal de pares de nucleótidos. pero una vez en el interior de la célula hospedadora se circulariza.28. sin que haya al menos una pequeña región de doble cadena que actúa como cebador. En la parte derecha del esquema. sobre el que la polimerasa de DNA III va añadiendo desoxinucleótidos hasta separarse de la cadena. (Tomado de A. Entonces. la enzima primasa.) . H. este proceso deja unos huecos que son rellenados por la polimerasa de DNA I. Al romperse el DNA Figura 11. ya que el extremo 5' de cada cadena tiene una prolongación terminal de 12 bases. Como puede verse en la figura. El DNA del fago Á resultó ser un trozo del DNA lineal que puede circularizarse. En las bacterias. Por ello. la nueva cadena se fabrica de manera continua. Copyright © 1974 de W. se conocen como extremos «cohesivos» o «pegajosos». ambos extremos pueden emparejarse y convertir el DNA en un círculo.LA ESTRUCTURA DEL DNA 287 Por esta razón no han aparecido en la evolución poiimerasas 3'-*5'. Freeman and Company. el DNA de A es lineal. la nueva cadena debe fabricarse de forma discontinua. complementaria del otro extremo 5' (figura 11.32. Así. sintetiza un cebador de RNA para la polimerasa III. Esta síntesis requiere una primasa para sintetizar primero un fragmento corto de RNA que sirva de «cebador». la enzima ligasa de DNA sella el último enlace. La conclusión inmediata es que el mapa de alelos constituye el equivalente genético de las secuencias de pares de nucleótidos en el DNA.