You are on page 1of 20

HU

Cinética de Enzimas

• • • •

Cinética de Michaelis-Menten Determinação de kcat (constante catalítica) Atividade específica Inibidores de enzimas: tipos e cinéticas - Inibição competitiva - Inibição não-competitiva

Equação da cinética enzimática .

k-2.[ES] é constante. [E] <<<[S] . é improvável 3. Enzima e substrato se unem para formar o complexo ES: 2. 1. estado de equilíbrio: d[ES]/dt = 0 4.E + S k1 k-1 ES k2 k-2 E + P Existe quatro diferentes passos para a reação enzimática: Estes passos seguem o modelo de Michaelis-Menten. A reação reversa. explicando a cinética de V vs S.

Como nós podemos descrever a cinética enzimática se nâo podemos medir diretamente [ES]? • • • taxa de formação de ES = k1 [E] [S] taxa de clivagem ES = k-1 [ES] + k2 [ES] no estado de equilíbrio. taxa de formação de ES = taxa de clivagem ou [ES]/dt = 0 • • k1[E][S] = (k-1 + k2)[ES] [E][S]/[ES] = (k-1 + k2)/k1 = KM KM é a constante de Michaelis-Menten .E + S • • k1 k-1 ES k2 E + P taxa de produção: V0 = k2[ES] [ES] existe por pouco tempo e é dificil de ser detectado.

[Slivre] ~ [Stotal] [Elivre] = [Etotal] .[ES] [ES] = ([Et][S] .[ES][S]) KM [ES] + [ES][S] = [Et][S] = [ES](1 + [S]/KM) KM KM Dividir por (1 + [S]/KM) • • .E + S • • • • k1 k-1 ES k2 E + P [ES] = [E][S]/KM se [E] << [S].

todas as enzimas ligadas ao substrato. . ou [Et] = [ES] So Vmax = k2[Et] Therefore: • • • V0 = Vmax[S] [S] +KM Equação de Michaelis-Menten.E + S • [ES] = k1 k-1 ES [Et][S] k2 E + P [Et][S]/KM = (KM/KM + [S][KM) [S] + KM • Se lembre que V0 = k2[ES] so: V0 = k2[Et][S] [S] + KM At Vmax.

Termodinâmica da catálise enzimática .

Ação de enzima .

Atividade enzimática • Unidade de atividade enzimática :1. atividade: quantidade total de unidades de atividade enzimática na amostra.0 µmol of substrato min -1 em 25 oC em condições ideais.0 unidade de atividade enzimática é definida como a quantidade de enzima que causa a transformação de 1. • Regulação da atividade: Disponibilidade do substrato Regulação da atividade da enzima . atividade especifica : quantidade de unidades / mg-1 protein.

Mudanças da atividade enzimática e da atividade enzimática durante a purificação da enzima: .

Myocardial infarction • Key Indicators ↑ Creatine Kinase ↑ Lactate Dehydrogenase-LDH ↑ H4 > H3M isozyme (flip) • Supportive Indicators ↑ Aspartate transaminase-AST normal Alanine transaminase ALT .

6 kJmol-1 Ensaios para determinação de atividade enzimática fosfocreatina + ADP + H+ .Creatina : Creatina quinase and infarto do miocárdio Fosfocreatina fornece uma reserva de alta energia para formação de ATP (em células musculares e nervosas) ATP + creatina deltaG0´= +12.

saturating [S] . Low [S] B.Saturação da enzima com substrato A. High. 50% [S] or Km C.

Curva de Michaelis-Menten Vo (velocidade inicial) depende da concentração da enzima .

Curva de Lineweaver-Burke (linearização da curva de Michaelis-Menten) 1/vo = (Km / vmax) 1/[S] +1 / vmax -1/Km .

Curva de progressão para uma reação simples catalisada por enzimas [So] [E]T Concentração .

Cinética de Michaelis-Menten para inibição competitiva Vo = Vmax [S]/ (αKm + [S]). muda Km α = 1 + [I]/KI .

muda Km muda Vmax .Gráfico de Lineweaver-Burke: Inibição não-competitiva Vo = Vmáx [S]/ (Km + α´[S]).

DNS C6H12O6 + C6H12O6 Glicose Frutose 2.Ensaio enzimático da Invertase C12H22O11 + H2O Sacarose 1. Reação de Fehling .